Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Антигенная активность почек и печени новорожденных и половозрастных доноров

I 1 0 3 9'И

ШЛИССШ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи СЛМХАРАДЗЙ НАНУЛИ ГЙРОНТЬЕВНА

АНТИГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЧЕК И ПЕЧЕНИ НОВОРОЖДЕННЫХ И ПОЛОВОЗРЕЛЫХ ДОНОРОВ

14,00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой стапели кандидата биологических наук

Тбилиси 1990

Работа выполнена а Ьаучно-исследовиТн;.ьикик инстит;тч экспериментальной и клиническо;: хирургии им. академик^ К.Д. Эриставн Министерстве адравоохравений ОДзиискок ССР.

Научный руководитель -кандидат медицинских наук,

старлии научный сотрудинк Э.Я.йАцИАй1в<..1й

Официальный оппоненты:

член-корреилонделг АМН ССОР,

■ профессор Г.Ь.ГУРШмДЗй

доктор медицинских наук, профессор Ь.М.лиРОАНТвШ

Ведущее учреждении - НИи трансплантологии и искусственных органов МЗ СССР (г. Москва)

Зациха диссертации состоится " М- Ш 1991 г. и 3 час, на заседании слец:1сЛизиро;<а.!пого соьета К 078.01.02 и Мини с с к ом ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте.

Адрес института: 380077, Тбилиси, пр. Ьижи Нашила, 33.

С диссертацией модно ознакомиться в библиотека Тбилисского государственного медицинского института.

Автореферат разослан "_"_____ 1990 года

Ученый секретарь

специализированного сонета '

доктор медицинских наук,

профессор п . и-В.П.СААКАДВЬ,

в Ол^^е

fJWCTiEffli«

i

Актуальность проблемы. Проблема повышения результативности лечения истрой или хронической недостаточности таких жизненно важных органон как почки и печень яилпотсп одной из наиболее актуальных в современной медицине (3.И.Гальперин, О.М.Дедерер, 1978; Ii.Д.Комаров и соавт., 1983; В.Г.Ьруолик, 198<t; Л.А.Шалимов и соавт., 1975; Fci-h'-t- и соавт., I977\l/om'f0i

и соавт., 1980; Wydnndet- и соавт., 1У85г£- и соавт., 1985; {н- и соавт., IShS-JauxKH Se^miloty Ш7;Тяк^<т<*-пt 1У87; ffaLH и соавт., 1988). Крайне низкая эффективность консервптии-. ной терапии - малая продоляительноеть лечебного воздействия -привела к интенсивной разработке хирургических методов лечения недостаточности указанных органов. Среди хирургических методов лечения не последнее место занимает' трансплантация (М.С.Маргу-лис и соавт., 1977; Б.Б.Петровский, 1988; O.G.Гвлорусов, В.А.Го-ряинов, l988\WiBlieim& и соавт., 1985; Као .Агп/ет-У«? и, 1985; (Уа^яним и соавт., 1986).

Путем длительных и кропотливых исследований были решены основные практические вопросы трансплантации, например, селекция наименее несовместный пар донор-реципиент, методика и хирургическая техника операции, анестезиологическое и реанимационное обеспечение, послеоперационное ведение больных и др. Однако проведение трансплантации органов в кпиничеоких .условиях и по настоящее время лимитируется слояностыо получения полноценного донорского материала (Н.А.Лопаткин и соавт., 1980; Л.Г.Манагадзе, 1961; Ю.М.Зарецкан, 1982; Р.В.Петров, 1985;&iC><? и сиавт., 1984; JoiJnn и соавт., , 1986).

Традиционные ниточники донорского материала (трупное донорство, пересадка от живнх родсгненнкх доноров, коеногенные органы) по целому ряду причин не нмходнт широкого использовании, if,

- ь -

следовательно, на ыогут решить проблему донорства (,11?,,,,^, 1585; 1/| 1986). Это ооусловливает насущную необходимость поис-

ков полых реальных путчи получении полноценного донорского материала (Г.д.Иоселиани, д.Н.Дугладзе, Л.Г.Манагадзе, 1977-19ь2; МиЗор и соавт., 1575; , ,

1975).

