Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфогенетическая оценка изменений центральной нервной системы в инкубационном периоде острого клещевого энцефалита

\ ЭмСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

ПОЛИЩУК

Татьяна Ивановна

МОРФОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ИЗМЕНЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ

В ИНКУБАЦИОННОМ ПЕРИОДЕ ОСТРОГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА

(экспериментальное исследование) 14.00.15 — патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ОМСК 1934

Работа ышолнена в Омской государственной медицинской академии и Омском НИИ природноочаговых инфекций.

Научные ругаводители: - член-корреспондент РАМН,

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор ЗИНОВЬЕВ А. С.

- доктор медицинских наук,, профессор КВЕТКОВА Э. А.

Официальны? оппоненты: - доктор медицинских наук,

профессор КОВАЛЕНКО Е Л.

- доктор медицинских наук, профессор ЯРОСЛАВСКИЙ Ъ. Е.

Ведущя организация: Санкт-Пэтербургская медицинская

академия последипломного образования

Зшцчта сссто:гтап " 1г. на заседании сиэ-

цнализированого Совэтз К >. 30. 02 при Омской государственной медицинский академии по адресу? 644099, г.Омск, ул. Ленина, 1?.

С диссертацией можно сзнпкомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан "_"_139 г.

Ученый секретарь ипециализпрскашгаго Совета доцент

КОСТЕГИНА Л. Д.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность пройлеш Изучение клещевого энцефалита (КЗ) в течение более чем 50 лет позволило детально исследовать формальную морфологию болезни, клинику, основные элементы патогенеза болезни [Панов А.Г., 1956; Шаповал А.Е, 1968-1976; Погодина В.В., 1970-1994; Львов Д.К., 1960-19943. Но несмотря на продолжающуюся интенсивную разработку различных аспектов проблемы КЗ, многие вопросы, касающееся патогенеза этой тяжелой нейроинфекции, ее профилактики, диагностики, клиники и лечения до конца не решены и сохраняют свою актуальность до настоящего времени.

Успехи молекулярной биологии, иммунологии, иммунохимии создали предпосылки для появления новых идей и разработки иных методических подходов, способствующих дальнейшей, более полной и глубокой расшифровке морфогенеза КЭ Г Угрюмов М. В., 1992]. Особый интерес в этом отношении представляет возможность оценки инициальных морфологических изменений в оргш лз-ме инфицированного хозяина на ранних этапах формирующегося инфекционного процесса. Инициальные фазы общепатологических процессов, развивающихся на фоне вирусной инвазии, изучены мало.. Недостаточно ясны и механизмы вирусной инвазии в мозг, пути проникновения вирусного материала в клетки, что не **сз-вэляет детально изучить морфогенез болезни. Это обстоятельство, в свою очередь, осложняет решение ряда не только чисто научных задач, но и разработку в просоз прикладного значения. Работа в этом направлении требует комплексного подхода к морфологическому исследованию на экспериментальных моделях и соответствующей многоуровневой системы оценки состояния мезен-химадьных и нейроэктодермальных элементов мозга. Полученные при этом данные позволяют определить пусковые механизмы различных звеньев морфогенеза КЭ, что, в свою очередь, предоставит возможность обосновать ноЕые подходы к профилактике, ранней диагностике, этиотропной и патогенетической терапии болезни.

Цель работы создание теоретических основ для разработки ранней диагностики и терапии КЭ на основе изучения структур-кик иэм^л^ний в ЕНС в инкубационном перисдэ инфекции.

- г -

Залачи исследования:,

1. Исследовать в инкубационном периоде КЭ пути проникновения вируса б мозг, д-кументируя динамику появления в структурах мозга как зрелых вирусных частиц, так и их компонентов (вирусной РНК, антигенов).

2. Изучить ультраструктурные изменения нейроэк"эдврмальных и мезенхимальных элементов мозга в инкубационном периоде КЭ.

3. Установить корреляционные связи патоморфологических изменений сосудов, сосудистых сплетений, нейронов и глиальных клеток с динамикой появления в этих структурах вирусной РНК, антигенов и зрелых вирусных частиц.

4. Провести сравнительную оценку механизмов повреждения различных вон мозга при остром КЗ и особенностей патоморфологин энцефалита в инициальной фазе инфекции.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное морфологическое и вирусологическое исследование мозга в инкубационном периоде КЭ. При атом наблюдалась диссоциация во времени появления и локализации различных структурных компонентов вируса КЭ.

Показано, что первой регистрируется вируснаг РНК, локализованная в сосудистых элементах шага. Одновременно выявляется деструкция элементов гемато-знцефалического барьера и повышение проницаемости сосудов мозга для низкомолекулярных во-. ществ.

Обнаружение в нейронах и лериваскулярном пространстве зрелых вирусных частиц и вирусного антигена в сосудистой стенке ассоциируется с появлением первых морфологических признаков воспаления и ¡завершением инкубационного периода заболевания.

Практическая значимость. Комплексное изучение патологии ЦНС в инкубационном периоде острого КЭ открывает принципиально новые подходы в разработке методов равней диагностики, профилактики болезни и ее осложнений. & атой основе, в частности, вовможка патогенетическая коррекция повреждений ыикро-цириуляториого русла в инкубационном периода раввичнши группами лекарственных препаратов (антикоагулянтов прямого дейс-тивя, антиагрегантов, ангиопротеисоров, иммунокоррекгорав).

Влгдреию? результатов явследрваняв. По результатам работы ивдшто тфориэдгашто-штадичеекое письмо, утвержденное Госко-

■ а -

митетом санэпиднадэора РФ "Гибрндайациа нуклеиновых кислот как метод быстрой диагностики клещэвого энцефалита", Омск, 1992 г.

Апробация работ Материалы диссертаиш доложены на VIII Всесоюзной съезде патологоанатомов, г. Тбилиси, 1989г.; Всесоюзном симпозиуме "Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита", г. Иркутск, 1990 г. научно-практической конференции "Молодые ученые - практическому здравоохранению", г.Красноярск, 1990г.; I и II межрегиональных конференциях патологоанатомов Урала, Сибири и Дальнего Востока, г. Тюмень, 1991г., г. Курган, 1993г.; конференциях Свердловского НИИВИ, 1988, 1989; Омского НИИПИ, 1988-1993 гг.; II региональной научно-практической конференции "Вопросы медицинской профилактики и здоровья человека в Сибири", г. Омск, 1993г.; заседаниях Омского отделения общества патологоанатомов, 1989-1990 гг.

Лолохютя диссертации, выиосшыэ на защиту,

1. Наиболее ранние изменения в инкубационном периоде острого КЗ в мозге выявляются в сосудах микроциркуляторного русла индикаторных зон (стазы, тромбозы, повышение проницаемости стенок капилляров, периваскулярный отек) с распадом окружающего сосуд нейропиля. Параллельно а этих же отделах развиваются дистрофические изменения нейронов, индуцированные гипоксией, а в дальнейшем - проникновением в них вируса КЭ.

