Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование влияния ксимедона на течение беременности, развитие плодов крысы и взаимоотношение его с тератогенами циклофосфамидом и натрия салицилатом.

На правах рукописи

Гайнетдинов Рафаэль Фанисович

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ КСИМЕДОНА НА ТЕЧЕНИЕ БЕРЕМЕННОСТИ, РАЗВИТИЕ ПЛОДОВ КРЫСЫ И ВЗАИМООТНОШЕНИЕ ЕГО С ТЕРАТОГЕНАМИ ЦИКЛОФОСФАМИДОМ И НАТРИЯ САЛИЦИЛАТОМ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ 4841287

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 МАР 2011

Казань-2011

4841287

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Хафизьянова Рофия Хафизьяновна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Данилов Валерий Иванович

кандидат медицинских наук, доцент Хазиахметова Вероника Николаевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г.Уфа)

Защита диссертации состоится «01» апреля 2011 г. в Ю00 час. на заседании диссертационного совета Д 208.034.01 при ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» (420012, г.Казань, ул. Бутлерова, д.49).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» (420012, г.Казань, ул. Бутлерова, д.49).

Автореферат разослан «^6» <3/1-? 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Лекарственные средства широко используются для лечения патологии человека в репродуктивный период жизни. Одним из недостатков как недавно внедренных в практическую медицину, так и давно используемых лекарственных препаратов является их неблагоприятное воздействие на течение беременности и развитие плодов (Schardein J.L. 1980; Pastuszak А. Et al., 1993; Карпов О.И., 2003; Tomson Т. et al., 2009; Czeizel A.E. et al., 2009; Langer O. et al., 2007; Wells P.G. et al., 2010). Исследование тератогенных свойств лекарственных веществ стало обязательным после «Талидомидной катастрофы», поэтому изучение репродуктивной безопасности на доклиническом этапе исследования новых лекарственных веществ является актуальным.

Производные пиримидина являются перспективным классом химических веществ для поиска и внедрения в практическую медицину новых лекарственных препаратов. Широкое применение в практической медицине нашли метилурацил, пентоксил, калия оротат и др. Одним из перспективных среди пиримидиновых производных является отечественный препарат ксимедон, синтезированный Н.Г.Пашкуровым и В.С.Резником в ИОФХ КФАН АН СССР им. А.Е.Арбузова в 1964 году.

Ксимедон проявляет широкий спектр фармакологических эффектов: иммуномодулирующее (Слабнов Ю.Д. 1998; Малышев К.В. 2000), антиапоптозное (Черепнев Г.В. 1999, 2002), антиоксидантное (Слабнов Ю.Д. 1996; ВалееваИ.Х. 2004), антимутагенное (Черепнев Г.В., 2000), радиопротекторное (Цибулькин А.П. 1992), ноотропное свойства, сочетающиеся с анксиолитическим и антидепрессантным действием (Хафизьяиова Р.Х. 2006), гипохолестеринемическим действием в экспериментальных условиях (Камбург P.A. 1993), способность стимулировать регенерацию периферического нерва (Хафизьянова Р.Х. 1996). В клинических исследованиях показана его способность проявлять противоожеговое действие, ускорять процессы регенерации при остеомиелите, корригировать нарушение иммунного статуса при дерматитах и дерматозах, стимулировать заживление язв при декомпенсированной форме хронической венозной недостаточности, улучшать функциональное состояние и клинические параметры при полинейропатиях у больных с сахарным диабетом и др (Ларионов М.В 2006; Кадырова Л.Р. 2004).

Несмотря на длительное применение в клинической практике лекарственного препарата ксимедона в качестве противоожогового средства, а также на наличие широкого круга научных публикации, патентов на изобретения и выполненных диссертационных работ экспериментального и клинического характера, в которых утверждается перспективность применения его для коррекции различных патологических процессов и заболеваний остается открытым вопрос: допустимо ли использование ксимедона в репродуктивном

периоде у женщин? Поэтому, исследование влияния ксимедона на организм беременных крыс и развитие их плодов является вполне назревшим и обоснованным как с теоретических, так и практических позиции медицины.

Цель исследования. Изучение влияния ксимедона на процессы пренатального развития крысы и его взаимоотношения с тератогенами: циклофосфамидом и натрия салицилатом.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние ксимедона на течение беременности и развитие плодов при введении крысам с 6 по 16 дни гестации в дозе 30 мг/кг.

2. Исследовать влияние ксимедона на течение беременности и развитие плодов при введении крысам на протяжении всего срока гестации.

3. Оценить тератогенные свойства циклофосфамида в различных дозах при введении беременным крысам.

4. Изучить воздействие различных доз натрия салицилата на течение беременности и развитие плодов крыс.

5. Оценить взаимоотношение ксимедона с тератогенами: циклофосфамидом и натрия салицилатом.

Научная повизна.

Впервые изучено влияние ксимедона на организм беременных крыс и развитие плодов при введении его в терапевтической дозе в различные сроки гестации и доказано отсутствие эмбриотоксических свойств препарата.

Впервые исследовано взаимоотношение ксимедона с тератогенами циклофосфамидом и патрия салицилатом и установлено, что препарат не проявляет антитератогенного действия и не усиливает общетоксические и эмбриотоксичесикие свойства этих веществ, что свидетельствует о возможности сочетанного его применения как с циклофосфамидом, так и натрия салицилатом.

Личный вклад автора. Определен алгоритм исследования, предполагающий изучение тератогенных свойств ксимедона и эмбриотоксических свойств циклофосфамида и натрия салицилата для моделирования тератогенеза, также оценки взаимоотношения ксимедона с этими тератогенами. Проведен анализ научной литературы, определены методики. Экспериментальные исследования и статистическая обработка их результатов, представленные в диссертации, полностью выполнены автором.

Научио-практическая ценность работы. Итоги работы являются обоснованием возможности использования ксимедона в акушерстве и гинекологии, а также у женщин в период беременности. Результаты исследования расширяют представления о сложности

разработки проблемы лекарственной коррекции и профилактики тератогенного эффекта ксенобиотиков.

Экспериментальные данные могут быть использованы для дальнейших исследований, направленных на раскрытие механизмов, лежащих в основе тератогенных эффектов циклофосфамида и натрия салицилата. Циклофосфамид в дозе 10 мг/кг при однократном введении на 12 сутки гестации и натрия салицилат в дозе 300 мг/кг при курсовом однократном ежедневном введении на 9,10,12,13 сутки беременности крысам позволяют моделировать тератогенез для поиска антитератогенных веществ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ежедневное введение ксимедона в дозе 30 мг/кг беременным крысам с 6 по 16 дни и с первого по 19 сутки гестации не сопровождается эмбриолетальным, тератогенным действием и задержкой развития плодов.

2. Ксимедон, вводимый с 6 по 16 день гестации в дозе 30 мг/кг беременным крысам, не влияет на тератогенный эффект циклофосфамида, вводимого на 12 день гестации.

3. Ксимедон, вводимый с 6 по 16 день гестации в дозе 30 мг/кг беременным крысам, не корригирует тератогенный эффект натрия салицилата, вводимого на 9, 10, 12, 13 дни гестации.

