Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Морфологические и иммуногистохимические особенности опухолей человека с мутацией рецептора эпидермального фактора роста
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.03.02
Автореферат диссертации по медицине на тему Морфологические и иммуногистохимические особенности опухолей человека с мутацией рецептора эпидермального фактора роста
/ФЖ^
На правах рукописи
ИВАНЦОВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОПУХОЛЕЙ ЧЕЛОВЕКА С МУТАЦИЕЙ РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА
14.03.02- Патологическая анатомия 14.01.12 - Онкология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 9 МАЙ 2011
Санкт-Петербург 2011
4846999
Работа выполнена в ФГУ «Научно-исследовательский институт онкологии им. H.H. Петрова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор
Мацко Дмитрий Евгеньевич доктор медицинских наук, профессор Имянитов Евгений Наумович
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор
Хмельницкая Наталия Михайловна доктор медицинских наук, профессор Топузон Эльдар Эскендерович
Ведущая организация: Федеральное государственное
бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт- Петербургский университет»
Защита диссертации состоится « » 2011 г. в 14 часов на
заседании совета по защите кандидатских и докторских диссертаций Д 215.002.02 при ФГВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова» МО РФ по адресу: 194044, Санкт - Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6.
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова» МО РФ по адресу: 194044, Санкт - Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6.
Автореферат разослан «¿9 » апРЕАА 2011 г.
Ученый секретарь совета доктор медицинских наук
Чирский Вадим Семенович
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
В настоящее время во всем мкре, в том числе и в России, онкологические заболевания являются одной из самых частых причин инвалидизации и смертности трудоспособного населения. В связи с этим, в настоящее время многие исследования сосредоточены на поиске новых подходов к противоопухолевой терапии.
В последние годы в качестве лекарственной мишени (таргетная терапия) изучается рецептор эпидермального фактора роста (epidermal growth factor receptor - EGFR), как молекулярный фактор, ответственный за митогенную активность опухолевого роста. EGFR - трансмембранный гликопротеин молекулярной массой 170 Ш, обладающий тирозинкиназной активностью. EGFR (или HERI) относится к семейству рецепторов эпидермального фактора роста, которое также представлено другими его видами: erbB2/HER2-neu; erbB3/HER3 и erbB4/HER4. EGFR экспрессируется на поверхности как нормальных, так и трансформированных эпителиальных клеток, а также участвует в регуляции клеточного роста и дифференцировки. Гиперэкспрессия EGFR опухолевыми клетками ассоциируется с поздними стадиями и метастатическим фенотипом заболевания, коррелирует с плохим прогнозом, резистентностью к проводимой лекарственной и лучевой терапии. Наиболее хорошо гиперэкспрессия EGFR изучены в бронхиолоальвеолярных аденокарциномах легких, инвазивном раке молочной железы, раке толстой кишки, раке предстательной железы.
Ингибиторы EGFR - группа препаратов, которые конкурентно связываясь с активными точками тирозинкиназы С (интрацеллюлярная часть) блокируют процесс фосфорилирования, и тем самым препятствуют фосфорилированию белков-переносчиков сигналов. Одним из ингибиторов EGFR является Гефитиниб (Иресса). Он одобрен в 2003 г. Управлением по контролю качества продуктов и лекарств США для лечения химиорезистентного диссеминированного немелкоклеточного рака лёгкого. Ответ на терапию гефитинибом в общей популяции больных наблюдается лишь у 10-20 % пациентов (Fukuoka М., 2003). В то же время исследования, в которые были включены больные с мутацией гена EGFR, выявили невиданную ранее для этого заболевания частоту объективных ответов (от 55 до 100 %), при этом медиана времени до прогрессирования опухоли почти вдвое превышала исторический контроль (Lynch Т. J., 2004). Несравненно высокая эффективность терапии ингибиторами тирозинкиназных рецепторов у больных с активирующей мутацией гена EGFR требует обязательного определения данной мутации у больных с аденокарциномой лёгкого.
Многие исследователи указывают на зависимость между выраженным клиническим ответом к ингибиторам EGFR и наличием соматических мутаций внутри тирозинкиназного домена EGFR при многих опухолях эпителиальной природы (Blons Н., 2006; Zakowski M.F., 2009). Наиболее подробно изучены мутации EGFR при бронхиолоальвеолярном раке легкого
в группе немелкоклеточных раков легкого. Выявлены наиболее часто встречающиеся мутации EGFR (экзоны 19 и 21), изменяющие пространственную структуру центров связывания тирозинкиназной части EGFR (Cohen S., 1974; Cohen D., 2007). Большинство исследователей указывают на молекулярную гетерогенность мутаций (Cohen S., 1974; Blons Н, 2006; Zakowski M.F., 2009).
Часть исследователей указывают на отсутствие стандартов в области иммуногистохимического определения сверхэкспрессии EGFR, так как результаты определения мембранного и цитоплазматического EGFR достоверно отличаются друг от друга, но не коррелируют с общей выживаемостью и рецидивированием заболевания (Cohen S., 1974; Cohen D., 2007).
В некоторых статьях указывается на различия в количестве и интенсивности окрашивания при иммуногистохимическом методе исследования опухолевых клеток с сверхэкспрессией EGFR в первичной опухоли и метастазах, в частности, при светлоклеточном раке почки (Badalian G., 2007).
Работ содержащих описание иммунофенотипа с мутацией гена EGFR светлоклеточным раком почки нам не встретилось, хотя имеются публикации, описывающие иммунофенотипический статус (Ki-67, Р-53, Вс1-2) как при светлоклеточном раке почки (Suzuki К., 2002), так и при немелкоклеточном раке легкого (Radovic S., 2007).
Таким образом, анализ морфологических и иммуногистохимических особенностей опухолей с мутацией EGFR, в частности светлоклеточного рака почки, бронхиолоальвеолярного рака легкого, способен выявить те морфологические и иммуногистохимические критерии, которые могут способствовать как определению прогноза заболевания, так и выбора адекватного метода лечения.
Цель исследования. Сравнительный анализ морфологических и иммуногистохимических особенностей опухолей у больных с мутацией гена EGFR и без неё.
Задачи исследования:
1. Изучить частоту наиболее часто встречаемых мутаций в гене EGFR у больных с аденокарциномой лёгких Северо-Западного региона РФ.
2. Оценить возможную роль экспрессии Ki-67, Р-53, Вс1-2, рецепторов эстрогена альфа (ER-a), EGFR, в выявлении мутации гена EGFR у пациентов с аденокарциномой лёгких.
3. Выявить различия иммуногистохимической экспрессии Ki-67, Р-53, Bcl-2, ER-a, EGFR у больных с аденокарциномой лёгких с различными активирующими мутациями гена EGFR.
4. Изучить частоту наиболее часто встречаемых мутаций в гене EGFR у пациентов со светлоклеточным раком Северо-Западного региона РФ.
5. Оценить роль экспрессии Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-«, ЕОРЯ в выявлении мутации гена ЕОР11 у больных со светлоклеточным раком почки, и определить особенности экспрессии иммуногистохимических маркеров.
Научная новизна
Впервые проведено исследование по выявлению активирующих мутаций гена ЕОБК у больных со светлоклеточным раком почки СевероЗападного региона РФ. Были изучены иммуногистохимические особенности аденокарцином лёгких и светлоклеточного рака почки с мутацией в гене ЕСР11 у пациентов Северо-Западного региона РФ. Выявлены принципиальные различия в частоте и выраженности экспрессии маркеров пролиферации и апоптоза. Показано, что иммуногистохимические маркеры пролиферации и апоптоза не связаны с частотой мутации ЕйРК при аденокарциноме лёгких.
Положения выносимые на защиту
1. У больных с аденокарциномой лёгких и светлоклеточным раком почки Северо-Западного региона РФ встречаются мутации гена ЕОРЯ (20,3 % и 1,2 % соответственно).
2. У больных аденокарциномой лёгких с мутацией гена БОРЯ в 61 % встречается делеция 19 экзона, в 39 % - мутация Ь85811 в 21 экзоне, а у больных светлоклеточным раком почки выявляется только делеция в 19 экзоне гена БОРЯ.
3. Гиперэкспрессия ЕОРЯ на мембране опухолевой клетки не зависит от статуса гена БОРИ, у больных с аденокарциномой лёгких.
4. Экспрессия Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а не способствуют выявлению мутации гена БОРЯ в светлоклеточном раке почки.
Личный вклад автора
Автор самостоятельно подготовил обзор литературы, определил объём и структуру методов и объёмов исследования, оценил гистологические и иммуногистохимические результаты, провел математихо-статистический анализ данных, изложил полученные результаты, сформулировал выводы и практические рекомендации. Молекулярно-генетический анализ выполнен совместно с лабораторией молекулярной онкологии.
Апробация диссертации
Результаты исследования были представлены в докладах на: 4-ой Российской конференции по фундаментальной онкологии (Санкт-Петербург, Россия, 2008); 20-ой конференции Европейской ассоциации исследования рака (Лион, Франция, 2008); 20-ом международном конгрессе противоракового лечения (Париж, Франция, 2009); 6-ом съезде онкологов и радиологов СНГ (Душанбе, Таджикистан, 2010).
Структура и объём диссертации
Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, описания материала и методов, результатов собственного исследования, обсуждения полученных данных и выводов. Текст иллюстрирован 7 таблицами, 28 рисунками. Список литературы содержит 157 наименований, из которых 13 отечественных и 144 иностранных.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Было изучено 202 случая больных аденокарциномой лёгких, оперированных в ФГУ НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова с 1998 по 2004 г. Больные плоскоклеточным, мелкоклеточным, крупноклеточным раком, оперированные в этом же промежутке времени в исследование не включены. Определён гистологический тип опухоли и степень дифференцировки, затем выполнено молекулярно-генетическое исследование экзонов 19, L8S8R в 21 экзоне гена EGFR парафиновых образцов опухоли, с последующей оценкой степени экспрессии EGFR и выявлением случаев с альтерацией экзонов 19, L858R в 21 экзоне. Исследование проводилось с использованием микроскопа Leica DM 2000, микросъёмка проводилась с помощью цифровой фотокамеры Leica DFC 320. Обработку цифровых изображений проводили на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ «Adobe Photoshop CS». Анализируемые наблюдения были разделены на 3 группы:
1 группа- 25 случаев аденокарцином лёгкого с мутацией EGFR в экзоне 19.
2 группа - 16 случаев аденокарцином лёгкого с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне.
3 группа - 170 случаев аденокарцином лёгкого без мутации EGFR.
Проведено рутинное гистологическое исследование и
иммуногистохимическое определение Ki-67, BcI-2, Р-53, а также выраженности экспрессии EGFR и ER.
