Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая активность растительных сборов с васильком синим

На правах рукописи

Повиляева Елена Александровна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНЫХ СБОРОВ С ВАСИЛЬКОМ СИНИМ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармаколоПОГ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Купавна - 2004

Работа выполнена в Национальном фармацевтическом университете, г. Харьков и Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ, Московская обл., п. Старая Купавна.

Научный руководитель: академик АНТК Украины, заслуженный

деятель науки и техники Украины, доктор фармацевтических наук, профессор Б.А. САМУРА Научный консультант: доктор биологических наук,

профессор В.А. ТРАПКОВ

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Н.Д. БУНЯТЯН доктор биологических наук, В.И. БОБРОВ

Ведущее учреждение: Гематологический научный центр РАМН

Защита диссертации состоится «27» апреля 2004 г. в 10.30 часов на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ, Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ: Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

Автореферат разослан « 25 » марта 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук,

профессор Л.В. Корольченко

Лот з

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Поиск новых лекарственных препаратов, осуществляющих регуляцию нарушенных жизненно важных функций почек, является актуальной задачей современной экспериментальной фармакологии.

Большое значение имеет создание препаратов на основе биологически активных веществ (БАВ), имеющихся в лекарственных растениях. Наличие в растительном сырье БАВ позволяет оказывать комплексное воздействие на организм больного. Лечение различных заболеваний с использованием растительных лекарственных средств характеризуется высокой терапевтической эффективностью, поливалентностью действия и относительно низкими частотой и тяжестью побочных эффектов. Применение лекарственных растений целесообразно при лечении хронических заболеваний, а также для профилактики рецидивов болезни [Т.А. Виноградова и др., 1998; В.Н. Кортиков и др., 1998; Ю.Н. Нуралиев, и др. 1999].

Конец ХХ-ого и начало ХХ1-ого века характеризуется ростом количества нефрологических больных среди взрослого населения. Врачи нефрологического профиля отмечают значительное увеличение числа заболеваний почек на фоне эндокринных, аллергических заболеваний, связанных с алкоголизмом и наркоманией. В клинической медицине применяются такие лекарственные препараты как фуросемид, этакриновая кислота, гипотиазид, диакарб и др. Однако при применении этих средств у больных могут наблюдаться осложнения: уменьшение выведения мочевой кислоты, метаболический алкалоз, гипокалиемия, гиперурикемия, возможны тошнота, гиперемия кожи, зуд, обратимое ухудшение слуха, головокружение и др. [М.Д. Машковский, 2000; Ю.Ф. Крылов, 2003].

При заболеваниях почек и мочевыводящих путей, наряду с производными сульфамоилантраниловой, сульфамоилбензойной и дихлорфеноксиуксусной кислотами, широко применяются лекарственные растения [А.Ю. Нестеровская и др., 1999; С.Я. Соколов, И.П. Замотаев, 2000; П.А. Кьосев, 2001]. Благоприятные терапевтические эффекты, оправдывают интерес к дальнейшему изучению растительных сборов с целью создания на их основе эффективных лекарственных препаратов позволяющих индивидуализировать лечение, получить высокий терапевтический эффект при лечении заболеваний почек [И.Ф. Мамчур, 1991; И.Ф. Остапчук, 1991; Т.Д. Реднюк, 1992; Б.Н. Гажев идр., 1996].

Данная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Национального фармацевтического университета (номер государственной регистрации 0198Ш07011, шифр темы ВН 10.08.0036.99) и целевой программой создания диуретических лекарственных средств.

Цель исследования. Целью настоящего исследования является изучение фармаколоршшшй.. акшшшепц растительных сборов с ИХ., н • . -<■. Би - КА С.

амё!»*:

васильком синим, а также поиск и разработка потенциального диуретического растительного средства.

Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести качественный анализ настоев из 20 растительных сборов с васильком синим. В состав сборов входят также плоды боярышника однопестичного, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, солома овса посевного, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, трава пустырника сердечного, корни пырея ползучего, листья расторопши, трава репяшка обыкновенного, цветки ромашки лекарственной, листья черной смородины, трава хвоща полевого, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной.

2. Провести фармакологический скрининг 20 растительных сборов с васильком синим на выявление диуретической, нейротропной, анальгетической, противовоспалительной, гипотензивной, антиоксидан-тной и антимикробной активностей.

3. Отобрать сбор, обладающий наибольшим диуретическим действием, для проведения углубленного фармакологического исследования.

4. Изучить специфическую фармакологическую активность выбранного потенциального диуретического средства растительного происхождения.

Научная новизна исследования. Изучен химический состав и впервые проведен фармакологический скрининг 20 сборов из лекарственных растений с васильком синим. Впервые в опытах на лабораторных животных исследована зависимость фармакологической активности от состава растительных сборов с васильком синим. Выявлены растительные сборы, обладающие диуретической, депримирующей, психостимулирующей, противосудорожной, анальгетической, противовоспалительной, гипотензивной и антиоксидантной активностями.

Выявлен фармакологически активный растительный сбор №7 (условное название «Васмохвор»), обладающий диуретической активностью. Проведена оценка острой токсичности этого сбора. Впервые показано, что «Васмохвор» обладает высоким зависимым от дозы диуретическим действием и не проявляет ульцерогенного действия.

Практическая значимость работы. В результате проведенного фармакологического скрининга для дальнейшего доклинического изучения отобраны перспективные растительные сборы, обладающие диуретической, противовоспалительной, депримирующей, гипотензивной и антиоксидантной активностями.

Проведено изучение специфической фармакологической активности «Васмохвора», обладающего выраженным диуретическим действием, не вызывающего повреждения слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, что дает основание для дальнейших исследований по разработке и

созданию нового потенциального диуретического препарата растительного происхождения.

Полученные результаты изучения специфической фармакологической активности «Васмохвора» будут использованы при подготовке материалов на новое диуретическое средство растительного происхождения с целью представления в Министерства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

Результаты анализа химического состава и изучения фармакологии-ческой активности исследованных растительных сборов с васильком синим используются в учебном процессе на кафедрах фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, фармакогнозии и ботаники Национального фармацевтического университета, а также кафедрах фармакологии, фармакогнозии с курсом ботаники, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Апробация работы. Отдельные фрагменты работы доложены на научно-практических конференциях молодых ученых Национального фармацевтического университета (Харьков, 2001, 2002, 2003); на Все-украинской научно-практической конференции «Фармация XXI столетия» (Харьков, 2002), на международной научно-практической конференции «Лекарства - человеку» (Харьков 2002, 2003), на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003).

Диссертационная работа доложена на совместном заседании кафедр фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, микробиологии, патологической физиологии, фармакогнозии, ботаники, биохимии, Национального фармацевтического университета (протокол № 10 от 4 декабря 2003 года).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 печатных

работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 25 рисунками. Указатель литературы включает 112 отечественных и 116 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При проведении исследований использовано 1210 животных, в том числе 420 беспородных белых мышей, 760 беспородных белых крыс, 30 беспородных кошек. В соответствии с поставленными задачами нами в качестве объектов исследования были взяты 20 растительных сборов, в состав которых вошли 16 видов растительного сырья в различных пропорциях (табл. 1).

Таблица 1.Состав сборов, приготовленных из лекарственных растений

№ Названия растений Номера сборов и количество сырья из расчета 5г/50 мл настоя

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13 14 15 16 17 18 19 20

1 Боярышник однопестнчный 0,5 - - - 1,0 - - 1,5 0,5 0,5 0,5 - - 0,5 1,0 - - - 0,5 -

2 Василек синий 0,5 1,0 0.5 2,0 0,5 3,0 1,5 0,5 1,0 0,5 1,0 1,5 1.0 0,5 - 1,0 1,0 - 1,0 1,0

3 Календула лекарственная 1,0 0,5 1.0 - 1,0 1.5 - 1.5 1,0 1,0 - - - 1,0 - 0,5 0,5 0,5 - -

4 Кукуруза обыкновенная 1.0 0.5 1,0 0,5 - 0,5 1,0 0,5 0,5 0,5 - 0,5

5 Овес посевной - - - 0,5 - - - - 0.5 - - 1,5 - - - - - 0,5 - 0,5

6 Пастушья сумка 1.0 0,5 0,5 1,0 0,5 1,0 1,5 0,5 0,5 0,5 1,0 0,5

7 Почечный чай 1.0 1,0 - 0,5 - 1.0 - 1.0 - 0,5 - 0,5 - - 0,5 0,5 0,5 - 0,5

8 Пустырник сердечный 0,5 1.5 - - - 1,5 - - - - - - 2,0 - - - 0,5 -

9 Пырей ползучий 0,5 - - - - - 0,5 - - • 1,0 - - - 0,5 0,5 - -

10 Расторопша - - 0,5 - 0,5 - - - 0,5 2,0 - - - 0,5 0,5 0,5 - -

11 Репяшок обыкновенный - - - 0,5 - - - - 0,5 - - - - 0,5 0,5 - - 0,5

12 Ромашка лекарственная 1,0 - 0,5 0,5 1,0 0,5 - 0,5 - 1,0 -

13 Смородина черная - - 0,5 - 0,5 - - - - - - - - - - 0,5 1,0 -

14 Хвощ полевой 0,5 1,0 - 1,0 1,0 - 0,5 - 1,0 - 0,5 1.0 - 0,5 - - - 0,5

15 Череда трсхраздельная 1,0 0,5 - - - 0,5 0,5 0,5 0,5 - 0,5

16 Фасоль обыкновенная - - - - - - - - - 0,5 - - 0,5 - - - 0,5 - 0,5

Все лекарственное растительное сырье было собрано в июне -сентябре 2000-2003 в Харьковской области в период вегетации, когда в них накапливалось максимальное количество действующих биологически активных веществ (БАВ). Собранное сырье высушивали, измельчали и использовали для приготовления настоев из растительных сборов, а также для качественного определения в нем биологически активных веществ.

