Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка системы стандартизации и контроля качества лекарственных средств группы фенотиазина

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР /^(з

Первый Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицински|Пинститут им. И. М. Сеченова

л, ^ " пРавах Рукописи

Г

УДК 615.07.543:615.214:615.22

'

у ПРОКОФЬЕВА Вера Ивановна

ш,. .-.-уV

ЧУ-,'■'

«о. -

РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ СТАНДАРТИЗАЦИИ И КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ГРУППЫ ФЕНОТИАЗИНА

15.00.02 — фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва — 1989

Диссертационная работа выполнена в I Московском ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте им. И. М. Сеченова.

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор

Г. А. Мелентьева

доктор фармацевтических наук Н. С. Евтушенко

доктор химических наук, профессор А. П. Сколдинов

Ведущее учреждение:

Всесоюзный научно-исследовательский институт химии и технологии лекарственных средств.

Защита состоится « ...»......... 1989 г. в ... часов

на заседании Специализированного Совета Д-074.05.06 при I Московском ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте имени И. М. Сеченова (г. Москва, Б. Пироговская ул., 2/6).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института (г. Москва, Зубовская площадь, д. 1).

Автореферат разослан « ... »........ 1989 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета Д-074.05.06 кандидат фармацевтических наук, доцент Н. П. Садчикова

.lff.it

I А'Л

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

■Актуальность тема. Улучшение обеспечения учреждений здра-

воохранения высокоэффективными средствами связано с совершенствованием методов юс стандартизации и контроля качества.

В медицине используются многие высокоэффективные производные фенотиазина с различный фармакологическим действием на организм. Препараты этого ряда являются не только садами распространенными нейролептиками, но находят широкое применение в кардиологии, хирургии, акушерстве, дерматологии и других областях медицины.

Внедрение производных фенотиазина в медицинскую практику с каждым годом продолжает расширяться. Высокая фармакологическая активность этих лекарственных средств, необходимость их длительного применения, лабильность химической структуры, а также постоянно возрастающий уровень требований к качеству лекарственных средств обуславливает необходимость системного и более глубокого изучения хиническкх и физико-химических свойств соединений данного ряда в рамках общего совершенствования фармацевтического анализа.

Дальнейшее развитие фармацевтического анализа во многом зазисит от эффективности использования комплекса современных физико-химических методов, позволяющих оперативно и надежно получать информацию о качестве, и находится в прямой зависимости от уровня требований, заложенных в нормативно-техническую документацию (НТД).

Как показал критический анализ имеющихся данных, существующие методы контроля качества исследуешх лекарственных веществ часто несовершенны по многим показателям, не подкреп-

лены соответствующими теоретическими обоснованиями, не унифицированы; отсутствуют системные данные по оценке качества производных фенотиазина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), что не позволяет надежно оценить качество лекарственных средств данной группы.

Разрозненность, недостаточность или отсутствие данных по оценке качества группы не позволяет осуществлять выбор и прогнозирование методов и систем на научно обоснованной основе при создании и пересмотре НТД.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлось проведение системных исследований свойств лекарственных веществ, производных фенотиазина, теоретическое и эскпери-ментальное обоснование принципов комплексного использования химических и физико-химических методов на основе единых форы испытаний для разработки системы стандартизации лекарственных средств данной группы.

Методический подход основан на разработке, сравнительной оценке и выборе оптимальных методов, позволяющих наиболее полно характеризовать качество исследуешх препаратов по различным. показателям.

Для достижения поставленной цели исследования необходимо было решить следующие основные задачи:

1) изучить современное состояние вопроса по контролю качества и стандартизации лекарственных средств данной группы и провести научно обоснованный выбор методов, позволяющих более эффективно контролировать качество;

2) на основании сравнительной оценки электроно-донорных свойств, окийлительно-восстановительных реакций с различными реагентами обосновать и разработать общие и специфические

испытания качества; исследовать оптимальные условия окисления производных фенотиазина калия броматом в кислой среде, исследовать продукты реакции; на основе экспериментального изучения процесса окисления разработать унифицированную методику идентификации соединений данной группы;

3) исследовать продукты взаимодействия производных фенотиазина с пикриновой кислотой (метод ИК-спектроснопии и деривато-графии) и оценить полезность полученных данных для стандартизации;

4) провести теоретические исследования по оптимизации и стандартизации определения производных фенотиазина методом ТСХ, исследовать возможные корреляции "вещество - хроматографическое поведение", дать математическое описание хроматографическому процессу в унифицированных системах с цэлыо прогнозирования хроматографических характеристик; на основании полученных данных разработать эффективные методики контроля качества лекарственных средств данной группы методом ТСХ;

5) изучить возможность и показать перспективы применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для оценки качества лекарственных средств данной группы;

6) на основе изученных закономерностей реакций окисления, сроматографического поведения(ТСХ, ВЭШХ), исследования терми-геских свойств предложить систему нормативно-технического обес-гечения, гарантирующую постоянство качественных показателей ле-сарственных средств группы фенотиазина.

Научная новизна. Предложен оптимальный на современном |Тапе методологический подход к совершенствованию контроля :ачества лекарственных средств, производных фенотиазина, ос-:ованный на системе комплексного применения химических и

физико-химических методов с оценкой эффективности и математический обоснованием каждого из низе.

Исследован процесс окисления производных фенотиазина калия броматом в кислой среде. Методом многофакторного планирования эксперимента установлены оптимальные условия стабилизации реакции на стадии катион-радикалов.

Впервые установлена возможность применения щелочного раствора гидроксиламина в качестве окислителя соединений данной группы. Приоритет предложенных способов защищен 2 авторскими свидетельствами.

Научно обоснована и экспериментально подтверждена целесообразность применения термических методов для идентификации исследуешх лекарственных веществ. На основе метода распознавания образов предложены два решающих правила для идентификации 10-алкил- и 10-ацилпроизводных фенотиазина по их термографическим показателям.

Всесторонне изучено поведение лекарственных веществ, производных фенотиазина, в тонком слое сорбента, впервые дано математическое описание хроматографического процесса в системе гексан-ацетон-диэтиламин (50:30:2). Предложена оценка эффективности методик на основе сочетания разделяющей силы (ДР) и коэффициента эффективности разделения (Кра3д )•

Изучены условия селективного разделения лекарственных веществ, производных фенотиазина, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показана возможность более широкого использования разработанных вариантов как основы для разработки методик в аналитическом контроле (подлинность, чистота, количественное определение лекарственных форм).