В лаборатории консервации и трансплантации органов и тканей 1Ш1 вксперининталыюи и клинической хирургии иы. акад. К.Д.Эрис-тави УЗ Грузинской ССР (Тбилиси) разраоотан оригинальнип подход к вопросу трансплантации органов, значительно расширяющий возможности получения донорских органов (Г.Д.Иоаьлиани и соавт,, 1980). Новизна разработанного в институт подхода к аилросу трансплантации принципиально сводится к использованию оргинов новорожденных доноров (иартвировдзнио, несовместимые с жизньв уродства и аномалии развития) для пересадки изроолыы реципиентам; установлена анатоиичоокан и функциональная пригодность органов, например, почек к пичеш* нояорокденних Для первзадон йзроеяыв реципиентам: л условиях эксперимента почй: а кочень яоиориядвкйыж обеспечивали длительную метаболическую лоддзряяу организуй взрослого реципиента (Л.Г.Маиагадзо, 1581; Ц.Нооаль, Д.Шольц, 1981; Т.И.Мгаииашвипк, 1982; М.В.Иуадаавилк, Шб^/и'ЛймДе/? и соавт., 1979; , 1985; 1935). Вместе с тем печень новорож-

денных по только длительно поддоржиналь гомоостаз в организме взрослого рациниаша, но и стимулировала репаритивние процессы в пораженном органа (М.Мео'эль, Д.Шольд, 19Й1; К.ОДбдушалишвили, 19£Ц; Л.Г.Ыанагадзо и соавт., 1982). Ь рнде экспериментов вы явлены и иидоносун^оиашше сво;)сгиа леченп новорожденных (В.МЛ'овая-по, М.А.Бвкаури, 1!?82). Разработаны и хирургические варианты операции.

О перспективности разработанного в институте оригинального подхода к вопросу трансплантации органом свидетельствуют и имеющиеся в литературе, правда единичные, сведения о меньшей анти-генности тканей, например ножи, новорожденных в сравнении о аналогичными тканями половозрилых особей (М.А.Азарова, 1970; Н.Г;Го-гиналвили, Я, 1978). Однако некоторые исследователи

но наблюдали особой зависимости антигенных свойств тканей от возрастных особенностей доноров 1 1962). Таким образом, имеющиеся в литература сводения об антигенных свойствах тканей новорожденных и половозрелых доноров противоречивы и нооят характер косвенных суждений. Между тем изучение антигенных свойств тканой в известной мере мояет служить основанием для предположительной оценки силы ожидаемого иммунного конфликта и планирования его коррекции.

Цоль и задачи исследования. Целью работы являлось исследование антигенных свойотв почек и печени новорожденных и полово-зрэлых доноров для иммунологического обоснования оригинального подхода к вопросу трансплантации: использование органов новорожденных доноров для пересадок взрослым реципиентам.

При этом решались следуюцио задачи:

- исследовать иымунохимичоские структуры органоопецифи-ческих белков почек и печени новорожденных и половозрелых доноров;

- определить иммунологическую (гуыоральную и нлеточную) реакцию организма на иммунизацию "органоспецифичесними'" белками почек и печени новорожденных и половозрелых доноров;

- изучить морфологическую картину (обгор, иорфоиетряя,

электронная микроскопии) регионарных лимфатических узлов и сели'юики животных, иммунизированных антигенами ночек и почини новорожденных и половозрелых доноров;

- ои роде лить актиииооть ии'юхоидрнильиых сукцшштде гид-роге иааН и сб- -глицерофосфат доги .'¿рогоназы в лимфоцитах периферической кропи животных на фони иыы^ьнзации "органоспецифи-ческами" белками почик и печени новорожденных и половозрелых доноров.

Впервые:

- выявлены различия в структуре органоонецифичоских белков почек и печени новоринианиих венков и половозрелой соОакч;

- установлен эффект выраженного действии "оргыюопецифи-ческих" Оелкоь почек и печени на иммунный статус организма реципиент;

- обнаружено, что характер и интенсивность иммунного отвита в периферической крови, регионарных лимфатических уздах

и селезенке зависят ог лоараога донора ¡1 органной ипецифтчности антигена;

- выявлена зависимость уровня активности митохондриальных сукцинатдигидрогеназы и сИ- -глицерофосфагдегпдрогеназы а лимфоцитах периферической кропи от возраста донора и органной специфичности ентигона;

- определена высокая информативность комплексного иммунологического (имчунохимическиМ анализ гипериимунных абсорбированных сывороток; оценка.реакции немедленного и замедленного типа'в периферической крови; морфологическое, включая обэор, морфометрию и электронную микроскопию, изучение регионарных

лимфатических узлов и селезонки) подхода при сравнении антигенных свойств тканей.

Практическая ценность. Полученные данные иммунологической верификации позволяют широко внедрить в клиническую практику оригинальный подход к вопросу трансплантации' и значительно расширить пути получения донорских органов. Попользованная в работе комплексная иммунологическая программа может быть рекомендована для изучения антигенных свойств любого тканевого материала.

Основные положения, выносимые на защиту

<

1. С возрастом собакг, в антигенах их почек и печени увеличивается число компонентов, индуцирующих продукцию анти- • тел у реципиента; одновременно в этих органах.повышается концентрация всех компонентов антигена.

2. Инмуноэлектрофоретически компоненты антигена почек и печени половозрелой собаки, обеопечивающие антителогенез у реципиента, относятся н ¿1/ и [3 -глобулинам; печени новороядон-ных щенков - к о*/ -глобулинам.