2. Основными следует признать два пути проникновения вируса КЗ в мозг: через капилляры могга в так навиваемых индикаторных зонах и через сосудистые сплетения желудочков мозга в ликвор, затем в эпендиму и перивентрикулярныэ стр1<стурн. Шр-кером миграции инфекционного агента является выявление ь стенках капилляров вирусной РНК.

3. Маркером завершения инкубационного периода и начала невральной фазы КЭ является появление в клетках и межклеточных пространствах мозга зрелых вирусных частиц и вирусного антигена.

Лубликшда. По тепе диссертации опубликовано 18 работ.

Объем и структура работа . Диссертация изложена на 141 странице машинописи. Состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственник исследований, заключения, выводое

и списка литературы, включающего 143 отечественных и 132 иностранных источника. Работа иллюстрирована 5 таблицам* и 70 рисунками.

МАТЕРИМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В соответствии с поставленными задачами было проведено исследование динамики течения острого КЗ в эксперименте на модели восприимчивого животного.

Экслеричентальные животные. Острую инфекцию моделировали на беспородных белых мышах, приблизительно одного возраста, массой 9-10,0 , полученных из Ленинградского питомника Рапполово. Животные перед поступлением в эксперимент проходили соответствующее контроли.

Вирус. Для инфицирования животных использован штамм вируса КЭ "Софьин" с контрольным испытанием его по основным генетическим маркерам, показавшим идентичность эталону. С целью исключения иммунопатологических реакций вирус вводился животным в культуральной форме. Был избран подкожный путь заражения, как наиболее полно обеспечивающий естестгэнные условия развития инфекционного процесса.

Вирус вводился животным в доге 1000 II)/50 подкожно. У мышей эта доза вызывает острую форму КЗ с летальным исходом в. финале на 10-12-е сутки с момента заражения.

Схем ' опытов. В течение первых четырех суток течения инфекции (латентный период) животных забивали через каждые <12 ч, затем через 24 ч. В группы брали по 10 белых мьпией, используя принцип случайного отбора. Исследованию подвергали органы только тех животных, которые погибали в присутствии исследователя. Общее число белых мышей, использованное в опытах составило 160 особей.

Вирусологические и имиуюдогжеские наследования были выполнены в лаборатории иммунологии и патогенеза вирусных инфекций Омского ШИПИ под руководством доктора медицинских наук, профессора Кветковой Э. А. В эксперименте у животных опре-. делялся титр вируса КЭ в крови и мозге по общепринятым методикам. Динамика иммунного ответа оценивалась по РИГА (гуморальный иммунитет) и реакции торможения миграции лимфоцитов

(клеточный иммунитет).

Для функциональной оценки гемзто-энцефаджеского барьера использовались вещества-трассеры. Перед забивкой в хвостовую вену мышей вводились трассеры (0,1Х-ный раствор Эванса голубого и 0,1Х-ный раствор трипанового синего на стерильном физиологическом растворе), которые после умерщвления животных экстрагировались из мозга спиртом с раствором серной кислоты с последующей коллориштрической оценкой (Мэтавкин П.А.-, Черток В.Ы., 1980; Чернух A.U. , 1984).

Для световой ыикрсс копии кусочки мозга фиксировали а 10%-ном нейтрально' • буферном формалине Лилли, спирт-формалине, ацетоне. Криостатные и парафиновые срезы окрашивали па-ноптическими, нейрогистологическими и гистохимическими методами. Применялись.окраски гематоксилин-эозином, ШИК-методом, пиронином и метиловым зеленым по Браше, по Нисслю, по Мийага-ва-Александровской, по Шпильмейеру, по Билыповскому-Гроссу, по Вейгерту на эластику.

Для электронной микроскопии кусочки мозга величиной 1x1 мм из коры головного мозга, подкорковых ядер, мозжечка, шейных сегментов спинного мозга фиксировали в 4Х-ном забуференном параформе (рН=7,2). Проводилось обезвоживание материала в спиртах с последующей заливкой в смесь эпон-аралдит. Пэлутон-киэ и ультратонкие срезы получали на ультратоме фирмы LKB, просматривали и фотографировали с помощью электронного микроскопов Сумского завода ЗИ-100С.

Итуногистохииия. Для индикации вирусного антигена использовался прямой и непрямой метод иммунофлуоресценции. Сыворотки, меченные ФИТЦ, против антигенов вируса КЗ. титрованные по эталонному штамму Софьин, были получены из Екатеринбургского НИИ вирусных инфекций. Криостатные и парафиновые срезы после инкубирования с сывороткой просматривали и фотографировали на микроскопах МБИ-15 и Домам-211 Оценка результатов проводилась по шкале градации свечения, предложенной Кар-мышевой М. Я (1979).

М?гэд уолекулярной гибридиаации нуклеиновых кислот in situ (совместно с ПЬманиным В. А., Рычковым А. А., Коневым а П.) применялся с целью индикации вирусной РНК в клетках головного и спинного мезга. В основе ЦГНК in situ лежит исполь-

- в -

эование меченных зондов (фрагментов' ДНК или РНК), комплементарных изучаемой м-РНК. Широкие возможности этого ме-ода и особенности его высокой специфичности позволили примененить его для решения основной задачи исследования - выявления вирусной РНК как маркера реплицирующегося пируса (Плетнев А. Г., 1984; Шаманин RA., 1991; В1шпН.Е., Haase А. Т., 1984; МзА1-1 ister А. А., 1985).

Радиохимические исследования проводились в лаборатории радиохимии Новосибирского НИИЕХ СО АН СССР под руководством ст. н. с., доктора химических наук Плегнега А. Г.

Мэрфоиетртеские и статистически!- методы. С целью объективизации ■ морфологического - исследования применялись количественные, полуколичественные и качественные методы.

Оценка состояния отдельных структур нервной ткани проводилась с использованием сетки Автандилоьа Г. Г. (1984) с вычислением средних величин.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ N ОБСУЖДЕНИЕ

Индикация вируса меченого аицвфаявда и изменения сосудов ЦИС в инкубационном периода

Оценка состояния сосудистых образований головного и спинного мозга при КЭ показала постоянство выявления структурных изменений капилляров, сосудистых сплетений желудочков и оболочек. Изучение этих образований проведено как с целью выявления структурных изменений, так и обнаружения в них компоне-нов цельного вируса или вирусных частиц.

Уже чере" 12 ч после введения вируса животным в сосудистых образованиях мозга были отмечены первые морфологические изменения. Ссуды подкорковых и стволовых, отделов головного мозга выглядели умеренно полнокровными, иногда в них встречались стазы и сладжи эритроцитов. Эндотелиалыше клетки в целом сохраняли морфологическую ивтактность, но базальный слой капилляров заметно терял четкость контуров. : Дискретные радиометки изредка регистрировались лишь в отдельных сосудах спинного и продолговатого мозга.