Практическая ценность и внедрение результатов исследова-

ния. Практические результаты исследований реализованы в предложенной системе стандартизации лекарственных средств, производных фенотиазина.

В Г$ СССР XI издания для идентификации препаратов данной группы предложен реактив-окислитель - калия бромат в кислой среде. Методические указания "Методы контроля лекарственных средств. У$- и ИК-спектроскопия в идентификации лекарственных средств» производных фенотиазина"(МУ-64-005-87) введены в действие Техническим управлением Мшшедбиопрома СССР с I июля 1987 года.

Разработаны и предложены более эффективные по сравнению с существующими методики определения качества исследуемой группы методом хроматографии в тонком слое сорбента.

По результатам исследования утверздено 7 фармакопейных статей и подготовлено 7 проектов изменений НЦД.

Общая схема окисления, методики окисления и унифицированные системы ТСХ используются в учебной работе фармацевтических зузов :: кгфздр на практических занятиях и при чтении лекционного курса по фармацевтической химии; опубликованы в книге 'Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической хи-!ии" (для студентов фарм.вузов), М., 1987.

На защиту выносятся:

Результаты по совершенствованию системы контроля качест-а и стандартизации лекарственных средств, производных феноти-зина:

результаты исследований по изучению реакции окисления производных фенотиазина калия броматом в кислой среде; обоснование целесообразности применения термических методов для идентификации исследуемых лекарственных веществ;

- б -

- результаты исследований в области хроматографии в тонких слоях сорбента производных фенотиазина (установление корреляций, концепция выбора эффективных систем);

- результаты изучения условий селективного разделения производных фенотиазина методом ВЭЖХ как основы для разработки аналитических методик определения их качества.

Апробация работы.■Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на П и 1У Всесоюзных съездах фармацевтов (Рига, 1974 г., Казань, 1986 г.), П, 1У и У Всероссийских съездах фармацевтов (Саратовs1969,г., Воронеж, 1981 г., Ярославль, 1987 г.), Всесоюзных и Республиканских научных конференциях (Москва, 1987 г., Каунас, 1985 г.), на международном симпозиуме "Хроматография в биологии и медицине" (Москва, 1986 г.), на итоговой научной конференции фармацевтического факультета I ИМИ им. И.М.Сеченова (Москва, 1988 г.).

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Тема исследования соответствует плану научно-исследовательской работы I ММИ им. И.М.Сеченова и соответствует тематике научных исследований союзной проблеш "Фармация" научного совета № 10 "Фармакология и фармация" АМН СССР, номер гос. регистрации 81003389.

Публикация. По теме диссертации опубликовано 34 работы, получено 2 авторских свидетельства и I рационализаторское предложение.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 325 страницах машинописного текста, содержит 48 таблиц, 58 рисунков и состоит из введения, обзора литературы (первая глава), пяти глав, посвященных экспериментальным исследованиям, общих выводов и приложения. Библиографический

указатель включает 345 источников литературы, из них - 194 отечественных, 151 - иностранных авторов, в приложении даны материалы по внедрению.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Лекарственные средства группы фенотиазина. Методы их анализа и стандартизации

Данная глава (I) диссертации представляет собой краткий обзор литературы. В обзоре особое место уделено исследованию характерных химических свойств (реакции окисления, комплексо-образования), физико-химическим методам (термическим, оптическим и хроматографическим), а также их применению в анализе лекарственных средств данной группы.

В главе рассмотрены современные тенденции в оцэнке качества лекарственных средств. Сделан вывод, что проблема совершенствования методов контроля качества лекарственных средств вообще, и производных фенотиазина в частности, должна решаться в рамках системных и комплексных исследований по разработке:

- научно обоснованных принципов и методов стандартизации для интегральной оценки качества лекарственных веществ исследуемой группы;

- эффективных и селективных методов на основе единых форм испытаний с оценкой их эффективности, целесообразности, полезности современными методами математической статистики с цзлью принятия оптимальных решений, - именно такой подход положен

в основу экспериментальной работы.

2. Исследование реакции взаимодействия 10-алкил-производных фенотиазина с калия броматом в кислой среде

В ГФ СССР X издания для идентификации лекарственных

средств, производных фенотиазина, используется реакирм с бромной водой при нагревании, - нестойким и токсичным реактивом, многие препараты дает сходное окрашивание и осадки, - в связи с этим мы поставили своей целью провести выбор более оптимального окислителя и изучить продеты реакции. В результате использования концентрированных кислот и реактивов на их основе, металлов с переменной валентностью, пероксида водорода, анионов кислородсодержащих кислот и других окислителей, было найдено, что оптимальным реагентом по аналитическим характеристикам для дифференциации 10-алкилцроизводных является калия брома? в присутствии соляной кислоты.

Изучены основные факторы для выбора оптимальных условий реакции: концентрация реагентов, температура, кислотность среды; в результате было найдено, что оптимальные концентрации: 0,1% водные растворы препаратов; 1% водный раствор калия бро-мата (или,как показали дальнейшие испытания, эквивалентное количество 0,1 н раствора калия броматер. Показано, что по сравнению с бромной водой, реакция проходит легко, без нагревания, чувствительность определения повышается в 40 раз; приоритет автора подтвержден авторским свидетельством. Ыетодика: к I мл 0,1% водного (или в случае метеразина водно-спиртового 1:1) раствора препарата прибавляют 0,15 мл (3 капли) разведенной соляной кислоты и 0,15 мл (3 капли) 1% водного раствора калия броыата, - отмечают полученное окрашивание. Спектры поглощения окрашенных продуктов окисления производных фенотиазина в видимой области подтверждают данные литературы о зависимости цвета окрашенных продуктов окисления от природы радикала в положении 2 цикла фенотиазина, - результаты представлены в таблице I.

Таблица I

Результаты взаимодействия 10-алкилпроизводных фенотиазина с КВчОд в кислой среде

№

п/п

Исследуемый препарат

Наблвдаемый результат реакции

Л щах нм

Предел обнаруж.