Также произведён анализ 336 случаев больных светлоклеточным раком почки, наблюдавшихся в ФГУ НИИ онкологии им. H.H. Петрова в 2000-2008 гг. Определён гистологический тип опухоли и степень дифференцировки по Fuhrman. Во всех анализируемых наблюдениях выполнено молекулярно-генетическое исследование экзонов 19, L858R в 21 экзоне гена EGFR. В выявленных случаях с мутацией EGFR (выявлено 5 случаев с мутацией EGFR в 19 экзоне, для иммуногистохимического исследования представлены парафиновые блоки 4 случаев) проведено иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии Ki-67, Bcl-2, Р-53, ER-a.
Для морфологического исследования срезы толщиной 3 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятой методике.
Для иммуногистохимического исследования использовано 5 коммерческих антител: Ki-67, Bcl-2, Р-53, ER-a, EGFR. Интерпретация результатов иммуногистохимического исследования.
Уровень пролиферации Ki-67, Р-53 оценивался при помощи подсчёта позитивно окрашенных ядер в 1000 опухолевых клеток. Ядерная реакция любой интенсивности фиксировалась как позитивная.
Уровень экспрессии Bcl-2 расценивался как позитивный, если более 5 % опухолевых клеток имели цитоплазматическое окрашивание любой степени интенсивности.
Экспрессия ER оценивались полуколичественно при помощи Allred scoring system. Оценивалась только ядерная реакция. Результат представляется в виде суммы двух величин, первая - интенсивность окрашивания опухолевых клеток (0 - отсутствует, 1 - слабая, 2 -умеренная, 3 - выраженная), вторая - количество позитивных опухолевых клеток (0=нет окрашивания; 1 - при <1%; 2 - 1 - 10 %; 3 - 11 - 33 %; 4 -34 - 66 %; 5 - 67 - 100 %).
Уровень экспрессии EGFR осуществлялся путём суммарной оценки выраженности окрашивания мембраны опухолевой клетки и общего числа позитивно окрашенных клеток. Случай расценивался как позитивный, если имело место любое по интенсивности окрашивание более 10 % опухолевых клеток. При окрашивании менее 10 % опухолевых клеток результат расценивался как нулевой. Слабая реакция более, чем у 10 % опухолевых клеток с мембраной окрашенной не полностью расценивалась как «1+», при слабом или умеренном окрашивании всей мембраны более, чем у 10 % опухолевых клеток - «2+», интенсивное окрашивание всей мембраны более, чем 10 % опухолевых клеток - «3+». Определение мутации EGFR.
Для проведения анализа на наличие мутации были использованы парафиновые блоки, полученные из первичной опухоли. Срезы 15 мкм с парафиновых блоков, прошедших морфологическую верификацию на наличие опухолевой ткани, наносились на предметные стекла. Выделение опухолевых клеток производилось методом стереотактической диссекции под контролем световой микроскопии со срезов, содержавших более 40 % опухолевых клеток. Для получения ДНК из срезов парафиновых блоков использовалась следующая методика (Imyanitov Е., 2001): Для определения делеции в экзоне 19 гена, кодирующего EGFR, производилась амплификация всей последовательности зкзона. Были использованы праймеры со следующими последовательностями: прямой 5 '-CTGTC ATAGGG ACTCTGGAT-3', обратный 5'-
CAGCAAAGCAGAAACTCACAT-3'.
Другим видом мутации, определение которого производилось в рамках данного исследования, были миссенс-мутации в экзоне 21 гена
EGFR. В данной позиции выявлялась замена L на G. Данный тест производился методом аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени. Для амплификации искомых последовательностей были использованы следующие последовательности праймеров: праймер, специфичный для последовательности дикого типа 5'-CACCCAGCAGTTTGGCCA-3', специфичный для последовательности с заменой нуклеотида - 5'-CACCCAGCAGTTTGGCCC-3', и общий праймер - 5' - GCATGAACTACTTGGAGGАС-3'. Статистическая обработка материала.
Статистический анализ проводили на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ «SPSS 13.0», парные групповые сравнения проводились непараметрическим методом MannWhitney. Различия считались статистически достоверными при р< 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Сравнительный анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров пролиферации и апоптоза, таргетиых маркеров в аденокарциномах лёгких с мутацией и без мутации EGFR
Клинические данные
Исследованы клинические данные и операционный материал 202 больных прооперированных в НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова по поводу периферического рака лёгких. Средний возраст больных 60,6 лет (от 36 до 81 года). В 124 случаях больные мужчины (61,4%), 78 женщины (38,6%).
В 182 случаях опухоль гистологически определена как аденокарцинома (90,1 %), в 20 случаях опухоль определена как бронхиолоальвеолярный рак (9,9 %).
Определение мутационного статуса гена EGFR
При проведении молекулярно-генетического анализа мутация рецептора эпидермального фактора роста выявлена в 41 случае (20,3 %). В 17 случаях (41,5 %) - мужчины, и в 24 случаях (58,5 %) женщины. В 39 случаях из 41 с выявленной мутацией гистологический тип соответствовал аденокарциноме (без учёта степени дифференцировки).
Делеция экзона 19 выявлена у 25 больных (61 %, из них 12 женщины (48 %), 13 мужчины (52 %)), точковая мутация в кодоне 858 встречена у 16 больных (39 %, из них 11 женщины (68,75 %) и 5 мужчины (31,25%)).
В 23 случаях аденокарцином (в 21 случае - умеренно дифференцированная, 2 случаях низко дифференцированная) выявлена мутация EGFR в экзоне 19.
В 2 случаях подтверждён бронхиолоальвеолярный рак и выявлена мутация EGFR в экзоне 19.
В 16 случаях аденокарцином (в 15 случаях - умеренно дифференцированная аденокарцинома, в 1 - низко дифференцированная) выявлена мутация гена EGFR L858R в 21 экзоне.
Выявленная в нашем исследовании частота мутаций гена EGFR, которая составила 20,3 % (41/202), позволяет говорить о сходстве в частоте возникновения мутации больше с белым населением Европы и Северной Америки, чем с больными азиатского происхождения, так как при анализе опухолей у больных в Тайване, частота мутированных вариантов гена суммарно составила 26 % (Kobayashi S., 2005), при исследовании больных в Испании и Северной Америке показатели мутации составили 12 % и 16 % соответственно (Furge К., 2000; Cortes-Funes Н., 2005)..
Экспрессия Ki-67
Для иммуногистохимического исследования образцы разделены в 3 группы. 1 группа - 18 случаев умеренно дифференцированных аденокарцином с мутацией EGFR в экзоне 19. 2 группа - 12 случаев умеренно дифференцированных аденокарцином с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне. 3 группа - 7 случаев умеренно дифференцированных аденокарцином без мутации EGFR, случаи были выбраны случайным образом, необходимыми критериями служили гистологический тип (аденокарцинома) и степень дифференцировки (умеренно дифференцированная); без учёта пола и возраста больных.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 минимальное значение Ki-67 составило 4 %, максимальное значение 49 %, медиана 22 %.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне минимальное значение Ki-67 составило 5 %, максимальное значение 20 %, медиана 13 %.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) минимальное значение Ki-67 составило 4 %, максимальное значение 49 %, медиана 14 %.
В группе больных аденокарциномой лёгких без мутации EGFR минимальное значение Ki-67 составило 26 %, максимальное значение 48 %, медиана 37 %.
При статистической обработке данных производили парные групповые сравнения уровня экспрессии Ki-67 непараметрическим методом MannWhitney, так как значения в сравниваемых выборках не соответствуют закону нормального распределения.
При сравнении уровня экспрессии Ki-67 в группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 (медиана 22 %) с группой аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне (медиана 13 %) выявлено статистически достоверное различие (р=0,036) (рис. 1).
При сравнении уровня экспрессии Ki-67 в группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR (медиана 37 %) с группой аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне (медиана 13 %) выявлено статистически достоверное различие (р=0,0001).
При сравнении уровня экспрессии Ki-67 в группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR (медиана 37 %) с группой аденокарцином лёгких с
мутацией ЕвРЯ вообще (мутация ЕОБЯ в экзоне 19 + мутация ЕОРЯ Е858Я в 21 экзоне) (медиана 14 %) выявлено статистически достоверное различие (р=0,006).
в. 5са§1юН1 с соавт. (1993) пороговым уровнем экспрессии Кл-67 определили 25 %, при котором статистически достоверно отличается безрецидивная выживаемость для операбельного варианта немелкоклеточного рака лёгких.
Рис. 1. Сравнение уровня экспрессии Е-67 в группах больных с аденокарциномой лёгких с мутацией гена ЕОРЯ в 19 экзоне, Ъ858Я в 21 экзоне, с мутацией вообще и без мутации гена ЕСБЯ. Верхняя и нижняя границы прямоугольников на диаграммах соответствуют первому и третьему квартилям (внутрь прямоугольника попадает 50 % наблюдений). Линия внутри прямоугольника соответствует медиане. Линиями сверху и снизу от прямоугольников отмечены максимальные и минимальные значения. Ось У -уровень экспрессии К-67, %; ось X - анализируемые группы
Медианы значений Кл-67 у больных с аденокарциномой лёгких с мутацией БвРЯ в экзоне 19, с мутацией ЕОРК. Ь858Я в 21 экзоне, с мутацией БОБЯ в сумме не превышают 25 %, а медиана значений К¡'-67 аденокарцином лёгкого без мутации ЕвРЯ составило 37 %. То есть можно утверждать, с ссылкой на О. Scagl¡otti с соавт. (1993), что прогностически группы опухолей лёгкого с мутацией ЕвРЯ вообще и по отдельности, более благоприятны по сравнению с опухолями лёпсих без мутации БОРЯ. Также аденокарциномы лёгкого с мутацией ЕОРЯ 1.858Я в 21 экзоне - группа с наиболее благоприятным прогнозом, так как они обладают статистически достоверной наименьшей нролиферативной активностью, а так же
характеризуются более высокой безрецидивной выживаемостью в операбельных случаях немелкоклеточного рака лёгкого по данным G. Scagliotti (1993).
Экспрессия Р-53
Для иммуногистохимического исследования использован прежний принцип разделения на 3 группы (1 группа - 18 случаев умеренно дифференцированных аденокарцином с мутацией EGFR в экзоне 19; 2 группа. ~ 12 случаев умеренно дифференцированных аденокарцином с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне; 3 группа - 7 случаев умеренно дифференцированных аденокарцином без мутации EGFR).