Наличие алкалоидов в растительном сырье и настоях определяли с помощью реактивов Майера, Вагнера и Бушарда, а также Драгендорфа [Н.И. Гринкевич, J1.H. Сафронич, 1983].

Наличие дубильных веществ определяли реакциями с железо-аммониевыми квасцами и с раствором желатина [Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич, 1983].

Иридоиды выявляли в реакции с реактивом Шталя и в реакции Трим-Хилла [Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич, 1983].

Качественные реакции на кумарины проводили с диазореактивом, а также методом лактонной пробы [Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич, 1983].

Для определения полисахаридов использовали реакции с этиловым спиртом, с ацетоном и с меди сульфатом [Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич, 1983].

Для выявления сапонинов проводили реакцию пенообразования, реакцию с основным ацетатом свинца, а также реакцию с ванилином и концентрированной серной кислотой [Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич, 1983].

Для обнаружения флавоноидов проводили цианидиновуго пробу, а также реакции с хлоридом железа и со щелочью [Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич, 1983].

Первичный фармакологический скрининг исследуемых сборов проведен согласно методическим рекомендациям «Простой и специальный скрининг новых химических веществ» [Ф.П. Тринус, 1985, C.B. Нижний, 1985, H.A. Лопаткин,1995] и «Элементы экспериментальной фармакологии» [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000].

Первичную фармакологическую оценку и изучение острой токсичности проводили на мышах при внутрибрюшинном введении настоев сборов (1:5) в дозе не более 1 мл на 20 г массы животного [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000].

Фармакологическую активность настоев из растительных сборов изучали в опытах на белых крысах. Настои готовили из расчета 1:10 [ГФ XI, 1989].

Исследование нейротропной активности проведено по тесту взаимодействия с барбитуратами и аналептиками. Сон у животных вызывали внутрибрюшинным введением субнаркотических доз этаминал-натрия (30 мг/кг), а клонико-тонические судороги воспроизводили подкожным введением коразола (80 мг/кг), кордиамина (300 мг/кг) и камфоры (1,2 г/кг) [В.В. Гацура, 1974].

Оценку возможного транквилизирующего действия проводили по методике измерения порогов эмоционального реагирования при электроболевом раздражении, вводя изучаемые вещества внутрижелудочно за 30 мин до нанесения электрических стимулов (0,5 мс, 20 Гц, 60 В) [К.С. Раевский, 1976].

Анальгетическую активность настоев исследуемых растительных сборов исследовали на беспородных белых крысах с использованием модели уксусных корчей, вызванных внутрибрюшинным введением 0,75% водного раствора уксусной кислоты [Ф.П. Тринус, 1985].

Противовоспалительную активность изучали на модели острого асептического отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапку крыс 0,1 мл 1% раствора каррагенина [Ф.П. Тринус, 1985].

Определение диуретической активности настоев исследуемых растительных сборов проводили при предварительном внутрижелудочном введении по методу Е.Б. Берхина [1977]. Содержание креатинина в моче измеряли по методу Фолина, а концентрации электролитов - методом пламенной фотометрии на пламенном фотометре «ПАЖ-2» [Е.Б. Берхин, 1972].

Влияние настоев изучаемых растительных сборов на системное артериальное давление (АД) исследовали в острых опытах на наркотизированных этаминалом натрия (50 мг/кг, внутрибрюшинно) кошках при введении в бедренную вену в условиях индуцированного наркоза; для предупреждения свертывания крови внутривенно вводили гепарин из расчета 1000 ЕД/кг [В.В. Гацура, 1974].

Антиоксидантную активность настоев сборов оценивали in vivo по концентрации малонового диальдегида (МДА) в микросомапьной фракции гомогенатов печени крыс. Стимуляцию перекисного окисления липидов (ПОЛ) вызывали внутрибрюшинным введением 25% масляного раствора тетрахлорметана (СС14; 2 мл/кг) [С.М. Дроговоз и др., 1994].

Антимикробную активность настоев сборов исследовали с использованием коллекции индикаторных штаммов микроорганизмов, оценивая минимальную подавляющую концентрацию (МПК) методом двойных серийных разведений в жидкой питательной среде [Д. Панчини, Ф. Паренти, 1985].

Радиоиммунологическое определение простагландина Е2 (ПГЕ2) проводили по методике фирмы «Clinical Assay» (США) с использованием тест-наборов этой фирмы. Экстракцию ПГЕ2 из сыворотки крови осуществляли по методике, предложенной В.М. Jaffe et al. [1973].

Концентрации калликреина и калликреиногена в сыворотке крови крыс определяли по методике, описанной Т.С. Пасхиной и A.B. Кринской [1974], на фоне водной и солевой нагрузок [Е.Б. Берхин, 1977].

Полученные данные обработаны методами вариационной статистики [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000]. Вычисления выполнены на персональном компьютере IBM-AT/PC с использованием программного обеспечения Windows-98, электронных таблиц Excel и пакета математической обработки Mathcad-5,0.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

С целью изучения химического состава лекарственного растительного сырья, взятого для приготовления сборов, были проведены качественные реакции на некоторые группы БАВ, присутствующие в этих растениях.

Наличие дубильных веществ было подтверждено реакциями с желе-зоаммониевыми квасцами и с раствором желатина. Дубильные вещества обнаружены в водных извлечениях из всех видов изучаемого растительного сырья.

Иридоиды были обнаружены с помощью качественных реакций с реактивом Шталя и Трим-Хилла в водных извлечениях из цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пустырника сердечного, цветков ромашки лекарственной, травы хвоща полевого и побегов череды трехраздельной.

Качественная реакция с диазореактивом извлечений из цветков календулы лекарственной, соломы овса посевного, цветков ромашки лекарственной, побегов череды трехраздельной травы и створок стручков фасоли обыкновенной была положительной, что указывало на присутствие в этом растительном сырье кумаринов.

При проведении реакции на слизи наблюдали желтое окрашивание, а ' при выполнении реакции с ацетоном выпадал осадок, что свидетельствовало о наличии полисахаридов в извлечениях из всех видов сырья, кроме листьев расторопши, соломы овса посевного, травы пастушьей сумки, травы хвоща полевого и створок стручков фасоли обыкновенной.

Наличие сапонинов было подтверждено с помощью реакций пенообразования, с основным ацетатом свинца и с ванилином и концентрированной серной кислотой в извлечениях из цветков василька синего, плодов боярышника однопестичного, цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, соломы овса посевного, травы пастушьей сумки, травы пустырника сердечного, листьев и молодых побегов почечного чая и травы хвоща полевого. При проведении реакции пенообразования, в обеих пробирках (как с хлористоводородной кислотой, так и с гидроксидом натрия) наблюдали одинаковое образование пены, что свидетельствовало о наличии тритерпеновых сапонинов в исследуемом растительном сырье.

Для определения флавоноидов в извлечениях из растительного сырья проводили цианидиновую пробу, реакцию со щелочью, реакцию с ванилином и концентрированной хлористоводородной кислотой. Положительные реакции на флавоноиды наблюдались в извлечениях из всех видов исследуемого лекарственного растительного сырья.

Флавоноиды (агликоны) плохо растворимы в воде, тогда как их гликозиды - эфиры с сахарами (глюкозой, галактозой, рамнозой и др.) достаточно растворимы и извлекаются при приготовлении настоев и

отваров. Извлечения из плодов боярышника однопестичного, в реакции с раствором ванилина в концентрированной хлористоводородной кислоте окрашивались в красно-малиновый цвет, что свидетельствует о присутствии катехинов в данных извлечениях.

Таким образом, с помощью проведенных качественных реакций фитохимического изучения в растительном сырье установлено наличие алкалоидов, дубильных веществ, иридоидов, кумаринов, полисахаридов, сапонинов и флавоноидов.

В рамках предпринятых исследований нами было также проведено изучение приготовленных для фармакологического скрининга настоев растительных сборов с васильком синим №1-№20 на наличие некоторых групп БАВ. Для качественного анализа использовали те же реакции, что и для изучения отдельных видов лекарственного растительного сырья. Установлено, что в приготовленных настоях содержатся следующие группы БАВ: флавоноиды, сапонины, дубильные вещества, алкалоиды, кумарины, полисахариды. В сборах № 10, №17 и № 20 отсутствовали полисахариды, в сборах №18 и №20 не были обнаружены алкалоиды, а в сборах №6, №7, №11, №14, №16 и №19 - кумарины.

Полученные результаты анализа растительного сырья и приготовленных настоев растительных сборов соответствуют данным, описанным в литературе.

Оценка острой токсичности растительных сборов показала, что исследованные настои из растительных сборов относятся к практически нетоксичным веществам, так как в максимально возможной исследованной дозе (50 мл/кг) не вызывали гибели опытных животных.

Исследование влияния настоев из растительных сборов с васильком синим на нервную систему показало, что большинство настоев исследуемых растительных сборов №1-№20 проявили синергизм к деприми-рующему действию этаминал-натрия. Наибольший агонистический эффект к действию барбитуратов был обнаружен у настоя сбора №3, который состоит из цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пустырника сердечного и трава хвоща полевого. Настой растительного сбора №3 при внутрижелудочном введении в дозе 2 мл/кг увеличивал продолжительность нахождения крыс в боковом положении на 91,2% (р<0,01). Замена в растительном сборе № 3 цветков календулы лекарственной и столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, на плоды боярышника однопестичного, траву пастушьей сумки и листья смородины черной (сбор №19, 2 мл/кг) приводила к снижению депримирующего эффекта с 91,2% (р<0,01) до 69,8% (р<0,05).

