Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Характеристика компонентов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в различных тканях при обтурационной механической желтухе (экспериментальное исследование)
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.03.03
Автореферат диссертации по медицине на тему Характеристика компонентов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в различных тканях при обтурационной механической желтухе (экспериментальное исследование)
На правах рукописи
48
56933
Смирнова Наталья Геннадьевна
ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПОНЕНТОВ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ В РАЗЛИЧНЫХ ТКАНЯХ ПРИ ОБТУРАЦИОННОЙ МЕХАНИЧЕСКОЙ ЖЕЛТУХЕ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)
14.03.03. - патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 3 ОКТ 2011
Санкт- Петербург 2011
4856933
Работа выполнена на кафедре патофизиологии ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения и социального развития РФ.
НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор медицинских наук, профессор
Власов Тимур Дмитриевич
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор медицинских наук,
профессор Николаев Валентин Иванович
доктор медицинских наук,
профессор Тюкавин Александр Иванович
ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:
Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины СЗО РАМН
Защита диссертации состоится «_»_2011 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д.208.090.03 Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова (197022, г. Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8).
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения и социального развития РФ.
Автореферат разослан «_» сентября 2011 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор В.Ф. Митрейкин
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Синдром внепеченочного холестаза развивается при целом ряде заболеваний гепатобилиарной области. В его основе лежит нарушение оттока желчи, связанное с механической обтурацией внепе-ченочных желчных протоков (Шерлок Ш.,1999; Иванченкова Р.А., 2006).
Наиболее часто внепеченочный холестаз развивается на фоне желчнокаменной болезни (Борисов А.Е. и соавт., 2003; Савельев B.C. и со-авт., 2003; Красильников Д.М. и соавт., 2008)., которая является самой распространенной причиной госпитализации в клинике хирургических болезней (Rosenmiiller М. et al., 2007). Кроме того, внепеченочный холестаз возникает при таких онкологических заболеваниях как рак поджелудочной железы, желчного пузыря и внепеченочных желчных протоков, которые суммарно составляют 15% всех злокачественных новообразований (Долгушин Б.И., Косырев В.Ю., 2004., O'Brien К. et.al, 2003).
Летальность пациентов с механическими желтухами по настоящее время остается высокой, и по данным разных авторов составляет 9-35% (Борисов А.Е и соавт., 2003; Dixon J.M. et al., 1984; Han X.C. et al., 2003).
Основными осложнениями, являющимися причиной летальности при механической желтухе являются почечная недостаточность, инфекционные осложнения, желудочно-кишечные кровотечения (Dixon J.M. et al., 1984; Han X.C. et al., 2003; Keighley M.R. et al., 1984 и Mishra D. et al. 2007), и, no данным Борисова А.Е. и соавт., (2003) - печеночная недостаточность вследствие развития токсического гепатита.
Основным методом лечения при механической желтухе остается оперативное, которое сегодня проводится как традиционным способом, так и с помощью эндоскопических и эндовидеохирургических методик (Борисов А.Е и соавт., 2003; Gergely М,1986; Mishra D. et. al. 2007). Однако для уменьшения количества интраоперационных осложнений механической желтухи в клинике также проводится и консервативное лечение (Dawson J.L. et al. 1968; Юдин А.А., 2010; Болевич С.Б., 2010). Одним из направлений консервативной терапии может являться использование гепатопротекторов. Их применение при обтурационной механической желтухе изучено недостаточно, особенно при сохраняющемся нарушении оттока желчи. В то же время использование данных препаратов может быть перспективным для профилактики повреждения печени и других органов при механической желтухе.
На сегодняшний день свободнорадикальное окисление клеточных структур при обструктивном холестазе остается мало изученным вопросом, хотя по мнению Dirlik М. и соавт. 2009 именно свободнорадикальное окисление является одним из главных механизмов повреждения при данном заболевании. По мнению Chroni Е. И и соавт. (2006), Konstantinou D. и соавт. (2008) можно говорить о развитии глубоких нарушений как систем свобод-норадикального окисления, так и антиоксидантной защиты при остром и хроническом обтурационном холестазе. Однако многие вопросы, касающиеся данного направления исследований, остаются неизученными. В частности,
несмотря на подтвержденные антиоксидантные свойства Б-аденозилметионина и ремаксола (Яковлев А.Ю. и соавт., 2010; Оопга1ег-Соггеа е1 а1., 1997) эффективность применения этих гепатопротекторов при обтурационном холестазе и их влияние на процессы свободнорадикаль-ного окисления и антиоксидантной защиты при данной патологии изучены недостаточно. Рассмотрение этих вопросов может быть перспективным для расширения представления о механизмах повреждения при холестазе и способах коррекции его осложнений.
Цель исследования: изучить особенности свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в различных органах на модели экспериментальной обтурационной механической желтухи у крыс.
Задачи исследования
1. Исследовать показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в ткани печени экспериментальных животных с холестазом.
2. Оценить системное влияние холестаза на состояние свободнорадикального окисления и некоторых показателей антиоксидантной защиты в почках, головном мозге и эритроцитах у экспериментальных животных.
3. Выявить особенности патоморфологических изменений в печени и некоторых отдаленных органах экспериментальных животных при экспериментальном холестазе.
4. Определить эффективность инфузионных препаратов - ремаксола и 8-аденозилметионина как гепатопротекторов при экспериментальном холестазе у крыс.
5. Изучить состояние антиоксидантной защиты и показателей свободнорадикального окисления в печени, почках, головном мозге и эритроцитах при экспериментальном лечении холестаза инфузионными гепатопротекторами.
Научная новизна исследования
1. Впервые выполнено комплексное исследование процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при экспериментальном холестазе с одновременной оценкой биохимических и морфологических показателей в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах и показано, что оксидативное повреждение и нарушение антиоксидантной защиты при холестазе носят системный характер.
2. Впервые показано, что использование в лечении экспериментальных животных препаратов 8-аденозилметионина и ремаксола приводит к снижению уровня первичных и вторичных продуктов перекисного окисления ли-пидов в различных органах, а также активации каталазы и системы обмена глутатиона - глутатионредуктазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и глута-тион-зависимых антиоксидантных ферментов - глутатионпероксидазы и глу-татион-8-трансферазы.
Теоретическая и практическая значимость
Данные, полученные в исследовании, расширяют современные представления о значении свободнорадикального окисления в патогенезе обтурационного холестаза, а также о роли свободнорадикального окисления в повреждении различных органов при данной патологии. Полученные данные об эффективности влияния инфузионных гепатопротекторов ремаксола и Б-аденозилметионина на показатели свободнорадикального окисления и ан-тиоксидантной защиты позволяют рассматривать данные препараты как возможные средства патогенетической терапии, воздействующие на процессы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при обтураци-онной механической желтухе.
Положения, выносимые на защиту
1. Нарушение оттока желчи сопровождается выраженной активацией свободнорадикального окисления и угнетением показателей антиоксидантной защиты в ткани печени, что имеет значение в патогенезе ее холестатического повреждения.
2. При экспериментальном холестазе происходит активация свободнорадикального повреждения на системном уровне в тканях других органов, причем на фоне угнетения антиоксидантных ферментов системы глутатиона и некоторых других компонентов антиоксидантной защиты происходит компенсаторная активация каталазы.
3. Внутривенное введение препаратов Ремаксол и Б-аденозилметионин при экспериментальном холестазе у крыс сопровождается гепатопротективным действием и оказывает корректирующее влияние на состояние свободнорадикального повреждения и антиоксидантную защиту на системном уровне.
Личный вклад автора
Личное участие автора в проведенном исследовании заключается в самостоятельной разработке дизайна исследования, личном участии в проведении экспериментов, получении, обработке и анализе экспериментальных данных.
Публикации
По теме диссертации опубликованы 5 печатных работ, основное содержание диссертационной работы отражено в 3-х статьях в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертационных исследований (список публикаций в журналах, рекомендованных ВАК РФ).
Внедрение результатов работы
Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре патофизиологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова.
Апробация работы
Результаты исследования докладывались на Российских конференциях и симпозиумах:
1. Ноябрь 2010 года-Всероссийская конференция с международным участием "Актуальные вопросы неотложной хирургической гастроэнтерологии" (г. Геленджик).
2. Ноябрь 2010 года-Всероссийский форум «Пироговская хирургическая неделя» (г. Санкт-Петербург).
3. Декабрь 2010 года - Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы гастроэнтерологии» (г. Москва).
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 27 отечественных и 133 иностранных источников. Работа иллюстрирована 33 рисунками и 12 таблицами, входящими в Приложение.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование выполнялись на крысах-самцах линии Вистар (возраст 18 недель, масса 270-300 г) полученных из питомника «Рапполово» РАМН, (г Санкт-Петербург). Общее количество животных - 120. До экспериментов животных подвергали 14 дневному карантину и рандомизации. Метки и индивидуальные номера животных регистрировали в протоколах лабораторных испытаний. Животных содержали в условиях вивария на неограниченном потреблении корма и воды. Ограничение потребление корма было только в день операции. Лапаротомия и забор крови при выводе животных из эксперимента выполнялись под анестезией (тиопентал натрия 50 мг/кг внутри-брюшинно). Все эксперименты выполнялись согласно требованиям этического комитета ГБОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова.
Моделирование экспериментального холестаза
Экспериментальный холестаз моделировался путем перевязки общего желчного протока крысы в модификации Aller М.А. et al. (2008). Кры-
сам под общей анестезией проводилась срединная лапаротомия, органы брюшной полости сдвигались, и выделялся общий желчный проток. Общий желчный проток перевязывался двумя лигатурами 4-0 и пересекался между ними, после чего органы брюшной полости крысы аккуратно возвращались на прежнее положение, и проводилось послойное ушивание операционной раны. Ложнооперированным животным производилась срединная лапаротомия без перевязки общего желчного протока.