4. Курсовое введение ксимедона беременным крысам не повышает токсические и тератогенные свойства циклофосфамида и натрия салицилата.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены: 77-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань, 2003); межвузовской конференции молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" (Санкт-Петербург, 2003); 78-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань, 2004); XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004 года); 2-ой Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005); XI Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2006); Второй международной конференции «Информация о лекарственных средствах - качественному использованию лекарств» (Казань, 2010); на заседаниях проблемно-предметной комиссии КГМУ (Казань, 2007, 2010).

Публикации. Материалы по теме диссертации опубликованы в 14 научных работах, в том числе три статьи - в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикация - 2,1 у.п.л., в том числе авторское участие 1,3 у.п.л.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 183 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы, включающего 102 отечественных и 104 иностранных источников. Диссертация содержит 99 рисунков и 59 таблиц.

Материалы и методы исследования.

Эксперименты проведены на 139 половозрелых белых беспородных крысах самках. Для моделирования беременности каждой самке подсаживалось половозрелые беспородные крысы самцы из расчета два самца на четыре самки. Всего в экспериментах было использовано 35 самцов. Полному обследованию были подвергнуты 885 плодов крыс.

При выполнении работы были использованы фармакологические, токсикологические, тератологические и статистические методы.

Тератологическими методами исследованиями устанавливались негативные воздействия изучаемых ксенобиотиков и их комбинаций на развитие плодов крыс. Эмбриотоксическое действие - способность того или иного вещества оказывать токсическое действие на развивающийся зародыши. Эмбриотоксичность может проявляться в трех основных формах: эмбриолетальном, тератогенном действии и общей задержке развития. Эмбриолеталыюе действие - повышение общего уровня предимплантационной или постимплантационной эмбриональной смертности. Тератогенное действие - анатомические, гистологические, цитологические, биохимические, нейрофизиологические и другие отклонения от нормы, проявляющиеся до или после рождения. Общая задержка развития -изменение массы тела, краниокаудального размера, задержка оссификации костей скелета. Эксперименты проводились в соответствии с общепринятыми требованиями (Хабриев Р.У. 2005; A. Wallace Hayes, 1994; Дыбан А.П.1974 и др.).

Диссертационная работа одобрена к проведению Локальным Этическим Комитетом ГОУ ВПО "Казанский государственный медицинский университет".

Для исследования использовали ксимедон - субстанция, которая была синтезирована в ИОФХ им. акад. А.Е. Арбузова КНЦ РАН. Она была предоставлена д.х.н., профессором B.C. Резником одним из авторов его синтеза, для проведения всех опытов. Ксимедон в дозе 30 мг/кг вводили животным 1 раз в день внутрибрюшино десятикратно с шестого по шестнадцатый день первой группе беременных крыс и девятнадцатикратно с первого по девятнадцатый день беременности - второй.

Циклофосфамид ("Циклофосфан" - субстанция, ООО "Компания Деко" г. Москва) вводился крысам однократно на двенадцатый день беременности в дозе 20 мг/кг или 10 мг/кг внутрибрюшинно.

Натрия салицилат (субстанция) вводился однократно, внутримышечно на 12 сутки первой опытной группе животных в дозе 400 мг/кг; второй - однократно па 9, 10, 12 сутки гсстации; третьей - однократно на 9,10,12,13, соответственно по 300 мг/кг; четвертой -однократно на 9,10,11,12,13 сутки гестации соответственно по 300 мг/кг.

Самки контрольных групп получали эквиобъем стерильной дистиллированной воды.

Оценка влияния ксимедона на тератогенные свойства циклофосфамида и натрия салицилата проведена на беременных крысах, разделенных на 4 группы. Две группы служили контролем, остальные получали либо ксимедон в сочетании с циклофосфамидом, либо ксимедон в сочетании с натрия салицилатом.

Для каждой крысы, включенной в исследование, определяли динамику массы тела на протяжении беременности, потребление ею воды, пищи и общую поведенческую активность. После эвтаназии крыс определяли коэффициенты массы некоторых органов (печень, почки, сердце, селезенка, тимус, мозг, гипофиз, надпочечники).

Для потомства каждой крысы рассчитывали показатели пред- и постимплантационной смертности. С целью оценки влияния препаратов на развитие плодов проводили морфометрическую оценку. Последовательно у всех выделенных эмбрионов определяли краниокаудальный размер, диаметр плаценты, аногенитальную дистанцию. Соотношение плодов различного пола оценивалось как результат отношения числа мужских к числу женских плодов по каждому помету. Определялась аногенитальпая дистанция (anogenital distance) - расстояние от края полового бугорка до анального отверстия.

После оценки показателей эмбриональной гибели все плоды осматривали на наличие внешних аномалий и вариаций развития. После осмотра у 1/3 части плодов оценивали аномалии развития внутренних органов, а 2/3 - аномалии костной системы. Для оценки аномалий использовалась классификация и порядок осмотра принятый зарубежными и отечественными исследователями (A, Wallace Hayes, 1994; Дыбан А.П.1974). Для оценки влияния ксенобиотиков на процессы формирования костных зачатков проводилась морфометрия зачатков костей, окрашенных ализарином, под микроскопом с морфометрической сеткой.

Статистический анализ результатов исследования проводили с использованием параметрических и непараметрических тестов (Хафизьянова Р.Х. 2006). Обработку проводили с использованием пакетов статистических программ Statistica (StatSoft, Inc. 2001, version 6).

Результаты исследования и их обсуждение.

Изучение влияния ксимедона на организм и течение беременности у крыс показало, что препарат при десятикратном введении в дозе 30 мг/кг с 6 по 16 день гестации не

оказывал влияния на общую поведенческую активность беременных крыс, потребление ими корма и воды и прирост массы тела.

Оценка влияния ксимедона на коэффициенты массы ряда органов беременных самок показала, что препарат не оказывал значимого действия на этот параметр мозга, печени, почек, сердца, селезенки, тимуса и матки. Однако, ксимедон достоверно повышал коэффициенты массы яичников, надпочечников, гипофиза беременных животных на 60,9%, 27,0% и 128,6% соответственно.

Ни в одной из сопоставляемых групп не было выявлено наличие мертвых плодов. В обеих группах животных было зарегистрировано отсутствие крыс с полной резорбцией эмбрионов. В яичниках опытных и контрольных животных не было выявлено различий числа желтых тел. Места ранней и поздней резорбции были выявлены в матках как опытных, так и контрольных крыс, и их число статистически не было значимым (таб. 1).

Таблица 1

Выживаемость эмбрионов после 10-кратного введения ксимедона (М±т).

Параметры Контроль Опыт

(диет, вода) (ксимедон 30 мг/кг х 10)

число беременных крыс 13 8

крыс с живыми плодами 13 8

крыс с мертвыми плодами 0 0

крыс с резорбцией всех эмбрионов 0 0

желтых тел 12,38±0,53 13,25±0,92

мест ранней резорбции 1,54±0,60 0,88+0,30

мест поздней резорбции 0,46±0,18 0,25+0,16

общее число резорбции 2,00+0,63 1,13±0,35

число живых плодов 8,08±0,89 8,13+1,65

число мертвых плодов 0 0

* - р<0.05 к контролю

Ксимедон в дозе 30 мг/кг при 10-кратном введении с 6 по 16 дни гестации не менял индексы пред- и постимплантационной гибели, не оказывал значимого влияния на массу и диаметр плаценты, а также массу и длину плодов. При данном режиме введения препарат не оказывал влияния на половую дифференцировку их плодов.