3. Антиген печени половозрелой собаки содержит группировки, сходные с детерминантами антигену почек собани того же возраста.

4. С возрастом собаки антигены почек и печени претерпевают качественные изменения, о чем свидетельствует участие различных механизмов (гуморального и гучорально-клеточного) в реализации отзета на иммунизацию экстрактами органов новорожденных щенков или половозрелой собаки.

5. Антигены почек и печени новорожденных щенков у реципиента нраводяг к развитии реакции гуморального типа; антигены почаи и печени половозрелой собаки формируют реакции как гуморального, так и клеточного типов-, опосредуемые ростом удельной концентрации В-лимфоцитов в периферической крови, повышением титра противоткаьевых антител ь сыворотке, увеличением индекса торможения ш>гращи лейкоцитов и иммунного лммфо-цитолиза, накоплением активированных В- и Т-лимфоцитов и регионарных лимфатических узлах и седвзонке.

6. Антигены почек и печени новорожденных ценкоь приводят

к существенному увеличению суСпонуияции лимфоцитов периферической кровч а высоким уровнем активности иитохондриильных дегид-рогоиаа; антигены почек и печени половозрелой сооаки - к увеличению субпопуляций как с высолим, так и низким уровнем их активности.

7. Выраженность иммунного ответа у реципиента зависит от вида антигена и воараста донора. Интенсивность иммунной пера-стройки достигает максимума при иммунизации крыс антигеном печени половозрелой собаки, а минимума - антигеном почек новорожденных щенков.

Реализация работы. По материалам диссертационной работы разработаны методические рекомендации "Оценка антигенных свойств тканей", утвержденныо ИЗ Грузинской СОР (1989), которые ннедраны в лабораториях иммунологии и транопдантации органов НИИ экспериментальной и клинической хирургии им. акад. К.Д.Эристави.

Апробация раооты. Основные положения диссертации долоквны

на: конференциях специалистов НИИ экспериментальной и клинической хирургии им. акад. К.Д.Эриетыви (1986, 1987), научно-прак-тичоскоН конференции молодых медиков (Кутаиси, 1986), Республиканском слете молодых медиков (Тбилиси, 1986), ХП республиканской научной конференции молодых медиков Грузии (Тбилиси, -1987), на I всесоюзном съезде иммунологов (Дагомыо, 1989), заседаниях учаного совета НИИ экспериментальной и клиничоской хирургии им. акад. К.Д.Эриотави МЗ Грузинокой ССР (Тбилиси, 1989) и кафедры микробиологии, эпидемиологии и иммунологии Тбилисского государственного медицинского института (Тбилиси, 1990).

Публикации. По-тема кендидатокой диссертации опубликованы 3 работы.

Объем и структура работы,- Кандидатская диссертация написана на русском языке, изложена на 105 страницах машинописи, включает 13 таблиц и 23 рисунка; состоит из введения, 4-х глав ("Обзор' литературы", "материал и метода исследования", "Результаты собственных исследований" и "Обсуядениа результатов исследования"), выводов, заключениям списка1литературы, насчитывающего 175. источников, из них 101 отечественный и 74 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования послужили экстракты тканей (антигены) почек и печени новорожденных щенков и половозрелой собаки, поскольку хирургическио и биохимические грани оригинального подхода отрабатывались л экспериывнтах именно на собаках. Использовали органы в систаме мать,- одно из поколений сибсов

дли приближения условий наших экспериментов к опытам на линейных жив ОТИЫХ .

Проведены 2 серии экспериментов. Б первой серии изучали структуру антигенов почек и печени новорожденных ценков и половозрелой собаки методом сравнений иротивогканевых гиперимчуышх сывороток ь реакциях двойной диадузип к шмуьоэлектрирореза. Противотканевио гипориммунные сыворотки получали путем иммунизации кроликов (шнншпли) воирастаадими дозами антигена почек и печени по схема Bifviih <¿1 й./-(1967). Кроликов разделили на 5 групп по 10 л каждой. I группа (контрольная) была представлена интактныыи животными. Кроликов П группы иммунизировали антигеном почек новорожденных щелков, кроликов 12 группы - печени новорожденных щенков, кроликов IJ группы - почек половозрелой собаки, кроликов У группы иммунизировали антигенами печени половозрелой собаки. Противогканавьш гипериммунные сыворотки абсорбировали последовательно сывороткой интактной половозрелой собаки и антигенами тканой гитсфологичных органов (сердце, легкое, селезенка, почень или почки),

Во второй серии экспериментов изучали реакцию организма на иммунизацию антигенами почек и печени новорожденных и половозрелых доноров. Эксперименты П серии проведены на крысах Мsfrtx-, которых также разделили на 5 групп по 60 в каждой. I группа (контрольная) была представлена интактными крысами. Крыс [[ группы иммунизировали антигеном почек новорожденных щенков, Ш группы -[Печени новорожденных щенков, 1У группы - почек половозрелой собаки, крыс У группы иммунизировали антигеном печени половозрело^ собаки. Крыс иммунизировали возрастающими дозами антигена по описанной нами схеме (Е.Н.Ахвяедиани и соавт. (1986). На 7-Й доньiпосла последней инъекции антигена у крыс изучали