Антагонизм к действию барбитуратов проявили настой сбора №5, состоящий из плодов боярышника однопестичного, цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, травы пастушьей сумки, травы пустырника сердечного, травы репяшков обыкновенных и травы хвоща полевого, а также настой сбора №12 в состав которого входят цветки

»

василька синего, солома овса посевного, листья расторопши и цветки ромашки лекарственной. Эти настои при внутрижелудочном введении в дозе 2 мл/кг существенно уменьшали продолжительность этаминапового сна у крыс.

Изучение противосудорожной активности настоев растительных сборов с васильком синим №1- №20 проведено по тесту взаимодействия с аналептиками. Установлено, что среди изученных сборов наиболее выраженное противосудорожное действие проявил настой сбора №3. Все опытные животные выжили. Противосудорожный эффект этого настоя (2,4 мл/кг) был сравним с настоем травы пустырника (2 мл/кг), но уступал аналогичному действию мидокалма (10 мг/кг) или фенобарбитала (10 мг/кг). Анализ зависимости противосудорожной активности от состава растительных сборов с васильком синим показал, что антиконвульсивное действие проявлялось в тех сборах, куда входили трава пустырника, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной (сборы № 3, №11 и №19). Эти настои оказывали противосудорожное действие в опытах со всеми аналептиками.

Изучение влияния растительных сборов с васильком синим №1-№20 на пороги эмоционального реагирования показало, что наиболее активным оказался настой сбора № 3, который увеличивал порог писка у животных на 56,2% (р<0,05). Исключение из сбора № 3 цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы, травы пустырника сердечного и при добавлении к нему плодов боярышника однопестичного, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, трав репяшка обыкновенного, хвоща полевого, череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной (сбор № И) приводило к уменьшению порога писка - с 56,2% (р<0,05) до 47,1% (р<0,05). При замене в сборе № 11 листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, травы репяшка обыкновенного, травы хвоща полевого, травы череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной травы пустырника сердечного на траву пастушьей сумки, траву пустырника сердечного, цветки ромашки лекарственной и листья смородины черной (сбор № 19) приводило к снижению порога писка крыс - с 47,1% (р<0,05) до 41,3% (р<0,05).

Исследование влияния настоев с васильком синим №1-№20 на порог агрессивности показало, что наиболее активным оказался настой из сбора № 3, который повышал порог агрессивности у животных на 42,8% (р<0,05). Исключение из сбора № 3 цветков календулы "лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы, травы пустырника сердечного и при добавлении к нему плодов боярышника однопестичного, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, травы репяшка обыкновенного, хвоща полевого, череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной (сбор № 11) приводило к уменьшению порога агрессивности - с 42,8% (р<0,05) до 32,6% (р<0,05).

Изучение анальгетической активности настоев растительных сборов с васильком синим №1-№20 на модели уксусных корчей у крыс показало, что большинство этих сборов при внутрижелудочном введении обладали анальгетическим действием. Наиболее высокую анальгетическую активность (39,4%; р<0,05) проявил настой сбора №10, состоящий из плодов боярышника однопестичного, цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, цветков ромашки лекарственной, травы пастушьей сумки, травы репяшка обыкновенного, цветков ромашки лекарственной, побегов череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной. Замена травы пастушьей сумки, цветков ромашки лекарственной, побегов череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной на солому овса посевного, листья и молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и траву хвоща полевого (сбор №9) приводила к снижению анальгетического действия (с 39,4% до 29,8%; р<0,05). Болеутоляющая активность (28,6%; р<0,05) практически не изменялась при замене в растительном сборе №9 цветков календулы лекарственной, соломы овса посевного, корней пырея ползучего на листья расторопши, траву хвоща полевого, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной (сбор № 11).

Исследование противовоспалительной активности на модели каррагенинового отека у крыс показало, что большинство изученных настоев растительных сборов №6-№16 обладали выраженным противовоспалительным действием в пределах от 21,6% (р<0,05) до 41,9% (р<0,05). Наиболее эффективное противовоспалительное действие было выявлено у настоя сбора №9, в состав которого входят плоды боярышника однопестичного, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, солома овса посевного, молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и трава хвоща полевого. Сбор №9 вызывал угнетение отека лапки у крыс на 41,9% (р<0,05). Замена соломы овса посевного, листьев и молодых побегов почечного чая, корней пырея ползучего и травы хвоща полевого в растительном сборе №9 на траву пастушьей сумки, цветки ромашки лекарственной, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной (сбор №10) приводило к снижению антиэкссудативного действия сборов №9 и № 10 [41,9% (р<0,05) и 29,7% (р<0,05) соответственно].

Изучение диуретической активности растительных сборов с васильком синим показало, что все исследованные сборы проявляли диуретическое действие (рис. 1). Наиболее активным оказался настой растительного сбора №7, состоящий цветков василька синего, травы пасггушьей сумки, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, листьев черной смородины и травы хвоща полевого, который увеличивал диурез за 4 ч на 139,2% (р<0,01). При исключении из состава сбора №7 листьев расторопши, листьев черной смородины и добавлении корней пырея ползучего (сбор № 13), а также выведение из состава сбора травы пастушьей сумки, листьев и молодых побегов почечного чая,

листьев расторопши, листьев черной смородины и травы хвоща полевого (сбор №8) приводило к уменьшению мочегонного эффекта на 81,3% (р<0,01) и 69,6% '(р<0,01), соответственно. На основании скрининговых экспериментов для дальнейшего углубленного исследования был выбран настой растительного сбора №7, диуретическое действие которого при внутрижелудочном введении в дозе 2,6 мл/кг превосходило аналогичный эффект гипотиазида (50 мг/кг) в 1,93 раза, а настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 2,32 раза.

Диурез, % по отношению к контролю

260 240 220 200 180 160 140 120 100 1 80 60 -4020 -0

*

* X

* *

X * X х

*

* х

х

**

X

*

X *

X

ll'll %о ее о о

го ч- т \о

ОО Стч О —

3 5

Настои сборов №№ § ¡~

X

Рис. 1. Влияние настоев из растительных сборов с васильком синим (2,6 мл/кг), настоя хвоща (3 мл/кг) и гипотиазида (50 мг/кг) на выделительную

функцию почек у крыс Примечание: * - р<0,05, ** - р<0,01 по сравнению с контролем.

Изучение влияния водных извлечений растительных сборов с васильком синим №1-№20 на системное АД у наркотизированных кошек показало, что наиболее выраженный гипотензивный эффект был обнаружен у настоя сбора №5: после внутривенного введения настоя этого сбора в дозе 2,3 мл/кг АД снижалось на 50,3 мм рт.ст. (37,4 %, р<0,05); при этом частота сердечных сокращений уменьшалась на 24,5% (р<0,05), частота дыхания - на 25% (р<0,05), а амплитуда дыхания увеличивалась на 27,4% (р<0,05) по сравнению с исходными показателями. Гипотензивный эффект настоя сбора № 5 продолжался в течение 60-70 мин. Исключение из растительного сбора № 5 плодов боярышника однопестичного, травы пастушьей сумки, травы репяшка обыкновенного и хвоща полевого (сбор № 6) приводило к снижению АД на 36 мм рт.ст.(26%; р<0,05), урежению ритма сердечных сокращений на 11,4% (р>0,05), уменьшению частоты

дыхания на 31,6% (р<0,05) и увеличению его амплитуды на 19,7% (р<0,05); через 15-30 мин АД возвращалось к исходным величинам.

Изучение антиоксидантных свойств настоев исследуемых растительных сборов с васильком синим №1-№20 показало, что наиболее выраженное ингибирование процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) наблюдалось после внутрижелудочного введения настоя растительного сбора №9, который вызывал уменьшение концентрации МДА в гомогенате печени крыс с индуцированным СС14 поражением печени на 47,4% (р<0,05). Сбор №9 состоит из следующих лекарственных растений: плоды боярышника однопестичного, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, солома овса посевного, листья и молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и трава хвоща полевого. Замена в сборе №9 цветков календулы лекарственной и корней пырея ползучего на листья расторопши, траву репяшка обыкновенного, побеги череды трех-раздельной и створки стручков фасоли обыкновенной (сбор №11) приводило к ослаблению антиоксидантных свойств [снижение уровня МДА в гомогенате печени на 39% (р<0,05)].

Оценка спектра возможного антимикробного действия настоев исследуемых растительных сборов с васильком синим №1-№20 выявила выраженный антимикробный эффект настоя сбора №13, который при МПК 62,5250 мкг/мл подавляет рост бактерий (золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, дизентерийной палочки, спор антра-коида, синегнойной палочки, вульгарного протея) и грибов (дрожжеподоб-ных грибов, возбудителя микроспорий, трихофитии и аспергиллы).

В результате проведенного фармакологического скрининга настоев из растительных сборов с васильком синим для углубленного доклинического изучения был выбран настой из растительного сбора № 7 («Васмохвор»).

Установлено, что «Васмохвор» при внутрижелудочном введении в дозах (0,5-3,5 мл/кг) увеличивает мочеотделение у крыс за 4 ч на 45,5% -135% (табл. 2). Диуретический эффект «Васмохвор» в дозе 2,5 мл/кг в 1,9 раза превосходил диуретическое действие гипотиазида (50 мг/кг) и в 2,1 раза превосходил диуретическое действие настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг). На основании проведенных исследований была рассчитана величина ЕД50 для «Васмохвора», которая составила 2,6 мл/кг.