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне минимальное значение Р-53 составило 0 %, максимальное значение 96 %, медиана 59 %.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 минимальное значение Р-53 составило 0 %, максимальное значение 94 %, медиана 2 %.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) минимальное значение Р-53 составило 0 %, максимальное значение 96 %, медиана 22 %.
В группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR минимальное значение Р-53 составило 2 %, максимальное значение 68 %, медиана 45 %.
При статистической обработке данных производили парные групповые сравнения уровня экспрессии Р-53 непараметрическим методом MannWhitney.
Анализ экспрессии Р-53 с 20 % порогом экспрессии.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 экспрессия Р-53 равна или выше 20 % в 7 из 18 случаев (38,8 %).
В группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR экспрессия Р-53 равна или выше 20 % в 4 из 7 случаев (57,1 %).
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне экспрессия Р-53 равна или выше 20 % в 9 из 12 случаев (75 %).
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) экспрессия Р-53 равна или выше 20 % в 16 из 30 случаев (53,3 %).
При сравнении частоты экспрессии Р-53 в группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 с группой аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне выявлено статистически достоверное различие (р=0,046).
По мнению Н. Ishida с соавт. (1997) положительная экспрессия Р-53 (окрашивание ядер более чем в 20 % опухолевых клеток) ассоциируется с более худшим прогнозом. Нами выявлено статистически достоверное различие в частоте экспрессии между аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 и с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне. Это свидетельствует о наличии иммунофенотипических перепадов между двумя
типами мутаций, хотя прямой связи между мутацией EGFR и экспрессией Р-53 нет, так ках это несвязанные между собой молекулярные пути. J. Lee с соавт. (1995) установили, что больные аденокарциномой лёгких с высокой степенью экспрессии Р-53 (более 50 %) обладают в два раза большей выживаемостью, чем с низкой степенью экспрессии Р-53. Также методом регрессии Кокса показано, что экспрессия Р-53 более чем в 50 % опухолевых клеток является положительным независимым прогностическим фактором для оценки общей выживаемости. Мы продемонстрировали полжительную экспрессию Р-53: у больных с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 в 27,8 % случаев; у пациентов с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне в 58,3 % случаев; больные с мутацией EGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) в 40 % случаев; у больных с аденокарциномой лёгких без мутации EGFR в 14,3 % случаев. При сравнении частот положительной экспрессии Р-53 (50 % порог) всех сравниваемых групп статистически достоверных различий не выявлено.
Экспрессия Вс1-2
Для иммуногистохимического исследования все больные с умереннодифференцированной аденокарциномой лёгких разделены в 3 группы: 1 группа - 18 случаев с мутацией EGFR в экзоне 19; 2 группа - 12 случаев с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне; 3 группа - 7 случаев без мутации EGFR.
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 экспрессия Вс1~2 равна или выше 5 % в 1 из 115 случаев (5,5 %).
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне экспрессия Вс1-2 равна или выше 5 % ни в одном из 12 случаев (0 %).
В группе аденокарцином лёгких с мутацией EGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) экспрессия Вс1-2 равна или выше 5 % в 1 из 30 случаев (3,3 %).
В группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR экспрессия Вс1-2 равна или выше 5 % в 3 из 7 случаев (42,9 %).
При статистической обработке данных частоты экспрессии Вс1-2 производили парные групповые сравнения непараметрическим методом Mann-Whitney, так как значения в сравниваемых выборках не соответствуют закону нормального распределения.
При сравнении частоты экспрессии Вс1-2 в группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR с группой аденокарцином лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне выявлено статистически достоверное различие (р=0,017).
При сравнении частоты экспрессии Е>с1-2 в группе аденокарцином лёгких без мутации EGFR с группой аденокарцином лёгких с мутацией EGFR вообще (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) выявлено статистически достоверное различие (р=0,003).
Н. Ishida с соавт. (1997) показали значимую связь экспрессии BCL-2 с благоприятным прогнозом (90 % против 68 % за 5 лет, Р < 0,05), показателем
Т по классификации TNM, малым размером опухоли (менее 2 см). D. Renouf с соавт. (2009) приводят данные о положительном окрашивании BCL-2 в 59 из 194 аденокарцином (30,4 %). Частота встречаемости экспрессии Вс1-2 среди больных с аденокарциномой лёгких составила 13 %, что гораздо ниже в сравнении с результатами D. "Renouf с соавт. (2009). Также экспрессия Bcl-2 не встречалась среди пациентов с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне, среди больных с аденокарциномой лёгких с мутацией в 19 экзоне выявлена единичная экспрессия, в то время как в группе больных без мутации EGFR определялась экспрессия Вс1-2 почти в половине случаев. Данная особенность подчёркивает уникальность состояния системы апоптоза при аденокарциноме лёгких с мутацией EGFR, и достаточно однозначно характеризует иммуногистохимический статус Вс1-2.
Экспрессия ER-a
Для иммуногистохимического исследования все больные с умереннодифференцированной аденокарциномой лёгких разделены в 3 группы: 1 группа - 18 случаев с мутацией EGFR в экзоне 19; 2 группа - 12 случаев с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне; 3 группа - 7 случаев без мутации EGFR.
У пациентов с мутацией EGFR в экзоне 19 экспрессия ER-a положительная в 4 из 18 случаев (22,2 %), максимальное значение - 4 балла по Allred scoring system.
У больных с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне экспрессия ER-a положительная в 2 из 12 случаев (16,6 %), максимальное значение - 2 балла по Allred scoring system.
У пациентов с мутацией HGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R) экспрессия ER-a положительная в 6 из 30 случаев (30%), максимальное значение - 4 балла по Allred scoring system.
У больных без мутации EGFR экспрессия ER-a положительная в 3 из 7 случаев (42,9 %), максимальное значение - 6 баллов по Allred scoring system.
При статистической обработке данных производили парные групповые сравнения частоты экспрессии ER-a непараметрическим методом MannWhitney.
Н. Kawai с соавт. (2005) показали, что ER-0, в основном, экспрессируются в ядре, a ER-a, в основном, экспрессируются в цитоплазме опухолевых клеток рака лёгкого. Оценивая функции ER и EGFR, пришли к выводу, что стимуляция ER приводит к повышению активности сигнального пути EGFR, и, наоборот, сигнал EGFR повышает активность ER (Pietras R., 2007). Y. Omoto с соавт. (2003) описывают экспрессию ER-p у больных немелкоклеточным раком лёгкого и отсутствие экспрессии ER-a. Мы встретили только ядерное окрашивание ER-a в опухолевых клетках, цитоплазматическое окрашивание отсутствовало. Во всех группах экспрессия рецептора эстрогена альфа встречается как у мужчин, так и у женщин. В группе контроля экспрессия ER-a встречается чаще у женщин. Все парные сравнения количества окрашенных клеток и интенсивности
окрашивания ER-a во всех группах сравнения (с мутацией и без мутации) статистически достоверных различий не выявили.
Экспрессия EGFR
Для иммуногистохимического исследования все больные с умереннодифференцированной аденокарциномой лёгких разделены в 3 группы: 1 группа — 18 случаев с мутацией EGFR в экзоне 19; 2 группа - 12 случаев с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне; 3 группа - 7 случаев без мутации EGFR.
Исходя из методики подсчёта экспрессии EGFR изложенной в материалах и методах, все случаи позитивны в отношении EGFR, незначительно варьирует интенсивность окрашивания, поэтому в ходе работы было решено расширить критерии оценки.
При статистической обработке данных производили парные групповые сравнения частоты экспрессии EGFR непараметрическим методом MannWhitney.
Все парные сравнения количества окрашенных клеток и интенсивности окрашивания во всех группах сравнения (с мутацией и без мутации, без учета выраженности мембранного компонента) статистически достоверных различий не выявили.
Также мы произвели количественный подсчёт тех аденокарцином, в которых отчётливо присутствует мембранный компонент, без учёта цитоплазматического компонента.
У больных с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR в экзоне 19 мембранная экспрессия EGFR выявлена в 8 из 18 случаев (44,4 %).
В группе пациентов с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне мембранная экспрессия EGFR присутствовала в 2 из 12 случаев (16,6 %).
В группе больных с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR (мутация EGFR в экзоне 19 + мутация EGFR L858R в 21 экзоне) мембранная экспрессия EGFR наблюдалась в 10 из 30 случаев (33,3 %).
В группе больных с аденокарциномой лёгких без мутации EGFR мембранная экспрессия EGFR выявлена в 5 из 7 случаев (71,4 %).
При сравнении частоты мембранной экспрессии EGFR в группе больных с аденокарциномой лёгких без мутации EGFR с группой больных с аденокарциномой лёгких с мутацией EGFR L858R в 21 экзоне выявлено статистически достоверное различие (р=0,026).
Таким образом, оценка EGFR, по нашему мнению, мало информативна, оптимально проводить оценку статуса гена EGFR молекулярно-генетическими методами. Тотальное окрашивание EGFR всех образцов не позволяет утверждать, что имеет место корреляция между наличием мутации и экспрессией EGFR.
Сравнительный анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров пролиферации и апоптоза, таргетных маркеров в светлоклеточном раке почки с мутацией EGFR
Клинические данные
Исследован операционный материал и клинические данные 336 больных прооперированных в НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова по поводу рака почки. Средний возраст больных 59,5 лет (от 17 до 85 лет). В 201 случае больные были мужчины (59,8 %), и в 135 - женщины (40,2 %). Во всех случаях опухоль гистологически определена как тючечноклеточный рак, светлоклеточный тип (100 %). Определение гистологического типа опухоли проведены в соответствии с требованиями и критериями классификации опухолей почек ВОЗ 2004 года.
Определение мутационного статуса гена ЕОРЯ.
При проведении молекулярно-генетического анализа мутация ЕОБЯ выявлена в 4 случаях из 336 (1,2 %). В 3 случаях (75 %}- мужчины, и в 1 случае женщина(25 %). Возраст мужчин составил: 50; 54; 60 лет. Возраст женщины - 54 года. Во всех случаях с выявленной мутацией гистологический тип определен как почечноклеточный рак, светлоклеточный тип. Степень дифференцировки по РиИгтап у всех мужчин расценена как «2» и у женщины «3». Во всех 4 случаях выявлена делеция в 19 экзоне.
Экспрессия иммуногистохимических маркеров (К-67, Р-53, Вс1-2, рецепторы эстрогена альфа) в светлоклеточном почечноклеточном раке почки с мутацией ЕСРЯ в 19 экзоне
Во всех 4 случаях было проведено иммуногистохимическое исследование Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а, что отображено в табл. 1.
У больных светлоклеточный раком почки с мутацией ЕОРЯ в экзоне 19 минимальное значение И-67 составило 4 %, максимальное значение 23 %, а минимальное и максимальное значение Вс1-2 и Р-53 составило 0 %.