Через 24 ч г момента заражения животных мягкие мозговые

оболочки спинного и стволовых отделов головного мозга выглядели набухшими и полнокровными. Практически во всех зонах Коага было заметно паретическое расширение сосудов. В просве-Je отдельных сосудов определялись стазы, гемолиз и диапедез эритроцитов. Отдельные эндотелиальные клетки выглядели набухшими. Стенки сосудов были слабо ШИК-позитивными. При исследовании серийных срезов с помощью ЫГНК in situ в этот срок над эндотелиальными клетками венул ствола, мозжечка и спинного мозга определялись радиометки вирусной РНК, а при электронной микроскопии этих же отделов цитоплазма андотелиоцитов выглядела осмиофильной, уплотненной или, наоборт, разреженнной. Вокруг капилляров обнаруживались примыкавшие непосредственно к стенке сосуда оптические пустоты (перикапиллярный отек). Подходящие к мембране капилляра отростки астроцитов и нейро-пиль также выглядели отечными . В этом сроке над элементами сосудистой стенки специфическое свечение не выявлялось.

Параллельно с использованием морфологических методов четырем животным на каждый срок перед умерщвлением вводили растворы витальных красителей: 1Х-ный раствор Званса голубого и 1Х-ный раствор трипанового синего. Эти вещества вводили как трассеры для исследования проницаемости сосудов микроциркуля-торного русла. Замороженные срезы после введения красителей просматривали в световом микроскопе без дополнительной окраски. В шейных отделах спинного мозга, перивентрикулярной зоне и мозжечке в этот срок у всех животных при введении обоих красителей обнаруживали небольшие кольцевидные облака голубой вуали вокруг сосудов , что свидетельствовало о повышении сосудистой проницаемости для низкомолекулярных веществ разной массы уже через сутки после заражения.

ПЬ истечение 36 ч с момента инокуляции вируса в сосудах слияного и головного мозга всех животных нарастали гемоцирку-ляторные расстройства. В капиллярах спинного мозга, ствола, мозжечка, подкорковых ядер, аммонова рога, сосудистых сплетений и коры головного мозга активизировались процессы сладжирования эритроцитов. Стенки сосудов выглядели гомогенными, ШИК-позитивными. В криостатных срезах мозга животных, которым вводили трассеры, несколько увеличилась плопрдь прокрашиваемого п| остранства вокруг сосудов, концентрация краен-

Таблица 1

Динамика появления радиоютск вирусной РНК, вмрусшк частиц и антигенов в сосудах моага в инкубационном периода острого клецеваго энцефалита

Структуры моага 1 1 | Вирусные | Бремя (в часах)

1 1 121 1 I I 11111 24| 36| 48| 60 | 72 | ■ II 1 1 96

1. Спинной мозг РЯД V + ++ ++ +++ +++

(шейный отдел) т + + + +

АГ - - - ± ± ± ±

2. Ствол моага ' РВЯ + + ++ ++ +++

т ■ - _ - . + +

АГ - - ± +

3. Шривентрику- РВЯ + + ++ ++ +++

лярная зона т - + + +

АГ - ■ - ± 4 +

4. Мээлечок РВЯ + + ++ ++ +++

т - + + +

АГ ±

5. Аммонов рог РШ + ++ ++ +++

т + +

АГ +

6. Таламус РНК + ++ ++ +++

ж • . + +

АГ +

7. Кора головного РВК + + ++

мозга Ш - - -

АГ

Примечание: РНК -вирусная РНК, Ш -вирусная частица, АГ.-вирусный антиген;

телей в мозге в атом сроке несколько возросла, что свидетельствовало о нарастающем повышении проницаемости сосудов

(1X0,05).

Методом МГНК ш эЛа над цитоплазмой эндотелиальяых клеток сосудов спинного мозга, ствола мозга, перивентрикулярной зоны и мозжечка обнаруживались дискретные радиометки вирусной РНК

Через 48 ч после заражения в сосудах ЦШ достаточно часто встречались тромбы и стазы. Стенки мелких сосудов подвергались плазматическому пропитыванию с накоплением в них нейтральных и кислих глчкозаминогликанов. Резко набухшие эндоте-лиальные клетки выстояли в просвет сосудов, их ядра были несколько увеличеньши и гиперхромными. Эластические мембраны сосудов также были набухшими и разволокненкыми. В Еирхов-Робе-новское пространство по периферии сос/дов глубоко проникали красители, а экстракция их из ткани мозга показала увеличение проницаемости.

Специфическое свечение вирусного антигена в стенках отдельных венул шейного отдела спиннного мозга определялось на уровне + . При обработке срезов с помошмо МГНК т з^ч были видны многочисленные дискретные метки над цитоплазмой эндотелия сосудов спинного мозга, мозжечка, стволовых и псдкорковых отделов головного мозга.

На электроннограммвх канальцы и цистерны эндоплазматичес-кою ретикулума эндотелия быль расширены, в перикаоионе регистрировали округлые полости, большое количество микровезикул, а очертания ретилулума становились нечеткими. В расширенном пер1заскулярном пространстве 1-апилляра шейного отдела спинного мозга обнаружены единичные зрелые вчрионы. При этом обращала на себя внимание мозаичность поражения мозга.

В этой сроке отмечена активация специфического клеточного иммунитета с тенденцией к быстром} подъему напряженности, определяемому процентом торможения миграции лимфоцитов по отношению к контрсуш. При этом тьгры вируса в мозге не регистрировались методом биопробы, а вирусеым находилась на уровне 31к БОЕ/мл.

Ч 60 ч от момента введения вируса гемодинамика в . мозге продолжила прогрессивно ухудшаться. В сосудах индикаторных зон найаодался широкий спектр расстройств кро-юобращения: стазы, сладжи, кровоизлияния, тромбы. В паретически ра'.лирен-ных венах мозжечка и подкорки часто формиров; лись тромбы. В

1 Рпрхов-Робеновских пространствах появлялись еди-

шиирэ ?ритроцитн, в просвете этих сосудов располагались служит-"? 7шдотедп?(пьные клвтки.

П/'и ялектронной микроскопии вокруг капилляров регистрирован! ).'он'1н-ч1 отек астроцитарннх ножек и межклеточного вещества с ог.рсрппянрем »»лких и крупных полостей. Эндотелий капилляров и этой зоне был вполне сохранным с умеренной осмиофилией нятопт.'г'лцч. Б других полях зрения капилляры и о::руиашщие их структуры, напротив, выглядели сильно повревденнши. Баэаль-

слой эндотелия был разрушен, ' органеллы практически не дшН.еренцировались. Рокруг таких сосудов в расширенном пери-васку .тарном проотр?нг:тве распределялись дистрофически и нек-робиотически измененные клетки гематогенного происхождения: лт.пЬоцпгн, макрофаги, полиыорфоноядерные лейкоциты с вакуоля-пи в цитоплазме, скоплениями осмиофилышх гранул и уплотненным цитонлзэмэтическим мэтриксом.

