Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Лечение гнойных ран иммобилизированных антисептиком натрия гипохлоритом в геле полимеров (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

Ри а ^

Набокин Игорь Иванович 2 9 Я Н В 200^

ЛЕЧЕНИЕ ГНОЙНЫХ РАН ИММОБИЛИЗИРОВАННЫМ АНТИСЕПТИКОМ НАТРИЯ ГИПОХЛОРИТОМ В ГЕЛЕ ПОЛИМЕРОВ (экспериментальное исследование)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2003

Работа выполнена в Курском государственном медицинском университете

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Бежин Александр Иванович доктор фармацевтических наук, профессор Панкрушева Татьяна Александровна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Суковатых Борис Семенович доктор медицинских наук, профессор Селезнев Юрий Петрович

Ведущая организация:

Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова

Защита состоится «¿¿У» « ¿¿^¿^^У^» 2004 г. в » час. мин.

на заседании диссертационного совета Д 208.039.02 при Курском государственном медицинском университете по адресу: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Шатунов А.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Инфекционные осложнения ран являются одной из важнейших проблем в хирургии. Гнойные осложнения составляют 30-35% от всех хирургических заболеваний (Даценко Б.М. с соавт., 1995). В настоящее время нагноение «чистых» операционных ран встречается в 5%, а загрязненных - в 25-30% случаев (Гаркави A.B., Елисеев Е.Т., 2000). Наряду с этим, около 42% летальных исходов после хирургических вмешательств связаны с гнойно-воспалительными осложнениями (Стручков Ю.В., 1982).

В комплексе мер профилактики и лечения раневой инфекции ведущее место принадлежит антибиотикотерапии (Блатун J1.A. с соавт., 2000; Деллинд-жер Э.П., 2001; Sher K.S., 1984). В настоящее время применение антибиотиков многими исследователями рассматривается в основном как средство профилактики раневых осложнений. Лечение гнойно-некротических ран при помощи общей антибиотикотерапии малоэффективно, так как патоморфологические изменения тканей в окружности раны не позволяют добиться концентрации антибиотика у раневой поверхности в терапевтических дозах (Гаркави A.B., Елисеев Е.Т., 2000).

На фоне переоценки места антибиотиков в настоящее время возродился интерес к антисептикам (Афиногенов Г.Е., Блинов Н.П., 1987; Красильни-ков А.П., 1995; Гаркави A.B., Елисеев Е.Т., 2000). Однако используемые в практике антисептики (фурацилин, бализ 2, хлорамин Б, хлоргексидин биглюконат, борная кислота, перекись водорода, калия перманганат, производные йода) обладают узким спектром действия, а среди больничных штаммов микроорганизмов отмечается широкое распространение биологически устойчивых форм. В отношении некоторых антисептиков процент устойчивых форм к ним достигает высоких значений (Красильников А.П., 1995).

В настоящее время в клинической хирургии для лечения гнойных ран широко применяется раствор антисептика натрия гипохлорит (NaOCI) в различных концентрациях, лишенный вышеперечисленных недостатков (Петро-сянЭ.А. с соавт., 1991; Гостищев В.К., 1994; Федоровский Н.М., 1995; Серги-

енко В.И., 1996). NaOCI можно отнести к категории универсальных антимикробных средств, так как бактерицидный эффект за счет атомарного кислорода выражен как в отношении грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов, анаэробов (Сергиенко В.И., 1996). При местном лечении гнойных ран препарат купирует альтеративную и экссудативную фазы воспаления, нормализует микроциркуляцию, способствует раневому некролизу, созреванию грануляционной ткани и развитию краевой эпителизации (Петросян Э.А., 1991; Гостищев В.К., 1994).

Однако местное использование антисептиков, в том числе и NaOCI в виде растворов, при лечении гнойных ран малоэффективно, так как наносимые на повязку растворы быстро высыхают и инактивируются раневым экссудатом (Блатун Л.А. с соавт., 1999). До настоящего времени мы не встретили в литературе работ по иммобилизированным формам NaOCI.

В связи с этим иммобилизация NaOCI на полимерные основы с целью пролонгирования его действия при местном лечении гнойных ран является перспективным направлением в клинической хирургии.

Цель исследования. Разработка и экспериментальное обоснование возможности применения иммобилизированных форм антисептика натрия гипо-хлорита в геле полимеров при местном лечении гнойных ран.

Задачи исследования.

1. Экспериментально in vitro выбрать и обосновать оптимальный состав гелевых полимеров для иммобилизации NaOCI.

2. Оценить в опытах in vitro антимикробную активность иммобилизированных форм антисептика NaOCI (1200 и 300 мг/г) в гелях полимеров в сравнении с раствором NaOCI в тех же концентрациях.

3. Оценить фармакохимическую активность антисептика NaOCI (1200 и 300 мг/л) в разработанных иммобилизированных формах NaOCI.