моль/л

1. Аминазин

2. Пропазин •3. Дипразин

4. Динезин

5. Метеразин

6. Этаперазин

7. Трифтазин

розовое окрашивание, переходящее в малиновое

526 7.10

розово?-красно-оранжевое с образованием мути, а затем вишневого осадка Св течение 10 мин.)

розовое, переходящее в малиновое

розовое, переходящее в малиновое

розово-оранжевое, переходящее в коричневое, которое, постепенно исчезает

-5

розовато-оранжевое, пе-

* • ' Г Ал ГЧ Л ТЛ1

реходящее в коричневое 506 7,8 • 10

-5

7,8'КГ5

розовое, переходящее

через красно-оранжевое 5

в розово-сиреневое 7,5 "10

526 4,1 • 10

-5

526

502

6,2-Ю-5 5,2 • Ю-5

При нагревании происходит быстрое исчезновение окрашивания, что может быть положено в основу оксидиметрического титрования препаратов.

Разработано окседиметрическое определение аминазина в присутствии раствора концентрированной соляной кислоты и воды (1:2) при температуре 80-90.°С, титруют раствором калия

бромата е(1 КВчОо) до обесцвечивания; наЭДенное содержание -6

99,81 ± 0,06%.

Найдено, что первоначальными продуктами окисления Ю-алкил-производных фенотиазика калия броматом в кислой среде являются

катион-радикалы, что установлено методом спектроскопии электронного парамагнитного резонанса ( лН спектров ЭПР аминазина 1,6 irfT, динезина(дипразина 1,8 iff, этаперазина, пропазина -

Основными факторами, влияющими на стабильность окрашенных продуктов реакции, как было установлено, являются концентрация реагентов и поддержание определенного рН среды.

Методом матештического планирования эксперимента (раздел выполнен при консультативной помощи доктора фармацевтических наук Ы.А. Векслера) были найдены варианты с использованием различных количеств калия бромата, соляной кислоты и буферного раствора рН ^ 1,0, которые позволяют стабилизировать реакцию на уровне катион-радикалов (постоянство оптической плотности в течение 30 минут), - согласно одной из возможных схем реакции:

2,0 ьЯ).

[^НОН

О т

На основании полученных данных была составлена математическая модель и уравнение регрессии:

= 0,326 + 0,054х, - 0,015хг + 0,00475 '

Л

где £ - величина оптической плотности;

X, - концентрация соляной кислоты;

X - концентрация калия бромата; в работе применяли глициновый буфер рН 1,0.

Найденные условия положены в основу методики количественного определения аминазина в 2,5% растворе для инъекций; относительная ошибка среднего результата при определении в модельной смеси не превышает + 1,23%.

При окислении дипразина калия броматом в кислой среде, в отличие от других 10-алкилпроизводных фенотиазина, образуется осадок, растворимый в органических растворителях, не растворимый в минеральных кислотах и щелочах.

В ИК-спектре продукта окисления дипразина отмечено наличие характеристических полос в области 1300 см~* ( ^аг 50а ), 1140 см"1 ( ^ 30г ), 1080 см-1 (^50 ), отсутствие полос при 740, 760 см-*, характерных для циклической группировки -СН^-З что позволило сделать предположение о следующем

механизме окисления:

- 12 -

На основании спектральных и хроматографических (ТСХ, ВЭЖХ) исследований продуктов реакции окисления 10-алкилпроизводных фенотиазина калия броматоы в кислой среде установлено, что в результате окисления образуется суша продуктов окисления, среди которых идентифицированы катион-радикалы (первоначальные окрашенные продукты) и соответствующие сульфоксиды (конечные продукты реакции, - в обесцвеченных растворах).

Методика окисления 10-алкилпроизводных фенотиазина калия броматом в кислой среде рекомендована наш в ГФ СССР XI издания для субстанций и лекарственных форм вместо реакции с бромной водой.

3. Реакции окисления в идентификации 10-ацил-производных фенотиазина

Для идентификации лекарственных средств, 10-ацилпроизвод-ных фенотиазина (хлорацизин, фторацизин, нонахлазин, этмозин, этацизин) ГФ СССР X издания в качестве окислителя рекомендуется бромная вода. Существенными недостатками реакции является отсутствие дифференциации с 10-алкилпроизводными фенотиазина,

о

недостаточная чувствительность ( ~10 г/мл), нестойкость реактива, недостаточная воспроизводимость.

В данном разделе нами показано, что Ю-ацилпроизводные фенотиазина устойчивы к окислению за счет наличия сильной электроноакцепторной группы в положении 10 и окисляются:

- концентрированной серной кислотой и реактивами на ее основе;

- реактивами, осуществляющими гидролиз амидной связи с одновременным (или последующим) окислением образовавшихся соответствующие 2-замещенных фенотиазина;

в качестве последних мы применили:

- 13 -

а) щелочной раствор гидроксилвыина;

б) калия бромат (после предварительного гидролиза препаратов соляной кислотой).

а) 10-ацилпроизводные фенотиазина дают окрашенные продукты окисления со щелочным раствором гидроксиламина при определенном значении рН среды (~4,0): к I мл 0,02$ водного раствора 10-ацилпроизводных фенотиазина прибавляли 2 мл этилового спирта, I мл свежеприготовленного раствора гидроксиламина, I мл разведенной соляной или азотной кислоты, - возникает окрашивание, цвет которого зависит от характера радикала в положении

2 цикла фенотиазина (предел обнаружения г/мл); приоритет

автора подтвержден авторским свидетельством (1982). Реакцию дают также другие относительно легко окисляющиеся вещества (амидопирин, анальгин, резорцин) и при изменении порядка добавления реактивов (щелочной раствор гидроксиламина добавляется по каплям к подкисленным растворам препаратов).'

Высказано предположение, что окисление соответствующих 2-замещенных фенотиазина осуществляется нитрит-ионом, образующимся в определенных условиях из гидроксиламина.