В группе светлоклеточных почечноклеточных раков почки с мутацией ЕОРЯ в экзоне 19 в 1 из 4 случаев отмечена умеренная экспрессия ЕЯ-а в 12 % опухолевых клеток.
Таблица 1
Экспрессия иммуногистохимических маркеров (И-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-чх) в светлоклеточном раке почки с мутацией БвРЯ в 19 экзоне
Больные Пол/возраст Степень по РиЬппап К-67 Вс1-2 Р-53 ЕЯ-а
1 М/50 2 4% 0 0 5 (2+3)
2 М/54 2 23% 0 0 0
3 М/60 2 12% 0 0 0
4 Ж/54 3 20% 0 0 0
Мутация БОБЯ в почечноклеточном раке почки, светлоклеточном варианте явление редкое, исключительное, но имеющее значимую перспективу с точки зрения лечения и прогноза заболевания. В литературе
встречена статья с описанием одного случая рака почки с мутацией ЕвРЯ, авторы подчёркивали казуистичность наблюдения.
Экспрессия К1-67 колебалась от 4 до 23 %, экспрессия Р-53, Вс1-2 во всех 4 случаях была отрицательной. В 1 из 4 случаев (25 %) отмечена умеренная экспрессия ЕЯ-а в 12 % опухолевых клеток. С. Ьа^пег с соавт. (2004) провели иммуногистохимический анализ 182 образцов рака почки. Экспрессия рецепторов эстрогенов и прогестерона была отмечена только в 2 случаях (1,1 %) с числом окрашенных клеток менее 10 %. Это наводит на мысль, что подобная редкость экспрессии ЕЯ, возможно, каким-то образом, связана с мутацией БОРЯ. Исключительное событие экспрессия ЕЯ в раке почки встречающееся в 1,1 % случаев, среди светло клеточных раков почки с мутацией ЕвРЯ в 19 экзоне встретилось в 25 % случаев. Е. Ыакапо с соавт. (1984) продемонстрировали достоверно большую выживаемость у больных с положительным рецепторным статусом, чем с отрицательным рецепторным статусом.
ВЫВОДЫ
1. Частота активирующих мутаций в гене ЕвРЯ у больных с аденокарциномой лёгких Северо-Западного региона РФ, составляет 20,3 %. Делеции экзона 19 (61 %) являются основной разновидностью выявленных мутаций; мутации Ь858Я в 21 экзоне встречаются несколько реже (39 %).
2. Наличие и степень выраженности иммуногистохимических маркеров Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а, ЕвРЯ не способствуют выявлению мутации гена ЕвРЯ у больных с аденокарциномой лёгких, основное значение имеет молекулярно-генетический анализ мутации ЕОРЯ.
3. Аденокарциномы лёгких с мутацией гена БвРЯ Ь858Я в 21 экзоне характеризуется наиболее низкой пролиферативной активностью среди всех вариантов аденокарцином, отсутствием экспрессии Вс1-2.
4. Частота мутаций в гене ЕСБЯ у больных со светлоклеточным раком почки Северо-Западного региона РФ составляет 1,2 %. Делеции экзона 19 является основной разновидностью выявленной мутации; мутация Ь858Я в 21 экзоне не встречена.
5. Иммуногистохимические маркеры Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а, их степень и характер экспрессии не способствуют выявлению мутации гена ЕвРЯ в светлоклеточном раке почки. В 1 из 4 случаев светлоклеточного рака почки с мутацией ЕОБЯ (25 %) встречена умеренная экспрессия рецепторов эстрогена.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Нецелесообразно использовать иммуногистохимические маркеры К1-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а, ЕвРЯ для выявления групп с высокой вероятностью наличия мутации гена ЕСБЯ.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Иванцов, А.О. Лечение больного распространенным раком почки с мутацией EGFR гефитинибом: описание клинического случая / В.М. Моисеенко, А.В. Новик, А.О. Иванцов и соавт. // Сибирск. онкол. журн. -2008.-№6.-С. 76-9.
2. Иванцов, А.О. Мутация EGFR при раке почки и терапия гефитинибом: описание клинического случая / А.Г. Иевлева, А.В. Новик, А.О. Иванцов и соавт. // 4-й Рос. конф. по фундаментальной онкологии. -СПб., 2008. - Вып. 38. - С. 11.
3. Ivantsov, А.О. Down-staging of EGFR mutation-positive stage IV lung carcinoma by gefitinib provides an opportunity for surgical treatment of the disease: report of 2 cases / E.V. Levchenko, V.M. Moiseyenko, A.O. Ivantsov et al. // J thorac oncol. - 2008. - Vol. 3, Ns 4, suppl. 1. - P. S69.
4. Иванцов, А.О. Исследование II фазы по применению гефитшшба в первой линии лекарственного лечения больных неоперабельным немелкоклеточным раком лёгкого с мутацией гена эпидермального фактора роста / Ф.В. Моисеенко, А.О. Иванцов, А.Г. Иевлева и соавт. // Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии: Сб. материалов,-М., 2009.-Т. I. - С. 166.
5. Иванцов, А.О. Мутация EGFR при раке почки и терапия гефитинибом: описание клинического случая / А.Г. Иевлева, А.В. Новик,
A.О. Иванцов и соавт. // Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии: Сб. материалов.- М., 2009. - Т. I. - С. 163.
6. Иванцов, А.О. Особенности экспрессии молекулярно-биологических маркеров пролиферации и апоптоза у больных раком лёгкого с мутацией рецептора эпидермального фактора, роста / А.О. Иванцов, Е.Н. Имянитов,
B.М. Моисеенко и соавт.// Арх. патол. - 2009. -№ 6. - С. 9-12.
7. Иванцов, А.О. Частота мутаций эпидермального фактора роста в популяции больных аденокарцинсмой лёгкого / Ф.В. Моисеенко, А.О. Иванцов, А.Г. Иевлева и соавт. // Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии: Сб. материалов - М., 2009. - Т. I. - С. 72.
8. Ivantsov, А.О. EGFR mutations in renal cell cancer: noticeable frequency and association with sensitivity to gefitinib / E.N. Imyanitov, A. Sokolenko, A.O. Ivantsov et al. // Ann oncol. - 2009. - Vol. 20, suppl. 3. - P. 300.
9. Ivantsov, A.O. Down-staging of EGFR mutation-positive advanced lung carcinoma with gefitinib followed by surgical intervention: follow-up of two cases E.V. Levchenko, V.M. Moiseyenko, A.O. Ivantsov et al. // Onkologie. - 2009. -№ 32. - P. 674-7.
10.Иванцов, A.O. Конверсия неоперабельной стадии рака легкого в операбельную у EGFR-позитивных пациентов на фоне лечения гефитинибом:
два клинических случая / Е.В.Левченко, В.М. Моисеенко, А.О. Иванцов и соавт. // Совр. онкол. - 2010. - Т. 12, № 2. - С. 44-47.
11.Иванцов, А.О. Митотический индекс светлоклеточного рака почки с мутацией рецептора эпидермального. фактора роста / А.С. Артемьева, А.Г. Иевлева, А.О. Иванцов и соавт. // Материалы VI съезд онкологов и радиологов стран СНГ. - Душанбе, 2010. - С. 55.
12.Иванцов, А.О. Применение Ирессы (гефитиниба) в качестве терапии первой линии для лечения неоперабельных аденокарцином легкого, содержащих мутацию в гене EGFR / В.М. Моисеенко, С.А. Проценко, А.О. Иванцов и соавт. // Совр. онкол. - 2010. - Т.12, № 1. - С. 74-80.
13. Иванцов, А.О. Эффективность гефитиниба (ирессы) в первой линии терапии неоперабельных больных аденокарциномой лёгкого, содержащей мутацию в гене EGFR: исследование II фазы) / А.С. Барчук, Е.Н. Имянитов, А О. Иванцов и соавт. // Вопр. онкол.- 2010.- Т. 56, № 1.- С. 20-23.
14.Ivantsov, А.О. High efficacy of first-line gefitinib in non-Asian patients with EGFR-mutated lung adenocarcinoma / V.M. Moiseyenko, S.A. Procenko, A.O. Ivantsov et al. // Onkologie. - 2010. - № 33. - P. 231-8.
15.Ivantsov, A.O. High efficacy of first-line gefitinib in non-Asian patients with EGFR-mutated lung adenocarcinoma / E.N. Imyanitov, S.A. Procenko, A.O. Ivantsov et al. // ICACT 21st International Congr. anti-cancer treatment. - Paris; France, 2.010. - P. 441.
16.Иванцов, A.O. Экспрессия KI-67, P-53, BCL-2, рецепторов эстрогена альфа у больных светлоклеточным раком почки с мутацией рецептора эпидермального фактора роста / А.О. Иванцов, Е.Н. Имянитов, В.М. Моисеенко и соавт. // Арх. патол. - 2011. -№ 2. - С.'6-7.
Подписано в печать 27 04.li
Обьем 1 п.л. Тираж 100 экз.
Формат 60x84/16 Заказ № 316
Типография ВМА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, б.
Оглавление диссертации Иванцов, Александр Олегович :: 2011 :: Санкт-Петербург
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1.1. Факторы прогноза при раке лёгкого.
1.1.2. Рецептор эпидермального фактора роста (ЕОЫ1).
1.1.3. Кл-67.
1.1.4. Вс1-2.
1.1.5. Р-53.
1.1.6. Рецепторы эстрогена (ЕБ1).
1.2.1. Светлоклеточный рак почки.
1.2.2. Особенности иммуногистохимической экспрессии маркеров Р-53, Вс1-2, Ю-67, ЕЯ в светлоклеточном раке почки.
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Сравнительный анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров пролиферации и апоптоза, таргетных маркеров в аденокарциномах лёгкого с мутацией и без мутации гена ЕСЫ*.^
3.1.1. Клинические данные.
3.1.2. Определение мутационного статуса гена ЕОИ*.
3.1.3. Экспрессия К1-67.
3.1.4. Экспрессия Р-53.
3.1.5. Экспрессия Вс1-2.
3.1.6. Экспрессия ЕЫ- а.
3.1.7. Экспрессия ЕОШ1.
3.2. Сравнительный анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров пролиферации и апоптоза, таргетных маркеров в светлоклеточном раке почки с мутацией гена ЕСЫ1.
3.2.1. Клинические данные.
3.2.2. Определение мутационного статуса гена ЕОБЯ.