- Л -

следующие параметры: уровень общего белка, альоумин-глобулиновый коэффициент, уровень противогкановнх антител с различным механизмом действия - працииитинов, гиммагглютининоп, комнлемонт-фиксирукнцих антител - в сыворотки, удельное количество Т- и В-лимфоцитои в периферической крови и активность митохондриальных Лермонтов (сукцинатдегидрогоназы и -глицерофосфатдегндрогяна-зы) в них. Функциональный статус лимфоцитов определяли в реакциях торможения миграции лоИкоцитов и иммунного лимфоцитолиза. Кроме того проводили морфологическое, и том числе обзор, морфо-метрию и электронную микроскопию, изучение регионарных (подколенных) лимфатических узлон и селезенки.

Для свотомикроскопичеокого исследования из каждого органа (подколенный лимфатический узел, селезенка) готовили срезы толщиной 6-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином, пиро-нином-мотклозш зеленым по Враше. Клетки в срезах подсчитывали при помощи квадратной измерительной сотки (Г.Г.Автандилов и соавт., 1981). Лля электронкомикроскопического изучения из органов на ультратоме КВ-Ш получали ультратонкие срезы; срезы опрашивали цитратом свинца. Электронномикроскопические препараты просматривались в электронном микроскопеТЕ£ЬА В-500.

Использовали стандартные варианты реакций.

Полученный цифровой материал обработан математически (Б.В. Гублер, 1978). достоверность межгрупповых различий показателей определяли с учетом критерия Стьюдента. Различия считались значимыми при р $ 0,05 .

РЕЗУЛЬТАТ* ИССЛЙДОиШЛ И ОБСУЖДЕНИЕ

I.серия пкеперимантов. После абсорбции все образцы противо-тканеаых гипериммунных сывороток продолжали реагировать с комно-

центами экстрактов тканей соответствующих орпшо:<. ¿¡склкменш; составляли лишь образцы сыворотки кроликов К группы, которые но реагировали ни с экстрактом ткани почек новорожденных щенков, ни с экстрактами тканей остальных органов.

Сравнительный анализ результатов изучения нротивотканевих гииериммунных (.абсорбированных) сывороток в реакциях преципитации в агара и иммуноэликтроу/ореза (Р^Э^) показал, что в экстракте почек новорожденных щенков содержится одна оргыноспецифическан антигенная детерминанта; антигенная детерминанта проявляет лишь серологическую активность в отношении готовых антител. Ь экстракте печени новорожденных щенков содержится не менее 2-х оргино-споцифических антигенных компонентов. Один из них индуцирует продукцию антител и вступает в серологические реакции с готовыми антителими, другой проявляет лиль серологическую активность. В экстракте почек половозрелой собаки содержится не менее 2-х ор-ганоопецифических антигоных детерминант, индуцирующих антитело-генез и серологически активных. Н экстракте печени .половозрелой собаки содержится не менее '+-х органоснецифических антигенных •компонентов, о чем свидетельствует гетерогенный характер 2-х полос преципитации в агаре и формирование <*-х дуг преципитации в РИЭФ. Боа 4 органоспецифических антигенных компонента индуцируют антителогоноз'в организме реципиента и вступают в серологические реакции с готовыми антителами.

Все нижесказанное может служить предположению об усложнении структуры антигена почек и печени собаки с возрастом. При этом • имеются в виду "интегридьные" .беики цитоилазматической мембраны ■ клеток (Х.Ьеуиер, 198?), Понятно, что в плане трансплантации органов практически значимы те антигенные компоненты, которые в организме реципиента индуцируют продукцию антител. С возрастом

собаки но только .усложняется структура антигена ночек и рочени, но и существенно повышается концентрация компонентов органоспе-цифичоских белков. Wо- иммунозликтрофоритической подвижности антиген печени ноиорождонного мошса соответствовал ^ -глобулинам, компоненты антигенов печени и почки половозрелой собаки к c¿--'H ¡3 -глобулинам.

11 серия экспериментов. Как видно из таблицы I, у крыс, многократно иммунизированных экстрактом Почек новорожденных щенков развивалась лишь тенденция к накоплению в сыворотке противотка-иовых антител с одним механизмом действия, например микропреци-литинов. иммунизация крыс экстрактом печени новорожденных щенков обусловливала тенденцию к накоплению в сыворотке животных проти-вотканевых антител о различным механизмом действия: микропреци-питинов, гемагглютининов, комплементфиксирующих' антител.