б) Исследовано окисление 10-ацилпроизводных фенотиазина калия броматом после предварительного гидролиза с разведенной соляной кислотой (в условиях, аналогичных 10-алкилпроизводным). Показано, что при гидролизе 10-ацилпроизводных фенотиазина

при нагревании их с разведенной соляной кислотой в течение 15-60 минут образуются соответствующие 2-земещенные фенотиазина, найдены оптимальные условия реакции, разработаны методики для идентификации 10-ацилпроизводных фенотиазина в субстанциях и лекарственных формах: к I мл 0,5 %

водно-спиртового (1:1) раствора препарата (хлорацизин, нона-хлазин, фторацизин) или водного раствора (этмозин, этацизин) прибавляют 3 капли (0,15 ыл) разведенной соляной кислоты, нагревают 15 минут на кипящей водяной электрической бане, охлаждают, прибавляют I мл этилового спирта и 3 капли (0,15 мл) 1% водного раствора калия бромата, - отмечают полученное окрашивание сразу и в течение 10 минут (предел обнаружения ~2,5.Ю-4 г/мл).

4. Применение дериватографии для идентификации лекарственных веществ, производных фенотиазина

Оценка качества препаратов может быть в значительной степени расширена характеристикой их термических свойств. Наиболее перспективным методом определения термических характеристик лекарственных веществ является метод дериватографии, сочетающий в себе полиинформативность с высокой экспрессностью проведения анализа. Необходимость дальнейшего развития и применения термического.анализа подчеркнута в работах В.А.Попкова, 1984 г.; Ю.А.Золотова, 1985 г.; I).§/;гоа, 1986 г.:Целью данного раздела работы было изучение возможности применения-

дериватографии для идентификации лекарственных веществ, произ-

1

водных фенотиазина, температуре плавления которых довольно близки (пропазин 17б-181°С, хлорацизин (171-175°С), а |интер-валы плавления некоторых,достаточно широки (трифтазин 232-240°С), а также для их пикрагов,- определение температур плавления последних широко используется в зарубежной нормативно-технической документации пр! исследовании лекарственных форм.

Пикраты лекарственных веществ были получены наш по ме-" тодике Британской фармакопеи (1980, 1988 г.) и охарактеризованы по температурам плавления и ИК-спектрам.

Дериват ограмш образцов получены на приборе "Дериватограф 1050" производства ВНР "MOM", скорость нагрева 5°С/мин до 500°С в динамической атмосфере воздуха, эталон - окись алюминия, мае са образца 0,100 г + 0,0005.

Получены дериватографические характеристики 12 лекарствен ных веществ, производных фенотиазина, их пикрагов, а также фе-нотиазина, 2-хлорфенотиазина и 2-трифторметилфенотиазина.

Количество термических эффектов, температурные интервалы, в которых они наблюдаются, индивидуальны для каждого лекарственного вещества в условиях эксперимента.

Учитывая близость химического строения лекарственных веществ, производных фенотиазина, сложность соотнесения и интерпретации полученных данных, мы исследовали возможность идентификации изучаемых лекарственных веществ по термографическим данным методами математической статистики. Анализ термографических' данных проведен наш совместно с кандидатом технических наук Т.А.Спиридоновой в лаборатории медицинской кибернетики ; В0НЦ АМН СССР при помощи разработанного пакета программ многофакторного статистического анализа ACTA под руководством доктора технических наук Т.Г.Глазковой.

Для идентификации производных фенотиазина по данным термографии построено решающее правило по методу Байеса. Получено два.варианта:

1) для идентификации 3 классов;

2) для дифференциации двух групп (10-алкил- и 10-ацил-производных)

Решающее правило представляет собой таблицу 2, в которой каждому проявлению признака соответствует свой козффиц^нт. Для идентификации вещества складываются соответствующие ему веса в признаках:

- 16 -

а) субстанции; подсчитывают три соответствующие суммы весов,- максимальная сумма определяет класс: I класс - Ю-незамещенные фенотиазина; = 3; П класс - 10-алкилпроизводные фенотиазина; ¿г = 7; Ш класс - 10-ацилпроизводаые фенотиазина; 63= 5. Достоверность идентификации 3-х классов составляет 100/100/60 (%) соответственно.

Таблица 2

Таблица соответствия данных дериват о графии (признаков и соответствующих им коэффициентов (весов)

№№ пп Название признака № гр. Градация Решающее птевило

а б

I кл П кл Ш кл Вес правила

I Субстанции I « 172 -194 -129 -81 -48

Сначала перво- 2 173-183 -125 -101 -219 +118

го интервала 3 184-188 -194 -239 -81 -158

4 свыше -84 -129 -219 +90

182

2 -Ь" конца послед- I $ 395 -179 -120 -69 -51

него интервала 2 396-460 -40 -238 -138 -92

свыше -179 -51 -138 +87

460

3 Пикраты

■¿"начала перво- I ^110 -157

го интервала 2 Ш-161 +92

3 163-170 -88

4 свыше 170 +91

5 неизв. -

4 ■¿"конца послед- I ^ 244 +121

него интервала 2 245 -88

3 246-264 +73

4 свыше 264 -128

5 неизв. -

- 17 -

б) субстанции и пикраты: подсчитывают сушу весов. Если сумма весов > 0, то соединение относят к классу Ю-алкил-

производных; если сумма весов < 0, то соединение относят к классу Ю-ацилпроизводных фенотиазина. Достоверность идентификации 2-х классов составляет 100/80 {%) соответственно.

Проведенный анализ показывает наличие существенных различий в термических свойствах 10-алкил- и Ю-ацилпроизводных фенотиазина, доказывает целесообразность и полезность получения термографических признаков и определения термических характеристик для идентификации лекарственных веществ данной группы.

5. Оптимизация условий разделения производных

фенотиазина методом тонкослойной хроматографии

Несмотря на большое число работ по применению ТСХ в анализе и стандартизации производных фенотиазина, отсутствует системное изучение их хроматографического поведения, не выявлены зависимости сорбционных характеристик от строения молекул, не изучены факторы, влияющие на эффективность хроматографического разделения производные фенотиазина.

Мы поставили своей задачей обосновать выбор критерия для сценки хроматографического разделения, установить возможные корреляции между физико-химическими свойствами и хроматографи-ческл.м поведением с целью использования полученных данных для разработки новых, более эффективных методик на основе единых форм испытаний. Работа проводилась на стандартных пластинах силуфол У£-254 15x15 см, 20x20 см. В качестве критерия эффективности разделения мы выбрали величину БР (разделяющей способности), характеризующую разность величин ^ , т.е. селек-

тивность разделения и коэффициент разделения, названный нами Крд3д и тождественный величине (в ВЭЖХ, денситометрии)

р - г (1х,-еха)

--£ —о-'

Оу^, + ЬуУг.