Содердание вирусной РНК в клетках возросло значительно, о ЧгМ сридетельствовало появление большого количества радиометок ниц цитоплазмой эндотелиальных клеток сосудов излюбленных гон локализашш вирусе. Слабое сведение вирусного антигена выявлялось в сосудах спинного мозга и пзривентрикулярной зоне на усавне +.

Через 72 ч после гаражния животных большая часть сосудов, мозга оказалась в состоянии пзретического расширения. Гемо-циркуляторные расстройства нарастали в виде стазов, появления тромбов. В этот же срок сосудистые изменения регистрировались не только в спинном мозге, но и в подкорковых отделах, мозжечке и коре больших полушарий.

Радготтки над сосудами индикаторных зон в этом сроке встречались часто, они лежали дискретно и группами. Свечение вирусного антигена в сосудистой стенке спинного мозга, ствола моргв, перивентрикулярной зоне было на уровне +.

На злектроннограммах в просвете сосудол часто обнаруживали агрегаты эритроцитов, тромбоцитов, фиксированные к сосудистой стенке. В расширенных периваскулярных пространствах также об-наруч1эа-псь скопления эритроцитов. Назальный слой .капилляра "?кл П! -г-рчлистым, рачуотвироррч, с разной электронной плот-носч-ъ'- <ч>хр»т«>г»>чся учаи-хках. Б эндотелиоцитах отдельных

- Л 1 _

a J.

капилляров подкорки, мозжечка и спинного мозга деструкция ор ганелл, главным образом, энергозавнеимых, достигапа степени дистрофии и некроза.

Через 96 ч после инокуляции вируса гемоциркула торные н.-фу шения были еще более выраженными. В сосудах разного калибра обнаруживали тромбы, очагсьые кровоизлияния. В крупных сосудах еще сохранялись эластические волокна и мышечные клетки, но в наиболее измененных капиллярах нее сюи подвергались расплавлению с накоплением в периваскулярном простра,тстве некротических масс, фрагментов распадающегося нейропиля, несколько позже в этих зонах появлялись гематогенные клетки.

При исследовании срезов мозга методом МГНК in situ радиометки были видны в виде мозаики во всех отделах мозга. При этом важно подчеркнуть, что они чаще встречались над наименее измененными сосудами. В зонах, где наблюдался некротический зндоваскулит, радиометки регистрировались гораздо реже. Наблюдалось слабое специфическое СЕечение в стенке сосудов всех исследуе!шх зон. Поиски же корреляции между выявлением вирусного антигена и вирусной РНК с факторами инфекционного процесса (титр вируса в крови) показали, чго при нарастании показателей вирусемии специфическое свечение в сосудистой стенке регистрировалось часто и вирусную РНК при этом обнаруживали в значительном числе сосудов, причем радиометки располагались не только над цитоплазмой эндотелиоцитов, но и по межклеточными пространствами. Бее это можно оценить ка-: показатели активной инвазии беэбарьерных зон мозга вирусом и их составными частями. .

На улмраструктурном уровне в подкорковых сосудах отмечалось нарастание дистрофических и некробиотических изменений. Во многих сосудах базальный слой местами становился гомогенным, обычная слоистость исчезала, в центральных отделах цитоплазмы определялись очаговые скопления электронноплотных РНП-гранул. В периваскулярном пространств^ подкорке ли. капилляров в этот срок встречались вирусные частицы, расположенные как дискретно, та-: и в виде длинных цепочек.

Так"м образом, на 4-е сутки после введения вирусм д~я большей части животных инкубационный период «завершился и появились первые признаки болезни: отказ от пиэд, гипергид-

роз, тремор конечностей. Еирусная FKK в индикаторных зонах мозга, выявленная методом МГПК in situ, имеющем наиболее высокую специфичность и чувствительность, была определена уже черев 24 ч поел? заражения швотных . В этих же вонах, но только уде через 72-96 ч, выявлено слабое свечение вирусного антигена. Отдельные вирусные частицы были обнаружены в пери-васкулярном пространстве спинномозговых капилляров через 48 ч после заражения при максимальной проницаемости сосудистой стенки на сроке S6 ч от начала опыта. В дальнейшем происходило нарастание гемоциркуляторных расстройств, альтерации эндо-телиоцитов и других структур сосудистой стенки, что совпадало с нарастанием ьирусемии и напряженности клеточного иммунитета. ''

В дальнейшем, с 5-х по 8-е сутки после введения швотным вируса КЗ гемоцирку.таторные нарушения бчли также ярко выражены. Шгкие мозговые оболочки выглядели отечными, с очаговой пметанноклеточнс/й инфильтрацией. Патологические изменения сосудов на этом сроке наблюдений были диффузными. Обильная инфильтрация сосудов круглоклеточными элементами с примесью плазмоцитов и лейкоцитов, наличие большого количества массивных периязскулярных муфт, диффузно-рассеянных в мозге, особенно реэко были внрулены в подкорковых ядрах, аммоновом роге и мозмечке. Воспалительные изменения постепенно уменьшались в каудэльном направлении. В наименее измененных сосудах маргинальные отделы цитоплазмы эндотелиоцитов выглядели реэко ва-куопиэырозанными и набухшими.

Тэким образом, в периоде с 5-х по 8-е сутки, который характеризуется как раугеф невральчой фазы инфекции, у всех животных регистрируется некротический энцефалит с выраженными гемоциркуляторнкми нарушениями в сосудистом русле и активацией фазы пролиферации воспаления, что коррелирует с максимальными показателям! клеточного и гуморального иммунитета.

Изменения в ЦНС с 9-х по 1?-е сутки,можно было оценить как Финал инфляции. Ежедневно регистрировали животных., в мозговой коме или павших. Е. мозге циркуляторные нарушения достигали максимума. В различных участках мозга по периферии сосудов им-:1 л 1.;?сто выраженный периваокулярный отек. В.части сосудов. Внрхов-РобеноБсь'ое пространство было зиюлнено гематогенными

и г .¡шальными элементами з виде пери- и панваскулитов. Инфильтрат состоял из лимфоцитов, макрофагов, глиальных клгэток, плазмоцитов, гистиоцитов. К финалу инфекции титр вируса в мозге снижался, соответственно наблюдалось резкое уменьшение числа раджозток вирусной FKK над сосудистой стенкой. В- стенках поврежденных сосудов выявляли радиометки над цитоплазмой макрофагальных элементов. При инкубировании срезсв с антисывороткой против вируса КЗ наблюдали специфическое свечение сосудистых стенок на уровне + или ■*, редко в стволовых отделах отмечали участки со свечением на уровне (+, -). Вирусные частицы и цель"? цепочки встречали у?": в межклеточном пространстве, так и ь цитоплазме разрушающихся клеток. *

Таким образом, изменения сосудов характеризуются дистрофическими и некротическими изменениями в инкубационном периоде и пролиферативными - в периоде разгара болезни и терминальном. Нарастающий внутри- и внеклеточный отек сопровоЗкдается повышением проницаемости и нарушением внутримсзговой гемодинамики. .Вирусные частицы, в эндотелиоцитах индикаторных зон мозга не были выявлены.' Обнаружение же вирусных маркеров (ра-» диометок РНК, МФА) в инкубационном периоде свидетельствует о трансэндотелиальной миграции вируса.