Анализ влияния однократного внутрижелудочного введения «Васмохвора» на суточное потребление воды, диурез, экскрецию креатинина, ионов натрия и калия у крыс показал, что настой этого сбора (2,6 мл/кг) увеличивает суточное потребление воды, значительно усиливает клубоч-ковую фильтрацию почек на 20,5% (р<0,05), увеличивает спонтанный диурез на 138,6% (р<0,001), повышает экскрецию натрия на 22,4% (р<0,05) и незначительно повышает выведение калия (на 4,8%; р>0,05).

Таблица 2. Влияние «Васмохвора», гипотиазида и настоя травы хвоща полевого на водный диурез у белых крыс-самцов (п=7)_

Группы Животных Доза Диу рез

2 час* 4 часа

М± ш, мл %К контролю М±т, мл %к контролю

Контроль - 1,42±0,11 100 2,5710,13 100

«Васмохвор» 0,5 мл/кг 1,8810,11* 132,4 3,7410,11" 145,5

1,0 мл/кг 2,06±0,12* 145,1 3,8410,14" 149,4

1,5 мл/кг 2,24Ю,13*' 157,7 4,52Ю,14"' 175,9

2,0 мл/кг 2,37±0,1б" 166,9 4,8510,11'" 188,7

2,5 мл/кг 2,54Ю,17** 178,9 6,0410,15'" 235,0

3,0 мл/кг 2,82±0,19** 198,6 5,5210,17"' 214,8

3,5 мл/кг 2,7810,22" 195,8 5,14Ю,18"' 201,2

Гипотиазид 50 мг/кг 1,84±0,09 129,6 4,3810,12" 170,4

Хвощ полевой 3,0 мл/кг 1,78±0,16 125,4 4,0510,09" 157,6

Примечание: * - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001 по сравненшо с контролем.

При введении гипотиазида (25 мг/кг) и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) наблюдалась тенденция к увеличению клубочковой фильтрации на 7,6% (р>0,05) и 10,6% (р>0,05) соответственно. После введения гипотиазида увеличилась экскреция ионов натрия - на 40,7% (р<0,05) и калия - на 20,5% (р<0,05). При воздействии настоя травы хвоща полевого экскреция натрия усилилась на 28,1% (р<0,05), а также наблюдалась тенденция к увеличению выведения калия на 5,9% (р>0,05).

Таким образом, «Васмохвор» (2,6 мл/кг) обладает выраженным диуретическим действием и по влиянию на спонтанный диурез превосходит гипотиазид (25 мг/кг) в 1,29 раза, а настой травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 1,41 раза. Следует подчеркнуть, что преимуществом «Васмохвора» является то, что этот растительный сбор, по сравнению с гипотиазидом и настоем травы хвоща полевого, выводит из организма крыс натрия больше, а калия - меньше.

При сравнительном изучении настоев растительных сборов и гипотиазида на водный диурез у крыс было установлено, что «Васмохвор» (2,6 мл/кг; внутрижелудочно) увеличивал водный диурез на 143,2% (р<0,01) и по диуретической активности превосходил гипотиазид (25 мг/кг) на 70,5% (р<0,05), а настой травы из хвоща полевого (3 мл/кг) - на 69,7% (р<0,01) (рис.2). Экскреция натрия после введения «Васмохвора» (рис. 3) увеличивалась на 42,7% (р<0,05), тогда как выведение калия характеризовалось лишь тенденцией к повышению (+ 3,4%; р>0,05) (рис. 4). Гипотиазид значительно увеличивал как экскрецию натрия (+ 36,7%; р<0,05), так и калия (+ 21,1%; р<0,05). Настой травы хвоща полевого существенно усиливал выведение натрия из организма крыс (+ 34,4%; р<0,05) и незначительно повышал выведение калия (+ 6,3%; р>0,05).

Ч_- - -а*»

Таким образом, в экспериментах с водной нагрузкой «Васмохвор» (2,6 мл/кг) по диуретической активности превосходит гипотиазид (25 мг/кг) в 1,97 раза, а настой травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 2,1 раза. Как и при оценке спонтанного диуреза, преимуществом «Васмохвора» является то, что этот сбор существенно в меньшей мере (в 6,2 раза) выводит калий по сравнению с гипотиазидом.

Эксперименты с использованием солевой нагрузки у крыс показали, что при внутрижелудочном введении «Васмохвора» (2,6 мл/кг) диурез увеличивался на 134,6% (р<0,01), тогда как под действием гипотиазида (25 мг/кг) - на 77,8% (р<0,01) и настоя из травы хвоща полевого (3 мл/кг) - на 69,7% (р<0,01). Экскреция натрия возросла под влиянием «Васмохвора» на 31,2% (р<0,05), гипотиазида - на 30,1% (р<0,05), а настоя из травы хвоща полевого - на 27,7% (р<0,05). Выведение калия характеризовалось тенденцией к усилению при применении «Васмохвора» (+ 6,2%; р>0,05), тогда как гипотиазид и настой травы хвоща полевого вызывали достоверное увеличение этого показателя (+ 18,1%; р<0,05 и + 11%; р<0,05, соответственно).

Следовательно, на фоне солевой нагрузки настой «Васмохвора» (2,6 мл/кг) более эффективно увеличивает диурез, чем гипотиазид (25 мг/кг; в 1,72 раза) или настой травы хвоща полевого (3 мл/кг); в 1,92 раза). Преимуществом настоя «Васмохвора» является то, что калий из организма он выводит в 2,9 раза меньше по сравнению с гипотиазидом и в 1,8 раза по сравнению с настоем из травы хвоща полевого.

Курсовое применение в течение 7 сут показало, что спонтанный диурез достоверно увеличивался под действием настоя «Васмохвора» (2,6 мл/кг) с 122,9% до 148,9% (р<0,001), под действием гипотиазида (25 мг/кг) - с 60,2 до 69,5% (р<0,05), и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) - с 53,7% до 67,4% (р<0,05).

Экскреция креатинина под действием «Васмохвора» увеличилась на 15,7% - 17,2% (р<0,05)., а под действием гипотиазида и настоя из травы хвоща полевого наблюдалась тенденция к повышению экскреции креатинина на 5,2% и 6,7%, соответственно. Экскреция электролитов увеличилась под влиянием «Васмохвора»: натрия на 39,7-44,8% (р<0,05) и наблюдалась тенденция к повышению калия - на 4,8-5,1%. Под действием гипотиазида экскреция натрия увеличивалась на 29,1%-33,3% (р<0,05) и калия - на 8,4% -9,39% (р<0,05).

Курсовое введение «Васмохвора» улучшало фильтрационную функцию почек и повышало спонтанный диурез у крыс в 1,65 раза по сравнению с гипотиазидом.

Введение «Васмохвора» (2,6 мл/кг; внутрижелудочно) уменьшало объем внутрисосудистой жидкости у крыс на 20,5% (р<0,05) и снижало содержание натрия в плазме на 19,3% (р<0,05), сопровождаясь тенденцией к повышению экскреции калия в моче - на 5,5% (р>0,05). Под влиянием настоя травы хвоща полевого в дозе 3 мл/кг при внутрижелудочном введении объем внутрисосудистой жидкости уменьшился на 15,5%

(р<0,05), концентрация натрия понизилась на 11,1% (р<0,05) и калия - на 9,1% (р<0,05).

Диурез, мл 8

б -

4

2 Н

»»

т

Контроль

Васмохвор

Гнпотназяд

Настов травы хвоща

Рис. 2. Влияние «Васмохвора» (2,6 мл/кг), гипотиазида (50 мг/кг) и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) на экскрецию мочи у белых крыс-самцов после водной нагрузки (п=10).

Примечание: * - р<0,05, ** - р<0,01 по сравнению с контролем. Экскреция иатрия, мкмоль 200 п

150 • 100

50 -

Контроль

Васмохвор

Гнпотназяд

Настой травы хвоща

Рис. 3. Влияние «Васмохвора» (2,6 мл/кг), гипотиазида (50 мг/кг) и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) на экскрецию натрия у белых крыс-самцов после водной нагрузки (п=10). Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем.

Экскреция калия, мкмоль 40

30 -| 20 10 -

Контроль Васмохвор Гипотназид Настой травы

Рис. 4. Влияние «Васмохвора» (2,6 мл/кг), гипотиазида (50 мг/кг) и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) на экскрецию калия у белых крыс-самцов после водной нагрузки (п=10). Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем.

«Васмохвор» у интактной группы повышал количество просга-гландина Е2 в плазме на 15,2% (р<0,05), а у крыс с водной и солевой нагрузками - на 23,7% (р<0,05) и 24,5% (р<0,05) соответственно(табл. 3).

Таблица 3. Влияние «Васмохвора», гипотиазида и настоя травы хвоща полевого при внутрижелудочном введении на уровень простагландина Е2 в плазме крови крыс (п=10)

Группы животных Доза Содержание ПГЕ2 в плазме, нмоль/л

Интактные Водная нагрузка Солевая нагрузка

Контроль - 6,44±0,11 6,74±0,16 7,21±0,12

В% - 100 100 100

«Васмохвор» 2,6 мл/кг 7,42±0,08* 8,34±0,09* 8,98±0,11*

В % к контролю - 115,2 _ 123,7 124,5

Гипотиазид 25 мг/кг 6,98±0,14 7,59±0,15* 8,26±0,08*

В % к контролю - 108,4 112,6 114,6

Настой травы ХШЩа, полевого 3 мл/кг 7,05±0,13* 7,48±0,11* 8,54±0,09*

В % к контролю - 109,4 110,9 118,4

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем.

