Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Нарушения функционально-метаболических параметров почек при хроническом гепатите и их коррекция перфтораном и липосомами

министерство здравоохранения республики узбекистан

второй ташкентский государственный

медицинский институт

Г 1 I) '.-)

? 8! . _ > На правах рукописи

1 3 Ш Щ7

удк 616.61 -008.9-085:616.36-002-036 шукуров Анвар Нажмидциновнч

нарушения функционально-метаболических параметров почек при хроническом гепатите и их коррекция перфтораном и липосомами

14.00.16 - патологическая физиология

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ташкент -1997

Работа выполнена во Втором Ташкентском, государственном медицинском институте.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Х.Я.КАРИМОВ

-Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, ,

профессор Н.Х.АБДУЛЛАЕВ

доктор медицинских наук, Р.Н.АКАЛАЕВ

Ведущее учреждение:

Ташкентский институт усовершенствования врачей

Защита диссертации состоится

1997 года в

часов на заседании Специализированного Совета Д.087.09.02 при Втором Ташкентском государственном медицинском институте, по адресу: 700109, г. Ташкент, ул. Фароби, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Второго Ташкентского государственного медицинского института.

Автореферат разослан

и «

,1997 года.

Ученый секретарь Специализированного Совета, доктор медицинских наук, профессор

1/>

А.А.БАТЫРБЕКОВ

общая характеристика

Актуальность проблемы. Поражения печени являются широко распространенной патологией для республик Центрально-Азиатского региона. Высокая частота заболеваемости гепатитами, их хронизация, большой процент смертности определяет актуальность данной патологии. Распространение патологического процесса на другие органы и системы обусловливает особый интерес исследователей к изучению различных аспектов повреждения этих систем и на их основе разработке целенаправленной терапии.

Общеизвестно, что особенно при тяжелых поражениях печени больше всего нарушаются функции почек, так как между этими органами существует тесная фило- и онтогенетическая взаимосвязь и, они относятся в биологическом отношении к системе выделения [B.C. Гинзбург, 1992]. Присоединение при патологии печени почечной недостаточности резко усугубляет течение основного заболевания, придавая его прогнозу неблагоприятный исход. Легальность при этом варьирует в широких пределах - от И до 84% [Б.Ц.Рималис, 1981, Б.И. Шулутко, 1987].

Почечная недостаточность при хронических гепатитах обусловлена с одной стороны, нарушениями гемодинамики [А.Робсон, 1987;

G.F. Dibona, 1984; M.Manasia, 1982], с другой - накоплением экзо - и эндогенных токсических продуктов, обладающих повреждающими действиями на различные ткани, органы и системы, в первую очередь в силу нарушения детоксикационной функции печени [Абдуллаев

H.Х., Каримов Х.Я., 1989; И.Е.Тареева, 1986]. Воздействие этих факторов вызывает деструктивные изменения почек и, естественно, нарушения метаболических процессов, что в конечном итоге приводит к недостаточности у последних. Однако, несмотря на многочисленные публикации, посвященные этому вопросу, патогенез развития почечной недостаточности при заболеваниях печени окончательно не расшифрован [E.Contu, 1982].

В силу важной экскреторной и метаболической роли почек несомненный интерес представляет изучение процессов липопероксидации в них при первичных поражениях печени, так как выраженность сво-боднорадикальных процессов определяет целостность и функциональную активность подоцитов [В.С.Макаренко, 1993; Ю.И.Гринштейн, 1991].

В последнее время всё большее внимание уделяется исследованию состояния монооксигеназной системы (МОС) эндоплазматического ретикулума, широко представленной в различных отделах почечной ткани и канальцевой системы [М.Дж.Данн, 1987, Х.Я.Каримов, 1994; L.F.Gulyaeva, 1992; M.Paolini, 1995; S.Marie, 1992]. Учитывая важную ее роль в процессах- детоксикации, биотрансформации экзо- и эндо-биотиков надо считать весьма актуальным изучение функциональной активности МОС при повреждениях почек.

Актуальным является поиск эффективных, патогенетически обоснованных средств, направленных в конечном итоге на профилактику и коррекцию почечных осложнений. В этом плане эффективным может быть применение препаратов, действие которых прежде всего направлено на улучшение гемомикроциркуляторных нарушений. К ним можно отнести перфторан - "искусственный заменитель крови", разработанный в институте Биофизики АН СССР в 1982 г. Он, положительно влияя на гемодинамические и реологические свойства крови, способствует улучшению микроциркуляции в органах и тканях, увеличивает их противоишемическую резистентность [Г.Р.Иваницкий, 1993; H.H. Крылов, 1994; Л.В.Усенко, 1994; H.Ya.Karimov, 1996]. В качестве же препарата, уменьшающего процессы мембранолиза, на наш взгляд, целесообразно было бы применение взвеси липосом, содержащих в своём составе различные фосфолипиды. Липосомы оказывают выраженное мсмбраностабилизирующее действие, улучшают функциональную активность МОС, обладают антиоксидантными свойствами [ШУ.Абдуллаев, 1992; А.Д.Бангэм, 1983; Н.Ю. Несытова, 1990; В.И. Швец, 1990]. В связи с этим, для коррекции нарушений функционально-метаболических параметров почек при развитии хронического токсического гепатита (ХТГ) нам представлялось целесообразным апробировать влияние этих препаратов, оказывающих определённое воздействие на патогенетические механизмы развития печёночной нефро-патии.