Надо полагать, неоднозначный спектр вирусиндуцированных морфологических проявлений сосудистого.русла связан как с ци" тотоксическим, так и с цитопролиферативным действием. .. вируса на клетки и структуры сосудистых образований, а также с реакциями местного и общего иммунитета, что проявляется формированием полиморфноклеточных инфильтратов в разгар инфекции'и терминальном периоде.

В связи с особой формой реакции эпендимы желудочков, пери- , вентрикулярных зон и сосудистых сплетений на вирусную инфекцию, мы сочли необходимым описать патологические изменения этих образований отдельно.

В первые сутки эпендима желудочков сохраняла свою морфологическую интактность»п однако, по периферии ее сосуды -рыли расширены с перегруппировкой глиальных элементов.

„ С 35-го по 48-й часы над клетками эпендимы были видны единичные рэдлометки. -.В сосудистых сплетениях в этом сроке наблюдали рнэчительное расширение капилляров, отек ворсин. Р

различных участках ворсин регистрировали единичные и сгруппированные радиометки.

В дальнейшем, на 60-й и 72-й «асы течения инфекции в сосудистых сплетениях резко усилилась отечность, появились участки диапедеза эритроцитов. На этом сроке наблюдений выявлены изменения эпендимы, которая в отдельных участках желудочков приобретала двуслойный характер. ПЬ периферии этих участков отмечена резкая гиперемия сосудов с перегруппировкой глиаль-кых элэментов, формирование так называемых глиальных "подушек". Радиометки вирусной РНК в этих сроках часто обнаруживали над эпендимоцитами и над клетками, окружающими капилляры сосудистых сплетений. Специфическое свечение вирусного антигена с достаточным постоянством наблюдали на уровне + или ++.

С 5-х суток течения игфекции у всех животных прогрессировал отек мозговой ткани. Желудочки выглядели расширенными. Эпендимоциты в отдельных участках слущивались, на их месте накапливались белковые флокуляты, в других участках эпендима была отелезна диапедеэными кровоизлияниями, встречались небольшие, по преимущеемтву лимфоидного типа, инфильтраты. Радиометки вирусной РНК в этом сроке встречались над клетками сосудистых сплетений, эпендимоцитачи и глиальными скоплениями в паравентричулярной зоне. Свечение вирусного антигена над эпендимой было ча уровне + или ++. Описанную морфологическую картину оценивали как эпендиматит. В дальнейшем, в.разгар болезни отечность сосудистых сплетений нарастала, в них встречались кисты о белювым содержимым, иногда с примесью эритроцитов и лейкоцитов. Патоморфологическш изменения ворсин сосудистых сплетений желудочков южно было оценить как хориои-дит.

. В терминальном периоде инфекции с 9-х по 12-е сутки нарастала дллатация желудочков мозга и очаговое отслоение эпендимы.' В перивентри:;улррном пространстве скапливались гематогенные и глиальные клетки в виде подушек. Над относительно ин-тактными апендиыарнымл клетками выявлялись дискретные и группами радиометки вирусной РНК. Над эпендимой обнаруживали специфическое свечение вирусного антигена на уровне + и ++.

Таким образом, патоиэрфологические изменения желудочковых образований на разных сталях инфекционного процесса при КЗ

можно определить как ьентрпкулит , перивентрпку.1':;?, а мнения в сосудистом сплетенш: как гсориэидлт.

Оценивая изменения в желудочковой системе с позиций распространения вируса в'мозге, мы полагаем, что сосудистые сплетения, таннициты, ' ликвор и эпендима желудочков представляет собой один из путей инвазии вируея и его компонентов в мозг. Быстрая циркуляция лидера делает возможным проникновение вирусной РНК в к-^тутт зпеядкм« :т из них в окру.лакхцце яелудочек отделы нозга уке в течение fi*p?nx «уток после вэр?>'*н!п. Развитие в желудочках и перивентрикулярной зоне пролий-рс^ив-нкх процессов мо*но рзеенэтривзть- результат цитопролкфе-ративного действия вируса, а понретенпе эпен.ци!*ы - как цито-токсическое его воздействие на клетки мозга.

Иияшкщся вируса 1гл?г.эгого эще£аякга и нейронов и исПпог.г"} и 1пи;'5зциозпго.ч першдэ

Наиболее ранние морфолргические изменения нейронов у- всех исследован-чта гивотннх б.чпи зарегистрированы уяе через 12-24 чеса после заражения. Нотонейрокы приобретали несколько округленную форму, слабо окрашивались тиояином.' Контуры цитоплазмы и ядра выглядели довольно четкими. 3 цитоплазме просматривались небольшие- Еакуоли, , располагаешься в перикарионе или на периферии. Аксон и дендриты клеток четко контурирова-лись, но иногда имели нерегулярные расширения и расплывчатость рисунка. Ядра измененных нейронов были несколько увеличены в размерах, округлены и иногда расположены эксцентрично.

Через 26 ч от момента введения эируса в клетках Пуркинье мозжечка, грушевидных нейронах коры, мотонейронах шейного отдела спинного мозга и клетках III-V слоев коры часто встречала ядра лопастной формы с неравномерным распределением и мзр-гинацией хроматина. Отмечалось утолщение, гомогенизацию,' разрыхление и локальный распад цитоплазматической мембраны, пластинчатый кошлекс был с нечеткими контура».®, мно^-естаом пузырьков, с образованием полостей и очаговой пролиферацией рибосом. Единичное гранулярные радиометки часто встречались над цитоплазмой нейронов, лежащих вокруг сосудов спиного мозга, моэдачка, ствола и перивентрикулярной зоны мозга.

Через 48 ч после введения вируса изменения со стороны нейронов прогрессировали в оральном направлении. В молекулярном слое мозжечка обнаруживалось увеличение в объеме клеток Пур-кинье, окрашенных тионином в бледно-голубой цвет с округлым гиперхромным ядром. Подобные изменения встречались и в мотонейронах верхнегрудного отдела спинного мозга. В шейном отделе мотонейроны содержали равномерно распыленную хроматофиль-ную субстанцию и слабо прокрашенную тионином цитоплазму. Отростки таких клеток выглядели набухшими и хорошо просматривались. Контуры цитоплазмы а ядра были четкими. Во многих нейронах описанных локализаций обнаруживались утолщение, гомогенизация, раг.рыхление, локальный распад цитоплазматической мембраны, т^лилые дистрофические изменения митохондрий, в более сохранных клетках - их гиперплазия. Наряду с описанными изменениями в цитоплазматическом матриксе нейронов обнаруживали структуры, которые не встречались в клетках контрольных жиБиа'ных, представленные скоплениями осмиофильных РНП-гранул, напоминазгах вирусы, но лишенные оболочкь, и отдельные вирусные частицы в цитоплазматическом матриксе клеток, дискретно располлгэнные в расширенных цистернах, каьальцах и везикулах эндоплазматической сети и пластинчатого комплекса мотонейронов.. Они имели сферическую форму (37 нм в диаметре) с хорошо выраженной белковой оболочкой вокруг электронноплотного нук-леотида..