где и Сх 2. - длина пробега вещества, мм; и - ширина основания пика, мм, или коэффициенту г^ (К.И.Евстратова, 1988) при визуальной оценке хроматограмм:

& ' Ь_

Ч*

7а (€,*€*)

где - разность величин соседних зон;

Ь - длина пробега, мм; £, £ - длина продольного сечения соседних зон адсорбции, мм,

которые характеризуют эффективность разделения. Тождественность величин и (Крддд ) доказана нами экспериментально.

На основе сочетания ДР и коэффициента разделения проанализированы десятки систем растворителей, подобранные нами экспериментально и частично взятые из данных литературы - наиболее эффективные из них (с наибольшими значениями ДР и Кразд.) представлены в таблице 3 и могут считаться предпочтительными при анализе лекарственных средств, производных фенотиазина.

Экспериментально было показано, что воспроизводимость величин существенно выше в системах, содержащих диэтиламин, а также при использовании диэтиламинлдля приготовления хромато-графируешх растворов (хлороформ - диэтиламин 99:1 или 99:5), что по сравнекию с растворами аммиака различной концентрации значительно стабилизирует систему.

Таблица 3

Значения и коэффициента эффективности разделения (Кразд.) для лекарственных веществ, производных фенотиазина

гексан-ацетон-диэтил-амин (50:30:2) гексан-ацетон-диэтил-амин (70:30:5). гексан-ацетон-диэтил-амин-меон (50:30:2:5)

Кразд. (г^ Кразд. Кразд.

Этаперазин

Метеразин

Трифтазин

Пропазин

Дипразин

Аминазин

Динезин

18 30 35 40 45 56 72

3,24 1,35 1,35 1,35 2,97 4,32

Этаперазин 17

Метеразин 45

Трифтазин 49

Дипразин 53

Пропазин 55

Аминазин 64

Динезин 82

7,56 1,08 1,08 0,54 2,43 4,86

Этаперазин

Метеразин

Пропазин

Дипразин

Трифтазин

Аминазин

Динезин

28 34 43 48 54 60 74

1,62 2,43 1,35 1,62 1,62 3,78

ю

I

этилацетат-гексан-диэтиламин .(50:15:2)_

Кразд.

эФилацетат-этанол-диэтиламин

(г ^ Кразд.

этилацетат-гек сан-

диэтиламин-меон

(50:20:2:20)

Кразд.

Фторацизин Хлорацизин Этацизин Этмозин Нонахлазин

83 79 56 43 35

0,92 4,46 2,3 1,5-

Этмозин

Фторацизин

Хлорацизин

Этацизин

Нонахлазин

79 69 65 60 33

2,38 0,76 1,13 5,4

Этмозин 78

Фторацизин 68

Хлорацизин 64

Этацизин 58

Нонахлазин 36

1,86 0,98 1,18 3,67

- 20 -

На хроматографическую подвижность производных фенотиазина существенное влияние оказывают:

- природа и концентрация основного компонента в системе (наиболее предпочитительным является диэтиламин);

-характер радикала в положении 10 цикла фенотиазина: азотсодержащие гетероциклы, по сравнению с диалкиламиноалкильными заместителями, в подавляющем большинстве систем обладают значительно большей сорбцией на силикагеле;

- наличие близких по донорно-акцепторным свойствам групп -С1

и -СРд приводит (при наличии сходных структур) к близкой хро-матографической подвижности этих соединений (фторацизин-хло-рацизин, 2-хлорфенотиазин-2-трифторметилфенотиазин).

Важное значение для решения задач идентификации имеет установление различных метрологически обработанных корреляций между хроматографическим поведением и физико-химическими свойствами анализируемых веществ. При статистическом анализе полученных данных в 4-х предпочтительных системах, представленных в таблица 4, была построена математическая модель в системе гексан-ацетон-диэтиламин (50:30:2):

у = 161,59-0,09Х1-0,ЗЗ^-Г.Шз где у = ИД}, индивидуального соединения ( Х| - молекулярная масса,

Х^ - температура плавления, Хд - константа ионизации

Модель позволяет априорно предсказать хроматографическую подвижность производных фенотиазина. Ряд предложенных нами систем растворителей с наиболее высокими значениями ¡ЦР и К разделения, такие как гексан-ацетон-диэтиламин (50:30:2), (70:30:5), (70:5:5), этилацетат-гексан-диэтиламин (50:15:2), оказались более эффективными по сравнению с существующими,

Таблица 4

Значения (х^Ю-алкил- и Ю-ацилпроизводных фенотиазина в системах растворителей, выбранных на основании величин ДР и Кразд. для статистического анализа

№ п/п Название препарата гексан-ацетон-диэтиламин (50:30:2) (№ I) этилацетат-гек-сан-диэтиламин (50:15:2) (№ 2) этилацетат-эта-нол-диэтиламин (17:2:0,5)(№ 3) этилацетат-этанол -10% аммиак (17:2:0,5) (№ 4)

Ю-алкилпроизводные

I. Динезин 72 64 84 77

2. Аминазин 56 45 76 57

3. Дипразин 45 31 51 48

4. Пропазин 40 31 44 37

5. Трифтазин 35 27 33 30

6. Метеразин 30 24 29 27

7. Фгорфеназин (ст. ВОЗ) 24 15 24 22

8. Этаперазин 18 9 19 19

Ю-ацшшгоизводные

I. Фторацизин 51 83 69 79

2. Хлорацизин 46 79 65 69

3. Этавдзин 46 55 60 65

4. Нонахлазин 41 45 '33 33

5. Этмозин 36 35 79 60

что позволило их рекомендовать в НТД (утверждены фармакопейным комитетом МЗ СССР на ст. "Этаперазин", "Дипразин", "Пропазин", "Аминазин", "Динезин) и представлены в ПО "Фармакон (хлораци-зин), ПХЗЮ "Латвбиофарм" (этмозин, фторацизин), завод химических реактивов им. ХХП съезда КПСС (нонахлазин).

Преимущество предложенных методик в унифицированных системах растворителей заключается в улучшении воспроизводимости и картины хроматографического разделения (четкая и округлая форма пятен, стабильные значения ^ , значительное уменьшение сорбции веществ на старте).