Цель II задачи работы. Целью настоящего исследования является изучение механизмов нарушений функционально-метаболических параметров почек при экспериментальном хроническом токсическом поражении печени и на их основе разработка эффективных методов коррекции.

Для решения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

). Исследование состояния МОС почек в динамике хронического токсического поражения печени и на фоне лечения перфтораном или лигюсомами.

2. Исследование интенсивности процессов перскисного окисления лнпндов (ПОЛ) и активности ферментов антноксидантнон системы

(АОС) в почка* при экспериментальном поражений печени и на фоне лечения перфтораном или липосомами.

3. Исследование функциональных показателей почек при развитии ХТГ н на фоне лечения перфтораном или липосомами.

4. Исследование состояния почечного плазмотока при поражении печени и на фоне лечения перфтораном или липосомами.

5. Оценка эффективности применения перфторана и липосом в профилактике печёночной нефропатии при хроническом поражении печени гелиотрином.

Научная новизна. Впервые на органо-тханевом и молекулярном уровнях проведены комплексные исследования Состояния МОС, интенсивности ПОЛ, функциональных и гемодинамических параметров в динамике развития хронического экспериментального гепатита у крыс.

Установлена патогенетическая роль мембранодеструктивных, ге-модинамичеких изменений в развитии метаболических и функциональных нарушений почек и их взаимосвязь со стадиями ХТГ. Показано значение повреждения МОС в регуляции водно-электролитного обмена и почечного кровотока. Разработаны некоторые патогенетические методы лекарственной коррекции нарушений почек при ХТГ. Показаны механизмы воздействия перфторана и взвеси липосом на разлйчные стороны патологического процесса в почках.

Практическая значимость. Полученные результаты могут быть фундаментальной основой для расшифровки патогенетических механизмов развития печёночной нефропатии. Показана роль липидных и ферментных компонентов мембран эндоплазматической сети в патогенезе почечной недостаточности при заболеваниях печени и выраженность нарушений функций почек в зависимости от стадии развития ХТГ. Для полной и достоверной оценки нарушений почек рекомендуется применение комплексных методов определения скорости эффективного почечного плазмотока, клубочковой фильтрации и параметров водноэлектролитного обмена, так как их изменения зависимы от стадий ХТГ. Полученные результаты могут служить основанием для разработки эффективных средств лекарственной терапии. Для профилактики и коррекции нарушений почек в ранние этапы развития ХТГ целесообразно применение препаратов мембраностабилизирую-щего и антиоксидантного действия; в более поздние - влияющих на ге-модинамические и реологические показатели. Применение перфторана и липосом может быть рекомендовано для коррекции гемодинамических, реологических и метаболических нарушений при развитии печё-ночно-почечной недостаточности.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Хронические поражения печени приводят к снижению функциональной активности МОС почек, степень выраженности которой зависит от стадии развития ХТГ. Экспериментальная терапия перфтораном И, особенно, взвесью липосом, восстанавливает функциональную активность этой ферментной системы.

2. При печёночной нефропатии интенсифицируются процессы ли-попероксидации, выраженность которых коррелирует с тяжестью патологического процесса. Экспериментальная терапия перфтораном и липосомами способствует снижению содержания малонового диальде-гида (МДА) в биомембранах и повышению активности ферментов су-пероксидцисмутазы (СОД) и каталазы (КАТ).

3. При развитии печёночной нефропатии снижается эффективный почечный плазмоток (ЭПП), носящий прогрессирующий характер. Фармакотерапия ХТГ липосомами и, особенно, перфтораном, восстанавливает интенсивность почечного плазмотока.

4. У животных с поражениями печени отмечается нарушение функционально-биохимических показателей почек: угнетение скорости клубочковой фильтрации (СКФ), суточного диуреза (СД), изменение содержания мочевины и кретишша, электролитного баланса, особенно в период активации хронического гепатита. Терапия перфтораном и липосомами в определённой степени коррелирует функциональные параметры почек.

5. Изучение свойств перфторапа и липосом показывает целесообразность их применения для профилактики и лечения почечной недостаточности при хронических поражениях печени.

Апробация работы. Работа выполнена на кафедре патологической физиологии к ЦНИЛ Н-ТашГосМИ согласно плану научных исследований института (номер государственной регистрации 01. 950003928). Материалы диссертации доложены на 4 Итоговой научно-практи-чеекой конференции 2-ТашГосМИ "Актуальные вопросы медицины" (Ташкент, 1996); на Совете ЦНИЛ (1997); на межкафедральной научной конференции кафедр патологической физиологии, биохимии, нормальной физиологии и ЦНИЛ И-ТашГосМИ (январь, 1997), на семинаре медико-биологического Совета института (февраль, 1997).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, содержит 11 таблиц, 7 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, собственных результатов, обсуждения полученных ре-

зультатов, выводов и указателя литературы, включающего 176 отечественных и 69 иностранных источников.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты проведены на 195 белых крысах-самцах весом 130-180 г. Модель хронического гепатита вызывали подкожным введением крысам-самцам алкалоида гелиотрина в дозе 70 мг/кг массы 1 раз в неделю в течении 6 недель [Н.Х.Абдуллаев, Х.Я.Каримов, 1989]. На 60 сутки опыта животные были разделены на группы, которым соответственно вводили внутрибргошинно перфторан в дозе 10 мл/кг, липосомы в дозе 100 мг/кг и плацебо (5 мл/кг) в течении 10 дней.