3.2.3. Экспрессия иммуногистохимических маркеров (К1-67, Р-53, Вс1-2, рецепторы эстрогена альфа) в светлоклеточном почечноклеточном раке почки с мутацией ЕвРЯ в 19 экзоне.^
Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Иванцов, Александр Олегович, автореферат
Актуальность проблемы. В настоящее время во всем мире, в том числе и в России, онкологические заболевания являются одной из самых частых причин инвалидизации и смертности трудоспособного населения. В связи с этим, в настоящее время многие исследования сосредоточены на поиске новых подходов к противоопухолевой терапии.
В последние годы в качестве лекарственной мишени (таргетная терапия) изучается рецептор эпидермального фактора роста (epidermal growth factor receptor - EGFR), как молекулярный фактор, ответственный за митогенную активность опухолевого роста. EGFR - трансмембранный гликопротеин молекулярной массой 170 kD, обладающий тирозинкиназной активностью. EGFR (или HERI) относится к семейству рецепторов эпидермального фактора роста, которое также представлено другими его видами: erbB2/HER2-neu; erbB3/HER3 и erbB4/HER4. EGFR экспрессируется на поверхности как нормальных, так и трансформированных эпителиальных клеток, а также участвует в регуляции клеточного роста и дифференцировки. Гиперэкспрессия EGFR опухолевыми клетками ассоциируется с поздними стадиями и метастатическим фенотипом заболевания, коррелирует с плохим прогнозом, резистентностью к проводимой лекарственной и лучевой терапии. Наиболее хорошо гиперэкспрессия EGFR изучены в бронхиолоальвеолярных аденокарциномах легких, инвазивном раке молочной железы, раке толстой кишки, раке предстательной железы.
Ингибиторы EGFR - группа препаратов, которые конкурентно связываясь с активными точками тирозинкиназы С (интрацеллюлярная часть) блокируют процесс фосфорилирования, и тем самым препятствуют фосфорилированию белков-переносчиков сигналов. Одним из ингибиторов EGFR является Гефитиниб (Иресса). Он одобрен в 2003 г. Управлением по контролю качества продуктов и лекарств США для лечения химиорезистентного диссеминированного немелкоклеточного рака лёгкого. 4
Ответ на терапию гефитинибом в общей популяции больных наблюдается лишь у 10-20 % пациентов (Fukuoka М., 2003). В то же время исследования, в которые были включены больные с мутацией гена EGFR, выявили невиданную ранее для этого заболевания частоту объективных ответов (от 55 до 100 %), при этом медиана времени до прогрессирования опухоли почти вдвое превышала исторический контроль (Lynch Т. J., 2004). Несравненно высокая эффективность терапии ингибиторами тирозинкиназных рецепторов у больных с активирующей мутацией гена EGFR требует обязательного определения данной мутации у больных с аденокарциномой лёгкого.
Многие исследователи указывают на зависимость между выраженным клиническим ответом к ингибиторам EGFR и наличием соматических мутаций внутри тирозинкиназного домена EGFR при многих опухолях эпителиальной природы (Blons Н., 2006; Zakowski M.F., 2009). Наиболее подробно изучены мутации EGFR при бронхиолоальвеолярном раке легкого в группе немелкоклеточных раков легкого. Выявлены наиболее часто встречающиеся мутации EGFR (экзоны 19 и 21), изменяющие пространственную структуру центров связывания тирозинкиназной части EGFR (Cohen S., 1974; Cohen D., 2007). Большинство исследователей указывают на молекулярную гетерогенность мутаций (Cohen S., 1974; Blons Н, 2006; Cohen D., 2007; Zakowski M.F., 2009).
Часть исследователей указывают на отсутствие стандартов в области иммуногистохимического определения сверхэкспрессии EGFR, так как результаты определения мембранного и цитоплазматического EGFR достоверно отличаются друг от друга, но не коррелируют с общей выживаемостью и рецидивированием заболевания (Cohen S., 1974; Cohen D., 2007).
В некоторых статьях указывается на различия в количестве и интенсивности окрашивания при иммуногистохимическом методе исследования опухолевых клеток с сверхэкспрессией EGFR в первичной 5 опухоли и метастазах, в частности, при светлоклеточном раке почки (Badalian G., 2007).
Статей содержащих описание иммунофенотипа с мутацией гена EGFR светлоклеточным раком почки нам не встретилось, хотя имеются работы описывающих иммунофенотипический статус (Ki-67, Р-53, Вс1-2) как при светлоклеточном раке почки (Suzuki К., 2002), так и при немелкоклеточном раке легкого (Radovic S., 2007).
Таким образом, анализ морфологических и иммуногистохимических особенностей опухолей с мутацией EGFR, в частности светлоклеточного рака почки, бронхиолоальвеолярного рака легкого, способен выявить те морфологические и иммуногистохимические критерии, которые могут способствовать как определению прогноза заболевания, так и выбора адекватного метода лечения.
Положения выносимые на защиту
1. У больных с аденокарциномой лёгких и светлоклеточным раком почки Северо-Западного региона РФ встречаются мутации гена EGFR (20,3 % и 1,2 % соответственно).
2. У больных аденокарциномой лёгких с мутацией гена EGFR в 61 % встречается делеция 19 экзона, в 39 % - мутация L858R в 21 экзоне, а у больных светлоклеточным раком почки выявляется только делеция в 19 экзоне гена EGFR.
3. Гиперэкспрессия EGFR на мембране опухолевой клетки не зависит от статуса гена EGFR у больных с аденокарциномой лёгких.
4. Экспрессия Ki-67, Р—53, Bcl-2, ER-a не способствуют выявлению мутации гена EGFR в светлоклеточном раке почки.
Цель исследования
Сравнительный анализ морфологических и иммуногистохимических особенностей опухолей у больных с мутацией гена ЕОРЯ и без неё.
Задачи исследования
1. Изучить частоту наиболее часто встречаемых мутаций в гене ЕвРЯ у больных с аденокарциномой лёгких Северо-Западного региона РФ.
2. Оценить возможную роль экспрессии Кл-67, Р—53, Вс1-2, рецепторов эстрогена альфа (ЕЯ-а), БвРЯ, в выявлении мутации гена ЕОРЯ у пациентов с аденокарциномой лёгких.
3. Выявить различия иммуногистохимической экспрессии Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а, БвРЯ у больных с аденокарциномой лёгких с различными активирующими мутациями гена ЕОРЯ.
4. Изучить частоту наиболее часто встречаемых мутаций в гене ЕОРЯ у пациентов со светлоклеточным раком Северо-Западного региона РФ.
5. Оценить роль экспрессии Ю-67, Р-53, Вс1-2, ЕЯ-а, ЕОРЯ в выявлении мутации гена ЕОРЯ у больных со светлоклеточным раком почки, и определить особенности экспрессии иммуногистохимических маркеров.
Научная новизна
Впервые проведено исследование по выявлению активирующих мутаций гена ЕОРЯ у больных со светлоклеточным раком почки СевероЗападного региона РФ. Были изучены иммуногистохимические особенности аденокарцином лёгких и светлоклеточного рака почки с мутацией в гене ЕОРЯ у пациентов Северо-Западного региона РФ. Выявлены принципиальные различия в частоте и выраженности экспрессии маркеров пролиферации и апоптоза. Показано, что иммуногистохимические маркеры пролиферации и апоптоза не связаны с частотой мутации ЕОРЯ при аденокарциноме лёгких.
Практическое значение
Определение типа мутации гена ЕОИ1 в аденокарциномах лёгких обладающих разным биологическим потенциалом, позволяет более полно дать биологическую характеристику опухоли, оценку её агрессивности.
Апробация работы
Результаты исследования были представлены в докладах на: 4 Российской конференции по фундаментальной онкологии (Санкт-Петербург, Россия, 2008); 20 конференция Европейской ассоциации исследования рака (Лион, Франция, 2008); 20 международном конгрессе противоракового лечения (Париж, Франция, 2009); б съезд онкологов и радиологов СНГ (Душанбе, Таджикистан, 2010).
Публикации
Материалы диссертации отражены в 16 опубликованных работах, в том числе 4 - в журналах, рекомендованных ВАК, 6 - в зарубежных журналах.
Структура и объём работы
Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, описания материала и методов, результатов собственного исследования, обсуждения полученных данных и выводов. Текст иллюстрирован 7 таблицами, 28 рисунками. Список литературы содержит 157 наименований, из которых 13 отечественных и 144 иностранных.
Заключение диссертационного исследования на тему "Морфологические и иммуногистохимические особенности опухолей человека с мутацией рецептора эпидермального фактора роста"
выводы
1. Частота активирующих мутаций в гене ЕОБЯ у больных с аденокарциномой лёгких Северо-Западного региона РФ, составляет 20,3 %. Делеции экзона 19 (61 %) являются основной разновидностью выявленных мутаций; мутации Ь85811 в 21 экзоне встречаются несколько реже (39 %).
2. Наличие и степень выраженности иммуногистохимических маркеров К1-67, Р—53, Вс1-2, ЕЯ-а, ЕвРЯ не способствуют выявлению мутации гена ЕОБЯ у больных с аденокарциномой лёгких, основное значение имеет молекулярно-генетический анализ мутации ЕОРЯ.
3. Аденокарциномы лёгких с мутацией гена БОРЯ Ь858Я в 21 экзоне характеризуется наиболее низкой пролиферативной активностью среди всех вариантов аденокарцином, отсутствием экспрессии Вс1-2.
4. Частота мутаций в гене ЕвРЯ у больных со светлоклеточным раком почки Северо-Западного региона РФ составляет 1,2 %. Делеции экзона 19 является основной разновидностью выявленной мутации; мутация 1,85811 в 21 экзоне не встречена.
5. Иммуногистохимические маркеры Кл-67, Р-53, Вс1-2, ЕЫ-а, их степень и характер экспрессии не способствуют выявлению мутации гена ЕвРЯ в светлоклеточном раке почки. В 1 из 4 случаев светлоклеточного рака почки с мутацией БОРИ. (25 %) встречена умеренная экспрессия рецепторов эстрогена.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Нецелесообразно использовать иммуногистохимические маркеры Кь-67, Р-53, Вс1-2, ЕИ-а, ЕОБЯ для выявления групп с высокой вероятностью наличия мутации гена БОРЯ.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Иванцов, Александр Олегович
1. Волкова, О. В. Основы гистологии с гистологической техникой / О. В. Волкова, Ю. К. Елецкий. — М.: Медицина, 1971. 272 с.
2. Дьердь, К. Практическая микротехника и гистохимия / К. Дьердь. -Будапешт: Изд-во акад. наук Венгрии, 1962. — 399 с.
3. Коржевский, Д. Э. Применение гематоксилина в гистологической технике / Д. Э. Коржевский // Морфология. 2007. - Т. 132, № 6. - С. 77 - 81.