4. В сравнительном аспекте изучить влияние иммобилизированного антисептика NaOCI (с концентрацией 1200 и 300 мг/г) в гелях полимеров на течение раневого процесса в 1 и II фазы соответственно в опытах in vivo на основа-

нии клинических, планиметрических, лабораторных, микробиологических и морфологических методов исследования.

5. Экспериментально обосновать возможность последовательного применения разработанных иммобилизированных форм NaOCI (в концентрациях 1200 и 300 мг/г) для лечения гнойных ран в I и II фазах раневого процесса соответственно.

6. Дать сравнительную оценку влияния иммобилизированных форм NaOCI (1200, 300 мг/г) в гелях полимеров и раствора NaOCI в тех же концентрациях на течение раневого процесса в эксперименте.

Новизна исследования. Экспериментально впервые выбраны и обоснованы оптимальные полимеры для иммобилизации раствора антисептика NaOCI. Впервые с целью пролонгирования антимикробного и регенераторного действия NaOCI произведена его иммобилизация на полимерные гели натрий-карбоксиметилцеллюлозу (Na-КМЦ) и аэросил (А). Разработаны способы приготовления иммобилизированных форм NaOCI. Экспериментально in vitro впервые изучена антимикробная активность иммобилизированных форм NaOCI с концентрацией 1200 и 300 мг/г в сравнении с раствором NaOCI в тех же концентрациях и полимерными гелями Na-КМЦ и А. Экспериментальным путем определена фармакохимическая активность иммобилизированных форм с антисептиком NaOCI.. Впервые в опытах in vivo изучено влияние иммобилизированных форм антисептика NaOCI в концентрации 1200 и 300 мг/г на течение раневого процесса и обоснована, с учетом концентрации NaOCI, возможность применения разработанных иммобилизированных форм антисептика NaOCI (1200, 300 мг/л) в I и II фазах раневого процесса соответственно. Получен патент на изобретение № 2209622 «Иммобилизированная форма натрия гипохло-рита для лечения местных гнойно-воспалительных процессов мягких тканей».

Практическая значимость работы. При лечении гнойных ран иммоби-лизированными формами NaOCI (1200 и 300 мг/г) сокращаются сроки очищения ран, появляются грануляции и начинается эпителизация ран в 1,5-2 раза быстрее, чем при лечении раствором NaOCI в тех же концентрациях. Способ

приготовления иммобилизированных форм NaOCI прост, не требует дорогостоящего оборудования и специального обучения персонала. Экономически выгоден в условиях больниц: из 100,0 г полимера Na-КМЦ выход 5% геля составляет 2,0 кг.

Положения, выносимые на защиту

1. Высвобождение антисептика NaOCI наблюдается из полимерных основ Na-КМЦ и аэросила максимальнее, чем из вазелин-ланолиновой основы.

2. Разработанные иммобилизированные формы антисептика NaOCI в геле полимеров оказывают выраженное антимикробное действие в отношении исследуемых тест-штаммов микроорганизмов в сравнении с раствором NaOCI в опытах in vitro.

3. Фармакохимическая активность NaOCI (1200, 300 мг/мл) в иммобилизированных формах антисептика NaOCI (1200, 300 мг/г) в гелях полимеров Na-КМЦ и аэросил-глицерине (А-Г) сохраняется в течение 6-12 месяцев.

, 4. Лечение гнойных ран иммобилизированными формами NaOCI (1200 мг/г) в I фазе раневого процесса в 1,5-2 раза быстрее сокращает сроки очищения ран от гнойно-некротических масс, способствует появление грануляций и краевой эпителизации, чем при использовании официнального раствора NaOCI (1200 мг/л).

5. Иммобилизированные формы NaOCI (300 мг/г) с концентрацией NaOCI (300 мг/л) оказывают более выраженное регенераторное действие на грануляционную ткань во II фазе раневого процесса, чем применение раствора NaOCI (300 мг/л).

6. Течение раневого процесса при последовательном лечении разработанными иммобилизированными формами антисептика NaOCI (1200 и 300 мг/г) имеет преимущества в сравнении с лечением раствором в тех же концентрациях.

Реализация работы. Материалы диссертации используются на практических занятиях и лекциях со студентами 4,5 и 6 курсов на кафедрах оперативной хирургии и топографической анатомии лечебного факультета, фармацевтиче-

ской технологии фармацевтического факультета КГМУ и кафедре оперативной хирургии и топографической анатомии с курсом факультетской хирургии лечебного факультета Медицинского института ОГУ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста. Состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы из 254 отечественных и 50 иностранных источников. Диссертация иллюстрирована 18 таблицами и 35 рисунками, включающими диаграммы и микрофотографии.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на 66-й итоговой научной конференции молодых ученых и студентов КГМУ (г. Курск, 2001 г.); на совместном заседании кафедр оперативной хирургии и топографической анатомии, хирургических болезней № 1 и фармацевтической технологии Курского государственного медицинского университета 14.10.2003 г. Опубликовано 5 печатных работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Материалом для экспериментального исследования послужили лекарственные формы с иммобилизированным антисептиком NaOCI (1200 мг/л и 300 мг/г) на основах Na-КМЦ и А-Г. Указанные лекарственные формы разработаны совместно сотрудниками кафедр оперативной хирургии и топографической анатомии и фармацевтической технологии КГМУ под руководством д.ф.н., профессора Панкрушевой Т.А.