Общая характеристика эксперимента
Эксперименты выполнялись в 2 этапа. На 1 этапе у 80 крыс моделировалась обтурационная желтуха путем перевязки общего желчного протока, изучаемые показатели оценивались на 7 или 14 дни после операции. Целью первого этапа эксперимента было изучение модели обтурационного холеста-за на сроке 7 и 14 дней с оценкой его влияния на общее состояние животных, функцию печени и поджелудочной железы. Животные выводились из эксперимента на 7 или 14 дни после начала эксперимента, в зависимости от распределения по группам. Кровь для биохимических исследований забиралась из нижней полой вены; для гистологического исследования извлекалась печень животных.
На 2 этапе эксперимента у 40 крыс моделировалась обтурационная желтуха путем перевязки общего желчного протока в течение 10 дней. Целью второго этапа эксперимента была оценка влияние обтурационного холестаза на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной активности, с одновременной оценкой функция печени, азотвыделительной функции почек, морфологических изменений в печени, почках и головном мозге экспериментальных животных.
Экспериментальное лечение начиналось в день операции и проводилось до дня выведения животных из эксперимента. В хвостовую вену животных в объеме 1мл/100 г веса крысы вводились раствор для инфузий Ремак-сол, содержащий в своем составе активные компоненты - янтарную кислоту, рибоксин, никотинамид, метионин, или лиофилизат 8-аденозилметионин (в дозе 10 мг/кг), растворенный в 5 мл прилагаемого растворителя, а затем в 400 мл 0,9% №С1.
Оценка биохимических показателей сыворотки крови
Забор биологических жидкостей (кровь) проводился на 7, 10 или 14 сутки после операции, в зависимости от распределения по группам, после введения исследуемых препаратов. Предварительно анестезированным животным (тиопентал натрия 50 мг/кг внутрибрюшинно) проводилась лапаротомия и забор крови из нижней полой вены.
Кровь без консерванта набирали в пластиковые пробирки и оставляли на 30 минут. После этого кровь центрифугировали при 15000 оборотах в течение 15 минут. Полученную сыворотку отдавали на исследование в тот же день.
Исследование уровня аланинаминотрансферазы (AJ1T); аспартата-минотрансферазы (ACT); билирубина общего; билирубина прямого; билирубин непрямого; щелочной фосфатазы (ЩФ); амилазы; гамма-глютамилтранспептидазы (ГГТП); альбумина, мочевины и креатинина выполнялись на автоматическом анализаторе Backman Coolter "Synchron".
Получение образцов крови и тканей для изучения показателей свободно-радикального окисленияи антиоксидантной активности
Для получения образцов для исследований предварительно анестезированным животным (тиопентал натрия 50 мг/кг внутрибрюшинно) проводилась лапаротомия и проводился забор крови из нижней полой вены.
Полученную кровь стабилизировали 4% раствором цитрата натрия в соотношении стабилизатор: кровь 1:6 - 1:8. Стабилизированную кровь лабораторных животных для выделения эритроцитов центрифугировали в течение 10 мин в центрифуге «К-24 D» (Германия) при 3000 об./мин (3000 g) и температуре +2°С. Полученную эритроцитарную взвесь трижды отмывали холодным физиологическим раствором и центрифугировали при тех же условиях. Эритроцитарную массу замораживали погружением в жидкий азот, после чего хранили в холодильной камере при - 60°С. Гемолиз эритроцитов вызывали добавлением к размороженной эритроцитарной взвеси в 5 мМ ТРИС-НС1 буфера с pH 7,6 в соотношении 1:9. Гемолиз осуществляли в течение 30 мин при +4°С. Полученный гемолизат использовали для определения биохимических показателей.
Органы: печень, почки и головной мозг отмывали холодным физиологическим раствором от крови в течение 35-50 с после иссечения, замораживали в жидком азоте и до начала исследований также хранили в холодильной камере при - 60°С.
Перед исследованием ткани печени, почек и головного мозга лабораторных животных извлекали из морозильной камеры, взвешивали, измельчали и гомогенизировали в микроизмельчителе тканей при 3000 об./мин, добавляя охлажденный 0,1 М калий-фосфатный буфер с pH 7,4 в соотношении ткань: буфер - 1:6.
Полученный гомогенат использовали для определения концентрации восстановленного глутатиона, содержания сульфгидрильных групп белков, МДА, ДК и ОАА. Время от момента размораживания тканей до отбора проб гомогенатов и осаждения в них белка кислотами не превышало 60-120 с.
Для определения активности ГП, ГР, FST и Гл-бф-ДГ использовали очищенную цитоплазматическую фракцию, которую получали дифференциальным центрифугированием. Гомогенат центрифугировали в течение 20 мин при +4°С с ускорением 20000 g на центрифуге K-24D. Супернатант ре-центрифугировали в течение 60 мин при +2°С при 44500 об./мин (ускорение 150000 g) с использованием ротора Туре 50 3.Ti на ультрацентрифуге L8-M
(«Вескшап»,США). Полученный супернатант использовали для определения активности исследуемых ферментов.
Концентрацию восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков, продуктов ПОЛ и активность вышеперечисленных ферментов в исследуемых тканях проводили спектрофотометрическими методами. Выбор этих методов исследования определялся их высокой информативностью и точностью, относительно небольшим количеством необходимого для исследования материала, возможностью проведения обследования всех животных одномоментно, по всем вышеперечисленным показателям.
Статистическая обработка результатов
Статистическая обработка результатов исследования осуществлялась с помощью пакета прикладных программ Microsoft Exel 2007 и StatSoft Statistica 6.0. Все данные были проверены на нормальность распределения с помощью теста Шапиро - Уилкса. В работе приведены средние значения и их стандартные отклонения, а также медианы и процентили. В статистическом анализе использовались непараметрические методы сравнения Манна-Уитни. Значения считали достоверными при заданном критерии вероятности р<0,01 и р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Влияние холестаза на состояние животных, динамику массы тела, потребление корма и воды
В течение первых нескольких дней после операции по воспроизведению экспериментального холестаза у всех крыс с холестазом появлялась и в последующие 14 дней нарастала желтушность кожных покровов и слизистых, стул становился ахоличным, моча темнела. Также отмечалась желтушность внутренних органов, что выявлялось при вскрытии брюшной полости при выведении животных из эксперимента. У всех животных экспериментальных групп отмечалось вздутие всех отделов кишечника, что характерно для синдрома мальабсорбции, развивающегося при обтурационном холестазе (Шерлок Ш.,1999). У части животных (в среднем около 30% в группах с холестазом) отмечался асцит, но различия по частоте асцита и объему асцити-ческой жидкости у животных разных групп не отмечались. Операция по воспроизведению экспериментального холестаза не влияла на потребление корма и воды.
Влияние холестаза на показатели и, характеризующие функцию печени и степень ее повреждения
На обоих этапах эксперимента, при 7, 10 и 14 дневном холестазе, отмечалась гипербилирубинемия и увеличение уровня ферментов, характерезующих холестатическое и паренхиматозное повреждение печени. У всех крыс с экспериментальным холестазом были достоверно увеличены такие показатели плазмы крови как общий, прямой и непрямой билирубин,
аспартатаминотрансфераза (ACT) и аланинаминотрансфераза (AJ1T), а также повышены показатели гамма-глютамилтранспептидазы (ГГТП) и щелочной фосфатазы (ЩФ) в сравнении с контрольной группой ложнооперированных животных.
При оценке морфологической картины ткани печени было показано, что с 7 по 14 день холестаза в ткани печени нарастала выраженность морфологических изменений. Дольковое строение печени становилось стертым, появлялось полнокровие венозного русла. Крупные желчные протоки расширялись, их просвет пустел. Появлялись ложные желчные ходы, наблюдалось паретическое расширение отдельных вен и желчных протоков, множественные кровоизлияния и некроз отдельных печеночных триад с выраженной лимфо-плацентарной инфильтрацией.
Влияние холестаза на показатели перекисного окисления липидов в ткани печени крыс
Одним из основных механизмов повреждения при обтурационном холестазе является перекисное окисление липидов (ПОЛ), которое инициирует образование из мембранных фосфолипидов перекисей липидов и гидроперекисей, дающих начало цепной реакции ПОЛ (Ercin C.N. et al., 2008). Образующиеся первичные продукты ПОЛ и их токсичные производные - эпок-сиды, альдегиды, кетоны, спирты и карбоксильные группы способны непосредственно повреждать гепатоциты, вследствие стимуляции выработки про-воспалительных цитокинов (Янковский О.Ю., 2000; Karadeniz G. et al., 2008).
Показатели ПОЛ в ткани печени
350°/о
300%
в;
£ о 250%
о.
1- X 200%
о 150%
н
о 100%
#
50%
0%
224%
00%
313%
1000/.
I
1Ложнооперированные
ОХолестаз
Малоновый диальдегид
Диеновые коньюгаты
Рис. 1. Влияние холестаза на показатели перекисного окисления липидов в ткани печени.
В связи с этим нами было изучено образование в ткани печени диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МД), как наиболее при-
нятых показателей активности перекисного окисления липидов при различных заболеваниях (Balkan J. et al., 2003; Sefkin S. et al., 2006;).
На фоне 10-дневного обтурационного холестаза уровень первичных продуктов ПОЛ в таканях печени - диеновых коньюгатов, увеличился в три раза с 52,32±4,02 до 162,51±11,46 нмоль/г ткани (р=0,0005) (рис.1).
Подобные изменения свидетельствуют об активизации свободно-радикального окисления, что подтверждается и увеличением вторичных показателей ПОЛ - малонового диальдегида, уровень которого в группе с холе-стазом также вырос в два раза с 169,8± 3 до 382,91±18,98 нмоль/г ткани (Р=0,0005) (рис.1). Таким образом, холестаз сопровождается резкой активацией процессов перекисного окисления липидов и увеличением в ткани печени таких показателей, как малоновый диальдегид и диеновые конъюгаты.