Липосомы, состоящие в основном из фосфатидилхолина и фосфа-тидилэтаноламина, получали в виде мультиламеллярных везикул по методу Э.И.Исаева и соавт. (авт.снид.К 1166360 от 1.03.1985) из суммарных фосфолипидных экстрактов печени барана [С.З.Щерматопа, 1991].

Всего проведены три серии экспериментов. В первой исследовали состояние МОС н процессов ПОЛ почек крыс с ХТГ и на фоне лечения перфтораном или лнпосомами на 90 и 120 сутки от начала эксперимента. Микросомальная фракция подоцитов выделялась путём последовательного дифференциального центрифугирования при 9000 g и 105000 g на центрифугах РС-6 и "VAC-бОГ. Дифференциальный спектр цитохромов Р-450 и bs определяли на спегсгрофотометре "SI'ECORD М-40", количественный рассчёт производили используя коэффициент молярной экстинкщш91 мМ1 ♦ см-1 для цитохрома Р-450 и 185 мМ'1 *см-' для цитохрома bs {T.Omura, R. Sato, 1964J. О функциональной активности МОС судили по активности анилингидрокси-лазы [А.И.Арчаков и соавт., 1975] и амидопирин-Ы-деметилазы [П.Попов, 1973]. Интенсивность процессов ПОЛ оценивали по образованию МДА [А.И.Андреева и соавт., 1988] и активности ферментов антиоксидантной системы (АОС) - СОД {М.А.Королюк и соавт., 1988] и КАТ [В.Г.Мхитарян, Г.Е.Бадалян, 1978]. Во второй серии исследовали почечный плазмоток, время полуэлимияации (Гт) и коэффициент очищения (а) радионуклидным методом по клиренсу J-гиппурана [И.В.Васильева, 1988]. В третьей серии изучали функционально-биохимических показателей почек путём определения СД, СКФ, ка-нальцевой реабсорбцнн, содержания мочевины, креатиннна [В.Г.Колб и соавт., 1982] и концентрации ионов Na+, К+, Cl" (на анализаторе SYNCHRON EL-15 фирмы BECKMAN) в крови и моче экспериментальных животных на 60, 90 и 120 сутки опыта. Обработка результа-

тов проводилась методом вариационной статистики на компьютере IBM PC/AT.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Согласно современным представлениям, в генезе многих патологических проявлений важное значение придаётся МОС. Проведённые исследования функциональных параметров МОС почек интактных крыс показали, что содержание цитохромов Р-450 и Ьз в них составляет 2,04±0,12 нмоль/г ткани и 0,886±0,021 нмоль/г ткани, тогда как в печени они равнялись 12,20±0,99 нмоль/ г ткани и 7,30±0,57 нмопь/ г ткани. Активность анилингидроксшгазы в почках также была ниже чем в печени, составляя 17,1% от её уровня. В то же время в отличии от первого фермента активность К-деметилазы амидопирина не уступала печёночной. Однако, несмотря на низкое содержание почечных моноокси-геназ, они, согласно литературным данным, занимают важное место в регуляции органного кровотока, электролитного баланса, метаболизма эндобиотиков {М.Дж.Данн,1987; А.Моррисон,1987; КО.АЬга1тт, 1992], что послужило основанием для изучения МОС.

Исследование состояния МОС почек при развитии ХТГ показало, что в микросомальной фракции почек происходит статистически достоверное снижение содержания цитохромов Р-450 и Ь5 на 27,6% и 36,7%; на 24,8% и 37,5% относительно интактной группы животных соответственно на 90 и 120 сутки опыта (табл. 1). Уменьшение содержания гемопротеидов в свою очередь способствовало ингибиции каталитической активности амидапирин-К-деметилаэы и анилингидроксилазы. Активность первой в почках крыс с ХТГ снижалась на 34,2 и 43,5%; второй - на 30,6% и 55,6% относительно таковых параметров интактных крыс соответственно срокам исследования. Выявленные более глубокие изменения активности ферментов и содержания гемопротеидов в поздний период опыта могут быть обусловлены нарастанием нарушений гемодинамики вследствие развития цирротических изменений в печени, депонированием крови в органах брюшной полости, и как следствие ухудшением кровоснабжения почек. Это обусловливает нарушение транскапшшярного обмена, развитие гипоксии и интенсификацию ПОЛ [Б.Н.Матюшин и соавт., 1988, В.В.Марченко и соавт., 1996, Б.И.Шулутко, 1987]. С другой стороны, более выраженные нарушения обменных процессов в печени, особенно её де-токсихационной функции, могут привести к накоплению токсических метаболитов, которые оказывают нефротоксический эффект. Совокупность этих изменений вызывает дестабилизацию мембранных структур и мембракносвязакных мультиферментных комплексов, что оиз'слоаливает их ингибпрование.