Гипотиазид при внутрижелудочном введении в дозе 25 мг/кг у крыс с водной и солевой нагрузками увеличивал количество ПГЕ2 на 12,6% (р<0,05) и 14,6% (р<0,05), соответственно. Содержание простагландина ПГЕ2 под влиянием настоя из травы хвоща полевого, в дозе 3 мл/кг при внутрижелудочном введении, в плазме увеличилось на 9,4% (р<0,05), у крыс с водной и солевой нагрузками увеличилось на 10,9% (р<0,05) и 18,4% (р<0,05), соответственно.

«Васмохвор» повышал уровень калликреиногена в плазме крови крыс с водной и солевой нагрузками на 18,5% (р<0,05) и 19,7% (р<0,05), а уровень калликреина - на 17,8% (р<0,05) и 21,7% (р<0,05), соответственно, по сравнению с контрольной группой (табл. 4). Под действием гипотиазида также наблюдали повышение уровня калликреиногена и калликреина у белых крыс: при водной нагрузке -на 13,6% и 14,8% (р< 0,05) соответственно, при солевой нагрузке - на 13,2% и 17,1% (р<0,05) соответственно,.

Настой травы хвоща полевого после водной и солевой нагрузок повышал содержание калликреногена в плазме крови, соответственно, на 15,5% и 16,6% (р< 0,05), а количество калликреина увеличивалось на 14,8% (р<0,05) и 19,9% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

Таблица 4. Влияние «Васмохвора», гипотиазида и настоя травы хвоща полевого на активность капликреин-кининовой системы после водной и солевой нагрузки у белых крыс (п=10)___

Группы животных Доза Калликреино-ген, мед/мл %к нитастным животным Калликреин, мед/мл % к ннтактным животным

Иптактные - 261,3*4,2 100 93,8±4,1 100

Водная нагрузка

Контроль - 276,9±6,1 106,0 101,514,3 108,2

% - 100 - 100 -

«Васмохвор» 2,6 мл/кг 328,2±6,2' 125,6 119,615,3" 1274

% к контролю - 118,5 - 117,8

Гнпотиазид 25 мг/кг 314,6±5,4 20,4 114,9±5,6 122,5

% к контролю - 113,6 из а -

Настой травы хвоща полевого 3 мл/кг 319,8±4Г3* 122,4 116,516,1" 124,2

% к контролю - 115,5 114,8 -

Солевая нагрузка

Контроль - 288,916,1 110,6 109,716,5 116,9

% - 100 - 100 -

«Васмохвор» 2,6 мл/кг 345,816,5' 132,3 133,517,1' - 1423

% к контролю - 119,7 - 121,7 -

Гнпотиазид 25 мг/кг 331,617,2" 126,9 128,516,3*„ 137,0

% к контролю - 1143 - 117,1 -

Настой травы хвоща полевого 3 мл/кг 336,817,4' 133,9 131,615,5" 140,3

% к контролю - 116,6 - 119,9 -

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с соответствующим контролем.

Исследование возможного ульцерогенного действия настоя «Васмохвора» у интактных крыс показало, что этот сбор при внутрижелудочном введении в дозах 10 и 25 мл/кг не вызывал поражения слизистых оболочек желудка или двенадцатиперстной кишки; симптомов предшествующих деструкции (участки воспаления или эрозии), не наблюдалось. Очень незначительное ульцерогенное действие «Васмохвора» наблюдалось лишь в дозе 50 мл/кг: повреждение слизистой оболочки было выявлено лишь у одного животного (индекс изъязвления - 0,01).

Кроме того, ульцерогенное действие «Васмохвора» было изучено на модели этаноловых повреждений желудка у крыс. «Васмохвор» в дозах 10 и 25 мл/кг не усиливал ульцерогенного действия этанола по сравнению с контролем, для которого индекс изъязвления составил 2,1. Этот сбор не вызывал достоверных различий в степени изъязвления слизистой желудка. Ацетилсалициловая кислота в дозе 10 мг/кг потенцировала ульцерогенное действие этанола. Значительное ульцерогенное действие ацетилсалициловой кислоты наблюдалось при введении в дозе 100 мг/кг (индекс изъязвления — 4,1).

Повреждающее действие «Васмохвора» на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта проявляется лишь в дозах, превышающих ЕД50 более чем в 10 раз. В отличие от ацетилсалициловой кислоты, «Васмохвор» не потенцирует ульцерогенное действие этанола.

Исследование острой токсичности «Васмохвора» показало, что под действием настоя этого сбора в дозах от 0,5 мл/кг до 10 мл/кг, наблюдалось увеличение количества отделяемой мочи и снижение двигательной активности животных. Через 1 ч после введения «Васмохвора» было выявлено незначительное уменьшение двигательной активности у животных, сохранена реакция одергивания головы при прикосновении к усам. Сохранен также роговичный рефлекс, зрачки без изменений, роговица глаз прозрачная и влажная. Спустя 4 ч после введения двигательная активность мышей восстанавливалась.

Установлено, что внутрижелудочное введение «Васмохвора» в дозах 10, 20 и 30 мл/кг не вызывало гибели животных, а в максимально исследованной дозе (50 мл/кг) «Васмохвор» вызывал гибель 40% животных. Поэтому «Васмохвор» можно отнести к практически нетоксичным веществам.

Таким образом, изучение специфической фармакологической активности оригинального растительного сбора «Васмохвор» показало, что этот сбор обладает натрийуретическим и диуретическим действием за счет уменьшения реабсорбции катионов натрия в канальцах нефронов, улучшения фильтрационной функции почек, увеличения биосинтеза простагландина Е2, повышения активности калликреин-кининовой системы; установлено, что данный сбор не оказывает ульцерогснного действия и его можно отнести к практически нетоксичным веществам.

ВЫВОДЫ

1. Путем первичного фармакологического скрининга среди 20 исследованных растительных сборов с васильком синим, выявлены настои, обладающие диуретической, депримирующей, антиконвульсивной, анапь-гетической, противовоспалительной, гипотензивной, антиоксидантной и антимикробной активностями. Установлены элементы зависимости указанных типов фармакологического действия от состава сборов.

2. Настой растительного сбора №3 (2,4 мл/кг) обладает выраженным депримирующим действием на модели взаимодействия с барбитуратами у крыс, существенно увеличивая (на 91,2%) продолжительность действия этаминал-натрия и превосходя действие настоев корневищ с корнями валерианы и пустырника. Кроме того, этот сбор повышает порог эмоционального реагирования у крыс, превосходя по данному виду действия настой из корневищ с корнями валерианы (2,5 мл/кг) и травы пустырника (2,4 мл/кг), но уступает нейролептическому эффекту аминазина (5 мг/кг).

3. Настой растительного сбора №3 (2,4 мл/кг) проявляет выраженное противосудорожное действие и значительно увеличивает латентный

период первых судорожных реакций на модели взаимодействия с аналептиками у крыс, превосходя по этой активности настой травы пустырника (2 мл/кг), но уступая мидокалму (10 мг/кг) и фенобарбиталу (10 мг/кг).

4. Настой растительного сбора №5 (2,3 мл/кг) оказывает существенное умеренное гипотензивное действие у наркотизированных этаминал-натрием кошек, уступая по активности клонидину (0,1 мг/кг).

5. Настой оригинального растительного сбора «Васмохвор» (сбор №7) обладает выраженным зависимым от дозы (0,5-3,5 мл/кг) диуретическим действием на модели водного диуреза у крыс, превосходя по активности настой травы хвоща полевого (3 мл/кг) и гипотиазид (25 мг/кг).

6. «Васмохвор» (2,6 мл/кг) оказывает выраженное натрийуретическое действие, улучшает фильтрационную функцию почек, уменьшает объем внутрисосудистой жидкости, повышает содержание простагландина Е^ и увеличивает активность калликреин-кининовой системы у крыс с солевой и водной нагрузками. >___

7. «Васмохвор» (10 и 25 мл/кг, внутрижелудочно) не оказывает существенного повреждающего действия на желудочно-кишечный тракт интактных крыс и не усиливает ульцерогенное действие этанола у крыс с этаноловым изъязвлением.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Полученные результаты экспериментального анализа химического состава и выявленной фармакологической активности исследованных растительных сборов с васильком синим, используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии, фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакогнозии и ботаники Национального фармацевтического университета, а также кафедрах фармакологии, фармакогнозии с курсом ботаники, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Результаты доклинического изучения специфической фармакологической активности оригинального растительного сбора «Васмохвор» будут включены в нормативно-техническую документацию на новое лекарственное средство растительного происхождения для представления в Министерства здравоохранения России и Украины с целью получения разрешения на проведение клинических испытаний.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изучение противосудорожной активности настоев из растительных сборов с васильком синим // Тез. докл. науч. конф. молодых ученых-Харьков: Изд-во НФАУ, 2001.-С. 145 (Соавтор Б.А.Самура).

2. Антибактериальная и фунгицидная активность настоев из растительных сборов с васильком синим // Лекарства - человеку. Меж-дунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств-Т.16, №1 .-Харьков, 2001- С. 88-90 (Соавтор Самура Б. А.).

3. Диуретическая активность растительных сборов с цветками василька синего // Лекарства — человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств.-Т.17, №1-Харьков, 2002.-С. 63-65 (Соавторы Лепахин В.К., Самура Б.А.).

4. Первичная фармакологическая оценка сборов лекарственных растений с васильком синим // Лекарства - человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств.-Т.17, №2.-Харьков, 2002.-С. 104-105.

5. Исследование гипотензивной активности растительных сборов с цветками боярышника однопестичного // IX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», 8-12 апр. 2002 г.: Тез. докладов.-С. 707 (Соавторы Таран A.B., Самура Б.А.).