Влияние холестаза на показатели антиоксидантной активности в ткани печени крыс
В настоящее время окислительный стресс рассматривается как состояние дисбаланса между прооксидантной и антиоксидантными системами (Путилина Ф.Е., 2007; Halliwell В., 2006).
Токсическое действие активных форм кислорода при оксидативном стрессе сопровождается интенсификацией свободнорадикальных процессов и снижением активности антиоксидантной защиты (Дубинина Е.Е., 2006). Общая антиокислительная активность клетки является интегральным показателем, отражающим общую активность одновременно всех ингибиторов свободнорадикальных реакций и показывает активность антиоксидантных ферментов, низкомолекулярных антиоксидантов и хелатов (Беляков Н.А., Семесько С.Г., 2005; Apak R. et al. 2007).
Нами получены результаты, что на фоне 10-дневного холестаза уровень общей антиокислительной активности снизился в 2 раза с 66,7±3,87до 33,3±5,02 нмоль/г ткани, что свидетельствует об общем угнетении звеньев антиоксидантной защиты в ткани печени (рис. 2).
Подобные изменения свидетельствуют о нарушении сбалансированности в системах генерации свободных радикалов и антиоксидантной защитой с преобладанием процессов свободнорадикального окисления.
К наиболее активным внутриклеточным ферментам относится ката-лаза, основной функцией которой является расщепление перекиси водорода. В организме млекопитающих основное ее количество сконцентрировано в ткани печени и эритроцитах (Дубинина Е.Е., 2006; Salvi М. et al.., 2007).
к с; о о.
II
о
X I-
о
Рис. 2. Влияние холестаза на динимику общей антиокислительной активности в ткани печени.
На фоне 10-дневного холестаза уровень каталазы в гепатоцитах снизился в 1,5 раза (918,19±32,91 нмоль/г ткани, в контрольной группе, 628,05±20,93 нмоль/г ткани) (р=0,0005), т.е. отмечалось снижение ее активности, которое проходило параллельно с уменьшением общей антиокислительной активности.
Еще одной системой, связанной с инактивацией перекисей, в отношении которых неэффективна каталаза, является глутатионовый редокс-цикл (Дубинина Е.Е., 2006; НаШшеП В., 2006).
Мы оценивали компоненты глутатионового редокс-цикла: восстановленный глутатион, глутатионредуктазу, глутатионпероксидазу, а также глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, способствующую образованию восстановленного НАДФ в реакциях пентозофосфатного пути окисления глюкозы, необходимого для глутатионредуктазной реакции.
Кроме того, в процессе активации ПОЛ в первую очередь происходит повреждение сульфгидрильных групп белков, что приводит к угнетению функций серосодержащих ферментов и коферментов, нарушению работы тиоловых металлопротеинов и факторов трансляции (Путилина Ф.Е., 2007). Поэтому нами также изучалось состояние БН групп белков при холестазе. Также нами оценивался уровень глутатионтрансферазы, селензависимого фермента, специализирующегося на нейтрализации органических перекисей и токсических продуктов взаимодействия активных форм кислорода с биомолекулами-эпоксидов и карбонилов (НаШ\уе11 В., 2006).
На фоне холестаза отмачалось угнетение всех звеньев обмена глутатиона в ткани печени (рис. 3). Уровень, восстановленного глутатиона, являющегося субстратом для работы глютагионредуктазы, снижался в 6 раз (11,73±0,34 нмоль/г ткани в контрольной группе против 1,94±0,11 нмоль/г ткани в группе с холестазом) (р=0,0005).
Общая антиокислительная активность в ткани печени
100%
100%
Ложнооперированные
80%
60%
40%
20%
Показатели системы глутатиона в ткани печени
100% юоо/о 1 ООО/о юо% юо% юо%
ЮО<% 90% 80% 70°А> бО% 500А> ДОЧЬ 30°А 20% Ю°Л.
С>°А
■ Л ожноопери рова н н ые ПХолестаз
Рис. 3. Влияние холестаза на показатели обмена глутатиона в ткани печени.
Уровень глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы снизился в ткани печени в 2,5 раза (137,64±8,84 нмоль/г ткани в контрольной группе, 56,01±2,71 нмоль/г ткани в группе с холестазом). Уровень сульфгидрильных групп белков также снизился в 2,7 раза (р=0,0005).
Вследствие уменьшения под действием холестаза уровней восстановленного глутатиона, ГЛ-6-ФГ, повреждения сульфгидрильных групп тиоловых белков, происходило угнетение уровней всех ферментов глутатионового редокс-цикла в ткани печени. Показатели глутатионпероксидазы в ткани печени в группе крыс с холестазом снизились по сравнению с контрольной группой в 2 раза (с 24,06±1,18 нмоль/г ткани до 10,94±0,9 нмоль/г ткани, р=0,0005), глутатионредуктазы в 1,8 раз (с 352,Ш6,43 нмоль/г ткани до 193,63±9,22 нмоль/г ткани, р=0,0005).
Также в 1,3 раза снизился уровень глютатион-Б-трансферазы (422,57±10,86 нмоль/г ткани в контрольной группе, 336,18 ±11,86 нмоль/г ткани нмоль/г ткани в группе с холестазом, р<0,05), одной из функций которой является коньюгация глутатиона с токсичными продуктами ПОЛ (Путилина Ф.Е., 2007).
Таким образом, при холестазе происходит достоверное снижение ан-тиоксидантной активности печени, связанное с угнетением активности ка-талазы и системы глутатиона, что является дополнительным фактором, увеличивающим повреждение печени при данной патологии.
Влияние холестаза на показатели перекисного окисления липидов в ткани почек, эритроцитов и головного мозга крыс.
Во всех изучаемых органах уровень малонового диальдегида у крыс с холестазом повышался, по сравнению с группой контрольных животных, статистическая разница была достоверной (р<0,001).
Описанные биохимические именения в ткани почек, эритроцитах и головном мозге свидетельствуют об активации свободно-радикального окисления в перечисленных органах (рис. 4).
Уровень малонового диальдегида в различных органах на 10 день холестаза
130% 11 лол.
120%
к
О 100% а
£ 80%. о
* 60% н
° 40% 20% 0%
ткань почки
ткань
эритроциты головного мозга
Рис. 4. Влияние холестаза на уровень малонового диальдегида в ткани почек, эритроцитов и головном мозге.
На рисунке 5 показан уровень общей антиокислительной активности в различных тканях. В ткани почек и эритроцитах достоверно снижалась ОАА, что, вероятно связано с истощением антиоксидантной защиты. В головном мозге уровень ОАА наоборот, достоверно повысился. Эти изменения по-видимому связаны с особенностями метаболических процессов головного мозга (Дубинина Е.Е., 2006).
При оценке уровня каталазы в различных органах были получены данные, что в тканях почек, эритроцитах и головного мозга он вырос (рис. 6), что отличается от показателей этого фермента в ткани печени, где отмечалось его достоверное снижение на фоне обтурационного холестаза.
Общая антиокислительная активность в различных органах на 10 день холестаза
ткань почки эритроциты ткань
головного мозга
■Ложнооперированные ВХолестаз
Рис. 5. Влияние холестаза на уровень общей антиокислительной активности в ткани почек, эритроцитов и головном мозге.
Уровень каталазы в различных органах на 10 день холестаза
145% 150%
ткань почки эритроциты ткань головного
мозга
■Ложнооперированные ОХолестаз
Рис. 6. Влияние холестаза на уровень каталазы в ткани почек, эритроцитов и головном мозге.
При оценке показателей обмена глутатиона были получены данные, что параллельно с активацией свободно-радикального окисления, угнетаются все звенья обмена глутатиона в ткани почек и эритроцитах. В ткани почек и эритроцитах достоверно снизились уровни восстановленного глутатиона и сульфгидрильных групп белков, также снизился уровень ферментов глута-тионового редокс-цикла -глутатиопероксидазы, глутатиоредуктазы и глюта-тион-8-трансферазы.
Показатели обмена глутатиона в мозговой ткани отличались от показателей обмена в тканях почек и эритроцитов. В мозговой ткани при холеста-зе отмечалось снижение уровня восстановленного глутатиона в 1,2 раза и его
уровень составил 2,17±0,03 мкмоль/г ткани (2,61±0,02 мкмоль/г ткани в группе контроля). Уровень SH-групп белков также снизился в 1,14 раза (р=0,0005). Уровень глутатионредуктазы повысился в 1,5 раза, глутатионре-дуктазы в 1,2 раза (р=0,0005). Также в 1,3 раза увеличился уровень глутати-OH-S-трансферазы (р=0,0005).
Таким образом, при 10-дневном холестазе происходит активация показателей свободно-радикального окисления и угнетение всех исследованных звеньев антиоксидантной защиты в ткани почек и эритроцитах экспериментальных животных, за исключением каталазы. Показатели свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты в ткани головного мозга отличались от данных, полученных в других изученных органах. Это проявлялось в умеренном повышении показателей ПОЛ, незначительном снижении уровня восстановленного глутатиона и сульфгидрильных групп белков и повышении показателей ферментов глутатионового редокс-цикла, в отличие от других органов, где эти показатели, напротив, снизились. По-видимому, обнаруженные изменения связаны с особенностями антиоксидантной защиты головного мозга. Одним из объяснений таких особенностей анитиоксдантной защиты является наличие гематоэнцефалического барьера, который снижает интенсивность прооксидантного воздействия желчных кислот и эндотоксинов на ткани головного мозга (Chroni Е et al., 2006). Возможно именно поэтому, в мозговой ткани исходно снижены содержание восстановленного глутатиона, глутатиопероксидазы и каталазы, относительно их уровней в печени, эритроцитах и почках экспериментальных животных и человека (Дубинина Е.Е.,2009; Alper G et al.. 1998).