При осмотре плодов крыс обеих групп внешних признаков, указывающих на наличие каких-либо нарушении строения головы, шеи, тела, конечностей и хвоста не было обнаружено. Из 105 контрольных плодов ни у одного не было выявлено внешних аномалий. У одного из 65 опытных плодов крыс (1,53%) было обнаружено наличие ластовидных задних конечностей и укорочение, как передних, так и задних конечностей.

Изучение влияния 10-кратного введения ксимедона на закладку и состояние внутренних органов плодов крыс не выявило нарушений. Исследование влияния ксимедона в

дозе 30 мг/кг при десятикратном введении с 6 по 16 дни гестации беременным крысам не оказывало действия на развитие скелета и его осслфикацию у плодов. Морфометрическое исследование точек окостенения различных отделов скелета не выявило негативного действия ксимедона. Как длина точек окостенения костей задних конечностей (бедренной, болынеберцовой, малоберцовой костей), так и передних конечностей (плечевой, локтевой, лучевой костей) плодов крыс опытной группы не отличались статистически значимо от плодов контрольной группы.

Исследование влияния ксимедона в дозе 30 мг/кг на течение беременности н развитие плодов крыс при введении на всем протяжении гестации позволило выявить, что животные хорошо переносили беременность и в течение всего эксперимента отмечалось постепенное нарастание их массы тела. К концу опыта прирост массы тела опытных беременных самок не отличался от контрольных. Коэффициенты массы сердца, печени, почек, селезенки и тимуса в опытных и контрольных группах животных статистически не различались. В то время как коэффициенты массы гипофиза, матки и яичников были достоверно повышены на 42,8%; 37,9%; 57,8% соответственно по сравнению с контрольными животными.

Курсовое введение ксимедона в период гестации не влияло на индекс пред- и постимплантационной смертности, что указывает на отсутствие у препарата эмбриолетального действия (таб. 2).

Таблица 2

Индексы предимплантационной и постимплантационной смертности эмбрионов крыс,

получавших ксимедон (М±т).

Параметры контроль (диет, вода) Опыт (ксимедон 30 мг/кг х19)

Индекс предимплантационной смертности 0,17+0,07 0,04±0,03

Индекс постимплантационной смертности 0,24±0,08 0,18+0,08

Ксимедон при курсовом введении не приводил к изменению массы плаценты и ее диаметра, а также массы и длины плода крыс (табл. 3).

Таблица 3

Морфометрические показатели плодов и плаценты (М±т).

Параметр контроль (диет, вода) опыт (ксимедон 30 мг/кг х19)

масса плода, гр. 2,68+0,14 2,72±0,11

масса плаценты, гр. 0,65+0,02 0,65±0,01

длина плода, мм 36,27±0,74 36,1010,71

диаметр плаценты, мм 14,94±0,31 15,14+0,17

Курсовое введение ксимедона в период беременности крыс не оказывало влияния на процессы половой дифферепцировки их плодов. Показатели аногенитальной дистанции и аногенитального индекса в обеих группах плодов были равнозначными.

Ксимедон при введении в период беременности не вызывал внешних аномалии у плодов крыс. Ксимедон не вызывал внутренних аномалий развития у плодов крыс. Однако он достоверно повышал число плодов с полнокровием предсердии и желудочков сердца и сосудов тела на 51 ; 28,5 и 52% соответственно по сравнению с контрольными.

Результаты морфометрических исследований не выявили значимого отрицательного действия ксимедона на длину точек окостенения костей передних и задних конечностей плодов крыс.

Сравнительная оценка воздействия ксимедона в дозе 30 мг/кг на организм беременных крыс позволяет заключить, что беременные самки крыс хорошо переносят как десятикратное, так и 19-кратное его введение в различные сроки гестации. Препарат не вызывает никаких симптомов интоксикации, не тормозит прирост массы тела беременных крыс. Как при десятикратном, так и 19-кратном введении проявляется специфическая органотропность препарата, выражающаяся в увеличении коэффициентов массы гипофиза, яичников и надпочечников у беременных крыс. Ксимедон не меняет коэффициент массы сердца, печени, почек, селезенки, тимуса беременных крыс. Впервые показано, что ксимедон не проявляет эмбриолетального действия, не вызывает задержки развития плодов крыс. В общесуммарной дозе равной 300 и 570 мг/кг при десятикратном и 19-кратном введении ксимедон не вызывает внешних аномалий, пороков развития внутренних органов и пе влияет существенно на процессы оссификации костей у плодов, т.е. не проявляет выраженного тератогенного действия. Способность препарата при 19-кратном введении в период беременности повышать число плодов с полнокровием предсердии и желудочков сердца, сосудов тела требует дальнейшего углубленного исследования. Результаты наших исследований согласуются с данными других авторов указывающих на отсутствие негативного действия на течение беременности и плодов крыс различных производных пиримидина в терапевтических дозах (Монахов Б.В., 1967; Космачевская Э.А., Чеботарь H.A., 1968).

Тератогенные свойства циклофосфамида исследованы достаточно широко с использованием различных доз в экспериментах на разных видах животных (Hales В., 1981; Slott V., 1988; Ujhazy Е., 1993; Han S-Y., 1993; Shah R., 1996; Wexler P. 1998; Kang H-G., 2003; Kim H-J., 2003; Bailey M., 2005; Park D., 2009). Однако в доступной литературе нами не было найдено сведений рекомендательного характера, указывающих дозу циклофосфамида для

изучеиия антитератогенных свойств лекарственных препаратов у крыс в период беременности.

Исследование влияния различных доз циклофосфамида на организм и течение беременности у крыс и выбор его дозы для моделирования тератогенеза позволило выявить, что препарат в дозе 10 мг/кг не оказывал общетоксического действия, но при повышении дозы препарата (20 мг/кг) в первые три дня наблюдалась вялость, снижение двигательной активности и агрессивность беременных крыс. На сроке 20 дней гестации регистрировалось снижение массы тела опытных крыс, которым однократно вводился циклофосфамид 20 мг/кг на 42,4% по сравнению с контрольными животными.

Циклофосфамид в дозе 10 мг/кг при однократном введении беременным самкам приводил к достоверному повышению коэффициентов массы яичников, почек, сердца и гипофиза па 32,3%, 28,1%,26,7% и 57,1% соответственно. При увеличении дозы препарата отмечалось значимое повышение коэффициента массы сердца на 20,3% и, наоборот, уменьшение этого параметра матки па 45%.

Введение циклофосфамида в дозе 20 мг/кг в отличие от дозы 10 мг/кг приводило к полной резорбции плодов у 80% самок (16 из 20) (р<0.001). В дозе 10 мг/кг препарат не оказывал эмбриолетального действия, в то время как в дозе 20 мг/кг значимо в 3,1 раза повышал постимплантационную гибель эмбрионов. Внутриутробная гибель плодов под влиянием циклофосфамида в дозе 20 мг/кг была связана с повышением их смертности как на эмбриональных, гак и фетальных периодах развития, о чем свидетельствует достоверное увеличение мест ранней и поздней резорбции. Количество мест ранней и поздней резорбции под влиянием циклофосфамида в дозе 10 мг/кг не было значимо снижено. В группе крыс, получавших циклофосфамид в дозе 10 мг/кг, число крысят не отличалось от контрольной, а циклофосфамид в дозе 20 мг/кг приводил к значимому, в 6,75 раза снижению их числа (табл. 4).