В процессе исследования и разработки оптимальных составов иммобили-зированных форм антисептика NaOCI использовались лекарственные и вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям действующей нормативно-технической документации.

На основании проведенного комплексного изучения количества антисептика NaOCI в иммобилизированных формах совместно с фармацевтическими технологами были установлены следующие составы:

1. Раствор NaOCI (1200 мг/л) - 66 мл 3. Раствор NaOCI (1200 мг/л) - до 100 мл Аэросил - 7,5 г Глицерин - 26,5 г Натрий-карбоксиметилцеллюлоза - 5,0 г

2. Раствор NaOCl (300 мг/л) - 66 мл 4. Раствор NaOCl (300 мг/л) - до 100 мл Аэросил - 7,5 г Глицерин - 26,5 г Натрий-карбоксиметилцеллюлоза - 5,0 г Экспериментальные исследования выполнены на 210 белых беспородных крысах-самцах линии «Вистар» массой 170+20 г в шести сериях экспериментов. В первой - контрольной серии (на 25-ти животных) создавали модель гнойной раны. Животных лечению не подвергали. Проводили динамическую оценку течения раневого процесса. Во второй серии (на 35-ти животных) оценивали последовательное влияние раствора NaOCl (1200 и 300 мг/л) на течение раневого процесса в I и II фазах. В третьей и четвертой сериях (на 50-ти животных) изучали последовательное влияние иммобилизированных форм NaOCl (1200, 300 мг/г) на течение раневого процесса в I и II фазах. В пятой и шестой сериях экспериментов (по 25 животных в каждой) изучили влияние гелей полимеров Na-КМЦ и А-Г на течение раневого процесса.

Изготовленные нами гели и \1ази исследованы на антимикробную активность в опытах in vitro. Определение антимикробной активности NaOCl (1200, 300 мг/г) в иммобилизированных формах и в растворе проводили методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем анализа зон угнетения роста фармакопейных тест-микроорганизмов: Staphylococcus' aureus АТСС 6538-Р, Escherichia coli АТСС 25922, Bacillus subtilis АТСС 6633, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, Candida albicans АТСС 885-653, Proteus vulgaris. Микробиологические исследования проведены совместно с к.ф.н., преподавателем кафедры микробиологии и вирусологии КГМУ Медведевой О.А.

Активность антисептика NaOCl (1200, 300 мг/л) в иммобилизированных формах определяли методом йодометрического титрования (Инструкция по применению;аппарата ЭДО-4, 1996). Содержание антисептика NaOCl (К) в мг/мл в иммобилизированных формах NaOCl (1200, 300 мг/г) вычисляли по формуле:

АхО,355x1000x1,05

К =--------------------------------= 37,275 А,

10

где А - объем 0,01 Н раствора серноватистокислого натрия, израсходованного на титрование.

Исследования проведены совместно с к.ф.н., доцентом кафедры фармацевтической химии КГМУ Кузьминым Б.В.

Гнойную рану моделировали по методике Толстых П.И. (1976) следующим образом. После предварительной обработки кожи, в асептических условиях, под гексиналовым внугрибрюшинным наркозом в межлопаточной области у животных иссекали кожу с подкожной клетчаткой в виде квадрата 2x2 см (400 мм2). Края и дно раны раздавливали зажимом Кохера. В рану вносили марлевый тампон весом 0,5 г с взвесью суточной культуры золотистого стафилококка (фаготип ЗА / ЗС / 55 / 71) в дозе 1 млрд микробных тел в 1 мл физраствора. Рану ушивали наглухо. На третьи сутки в межлопаточной области у животных формировался абсцесс со всеми характерными признаками гнойного воспаления. Швы с краев раны снимали, края раны разводили, марлевый тампон удаляли, эвакуировали большое количество гноя. Для предупреждения контракции раны, а также для стандартизации условий лечения, к краям раны подшивали разработанное устройство, которое позволяет перевязочному материалу удерживаться в ране, защитить и предупредить ее высыхание.

Лечение начинали с хирургической обработки гнойной раны: эвакуации гноя, удаления некротической ткани и промывания антисептиком №ОС1 1200 мг/л. На раневую поверхность наносили лекарственные средства 2 раза в сутки в течение 14-ти дней. ВI фазе раневого процесса в опытных группах животных применяли иммобилизированные формы ИаОС1 и раствор ЫаОС1 в концентрации 1200 мг/л до очищения ран от гнойно-некротических масс, а во II фазе при появлении грануляций в концентрации 300 мг/л.

Для комплексной оценки течения раневого процесса использовали методы клинического, лабораторного, планиметрического, бактериологического, цитологического, гистологического исследования ран. Результаты оценивали на 1,3,5,7,10,14-е сутки.