В условиях многократной иммунизации крыс экстрактом почек половозрелой собаки развивалось закономерное изменение режима работы иммунном системы как на гуморальном, так и на клеточном уровнях. Еще более четкое изменение режима работы иммунной системы наблюдалось на фоне иммунизации экстрактом печени половозрелой собаки. В этих случаях имели место существенный рост удельной концентрации В-лим^оцитов в периферическом крови, повышение уровня общего белка за счет ого крупнодисперсной фракции-глобулинов, и титра противотканеиых антител с различным механизмом действия в сыворотке. Кроме того наблюдалось достоверное увеличение удельной концентрации Т-лимфоцитов в периферической крови и формирование клона Т-лимцюцитов, активно продуцирующего WF-;.а.чтор и л'иаируюцогоия ui vil-^v г присутствии антиген'!, т.е. клоня сенсио'илил1роракш:х Г-димроцитов ( £>boi,j,&inii *лп , 1967; lo drum Л л1 1976; Т/с к , 1979; Anff.i сЫ rt¿, I960;

Некоторые показатели гуморального и клеточного иммунитета у крыс, иммунизированных экстрактами тканей

п = 16

Труппа животных Уровень общего белка, г/л АГК 1 - ш а о. я а Гемаг-глюти-нины, титр ^ КФ, Количество РОК • , % Т1лЛ, % ШЩ, индекс

Ой!) о к с о, з м - : ^ титр Е ЕАС

I контрольная П 65,0±2,5 69,0+4,0 0,76+0,1 0,74+0,1 1 + 1:2-1:8 1:2-1:8 1:5 1:5 5,9+0,44 6,5+0,7 4,9+0,37 5,6+0,5 3,3+0,2 3,5+0,4 1,15+0,05 1,3+0,2

ш 72,1+5,2 0,68+0,08 1 + 1:8 1:5 1:10 7,3+0,8 6,1+0,7 3,7+0,6 1,4+0,3

1У 86,7+4,0х 0,31+0,04х 3+ 1:64 1:80 19,8+2,3х 15,6+1,6х 33,7+3,Iх 12,2+1,3х

У ■89,6+4,0х 0,25+0,02х 3+ 1:128-1:64 1:80 1:40 22,5+1,5х 15,9+0,9х 35 ,2+2,Iх 13,5+1,0

к - Достоверность различий показателей интактных и опытных групп 0 ,05;

АГК - Альбумин-глобулиновый козффициент;

КФ - Комплемент-фиксирующие антитела;

РОК - РозеткооОразующие клетки;

ИЛ - Торможение миграции лейкоцитов;

ИЛИ - Иммунный ЛИМфОЦИТОЛИЗ.

■■11/

^12«/,о* ""<»£-1уеЬ). Для оценки иммунного статуса крыс были предложены оригинальные графики ("иммунограммы"), позволяющие иранпинать параметры у опытных и контрольных животных. К преимуществам "иммунограммы" следует отнести наглядность, возможность определения уроння различных звеньев иммунной системы вне зависимости от единиц их измерения (титр, г/л, % и др.), ¿1з рисунка I видно, что, если характер иммунного ответа в периферической крови зависит от возраста донора, то его интенсивность определяется видом антигена.

Рис. I. "Иыыунограмыы" опытных (заштрихованный неправильный многоугольник) и контрольных (круг) крыо

Изменение режима работы иммунной- системы, регистрируемое у крыс, иммунизированных антигенами почек и печени новорожденных щенков и половозрелой собаки на уровне периферической крови, в наших случаях было подтверждено и результатами морфологических исследования иымунокоыпетентных органов. Так, в регионарных (подколенных) лимфатических узлах и селезенке иммунизированных животных имело место усиление процессов пролиферации и дифферан-

циации лимфои«них клеток. Подтверждением сказанному могут служить такие гисто-цитологичоские и гисто-химичеокио показатели, как повышение плотности клеток, увеличение числа зародышевых цонтров, митотических фигур, больших лимфоцитов, включая и властные формы; повышение уровня рибонуклеонротоинов в клетках (табл. 2-5).