Циклофосфамид в обеих дозах (10 мг/кг и 20 мг/кг) значимо снижал массу и диаметр плаценты на 46,9%; 53,1% и 22%; 31% соответственно. Препарат на 15,3% и 31,4% достоверно снижал массу и на 13,5% и 24,5%; - длину плодов в дозах 10 и 20 мг/кг соответственно. Эти параметры плодов при введении большей дозы циклофосфамида были снижены в два раза (р<0.05).

Введение циклофосфамида приводило к появлению специфических аномалий развития у значимого числа зародышей, таких как экзенцефалия, отек, поли- и олигодактилия, выпадение языка, микрогнатия. Выраженность и частота регистрации и разновидности уродств у плодов проявлялись сильнее при введении беременным крысам циклофосфамида в дозе 20 мг/кг. Препарат в дозе 20 мг/кг вызывал достоверное повышение

числа эмбрионов с дефектом твердого неба, расширением лоханки почек, изменением положения мочевого пузыря, кровоизлиянием в головной мозг, полнокровием предсердий и желудочков сердца. Циклофосфамид и в дозе 10 мг/кг вызывал нарушения развития внутренних органов у значимого числа плодов: расширение центрального канала, кровоизлияния в мозг, полнокровие предсердий сердца, полнокровие сагиттальных синусов и сосудов тела.

Таблица 4

Влияние циклофосфамида на показатели, характеризующие эмбриотоксическое его

действие (М±т).

Параметры Контроль Циклофосфамид

10 мг/кг х 1 20 мг/кг х 1

число беременных крыс 10 7 20

крыс с живыми плодами 10 7 4*

крыс с мертвыми плодами 0 2 0

крыс с резорбцией всех эмбрионов 0 0 16*

желтых тел 12,80±0,59 10,43±0,95 10,8010,41

мест имплантаций 10,30±1,16 9,29+0,68 9,40+0,44

мест ранней резорбции 1,90+0,74 0,57+0,20 4,85+0,87*

мест поздней резорбции 0,30+0,15 0,57±0,43 3,35+0,72*

общее число резорбции 2,20+0,80 1,14+0,40 8,20+0,66*

количество живых плодов 8,10+1,17 7,43±1,25 1,20±0,60*

количество мертвых плодов 0 0,71+0,57* 0

* - р<0.05 к контролю (дистиллированная вода)

Циклофосфамид в обеих дозах вызывал достоверное повышение числа плодов с дефектами формирования костной системы. У плодов крыс, подвергшихся воздействию циклофосфамида, в дозах 10 и 20 мг/кг зарегистрировано нарушение процессов оссификации скелета, что проявлялось отсутствием точек окостенения тазовых костей, ключиц, грудины, лопаток и значимым уменьшением размеров точек окостенения трубчатых костей: бедренной, плечевой, локтевой при его введении в дозе 20 мг/кг. Мы полагаем, что введение циклофосфамида на 12 день гестации вызывает не только нарушение роста зачатков костей, но и торможение оссификации развивающихся зачатков крупных костей, что не противоречит результатам других исследователей (Дыбан А.П., 1974; Наггоик й а!., 2000; Капв ЬШ. Ы а!., 2003).

На основании результатов экспериментов можно сделать заключение, что циклофосфамид в дозе 20 мг/кг вызывает эмбриотоксический эффект, индуцирует аномалии и задержку развития плодов. При снижении дозы циклофосфамид также проявлял

выраженное тератогенное действие. Однако, в дозе 20 мг/кг он значимо на 80% повышал число беременных крыс с резорбцией плодов.

На основании проведенных исследований можно заключить, что в экспериментальной фармакологии для моделирования тератогенеза необходимо вводить белым беспородным беременным крысам циклофосфамид в дозе 10 мг/кг на 12 день гестации.

Исследование воздействия натрия салицилата в дозах 300 и 400 мг/кг на организм беременных крыс и развитие их плодов при введении на разных сроках гестации и выбор его дозы для моделирования тератогенеза.

Результаты опытов показали, что натрия салицилат при различных схемах введения не изменял поведения беременных животных и динамику массы их тела.

Как видно из таблицы 5, увеличение кратности введения препарата сопровождалось повышением смертности эмбрионов и плодов.

Таблица 5

Показатели, характеризующие эмбриотоксические свойства натрия салицилата

(М±т).

Параметры Контроль Натрия салицилат (доза х кратность введения)

400мг/кгх1 300 мг/кгхЗ 300 мг/кгх4 300 мг/кгх5

беременных крыс 12 5 5 12 6

крыс с живыми плодами 12 5 5 10 1

крыс с мертвыми плодами 0 0 1 1 0

крыс с резорбцией всех эмбрионов 0 0 0 2 5

число желтых тел 11,91 ±0,41 10,60±1,28 11,80±0,86 12,00+0,42 12,33+0,80

мест имплантаций 9,25±0,80 10,20+1,31 10,80±0,80 10,50+0,76 10,33±1,11

мест ранней резорбции 0,50+0,33 1,00+0,54 0,40+0,40 3,66+0,93* 3,83±0,94*

мест поздней резорбции 0,50+0,23 0,60+0,60 0,60±0,24 2,16±0,63* 5,00+1,50*

общее число резорбции 1,00+0,50 1,60±0,60 1,00±0,54 5,83±0,94* 8,83+1,37*

количество живых плодов 8,25±0,98 8,60±1,53 9,60±0,20 4,50+1,19* 1,50±1,50*

количество мертвых плодов 0 0 0,20±0,20 0,16±0,16 0

* - р<0.05 к контролю

Четырехкратное введение натрия салицилата в период органогенеза плодов беременным крысам на 16,7% снижало число животных с живыми плодами. Доведение числа инъекций до пяти в дозе 300 мг/кг оказывало максимально негативное действие на выживаемость плодов при введении на 9-13 сутки гестации. Так, было установлено, только у одной из шести опытных крыс этой группы (16,6%) были обнаружены живые плоды. В связи с чем среднее число живых плодов было значимо снижено на 81,8%. В отличие от других групп животных, в этой группе у пяти из шести крыс были выявлены крысы с полной резорбцией эмбрионов, что составило 83,3% (таб. 5).

Ни в одной из опытных групп индексы предимплантационной смертности не отличались от контрольной группы. При четырехкратном и пятикратном введении натрия салицилата достоверно на 408,3% и 633,3% повышался индекс постимплантационной смертности соответственно.

Введение препарата во всех использованных схемах введения сопровождалось однонаправленным снижением массы тела и плаценты плодов крыс. При сравнительном анализе изменений указанных параметров плодов и плаценты выявлено, что снижение их значений не зависело от дозы и кратности назначения в период гестации натрия салицилата.

Введение НС сопровождалось увеличением числа аномалий регистрируемых при внешнем осмотре и исследовании внутренних органов плодов. Наибольшее количество аномалий регистрировалось в группе, получивших четырехкратную инъекцию препарата в дозе 300 мг/кг.