6. Взаимодействие с барбитуратами настоев из растительных сборов с васильком синим // Лекарства - человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств.-Т.17, №1-Харьков, 2002.-С. 65-67.

7. Экспериментальные исследования антиоксидантного действия препаратов растительного происхождения и их комбинация при гипер-липидемии // Лекарства - человеку. Междунар. сб. науч. тр. по создан, и апробации новых лек. средств.-Т.17, №.2.-Харьков, 2003.-С. 47-48. (Соавторы Белай И.М., Самура Б.А.).

8. Сравнительная оценка фармакодинамических эффектов ангиопро-текторов при атеросклерозе// Лекарства - человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств.-Т.17, №.3.-Харьков, 2002.-С. 52 (Соавторы Белай И.М., Самура Б.А.).

9. Влияние настоев из растительных сборов с васильком синим на пороги эмоционального реагирования у крыс // Тез. докл. науч. конф. молодых ученых.-Харьков: Изд-во НФАУ, 2002.-С. 132.

10. Изучение аналыетической активности настоев из растительных сборов с васильком синим // X Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», 8-12 апр. 2002 г.: Тез. докл.-С. 648 (Соавторы Тарасявичюс Э .Л., Козуб Т.А., Самура Б.А.).

11. Противовоспалительная активность настоев из растительных сборов с васильком синим // Тез. докл. науч. конф. молодых учсных.-Харьков: Изд-во НФАУ, 2003.-С. 145 (Соавтор Киреев И.В.).

12. Антиоксидантная активность настоев из растительных сборов с васильком синим // Лекарства - человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств-Белгород, 2003.-С. 61-64.

13. Диуретическая активность растительных сборов с васильком синим // Лекарства — человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств .-Белгород, 2003 .-С. 44-46 (Соавтор Таран A.B.).

14. Влияние растительных сборов на системное артериальное давление и дыхание кошек // Лекарства - человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств.-Т.18, №1-Харьков, 2002.-С. 163-165 (Соавтор Самура Б.А.)

Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Офсетная печать. Усл. печ. л. 1,9 Тираж 100 экз. Заказ № 4354

ООО фирма «Стае», 69002, г. Харьков, ул. Дарвина, 8 тел. 45-21-90

РЫБ Русский фонд

2006-4 20914

\ ч

0 5 АПР ?004

Актуальность проблемы. Поиск новых лекарственных препаратов, осуществляющих регуляцию нарушенных жизненно важных функций почек, является важной задачей современной экспериментальной фармакологии.

Важное значение имеет создание препаратов на основе биологически активных веществ (БАВ) имеющихся в лекарственных растениях. Наличие в растительном сырье БАВ позволяет оказывать комплексное воздействие на организм больного. Врачи, осуществляющие лечение заболеваний лекарственными растениями, наблюдают высокий лечебный эффект, безвредность при рациональном использовании, поливалентность действия. Применение лекарственных растений целесообразно при лечении хронических заболеваний, а также для профилактики рецидивов болезни [12, 36, 38, 66].

Конец XX и начало XXI века характеризуется ростом количества нефроло-гических больных среди взрослого населения. Врачи нефрологического профиля отмечают значительное увеличение числа заболеваний почек на фоне эндокринных, аллергических заболеваний, связанных с алкоголизмом и наркоманией. В клинической медицине применяются лекарственные препараты: фуросемид, этак-риновая кислота, гипотиазид, диакарб и другие. Однако при их применении у больных могут наблюдаться осложнения: уменьшение выведения мочевой кислоты, метаболический алкалоз, гипокалиемия, гиперурикемия, возможны тошнота, гиперемия кожи, зуд, обратимое ухудшение слуха, головокружение и др. [58, 81].

При заболеваниях почек и мочевыводящих путей, наряду с производными сульфамоилантраниловой, сульфамоилбензойной и дихлорфеноксиуксусной кислотами, широко применяются лекарственные растения [44, 88, 112]. Благоприятные терапевтические эффекты, оправдывают интерес к дальнейшему изучению растительных сборов с целью создания на их основе эффективных лекарственных препаратов позволяющих индивидуализировать лечение, получить высокий терапевтический эффект при лечении заболеваний почек [54, 57, 71, 82].

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Национального фармацевтического университета (номер государственной регистрации 0198U007011, шифр темы ВН 10.08.0036.99), а также целевой программы создания диуретических лекарственных средств.

Цель исследования. Целью настоящего исследования является изучение фармакологической активности растительных сборов с васильком синим, а также поиск и разработка потенциального диуретического растительного средства.

Задачи исследования. Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести качественный анализ настоев из 20 растительных сборов с васильком синим. В состав сборов входят также плоды боярышника однопестично-го, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, солома овса посевного, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, трава пустырника сердечного, корни пырея ползучего, листья расто-ропши, трава репяшка обыкновенного, цветки ромашки лекарственной, листья черной смородины, трава хвоща полевого, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной.

2. Провести фармакологический скрининг 20 растительных сборов с васильком синим на выявление диуретической, нейротропной, анальгетической, противовоспалительной, гипотензивной, антиоксидантной и антимикробной активностей.

3. Отобрать сбор, обладающий наибольшим диуретическим действием, для проведения углубленного фармакологического исследования.

4. Изучить специфическую фармакологическую активность отобранного потенциального диуретического средства растительного происхождения.

Научная новизна исследования. Изучен химический состав и впервые проведен фармакологический скрининг 20 сборов из лекарственных растений с васильком синим. Впервые в опытах на лабораторных животных исследована зависимость фармакологической активности от состава растительных сборов с васильком синим. Выявлены активные сборы, обладающие диуретической, депри-мирующей, психостимулирующей, противосудорожной, анальгетической, противовоспалительной, гипотензивной и антиоксидантной активностями.

Выявлен наиболее активный растительный сбор №7 (условное название «Васмохвор»), обладающий диуретической активностью. Проведено изучение острой токсичности. Впервые показано, что васмохвор обладает высокой специфической диуретической активностью и не проявляет ульцерогенного действия.

Практическая значимость работы. В результате проведенного фармакологического скрининга для дальнейшего доклинического изучения отобраны перспективные растительные сборы, обладающие диуретической, противовоспалительной, депримирующей, гипотензивной и антиоксидантной активностями.

Проведено изучение специфической фармакологической активности вас-мохвора, обладающего выраженным диуретическим действием, не вызывающего повреждения слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, что дает основание для дальнейших исследований по разработке и созданию нового потенциального диуретического препарата растительного происхождения.

Полученные результаты изучения специфической фармакологической активности васмохвора будут использованы при подготовке материалов на новое диуретическое средство растительного происхождения с целью представления в Министерства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

Результаты анализа химического состава и изучения фармакологической активности исследованных растительных сборов с васильком синим используются в учебном процессе на кафедрах фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, фармакогнозии и ботаники Национального фармацевтического университета, а также кафедрах фармакологии, фармакогнозии с курсом ботаники, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Апробация работы. Отдельные фрагменты работы доложены на научно-практических конференциях молодых ученых Национального фармацевтического университета (Харьков, 2001, 2002, 2003); на Всеукраинской научно-практической конференции «Фармация XXI столетия» (Харьков, 2002), на международной научно-практической конференции «Лекарства - человеку» (Харьков 2002, 2003), на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003).

Диссертационная работа доложена на совместном заседании кафедр фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, микробиологии, патологической физиологии, фармакогнозии, ботаники, биохимии, Национального фармацевтического университета (протокол № 10 от 4 декабря 2003 года).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 25 рисунками. Указатель литературы включает 112 отечественных и 116 иностранных источников.

ВЫВОДЫ

1. Путем первичного фармакологического скрининга среди 20 исследованных растительных сборов с васильком синим, выявлены настои, обладающие диуретической, депримирующей, антиконвульсивной, аналь-гетической, противовоспалительной, гипотензивной, антиоксидантной и антимикробной активностями. Установлены элементы зависимости указанных типов фармакологического действия от состава сборов.

2. Настой растительного сбора №3 (2,4 мл/кг) обладает выраженным депримирующим действием на модели взаимодействия с барбитуратами у крыс, существенно увеличивая (на 91,2%) продолжительность действия этаминал-натрия и превосходя действие настоев корневищ с корнями валерианы и пустырника. Кроме того, этот сбор повышает порог эмоционального реагирования у крыс, превосходя по данному виду действия настой из корневищ с корнями валерианы (2,5 мл/кг) и травы пустырника (2,4 мл/кг), но уступает нейролептическому эффекту аминазина (5 мг/кг).

3. Настой растительного сбора №3 (2,4 мл/кг) проявляет выраженное противосудорожное действие и значительно увеличивает латентный период первых судорожных реакций на модели взаимодействия с аналептиками у крыс, превосходя по этой активности настой травы пустырника (2 мл/кг), но уступая мидокалму (10 мг/кг) и фенобарбиталу (10 мг/кг).

4. Настой растительного сбора №5 (2,3 мл/кг) оказывает существенное умеренное гипотензивное действие у наркотизированных этаминал-натрием кошек, уступая по активности клонидину (0,1 мг/кг).

5. Настой оригинального растительного сбора «Васмохвор» (сбор №7) обладает выраженным зависимым от дозы (0,5-3,5 мл/кг) диуретическим действием на модели водного диуреза у крыс, превосходя по активности настой травы хвоща полевого (3 мл/кг) и гипотиазид (25 мг/кг).

6. «Васмохвор» (2,6 мл/кг) оказывает выраженное натрийуретическое действие, улучшает фильтрационную функцию почек, уменьшает объем внутрисосудистой жидкости, повышает содержание простагландина Е2 и увеличивает активность калликреин-кининовой системы у крыс с солевой и водной нагрузками.