При оценке результатов учитывали следующие клинические параметры течения раневого процесса: наличие и характер воспалительной реакции, со-лояние краев и дна раны, сроки очищения раны от некротических тканей и по-

явления грануляций, характер грануляционной ткани, сроки начала эпителиза-ции ран (Даценко Б.М. с соавт,, 1995).

Для регистрации скорости уменьшения раневой поверхности во времени мы использовали распространенный в клинической практике планиметрический метод Поповой Л.Н, (1942), (Кузин Б.М. с соавт., 1990). Процент уменьшения площади раны за сутки определяли по формуле:

(£-■?>„)■ 100 St

где S - площадь раны при предыдущем измерении, S„ - площадь раны при данном измерении,

t - число дней между предыдущим и последующим измерениями.

Для изучения общей реакции организма животных на гнойный процесс и лечение в динамике проводили исследования общего количества лейкоцитов и СОЭ в те же сроки. Анализ крови.производили на гемолитическом анализаторе К-1000 (Япония).

Бактериологические исследования гнойной раны включали качественное и количественное изучение раневой микрофлоры (Даценко Б.М. с соавт., 1995) в динамике на 1, 3, 5, 7-е сутки лечения. Идентификацию выделенного из раны возбудителя и определение его чувствительности к антибиотикам проводили на бактериологическом анализаторе фирмы UPI (Франция). Данные исследования проведены в клинико-микробиологической лаборатории городской больницы им. С.П. Боткина г. Орла совместно с врачем-бактериологом Драхловой JI.M.

Количество микробов на 1 г ткани вычисляли по формуле:

N=nxl0xl0 (100 или 1000)хК, где N - число колоний на 1 г тканей биоптата,

п - количество колоний, выросших на чашке Петри, 10 - пересчет на 1 г суспензии,

10 (100 или 1000 в зависимости от разведения) - разведение материала, засеянного на чашку, в которой ведется подсчет колоний,

К - коэффициент пересчета навески на 1 грамм биоптата.

При цитологическом исследовании раневого процесса использовали метод «поверхностной биопсии ран» (Камаев М.Ф., 1954). Мазки фиксировали смесью Никифорова (спиртоэфирный раствор) и окрашивали по способу Рома-новского-Гимза. При исследовании мазков-отпечатков считали 100 клеток. Клеточный состав выражали в процентах. Мазки для цитологического исследования брали на 1, 3, 5, 7, 10,14-е сутки. Для определения типа цитограмм и фазы раневого процесса мы использовали схему Сергель О.С и Гончаровой З.Н. (Кузин Б.М. с соавт., 1990).

Для изучения динамики морфологических изменений в ране забор раневых биоптатов проводили на 3, 5, 7, 10, 14-е сутки от начала лечения после выведении подопытных животных из опыта. Взятый материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина с последующей проводкой по восходящим спиртам и заливкой в парафин по стандартной методике. Приготовленные парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Гистологические препараты консультированы к.м.н., врачом патологоанатомом Орловской ОКБ Швецом А.И. и к.м.н., доцентом кафедры гистологии и эмбриологии КГМУ Язевой Г.Г. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием методов однофакторного дисперсионного и корреляционного анализа с помощью электронных таблиц приложения Microsoft Excel 2000. Вычисляли средние величины количественных показателей, средние ошибки и коэффициент корреляции. Существенность различий средних величин оценивали по показателям Стьюдента.

Результаты исследований и их обсуждение. Микробиологические исследования показали, что зоны задержек роста исследуемых тест-штаммов микроорганизмов различались в зависимости от исследуемых составов. Нами установлено, что максимальное высвобождение NaOCI происходит из полимерных основ Na-КМЦ и аэросил-глицерина. Известно, что NaOCI стабилен в щелочных растворах (Красильников А.П., 1995). Ион Na в полимере Na-КМЦ и А-Г основа обеспечивают щелочную среду гелевым композициям и тем самым потенцируют антимикробные и регенераторные свойства NaOCI в зависимости

от концентрации. Поэтому в качестве носителей ЫаОС1 были выбраны основы №-КМЦ и А-Г. Слабое высвобождение ЫаОС1 из вазелин-ланолиновой основы обусловлено свойствами самой основы. Она не обеспечивает достаточного высвобождения активного ингредиента из композиции.

Исследования антимикробной активности иммобилизированных форм антисептика ИаОС1 (1200 мг/г) свидетельствуют о выраженном антимикробном действии в отношении всех исследуемых тест-культур (рис. 1).

Гель 5% Na-КМЦ +NaOCI Гель на А-Г+NaOCI Раствор NaOCI ЗООмг/л.