Радиометки часто регистрировали как над цитоплазмой . ин-тактных, так и дистрофически измененных нейронов индикаторных зон иозга. Уже с первых*суток опыта обнаруживали специфичные радиометки, что говорит об инвазировании вируснгй РНК в ранние сроки инкубационного гериода. В атом же периоде появилась тенденция к нарастанию титроо вируса в мозге.

Через 60 ч после инокуляции чируса у больпгаства экспериментальных животных параллельно нарастанию гемоциркуляторных расстройсть в головном и спинном мозге многие периваскулярно расположенные нейроны терялл контуры или становились, гиперх-ромными. В отдельных нейронах имел место тотальный лизис нисслевского вещества с появлением в периферических отделах цитоплазмы небольгих базофильных глыбок. Ядра клеток смещались к периферии, диффуэкт п^окраширались танином, поДверга-

Таблица 2.

Динчмика вигаяенш рвдюмвтак вирусной РНК , вирусных частиц и антигеноп в нейронах моага в ипубацпннсм периоде острого клрфваго энцефалита

-—1-1-1-:- ■

Структуры (Вирусные | Время (в часах)

мозга |структуры|-г~—I—~г-1-1-1—:-

| | 12| 24| 36| 48| 60 Г 72 I 95

* 111111_I

1. Спинной мозг РНЯ, -•<■++++++ +++ -Н-+ (шейный отдел) Ш ---.+ + + +

АГ.....± +

2. Ствол мозга РНК - + -н- ++ ++ +++ +++

т. ----•-+ +

др - -- -- + +

3. Беривентрику- РНЯ - -н ++ ++ ++ , +++ +++ лярная зона Ш. - - - + +' + +

¿Г ----- +

4. Мозжечок РНЯ - + ++++++ '•+++, +++

'.В1 - - - - +■ + + АГ - - -' - - ± +

5. Аммонов рог РНК т + . + + ++ . +++ +++

Ш - - . - - • • + +

АГ ----■-•- - ±

6. Таламус РНЯ - + + . х ++ +-» +++

а! - - - + +

АГ - - ■ - -

7. Кора головного РНК - + + . + ++ ++ ,

мозга Ш -- _-_ .- +.

АГ . - - - - - -

Примечание: РНК -вирусная РНК, Ш -вирусная частица, . . АГ - вирусный антиген;

лись рексису, лизису. .

В изменениях улътраструктуры нейронов прослеживалась шза-

ичность. Степень повреждения их значительно варьировала от вполне сохранных клеток до полной их гибели, причем на месте погиСлих мотонейронов обнаруживали скопления и дискретно лежащие зрелые вирусные частицы. Отдельные нейроны имели просветленную цитоплазму с очаговым скоплением рибонуклеопротеид-ных зерен в цитоплазматическом матриксе и-гиперплазией митохондрий с разрушенными кристами и скоплениями фрагментов разрушающихся мембран.

Фрез 72 ч- после заражения животных в нейронах индикаторных вон мозга прогрессировал хроматолиз, клетки практически обесцвечивались. Цитоплазма их при этом выглядела гомогенной или резко вакуолизированной, ядра округляюсь, увеличивались в размере, становились гиперхремными, часто располагались эксцентрично или, наоборот, приобретали угловатую форму, сморщивались и были гиперхромными. Вокруг таких нейронов группировались глиальные клетки. В молекулярном слое коры мозжечка пролиферировала периваскулярная глия. Среди клеток Пуркинье часто встречались клетки, увеличенные в объеме с нечеткими контурами цитоплазмы .. ядра, хроматолизом нисслевско-го вещества В некоторых их них от тигроидного вещества отс-тавались лишь мелкие зерна. №стами наблюдался феномен "выпадения" клеток Пуркинье с формированием нейронофагических узелков. В стволовой части мозга, коре аммонова рога встречались отдельные сморщенные, приобретающие угловатую форму нейроны, усиленно воспринимающее основные красители и содержащие большое количество дискретных .и гранулярных радиометок.

Размножащееся нуклеоиды располагались на наружной поверхности внутренних мембран дистрофичных нейронов индикаторных зон в виде укрупненных рибосом с отпочкованием зрелых вирио-нов в полости эндоплагматического ретикулума, пластинчатого комплекса и вакуолей . Радиометки часто регистрировали как над цитоплазмой интактных, так и дистрофически измененных нейронов описываемых зон. В этом же сроке регистрировалось неустойчивое свечение в нейронах шейного отдела спинного моз-па и мозжечка.

Через 96 ч ог .ломента заражения расположение измененных нейронов в структурах мозга приобретает мозаичный характер. К этому сроку патологические иемененич вшмялн лишь в нейронах

шейного, грудного отделов спинного мозга, коры и зубчатых . ядер мозжечка, черной субстанции, располагавшейся в ножках мозга, III и V слоев коры. Обращала внимание выраженная вариабельность поражения: от сохранных клеток до полной их гибели. В подкорковых образованиях и коре нейроны подвергались резкому набуханию с хроматолизом, огрубением, распадом и расплавлением нейрофибрилл, пикнозом и лизисом ядер, утолщением и фрагментацией отростков.

Мэзжечок, как никакой другой отдел, был подвержен интенсивному поражению. В коре мозжечка обнаруживались целые поля выпадения клеток Пуркинье. На их месте формировались очаги спонгиозной дегенерации. Часто встречались пролифераты берг-мановской глии. В стволовых и подкорковых отделах мозга нейроны подвергались лизису, распадались на глыбки и зерна. Вирусный антиген выявлялся, по периферии измененных и сохранных нейронов на уровне +. Радиометки вирусной РНК часто обнаруживали над цитоплазмой интакгных и реже погибающих клеток.

Таким;образом, нейроны безбарьерных индикаторных зон ЦНП воспринимают вирусную РНК практически одновременно с сосудами этих локализаций, а вирионы формируются в них уже через сутки. Это свидетельствует о том, что в этих зонах система "капилляр-нейрон" реагирует содружественно и одномоментно, что, вероятно, и обусловлено инваэивными.свойствами вирулентных штаммов вируса при периферическом введении.