Таблица 1

ВЛИЯНИЕ ПЕГОТС/FAHA И ЛИПОСОМ НА ФЕРМЕНТАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ МОС К СОСТОЯНИЕ ПРОЦЕССОВ ПОД У КРЬС С ХТГ

1 ....... - Эксперим. группы активность Содержание цктакроыов содержание активность

Амид.-Н-дем. (нмоль/мг б) Акилинг-азы (нмоль/мг б) Р-450 (нмоль/ Г тгини) bs (КМОЛЬ/ г ткани) МДА (кмоль/ иг белка ) сод (ед.акт/ мг.белка.мин) кат. (мккат/ мг.белка.мин)

Интактная 1,87to,D7 0,160+0,006 1,92+0,20 0,851±0,050 1,56+0 до 1,15 +0,05 0,161±0,007

1,73+0,02 0,169+0,012 2,1510',02 0,92110,027 1,16+0,03 0,811+0,020 0,115+0,004

Крысы с хтг 1,23+0,05® 0,111+0,005® l.sgto.iz3 0,640*0,033® 2,0710,13® 0,681+0,060® 0,106+0,008®

0,977±0,038® 0,075+0,008° l,36±0,08a 0,576±0,038а 1,47+0,07® 0,593±0,012® 0,085±0,005а

ХТГ+пэр-фторан 2,29+0,об®6 0,182+0,009е6 2,41+0,11°® 0,98810,057® 1,62±0,09® 1,15 ±0.038® 0.155+0,009®

1,9510,09®® 0,164+0,0106 1,8810,09s6 0,835±0,073в 1,41+0,09® 0,996+0,019s6 0,09910,005®®

ХТГ+липо-сош 2.32+0,от06 0,189+0,005®® 2.83+0,16s6 1,10 10,055® 1,57+0,10® 0,930+0,042®® 0,14410,006®

1,87±0,10® 0,165±0,013б 2,13±0,196 0,97210,079® 1,28+0,10 0,75710,028® 0,10110.004®"

Примечания : 1) в числителе - значения ка 90-е, в знаменателе - на 120 сутки опыта;

2) ® - достоверность различий между контрольной и интактной группами, 6 - достоверность различий между контрольной и леченными группами.

Для проверки вышесказанного предположения нами было изучено содержание одного из конечных продуктов ПОЛ - МДА в мембранах эндоплазматического ретикулума почек крыс с ХТГ, а также активность ферментов АОС - СОД и КАТ. Проведённые исследования показали статистически значимое повышение уровня МДА на 32,7% к 90-м суткам опыта на фоне угнетения активности СОД и КАТ на 40,8% и 34,2% соответственно (табл. 1). В дальнейшем (через 120 дней от начала эксперимента) содержание МДА имело тенденцию к снижению, хотя всё ещё превышало нормативные значения на 26,7%. Наряду с этим наблюдалась некоторая, не достигающая интактных показателей, активация ферментов АОС по сравнению с предыдущим сроком опыта. Видимо, выраженность гиперлилопероксидации в почках тесно связана со степенью воспалительно-некротических процессов и интенсивностью ПОЛ в печени, которые, согласно литературный данным, снижаются с развитием цирроза [Ш.Я.Закнрходжаев, 1992; Б.Н.Матюшин, А.С.Логинов, 1996].

Интенсификация процессов ПОЛ может приводить к развитию деструктивных процессов в подоцитах, обусловливая нарушения функциональной способности органа. Для выяснения вышеизложенного нами в дальнейшем были исследованы функционально-биохимические тесты, характеризующие состояние деятельности почек. Анализ выделительной функции почек, оцениваемой по суточному диурезу, скорости клубочковой фильтрации и реабсорбции показал их изменения в зависимости от активности воспалительного процесса. Так, через 60 дней от начала опыта у крыс с ХТГ отмечалось статистически достоверное снижение СД на 30,4% (табл.2). При этом СКФ статистически значимо угнеталась на 33,8%, тогда как процессы реабсорбции существенно не изменялись. На 90-е сутки эксперимента отмечена тенденция к восстановлению исследуемых параметров, хотя они не достигали уровня таковых показателей интактных крыс. С удлинением срока эксперимента (через 120 суток от начала опыта) СД и СКФ вновь снижались, составляя 80,7% и 74,9% от уровня значений интактной группы животных. Выявленные изменения подтверждают наше мнение о зависимости нарушений почек от стадии ХТГ. Наличие воспалительно-десгруктив-ных изменений в печени и почках на ранних сроках исследования, на наш взгляд, обусловливают токсическое поражение подоцитов и клубочков почек, следствием чего является угнетение СКФ и СД. Развитие компенсаторно-приспособительных реакций, уменьшение токсического действия гепатотропного агента приводят к некоторому восстановлению нарушенных показателей. Однако дальнейшее нарушение гемодинамики, развитие портальной гипертензии в поздние сроки ХТГ и при ЦП обусловливают ухудшение иэучаемых^параметров. . '

Таблица Z

ВЛИЯНИЕ ЛЙПССОМ И ПЕРФТОРАНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПАРАМЕТРЫ ПОЧЕК И КЛИРЕНС ПШПУРАНА У КРЫС С ХТГ

rKCuGpVMcHTaJIb- Суточный СКФ Содержание мочевины Показатели клиренса гиппурана

диурез, мл мл/мин в крови шшоль/л в моче млмодь/л Т1/е(мин) ЭПП (мл/мин)