При морфологическом исследовании тканей почек и головного мозга были получены данные, что все изменения на фоне 10-дневного холе-стаза носили неспецифический характер и проявлялись в ткани почек в неравномерном полнокровии и отеке стромы; в ткани головного мозга - в пе-рицеллюлярном отеке и неравномерном полнокровии.
Влияние экспериментального лечения на лабораторные показатели, характеризующие функцию печени и морфологическую картину в ткани печени
Ремаксол и S-аденозилметионин оказали умеренное гепатопротек-тивное действие, что выражалось в тенденции снижения уровней показателей пигментного обмена и ферментов, характеризующих холестатическое повреждение печени (общий билирубин и его фракции, ГГТП, ЩФ). Статистически достоверными были только данные о снижении уровня ферментов, характеризующих паренхиматозное повреждение печени (ACT, АЛТ), где оба препарата также оказали однонаправленное и сопоставимое действие. Так, в группах с введением S-аденозилметионина и ремаксола уровни ACT составили 259,7±76,17 МЕ/Л и 296±112,4 МЕ/Л, соответственно (385,73±103,96 МЕ/Л в группе холестаза, р<0,05).
В группах животных, получавших экспериментальное лечение, морфологические изменения в ткани печени не достигли такой развернутой картины, как в группе с холестазом и носили слабо выраженный или умеренный характер, не проявляясь выраженными воспалительными реакциями, нарушениями кровообращения и деструкции печеночной ткани. Эти данные, в сочетании с биохимическими данными, дают основание сделать заключение об умеренном гепатопротективном действии ремаксола и 55— аденозилметионина при экспериментальном холестазе.
Влияние экспериментального лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в ткани печени
На фоне 10 дневного введения ремаксола и Б-аденозилметионина были получены данные, что оба препарата оказали схожее действие на показатели свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты в тканях печени. На фоне их введения снизился активность перекисного окисления липидов, достоверно повысился уровень каталазы, причем действие обоих препаратов было однонаправленным и сопоставимым между собой. Б-аденозилметионин и ремаксол активизировали редокс-систему глутатиона, в которой достоверно повысились все изучаемые показатели (глутатионредук-таза, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа) и стимулировали выработку глутати-он-зависимых антиоксидантных ферментов: глутатионпероксидазу и глута-тиотрансферазу.
Влияние экспериментального лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в тканях почек, эритроцитах и головном мозге
При экспериментальном лечении в тканях почек, эритроцитах и головном мозге уровень показателей перекисного окисления липидов достоверно снижался. Кроме того, достоверно повышался уровень каталазы и общая антиокислительная активность в почечной ткани и эритроцитах (табл.1).
При оценке влияния препаратов на показатели обмена глутатиона в ткани почек и эритроцитов установлено, что оба препарата оказали однонаправленное и статистически достоверное увеличение всех показателей обмена глутатиона (восстановленного глутатиона, глутатионредуктазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы глутатионпероксидазы и глутатион-5-трансферазы).
Показатели свободно-радикального окисления и антиоксидантной активности в мозговой ткани отличались от показателей, полученных в других изучаемых органах на фоне экспериментального лечения. Так, уровень каталазы и общей антиокислительной активности в ткани головного мозга экспериментальных животных снижался по сравнению с группой холестаза.
Уровни восстановленного глутатиона, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и сульфгидрильных групп белков достоверно повысились. Однако, не отмечалось статистически достоверного антиоксидантного воздействия на показатели глутатионового редокс-цикла -
глутатионредуктазу и глутатионпероксидазу, так же как и на уровень глута-тион-Б-трансферазы, что возможно связано с низким исходным содержанием уровней этих ферментов в головном мозге крыс (Дубинина Е.Е., 2009).
Таблица 1
Некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в различных тканях
Показатель Холестаз 8-аденозилметионин Ремаксол
Почки (нмоль/г ткани)
МДА 178,11±4,66 186,51±5,38 166.58±7,03
ОАА 40,76±2,38 42,92±2,67 55,92±2,15
Каталаза 646,40±15,60 672,76± 15,91 745,90± 16,35
Восстановленный глу-татион 5,51±0,25 5,18±0,23 6,88±0,29
Эритроциты (мкмоль/г гемоглобина)
МДА 12,78±1,58 7,29±0,94 8,95±0,81
ОАА 24,46±2,26 36,25±1,11 35,42±1,18
Каталаза 29,40±2,99 43,73±1,44 37,59±1,09
Восстановленный глу-татион 3,63±0,35 5,17±0,36 4,56±0,61
Головной мозг (нмоль/г ткани)
МДА 154,58±5,29 148,22±2,50 148,22±2,50
ОАА 39,26±1,67 32,80±1,98 32,10±1,44
Каталаза 14,74±0,76 11,85±0,39 10,91±0,69
Восстановленный глу-татнон 2,17±0,03 2,42±0,03 2.54±0,03
Примечание. Различия между группой с холестазом и с каждой из групп, с введением 5-аденозилметионина иремаксола - достоверны (р<0,05).
Таким образом, экспериментальный холестаз сопровождается активацией процессов перекисного окисления липидов, как в ткани печени, так и в других органах - в ткани почек, головного мозга и эритроцитах, что говорит о системном воздействии свободнорадикального окисления на различные органы. Инфузионные гепатопротекторы ремаксол и Б-аденозилметионин обладают не только гепатопротективными свойствами на показатели, характеризующие функцию печени, но также оказывают влияние на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в других органах и системах.
Выводы.
1. Экспериментальный острый холестаз сопровождается достоверным повышением концентрации промежуточных и конечных продуктов перекисного окисления липидов (диеновые коньюгаты, малоновый диальдегид) в тканях печени, почек, головном мозге и эритроцитах, что подтверждает развитие системного оксидативного стресса при данной патологии.
2. У крыс с холестазом в тканях печени, почек, головном мозге и эритроцитах отмечается снижение уровня общей антиокислительной активности, восстановленного глутатиона и угнетение активности ферментов обмена глута-тиона (глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, глутатион-Б-трансфераза), что приводит к достоверному снижению антиоксидантной защиты.
3.Содержание каталазы в печени крыс при экспериментальном холестазе снижается, в то время как в ткани почек, головном мозге и эритроцитов увеличивается, что можно рассматривать как компенсаторную реакцию на активацию свободнорадикального повреждения.
4. Внутривенное введение 5-аденозилметионина (10 мг/кг) и ремаксола (10 мл/кг) в течение 10 дней приводит к уменьшению повреждения печени при экспериментальном холестазе, что подтверждается данными биохимического и морфологического исследований, и свидетельствует об гепатопротектив-ном действии этих препаратов.
5. Лечение крыс с холестазом внутривенным введением ремаксола и 8-аденозилметионина сопровождается уменьшением показателей свободнорадикального повреждения и активацией каталазы и антиоксидантных ферментов системы глутатиона (глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и глу-татион-Б-трансферазы) в тканях печени, почек, эритроцитах и головном мозге.
Практические рекомендации
1. Обтурационный холестаз сопровождается достоверным повышением продуктов свободнорадикального окисления и угнетением факторов антиоксидантной защиты, что способствует дополнительному повреждению печени и других органов, и необходимо учитывать в клинической практике.
2. Введение инфузионных гепатопротекторов Ремаксола и 5-аденозилметионина снижает активность свободнорадикального повреждения и активирует антиоксидантные ферменты системы глутатиона в тканях печени, почек, эритроцитах и головном мозге, что может учитываться при назначении этих препаратов пациентам с заболеваниями желчевыводящих путей.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Смирнова Н.Г. Влияние инфузионного гепатопротектора ремаксол на функцию печени крыс на модели обтурационной желтухи / Н.Г.Смирнова, С.Г. Чефу, АЛ. Коваленко, Т.Д.Власов // Экспериментальная и клиническая фармакология.-2010.-Том 73 № 9 С.24-27.
2. Смирнова Н.Г. Влияние инфузионных гепатопротекторов на функциональное состояние печени при экспериментальном холестазе. / Н.Г. Смирнова, С.Г Чефу, А.Л. Коваленко, О.Д. Ягмуров, Т.Д.Власов// Хирургия. Журнал им.Н.И. Пирогова.-2010.-№ 10 С.83-88.
3. Смирнова Н.Г. Состояние свободнорадикального окисления и анти-оксидантной защиты при экспериментальной холестазе/ Н.Г. Смирнова, С.Г Чефу, А.Л. Коваленко, P.A. Грашин, Т.Д.Власов// Хирургия. Журнал им.Н.И. Пирогова.-2011.-№ 3 С.50-55.
4. Смирнова Н.Г. Влияние инфузионных гепатопротекторов на функциональное состояние печени при экспериментальном холестазе /Н.Г. Смирнова, С.Г Чефу, А.Л. Коваленко, Т.Д.Власов. / Материалы Всеросийского форума «Пироговская хирургическая неделя», г. Санкт-петербург, 24-28 ноября 2010 - СПб, Издательство СПбГМУ, 2010. С. 289-290.
5. Смирнова Н.Г. Влияние инфузионного гепатопротектора ремаксол на функцию печени крыс на модели обтурационной желтухи./ Н.Г. Смирнова, С.Г Чефу, А.Л. Коваленко, Т.Д.Власов. Материалы всероссийской конференции с международным участием "Актуальные вопросы неотложной хирургической гастроэнтерологии"г. Геленджик., 2010 // Вестник Хирургической Гастроэнтерологии. - 2010,- №3. С115.