б. Исследования в области стандартизации условий разделения и применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в контроле качества лекарственных средств, производных фенотиазина

Глава б посвящена изучению оптимальных условий селективного разделения 10-алкил- и 10-ацилпроизводных фенотиазина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭНХ) в обращенно-фазовом варианте.

Экспериментально найдено, что для сорбентов С^-С^-д селективное и эффективное разделение в изократическом режиме при комнатной температуре может быть достигнуто на основе элюента ацетонитрил-вода с добавлением триэтиламина и буферных растворов различных значений рН.

Оптимальное соотношение ацетонитрил-вода при постоянной концентрации основного компонента было найдено экспериментально, данные подтверждены также расчетом оптимальной концентрации ацетонитрила в данном элюенте « зависимости от упрощенного критерия гидрофобности ( Н ) (В.Д.Шатц, О.В.Сахартова,

1988). Учитывая, что величина H колеблется в ряду производных фенотиазина от 10 до 17, то процент ацетонитрила должен быть от 55 до 75% (согласно номограммам зависимости % ацетонитрила от величины Н); в разработанных наш вариантах он колеблется от 47 до 60%.

На основании проведенных исследований разработаны 4 варианта селективного разделения производных фенотиазина, которые могут служить основой для разработки методик определения качества исследуешх лекарственных веществ.

Вариант А,. Хроматограф Pye Ualcam." стальная колонка 250x4,6 мм; сорбент "SpKe-z-lSotb С2 ' 5 мкы, объем петли ввода 20 мкл, температура колонки 23°С, детектор - ультрафиолетовый с переменной длиной волны, интегратор Spacita pfiystds модели 4100, элюент - ацетонитрил-вода-триэтилашн (60:40:1, по объему); скорость потока 1,5 мл/мин. - таблица 5.

Вариант Б. Хроматограф " Р^е Urùcam , стальная колонка 250x4,6 мм, сорбент "ùckiosqzè RP-2', 5 мкм, объем петли ввода - 20 мкл, чувствительность детектора - 0,16 ед. опт. плотности, элгаент -^ацетонитрил-вода-триэтилашн (47:53:1, по объему), скорость потока I мл/мин. - таблица 6.

Вариант В. Хроматограф Ч flex." модель 100а (США), стальная колонка 250x4,6 мм; сорбент " Sphezisovê DDS-2." 5 мкм; детектор - ультрафиолетовый с переменной длиной волны; температура - комнатная, элюент - ацетонитрил - 0,1 м KHgPO^ с Н3РО4 до рН 3,5 (60:40, по объему), скорость потока 1,5 мл/мин. - таблица 7.

Вариант Г. Для разделения 10-ацилпроизводных фенотиазина -условия аналогичны варианту В; элюент - ацетонитрил-вода -

Таблица 5

Характеристика хроматографического разделения производных фенотиазина (Вариант А)

п/п

Название препарата

■и

(МИН.)

К'

10-алкилпроизводные фенотиазина и примесные соединения

1. Этаперазин

2. Фторфеназина дигидро-хлорид (ст. ВОЗ)

3. Фенотиазин

4. 2-С фенотиазин

5. 2СРд-фенотиазин

6. Дипразин

7. Динезин

8. Пропазин

9. Метеразин

10. Трифтазин

11. Аминазин и хлорпромазина гидрохлорид (ст. ЮЗ)

Ю-ацилпроизводные фенотиазина

1. Этмозин

2. Этацизин

3. Нонахлазин

4. Хлорацизин

5. Фторацизин

4,76 1,7^2

5,17 5,57 7,19 8,10 8,84 9,60 10,40 11,05 11,56

1,95 2,18 3,11 3,63 4,05 4,48 4,94 5,31 5,61

12,56 6,18

1,13

1,Н 1,42 1,16 1,И 1,10 1,10 1,07 1,05

1,10

4,96 1,83 1,59

6,85 2,91

1,15

7,79 3,45

1,35

9,94 4,68

1,14

11,13 5,36

Таблица 6

Характеристики хроматографического разделения производных фенотиазина (Вариант Б)

Т

№ п/п

Название препарата

(мин)

К'

А

10-алкилпроизводные

фенотиазина

I. Этаперазин 5,04 1,88

2. Дипразин 10,49 5,00

3. Метеразин 11,20 5,40

4. Динезин 11,72 5,69

5. Пропазин 12,82 6,32

6. Трифтазин 14,52 7,30

Аминазин 17,06 8,86

10-ацилпроизводные

фенотиазина

I. Этмозин 3,74 1,П

2. Нонахлазин 5,29 2,02

3. Этацизин 5,50 2,14

4. Хлорацизин 7,80 3,46

5. Фторацизин 9,56 4,46

2,66 1,08 1,05

1,И

1,15 1,21

1,82 1,06 1.14 1,29

Таблица 7

Характеристики хроматографического разделения производных фенотиазина (Вариант В)

№ п/п Название препарата tR (мин) К,

Ю-алкилпроизводные

фенотиазина

I. Дипразин 4,20 1,40

2. Пропазин, этаперазин 7,20 3,11

3. Динезин 9,60 4,48

4. Аминазин 11,30 5,46

5. Метеразин . 12,60 6,20

6. Трифтазин 15,60 7,91

2,22

1,44

1,22 1,13

1,27

10-ацилпроизводные фенотиазина

1. Этмозин

2. Этацизин

3. Нонахлазин

4. Хлорацизин

5. Фторацизин

0,1 ы СНдС001Ш4 с добавлением раствора концентрированного аммиака до рН 8,0 (69:56:5, по объему) - таблица 8.

Таблица 8

Характеристики хроматографического разделения Ю-ацилпроизводных фенотиазина (Вариант Г)

п/г Название препарата (мин) К'

I. Этмозин 4,73 1,70 1,50

2. Нонахлазин 6,18 2,53 1,07

3. Этацизин 6,50 2,71 1,50

4. Хлорацизин 8,90 4,08 1,24

5. Фторацизин 10,78 5,16

Далее было показано, что каждый из вариантов может служить основой для разработки методик контроля качества исследуемых лекарственных веществ в зависимости от поставленных задач: для идентификации (в работе были использованы стандартные образ щ ВОЗ - хлорпромазина гидрохлорид и фторфеназина дигидро-хлорид), контроля чистоты и количественного определения действующих веществ в лекарственных формах.