Интактная 4,81+0,27 0,334±0,017 о,бе±о,и 3,88±0,16 3,58±0,11 3,47+0,19 0,585±0,029 0,65710,020

Красу с ХТГ 4,20+0,18 3,83±0,26 0,257+0,021a 0,250±0,028 о^заэ.зз3 0,75±0,4в 3,78±0,14 3.4610,21 6,1310,47е 6,2840,68® 0.420Ю.014* 0,400±0,031®

ХТГ+перфгораи 5,92+0,36a5 4,56±0,28 0,45140,034®® 0,332±0,022° 0,бЗ±0,14® 0,6810,11 4,84+0,22® 3,46±0,21 s.emis88 3,0310,24® 0,70840,028®" 0,66610,008®

ХТГ+липоссш 5,14±0,34® 4,1010,23 0,37б±0,032е 0,31310,022 0,ТОЮ, 18® 0,68±0,19 4,Б0±0,25® 3,46±0,21 2,8340,09°® 4,13±0,14а 0.68110,038®® 0,б23±0,03бв

Пркыэчздая : 1) в числителе - значения на 90-е, в знаменателе - на 120 сутки опыта;

2) ® - достоверность различии между контрольной и интактной группами, а - достоверность различий между контрольной и леченными группами.

Для более достоверной оценки функционального статуса почек нами изучалось содержание электролитов, мочевины и креатинина в сыворотке крови и в моче экспериментальных животных. Проведённые исследования показали, что на 60-е сутки опыта у крыс с ХТГ статистически значимо возрастало содержание мочевины на 31,6% по сравнению со значениями интактных крыс. В дальнейшем наблюдалась тенденция к снижению её уровня, но всё ещё превышая нормативные показатели на 17,1% и 12,3% соответственно на 90-е и 120-е сутки эксперимента. Повышение содержания мочевины на 60-е сутки может быть обусловлено как усилением катаболизма азотсодержащих соединений, так и снижением её выведения (на 14,7%). Уменьшение проявлений азотемии в отдалённые сроки, вероятно, определяется развитием печёночно-клеточной недостаточности и нарушением специфических функций гспатоцитов, в частности мочевинообразователь-ной.

При исследовании электролитного обмена в динамике печёночной нефропагии выявлено снижение экскреции ионов N3* на 21,1%, 19,6% и 15,2% соответственно срокам, что может быть обусловлено как снижением СКФ, так и вторичным гиперальдестеронизмом, наблюдаемым при печёночной недостаточности. Увеличение реабсорб-ции Иа* сопровождается активацией люминального канала выведения К+ и повышением экскреции его на 39,9%, 25,1% и 22,5%. Вместе с тем, наблюдалось увеличение концентрации ионов К* и С1- в сыворотке крови экспериментальных животных, как возможное отражение воспалительных процессов.

Как было показано ранее, в генезе почечных нарушений могут лежать воздействия нескольких факторов: во-первых, токсическое действие на подоциты продуктов нарушенного метаболизма в результате печёночной недостаточности; во-вторых - нарушения кровотока в почках вследствие изменений центральной и периферической гемодинамики при ХТГ и ЦП. С целью выяснения роли второго фактора исследовалось состояние почечного плазмотока, время полуэлиминации гиппурана и коэффициент очищения (табл 2). Проведённые исследования показали, что на 90-е сутки эксперимента у животных с ХТГ ЭПП снижался На 28,2% (Р<0,05). С удлинением продолжительности опыта наблюдалось умчгыгение ЭПП на 39,2%, что, возможно, связано с формированием цирротических изменений в печени, дальнейшим угнетением гемодинамики, более выраженным нарушением кровоснабжения органов брюшной полости. Это сопровождалось статистически значимым удлинением Т1/2 на 43,3%, снижением а на 28,7%, что свидетельствует о накоплении гиппурана в организме экспериментальных животных вследствие нарушения секреторной функции почек. В следующие сроки происходило дальнейшее угнетение данной .функции почек, обусловливая увеличение Т1/2 на 52,2% и снижение а на

31,8% соответственно, что коррелирует с уменьшением ЭПП. Полученные результаты подтверждают предположение о важной роли ге-модинамических нарушений в развитии повреждения нефрона.

Следовательно, при развитии ХТГ происходит угнетение функциональной активности МОС почек, илгибируются ферменты ДОС, интенсифицируются процессы липопероксидацин, уменьшается ЭПП. При этом нарушаются функционально-метаболические показатели почек: снижается СКФ и СД, экскреция мочевины и креатинина, ионов натрия и гнппурана; нарушается выведение ионов К* и CI-. В кррви у экспериментальных животных выявляется гиперазотемия, гиперкалнй-емия.