Оценка костной системы плодов крыс выявила широкий спектр аномалий. Трехкратное введение НС в дозе 300 мг/кг на 9, 10, 12 дни гестации беременным крысам сопровождалось возрастанием числа плодов с недоразвитием лицевого скелета и нарушением формирования ребер. Было значимо повышено число плодов с наличием 14 ребра. Введение натрия салицилата четырехкратно в дозе 300 мг/кг (на 9,10,12,13 дни гестации) приводило к резкому возрастанию числа аномалий костной системы у плодов. Так, достоверно повышалось число плодов крыс с отсутствием зачатков лобной, теменной, височной, затылочной костей черепа.

Таблица 6

Влияние различных доз и схем применения натрия салицилата на длину зачатков

костей плодов при назначении в период органогенеза беременным крысам (М±т).

Параметры Контроль Опыт (Натрия салицилат)

(диет, вода) 400мг/кгх1 300 мг/кгхЗ 300 мг/кг х4 300 мг/кг х5 **

[Длина (мм)

[Лучевая 1,93+0,06 1,52±0,20* 1,71±0,04* 1,47±0,08 * 1,60**

[Локтевая 2,46+0,07 1,91+0,28* 2,15+0,02* 1,78+0,11 * 2,01**

|Плечевая 2,32+0,08 1,89±0,28 2,10+0,04 1,83+0,11 * 2,02**

|Бедренная 1,73+0,07 1,31+0,22* 1,53±0,03* 1,28±0,09 * Ii,55**

|Болыпеберцовая 1,98+0,07 1,50±0,22* 1,80+0,05 1,54+0,09* 1,72**

[Малоберцовая 1,83±0,06 1,18+0,25* 1,51+0,06* 1,36±0,08 * 1,48**

[Лопатка 2,34+0,07 1,96±0,26_ 2,18+0,02 1,90+0,09 * 2,00**

[Количество М±т М±т

[Зачатков кисти 3,08±0,22 2,40±0,48 2.64±0,19 Ь,03±0,27 * 2,33**

[Зачатки стопы 3,24±0,41 2,93+0,07 2,82+0,08 2,53+0,25 2,67**

[Ребер 13,84±0,84 12,90+0,10 13,70+0,20 12,29±0,44 14,00**

* - р<0.05 к контролю

** - в группе был только один плод

Отмечалось повышение числа крысят с отсутствием зачатков костей пясти, плюсны и грудины. Наряду с этими нарушениями формирования костной системы у плодов крыс отмечалось достоверное увеличение случаев недоразвития лицевого скелета, нарушения правильного формирования грудной клетки. Повышалось число плодов, имеющих сращение ребер, наличие дополнительного 14 ребра и, наоборот, уменьшение их количества.

Исследование роста зачатков трубчатых костей в опытных группах плодов позволило выявить, что препарат оказывает разнонаправленное действие в зависимости от дозы и схемы введения. Натрия салицилат при однократном введении в дозе 400 мг/кг и четырехкратном введении в дозе 300 мг/кг вызывал однонаправленное уменьшение длины зачатков всех трубчатых костей: лучевой, локтевой, плечевой, бедренной, большеберцовой, малоберцовой (таб. 6). Увеличение общесуммарпой дозы до 1200 мг/кг также сопровождалось снижением числа точек окостенения ребер, стопы и кисти. Трехкратное введение препарата в дозе 300 мг/кг оказывало также влияние на костную систему плодов и нарушало параметры локтевой, лучевой, бедренной, малоберцовой костей.

Результаты иаших исследований указывают на способность натрия салицилата избирательно нарушать процессы формирования костно-сусгавной системы у плодов крыс при его назначении в период органогенеза с 9 по 12 сутки гестации беременным самкам.

Этот препарат только в дозе 300 мг/кг при четырехкратном введении в период органогенеза беременным крысам проявляет наиболее выраженные тератогенные свойства: вызывает аномалии развития внутренних органов, нарушает формирование костно-суставной системы у плодов. На основании анализа результатов можно полагать об обоснованности применения именно этой дозы и выбранной схемы назначения в период гестации натрия салицилата для моделирования тератогенеза у крыс. Результаты исследования данного фрагмента работы расширяют представления об эмбриотоксических свойствах салицилатов в зависимости от дозы и схемы применения в период беременности, дополняют имеющиеся в литературе данные об этой группе ксенобиотиков (Beall J.R. 1977; Klein K.L. 1981; Wilson J.G. 1977; Karabulut A.K. 2000).

Исследование влияния ксимедона на тератогенные эффекты циклофосфамида дозе 10 мг/кг.

Учитывая сведения литературы, подтверждающие наличие антиоксидантных свойств у ксимедона (Валеева И.Х. 2004; Малышев К.В. 2000; Власов А. П. 2000; Зорькина A.B. 1997), его способность оказывать иммуномодулирующее (Слабнов Ю.Д., 1997), антиапоптозное действие (Черепнев Г.В., 1999, 2000), радиопротекторное (Цибулькин А.П., 1992), а также генопротекторные свойства (Малышев К.В. 2000) представлялось важным оценить антитератогенные свойства у препарата. В качестве тератогенов в настоящей работе

были использованы циклофосфамид и натрия салицилат. Предполагается, что в реализации их тератогенного эффекта задействованы различные механизмы (Kovacic Р. 2006; Hansen J.M. 2006; Hosako Hiromi, 2009; Wells P.G. 2010; Abbot B.D. 2010; Chernoff N. 2010).

Было установлено, что введение ксимедона в дозе 30 мг/кг с последующей однократной инъекцией циклофосфамида в дозе 10 мг/кг беременным крысам не препятствовало достоверному снижению массы тела этой опытной группы по сравнению с контрольной.

Ксимедон в сочетании с циклофосфамидом, как и циклофосфамид в дозе 10 мг/кг не изменяли параметры эмбриональной и фетальной гибели. Показатели пред- и постимплантационной гибели были одинаковыми в обеих группах животных.

Как циклофосфамид, так и ксимедон в сочетании с этим тератогеном однонаправлено достоверно снижали массу и диаметр плаценты беременных крыс и массу и длину плодов крыс (таб. 7).

Таблица 7

Морфометрические показатели плодов контрольных и опытных крыс, получавших

комбинацию циклофосфамида и ксимедона (М±т).

Параметры Контроль Циклофосфамид 10 мг/кг х 1 Ксимедон 30 мг/кг х 10 + Циклофосфамид 10 мг/кг х 1

масса плода, гр. 2,53+0,07 2,16±0,15* 2,00±0,11*

масса плаценты, гр. 0,65+0,03 0,34+0,02* 0,38±0,02*

длина плода, мм. 35,37±0,53 30,77+1,26* 30,41±1,10*

диаметр плаценты, мм. 15,22±0,36 11,80±0,26* 12,82±0,43*

* - р<0.05 к контролю

Ксимедон при десятикратном введении в сочетании с циклофосфамидом не влиял на число плодов с дефектом свода черепа с выходом головного мозга, значимо снижал число плодов с микрогнатией на 39,4%, уменьшал число плодов с ластовидными передними конечностями на 21,2%. В этой группе животных у 76,1% плодов отмечалась олигодактилия задних конечностей, но ни в одном случае у плодов не была выявлена полидактилия нижних конечностей.