300 мг/л • Гель5%Na-КМЦ +NaOCI З00мг/л; Гелька AJ".NaOCI Раст»ор NaOCI

1200 мг/л, . 1200МОЯ. 1200мг/л.;

Q Staph.auresus ATCC 6538-Р D Esherichia coli АТСС 25922

□ Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 И Proteus vulgaris ■ Bacillus subtilis АТСС 6633 □ Candida albicans АТСС 685-653

Рисунок 1. Динамика зон угнетения роста тест-микроорганизмов

Высокая биоцидность иммобилизированных форм антисептика NaOCl (1200 мг/г) обусловлена максимальным высвобождением NaOCI из полимерных основ и потенцирующим действием основ Na-КМЦ и А-Г, что не наблюдается у раствора NaOCI (1200 мг/л). Это объясняется тем, что раствор NaOCl представляет собой соединение с небольшой молекулярной массой и малыми структурными размерами, что приводит к быстрой диффузии его в мясопеп-тонный агар.

Гели полимеров Na-КМЦ и А-Г обладают слабым бактерицидным действием, обусловленным свойствами самих основ. Анализ биоцидной активности иммобилизированных форм антисептика NaOCI (300 мг/г) показал наличие минимальной антибактериальной активности в отношении всех исследуемых тест-

культур. Такая концентрация №0С1, по данным литературы, достаточна для поддержания биоцидности в ране (Красильников А.П., 1995).

Наши исследования показали различную активность разработанных препаратов. Активность №ОС1 (мг/г) в нестабилизированных формах сохранялась 6 месяцев, а в стабилизированных - 12 месяцев. Это объясняется тем, что антисептик НаОСЛ в иммобилизированных формах находится в латентном состоянии до контакта с мишенью, что обеспечивает его активность в указанные сроки. Сохранение более высокой активности иммобилизированных форм №ОС1 (1200 и 300 мг/г) в геле полимеров, приготовленных на основе стабилизирован ного антисептика №00, объясняется так же и наличием стабилизатора в растворе №0С1.

Анализ течения раневого процесса показал, что сроки очищения ран в третьей серии составили 2,5±1,3 и в четвертой 2,5±0,5 суток. Во второй сери>; сроки очищения раны увеличивались до 4,5±0,2 суток, а в пятой и шестой сериях они составили 8,7±0,2 и 8,3±0,6 суток. В контрольной серии - без лечения рана очищалась к 9,2±0,2 суткам.

Сроки появления грануляций в опытных сериях составили 3,2±0,2, а в группах сравнения при лечении раствором №0С1 (1200 мг/л) - 4,3±0,2, при лечение гелями полимеров - 7,7±0,2, а в контроле без лечения - 8,3±0,2 суток.

Сроки выполнения раны грануляциями составили в опытных сериях 3,7±0,3, а в контроле без лечения - 13,0±0,4 суток. В группах сравнения при лечении раствором №0С1 (300 мг/л) - 6,0±0,1, а при лечении гелями полимеров -10,8±0,3 суток.

Начало краевой эпителизации в третьей и четвертой опытных сериях отмечено на 4,3±0,2 сутки. В контроле без лечения - на 10,7±0,2, а в группах сравнения при лечении раствором №0С1 (300 мг/л) - на 6,3±0,2 сутки. При лечении гелями полимеров сроки краевой эпителизации увеличивались до 9,7±0,2 суток. Статистическое различие между группами достоверно (р<0,05).

Таким образом, сравнивая лечение ран иммобилизированными формами №0С1 (1200, 300 мг/г) с лечением раствором №0С1 в тех же концентрациях и

гелями полимеров Ка-КМЦ и А-Г происходит в 1,5-2 - 4-4,5 раза быстрее сокращение сроков очищения ран от гнойно-некротических масс, появление грануляций и начало краевой эпителизации (рис. 2).

14 -| 12 -

Сроки очищения Сроки появления Сроки Начало краевой ран грануляций выполнения эпителизации

раны грануляциями

(3 Контроль без печения в Лечение раствором ЫаОС1

Ш) Лечение А-Г- №ОС1 ■ Лечение №-КМЦ+№ОС1

0 Лечение №-КМЦ ВЛечение А-Г

Рисунок 2. Клинические признаки течения раневого процесса

Это объясняется тем что, разработанные иммобилизированные формы антисептика №ОС1 (1200 мг/г) в гелях полимеров Ыа-КМЦ и А-Г, оказывая иыраженное пролонгированное антибактериальное, противовоспалительное действия, в I фазе быстро купируют альтеративную и экссудативную фазы воспаления, способствуют ускорению раневого некролиза и появлению грануляций. Применение иммобилизированных форм ЫаОО (300 мг/г) во II фазе оказывает выраженное регенерирующее действие, ускоряет созревание грануляционной ткани и развитие краевой эпителизации.