Выявленные изменения в почках могут способствовать нарушению её экскреторной и метаболической функций, накоплению экзо- и эндотоксинов в организме экспериментальных животных, обусловливая развитие эндотоксинемии и усугублять течение основного заболевания. Учитывая наличие двух основных факторов в развитии печёночной нефропатин, с целью коррекции нарушений функционально-метаболических параметров почек представлялось логичным использование перфторана - напрапленного на восстановление микроцнрку-ляторных и гемодинамических нарушений и пзвеси липосом - обладающих мембраностабнлишрующим и антиокпщантным действиями. Проведённые исследования показали, что фармакотерапия ХТГ перфтораном оказывает индуктивное влияние на МОС почек (табл.1). Так, на 90-е сутки опыта, содержание цитохромов Р-450 и bj статистически значимо возрастало на 73,4% и 54,4%, активность ферментов амидопи рин-1Ч-деметилазы и ашшшгндрокснлазы - на 86,2% и 64,0% по сравнению со значениями нслечекных крыс и их величины несколько превышали нормативные показатели. В отдалённые сроки исследования содержание цитохромов несколько снижалось по сравнению со значениями интактных животных, однако превышали таковые показатели нелеченных крыс на 38,2% и 45,0%. Вместе с тем, активность ферментов а м и до п г ф и н- N-де м ети ла з ы и анилннгидроксилазы сохранялись на уровне нормы и статистически значимо были выше показателями нелеченных животных на 99,6% и 118,7%. В отличие от перфторана индуктивное действие липосом на МОС было более выраженным. Так, наблюдалось статистически значимое увеличение содержания цитохромов Р-450 и bj на 103,6% и 71,9%; аетивности N-деметилазы амидопирина и р-гндроксялазы анилина ка 88,6% и 70,3% сравнительно со значениями контрольных животных на 90-г сутки опыта. При этом их уровень статистически достоверно превышал показания интактных крыс. С увеличением продолжительности эксперимента, иа 120 сутки опыта, индуктивные свойства препарата сохранялись, содержание цнтохровов Р-450 н bj статистически значимо превышало величины испеченных крыс на 56,6% и 68,8%, активность N-

демети-лазы амидопирина и р-гидроксилазы анилина - на 91,4% и 120,0%. Эти значения находились в пределах нормативных, что свидетельствует о стабильном поддержании активности МОС подоцитов крыс с Х'ГГ на уровне интактных животных и предупреждении их ин-гибиции.

Как было показано нами ранее, в генезе ннгибирования активности МОС лежит интенсификация свободнорадикальных процессов на фоне угнетения активности ферментов антиоксидантной защиты клеток. Наблюдаемо.е нами увеличение детоксициругощей функции почек при терапии ХТГ в определённой степени может быть связано нормализацией ПОЛ.

Проведённые исследования показали, что фармакотерапия ХТГ перфтораном к 90-м суткам статистически значимо уменьшала образование МДА на 21,7% по сравненшо со значениями нелеченных животных и приближала к нормативным величинам (табл.1). К 120 суткам опыта у данной группы животных уровень МДА несколько возрастал по сравнению с предыдущим сроком и существенно не отличался от таковых параметров контрольных животных. Антиоксидантный эффект перфторана, по-видимому, в большей степени обусловлен активацией ферментов АОС, так как активность СОД и КАТ статистически значимо возрастала на 68,9% и 46,2% по сравнению с таковыми показателями нелеченных крыс и достигала значений интактной группы крыс на 90-е сутки эксперимента. Такая инициация активности ферментов АОС, особенно СОД, сохранялась и в последующие сроки. Экспериментальная терапия ХТГ липосомами также способствовала уменьшению гиперлипопероксидации, снижая содержание МДА статистически значимо на 24,1% по сравнению с показателями нелеченных крыс до уровня интактных животных на 90 сутки исследования. Наряду с этим наблюдалось увеличение активности ферментов СОД и КАТ на 36,6% (Р<0,£>5) и 35,8% (Р<0,05). При этом активность КАТ дотигала значений интактных животных, а активность СОД имела тенденцию К приближению к ним. В дальнейшем (через 120 дней от начала опыта) антиоксидантное действие липосом несколько ослабевало, но всё же содержание МДА имело тенденцию к сохранению на уровне значений интактных крыс. Вероятно, антиоксидантные свойства взвеси липосом, в отличии от перфторана, связаны в основном активацией неферментативной системы защиты клеток от продуктов ПОЛ.

Уменьшение мембранодеструктивных процессов в почках крыс с ХТГ на фоне применения липосом или перфторана, по-видимому, должно способствовать восстановлению функциональных параметров почек. Для выяснения этого нами были изучены показатели функциональных проб почек, широко применяемые в клинической практике. Проведенные исследования показали, иго на 90-е сугки опыта, экспе-

римснтальная терапия ХТГ перфтораном приводила к увеличению СД на 41,0% и СКФ на 75,5% относительно таковых параметров неле-ченных крыс, что, по-видимому, связано улучшением реологических свойств крови у крыс данной группы (табл.2). В отличие от перфтора-на, в группе животных, получавших липосомы, положительные сдвиги со стороны изучаемых показателей были менее выражены. Так, повышение СД и СКФ составило 22,4% и 46,3% соответственно по сравнению со значениями испеченных животных. Следует отметить, что если у крыс с ХТГ, леченных липосомаыи, изучаемые параметры недостоверно превышали значения интактных, то в группе животных с использованием перфторана СД превышал нормативные значения статистически значимо на 23,1%, СКФ - на 35,0%. С увеличением интервала после лечения эффект препаратов несколько ослабевал, особенно при применении штосом.