7. «Васмохвор» (10 и 25 мл/кг, внутрижелудочно) не оказывает существенного повреждающего действия на желудочно-кишечный тракт интактных крыс и не усиливает ульцерогенное действие этанола у крыс с этаноловым изъязвлением.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Полученные результаты экспериментального анализа химического состава и выявленной фармакологической активности исследованных растительных сборов с васильком синим используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии, фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакогнозии и ботаники Национального фармацевтического университета, а также кафедрах фармакологии, фармакогнозии с курсом ботаники, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Результаты доклинического изучения специфической фармакологической активности васмохвора будут включены в нормативно-техническую документацию на новое лекарственное средство растительного происхождения для представления в Министерства здравоохранения России и Украины с целью получения разрешения на проведение клинических испытаний.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенный качественный анализ растительного сырья и приготовленных настоев из растительных сборов №1-№20 содержатся следующие группы БАВ: флавоноиды, сапонины, дубильные вещества, иридоиды, алкалоиды, кумарины, прлисахариды. Полученные нами результаты соответствуют данным литературы [32,36, 68, 99, 101, 104].

Оценка острой токсичности растительных сборов показала, что исследованные настои из растительных сборов относятся к практически нетоксичным веществам, так как в максимально возможной исследованной дозе (50 мл/кг) не вызывали гибели опытных животных.

Исследование влияния настоев из растительных сборов с васильком синим на нервную систему показало, что большинство настоев исследуемых растительных сборов №1-№20 проявили синергизм к депримирующему действию этами-нал-натрия. Наибольший агонистический эффект к действию барбитуратов был обнаружен у настоя сбора №3, который состоит из цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пустырника сердечного и трава хвоща полевого. Настой растительного сбора №3 при внутрижелудочном введении в дозе 2 мл/кг увеличивал продолжительность нахождения крыс в боковом положении на 91,2% (р<0,01).

Изучение противосудорожной активности настоев растительных сборов с васильком синим №1- №20 проведено по тесту взаимодействия с аналептиками. Установлено, что среди изученных сборов наиболее выраженное противосудо-рожное действие проявил настой сбора №3. Все опытные животные выжили. Противосудорожный эффект этого настоя (2,4 мл/кг) был сравним с настоем травы пустырника (2 мл/кг), но уступал аналогичному действию мидокалма (10 мг/кг) или фенобарбитала (10 мг/кг). Анализ зависимости противосудорожной активности от состава растительных сборов с васильком синим показал, что антиконвульсивное действие проявлялось в тех сборах, куда входили трава пустырника, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной (сборы № 3, №11 и №19). Эти настои оказывали противосудорожное действие в опытах со всеми аналептиками.

Изучение влияния растительных сборов с васильком синим №1-№20 на пороги эмоционального реагирования показало, что наиболее активным оказался настой сбора № 3, который увеличивал порог писка у животных на 56,2% (р<0,05).

Исследование влияния настоев с васильком синим №1-№20 на порог агрессивности показало, что наиболее активным оказался настой из сбора № 3, который повышал порог агрессивности у животных на 42,8% (р<0,05).

Изучение анальгетической активности настоев растительных сборов с васильком синим №1-№20 на модели уксусных корчей у крыс показало, что большинство этих сборов при внутрижелудочном введении обладали анальгетиче-ским действием. Наиболее высокую анальгетическую активность (39,4%; р<0,05) проявил настой сбора №10.

Исследование противовоспалительной активности на модели каррагенино-вого отека у крыс показало, что большинство изученных настоев растительных сборов №6-№16 обладали выраженным противовоспалительным действием в пределах от 21,6% (р<0,05) до 41,9% (р<0,05). Наиболее эффективное противовоспалительное действие было выявлено у настоя сбора №9, в состав которого входят плоды боярышника однопестичного, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, солома овса посевного, молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и трава хвоща полевого. Сбор №9 вызывал угнетение отека лапки у крыс на 41,9% (р<0,05).

Изучение диуретической активности растительных сборов с васильком синим показало, что все исследованные сборы проявляли диуретическое действие.

Наиболее активным оказался настой растительного сбора №7, состоящий цветков василька синего, травы пастушьей сумки, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, листьев черной смородины и травы хвоща полевого, который увеличивал диурез за 4 ч на 139,2% (р<0,01). На основании скрининго-вых экспериментов для дальнейшего углубленного исследования был выбран настой растительного сбора №7, диуретическое действие которого при внутриже-лудочном введении в дозе 2,6 мл/кг превосходило аналогичный эффект гипотиазида (50 мг/кг) в 1,93 раза, а настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 2,32 раза.

Оценка острой токсичности растительных сборов показала, что исследованные настои из растительных сборов относятся к практически нетоксичным веществам, так как в максимально возможной исследованной дозе (50 мл/кг) не вызывали гибели опытных животных.

Исследование влияния настоев из растительных сборов с васильком синим на нервную систему показало, что большинство настоев исследуемых растительных сборов №1-№20 проявили синергизм к депримирующему действию этами-нал-натрия. Наибольший агонистический эффект к действию барбитуратов был обнаружен у настоя сбора №3, который состоит из цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пустырника сердечного и трава хвоща полевого. Настой растительного сбора №3 при внутрижелудочном введении в дозе 2 мл/кг увеличивал продолжительность нахождения крыс в боковом положении на 91,2% (р<0,01). Замена в растительном сборе № 3 цветков календулы лекарственной и столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, на плоды боярышника однопестичного, траву пастушьей сумки и листья смородины черной (сбор №19, 2 мл/кг) приводила к снижению депримирующего эффекта с 91,2% (р<0,01) до 69,8% (р<0,05).

Антагонизм к действию барбитуратов проявили настой сбора №5, состоящий из плодов боярышника однопестичного, цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, травы пастушьей сумки, травы пустырника сердечного, травы репяшков обыкновенных и травы хвоща полевого, а также настой сбора №12 в состав которого входят цветки василька синего, солома овса посевного, листья расторопши и цветки ромашки лекарственной. Эти настои при внутрижелудочном введении в дозе 2 мл/кг существенно уменьшали продолжительность этаминалового сна у крыс.

Изучение противосудорожной активности настоев растительных сборов с васильком синим №1- №20 проведено по тесту взаимодействия с аналептиками. Установлено, что среди изученных сборов наиболее выраженное противосудо-рожное действие проявил настой сбора №3. Все опытные животные выжили. Противосудорожный эффект этого настоя (2,4 мл/кг) был сравним с настоем травы пустырника (2 мл/кг), но уступал аналогичному действию мидокалма (10 мг/кг) или фенобарбитала (10 мг/кг). Анализ зависимости противосудорожной активности от состава растительных сборов с васильком синим показал, что антиконвульсивное действие проявлялось в тех сборах, куда входили трава пустырника, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной (сборы № 3, №11 и №19). Эти настои оказывали противосудорожное действие в опытах со всеми аналептиками.

Изучение влияния растительных сборов с васильком синим №1-№20 на пороги эмоционального реагирования показало, что наиболее активным оказался настой сбора № 3, который увеличивал порог писка у животных на 56,2% (р<0,05). Исключение из сбора № 3 цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы, травы пустырника сердечного и при добавлении к нему плодов боярышника однопестичного, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, трав репяшка обыкновенного, хвоща полевого, череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной (сбор № 11) приводило к уменьшению порога писка - с 56,2% (р<0,05) до 47,1% (р<0,05). При замене в сборе № 11 листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, травы репяшка обыкновенного, травы хвоща полевого, травы череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной травы пустырника сердечного на траву пастушьей сумки, траву пустырника сердечного, цветки ромашки лекарственной и листья смородины черной (сбор № 19) приводило к снижению порога писка крыс - с 47,1% (р<0,05) до 41,3% (р<0,05).

Исследование влияния настоев с васильком синим №1-№20 на порог агрессивности показало, что наиболее активным оказался настой из сбора № 3, который повышал порог агрессивности у животных на 42,8% (р<0,05). Исключение из сбора № 3 цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы, травы пустырника сердечного и при добавлении к нему плодов боярышника однопестичного, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, травы репяшка обыкновенного, хвоща полевого, череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной (сбор №11) приводило к уменьшению порога агрессивности - с 42,8% (р<0,05) до 32,6% (р<0,05).

Изучение анальгетической активности настоев растительных сборов с васильком синим №1-№20 на модели уксусных корчей у крыс показало, что большинство этих сборов при внутрижелудочном введении обладали анальгетиче-ским действием. Наиболее высокую анальгетическую активность (39,4%; р<0,05) проявил настой сбора №10, состоящий из плодов боярышника однопестичного, цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, цветков ромашки лекарственной, травы пастушьей сумки, травы репяшка обыкновенного, цветков ромашки лекарственной, побегов череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной. Замена травы пастушьей сумки, цветков ромашки лекарственной, побегов череды трехраздельной и створок стручков фасоли обыкновенной на солому овса посевного, листья и молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и траву хвоща полевого (сбор №9) приводила к снижению анальгетического действия (с 39,4% до 29,8%; р<0,05). Болеутоляющая активность (28,6%; р<0,05) практически не изменялась при замене в растительном сборе №9 цветков календулы лекарственной, соломы овса посевного, корней пырея ползучего на листья расторопши, траву хвоща полевого, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной (сбор № 11).