При оценке аномалий внутренних органов было установлено, что циклофосфамид в дозе 10 мг/кг при однократном введении на 12 день гестации достоверно повышал число плодов с расширением центрального канала спинного мозга, кровоизлиянием в головной мозг, полнокровием предсердий, полнокровием сагиттальных синусов и сосудов тела. Ксимедон препятствовал возникновению этих аномалии внутренних органов, кроме повышения случаев полнокровия предсердий у плодов.

При оценке скелета по методу Доусона-Дыбана было выявлено, что введение ксимедона в дозе 30 мг/кг с б-го по 16 день гестации при воздействии циклофосфамида на 12 сутки беременности крысам вызывало те же изменения костной системы у плодов. В этой группе по выраженности они были сопоставимы и достигали значимых значений. Следует однако отметить, что ксимедон приводил в 2,7 раза, 4,2 раза и 3,5 раза к достоверному снижению числа плодов крыс с отсутствием зачатков предплечья, кисти и стопы соответственно.

Циклофосфамид в этой дозе однонаправлено приводил к достоверному уменьшению длины зачатков: лучевой, локтевой, плечевой, бедренной, большеберцовой, малоберцовой и лопатки. Он также значимо снижал количество зачатков пясти, плюсны, числа ребер. Введение ксимедона до и после тератогена не оказывало протективного действия на исследуемые параметры перечисленных костей скелета плодов.

Во всех трех исследуемых группах в помете были как плоды женского, так и мужского пола. Ни циклофосфамид, ни его введение в сочетании с ксимедоном не оказывало влияния на половую дифференциацию плодов.

На основании анализа результатов проведенных исследований можно заключить, что ксимедон в дозе 30 мг/кг при выбранной схеме введения: с 6 по 16 день гестации беременным крысам - в период органогенеза плодов не проявляет протективного действия по отношению тератогенного эффекта циклофосфамида, инъецированного однократно в дозе 10 мг/кг на 12 сутки гестации. Несмотря на то, что ксимедон в этих опытах вводился профилактически за 6 дней до тератогена, а затем в течение четырех дней после тератогена препарат не предотвращал развитие у плодов крыс внешних уродств, нарушения закладки внутренних органов, а также костной системы. Итоги анализа позволяют предполагать, что ксимедон не усиливает тератогенные эффекты циклофосфамида, однако он и не проявляет антитератогенного действия.

Исследование влияния ксимедона на тератогенные эффекты натрия салпцилата.

Считается, что тератогенные эффекты салицилатов опосредуются через усиление процессов перекисного окисления липидов. В экспериментах с эмбрионами, культивируемыми в сыворотке, содержащей ацетилсалициловую кислоту, салициловую кислоту, салицилат натрия добавление в культивируемую среду супероксиддисмутазы снижало число эмбрионов с аномалиями развития через 48 часов (КагаЬи1Ш АК, 2000).

Учитывая наличие антиоксидантных свойств у ксимедона мы предположили, что он будет предотвращать тератогенные эффекты натрия салицилата.

Было выявлено, что масса тела беременных крыс на фоне введения как натрия салицилата, так и его сочетания с ксимедоном, начиная с десятых суток до конца эксперимента достоверно снижалась.

В опытной группе крыс с введением ксимедона и тератогена регистрировалось значимое снижение числа животных с живыми плодами на 66,7%. У 50% беременных крыс этой группы отмечалась полная резорбция плодов. Число желтых тел в яичник&ч беременных крыс во всех группах значимо не различалось. Как тератоген, так и ксимедон в сочетании с ним вызывали значимое повышение мест поздней резорбции плодов.

Ксимедон повышал достоверно по сравнению с тератогеном места общей резорбции в матке. Количество живых плодов в обеих опытных группах значимо было снижено по сравнению с контрольной от 43,7 до 60,4%. (таб. 8).

Таблица 8

Влияния сочетанного введения ксимедона и натрия салицилата на параметры

выживаемости потомства крыс (М±т).

Параметры Контроль Натрия салицилат 300 мг/кг х 4 Ксимедон 30 мг/кг х 10 + натрия салицилат 300 мг/кг х 4

число беременных крыс 10 12 6

крыс с живыми плодами 10 10 2

крыс с мертвыми плодами 0 1 1

крыс с резорбцией всех эмбрионов 0 2 3

желтых тел 12,60+0,64 12,00±0,42 14,50+1,45

мест имплантаций 10,20+1,17 10,50+0,76 13,17+0,75

мест ранней резорбции 1,90±0,74 3,66+0,93* 6,17+1,78*

мест поздней резорбции 0,30±0,15 2,16+0,63* 3,67+1,02* .

общее число резорбций 2,20±0,80 5,83±0,94* 9,83±2,24*,**

количество живых плодов 8,00+1,16 4,50±1,19* 3,17+2,46*

количество мертвых 0 0,16±0,16 0,17+0,17

плодов

* - р<0.05 к контролю

** - - р<0.05 к группе натрия салицилата

Как натрия салицилат, так и ксимедон, введенный с этим тератогеном крысам в

период гестации приводили к достоверному и повышению индекса постимплантационной смертности зародышей на 221,4 и 275%% (р<0.05), соответственно. Ксимедон, вводимый в комбинации с НС не снижал достоверно повышенный индекс постимплантационной гибели.

Под воздействием ксимедона в сочетании с натрия салицилатом, как и натрия салицилатом при изолированном введении регистрировалось однонаправленное значимое уменьшение массы и диаметра плаценты и массы и длины плодов (таб. 9).

Внешний осмотр плодов крыс выявил, что введение ксимедона в сочетании с тератогеном снижало число плодов, с различными аномалиями: дефект свода черепа, выпадение языка, генерализованный отек, подкожные кровоизлияния и многоводие плаценты и др. Натрия салицилат в этой серии экспериментов приводил к достоверному повышению числа плодов с дефектом диафрагмы, в то время как она отсутствовала при введении ксимедона. Тсратоген вызывал кровоизлияния в головной мозг и сосуды легких и тела, и эти нарушения регистрировались и при сочетанном введении ксимедона.

Таблица 9

Морфометрические показатели плодов контрольных и опытных крыс (М±т).

Параметры Контроль (диет, вода) Натрия салицилат 300 мг/кг х 4 Ксимедон 30 мг/кг х 10 + натрия салицилат 300 мг/кг х 4

масса плода, гр. 2,72±0,18 1,95±0,10* 1,64+0,17*

масса плаценты, гр. 0,64+0,03 0,50±0,03* 0,42+0,05*

длина плода, мм. 36,26±0,96 30,56±1,48* 29,08±0,33*

диаметр плаценты, мм. 15,19±0,37 12,76±0,27* 13,56+0,31*

* - р<0.05 к контролю

Натрия салицилат вызывал 11 разновидностей нарушения костной системы у опытных плодов крыс (Р<0.05), а сочетанное введение ксимедона с тератогеном - 7, т.е. на 36,4% меньше. Дефекты костной системы у плодов крыс были сходными с ранее описанными для натрия салицилата. Ксимедон не предотвращал изменения этих костей плодов, но и не усиливал негативное действие тератогена. Однако ксимедон значимо повышал число плодов с уменьшением количества зачатков пясти и плюсны по сравнению с плодами подвергнутых воздействию одного тератогена - натрия салицилата. Введение ксимедона совместно с натрия салицилатом не сопровождалось нарушениями половой дифференцировки плодов крыс.