Список основных обозначений и сокращений
АЛТ- аланинаминотрансфераза
АСТ - аспартатаминотрансфераза
ВГ - восстановленный глутатион
ГГТП- гамма-глютамилтранспептидаза
Гл-бф-ДГ - глюкозо-бф-дегидрогеназа
ГП - глутатионпероксидаза
ГР - глутатингедуктаза
ГБТ - глутатион-Б-трансфераза
ДК - диеновые коньюгаты
МД - малоновый диальдегид
НАДФ- никотинамидадениндинуклеотидфосфат
ОАА общая антиокислительная активность
ПОЛ - перекисное окисление липидов
Подписано в печать 16.09.11 Формат 60х84'/16 Цифровая Печ. л. 1.5 Уч.-изд. л. 1.5 Тираж 100 Заказ 11/09 печать
Отпечатано в типографии «Фалкон Принт» (197101, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Пушкарская, д. 54, офис 8)
Оглавление диссертации Смирнова, Наталья Геннадьевна :: 2011 :: Санкт-Петербург
Список сокращений.
Введение.
Глава 1 Литературный обзор.11'
С 1.1. Анализ заболеваемости и смертности при обструктивном холестазе.
1.2 Изменение лабораторных показателей при холестазе.
1.2.1 Динамика показателей пигментного обмена при холестазе
1.2.2 Динамика биохимических показателей, отражающих холестатическое повреждение печени при холестазе.
1.2.3 Динамика биохимических показателей, отражающих паренхиматозное повреждение печени при-холестазе.
1.2.4 Динамика биохимических показателей отражающие белоксинтезирующую функцию печени при холестазе.
1.2.5* Особенности метаболизма желчных кислот при холестазе. 21 1.2.6. Показатели, отражающие состояние антиоксидантной и прооксидантной системы при холестазе.
1.3. Морфологические изменений при холестазе.
1.4. Системное влияние холестаза на различные органы и системы.
1.5. Современные способы лечения механической желтухи.
Глава 2 Материалы и1 методы.
2.1. Характеристика животных.
2.2. Общая характеристика эксперимента1.
2.3. Введение препаратов- исследования лабораторным животным.
2.4. Экспериментальная модель.
2.5. Лабораторные исследования.
2.5:1. Оценка биохимических показателей сыворотки крови.
2.5.2. Получение образцов крови и тканей для экспериментальных исследований.
2.5.3. Определение общей антиокислительной активности.
2.5.4. Определение концентрации восстановленного глутатиона.
2.5.5. Определение концентрации сульфгидрильных групп белков
2.5.6. Определение активности глутатионпероксидазы (КФ 1.11.1.9).
2.5.7. Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2)
2.5.8. Определение активности глутатион-8-трансферазы (КФ 2.5.1.18).
2.5.9. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (КФ 1.1.1.49.).
2.5.10. Определение активности каталазы.
2.5.11. Определение концентрации диеновых конъюгатов.
2.5.12. Определение концентрации малонового диальдегида.
2.6. Патоморфологическое исследование.
2.7. Статистическая обработка результатов.
Глава 3 Результаты.
3.1. Характеристика модели и динамика состояния животных на
7 и 14 дни холестаза.
3.1.1 Влияние холестаза на состояние животных.
3.1.2. Лабораторные показатели при экспериментальном холестазе 62 3.1.3: Влияние холестаза на морфологическую1 картину тканипечени крыс.
Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной защиты печени, крыс при экспериментальном холестазе.
3.2.1 Влияние холестаза на показатели перекисного окислениялипидов в ткани« печени крыс.
3.2.2. Влияние холестаза на показатели1 антиоксидантной активности в ткани печени крыс.
3.3. Влияние холестаза на функцию почек.
3.3.1 Влияние холестаза на азотвыделительную функцию почек
3.3.2 Влияние холестаза на морфологическую картину ткани почек крыс.
3.3.3. Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной защиты почек крыс при экспериментальном холестазе. 'у
3.4. Влияние холестаза на состояние эритроцитов.
3.4.1. Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной защиты эритроцитов крыс при экспериментальном холестазе
3.5 Влияние холестаза на ткань головного мозга.
3.5.1. Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной защиты головного мозга крыс при экспериментальном холестазе.
3.5.2 Влияние холестаза на морфологическую картину ткани головного мозга крыс.
3.6. Влияния экспериментального лечения 8аденозилметионином и ремаксолом крыс с холестазом
3.6.1. Влияния экспериментального лечения на лабораторные показатели, характеризующие функцию печени и степень ее повреждения.
3.6.2. Влияние экспериментального лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в ткани печени крыс.
3.6.3 Влияние экспериментального лечения на морфологическую картину ткани печени крыс.
3.6.4. Влияние экспериментального лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в тканях почек, эритроцитах и головном мозге
3.6.4. Влияние экспериментального лечения на морфологическую картину в тканях почек и головного мозга
Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Смирнова, Наталья Геннадьевна, автореферат
Актуальность исследования. Синдром внепеченочного холестаза развивается при целом ряде заболеваний гепатобилиарной области. В его основе лежит нарушение оттока желчи, связанное с механической обтурацией внепеченочных желчных протоков (Шерлок Ш.,1999; Иванченкова Р.А., 2006).
Наиболее часто внепеченочный холестаз развивается на фоне желчнокаменной болезни' (Борисов А.Е. и соавт., 2003; Савельев B.C. и соавт., 2003; Красильников Д.М. и соавт., 2008)., которая является самой распространенной причиной госпитализации* в клинике хирургических болезней (Rosenmiiller М. et al., 2007). Кроме того, внепеченочный холестаз возникает при таких онкологических заболеваниях как рак поджелудочной железы, желчного пузыря и внепеченочных желчных протоков, которые суммарно составляют 15% всех злокачественных новообразований' (Долгушин Б.И., Косырев В.Ю., 2004., O'Brien К. et.al, 2003).
Летальность пациентов с механическими желтухами по настоящее время- остается высокой, и по данным разных авторов составляет 9-35% (Борисов А.Е и соавт., 2003; Dixon J.M. et al., 1984; HanX.C. et al., 2003).
Основными осложнениями, являющимися причиной- летальности при механической желтухе являются* почечная недостаточность, инфекционные осложнения, желудочно-кишечные кровотечения (Dixon J.M. et al., 1984; Han X.C. et al., 2003; Keighley M.R. et al., 1984 и Mishra D. et al. 2007), и, по данным Борисова А.Е. и соавт., (2003) - печеночная недостаточность вследствие развития токсического гепатита.
Основным методом лечения при механической желтухе остается оперативное, которое сегодня проводится как традиционным способом, так и с помощью эндоскопических и эндовидеохирургических методик (Борисов А.Е и соавт., 2003; Gergely МД986; Mishra D. et al. 2007). Однако для уменьшения количества интраоперационных осложнений механической желтухи в клинике также проводится и консервативное лечение (Dawson J.L. et al. 1968; Юдин А.А., 2010; Болевич С.Б., 2010). Одним из направлений консервативной терапии может являться использование гепатопротекторов. Их применение при обтурационной механической желтухе изучено недостаточно, особенно при сохраняющемся нарушении оттока ж елчи. В то же время использование данных препаратов может быть перспективным для профилактики повреждения печени и других органов при механической желтухе.
На сегодняшний день свободнорадикальное окисление клеточных структур при обструктивном холестазе остается мало изученным вопросом, хотя по мнению Dirlik М. и соавт. 2009 именно свободнорадикальное окисление является одним из главных механизмов повреждения при данном заболевании. По мнению Chroni Е. И и соавт. (2006), Konstantinou D. и соавт. (2008) можно говорить о развитии глубоких нарушений как систем свободнорадикального окисления, так и антиоксидантной защиты при остром и хроническом обтурационном холестазе. Однако- многие вопросы, касающиеся данного направления исследований, остаются неизученными. В> частности, несмотря на подтвержденные антиоксидантные свойства S-аденозилметионина и ремаксола (Яковлев А.Ю. и соавт., 2010; Gonzalez-Correa J.A. et al., 1997) эффективность применения этих гепатопротекторов при обтурационном холестазе и их влияние на процессы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при данной патологии изучены недостаточно. Рассмотрение этих вопросов может быть перспективным для расширения представления о механизмах повреждения при холестазе и способах коррекции его осложнений.
Цель исследования: изучить особенности свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в различных органах на модели экспериментальной обтурационной механической желтухи у крыс.
Задачи исследования
1. Исследовать показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в ткани печени экспериментальных животных с холестазом.
2. Оценить системное влияние холестаза на состояние свободнорадикального окисления и некоторых показателей антиоксидантной защиты в почках, головном мозге и эритроцитах у экспериментальных животных.
3. Выявить особенности патоморфологических изменений в печени и некоторых отдаленных органах экспериментальных животных при экспериментальномхолестазе.
4. Определить эффективность инфузионных препаратов - ремаксола и Б— аденозилметионина как гепатопротекторов при экспериментальном холестазе у крыс.
5. Изучить состояние антиоксидантной защиты и показателей свободнорадикального окисления в печени, почках, головном мозге и эритроцитах при экспериментальном лечении холестаза инфузионными гепатопротекторами.
Положения, выносимые на защиту
1. Нарушение оттока желчи сопровождается выраженной активацией свободнорадикального окисления и угнетением показателей антиоксидантной защиты в ткани печени, что имеет значение в патогенезе ее холестатического повреждения.
2. При экспериментальном холестазе происходит активация свободнорадикального повреждения на системном уровне в тканях других органов, причем на фоне угнетения антиоксидантных ферментов системы глутатиона и некоторых других компонентов антиоксидантной защиты происходит компенсаторная активация каталазы.
3. Внутривенное введение препаратов Ремаксол и 8-аденозилметионин при экспериментальном холестазе у крыс сопровождается гепатопротективным действием и оказывает корректирующее влияние на состояние свободнорадикального- повреждения и антиоксидантную защиту на системном уровне
Научная новизна исследования
1. Впервые выполнено комплексное- исследование процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при экспериментальном холестазе с одновременной1 оценкой биохимических и морфологических показателей в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах и показано; что оксидативное повреждение и нарушение антиоксидантной защиты при холестазе носят системный характер.