С 5-х по 8-е сутки течения инфекции у всех'животны*. регистрировалась клиника КЭ. Патоморфологические изм:нен;тя нейронов в этот срок носили диффузный характер и встречались повсеместно. В них отмечалось округление тел, в цитоплазме появлялись очаги лизиса хроматофильного вевдетва,. по перифе- < рии цитоплазмы встречали вакуоли, разграниченные мостиками цитоплазмы, окрашивающиеся. тионином в бледно-голубой цвет. Другие нейроны имели вытянутые тела, цитоплазма их интенсивно воспринимала тиония, ядра их были гиперхромными. Белое вещество подвергалось спонгиозной дегенерации и очаговой лейко-маляции. В наружных отделах извилин коры мозжечка обмечали выпадение грушевидных нейронов. Нейроны зубчатых ядер подве-гались гидропичэской дистрофии с образованием клеток-теней, позже - нейронофагических узелков. . В III-V слоях коры часто

встречались измененные пирамидные клетки с признаками набухания, сморщивания, некроза и формированием на их месте глиадь-ных уведков. Свечение вирусного антигена в нейронах спинного, продолговатого мозга,. ядер и коры мозжечка определялось на уровне + или ++. Радиометки регистрировали над цитоплазмой как измененных, так и сохранных нейронов индикаторных зон. При электронно-микроскопическом исследовании в гибнущих клетках и межклеточных пространствах обнаруживались зрелые вирусные частицы..

Таким образом, у всех, подопытных животных в периоде разгара инфекции в нейронах формировались типичные для КЗ патомор-фологические изменения, обусловливающие его нозологическое своеобразие. _

На 9-12-е сутки патологические изменения нейронов, типичные для КЗ, наблюдались во всех индикаторных зонах мозга: спинном ыозге, коре и ядрах мозжечка, черной субстанции, продолговатом моэгэ, аммоновом роге, III-V слоях коры больших полушарий головного мозга. Патоморфологические изменения убывали в оральном и каудальном направлениях. В финале инфекции в описываемых локализациях отмечена мелкокапельная липидная дегенерация миелиновых волокон. Зоны дегенерации миелина соответствовали очагам пролиферации олигодендроцитов . Количество радиометок, вирусных , частиц и антигенов резко уменьшилось, но количество пораженных нейронов оказалось свыше 90%.

Таким образом, к концу 12-х суток в мозге инфицированных мышей большая часть мотонейронов шейного отдела спинного мозга, нейронов мозжечка и подкорковых ядер имела выраженные признаки дистрофии и некробиоза. В цитоплазме дистрофически измененных клеток перечисленных отделов мозга и межклеточных пространств с 48 ч опыта обнаруживали вирусные частицы. В нервных клетках указанных зон наиболее ранними реакциями на вирусную инвазию оказались изменения в энергозависимых структурах: в начале инкубационного периода -' дистрофия митохондрий, расширение цистерн и канальцев эндоплазматической сети; в конце инкубационного периода - гипертрофия и гиперплазия митохондрий, увеличение количества рибонуклеопротеидных гранул, трансформация внутриклеточной мембранной системы.

Дистрофические изменения в н»рзйнх клетках и экспрессию

вирусного генома регистрировали в ранние сроки инкубационного . периода, практически одновременно с патоморфеюгическими изменениями капилляров индикаторных зон. Именно в первые-вторые сутки течения инфекции формируются очалки вирусной деструкции, в которых затем прогрессирую, компенсаторно-приспособительные и воспалительные реакции, развивающиеся'позднее.

Эти первоначальные изменения связаны как с проникновением вирусного генома в клетки и изменением синтеза клеточных белков, так и с вторичными нарушения)® питания и дыхания клеток в результате повреждения сосудов, обусловленного инфекционным процессом! Шследующие изменения в инфицированных нервных клетках обусловлены сложными процессами продукции ранних вирусных белков. Это находит свое морфологическое выражение а накоплении рибонуклеопротеидов, по-ьлдимому. вирусной природы в цитоплазматическом матриксе, в гипертрофии и гиперплазии митохондрий и цитоплазматического матрикса Этот процесс заканчивается синтезом вирусных частиц и гибелью клетки.

В инкубационном периоде мы наблюдали реактивные изменени.., нейроглии,. которые выражались в гипертрофии и относительной пролиферации, в перегруппировке астроцитов и олигодендроцитов вокруг сосудов, а в разгаре инфекции и перинейронально. Регистрация вирусной РЕК в цитоплазме глиальных клеток на ранних этапах развития инфекционного процесса дает. основание считать, что вирусный материал первоначально концентрируется в нейроглие до массивного расселения его в других' структурных элементах мозга. ■ '•

Таким образом, нейроэктодермальныэ элементы в ходе эаселе- , ния мозга вирусом играют важную роль. Появление вирусной РНК в нейронах лишь на 12 ч отстает от появления его в сосудистых ■ элементах. Вероятно, именно в этот срок и происходит первичное проникновение вирусного материала в нейроэктодермальные элементы, где уже невозможно воздействие на вирус эффекторами иммунной системы и неспецифическими антивирусными агентами. Вероятно, именно в инкубационном периоде болезни быстрое проникновение вирусной РНК в нейроны и определяет- развитие острого КЭ, формируя.очаги альтерации мозга При этом воспалительные изменения в ткани мозга начинают регистрироваться с появлением вирусного антигена и активацией общих иммунных ре-

андий, преимущественно клеточных. С появлением вирусного антигена и эффекторов иммунного ответа в мозге манифестируются воспалительные реакции.

ВЫВОДЫ

1. В инкубационном периоде острого клрщевого энцефалита наблюдается диссоциация во времени появления и локализации различных компонентов вирусной частицы в ЦНС. При этом первой выявляется вирусная РНК в сосудистых структурах спинного мозга, ствола к подкорковых структур головного мозга, сосудистых сплетениях желудочков.

2. Появление вирусной РНК сопровождается деструкцией мембран капилляров, энергетически структур эндотелиоцитов и гли-альных элементов по периферии сосудов, что коррелирует с повышением сосудистой проницаемости.

3. Появление зрелых вирионов в межклеточных пространствах капилляров и нейронах, вирусного антигена в стенках сосудов и нейронах соответствует первому пику вирусемии и напряженности клеточного иммунитета, что отражается в тканевая реакциях в виде начальных фаз воспаления (альтерации, экссудации).

1 Развитие васкулитоз с инфильтрацией околососудистых пространств гематогенными, гистиоцитарными и глиальными элементами означает завершение инкубационного периода и выход вируса из мозга в кровоток.

5. Развитие эпендиматита и хориоидита в инкубационном периоде КЭ следует отнести к непосредственному действию элементов вируса на капилляры сосудистых сплетений и впендимарные элементы выстилки желудочков. Быстрое появление вирусной РНК в клетках по периферии желудочков позволяет считать путь проникновения вируса через "капилляры сосудистых сплетений-лик-вор-эпекдимоциты" в числе основных.

В. Мэззичность поражений мозга следует связать с различными путями проникновения вируса КЭ, и, вероятно, особенностями гтоникновения его в те или иЬые структуры.