Продолжение таблищ 7

3,80 1,17

1,80

5,42 2,10

1,00

5,44 2,11

1,75

8,20 3,70

I 15

9,20 4,26 '

Вариант А был применен для контроля чистоты серийных образцов аминазина и стандартного образца ВОЗ (метод внутренней нормализации), - общее содержание примесных соединений в серийных образцах колеблется от 1,5 до 3%.

Вариант Б и вариант Г были использованы для оценки чистоты серийных и технических образцов этацизина (расчеты проводили по методу абсолютной калибровки для сульфоксида этацизина, Ю-акрйил-2-карбэтоксиаминофенотиазина, 2-нарбэтоксиаминофено-тиазина), - относительная ошибка среднего результата при доверительной вероятности 0,95 в модельных смесях не превышает - 2,35%. Общее содержание примесных соединений в серийных образцах не превышало 0,6555, в технических - от 1,03 до 1,34%.

В данном разделе показана также перспективность применения метода ВЭЖХ для селективного количественного определения производных фенотиазина в лекарственных формах, особенно для тех, методы определения которых длительны или трудоемки.

Анализ полученных данных выявил некоторые закономерности хроматографического поведения. Отмечено увеличение сорбции СРд-производных по сравнению с С1-производными и незамещенными фенотиазина, а в ряду пиперазинилпроизводных - метилпиперазинил-производных по сравнению с ^ -оксиэтилпиперазинилпроизводными.

ВЫВОДЫ

I. Обоснованы принципы и реализованы пути комплексного аналитического подхода к контролю качества и повышению эффективности стандартизации лекарственных средств, производных

фенотиазина. В целях совершенствования системы контроля качества лекарственных средств данной группы создана единая основа для сравнительной оценки качества и прогнозирования выбора методов стандартизации. Совокупность полученных результатов может служить общим методическим подходом для оптимизации условий анализа других груш лекарственных веществ.

2. Исследована реакция взаимодействия Ю-алкилпроизводных фенотиазина с калия броматом в кислой среде; методами ЭПР, ИК, УФ-спектроскопии, ТСХ и ВЭЖХ установлены основные продукты реакции, обоснована целесообразность ее использования в идентификации лекарственных средств данной группы.

3. Методом математического планирования эксперимента найдены оптимальные условия стабилизации реакции окисления 10-алкилпроизводных фенотиазина калия броматом в кислой среде.

На этой основе разработана методика количественного фотометрического определения аминазина в 2,5% растворе для инъекций, относительная погрешность определения в лекарственной форме при доверительной вероятности 95% не превышает + 1,23%.

4. Исследовано взаимодействие 10-ацилпроизводных фенотиазина с концентрированной серной кислотой, щелочным раствором гидроксиламина и калия броматом в кислой среде. Найдены оптимальные условия идентификации и исследованы продукты реакции 10-ацилпроизводных фенотиазина с калия броматом в кислой среде, показана возможность использования реакции в анализе лекарственных средств данной группы.

5. Научно обоснована и экспериментально подтверждена целесообразность применения термических методов для идентификации исследуемых лекарственных средств, сняты дериватограммы производных фенотиазина и их пикратов. На основе метода рас-

познавания образов предложены 2 решающих правила для идентификации 10-алкил- и 10-ацилпроизводных фенотиазина по их термографическим показателям (достоверность идентификации 100% и 80% соответственно).

6. На основании изучения хроматографического поведения производных фенотиазина, величины разделяющей способности (ДР) и коэффициента разделения (Крддд ) предложены оптимальные системы растворителей гексан-ацетон-диэтиламин (50:30:2, 70:30:5, 70:5-5), этилацетат-гексан-диэтиламин (50:15:2) и показана эффективность использования этих систем в качестве исходных для определения чистоты исследуемых лекарственных веществ.

7. Изучена взаимосвязь между хроматографическим поведением, молекулярной массой и величиной рКа лекарственных веществ, производных фенотиазина; впервые построена математическая модель процесса в системе гексан-ацетон-диэтиламин (50:30:2), которая позволяет прогнозировать хроматографические параметра.

8. Изучены оптимальные условия селективного разделения производных фенотиазина методом ВЭЖХ с использованием сорбентов лихросорб (?Р—2, сферисорб Сд, сферисорб 0Д8-2 и элюентов различных соотношений ацетонитрил-вода, содержащих триэтила-мин, а также буферы рН 8,0 или рН 3,5. Показана перспективность разработанных вариантов селективного разделения производных фенотиазина методом ВЭЖХ как основы для разработки методик оценки качества лекарственных средств данной группы.

9. Показана возможность применения разработанных вариантов разделения производных фенотиазина методам ВЭЖХ

- для определения примесных соединений в серийных образцах аминазина, серийных и технических образцах этацизина.

Относительная ошибка определения среднего результата в модельных смесях сульфоксида этацизина + 2,355?, 2-карбэтокси-аминофенотиазина + 1,33%, 10-акрилоил-2-карбэтоксиамино-фенотиазина _± 1,51%;

- для определения количественного содержания 10-алкилпроиз-водных фенотиазина в лекарственных формах; относительная ошибка определения среднего результата в модельных смесях не превышает + 1,28%.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ ИЗЛОЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ

1. Прокофьева В.И. Трифтазин-метиловый оранжевый. Установление состава.//Материалы научной конференции аспирантов и ординаторов I ММИ.~ М., 1969. - С.217-219.

2. Прокофьева В.И. Исследование возможности применения экстракционной фотометрии для количественного определения трифлуоперазина (трифтазина) и левомепромазина в моче.//Тезисы докладов П Всероссийского съезда фармацевтов. - М., 1969.

- С.138.

3. Прокофьева В.И. Об образовании и экстрагируемости соединений органических оснований с красителями (трифтазин-метиловый оранжевый.//Фармация. - 1970.- Т.19, № 2,- С.45-49.

4. Прокофьева В.И. Об образовании и экстрагируемости соединений органических оснований с красителями. Состав и константа диссоциации комплекса трифтазин-метиловый оранжевый. //Фармация.- 1970.- Т.19, № 5.- С.54-56.

5. Прокофьева В.И. Экстракционно-фотометрическое опре-

В связи с изменением фамилии автора в ряде ссылок фамилия Малахова В.И. указана как Прокофьева В.И.