Исследование противовоспалительной активности на модели каррагенино-вого отека у крыс показало, что большинство изученных настоев растительных сборов №6-№16 обладали выраженным противовоспалительным действием в пределах от 21,6% (р<0,05) до 41,9% (р<0,05). Наиболее эффективное противовоспалительное действие было выявлено у настоя сбора №9, в состав которого входят плоды боярышника однопестичного, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, солома овса посевного, молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и трава хвоща полевого. Сбор №9 вызывал угнетение отека лапки у крыс на 41,9% (р<0,05).

Изучение диуретической активности растительных сборов с васильком синим показало, что все исследованные сборы проявляли диуретическое действие. Наиболее активным оказался настой растительного сбора №7, состоящий из цветков василька синего, травы пастушьей сумки, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, листьев черной смородины и травы хвоща полевого, который увеличивал диурез за 4 ч на 139,2%) (р<0,01). На основании скринин-говых экспериментов для дальнейшего углубленного исследования был выбран настой растительного сбора №7, диуретическое действие которого при внутри-желудочном введении в дозе 2,6 мл/кг превосходило аналогичный эффект гипотиазида (50 мг/кг) в 1,93 раза, а настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 2,32 раза.

При введении гипотиазида (25 мг/кг) и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) наблюдалась тенденция к увеличению клубочковой фильтрации на 7,6% р>0,05) и 10,6% (р>0,05) соответственно. После введения гипотиазида увеличилась экскреция ионов натрия - на 40,7% (р<0,05) и калия - на 20,5% (р<0,05). При воздействии настоя травы хвоща полевого экскреция натрия усилилась на 28,1% (р<0,05), а также наблюдалась тенденция к увеличению выведения калия на 5,9% (р>0,05).

Таким образом, «Васмохвор» (2,6 мл/кг) обладает выраженным диуретическим действием и по влиянию на спонтанный диурез превосходит гипотиазид (25 мг/кг) в 1,29 раза, а настой травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 1,41 раза. Следует подчеркнуть, что преимуществом «Васмохвора» является то, что этот растительный сбор, по сравнению с гипотиазидом и настоем травы хвоща полевого, выводит из организма крыс натрия больше, а калия - меньше.

При сравнительном изучении настоев растительных сборов и гипотиазида на водный диурез у крыс было установлено, что «Васмохвор» (2,6 мл/кг; внутрижелудочно) увеличивал водный диурез на 143,2% (р<0,01) и по диуретической активности превосходил гипотиазид (25 мг/кг) на 10,5% (р<0,05), а настой травы из хвоща полевого (3 мл/кг) - на 69,1% (р<0,01) (рис.2). Экскреция натрия после введения «Васмохвора» увеличивалась на 42,7% (р<0,05), тогда как выведение калия характеризовалось лишь тенденцией к повышению (+ 3,4%; р>0,05) (рис. 4). Гипотиазид значительно увеличивал как экскрецию натрия (+ 36,7%; р<0,05), так и калия (+21,1%; р<0,05). Настой травы хвоща полевого существенно усиливал выведение натрия из организма крыс (+ 34,4%; р<0,05) и незначительно повышал выведение калия (+ 6,3%; р>0,05).

Таким образом, в экспериментах с водной нагрузкой «Васмохвор» (2,6 мл/кг) по диуретической активности превосходит гипотиазид (25 мг/кг) в 1,97 раза, а настой травы хвоща полевого (3 мл/кг) - в 2,1 раза. Как и при оценке спонтанного диуреза, преимуществом «Васмохвора» является то, что этот сбор существенно в меньшей мере (в 6,2 раза) выводит калий по сравнению с гипотиа-зидом.

Эксперименты с использованием солевой нагрузки у крыс показали, что при внутрижелудочном введении «Васмохвора» (2,6 мл/кг) диурез увеличивался на 134,6% (р<0,01), тогда как под действием гипотиазида (25 мг/кг) - на 77,8% (р<0,01) и настоя из травы хвоща полевого (3 мл/кг) - на 69,7% (р<0,01). Экскреция натрия возросла под влиянием «Васмохвора» на 31,2% (р<0,05), гипотиазида

- на 30,1% (р<0,05), а настоя из травы хвоща полевого - на 27,7% (р<0,05). Выведение калия характеризовалось тенденцией к усилению при применении «Васмохвора» (+ 6,2%; р>0,05), тогда как гипотиазид и настой травы хвоща полевого вызывали достоверное увеличение этого показателя (+ 18,1%; р<0,05 и + 11%; р<0,05, соответственно).

Следовательно, на фоне солевой нагрузки настой «Васмохвора» (2,6 мл/кг) более эффективно увеличивает диурез, чем гипотиазид (25 мг/кг; в 1,72 раза) или настой травы хвоща полевого (3 мл/кг); в 1,92 раза). Преимуществом настоя «Васмохвора» является то, что калий из организма он выводит в 2,9 раза меньше по сравнению с гипотиазидом и в 1,8 раза по сравнению с настоем из травы хвоща полевого.

Курсовое применение в течение 7 сут показало, что спонтанный диурез достоверно увеличивался под действием настоя «Васмохвора» (2,6 мл/кг) с 122,9% до 148,9% (р<0,001), под действием гипотиазида (25 мг/кг) - с 60,2 до 69,5% (р<0,05), и настоя травы хвоща полевого (3 мл/кг) - с 53,7% до 67,4% (Р<0,05).

Экскреция креатинина под действием «Васмохвора» увеличилась на 15,7%

- 17,2% (р<0,05)., а под действием гипотиазида и настоя из травы хвоща полевого наблюдалась тенденция к повышению экскреции креатинина на 5,2% и 6,7%, соответственно. Экскреция электролитов увеличилась под влиянием «Васмохвора»: натрия на 39,7-44,8% (р<0,05) и наблюдалась тенденция к повышению калия - на 4,8-5,1%. Под действием гипотиазида экскреция натрия увеличивалась на 29,1%— 33,3% (р<0,05) и калия - на 8,4% -9,39% (р<0,05).

Курсовое введение «Васмохвора» улучшало фильтрационную функцию почек и повышало спонтанный диурез у крыс в 1,65 раза по сравнению с гипотиа-зидом. Введение «Васмохвора» (2,6 мл/кг; внутрижелудочно) уменьшало объем внутрисосудистой жидкости у крыс на 20,5% (р<0,05) и снижало содержание натрия в плазме на 19,3% (р<0,05), сопровождаясь тенденцией к повышению экскреции калия в моче - на 5,5% (р>0,05). Под влиянием настоя травы хвоща полевого в дозе 3 мл/кг при внутрижелудочном введении объем внутрисосудистой жидкости уменьшился на 15,5% (р<0,05), концентрация натрия понизилась на 11,1% (р<0,05) и калия - на 9,1% (р<0,05).

Гипотиазид при внутрижелудочном введении в дозе 25 мг/кг у крыс с водной и солевой нагрузками увеличивал количество ПГЕ2 на 12,6% (р<0,05) и 14,6% (р<0,05), соответственно. Содержание простагландина ПГЕ2 под влиянием настоя из травы хвоща полевого, в дозе 3 мл/кг при внутрижелудочном введении, в плазме увеличилось на 9,4% (р<0,05), у крыс с водной и солевой нагрузками увеличилось на 10,9% (р<0,05) и 18,4% (р<0,05), соответственно.

Васмохвор» повышал уровень калликреиногена в плазме крови крыс с водной и солевой нагрузками на 18,5% (р<0,05) и 19,7% (р<0,05), а уровень кал-ликреина - на 17,8% (р<0,05) и 21,7% (р<0,05), соответственно, по сравнению с контрольной группой (табл. 4). Под действием гипотиазида также наблюдали повышение уровня калликреиногена и калликреина у белых крыс: при водной нагрузке -на 13,6% и 14,8% (р< 0,05) соответственно, при солевой нагрузке - на 13,2% и 17,1% (р<0,05) соответственно.

Настой травы хвоща полевого после водной и солевой нагрузок повышал содержание калликреногена в плазме крови, соответственно, на 15,5% и 16,6% р< 0,05), а количество калликреина увеличивалось на 14,8% (р<0,05) и 19,9% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

Исследование возможного ульцерогенного действия настоя «Васмохвора» у интактных крыс показало, что этот сбор при внутрижелудочном введении в дозах 10 и 25 мл/кг не вызывал поражения слизистых оболочек желудка или двенадцатиперстной кишки; симптомов предшествующих деструкции (участки воспаления или эрозии), не наблюдалось. Очень незначительное ульцерогенное действие «Васмохвора» наблюдалось лишь в дозе 50 мл/кг: повреждение слизистой оболочки было выявлено лишь у одного животного (индекс изъязвления - 0,01).

Кроме того, ульцерогенное действие «Васмохвора» было изучено на модели этаноловых повреждений желудка у крыс. «Васмохвор» в дозах 10 и 25 мл/кг не усиливал ульцерогенного действия этанола по сравнению с контролем, для которого индекс изъязвления составил 2,1. Этот сбор не вызывал достоверных различий в степени изъязвления слизистой желудка.

Повреждающее действие «Васмохвора» на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта проявляется лишь в дозах, превышающих ЕД50 более чем в 10 раз. В отличие от ацетилсалициловой кислоты, «Васмохвор» не потенцирует ульцерогенное действие этанола.

Таким образом, изучение специфической фармакологической активности оригинального растительного сбора «Васмохвор» показало, что этот сбор обладает натрийуретическим и диуретическим действием за счет уменьшения реабсорб-ции катионов натрия в канальцах нефронов, улучшения фильтрационной функции почек, увеличения биосинтеза простагландина Е2, повышения активности калликреин-кининовой системы; установлено, что данный сбор не оказывает ульцерогенного действия и его можно отнести к практически нетоксичным веществам.