Некоторое восстановление СД и СКФ под влиянием исследуемых препаратов приводило к нормализации азотистого и электролитного баланса. Так, на 90-е сутки опыта у крыс, леченных перфтораном, увеличивался натрийурез на 31,3% на фоне одновременного снижения ка-лийуреза на 17,3% по отношению к значениям нелеченных животных. В большей степени это, вероятно, связано с влиянием перфторана на интенсивность клубочковой фильтрации. Уменьшение же экскреции К*, на наш взгляд, обусловлено как снижением его содержания в крови в результате уменьшения катаболических процессов, так и положительным воздействием препарата на почечный канальцевый аппарат вследствие улучшения микроциркуляции. Наряду с этим в этой группе выявилась тенденция к снижению содержания в сыворотке крови ионов С1". В группе крыс, получавших липосомы, также наблюдался положительный эффект, но выраженность их была в меньшей степени.

Терапия ХТГ перфтораном и липосомами способствовала повышению выведения мочевины на 90-е сутки опыта на 28,1% и 19,5% относительно показаний контрольной групппы. При этом концентрация мочевины в сыворотке крови в группах крыс с применением лечения была ниже показателей нелеченных крыс и приближалась к значениям ннтактнон группы. С удлинением сроков эксперимента уровень мочевины существенно не изменялся и сохранялся в пределах нормативных величин.

Восстановление функционально-метаболических параметров почек под влиянием исследуемых препаратов может быть обусловлено каку-меньшением мембранодеструктивных процессов в подоцигах, так и восстановлением центральной и периферической гемодинамики. Проведённые исследования показали, что у крыс с ХТГ, получавших перфторан, ЭПП статистически значимо возрастал на 90-е сутки эксперимента на 68,1% по сравнению с таковыми параметрами контрольных крыс и на 20,7% - шпашными (табл.2). К 120-м суткам эф-

фект препарата на плаэмоток сохранялся. Экспериментальная терапия липосомамн, в оТличие от применения перфторана, приводила к менее выраженной активации« ЭПП. данный показатель статистически значимо повышался на 62,1% и 55,8% соответственно срокам относительно значений нелеченных крыс и имел тенденцию к приближению к уровцю нормы. Увеличение почечного кровотока способствовало возрастанию выведения радионуклида. Так, на 90-е сутки исследования у крыс с ХТГ, леченных перфтораном, время лолуэлиминации гиппура-на статистически значимо укорачивалось на 42,9%, коэффициент очищения увеличивался на 71,9% по сравнению с таковыми параметрами нелеченных крыс. Такая же положительная направленность изменений выявлена и в группе крыс, получавших липосомы - Тю сокращалось ; на 44,8%, а - повышался на 77,0%. Причём, если эффект липосом с удлинением времени окончания терапии несколько снижался, то в группе с введением перфторана он сохранялся и исследуемые показатели были на уровне нормы. Полученные результаты подтверждают наше высказывание о преимущественном влиянии перфторана на ге-модинамическнй статус организма.

Таким образом, при развитии ХТГ происходит угнетение функциональной активности МОС почек, ингибируются ферменты АОС, интенсифицируются процессы липопероксндации, уменьшается почечный плаэмоток. При этом нарушаются функционально-биохимические показатели почек. Экспериментальная терапия ХТГ перфтораном или липосомамн восстанавливает нарушенные функционально-метаболические параметры почек крыс, особенно на 90-е сутки опыта. При этом увеличивается содержание цитохромов Р-450 и Ьз, активность ферментов амндопирнн-№деметилаэы и аннлингндроксилазы; снижается интенсивность ПОЛ на фоне возрастания активности ферментов СОД и КАТ. Наряду с этим, повышается почечный плаэмоток, более выраженное при применении перфторана. Уменьшение явлений мембрано-лиза, возрастание ЭПП под влиянием исследуемых препаратов способствует восстановлению выделительной, секреторной функций почек, в частности увеличивается СКФ и СД, повышается экскреция Ыа+ и радиофармпрепарата, снижается содержание мочевины и креатини-на, ионов К+ и С1 в сыворотке крови экспериментальных животных.

ВЫВОДЫ

1. Хронические поражения печени приводят к ингибированпю активности и снижению содержания основных компонентов моноокси-геназной системы почек, степень выраженности которых с прогресси-рованием патологического процесса нарастает. Экспериментальная терапия перфтораном и, особенно, взвесью липосом, восстанавливает функциональную активность данной ферментной системы. С у длине-

нием продолжительности опыта положительные сдвиги в результате терапии сохраняются.

2. При печёночной нефропатии в мнкросомально-цнтозольной фракции подоцитов наблюдается Интенсификация процессов перекнс-иого окисления липидов на фоне угнетения активности ферментов ан-тиоксидантной системы, выраженность которых зависит от тяжести патологического процесса. Экспериментальная терапия перфтораном и липосомами способствует снижению содержания МДА в биомембранах и повышению активности ферментов СОД и КАТ.

3. При развитии печёночной нефропатии отмечается значительное снижение эффективного почечного плазмотока, удлинение времени полуэлиминации гиппурана и уменьшение клиренса очищения, имеющие прогрессирующий характер. Терапия хронического гепатита липосомами и, особенно, перфтораном, восстанавливает исследуемые параметры.

4. У животных с токсическим поражением печени отмечается угнетение скорости клубочковой фильтрации, суточного диуреза, увеличение содержания мочевины и кретинина в сыворотке крови, нарушение электролитного баланса. Фармакотерапия перфтораном и липосомами в определённой степени восстанавливает функциональные параметры почек.