По данным планиметрического метода во всех сериях на первые сутки после раскрытия раны средняя площадь ран составила 400±],7 мм2. Сравнивая данные планиметрии в разных группах исследования, нами получены достоверно различные данные (р<0,05). Так в контрольной группе животных, без лечения, площадь ран к 14-м суткам уменьшилась на 124±1,6 мм2. Примерно та-

кие же данные получены в сериях с применением гелей полимеров, где площадь раны уменьшилась на 127,4±1,4 мм2 с Ыа-КМЦ и на 132,5±1,5 мм2 с аэро-сил-глицерином. При лечении же раствором ЬтаОС1 (1200 и 300 мг/л) площадь ран к 14-м суткам уменьшилась на 330,1±1,4 мм2. В опытных группах животных площадь ран на те же сутки уменьшилась в третьей - на 374,0±1,2 и в четвертой - на 374,2±1,3 мм2 (рис. 3).

1 сутки Зсутки бсутки 7сутки Юсутки 14сутки

В Контроль без лечения ВЛечение раствором ЫаОС1

□Лечение А-Г+ЫаОС! ВЛечение №КМЦ+№ОС1

ИЛечение ЫаКМЦ ЕЛечение А-Г

Рисунок 3. Динамика изменения площади ран у экспериментальных животных в процессе лечения

Из указанной диаграммы видно, что в опытных сериях суточное уменьшение площади ран остается высоким с 1 по 14-е сутки лечения.

Общий коэффициент уменьшения площади ран (%) на 14-е сутки лечения представлен на рисунке 4.

Таким образом, планиметрические исследования показали, что при лечс нии гнойных ран иммобилизированными формами антисептика №ОС1 (1200 и 300 мг/г) уменьшение их площадей происходит в 1,5-2 раза быстрее, чем при лечении раствором ИаОС! в тех же концентрациях, и в 4-4,5 раза быстрее, чем при применении только гелей полимеров и в контроле без лечения.

100 90 80 70 60

5? 50 40 30 20 10 0

контроль Лечение Лечение А- Лечение Лечение Лечение А;, без раствором Г-ЫаОС1 №-КМЦ- №-КМЦ Г лечения ЫаОС1 №ОС1

Рисунок 4. Общий коэффициент уменьшения площади ран (%) у экспериментальных животных на 14-е сутки

Высокая лечебная эффективность иммобилизированных форм антисептика №ОС1 в концентрации (1200 и 300 мг/г) при лечении ран объясняется тем, что полимерные основы На-КМЦ и А-Г обеспечивают его постепенное и постоянное высвобождение в ране. Это обеспечивает пролонгацию антимикробного, некролитического и фибринолитического действий в I фазе раневого процесса за счет совокупного действия атомарного кислорода ЫаОС1 и дегидратирующего эффекта полимерных основ. Во II фазе положительный регенераторный эффект иммобилизированных форм ЫаОС1 в концентрации 300 мг/г можно объяснить отсутствием сильного окислительного действия ЫаОС1 и защищающего эффекта полимерных основ. При соприкосновении с раневой поверхностью они образуют защитную пленку.

Количество лейкоцитов крови у животных при лечении иммобилизиро-вэ иными формами ЫаОСЛ (1200, 300 мг/г) повышалось до трех-пяти суток, за-тгч снижалось до исходного уровня к 14-м суткам. Показатели СОЭ нормализовались к 7-10-м суткам. В группе животных при лечении раствором ИаОС! (1200, 300 мг/л) и в контрольных сериях показатели лейкоцитов и СОЭ оставались высокими до 14-х суток.

оо о ЯМ

ш-ш

ъъ п

л »и »••1 ■

.•ь

-

р®

Результаты микробиологического исследования динамики элиминации возбудителя из гнойных ран показали, что в опытных сериях животных при посеве на первые и третьи сутки отделяемого из раны получали монокультуру золотистого стафилококка (фаготип ЗА/ЗС/55/71). Сапрофитная флора не высевалась. Начиная с пятых суток, при посеве отделяемого из ран рост золотистого стафилококка не наблюдался. Сапрофитная микрофлора также не обнаруживалась. В контрольной серии животных, без лечения, роста золотистого стафилококка не наблюдалось только с 14-х суток.

Определение количественного состава микрофлоры в ранах свидетельствует, что микробная обсемененность в 1 г ткани раны у животных'опытных групп при применение иммобилизированных форм ИаОС! (1200 мг/г) на третьи сутки уменьшилась с 107 до 103, что было в 2,5 раза меньше, чем у животных контрольной группы без лечения и при лечении гелями полимеров, и в 1,5 раза меньше, чем у животных при лечении раствором №ОС1 (1200 мг/л). В контрольной группе животных без лечения и при лечении гелями полимеров критический уровень бактериальной обсемененности 107 был и на седьмые сутки лечения.

Данные цитологического изучения мазков-отпечатков из гнойных ран показали, что при последовательном лечении ран иммобилизированными формами №ОС1 (1200, 300 мг/г) происходила быстрая смена фаз воспалительного процесса - от дегенеративно-воспалительного типа цитограмм перед началом лечения до регенераторного - на седьмые сутки. В других сериях такого быстрого перехода типов цитограмм в ране не наблюдалось. При лечении растворами №ОС1 (1200, 300 мг/л) в ранах смена типов цитограмм происходила медленнее: регенераторный тип отмечен на десятые сутки, а цитологическая картина ран при лечении гелями полимеров и в контрольной группе без лечения характеризовалась длительной воспалительной реакцией до 10-14-х суток.