2. Впервые показано, что использование в лечении экспериментальных животных препаратов Э-аденозилметионина и ремаксола приводит к снижению уровня первичных И- вторичных продуктов перекисного окисления липидов в различных органах, а также активации каталазы и системы обмена глутатиона — глутатионредуктазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и глутатион-зависимых антиоксидантных ферментов - глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы.
Научно-практическое значение работы
Данные, полученные в исследовании, расширяют современные представления о значении свободнорадикального^ окисления в патогенезе обтурационного холестаза, а также о роли свободнорадикального окисления в повреждении различных органов при данной патологии. Полученные данные об эффективности влияния инфузионных гепатопротекторов ремаксола и 8-аденозилметионина на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты позволяют рассматривать данные препараты как возможные средства патогенетической терапии, воздействующие на процессы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при обтурационной механической желтухе.
Полнота изложения материалов в работах, опубликованных соискателем
Основное содержание диссертационной работы отражено в 3-х статьях в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертационных исследований (список публикаций в журналах, рекомендованных ВАК РФ).
Результаты исследования доложены на Всероссийской конференции с между народ ным участием "Актуальные вопросы неотложной хирургической гастроэнтерологии" 1—7 ноября 2010 года в Геленджике, Всеросийском форуме «Пироговская хирургическая неделя» в г. Санкт-Петербург 24-28 ноября 2010 года и на Научно-практической конференции «Актуальные проблемы гастроэнтерологии» 10 декабря 2010 в г. Москва.
Благодарность
Автор благодарит доцента кафедры биохимии и лабораторной диагностики Военно-медицинской академии Грашина Романа Ариковича за помощь в проведении лабораторных исследований показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности.
Заключение диссертационного исследования на тему "Характеристика компонентов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в различных тканях при обтурационной механической желтухе (экспериментальное исследование)"
Выводы.
1. Экспериментальный острый холестаз сопровождается достоверным повышением концентрации промежуточных и конечных продуктов перекисного окисления липидов (диеновые коньюгаты, малоновый диальдегид) в тканях печени, почек, головном мозге и эритроцитах, что подтверждает развитие системного оксидативного стресса при данной патологии.
2. У крыс с холестазом в тканях печени, почек, головном мозге и эритроцитах отмечается снижение уровня общей антиокислительной активности, восстановленного глутатиона и угнетение активности ферментов обмена глутатиона (глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, глутатион-Б-трансфераза), что приводит к достоверному снижению антиоксидантной защиты.
3.Содержание каталазы в печени крыс при экспериментальном холестазе снижается, в то время как в ткани почек, головном мозге и эритроцитов увеличивается, что можно рассматривать как компенсаторную реакцию на I активацию свободнорадикального повреждения.
4. Внутривенное введение 8-аденозилметионина (10 мг/кг) и ремаксола (10 мл/кг) в течение 10 дней приводит к уменьшению повреждения печени при экспериментальном холестазе, что подтверждается данными биохимического и морфологического исследований, и свидетельствует об гепатопротективном действии этих препаратов.
5. Лечение крыс с холестазом внутривенным введением ремаксола и 8-аденозилметионина сопровождается уменьшением показателей свободнорадикального повреждения и активацией каталазы и антиоксидантных ферментов системы глутатиона (глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы) в тканях печени, почек, эритроцитах и головном мозге.
Практические рекомендации
1. Обтурационный холестаз сопровождается достоверным повышением продуктов свободнорадикального окисления и угнетением факторов антиоксидантной защиты, что способствует дополнительному повреждению печени и других органов, и необходимо учитывать в клинической практике.
2. Введение инфузионных гепатопротекторов Ремаксола и 8-аденозилметионина снижает активность свободнорадикального повреждения и активирует антиоксидантные ферменты системы глутатиона в тканях печени, почек, эритроцитах и головном мозге, что может учитываться при назначении этих препаратов пациентам с заболеваниями желчевыводящих путей.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Смирнова, Наталья Геннадьевна
1. Беляев А.Н. Эффективность внутрипортальных инфузий мексидола при лечении механической желтухи // Хирургия. Журнал им. Пирогова—2009.—№ 9.- С. 66-69.
2. Борисов А.Е.Руководство по хирургии печени и желчевыводящих путей // Санкт-Петербург, Скифия, 2003.- Т.2.- С. 20-37.
3. Болевич С.Б., Ступин В. А. и соавт., Особенности течения свободнорадикальных процессов у больных с механической желтухой и методы их коррекции // Хирургия. Журнал им. Пирогова. — М:Медицина.— 2010.-№7. С.66-70.
4. Беляков Н.А., Семесько С.Г. Антиоксидантная активность биологических жидкостей человека: методология и клиническое значение. Эфферентная терапия, 2005, т.11, 1:5-21.
5. Владимиров Ю.А., Проскурина Е.В. Свободные радикалы и клеточная люминесценция// Успехи биологической химии., М:Медицина- 2009, т.49. С.341-388
6. Власов А.П., Крылов В.Г., и соавт. Коррекция синдрома эндогенной интоксикации при остром панкреатите // Журнал им. Пирогова М:Медицина.— 20 Ю.-№5 .-60-64.
7. Долгушин Б.И., Косырев В.Ю. Комплексная диагностика опухолей билиопанкреатодуоденальной зоны //Практическая онкология.— М:Медицина.-2004,- Т.5-С.277-284.
8. Дубинина Е.Е., Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток/ СПб: Медицинская пресса 2009. -С.24-33.
9. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р. Измерение диеновых коньюгатов в плазме крови по УФ-поглащению гептановых и изопреналовых экстрактов // Лаб. Дело. -1988.-№2.-С.60-64.
10. Иванченкова P.A. Хронические заболевания желчевыводящих путей, М: Атмосфера 2006.-С. 9-54.
11. Коваленко A.JI. Фармакологическая активность оригинальных лекарственных препаратов на основе 1 -дсзокси-1 (N-метил aMHHo)-D-глюцитола: Автореф. дис. . д-ра биол. наук.- СПб., 2005 С.33-46.
12. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк // Лаб.дело. -1988.- № 1.- С.16-19.
13. Красильников Д.М., Фаррахов А.З., Хайруллин И.И., Маврин М.И. Ранние послеоперационные осложнения у больных калькулезным холециститом и холедохолитиазом// Казань ¡Медицина 2008.-С.26-36.
14. Кулинский В.И. Обмен глутатиона / Успехи биологической химии.-1990. -Т. 31.-С.157-179.
15. Назаренко Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований // М:Медицина 2006.-С. 158-164.
16. Путилина Ф.Е., Галкина О.В. Свободнорадикальное окисление, СПб: С. Петербургский университет.- 2007.-С. 82-92.
17. Савельев B.C. 50 лекций по хирургии. М: Медиа Медика.-2003.-С. 196204.
18. Сологуб Т.В. и соавт., Гепатопротективная активность ремаксола при хронических поражениях печени // Клиническая медицина 2010.-№1.-С. 62-66.
19. Спектор, Е.Б. Метод определения антиокислительной активности сыворотки крови/Е.Б. Спектор, A.A. Ананенко, A.A. Политова// Лаб.дело-1984-№1- С.26-28.
20. Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот // Современные методы в биохимии — М: Медицина.-1977.-С.63-64.
21. Суханов Д.С, Саватеева Т.Н., Антиоксидантная активность ремаксола на модели лекарственного поражения печени //Вестник Санкт-Петербургской государственной академии им. И.И. Мечникова —2008—№4. -С. 127-131.
22. Ш. Шерлок, Дж. Дули, Заболевания печени и желчевыводящих путей // М:ГЭОТАР—1999. -С.424-465.
23. Филиппов В.А. и соавт. Экстрокорпоральная антибиотикрпрофилактика инфекционных осложнений после холецистэктомии у больных с желчекаменной болезнью пожилого и старческого возраста // Эфферентная терапия.-2007.-№ 13 (4).-С. 21-27.
24. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н., Афанасьева Г.А. Возможности эффективного использования антиоксидантов и антигипоксантов в экспериментальной* и клинической медицине //Успехи современного естествознания 2006. —№8 - С. 18-25.
25. Юдин А.А., Беляев А.Н., Патогенетичнская коррекция почечной недостаточности при остром обтурационном холестазе // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. -2010.-№ 2 (14).-С.22-30.
26. Яковлев- А.Ю^ и соавт. Инфузионная терапия* больных с желчекаменной болезнью, осложненной механической желтухой// Хирургия. Журнал им. Пирогова. -М:Медицина-2010.-№ 12. -С. 82-86.
27. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (эволюционные, экологические и медико-биологические аспекты). — СПб: Игра.-2000.-С. 157-187.
28. Abdeldayem H, Ghoneim E, Refaei AA, Abou-Gabal A., Obstructive jaundice promotes intestinal-barrier dysfunction and bacterial translocation: experimental stud // Hepatol Int. -2007.—Vol 1 № 4.-P. 444-448.
29. Aller MA, Duran M, Ortega L, Arias JL, Nava MP, Prieto I, Arias J., Comparative study of macro- and microsurgical extrahepatic cholestasis in the rat.// Microsurgery. -2004-Vol. 24 №6. -P.442-447.
30. Aller MA, Nava MP, Cuellar C, Chivato T, Arias JL, Sanchez-Patan F, de Vicente F, Alvarez E, Arias J., Evolutive phases of experimental prehepatic portal hypertension// J Gastroenterol Hepatol-2007- Vol.22 №7.-P. 1127-1133.
31. Aller MA, Arias JL, García-Domínguez J, Arias JI, Durán M, Arias J., Experimental obstructive cholestasis: the wound-like inflammatory liver response, //Fibrogenesis Tissue Repair. -2008 № 3 (1). P. 6-8.
32. Alper G, Cmar GM, Can C, Mente? G, Ersöz B, Evin? A. The Effects of Vitamin E on Catalase Activities in Various Rat Tissues //Tr J. Medical Sciences.-1998.-Vol 28.-P. 127-131.