Усиление процессов пролиферации и дифференциации лимфоид-ных клеток затрагивало Т- и В-зоны 1Ш и селрэенки и в конечном счете приводило.к накоплению в них плазматических клеток и активированных Т-лиыфоцитов. Как известно, плазматическая клетка это эффекторкая форма В-популнции лимфоцитов с уже завершенным морфо-функциональным развитием, способная к продукции ^-глобулинов, т.е. антител (Ф.Еернег, 1971). Наиболее характерной ультраструктурой плазматической клетки является развитый гранулярный энлоплазматический ретикулум .(ГЭР). Считают, что активированный Т-лимфоцит, отличающийся обилием свободных рибосом и попирибо-соч в сравнительно широком ободке цитоплазмы и отсутствием ГЭР (А.Хэм, Д.Кормак, 1982), подобен клеткаы-бластам, которые обнаруживаются VI ¿к? в культурах лимфоцитов при добавлении к ним митох'внов, например фитогемагглютинина (М.М.Авербах и соавт., 1973; Э.С.Батчер, И .Л.Вайссман, 1985, /Г«^ , 1975; £у(- аХ > 1982). Активированный Т-лимфоцит способен к неоднократному делению и формированию клона эффокторных Т-лимфоцитов, продуцирующих тормозящий миграцию макрофагов или лейкоцитов фактор и оказывающих цитотоксический эффект на ш.етки-мишони. На 4оне иммунизации антигенами почек и печени новорожденных щенков в подколенньх лимфатических узлах и селезенке реципиентов проке-, ходило накопление »ишь я/.озкахйчсских клеток, тогда как при ка-попьзоьаиив в качестве агтигопа белков почек и печен;: ¡¡о..о'ои»

Табл;:иа 2

Данные иорфометрического изучения В-зоны регионарных лимфатичеслпх узлов иммунизированных крыс в зависимости от возраста донора и характера

антигена „ _ с

Группа Число зарода-¿ибьых центров, п/з Лимфоциты, £ /С Плазматические клетки, ? •Клетки с густой пиронпно-физиеи, ¡3 ;.!итозы

гашотных болькие средние малые ! 1

I' ■ контрольная 0,1 8,5+0,8 28,8+2,0 41,6+3,9 2Д +0,2 3,1+0,3 1 0,30+0,03

Л 0,2 12,5+1,1х 26,3+2,2 43,6+4,0 4,3+0,3х 7,5+0,5х ,0,52+0,02

п м 0,2 13,1+1,4х 27,6+2,3 45,2+3,7 3,9±0,3Х II,4+0,9х 0,39+0,05

1У 0,5 20,6+1,9х II,4+1,0х 54,8+4,5х 9,5+0,7х 14,1+1,1х 0,76+0,07х

У 0,? 21,9+2,0х 10,3+0,9х 55,5+4,4х 10,6+0,8* 20,2+1,2х 1,05+0,08х,

* - Достоверность мажгрушюБых различий показателей с$ 0,05.

Данные морфометрического изучения Т-зоны подколенных лимфатических узлов иммунизированных крыс в зависимости от возраста донора и характера антигена

' (в %)

п-= 5

Группа животных Лимфоциты ■ Плазматические клетки Клетки с густой пиронино-фидиай Митозы

большие средние малые

I контрольная 3,2+0,3 21,6+2,2 53,1+5,4 0,62+0,05 0*8+0,1 0,20+0,02

П 3,6+0,4 20,0+1,9 55 ,4+5,2 0,57+0,04 1,5+0,Iх 0,20+0,02

Ш 3,9+0,3 20,7+2,0 ■ 56,8+5,1 0,55+0,05 2,7+0,2х 0,20+0,02

1У •14,2+1,2х -15,1+1,2х 65,2+3,1 0,64+0,04 б, 1+0,4х 0,60+0,05х

У 13,6+1,1х 15 ,2+1,0х 67,1+3,5х 0,61+0,04 9,5+0,7х 0,90+0,08х

х - Достоверность межгрупповых различий показателей ^ 0,05 •

TáC-I/lUÜ +

данныа морфоиетрическсго изучения в-аокк селезенки иммунизированных ¡¡рыс в зазксгвости от ьозраота доноаа и характера антигена

>i = 5

Группа - ол 0 зароды- ИоВЫХ центров, п/з Лимфоциты, * Плазматические клетки, сг Р Клетки с густой пиронинр- ф и ли ей, %

животных большие Средние малые Митозы, л»

I кснтродь-ная 0,2 7,4+0,6 22,3+2,1 52,2+5,1 I,4+0,1 2,5+0,2 0,30+0,04

П 0,3 15,3+1,5х 19,1+1,6 50,1+5,0 3,IZ0,3X 5,4+0,5х 0,30+0,02

S ОЛ 17,6+1,6х ' 19,5+1,7 49,3+5,2 3,0+0,3х 8,1+0,7х 0,35+0,02

и 0,7 26,8+2,4х 14,6+1,1х 43,5+4,1 6,2+0,5х 17,9+1,4х 0,60+0,05х

У '1,0 29,1±2,2Х 13,8+1,0х 42,6+3,9 6,5+0,4х 24,9+2,Iх 0,90+0,07х

s - Достоверность ыежгрупдовых различий показателей íj 0,СЬ

Данные морфометрического изучения Т-зоны селезенки иммунизированных крыс в зависимости от возраста донора и характера'антигена (в %)

П = 5

Группа Лимфоциты, % Плазматические клетки Клетки с густой пиронино- фИЛИЗЙ Митозы

аивотных большие средне малые

I контрольная 2,9+0,3 15,2+1,5 61,3+6,1 - 1.,1±0,1 0,30+0,02

П 3,4+0,3 14,6±1,5 62,2+6,0 - 1,5+0,2 0,20+0,02

ш 4,1+0,3х 13,9+1,2 63,9+5,7 - 2,3+0,2х 0,30+0,02

17 .21,5+2,1х 7,8+0,6х 62,8+5 ,5 - II,2+1,Iх 0,50+0,04х

У 22,8+1,9х 7,5+0,5х 63,1+4,9 - 16,7+1,3х 0,80+0,07х

х - Достоверность межгрупповых различий показателей 0,05.