Гистологические исследования показали, что фаза воспаления, выражающаяся в трансформации струпа, его демаркации, формирование грануляционной ткани, а так же воспалительная инфильтрация тканей дна раны при при-

менении иммобилизированных форм антисептика NaOCI (1200 мг/г) сокращается до трех суток, а при лечением раствором NaOCI (1200 мг/л) - до пяти суток. При лечении гелями полимеров и в контроле без лечения указанные явле-ь'йя остаются выраженными до 10-14-и суток. С третьих суток в опытных группах животных, а в серии животных при лечении раствором NaOCI (1200 мг/л) -на пятые сутки, на остаточные явления фазы воспаления наслаивается фаза ре-»операции, характеризующаяся развитием грануляционной ткани. При этом она начинает формироваться в виде отдельных островков на дне и стенках раны и далее постепенно выполняет весь дефект раны, в опытных сериях животных - к пятым суткам, а в серии животных при лечении раствором NaOCI - к седьмым суткам. В группах животных, пролеченных гелями полимеров, даже к 14-м суткам грануляционная ткань полностью не выполняет раневой дефект, а в контроле без лечения она представлена в виде отдельных островков, чему способствует наличие в большом количестве тучных клеток, макрофагов и плазматических клеток, выделяющих биологически активные вещества. При лечении иммобилизированными формами NaOCI (300 мг/г) к 10-14-м суткам четко заметны признаки фазы реорганизации рубца и эпителия. Прогрессирующее уменьшение числа сосудов и клеточных элементов ведет к уплотнению формирующегося рубца. В серии животных, пролеченных раствором NaOCI (300 мг/л), признаки фазы реорганизации рубца и эпителия замедленны. В группах животных, пролеченных гелями полимеров, к 14-м суткам лишь определяются незначительные признаки реорганизации рубца, а в контроле без лечения эти признаки только намечаются. Проведенные нами гистологические исследования раневых биоптатов подтвердили тот факт, что иммобилизированные формы NaOCI (300 мг/г) оказывают выраженное регенераторное, а в последующем и ргнаративное действие на грануляционную ткань во вторую и третью фазы раневого процесса.

Последовательное применение Для лечения гнойных ран раствора NaOCI 1200 мг/л в I фазе и 300 мг/л во II фазе раневого процесса в эксперименте оказалось малоэффективным. Это объясняется высыханием раствора NaOCI на по-

вязке. Гели полимеров Na-КМЦ и А-Г при нанесении на рану обладали слабым бактерицидным действием и в минимальной степени способствовали очищению ран от гнойно-некротических масс за счет незначительного дегидратирующего эффекта.

Таким образом, полученные нами данные экспериментальных клинических, планиметрических, микробиологических, морфологических методов исследования раневого процесса у животных опытных и групп сравнения показали, что последовательное применение в лечении гнойных ран иммобилизиро-ванных форм NaOCI в гелях полимеров Na-КМЦ и А-Г в концентрации 1200 в первую и 300 мг/г во вторую фазу раневого процесса оказывает выраженное антибактериальное, противовоспалительное, регенераторное, репаративное действия. Положительный эффект обусловлен совокупным действием антисептика натрия гипохлорита и гелей полимеров натрия-карбоксиметилцеллюлозы и аэросила.

ВЫВОДЫ

1. Оптимальными полимерными основами для иммобилизации раствора антисептика натрия гипохлорита в концентрации (1200 и 300 мг/л) являются натрий-карбоксиметилцеллюлоза и аэросил.

2. Разработанные и предложенные для профилактики и лечения гнойных ран иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита (1200, 300 мг/г) в гелях полимеров натрий-карбоксиметилцеллюлозы и аэросил-глицерине обладают пролонгированными бактерицидными свойствами в сравнении с раствором натрия гипохлорита в тех же концентрациях в опытах in vitro.

3. Фармакохимическая активность натрия гипохлорита (1200, 300 мг/мл) в иммобилизированных формах антисептика натрия гипохлорита (1200, 300 мг/г) в гелях полимеров натрий-карбоксиметилцеллюлозы и аэросил-глицерина, приготовленных на основе раствора натрия гипохлорита (1200, 300 мг/л), полученного на аппаратах ЭДО, сохраняется в течение 6 месяцев, а

приготовленные на стабилизированном растворе натрия гипохлорита - в течение 12 месяцев.

4. Иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита (1200 мг/г) в гелях полимеров натрий-карбоксиметилцеллюлозы и аэросил-глицерина при лечении гнойных ран в I фазе раневого процесса в 2 раза быстрее купируют альтеративную и зкссудативную фазы воспаления, способствуют ускорению раневого некролиза и появлению грануляций. Применение иммоби-■ ■кзировашшх форм натрия гипохлорита (300 мг/г) во II фазе оказывает выраженное регенерирующее действие, ускоряя в 2 раза созревание грануляционной чкнки и развитие краевой эпителизации.