4. Лавдовский, М. Д. Основания к изучению микроскопической анатомии человека и животных / М. Д. Лавдовский. СПб., 1887. - 398 с.
5. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли. М.: Мир, 1969. - 645 с.
6. Меркулов, Г. А. Курс патогистологической техники / Г. А. Меркулов / Л.: Медицина, 1969. 340 с.
7. Ромейс, Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс. М.: Изд-во иностранной лит., 1954. - 718 с.
8. Роскин, Г. И. Микроскопическая техника / Г. И. Роскин, Л. Б. Левинсон. М.: Совет, наука, 1957. - 467 с.
9. Сапожников, А. Г. Гистологическая и микроскопическая техника / А. Г. Сапожников, А. Е. Доросевич. Смоленск: САУ, 2000. - 476 с.
10. Саркисов, Д. С. Микроскопическая техника: Рук. для врач, и лаборантов / Д. С. Саркисов, Ю. Л. Перов. М.: Медицина, 1996. - 468 с.
11. Соболев, Л. В. Основы патолого-гистологической техники / Л. В. Соболев. СПб.:В. Безобразовъ и Ко, 1910. - 242 с.
12. Фрайштат, Д. М. Реактивы и препараты для микроскопии: Справ. / Д. М. Фрайштат. -М., 1980.-480 с.
13. Шацева, Т. А. Антиген Ki-67 в оценке опухолевой пролиферации. Его структура и функции / Т. А. Шацева, М. С. Мухина // Вопр. онкол.- 2004— №2.-С. 157-164.
14. Albain, K. S. Survival determinants in extensive-stage non-small-cell lung cancer: the Southwest Oncology Group experience / K. S. Albain, J. J. Crowley, M. LeBlanc et al. // J Clin Oncol.- 1991.-Vol. 9, № 9.- P. 1618-1626.
15. Badalian, G. EGFR and VEGFR2 protein expressions in bone metastases of clear cell renal cancer / G. Badalian, K. Derecskei, A. Szendroi et al. // Anticancer Res.- 2007.- Vol. 27, № 2.- P. 889-94.
16. Bargonetti, J. Multiple roles of the tumor suppressor p53 / J. Bargonetti, J. J. Manfredi // Curr Opin Oncol.- 2002.- Vol. 14, № 1.- P. 86-91.
17. Betticher, D. C. Prognostic significance of CCND1 (cyclin Dl) overexpression in primary resected non-small-cell lung cancer / D. C. Betticher, J. Heighway, P. S. Hasleton et al. // Brit J Cancer. 1996. - Vol. 73, № 3. - P. 294300.
18. Blons, H. Epidermal growth factor receptor mutation in lung cancer are linked to bronchioloalveolar differentiation / H. Blons, J. F. Côté, D. Le Corre et al. // Am J Surg Pathol.- 2006.- Vol. 30, № 10.- P. 1309-15.
19. Bot, F. J. Prognostic factors in renal-cell carcinoma: immunohistochemical detection of p53 protein versus clinico-pathological parameters / F. J. Bot, J. C. Godschalk, K. K. Krishnadath et al. // Int J Cancer.- 1994.-Vol. 57, № 5.- P.634 -7.
20. Bourdon, J. C. p53 and its isoforms in cancer / J. C. Bourdon // Brit J Cancer.- 2007.-Vol. 97, № 3.- P. 277 282.
21. Bourke, W. Lung cancer in young adults / W. Bourke, D. Milstein, R. Giura et al. // Chest.- 1992.- Vol. 102, № 6. P. 1723-1729.
22. Brundage, M. D. Mackillop Prognostic Factors in Non-small Cell Lung Cancer A Decade of Progress / M. D. Brundage, W. Davies // Chest. 2002. -Vol. 122, № 3. - P. 1037-1057.
23. Brundage, M. D. Phase I study of a decision aid for patients with locally advanced non-small cell lung cancer / M. D. Brundage, D. Feldman-Stewart, R. Cosby et al. // J Clin Oncol.- 2001.-Vol. 19, № 5,- P. 1326-1335.
24. Buccheri, G. Prognostic factors in lung cancer: tables and comments / G. Buccheri, D. Ferrigno // Eur Respir J.- 1994.- Vol. 7, № 7.- P. 1350-1364.
25. Buccheri, G. Prognostic value of the tissue polypeptide antigen in lung cancer / G. Buccheri, D. Ferrigno // Chest. 1992.- Vol. 101, № 5.- P. 12871292.
26. Bukowski, R. M. Interferon-gamma and CXC chemokine induction by interleukin 12 in renal cell carcinoma / R. M. Bukowski, P. Rayman, L. Molto et al. // Clin Cancer Res.- 1999.- Vol. 5, № 10.-P. 2780-9.
27. Caputi, M. Prognostic role of cyclin D1 in non small cell lung cancer: an immunohistochemical analysis / M. Caputi, L. De Luca, G. Papaccio et al. // Eur J Histochem.- 1997.- Vol. 41, № 2.- P. 133-138.
28. Chen, L. Steroid receptors in human renal carcinoma / L. Chen, F. R. Weiss, S. Chaichik et al. // Isr J Med Sci. 1980. - Vol. 16, № 11.- P. 756-60.
29. Cho, Y. Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations / Y. Cho, S. Gorina, P. D. Jeffrey et al. // Science. 1994.-Vol. 265, № 5170. - P. 346-55.
30. Clarke, M. Meta-analyses of adjuvant therapies for women with early breast cancer: the Early Breast Cancer Trialists' Collaborative Group overview / M. Clarke // Ann Oncol. 2006. -Vol. 10, suppl. 17. - P. 59-62.
31. Cohen, S. Epidermal growth factor: chemical and biological characterization / S. Cohen, J. M. Taylor // Recent Prog Horm Res. 1974- Vol. 30, №0.-P. 2188-2194.
32. Cortes-Funes, H. Epidermal growth factor receptor activating mutations in Spanish gefitinib-treated non-small-cell lung cancer patients / H. Cortes-Funes, C. Gomez, R. Rosell et al. // Ann Oncol. 2005. - Vol. 16, № 7. - P. 1081- 1086.
33. Couse, J. F. Estrogen receptor null mice: what have we learned and where will they lead us / J. F. Couse, K. S. Korach // Endocr Rev. 1999. - Vol. 20, № 3.-P. 358^17.
34. Dabbs. D.J. Diagnostic immunohistochemistry / D. J. Dabbs. Churchill Livingstone, 2002. - 828 p.
35. Diez, M. Prediction of survival and recurrence by serum and cytosolic levels of CEA, CA125 and SCC antigens in resectable non-small-cell lung cancer / M. Diez, A. Torres, M.L. Maestro et al. // Brit J Cancer.- 1996 Vol. 73, № 10.-P. 1248-1254.
36. Diez, M. Value of serum neuronspecific enolase in nonsmall cell lung cancer / M. Diez, A. Torres, L. Ortega et al. // Oncology (Huntingt). 1993. - Vol. 50, №2.-P. 127-131.
37. Downyard, J. Close similarity of epidermal growth factor receptor and v— erb-B oncogene protein sequences / J. Downyard, Y. Yarden, E. Mayes et al. // Nature.- 1984.-Vol. 307, № 5951. -P.521-7.
38. El-Deiry, W. S. Definition of a consensus binding site for p53 / W. S. El-Deiry S. E. Kern, J. A. Pietenpol et al. // Nat Genet.- 1992.-Vol. 1, № 1.-P.45- 9.
39. Ellis, R. E. Mechanisms and functions of cell death / R. E. Ellis, J. Y. Yuan, H. R. Horvitz // Ann Rev Cell Biol.-1991.-№ 7.- P. 663-98.
40. Feinstein, A. R. Clinical biostatistics XIV: the purposes of prognostic stratification / A. R. Feinstein // Clin Pharmacol Ther. 1972.-Vol. -13, № 2.-P. 285-297.
41. Fukuoka, M. Multi-institutional randomized phase II trial of gefltinib for previously treated patients with advanced non-small cell lung cancer / M. Fukuoka, S. Yano, G. Giaccone et al. // J Clin Oncol.- 2003.- Vol. 21, № 12.- P. 2227-9.
42. Furge, K. A. Met receptor tyrosine kinase: enhanced signaling through adapter proteins / K. A. Furge, Y. W. Zhang, G. F. Vande Woude // Oncogene.-2000.- Vol. 19, № 49.-P. 5582-5589.
43. Gerdes, J. Ki-67 and other proliferation markers useful for immunohistological diagnostic and prognostic enaluations in human malignancies / J. Gerdes // Semin Cancer Biol. -1990. Vol. 1, № 3.-P. 99-206.
44. Gerdes, J. Stein Producing of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated witn cell proliferation / J. Gerdes, U. Schwab, H. Lemke // Int J Cancer.- 1983.-Vol. 31, № 1.- P. 13-20.
45. Girgin, C. P53 mutations and other prognostic factors of renal cell carcinoma / C.Girgin, H. Tarhan, M. Hekimgil et al. // Urol Int.- 2001 Vol. 66, № 2 — P. 78-83.
46. Gofrit, O. N. Renal cell carcinoma: evaluation of the 1997 TNM system and recommendations for follow-up after surgery / O. N. Gofrit, A. Shapiro, N. Kovalski et al. // Eur Urol.- 2001.- Vol. 39, № 6.-P. 669-74.
47. Gruber, D. M. Conjugated estrogens—the natural SERMs / D. M. Gruber, J. C. Huber// Gynecol Endocrinol. -1999-Vol. 6, suppl. 13. -P. 9-12.94
48. Gustafsson, J. A. What pharmacologists can learn from recent advances in estrogen signaling / J. A. Gustafsson // Trends Pharmacol Sci.-2003. Vol. 24, №9.P. 479-485.
49. Hainsworth, J. D. Treatment of metastatic renal cell carcinoma with a combination of bevacizumab and erlotinib / J. D. Hainsworth, J. A. Sosman, D. R. Spigel et al. // J Clin Oncol.- 2005.- Vol. 23, №31- P. 7889-96.
50. Hall, J. M. The multifaceted mechanisms of estradiol and estrogen receptor signaling / J. M. Hall, J. F. Couse, K. S. Korach // J Biol Chem.- 2001.- Vol. 276, № 40.-P. 36869- 36872.
51. Harada, M. Prognostic significance of the expression of ras oncogene product in non-small cell lung cancer / M.Harada, H. Dosaka-Akita, H. Miyamoto et al. // Cancer.- 1992.- Vol. 69, № 1.- P. 72-77.