релой сооаки в периферических имыунокомпетентных' органах концентрировались как плазматические клетки, так И активированные Т-лиыфоциты. Причем в (1ЛУ реципиентов в сравнении с сел( зенкой значительно чащи встречались плазматические клетки с резко расширенными канальцами ГУР и крупными мешкоподобмиыи вакуолями, непосредственно примыкающими н цитоплазматичеикой мембране и содержащими гомогенное электронноплотное вещество. Биохимичеокое • исследование подибного вещества выявлнет в нем белки и ыунсполи-сахариды, оно проявляет антительную активность к -глобулину (В.а.Афанасьева, 1984; В.В.Меунаргия и соавт.,. 1986; Н.В.Чикова-ни, 1988; [гг. $ о 1.1 ('е./ с- «I , 1978;йэ/«п Л «¿1979; Улп Ссо ¿1 1981\Р(!иг>1 аС, 1986). Отмеченный факт, надо полагать', свидетельствует в пользу большей функциональной напряженности плазматических клеток в 1Ш в сравнении о селезенкой (К.А. Зуфарои и соавт., 1983), что возможно связано со способом введении (подкокно) антигена а наших случаях. Степень выраженности ' морфологических изменений в подколенных лимфатических узлах и селезенке (число зародышевых центров, митотических фигур, плотность лимфоидных элементов, относительное содержание клеток с густой пиронинофилиай) достигала максимума на фоне иммунизации антигенами печени половозрелой собаки, при иммунизации антигенами почек новорожденных щенков Сила минимальной. Зависимость ооо-оенностей и интенсивности гистохимических и иыыуноцитохиыичоских изменений и тимусе, регионарных лимфатических узлах и селезенка подопытных животных от возраста доноров и характера антигена была винилена и в работе р.Г.Панцу-лая (1989), Корреляция между особенностями процессов, индуцируемых антигенами, и типом антигена, дозой и способом его воздействия т исключается 'ом

(1980, 1982).

Многократная иммунизация крыс экстрактами тканей (почка, печень) приводила к существенным качественно-количественным изменениям активности митохондриальных сукцинатдегидрогеназы и об--глицерофосфатдогидрогеназы в лимфоцитах периферической крови. Качественно-количественные изменения активности ферментных систем, принимающих непосредственное участие в обменных внутриклеточных процессах, надо полагать, отражают необходимость мобилизации иммунного ответа на антигенное раздражение и, в известной мере, степень напряженности иммунной системы.

Выявленные качественно-количественные изменения активности сукцинатдегидрогеназы и ¿> -глицарофосфатдегидроганазы отражались на структуре популяции лимфоцитов. Особенности структуры популяции лчмфоцитов зависели в основном от возраста доноров тканевого материала, в меньшей степени от вида антигена. При использовании в качестве иммунизирующего материала антигенов почек и печени новорожденных щенков отмечалась тенденция к росту числа клеток с высоким уровнем активности митохондриальных дегидрогеназ. На фоне иммунизации антигенами органов половозрелой собаки регистрировалось существенное накопление клеток как с высокой, так и с низкой активностью ферментов (табл. 6). Можно предположить, что чаткая дифференциация популяции лимфоцитов периферической крови по уровню активности митохондриальных дегидрогеназ обусловлена формированием в этих случаях реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типов. Известно, что более многочисленная субпопуляция лимфоцитов с высоким уровнем активности СДГ и fr -ГОДГ ответственна за реакции гиперчувотвительности немедленного типа, тогда как субпопуляция лимфоцитов с низким уровнем активности СдГ и оу-ГФДГ - за реакциипротекающие по типу гиперчувст-витальности замедленного типа (Р.П.Нарциссов, 1978).