5. Разработанные иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита (1200 мг/г) обеспечивают выраженный бактерицидный, некролитиче-ский, фибринолитический эффекты в I фазе раневого процесса. Иммобилизированные формы натрия гипохлорита (300 мг/г) оказывают выраженный регенераторный эффект во II фазе раневого процесса.

6. Иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита (1200, 300 мг/г) при последовательном лечении гнойных ран в I и II фазах раневого процесса в 1,5-2 раза сокращают сроки очищения ран от гнойно-некротических масс, появления грануляций и краевой эпителизации в сравнении с раствором натрия гипохлорита в тех же концентрациях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предложенные иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита (1200, 300 мг/г) в гелях полимеров могут быть изготовлены как в заводских условиях при использовании стабилизированного раствора натрия гипохлорита (1200, 300 мг/л), так и в условиях аптек при использовании раствора натрия гипохлорита (1200, 300 мг/л), полученного на аппаратах ЭДО. Способы приготовления иммобилизированных форм антисептика натрия гипохлорита в гелях полимеров натрий-карбоксиметилцеллюлозы и аэросил-глицерина просты, не требуют дорогостоящего оборудования и специального обучения пер-

сонала. Экономически выгодны в условиях больниц: из 100,0 г полимера на-трий-карбоксиметилцеллюлозы выход 5% геля составляет 2,0 кг.

2. Хранение иммобилизированных форм антисептика натрия гипохлорита (1200, 300 мг/г) в гелях полимеров натрий-карбоксиметилцеллюлозы и аэросил-глицерина раствора натрия гипохлорита (1200, 300 мг/л), полученных на аппаратах ЭДО, осуществляется в темной стерильной посуде в холодильнике при температуре +4°С в течение 6 месяцев, а стабилизированных форм — 12 месяцев.

3. Иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита применяются местно. Лечение начинают с широкого раскрытия гнойника и хирургической обработки раны с промыванием её раствором антисептика натрия гипохлорита (1200 мг/л). Рана рыхло тампонируется марлевыми салфетками, пропитанными гелями на аэросил-глицериновой и натрий-карбоксиметилцеллюлозной основах с натрия гипохлоритом, затем накладывается асептическая повязка.

4. В I фазе раневого процесса для местного лечения показаны иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита в концентрации 1200 мг/г.

5. Во II фазе раневого процесса после очищении ран от гнойно-некротических масс и появления грануляций необходимо использовать иммобилизированные формы антисептика натрия гипохлорита в концентрации 300 мг/г.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ

1. Разработка и оценка антимикробной активности мазей с натрия гипохлоритом в опытах in vitro // Актуальные проблемы медицины и фармации: Матер. 65-й итог. науч. конф. молодых ученых и студентов. - Курск, 2000. -С. 19-20 (соавт. А.И. Бежин, Т.А. Панкрушева, С.Н. Удалова, O.A. Медведева,

B.А. Липатов).

2. Изучение антимикробной активности мазей с натрия гипохлоритом // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики; Матер, науч.-практ. конф., посвящ. 35-летию фармфакультета. - Курск, 2001. —

C. 143-144 (соавт. Т.А. Панкрушева, С.Н. Удалова, O.A. Медведева, Я.И. Ишез-ский).

3. Лечение гнойных ран иммобилизированным антисептиком натрия ги-похлорит в геле полимеров в экспериментах in vivo // Клинические исследования лекарственных средств: Матер. II Междунар. конф. - М., 2002. - С. 130-131 (соавт. А.И. Бежин, А.И. Бузов).

4. Антимикробная активность мазей с натрия гипохлоритом в экспериментах in vivo // Лечение ран и раневой инфекции: Матер. Междунар. конф. -Ярославль - М., 2003. - С. 39-40 (соавт. В.Д. Затолокин, М.А. Халилов).

5. Экспериментальное обоснование применения иммобилизированных форм антисептика натрия гипохлорита (1200, 300 мг/л) в лечении гнойных ран // Науч. тр. 4-й Междунар. науч. практ. конф. «Здоровье и образование в XXI веке» (23-25 мая 2003г.; г. Москва). - М., 2003. - С. 445 (соавт. А.И. Бежин, А.И. Бузов).

6. С1 2209622 RU 7 А 61 К 9/06, 3.3/20, А 61 Р 31/02. Иммобилизирован-ная форма натрия гипохлорита для лечения местных гнойно-воспалительных процессов мягких тканей / Курск, гос. мед. ун-т. - № 2001134480/14. Заявл. 17.12.2001 // Изобретения (Заявки и патенты). - 2003. - № 22. - С. 592 (соавт. А.И. Бежин, Т.А. Панкрушева, С.Н. Удалова, С.В. Иванов, O.A. Медведева, Б.В. Кузьмин).

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 15.12.2003 г. Подписано в печать 17.12.2003 г. Формат 30х42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 10А.

Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.