52. Hirata, T. Expression of CD44 variant exon 6 in stage I non-small cell lung carcinoma as a prognostic factor / T. Hirata, T. Fukuse, H. Naiki et al. // Cancer Res.- 1998.- Vol. 58, № 6.-P. 1108-1110.
53. Horio, Y. Prognostic significance of p53 mutations and 3p deletions in primary resected non-small cell lung cancer / Y. Horio, T. Takahashi, T. Kuroishi et al. // Cancer Res.- 1993.-Vol. 53, № 1.- p.
54. Imyanitov, E. N. Partial restoration of degraded DNA from archival paraffin-embedded tissues / E. N. Imyanitov, M. Y. Grigoriev, V. M. Gorodinskaya et al. // Biotechniques. 2001. - Vol. 31, № 5. - P. 1000-1002.
55. Ishida, H. The prognostic significance of p53 and bcl-2 expression in lung adenocarcinoma and its correlation with Ki-67 growth fraction / H. Ishida, K. Irie, T. Itoh et al. // Cancer. 1997. - Vol. 80, № 6.- P. 1034-45.
56. Itoi, T. Impact of frequent Bcl-2 expression on better prognosis in renal cell carcinoma patients / T. Itoi, K. Yamana, V. Bilim et al. // Brit J Cancer — 2004-Vol. 90, № 1.- P. 200-205.
57. Jayson, M. Increased incidence of serendipitously discovered renal cell carcinoma / M. Jayson, H. Sanders // Urology. 1998.-Vol. 51, № 2.- P. 203-5.
58. Jensen, E. V. On the mechanism of estrogen action / E. V. Jensen // Perspect Biol Med.-1962.-№ 6.-P. 47-54.
59. Kaghad, M. Monoallelically expressed gene related to p53 at lp36, a region frequently deleted in neuroblastoma and other human cancers / M. Kaghad, H. Bonnet, A. Yang et al. // Cell.- 1997.- Vol. 90, № 4. P. 809-819.
60. Kato, S. Activation of the estrogen receptor through phosphorylation by mitogen-activated protein kinase / Kato S., Endoh H., Masuhiro Y., et al. // Science.-1995.-Vol. 270, № 5241.-P. 1491-1494.
61. Katzel, J.A. Recent advances of novel targeted therapy in non-small cell lung cancer / J. A. Katzel, M. P. Fanucchi, Z. Li // J Hematol Oncol 2009.-№ 2—P. 2.
62. Kawai, H. Estrogen receptor alpha and beta are prognostic factors in non-small cell lung cancer / H. Kawai, A. Ishii, K. Washiya et al. // Clin Cancer Res.-2005.-Vol. 11, № 14.-P. 5084-5089.
63. Kessler, R. Blood vessel invasion is a major prognostic factor in resected non-small cell lung cancer / R. Kessler, B. Gasser, G. Massard et al. // Ann Thorac Surg.- 1996.-Vol. 62, № 5.-P. 1489-1493.
64. Kirkali, Z. Recent advances in kidney cancer and metastatic disease / Z. Kirkali, E. Tuzel, M. U. Mungan // Bju Int.- 2001.-Vol. 88, № 8.-P. 818-824.
65. Knudson, C. M. Bcl-2 and Bax function independently to regulate cell death / C. M. Knudson, S. J. Korsmeyer // Nature Genet. 1997-Vol. 16, № 4. -P. 358-63.
66. Kobayashi, S. EGFR mutation and resistance of non-small-cell lung cancer to gefitinib / S. Kobayashi, T. J. Boggon, T. Dayaram et al. // New Engl J Med.- 2005.-Vol. 352, № 20.-P. 786-792.
67. Komaki, R. Apoptosis and mitosis as prognostic factors in pathologically staged N1 nonsmall cell lung cancer / R. Komaki, T. Fujii, P. Perkins et al. // Int J Radiat Oncol Biol Phys.- 1996.- Vol. 36, № 3.- P.601-605.
68. Komaki, R. Prognostic biomarker study in pathologically staged N1 non-small cell lung cancer / R. Komaki, L. Milas, J. Y. Ro et al. // Int J Radiat Oncol Biol Phys.- 1998.- Vol. 40, № 4.- P. 787-796.
69. Korsmeyer, S. J. Bcl-2 initiates a new category of oncogenes: regulators of cell death / S. J. Korsmeyer // Blood. 1992.-Vol. 80, № 4. - P. 879-86.
70. Krajewski, S. Immunohistochemical analysis of in vivo patterns of Bcl-X expression / S. Krajewski, M. Krajewska, A. Shabaik et al. // Cancer Res-1994-Vol. 54, №21.-P. 5501-7.
71. Kuiper, G. G. Cloning of a novel receptor expressed in rat prostate and ovary / G. G. Kuiper, E. Enmark, M. Pelto-Huikko et al. // Proc Natl Acad Sci USA.-1996.-Vol. 93, № 12.-P. 5925-5930.
72. Lager, D. J. The expression of epidermal growth factor receptor and transforming growth factor alpha in renal cell carcinoma / D. J. Lager, D. D. Slagel, P. L. Palechek // Modern Pathol.- 1994.- Vol. 7, № 5.-P. 544-8.
73. Langner, C. Steroid hormone receptor expression in renal cell carcinoma: an immunohistochemical analysis of 182 tumors / C. Langner, M. Ratschek, P. Rehak et al. // J Urol.- 2004.- Vol. 171, № 2.- P. 611-4.
74. Lee, J. S. Expression of p53 oncoprotein in non-small-cell lung cancer: a favorable prognostic factor / J. S. Lee, A. Yoon, S. K. Kalapurakal et al. // J Clin Oncol.- 1995,-Vol. 13, № 8.-P. 1893-903.
75. Levine, A. J. P 53, the cellular gatekeeper for growth and division / A. J. Levine // Cell. 1997.-Vol. 88, № 3.- P. 323-331.
76. Liu, M.M. Opposing action of estrogen receptors alpha and beta on cyclin D1 gene expression / M. M. Liu, C. Albanese, C. M. Anderson et al. // J Biol Chem-2002- Vol. 277, № 27.-P. 24353-24360.
77. Lynch, T. J. Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib / T. J. Lynch, D. W. Bell, R. Sordella et al, // New Engl J Med.- 2004.- Vol. 350, № 21.-P. 2129-2139.
78. Mackillop, W. J. The importance of prognosis in cancer medicine / W. J. Mackillop // Prognostic factors in cancer / Ed. by M. K. Gospodarowicz, D. E. Henson, R. B. P. Hutter et al. New York: Wiley & Sons, 2001. - 832 p.
79. Martinez-Arribas, F. Bcl-2 expression in breast cancer: a comparative study at the mRNA and protein level / F. Martinez-Arribas, T. Alvarez, G. Del Val et al. // Anticancer Res. 2007.-Vol. 27, № 1 A.- P.219-222.
80. Martins, C. P. Modeling the therapeutic efficacy of p53 restoration in tumors / C. P. Martins, L.Brown-Swigart, G. I. Evan // Cell.- 2006.-Vol. 127, № 7.-P. 1323-1334.
81. Maruyama, R. Absence of Bcl-2 and Fas/CD95/APO-l predicts the response to immunotherapy in metastatic renal cell carcinoma / R. Maruyama, K. Yamana, T. Itoil et al. // Brit J Cancer.- 2006.- Vol. 95, № 9.-P. 1244 1249.
82. Massard, G. Bronchogenic cancer in the elderly: operative risk and long-term prognosis / G. Massard, R. Moog, J. M. Wihlm et al. // Thorac Cardiovasc Surg.- 1996.- Vol. 44, № 1.- P. 40-45.
83. Massaro, D. Estrogen regulates pulmonary alveolar formation, loss, regeneration in mice / D. Massaro, G. D. Massaro // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.- 2004.- Vol. 287, № 6.-P. LI 154-L1159.
84. Mazel, S. Regulation of cell division cycle progression by bcl-2 expression: a potential mechanism for inhibition of programmed cell death / S. Mazel, D. Burtrum, H. T. Petrie // J Exp Med. 1996.-Vol. 183, № 5. - P. 221926.
85. Meert, A. P. EFGR, c-erbB-2 and ki-67 in NSCLC and preneoplastic bronchial lesions / A. P. Meert, B. Martin, J. M. Verdebout et al. // Anticancer Res.-2006-Vol. 26, № 1A.-P. 135-8.
86. Mendelson, J. Status of epidermal growth factor receptor antagonists in the biology and treatment of cancer / J. Mendelson, H. Baselga // J Clin Oncol-2003 .-Vol. 21, № 14.-P. 2787-99.
87. Miettinen, P. J. Epithelial immaturity and multiorgan failure in mice lacking epidermal growth factor receptor / P. J. Miettinen, J. E. Berger, J. Meneses et al. // Nature.-1995.-Vol. 376, № 6538.- P. 337-341.
88. Mitsudomi, T. Mutations of the p53 gene as a predictor of poor prognosis in patients with non-small-cell lung cancer / T. Mitsudomi, T. Oyama, T. Kusano et al. // J Natl Cancer I.- 1993.- Vol. 85, № 24.- P. 2018-2023.
89. Mitsudomi, T. Ras gene mutations in non-small cell lung cancers are associated with shortened survival irrespective of treatment intent / T. Mitsudomi, S. M. Steinberg, H. K. Oie et al. // Cancer Res.- 1991.- Vol. 51, № 18.- P. 49995002.
90. Mitsutoshi, S. Prognostic implication of Ki-67 immunostaining in treating subclinical pleural cancer found at thoracotomy in lung cancer patients / S. Mitsutoshi, K. Kimitaka, K. Hiromasa et al. // Ann Thorac Surg 2001.-Vol. 71, № 6.-P. 1765-1771.
91. Mombini, H. Relationship Between Expression of p53 Protein and Tumor Subtype and Grade in Renal Cell Carcinoma / H. Mombini, G. Majid, R. Iran // Urology. -2006-Vol. 3, № 2.-P. 79-81.
92. Montanaro, D. Antiestrogens upregulate estrogen receptor beta expression and inhibit adrenocortical H295R cell proliferation / D. Montanaro, M. Maggiolini, A. G. Recchia et al. // J Mol Endocrinol.- 2005.- Vol. 35, № 2.-P. 245-256.
93. Morani, A. B. R. Lung dysfunction causes systemic hypoxia in estrogen receptor beta knockout (ERbeta-/-) mice / A. B. R. Morani, O. Imamov, K. Hultenby et al. // Proc Natl Acad Sci USA.-2006.- Vol. 103, № 18.-P. 71657169.
94. Morkve, O. Prognostic significance of p53 protein expression and DNA ploidy in surgically treated non-small cell lung carcinomas / O. Morkve, O. J. Halvorsen, R. Skjaerven et al. // Anticancer Res. 1993. - Vol. 13, № 3.- P. 571578.