33. Amaral JD, Viana RJ, Ramalho RM, Steer CJ, Rodrigues CM., Bile acids: regulation of apoptosis by ursodeoxycholic acid// Lipid Res 2009 - Vol 50 №9. — P.1721-1734.
34. Arthur J.D.R. Management gallstone disease in the elderly // Ann R Surg Engl.-Vol 85. -P.91-96.
35. Avila MA, García-Trevijano ER, Martínez-Chantar ML, Latasa MU, Pérez-Mato I, Martinez-Cruz LA, del Pino MM, Corrales FJ, Mato JM. S
36. Adenosylmethionine revisited: its essential role in the regulation of liver function // Alcohol.-2002.-Vol'27.-P: 163-167.40; Balkan J, Dogru-Abbasoglu S, Kanbagli O, Cevikba§ U, Aykacp-Toker G, Uysal M. //Hum Exp Toxicol. -2001.- Vol 20 №5. -P.251-254.
37. Bellomo G. Modulation of cellular glutation depletion and protein/thiol status during quinine metabolism // Meyh. Enzimol. -1990-Vol. 186. -P.627-635.
38. Bhandari Mayank , Toouli James, Preoperative biliary drainage (stenting) for treatment of obstructive jaundice // IIPB. Oxford. -2006.- Vol 8№ 5-P. 343345. ., ' : ' ■ ;
39. Carlberg 1., Mannervik B. Glutatione reductase // Meth. Enzymol —1985-Vol.l 13.-P.484-490.
40. Cameron JL, Pulaski EJ, Abei T, Iber EL., Metabolism and excretion of bilirubin-C14 in experimental obstructive jaundice // nn Surg.— 1966—Vol/ 3. —P. 330-338; ■
41. Cao C, Leng Y, Kufe D., Catalase activity is regulated by c-Abl and Arg in the oxidative stress response;// J Biol Chem. -2003,- Vol. 8. № 32.—P. 2966729675/
42. Clarke DL, Pillay Y, Anderson F, Thomson SR., The Current Standard of Care in the Periprocedural Management of the Patient with Obstructive Jaundice // AiurR Coll Surg Engl. -2006.- Vol 88 №7 p 610-616.
43. Conolly W.B, Beizer FO, Dunphy JE, Studies in obstructive jaundice // Gut. 1969.-Vol 10. №8. -P.623-627.
44. Clements W.D., McCaigue M, Erwin P, Halliday I, Rowlands BJ; Biliary decompression promotes Kupffer cell recovery in obstructive jaundice // Gut. — 1996. Vol 38. №6. -P.925-931.
45. Dancygier H:, Clinical Hepatology // Springer-Verlag-Berlin Heideberg.— 2010. -P.,103-117.
46. Dawson J.L., Acute post-operative renal failure in obstructive jaundice / Ann1. R Coll Surg Engl. -1968. Vol 42№ 3. -P.163-81
47. Dawson J.L., The etiology and prevention of acute renal failure in surgical patients // Proc R Soc Med. -1968.- Vol- 61. -P. 1163-1165.
48. Diaz Belmont A, Dominguez Henkel R, Uribe Ancira F., Parenteral S-adenosylmethionine compared to placebos in ■ the treatment of alcoholic liver diseases // An MedTnterna. -1996. №13. -P.9-15.
49. Dirlik M., Canbaz H., Dü§mez A. D., Caglikülek«^ M., Yaylak F., Balli E., Tamer L., Kanik A., Aydin S., The monitoring of progress in apoptosis of liver cells in bile duct-ligated rats //Turk J Gastroenterol. -2009. Vol 20 №4.247-256.'
50. Dixon J.M., Armstrong C.P., Duffy S.W., Davies G.C., Factors affecting morbidity and mortality after surgery for obstructive jaundice: a review of 373 patients //Gut. -1983.- №24. -P.845-852.
51. Dixon J.M., Armstrong CP, Duffy SW, Elton RA, Davies GC, Factors affecting mortality and morbidity after surgery for obstructive jaundice // Gut. 1984.-Vol 25. №1. -P.104.
52. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch, Biochem.Biophys-1959-Vol. 8. —№l.-P70-77.
53. Ercin C.N. S., , Zeki Y., Ahmet A., Ahmet S., Gokhan E., Oxidative stress in extrahepatic ncholestasis// Anatol J Cein Investigation 2008.-P. 150-154
54. Esteller A. Hhysiology of bile secretion // World J Gastroenterol.-2007.-Vol.14. №<37. P. 1-7.
55. Fabris C, M Pirisi, M P Panozzo, G Soardo, P Toniutto, V Hocza, and E Bartoli., Intensity of inflammatory damage and serum lipid peroxide concentrations in liver disease, J Clin Pathol. -1993 Vol 4№4. P. 364-367.
56. Forsmark E.F., Pancreatitis and Its Complications //Humana Press Inc.— 2005. -P. 72-93.
57. Galán AI, Muñoz ME, Jiménez R., S-Adenosylmethionine protects against cyclosporin A-induced alterations in rat liver plasma membrane fluidity and functions// J Pharmacol Exp Ther. -1999.-Vol 290 №2.- P.774-81.
58. Gergely M. Does preoperative percutaneous biliary drainage reduce operative risk or increase hospital cost? //Ann Surg. -1986.—Vol 204.№5. P. 614615.
59. Ginés P, Vicente A.,Juan R., Ascites and Renal Dysfunction in Liver Disease//Pathogenesis, Diagnosis, and Treatment-Hardcover.- 2005-P.78-80.
60. Gibelli NE, Tannuri U, de Mello ES, Rodrigues CJ., Bile duct ligation in neonatal rats: is it a valid experimental model for biliary atresia studies? //Pediatr Transplant. -2009.- Vol 13 №1. -P.81-87.
61. Gil B, Casado M, Pajares MA, Boscá L, Mato JM, Martín-Sanz P, Alvarez L. Differential expression pattern of S-adenosylmethionine synthetase isoenzymes during rat liver development // Hepatology. -1996.-№24. -P.876-881
62. Habig W.N., Jakoby W.B. Assay for differentiation of glutathione S-transferases // Meth Enzymol.—1981.—Vol:717. —P. 1—15.
63. Han X.-C. , Jin-Long Li and Gang Han, Surgical mortality in patients with malignant obstructive jaundice: a multivariate discriminant analysis // HBPD In. -t 2003.-№ 2. -P.435-440
64. Halliwell B., Gutteridge J M, Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease //Biochem J. -1984.- Vol 219 №-1.-P. 1-14.
65. Halliwell B., Gutteridge J M. Oxygen radicals and the nervous system // Trends NeuroSc. -1985.- Vol 8. -P.22-26.
66. Halliwell B., Reactive Species and Antioxidants, Redox Biology Is a Fundamental Theme of Aerobic Life // Plant Physiol. -2006 .-Vol 141 №2. -P.312-322.
67. Hansson J A, J Hoevels, G Simert, U Tylen, and J Vang, Clinical aspects of nonsurgical percutaneous transhepatic bile drainage in obstructive lesions of the extrahepatic bile ducts //Ann Surg. -1979 Vol 189 №1. -P. 58-61.
68. Hatfield AR, Tobias R, Terblanche J, Girdwood AH, Fataar S, Harries-Jones R, et al. Preoperative external biliary drainage in obstructive jaundice. A prospective controlled clinical trial // Lancet. —1982. —Vol 2. —P.896-899.
69. He ZJ, Alho H, Harmoinen A, Ahola T, Nordback I., Extrapancreatic organ manifestations in a moderately severe acute pancreatitis model // nt J.Surg Investig. -1999.-Vol 1 №2.-P. 107-111.
70. Hsu S.H., Lu C.L., Chan C.Y., Lin S.H., Chang F.Y., Lee S.D., The effects of ursodeoxycholic acid in patients with severe obstructive jaundice after drainage procedure// Zhonghua Yi Xue Za Zhi (Taipei).- 1997.- Vol 60. №3. P.142-146.
71. Hong Ji-Young, F. Sato, Eisuke,Hiramoto, Keiichi,Nishikawa, Manabu,Inoue, Masayasu , Mechanism of Liver Injury during Obstructive
72. Jaundice: Role of Nitric Oxide, Splenic Cytokines, and Intestinal Flora // J Clin Biochem Nutr. -2007.- Vol 40 №3. -P. 184-193.
73. Huang ZZ, Mao Z, Cai J, Lu SC. Changes in methionine adenosyltransferase during liver regeneration in the rat. Am J Physiol. —1998 — Vol 275. -PI4-21.
74. Huang HC, Wang SS, Lee FY, Chang CC, Chang FY, Lin HC, Hou MC, Lee SD., Vasopressin response and shunting modulation in cirrhotic rats by chronic nitric oxide inhibition // J Gastroenterol Hepatol. -2008 .- Vol 23 №7 — P. 265-269.
75. Johnson. W.R., Shionoya T., Rowntree L.G., Studies in experimental extracorporeal thrombosis in obstructive jaundice and after intravenous administration of bike acid // Exp Med. -192.- Vol 48 №6. -P.871-884.
76. Karadeniz G., Acikgoz S., Tekin IO., Tascylar O., Gun B.D., Comert M., Oxidized low-density-lipoprotein accumulation^ is associated with liver fibrosis in experimental cholestasis// Clinics (Sao Paulo).- 2008.- Vol 63 №4. -P.531-540.
77. Karatepe O., Acet E., Battal M., Adas G., Kemi A., Effects of glutamine and curcumin on bacterial translocation in jaundiced rats //World J Gastroenterol — 2010.-Vol 16.-P.4313-4320.