Сравнительный анализ результатов экспериментов позволяет заключить, что ксимедон в выбранной дозе и схеме введения беременным крысам не предотвращает негативное действие натрия салицилата на организм крыс и развитие уродств у плодов. В группе животных, получавших ксимедон, регистрировались как внешние уродства, гак и аномалий развития внутренних органов и костной системы у плодов, характерных для тератогена -натрия салицилата. Следует отметить, что ксимедон не усиливает проявления тератогенного действия натрия салицилата.

ВЫВОДЫ

1. Ксимедон в дозе 30 мг/кг при курсовом введении с 6 по 16 день гестации не влияет на общую поведенческую активность, потребление корма и массу тела беременных

крыс. Препарат не вызывает внешних уродств, аномалий развития внутренних органов и костной системы у плодов.

2. Курсовое введение беременным крысам ксимедона в дозе 30 мг/кг с первого по 19 сутки гестации не оказывает общетоксического действия на организм беременных крыс и не оказывает эмбриолетального и тератогенного действия и не вызывает задержку развития плодов животных.

3. В экспериментах на беременных крысах циклофосфамид однократно в дозе 10 мг/кг (внутрибрюшинно) и натрия салицилат в дозе 300 мг/кг четырехкратно (внутримышечно) при введении в период гестации вызывают уродства у плодов и рекомендуются для моделирования тератогенеза в эксперименте.

4. Ксимедон при курсовом введении в дозе 30 мг/кг не проявляет антитератогенное действие и не препятствует возникновению аномалий развития у плодов крыс, вызванных введением тератогенов: циклофосфамида и натрия салицилата беременным животным.

5. Курсовое введение ксимедона не потенцирует общетоксические и тератогенные свойства циклофосфамида и натрия салицилата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Ксимедон в терапевтической дозе 30 мг/кг безопасен при применении в период беременности.

2. Для моделирования тератогенеза в экспериментальных условиях рекомендуется однократное внутрибрюшинное введение циклофосфамида в дозе 10 мг/кг на 12 день гестации, а натрия салицилата четырехкратно на 9, 10, 12, 13 сутки беспородным белым крысам в период беременности в дозе 300 мг/кг внутримышечно.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гайнетдинов Р.Ф. Влияет ли димефосфон на костно-суставную систему плодов крыс? / Р.Ф.Гайнетдинов, Р.Н. Камалетдинов // Тезисы 77-ой Всероссийской студенческой научной конференции. - Казань. - 2003. - С. 38.

2. Камалетдинов Р.Н. Особенности влияния циклофосфана на эмбриогенез крысы / Р.Н.Камалетдинов, Р.Ф.Гайнетдинов// Тезисы 77-ой Всероссийской студенческой научной конференции. - Казань. - 2003. - С. 39.

3. Оценка действия димефосфона на предимплатационный период развития зародышей крыс / И.М. Бурыкин, Э.Р. Галимуллин, К.А. Малхасян, Р.Н. Камалетдинов, A.B.

Захарова, Р.Ф.Гайнетдинов, Р.Х. Хафизьянова // Межвузовская конференция молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии». -Санкт-Петербург. - 2003. - С. 12-14.

4. Гайиетдииов Р.Ф. Сравнительная оценка влияния различных ксенобиотиков на формирование костной системы плодов крыс / Р.Ф.Гайнетдинов // Тезисы 78-ой Всероссийской студенческой научной конференции. - Казань. - 2004. - С. 37-38.

5. Зависимость действия натрия салицилата от его дозы на формирование дефинитивной структуры и строения внутренних органов плодов крыс / К.А.Малхасян, Р.Ф. Гайнетдинов, Р.Н.Камалетдинов, А.В.Захарова // Тезисы 78-ой Всероссийской студенческой научной конференции. - Казань. - 2004. - С. 36.

6. Итоги сопоставления монофосфоната димефосфона и эталонных тератогснов: циклофосфамида и натрия салицилата на развитие эмбрионов крысы / И.М. Бурыкин, Р.Ф. Гайнетдинов, Г.Н. Алеева, Р.Х. Хафизьянова // XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - Москва. - 2004. - С. 769.

7. Гайнетдинов Р.Ф. Сравнительная оценка влияния димефосфона, циклофосфамида и натрия салицилата на половую дифференцировку плодов крыс / Р.Ф. Гайнетдинов, Р.Х. Хафизьянова И Материалы 2-ой Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека». Ульяновск. -2005.-С. 21-22.

8. Особенность моделирования тератогенеза циклофосфамидом / Р.Х. Хафизьянова, Р.Ф.Гайнетдинов, И.М. Бурыкин, Г.Н. Алеева // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Общество, здоровье, лекарство». - Саранск. - 2005. - С. 98-99.

9. Сравнительная оценка действия димефосфона н циклофосфамида на течение беременности и развитие плодов крыс / Р.Х. Хафизьянова, И.М. Бурыкин, Г.Н. Алеева, Р.Ф.Гайнетдинов // Казанский медицинский журнал - 2005. - № 6. - С. 503-504.

10. Гайнетдинов Р.Ф. Внешние аномалии развития плодов крыс при воздействии различных доз циклофосфамида / Р.Ф.Гайнетдинов // XI Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине». Казань. - 2006. - С. 196-197.

11. Изменение остеогенсза плодов при воздействии натрия салицилата в период органогенеза беременным крысам / Р.Х. Хафизьянова, Гайнетдинов Р.Ф., И.М. Бурыкин, Г.Н. Алеева // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2006. - том 182. - С. 346-353.

12. Гайнетдинов Р.Ф. Взаимоотношение ксимедона с тератогеном циклофосфамидом / Р.Х. Хафизьянова, Гайнетдинов Р.Ф // Клиническая фармакология и терапия. - 2010. - том 19. - С. 95-96.

13. Эмбриогенез плодов крыс при введении ксимедона беременным крысам / Р.Х. Хафизьянова, Р.Ф.Гайнетдинов, Г.Н. Алеева, И.М. Бурыкин // Материалы Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров». Казань. - 2010. - С. 229-232.

14. 1,2-дигидро-4,6-диметил-^/р-оксиэтил/-пиримидон2 (кеимедон) не проявляет эмбриотоксические свойства / Хафизьянова Р.Х., Гайнетдинов Р.Ф., Алеева Г.Н., Бурыкин И.М. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2010.- Т.204.- С.314-322.

Подписано в печать 25.02.2011. Формат 60x84 ,/16. Тираж 120 экз. Гарнитура -Тайме». Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Заказ № 02/136. Печать ризографическая.

»

Отпечатано с готового оригинал-макета в издательстве «ИГМА-пресс» ИП Маликовой И.Г. ОГРН 308169031500136 Казань, ул. Московская, д.31, офис 215. Тел. 526-03-69.

Актуальность исследования. Лекарственные средства широко используются для лечения патологии человека в репродуктивный период жизни. Одним из недостатков как недавно внедренных в практическую медицину, так и давно используемых лекарственных препаратов является их неблагоприятное воздействие на течение беременности и развитие плодов [43, 199, 124, 153, 169, 176, 184]. Исследование тератогенных свойств лекарственных веществ стало обязательным после «Талидомидной катастрофы», поэтому изучение репродуктивной безопасности на доклиническом этапе исследования новых лекарственных веществ является актуальным.