5. Перфторан и липосомы могут быть рекомендованы в качестве средств коррекции гемодинамическнх, реологических и метаболических нарушений при развитии печёночно-почечной недостаточности.

Список опубликованных работ

1. Иргашев М.К., Шукуров А.Н., Карабанович А.К. Влияние некоторых гепатопротекторов на активность мотаюкемгеназной системы печени и почек II Нарушение механизмов адаптации и их коррекция. Вып.2. - Т., 1995. - С.19-22.

2. Изменение активности ключевых ферментов микросом при хроническом токсическом поражении печени и её коррекция перфтораном /Каримов Х.Я., Иргашев М.К., Иноятова Ф.Х., Шукуров А.Н. II Хронические заболевания печени - от вирусного гепатита до цирроза с портальной гипертензией. Мат-лы респ.конференции, 16-17 янв. - Т., 1996. - С.82.

3. Влияние липосом на некоторые показатели активности моно-оксигеназной системы почек и процессов перехисного окисления липидов в динамике развития печёночной нефропатии/Каримов Х.Я., Иргашев М.К., Шукуроп А.Н.ДИерматова С.З.Шатология. Вып.1.- Т., 1996.-С. 38-41.

хулоса

"Сурункали токсик гепатитда буйрак функционал-метаболик каурсаткичларининг бузилиши ва уларни перфторан хамда липосома-лар билан тузатиш"

Шукуров А.Н.

Мазкур изланишнинг максади жигарнинг зксперимснтал сурункали токсик шикастланишида вужудга келадиган буйракиинг функционал-метаболик бузилишларининг механизмларини очиш ва улар асосида даволашнинг самарадорлигини ошириш усулларини ишлаб чикишдан пборатдир.

195 ок каламушларда гелиотрин таъсирида чакирилган сурункали оксик гепатит (СТГ) ривожланишвда буйрак монооксигеназ системаси (МОС) функционал фаоллигини сусайиши, антиоксидант системаси (АОС) ферменларинииг ингибицияси, штопероксидацпя жараёнлари-нинг кучайиши хамда буйракиинг эффектив плазма окимшшнг (ЭПО) пасайиши курсатилди. Ушбу холатда буйракиинг функционал-биокимёвнй курсаткичларининг узгаришн- кузатилди: коптокчалар фильтрацияси тезлиги (КФТ) ва кушшк диурез (КД) микдори камайди, мочевина ва креатипин, натрий ионлари ва гиппуран зкскрецияси па-сайди, К+ ва С!- шшг оргапизмдан чикаршшши бузиддп. Эксперимеи-тал хайвонларда гиперазотемия, гиперкзлийемия аникланди. СТГнинг перфторан ёки липосомалар билан эксперимента!! даволаш буйракни-ниг функционал-метаболик курсаткичларшда тшслаиишига олиб кел-ди; цитохром Р-450 па bj микдори, амидопирин-М-дсметилаза ва ани-лингидроксилаза ферментларининг фаоллиги ошди, липидларнннг перекисли оксидланиши камайди, супероксиддисмутаза ва катадаза ферментларининг фаоллиги •сртди.Препаратларшшг таъсири купрок тажрибашшг 90-чи кунида намое'н булдл. Шу билан бир каторда буйрак ЭПО тпкланнши кузатилди ва бу ижобий холат перфторан кулла-нилганда якколрок курииди. Кузатнлган ижобий узгаришлар буйракиинг ажратиш, секретор функцияларинннг ортишнга олиб келди; КФТ ва КД купайди, Na+ ва радиофармпрепарат зкскрецияси кучайди, К+ ва С1- ионларишшг кондагн микдори камайди.

SUMMARY

"RENAL FUNCTJONAL-METABOLIC PARAMETERS DISORDERS IN CHRONIC TOXIC HEPATITIS AND THEIR CORRECTION WITH PERFTORAN AND LIPOSOMES"

Shukurov A.N.

The present research work was aimed at investigation of disorders mechanisms in renal functional-metabolic parameters in experimental chronic hepatitis and working out sufficient methods of their correction.

Studies performed on 195 white male rats revealed inhibition in renal monooxygenases system (MOS), antbxidant system (AOS) enzymes, lipid peroxidation processes intensity, decrease in effective renal blood flow (ERBF) in development of chronic toxic hepatitis (CTH). Clinical-biochemical renal profiles are being disturbanced as follows: glomerular filtration velocity (GFV) and daily urine (DU), urea and creatinine, sodium and hippurane iones excretion were decreased, K* and CI- iones excretion damaged. Hyperazotemia, hyperkalemia revealed to be in the blood of experimental animals. Experimental therapy of CTH with perftoran and liposomes restored functional-metabolic indices diturbanced in rats kidneys especially on tlie day 90. of experiment. Cytochromes P-450 and bj content as well as amidopyrin-N-demethylase and aniline hydroxylase activity were increased, lipid peroxidation intensity decreased against a background of activity growth in AOS enzymes - superoxide dimutase and catalase. At the same time, renal blood flow was increased especially by administration of perftoran. Decrease in membranolysis events, increase in ERBF by action of preparations investigating contributed to restoration of excretory, secretory renal function in particular GFV and DU, Na+ and radiopharmpreparation also increased, urea and creatinine content, K+ and CI- iones in blood serum of experimental animals decreased.