78. Katsuta Y, Zhang XJ, Ohsuga M, Akimoto T, Komeichi H, Shimizu S, Kato Y, Miyamoto A, Satomura K, Takano T., Arterial hypoxemia and intrapulmonary vasodilatation in rat models of portal hypertension // J Gastroenterol. —2005 Vol 40 №8. -P.811-819.
79. Katz S., Grosfeld J.L., Gross K., Plager D.A., Ross D., Rosenthal R.S., Hull M., Weber T.R., Impaired bacterial clearance and trapping in obstructive jaundice //Ann Surg. -1984,-Vol 199 №1.-P. 14-20.
80. Keighley M. R., Razay G., Fitzgerald M. G., Influence of diabetes on mortality and morbidity following operations for obstructive jaundice // Ann R Coll Surg Engl. -1984 Vol. 66 №1- P. 49-51.
81. Kornberg A. , Horecker B.L., Smyrniot P.Z. // Math. Enzymor.-1955.-Vol. 1. -P.323-327.
82. Kountouras J, Billing BH, Scheuer PJ., Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.//Br J Exp.Pathol. —198. Vol 65 № 3 — P. 305-311.
83. Kucuk C., Sozuer E., Ikizceli I., Avsarogullari L., Keceli M, Akgun H., Muhtaroglu S., Role of oxygen free radical scavengers in acute renal failure complicating obstructive jaundice // Eur Surg Res. -2003.- Vol 35. №3. -P. 143-7.
84. Kucuk C, Ok E, Yilmaz Z, Sozuer E, Muhtaroglu S, Arar M., The effects of dimethylsulfoxide in experimental obstructive jaundice // Acta Chir Belg. -2003.-Vol 103 №4.-P. 392-395.
85. Lu SC., S-Adenosylmethionine //Int J Biochem Cell Biol. -2000 Vol 32 № 4 P. 391-395.
86. Lee TD, Sadda MR, Mendler MH, Bottiglieri T, Kanel G, Mato JM, et al. Abnormal hepatic methionine and glutathione metabolism in patients with alcoholic hepatitis //Alcohol Clin Exp Res. -2004. Vol 28. -P.173-181.
87. Lieber C.S., S-adenosyl-L-methionine: its role in the treatment of liver disorders //Am J Clin Nutr. -2002.- Vol 76 №5- P. 1183-1187.
88. Lin Mu-Sheng, Miao Hui-Lai, Gong Xiao-Guang., Effect of L-arginine on calcium in hepatic mitochondrion in rats with obstructive jaundice// Hepatobiliary Pancret Ds.Int.- 2006. Vol 5.№3. -P. 432-435.
89. Ljubuncic P., Fuhrman B., Oiknine J., Aviram M., Bomzon A. Effect of deoxycholic acid and ursodeoxycholic acid on lipid peroxidation in cultured macrophages // Gut.- 1996.- Vol 39 №3. -P.475-478.
90. Ljubuncic P., Tanne Z., Bomzon A., Evidence of a systemic phenomenon for oxidative stress in cholestatic liver disease//Gut.- 2000. Vol 47. -P.710-716.
91. Martínez-Prieto C, Ortiz MC, Fortepiani LA, Ruiz-Maciá J, Atucha NM, García-Estañ J., Haemodynamic and renal evolution of the bile duct-ligated rat // Clin Sci (Lond). -2000.- Vol 98. №5. -P.611-617.
92. Meyerholz DK, Samuel I., Morphologic characterization of early ligation-induced acute pancreatitis in rats //Am J Surg: —2007. — Vol 194 № 5. P.652-658.
93. Lu SC, Tsukamoto H, Mato JM. Role of abnormal methionine-metabolism in alcoholic liver injury //Alcohol.- 2002. Vol 27.-P155-162.
94. O'Brien K, Cokkinides V, Jemal A, Cardinez CJ, Murray T, Samuels A, Ward E, Thun MJ: Cancer statistics for Hispanics //CA Cancer J: Clin. -2003 Vol 53 №4. -P.208-226.
95. Pain JA, Cahill CJ; Bailey ME. Perioperative complications in obstructive jaundice: therapeutic considerations //Br J Surg. -1985. Vol.72. -P.942-945.
96. Pain J.A., Bailey M.E., Prevention of endotoxaemia in obstructive jaundice— a comparative study of bile salts// HPB Surg. -1988.- Vol 1 №1.- P21-27.
97. Pitt H A., Gomes A. S., et al., Does preoperative percutaneous biliary drainage reduce operative risk or increase hospital cost? //Ann Surg. -1985.—; Vol 201 №5.-P. 545-553.
98. Papapostlou G. I. Time-related alterations of superoxide radical levels in diverse organs of bile duct-ligated rats // Free Radical Research.- 2009. Vol 43 №9. -P.803-808.
99. Parks R.W., Clements W.D., Pope C., Halliday M.I., Rowlands B.J., Diamond T., Bacterial translocation and gut microflora in obstructive jaundice// J Anat. -1996.- Vol 189 № 3. -P.561-565.
100. Perez M. J., Briz O., Bile-acid-induced cell injury and protection //World J Gastroenterol.-2009.- Vol 14. №15.-P. 1677-1689!
101. Pereira R.M., Santos R.A., Oliveira E.A., Leite V.H., Dias F.L., Rezende A.S., Costa L.P., Barcelos L.S., Teixeira M.M. Development of hepatorenal syndrome in bile duct ligated rats// World J Gastroenterol. -2008.- Vol 14. №28 — P.4505-4511.
102. Quraishy MS, Chescoe D, Mullervy J, Coates M, Hinton RH, Bailey ME. Influence of the gut microflora and of biliary constituents! on morphological changes in the small intestine in obstructive jaundice// HPB Surg. -1996. Vol 10. №1. -P. 11-20.
103. Rambaldi A, Gluud C., S-adenosyl-L-methionine for alcoholic liver diseases. Cochrane Database Syst Rev. -2001 Vol 4. -P.22-35.
104. Ricci F, Castaldini G, de Manzoni G, Borzellino G, Rodella L, Kind R, Cordiano C., Treatment of gallstone pancreatitis: six-year experience in a single center // World J Surg.- 2002.- Vol 26 №1. -P85-90.
105. Rodés J., Benhamou J.P., Rizzetto M.: Textbook of hepatology: from basic science to clinical practice, 1, -2007-P. 175-192.
106. Rosen H., Klebanoff S J., Bactericidal activity of a superoxide anion-generating system. A model for the polymorphonuclear leukocyte //J Exp Med. -1979.- Vol 149 №1. -P. 27-39.
107. Rosenmuller M, Haapamâki MM, Nordin P, Stenlund H, Nilsson E., Cholecystectomy in Sweden 2000-2003 : a nationwide study on procedures, patient characteristics, and mortality// BMC Gastroenterol. -2007.- Vol 17№7. -P.35.
108. Salazar-Montes A, Ruiz-Corro L, Lôpez-Reyes A, Castrejôn-Gômez E, Armendâriz-Borunda J*., Potent antioxidant role of pirfenidone in experimental cirrhosis// Eur J Pharmacol-. -2008.- Vol 24'. -P69-77.
109. Samuel I, Yorek MA, Zaheer A, Fisher RA., Bile-pancreatic juice exclusion promotes Akt/NF-kappaB activation and chemokine production in ligation-induced acute pancreatitis// J Gastrointest Surg. -2006.- Vol 10 -№-7P.950-959.
110. Seçkin S, Dogru-Abbasoglu S; Baçaran-Kuçiikgergin C, Yavu E, Cevikbaç U, Aykaç-Toker G, Uysal M. // Res Commun Mol Pathol Pharmacol. -2001. Vol 109 №5. -P.299-308.
111. Shelly C.L., Regulation'of glutathione synthesis // Mol Aspects Med: -2009 Vol 30 №l-2.-P.42-59.
112. Stone H.H., Fabian T.C., Dunlop W.E., Gallstone pancreatitis: biliary tract pathology in relation to time of operation // Ann Surg. -1981 Vol .194 №3.-P.305-312.
113. Tieppo J, Vercelino R, Dias AS, Silva Vaz MF, Silveira TR, Marroni CA, Marroni NP, Henriques JA, Picada JN., Evaluation of the protective effects of quercetindrnthe hepatopulmonary syndrome // Food Chern Toxicol. -2007 Vol. 45 №7. -P. 1140-1116:
114. Yüceyar S., Gümü§ta§ K., Ertürk S., Hamzaoglu I.H., Uygun N., Ayaz M., Cengiz A., Kafadar Y., The role of oxygen free radicals in acute renal failure complicating obstructive jaundice: an experimental study // HPB Surg. —1998 — Vol 10№ 6. -P.387-393.
115. Vercelino R, Tieppo J, Forgiarini Junior LA, Dias AS, Marroni CA, Marroni NP., Experimental models for assessment of pulmonary alterations in hepatopulmonary syndrome// J Bras Pneumol. -2008.- Vol 34 №7. -P.453-460.
116. Wardle EN, Wright NA., Endotoxin and acute renal failure associated with obstructive jaundice// Br Med J. -1970.- №4 P.472-474.
117. Wahbah A.M., el-Heftiy M.O., Wafa E.M., el-Kharbotly W, el-Enin A.A., Zaglol A., Atallah M.M., Perioperative renal protection in patients with obstructive jaundice using drug combinations// Hepatogastroenterology. -2000.- Nov- Vol 47.№36. -P1691-1694.
118. Wait RB, Kahng KU. Renal failure complicating obstructive jaundice //Am J Surg. -1989.-Vol 157. -P256-263.
119. Wang DS, Duo KF, Li KZ, Gao ZQ, Song ZS, Liu SC., Hepatocellular apoptosis after hepatectomy in obstructive jaundice in rats //World J Gastroenterol.- 2003- Vol 9 №12.- P.2737-2741.
120. Wisniewska-Knypl JM, Wroñska-Nofer T., // Int J Occup Med Environ Health. -1994.- Vol 7№4. -P.355-363.