7. Проникновенье вируса через желудочковую систему мозга требует пересмотра основная позиций, свяганпьх с диагностикой и профилактикой К^ в сеязп с 'недоступности вируса в далудоч-

ковой системе для эффекторов иммунной системы. При этом следует считать ликвор и .го элементы в числе наиболее вероятных объектов выявления вируса и его частиц для ранней диагнсоти-

КИ.(

а В связи с тем, что наиболее ^анни? вирусные поражения в мозге регистрируются в капиллярах, при этом в них выявляется вирусная РНК, можно полагать, что для раннего лечения и профилактики могут использоваться бштехнологические препараты, действующие в этих структурах.

Список работ, оцублипованных ш теме диссертантки

1. Рычков A.A., Кветкова Э.А., Шаманин В.А., Конев В.П., Костерина- Л. Д., Пиценко Н. Д., Шлищук Т. И. Применение метода молекуляр1 jft гибридизации для ^следования локализации повреждений мозга при клещевом энцефалите // Природнооча-говые болезни человека. - Омск. - 1987. - С. 40-44.

2. Конев В. П., Костесина Л. Д , Кветкова Э. А., Рычков А. А., Псшпаук Т. и. Иммунодефицита в морфогенезе нейровирусных инфекций У/ VIII Вс-ес. съезд патологоанатомов.' Тез. докл. Г. Тбилиси, 17-20 октября 1989 г. - М. , 1989. - С.' 208-20Э.

3. Конев R П., Костерина Л. Д., Рычков А. А., Шаманин В. А., Белявская "IL А. , Шлищук Т. Л Регенераторные процессы в мозге после острой нейровирусной инфекции: пути развития,. патогенетическая оценка // Структурное обеспечение и стимуляция компенсаторно-восстановительных •. реакций. - Омск. -

1989.- С. 47-50.

4. Конев L. П., Кветкова 3. А. , Костерина Л. Д., Шлицук Т. JL Морфогенез острых и хронических форм клещевого энцефалита // Актуальные вопросы медицинской вирусологии.-. Свердловск.- 1989.- С. 173-177.

5. Полишук Т. И., Зиновьев А. С., Конев В. П. Выявление РНК вируса клещевого энцефалита в сосудистых образованиях мозга в остром периоде болезни // Вопросы эпидемиологии, ммуно-логии и диагностики вирусных инфекций. - Свердловск. -

1990.- С. 46-50.

6. Конев В. П., Кветкова 3. А., Полищук Т. И., 1 ычкоз А. А. , Пй-ценко Н. Д. Изучение морфогенеза клещевого энцефалита мето- 1 дом г 1бридизации нуклеиновых кислот // Совр. проблемы эпи-демиол., диагностики и профилактики клещевого энцефалита. Тез. докл. Всес. симпозиума, г. Иркутск, 18-21 сентября . 1990 г.- Иркутск.- 1990.- С. 114-115.

7. Полищук Т. И. Деструктивные и компенсаторно-приспособительные процессы а мозге, при клещевом энцефалите // Клеточ-но-тканевые механизмы адаптации к действию повреждающих факторов. - Омск. - 1990. - С. 11-13.

8. Рычков А. А. , Конев Е П., Шлищук Т. IL , Тулакина Л. Г. Этиологическая диагностика клешевого энцефалита // Актуальные вопросы патологической анатомии заболеваний населения Урала и Западной Сибири. Тез. докл. I мекрегион. конф. патологоанатомов. - Тюмень.- 1591.- С. 28-29.

- гл -

9. Конев Б. П. , Рычков А. А., 1Ьлищук Т. И. Патология сосудистых сплетений при остром клещевом -энцефалите // Морфология сосудистой системы в норме и патологии. - Томск. - 1990. - С. 37-28.

10. Полишук Т. И. , Шаманкн В. А., Рычков А. А., Конев В. П. Взаимосвязи морфологических изменений в мозге и лимфоидных органах при клещеьсм энцефалита // Здоровье человека в Сибири. Тей. 5-й научно-практ. конф. "Иолодые ученые - практическому здравоохранению", 29 октября - 2 ноября 1990 г. -Красноярск. - 1990. - С. 104-105.

11. Конев В. П. , Рычков А. А. , ГЬлищук Т. И., Кветкова Э. А. Критерии патологоанзтбмической диагностики клещево.ю энцефалита // ПриродноочагоЕые болезни человека. - Омск. - 1990. -С. 54-57.

12. Зиновьев А. С. , Рычков А. А. , Конев В. П., Костерина Л. Д.,

• Полкщух Т. И. Методы индикации вируса и оценка морфогенеза клещевого энцефалита // Актуальные вопросы патологической анатомии. - Харьков.- 1990.- С. 111-114.

13. Конев В. П, , Кветкова Э. А., Полишук Т. И., Тулакина Л. Г., Рычков А. А. Корреляционные отношения повреждений мозга и лимфоидных оргакоЕ при остром клещевом энцефалите // При-родноочаговые болезни человека. - Омск. - 1991. - С. 74-78.

14. Ерман Б. А. , Полишук Т. И. , Тулакина Л. Г., Конев В. П. Патология ПНС в 1.лкубационном периоде клещевого энцефалита по данным электронной микроскопии и метода гибридизации нуклеиновых кислот // XIV конф. по электронной микроскопии (биология, медицина), г. Ч рноголовка, июнь 1992 г. Тез. докл. - М. , 1992. - С. 24.

15. Конев В. П. , Шлшцук Т. И. , Рычков А. А. Проблемы морфологической диагностики клещэвого энцефалита // Ьопр. диагностики, профилактики и реабилитации в работе врача-клинициста. - Омск. - 1993. - С. 75-77.

16. Конев Ей, Тулакина Л. Г., Полищук Т. И., Кветкова Э. А. , Лукьяненко Д. Ф. , Рычков А. А. Морфогенез инкубационного периода клещэвого энцефалита: роль сосудов микроциркулятор-ного русла мозга, выделение вирусной РНК // Эпидемиология, клиника и профилактика вирусных инфекций. - Екатеринбург. -1992.- С. 151-157.

17. Конев В. П. , Полищук Т. И. , Рычков А. А. Критерии дифференциальной диагностики острого и хронического клещевого энцефалита // Актуальные вопросы патологической анатомии.

■ Матер. 11 ме>регион. науч. -практ. конф. патологоанатомов Урала и Западной Сибири. - Курган. - С. 18-13.

18.- Конев В. Е , Полиедтс Т. И. , Рычков А. А. Пути проникновения в мозг вируса клещевого энцефалита и патологчя желудочковой системы // Структурно-функциональные механизмы патологических и компенсаторно-восстановительных речцнй. - Омск. -1994.- С. 32-34.

.дано в печать . ^.•.Щ-ßA'.. Формат 30/64 1/15. Бум. тип. N3 Печать офсетная. .-еч. л. 1.0. Тираж luü. Sara? N 497.

Картолитография ОмС'лИ, Омсл-S, Спбэков'.кзя. 4.