- -¿Ь -

/рштив л'тиьно^ги мы-ихоидриалишх дегндрогиньз а Iиг!шцитах. (и;|1Н 1рич^ч)коа кро1|И к^ио, иммунизированных лнмрвнтаии ткииин

= 1Ь

^ ! г: 11 13.-ч

I

контроль

п

■Уролонь актмнностя митихондриальных деыдрогшми в лимфоцитах

сукциннт догидригенази

НИЗКИЙ

14,0/2,6 12,0/2,Ь .14,0/2,7 2 2,$3,1 22 ,$3,2

(V -глицироц.ио-фа^ да гидр о гон азы

средний высокий низкий средний высокий

70,0/10,5 16,0/17,7 16,0/1,6 58,0/6,5 ,«16,0/13,2

70,0/10,'; 18,0/18,7 16,0/1,7 54,0/6,й 30,0/14,3

ев, 0/10, (, 18,0/18,9 14,0/1,7 54,0/6,9 32,0/14,0

55,0)10,7 2Я, 0^23, 2х 22 ,$2,1 42, $7,3 36,$16,2х

44 ,$П),н 34, 7* 24,$2 ,5 34, $8,0 42, $21,1х

- достоверность различий показателей у интактных и опытных групп ^0,05;

•- в числителе дроои дано относительное содержание киоток (;«) с мм или иним уровнем активности фермента, в'знаменателе - число гранул продукта реакции.

Б условиях наших экспериментов инверсия активности сукцинит--дегидрогеньиы и «С--глицерофосфатдбгидрогеназы не наблюдалось. Бо всех случаях поьышенио активности СДГ сопровождалось повышением активности оС-••ГФдГ при степени достоверности коэффициента корро- • ляции <0,01.

ВЫВОДЫ

I. Структура антигенов почек и печени собак с возраиток усложняется за счет компонентов, способных н индукции антителогене-уо в организме реципиента. С возраетои же а почках и печени со-

бак повивается и концентрация всех; компонентов антигена.

2. Индуцирующие антитологенез компоненты антигена почек и гючени половозрелой собаки по иммуноэлоктрофоретичнской характеристике следует отнести к & - ир -глобулинам, а печени новорожденных щенков - к оС- -глобулинам.

3. В антигенной структуре глобулинов печени половозрелой собаки содержатся группировки,. сходные с антигенными детерминантами почек того же возраста.

4. Антигены почек и печени собаки с возрастом претерпевают качественные изменения, о чем свидетельствует участие различных патогенетических механизмов в реализации иммунного ответа у реципиента при использовании экстрактов органов новорожденных щенков и половозрелой собаки.

5. Многократная иммунизация антигенами почек и печени новорожденных щенков приводит к развитию в организме реципиента реакций гуморального типа, что проявляется ростом относительного содержания В-лиыфоцитов в периферической крови, повьшонием титра прогивотканеиых антител в сыворотка, накоплением активированных Б-яимфоцитов в регионарных лимфатических узлах и селезенке. На фоне иммунизации антигенами почек и печени половозрелой собаки

в организме реципиента формируются реакции как гуморального, так к клеточного типа; при этом дополнительно регистрируются повышение тормошения миграции лейкоцитов, индекса иммунного лимфоцито-лизн и концентрация активированных Г-лимфоцитов в регионарных лимфатических узлах и селезенке.

6. Интенсивность иммунологической перестройки в организме подопытных животных зависела от вида антигена. Титр противотка-иовых антител, удельная концентрация Т- и В-лик'фоцитов, торчожо-ние миграции лчиксцитс» и индекс иммунного лимфоцитолиэа в пзри-

ферическои крови, а также выраженность процессов пролиферации и дифференциации в регионарных лимфатических узлах и селезенка были максимальными на фоне иммунизации антигенами печени половозрелом собаки и минимальными - антигенами почки новорожденных панков.

7. Структура популяции лимфоцитов периферической крови по уровня активности ыитохондриаиьных и сукцииатдегидрогеназы и d/~ глнцерофосфатдегидрогвквзы при многократном иммунизации антигенами почек и печени собак зависит от возрасти донора тканевого материала. При иммунизации антигенами почек и лечени новороздан-ных ленков существенно увеличивается популяция лимфоцитов с высоким уровней активности дегидрогеназ. Иммунизация антигенами почек и печени половозрелой собаки обеспечивает накопление клеток как с ниоиким, так и низким уровшши их активности.

Список опубликованных научных работ по тема диссертации:

1. Антигенная структура почки новорожденных щенков и поло-joapejiux cuCdK // TJI республиканский науч. кои$. молодых кодаков Гругии, носвященная 70-летию Вэл. Октябрьской революции. -2бияиои. ~ Ii37, - С. 369 (в асавт. с Р.Г.Панцулая).

2. Дцтигэнная структура печени и почки новорожденных цонкез ч пояозозреяй» ооо'ук // Г,звастия АН IVCP, оарт бзояогачоская. -1989. - Т. 15, и- 5. - С. 345 (в соааг. с Э.Я.Нацмшвила, И.И.'Ги-.чочук).

3. Состоянии гуморального и клеточного иммунитета у крыс, аммунлзирован/шх тканевым« антигенами // Известия AU 1VCР, серия отологическая. - 1990. - Т. 16, 4s I. - С. 51 (в соавг. с Э.Л.аацяаввйяя," II.il.Хирсели, й.Н.Ахаладиавд).