95. Motzer, R.J. Prognostic factors for survival of patients with stage IV renal cell carcinoma: memorial sloan-kettering cancer center experience / R J. Motzer, J. Bacik, M. Mazumdar // Clin Cancer Res. 2004. - Vol. 10, № 18.- P. 6302S-3S.
96. Motzer, R. J. Renal-cell carcinoma / R. J. Motzer, N. H. Bander, D. M. Nanus // New Engl J Med.- 1996.- Vol. 335, № 12.- P. 865-75.
97. Mountain, C. F. Revisions in the International System for Staging Lung Cancer / C. F. Mountain// Chest. 1997.-Vol. Ill, № 6.-P. 1710-1717.
98. Murray-Zmijewski, F. P 53/p63/p73 isoforms: an orchestra of isoforms to harmonise cell differentiation and response to stress / F. Murray-Zmijewski, D. P. Lane, J. C. Bourdon // Cell Death Differ.- 2006.-Vol. 13, № 6,- P. 962-972.
99. Nakano, E. Hormone receptor in renal cell carcinoma and correlation with clinical response to endocrine therapy / E. Nakano, Y. Tada, H. Fujioka et al. // J Urol.- 1984.- Vol. 132, № 2.-P. 240-5.
100. Neilan, J. G. An African swine fever virus gene with similarity to the proto-oncogene bcl-2 and the Epstein-Barr virus gene BHRF1 / J. G. Neilan, Z. Lu, C. L. Afonso et al. // J Virol.-1993.-Vol. 67, № 7.- P. 4391-94.
101. Normanno, N. Group NCNBC. Mechanisms of endocrine resistance and novel therapeutic strategies in breast cancer / N. Normanno, M. Di Maio, E. De Maio et al. // Endocr-relat Cancer.- 2005-Vol. 12, № 4.-P. 721-747.
102. Nunez, G. Deregulated Bcl-2 gene expression selectively prolongs survival of growth factor-deprived hematopoietic cell lines / G. Nunez, L. London, D. Hockenbery et al. // J Immunol.-1990.-Vol. 144, № 9.- P. 3602-10.
103. Olive, K. P. Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome / K. P. Olive, D. A. Tuveson, Z. C. Ruhe et al. // Cell.- 2004.-Vol. 119, №6.-P. 847-60.
104. Olivier, M. The IARC TP53 database: new online mutation analysis and recommendations to users / M. Olivier, R. Eeles, M. Hollstein et al. // Hum Mutât.- 2002.- Vol. 19, № 6.-P. 607-614.
105. Oltvai, Z. N. Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog, Bax, that accelerates programmed cell death / Z. N. Oltvai, C. L. Milliman, S. J. Korsmeyer // Cell.-1993.-Vol. 74, № 4.- P. 609-19.
106. Oltvai, Z. N. Checkpoints of dueling dimers foil death wishes / Z. N. Oltvai, S. J. Korsmeyer // Cell.-1994.- Vol. 79, № 2.-P. 189-92.
107. Omoto, Y. Expression, function, and clinical implications of the estrogen receptor beta in human lung cancers / Y. Omoto, Y. Kobayashi, K. Nishida et al. // Biochem Bioph Res Co.-2001.-Vol. 285, № 2.- P. 340-347.
108. Paez, J. G. EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy / J. G. Paez, P. A. Janne, J. C. Lee et al. // Science-2004.-Vol. 304, № 5676.-P. 1497-1500.
109. Palomares, M. R. Gender influence on weight-loss pattern and survival of nonsmall cell lung carcinoma patients / M. R. Palomares, J. W. Sayre, K. C. Shekar et al. // Cancer.- 1996.- Vol. 78, № 10.- P. 2119-2126.
110. Parker, A. S. Development and Evaluation of BioScore: A Biomarker Panel to Enhance Prognostic Algorithms for Clear Cell Renal Cell Carcinoma / A. S. Parker, B. C. Leibovich, M. L. Christine et al. // Cancer.- 2009.-Vol. 115, № 10.-P. 2092-2103.
111. Pietras, R. J. Membraneassociated estrogen receptor signaling pathways in human cancers / R. J. Pietras, D. C. Marquez-Garbab // Clin Cancer Res.-2007-Vol. 13, № 16.-P. 4672^4676.
112. Pujol, J. L. Hypodiploidy, Ki-67 growth fraction and prognosis of surgically resected lung cancers / J. L. Pujol, J. Simony, G. Jolimoy et al. // Brit J Cancer.- 1996.-Vol. 74, № 6.-P.964-970.
113. Quinlan, D. C. Accumulation of p53 protein correlates with a poor prognosis in human lung cancer / D. C. Quinlan, A. G. Davidson, C. L. Summers et al. // Cancer Res.- 1992.-Vol. 52, № I7.p. 4828-4831.
114. Radovic, S. Non-small cell lung carcinoma: cyclin Dl, bcl-2, p53, Ki-67 and HER-2 proteins expression in resected tumors / S. Radovic, M. Babic, M. Doric et al. // Bosn J Basic Med Sci.- 2007.- Vol. 7, № 3.- P. 205-11.
115. Renouf, D. J. BCL-2 expression is prognostic for improved survival in non-small cell lung cancer / D. J. Renouf, R. Wood-Baker, D. N. Ionescu et al. // J Thorac Oncol.- 2009.- Vol. 4, № 4.- P. 486-91.
116. Rodenhuis, S. Clinical significance of ras oncogene activation in human lung cancer / S. Rodenhuis, R. J. Slebos // Cancer Res.- 1992,- Vol. 52, № 9.- P. 2665-2669.
117. Saiwaki, T. In vivo dynamics and kinetics of pKi-67: transition from a mobile to an immobile form at the onset of anaphase / T. Saiwaki, I. Kotera, M. Sasaki et al. // Exp Cell Res.- 2005.- Vol. 308, № 1,- P. 123-34.
118. Salomon, D. S. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in human malignancies / D. S. Salomon, R. Brandt, F. Ciardiello et al. // Crit Rev Oncol Hematol.- 1995.-Vol. 19, № 3.- P. 183-232.
119. Scagliotti, G. V. Prognostic significance of Ki67 labelling in resected non small cell lung cancer / G. V. Scagliotti, M. Micela, L. Gubetta et al. // Eur J Cancer. 1993.-Vol. 29A, № 3.-P. 363-5.
120. Schwartz, A. G. Nuclear estrogen receptor beta in lung cancer: Expression and survival differences by sex / A. G. Schwartz, G. M. Prysak, V. Murphy et al. // Clin Cancer Res. 2005.-Vol. 11, № 20.- P. 7280-7287.
121. Selby, P. The value of quality of life scores in clinical cancer research / P. Selby // Eur J Cancer.- 1993.-Vol. 29A, № 12.- P.1656-1657.
122. Skov, B. G. Oestrogen receptor beta overexpression in males with nonsmall cell lung cancer is associated with better survival / B. G. Skov, B. M. Fischer, H. Pappot//Lung Cancer.-2008.-Vol. 59, № l.-P. 88-94.
123. Slebos, R. J. K-ras oncogene activation as a prognostic marker in adenocarcinoma of the lung / R. J. Slebos, R. E. Kibbelaar, O. Dalesio et al. // New Engl J Med.- 1990.-Vol. 323, № 9.-P. 561-565.
124. Sobue, T. Prognostic factors for surgically treated lung adenocarcinoma patients, with special reference to smoking habit / T. Sobue, T. Suzuki, I. Fujimoto et al. // Jpn J Cancer Res.- 1991.- Vol. 82, № 1.- P. 33-39.
125. Takai, E. Tumor-induced hypercalcemia and parathyroid hormone-related protein in lung carcinoma / E. Takai, T. Yano, H. Iguchi et al. // Cancer-1996-Vol. 78, №7.-P. 1384-1387.
126. Thatcher, N. First- and second-line treatment of advanced metastatic non-small-cell lung cancer: a global view / N. Thatcher // BMC Proc 2008-Vol.2, suppl. 2.-P. S3.
127. Tungekar, M. F. Ki-67 immunostaining and survival in operable lung cancer / M. F. Tungekar, K. C. Gatter, M. S. Dunnil et al. // Histopathology-1991.-Vol. 19, №6.-P. 545-550.
128. Uchida, T. Clinical significance of p53, mdm2, and bcl-2 proteins in renal cell carcinoma / T. Uchida, J. P. Gao, C. Wang et al. // Urology.- 2002.-Vol. 59, № 4.-P. 615-620.
129. Vaux, D. L. Bcl-2 gene promotes hematopoietic cell survival and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells / D. L. Vaux, S. Cory, J. M. Adams //Nature.- 1988.-Vol. 335, № 6189.- P.440^12.
130. Volm, M. Prognostic value of ERBB-1, VEGF, cyclin A, FOS, JUN and MYC in patients with squamous cell lung carcinomas / M. Volm, W. Rittgen, P. Drings // Brit J Cancer.- 1998,- Vol. 77, № 4p. 663- 669.
131. Vousden, K. H. Live or let die: the cell's response to p53 / K. H. Vousden, X. Lu // Nat Rev Cancer.- 2002.- Vol. 2, № 8.- P. 594-604.
132. Warburton, H. E. P 53 Regulation and Function in Renal Cell Carcinoma / H. E. Warburton, M. Brady, N. Vlatkovic et al. // Cancer Res.- 2005.- Vol. 65, № 15.-P. 6498-6503.
133. World Cancer Report by Boyle P., IARC press, 2008.
134. Wu, C. T. The significance of estrogen receptor beta in 301 surgically treated non-small cell lung cancers / C. T. Wu, Y. L. Chang, J. Y. Shih et al. // J Thorac Cardiovasc Surg.-2005.-Vol. 130, № 4. -P. 979-986.
135. Yang, J. Prognostic significance of MCM2, Ki-67 and gelsolin in non-small cell lung cancer / J. Yang, N. Ramnath, K. B. Moysich et al. // BMC Cancer.- 2006.-№ 6.-P. 203.
136. Yano, S. EGFR tyrosine kinase inhibitor «gefitinib (Iressa)» for cancer therapy / S. Yano, M. Yamaquchi, R. P. Donq // Nippon Yakuriqaku Zasshi-2003.-Vol. 122, № 6.-P. 491-7.
137. Zigeuner, R. Value of p53 as a prognostic marker in histologic subtypes of renal cell carcinoma: a systematic analysis of primary and metastatic tumor tissue / R. Zigeuner, M. Ratschek, P. Rehak et al. // Urology. 2004 - Vol. 63, №> 4.-P. 651-5.