Производные пиримидина являются перспективным классом химических веществ для поиска и внедрения в практическую медицину новых лекарственных препаратов. Широкое применение в практической медицине нашли метилурацил, пентоксил, калия оротат и др. Одним из перспективных среди пиримидиновых производных является отечественный препарат ксимедон, синтезированный Н.Г.Пашкуровым и В.С.Резником в ИОФХ КФАН АН СССР им. А.Е.Арбузова в 1964 году.

Ксимедон проявляет широкий спектр фармакологических эффектов: иммуномодулирующее [59, 72], антиапоптозное [94, 95, 96], антиоксидантное [9, 79], антимутагенное [98], радиопротекторное [92], ноотропное свойства, сочетающиеся с анксиолитическим и антидепрессантным действием [88], гипохолестеринемическим действием в экспериментальных условиях [41], способность стимулировать регенерацию периферического нерва [13]. В клинических исследованиях показана его способность проявлять противоожоговое действие, ускорять процессы регенерации при остеомиелите, корригировать нарушение иммунного статуса при дерматитах и дерматозах, стимулировать заживление язв при декомпенсированной форме хронической венозной недостаточности, улучшать функциональное состояние и клинические параметры при полинейропатиях у больных с сахарным диабетом и др [40, 52].

Несмотря на длительное применение в клинической практике лекарственного препарата ксимедона в качестве противоожогового средства, а также на наличие широкого круга научных публикации, патентов на изобретения и выполненных диссертационных работ экспериментального и клинического характера, в которых утверждается перспективность применения его для коррекции различных патологических процессов и заболеваний остается открытым вопрос: допустимо ли использование ксимедона в репродуктивном периоде у женщин? Поэтому, исследование влияния ксимедона на организм беременных крыс и развитие их плодов является вполне назревшим и обоснованным как с теоретических, так и практических позиции медицины.

Цель исследования. Изучение влияния ксимедона на процессы пренатального развития крысы и его взаимоотношения с тератогенами: циклофосфамидом и натрия салицилатом.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние ксимедона на течение беременности и развитие плодов при введении крысам с 6 по 16 дни гестации в дозе 30 мг/кг.

2. Исследовать влияние ксимедона на течение беременности и развитие плодов при введении крысам на протяжении всего срока гестации.

3. Оценить тератогенные свойства циклофосфамида в различных дозах при введении беременным крысам.

4. Изучить воздействие различных доз натрия салицилата на течение беременности и развитие плодов крыс.

5. Оценить взаимоотношение ксимедона с тератогенами: циклофосфамидом и натрия салицилатом.

Научная новизна. Впервые изучено влияние ксимедона на организм беременных крыс и развитие плодов при введении его в терапевтической дозе в различные сроки гестации и доказано отсутствие эмбриотоксических свойств препарата.

Впервые исследовано взаимоотношение ксимедона с тератогенами циклофосфамидом и натрия салицилатом и установлено, что препарат не проявляет антитератогенного действия, но не усиливает общетоксические и эмбриотоксичесикие свойства этих веществ, что свидетельствует о возможности сочетанного его применения как с циклофосфамидом, так и натрия салицилатом.

Личный вклад автора.

Определен алгоритм исследования, предполагающий изучение тератогенных свойств ксимедона и эмбриотоксических свойств циклофосфамида и натрия салицилата для моделирования тератогенеза, также оценки взаимоотношения ксимедона с этими тератогенами. Проведен анализ научной литературы, определены методики. Экспериментальные исследования и статистическая обработка их результатов, представленные в диссертации, полностью выполнены автором.

Научно-практическая ценность работы. Итоги работы являются обоснованием возможности использования ксимедона у женщин в период беременности. Результаты исследования расширяют представления о сложности разработки проблемы лекарственной коррекции и профилактики тератогенного эффекта ксенобиотиков.

Экспериментальные данные могут быть использованы для дальнейших исследований, направленных на раскрытие механизмов, лежащих в основе тератогенных эффектов циклофосфамида и натрия салицилата. Циклофосфамид в дозе 10 мг/кг при однократном введении на 12 сутки гестации и натрия салицилат в дозе 300 мг/кг при курсовом однократном ежедневном введении на 9,10,12,13 сутки беременности крысам позволяют моделировать тератогенез для поиска антитератогенных веществ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ежедневное введение ксимедона в дозе 30 мг/кг беременным крысам с б по 16 и с первого по 19 сутки гестации внутрибрюшинно не сопровождается эмбриолетальным, тератогенным действием и задержкой развития плодов.

2. Ксимедон, вводимый с 6 по 16 день гестации в дозе 30 мг/кг беременным крысам, не влияет на тератогенный эффект циклофосфамида, вводимого на 12 день гестации.

3. Ксимедон, вводимый с 6 по 16 день гестации в дозе 30 мг/кг беременным крысам, не корригирует тератогенный эффект натрия салицилата, вводимого на 9, 10, 12, 13 дни гестации .

4. Курсовое введение ксимедона беременным крысам не повышает токсические и тератогенные свойства циклофосфамида и натрия салицилата.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены:

- 77-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань,

2003);

- межвузовской конференции молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" (Санкт-Петербург, 2003);

78-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань,

2004);

XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004 года);

2-ой Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005);

- Всероссийской научно-практической конференции «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005);

- XI Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2006);

- Второй международной конференции «Информация о лекарственных средствах - качественному использованию лекарств» (Казань, 2010);

- на заседаниях проблемно-предметной комиссии КГМУ (Казань, 2007, 2010).

Структура диссертации. Работа изложена на 183 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы, включающего 102 отечественных и 104 иностранных источников. Диссертация содержит 99 рисунков и 59 таблиц.

выводы

1. Ксимедон в дозе 30 мг/кг при курсовом введении с 6 по 16 день гестации не влияет на общую поведенческую активность, потребление корма и массу тела беременных крыс. Препарат не вызывает внешних уродств, аномалий развития внутренних органов и костной системы у плодов.

2. Курсовое введение беременным крысам ксимедона в дозе 30 мг/кг с первого по 19 сутки гестации не оказывает общетоксического действия на организм беременных крыс и не оказывает эмбриолетального и тератогенного действия и не вызывает задержку развития плодов животных.

3. В экспериментах на беременных крысах циклофосфамид однократно в дозе 10 мг/кг (внутрибрюшино) и натрия салицилат в дозе 300 мг/кг четырехкратно (внутримышечно) при введении в период гестации вызывают уродства у плодов и рекомендуются для моделирования тератогенеза в эксперименте.

4. Ксимедон при курсовом введении в дозе 30 мг/кг не проявляет антитератогенное свойство и не препятствует возникновению аномалий развития у плодов крыс, вызванных введением тератогенов: циклофосфамида и натрия салицилата беременным животным.

5. Курсовое введение ксимедона не потенцирует общетоксические и тератогенные свойства циклофосфамида и натрия салицилата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для моделирования тератогенеза у крыс рекомендуется однократное внутрибрюшинное введение циклофосфамида в дозе 10 мг/кг на 12 день гестации, а натрия салицилата четырехкратно на 9, 10, 12, 13 сутки беременности в дозе 300 мг/кг внутримышечно.

2. Ксимедон в терапевтической дозе 30 мг/кг безопасен при применении в период беременности и может применятся в акушерстве и гинекологии.