деление левомепромазина с- метиловым оранжевым.//ШИТЭХИМ. М.: 1970.- Вып.2.- С.29-33.

6. Прокофьева В.И., Бабаскин П.М. Обнаружение некоторых производных фенотиазина в моче больных с помощью метода тонкослойной хроматографии.//Сб. Современное состояние и дальнейшее развитие исследования лекарственных веществ и некоторые другие фармации. - M., 1972.- С.57.

7. Прокофьева В.И., Малахова C.B. Получение сульфоксидов некоторых производных фенотиазина и их идентификация.//Фармация.- 1974.- Т.23, № 3. - С.74-79.

8. Прокофьева В.И., Орловская Е.С., Малахова C.B. Исследование в области стабильности производных фенотиазина. Обнаружение аминазина и некоторых продуктов его разложения " in viizo и " ¡avivo ".//Материалы П Всесоюзного съезда фармацевтов. -Рига. - 1974, С.170—171.

9. Малахова C.B., Прокофьева В.И., Щербакова О.В. Экстрак-ционно-фотометрическое определение нонахлазина.// Фармация. -1976. - Т.25, № 2.- С.64-67.

10. Чернова C.B., Прокофьева В.И., Гутева В.Т. К вопросу идентификации нонахлазина - отношение к окислителям.// Фармация.- 1978. - Т.27, № 4. - С.72-74.

11. Кувырченкова И.С., Прокофьева В.И., Чернова C.B. Количественное определение этмозина экстракционно-фотометриче-ским методом.// Новые методы диагностики, терапии и изучения новых лекарственных веществ. - М., 1980. - С.57-59.

12. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Прокофьева В.И. Применение УФ и ИК-спектроскопии в оценке подлинности лекарственных препаратов, производных фенотиазина.// Хим.-фарм. журн. - 1981. - Т.15, № 9. - C.I02-I06.

13. Комплексная оценка качества некоторых групп лекарственных средств /А.П.Арзамасцев, П.Л.Сенов, В.И.Прокофьева и соавторы// Матер. 1У Всероссийского съезда фармацевтов, Воронеж, 1981 г.: Тез. докладов. - Воронеж, 1981.- С.332-334.

14. Арзамасцев О.П., Кувирченкова З.С., Прокоф'ева В.Э. Иденуиф|'кащя деяких похсдних фенопазину методом тонкошаро-во1 хроматографИ (укр.) // Фармац. журн. - 1981..- № 5.-С.61-62.

15. Исследования в области анализа производных фенотиа-зина (фотометрия в видимой области спектра ДЬС.Кувырченкова,

B.И.Прокофьева, С.В.Чернова, П.Л.Сенов.// Научный обзор. Современное состояние и перспективы применения физико-химических методов анализа лек. препаратов. Сер. фармакология и фармация. М.: ВНИИМИ. - 1981. - № I.- С.12-15.

16. Авторское свидетельство 9II25I, СССР. МКИ S/ 0IK2I/78. Способ качественного определения производных фенотиазина. /И.С.Кувырченкова, В.И.Прокофьева, П.Л.Сенов, А.П.Арзамасцев/ Заявлено 14.07.80. Опубл. 07.03.82, Бюл. № 9.- // Открытия. Изобретения. - 1982. - № 9.

17. Прокофьева В.И., Кувырченкова И.С., Сенов П.Л. Применение цветной реакции для качественного определения производных фенотиазина и фотометрического определения этмозина //Физико-химические метода анализа лекарств. Научные труды ВНИИФ. - М., 1984. - Т.22. - С.147-154.

18. Унифицированная методика для дифференциации восьми лекарственных средств, алкилпроизводных фенотиазина, методом тонкослойной хроматографии /А.П.Арзамасцев, В.И.Прокофьева, И.С.Кувырченкова, С.В.Чернова// П съезд фармацевтов Молдавии, Кишинев, 10-11 сент. 1985 г.: Тез. докл.- Кишинев, 1985. -

C.86-87.

19. Прокофьева В.И., Чернова C.B., Кувырченкова И.С. Дифференциация и идентификация лекарственных средств, производных фенотиазина,методом тонкослойной хроматографии в унифицированных системах// Тезисы докладов научной конференции, посвящ. 200-летию высшего фарм. образования в Литве. -Каунас, 1985. - С.163.

20. Тонкослойная хроматография в контроле качества Ю-ал-килпроизводных фенотиазина/ В.И.Прокофьева, Г.И.Егоренкова, А.В.Бердникова, Р.И.Фалина и др.// Повышение качества лекарственной помощи амбулат. и стацион. больным на основе ускорения научно-техн. прогресса в свете решений ХХУП съезда КПСС: Тез.докл. 1У Всесоюзного съезда фармацевтов. - Казань, 1986.-С.340-341.

21. Исследования в области контроля качества лекарственных средств, производных фенотиазина /В.И.Прокофьева, С.Ф. Митрягина, Г.И.Егоренкова, Е.Б.Нечаева и др.// Актуальные проблемы совр. фармации. - Сб.научных трудов I ММИ.- М., 1986. - С.49-52.

22. Применение тонкослойной хроматографии в контроле качества лекарственных средств, 10-ацилпроизводных фенотиазина /В.И.Прокофьева, В.В.Васина, Б,М.Пятин, А.В.Сибилев// Междунар. симпозиум "Хроматография в биологии и медицине", Москва', 1986г.: Тез. докл. - Москва, 1986.- С.49-52.

23. Авторское свидетельство 1286970, СССР, МКИ9 0М21/78. Способ идентификации производных фенотиазина/ В.И.Прокофьева, С.Ф.Митрягина, Г.И.Егоренкова, Э.И.Кирпичева и др./ Заявлено 03.07.85. Опубл. 30.01.87. Блюл. № 4. -//Открытия. Изобретения. - 1987. - № 4.

24. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии./ Под ред.А.П.Арзамасцева/. -М.: Медицина, 1987. - С.234.

- 34 -

25. Методы контроля лекарственных средств. ИК- и УФ-спект-роскопия в идентификации лекарственных средств, производных фе-нотиазина./А.П.Арзамасцев, В.И.Прокофьева, И.С.Кувырченкова, В.В.Васина.- Методические указания Минмедбиопрома ОССР.- М., 1987. - МУ 64-005-87. - 13 с.

26. Прокофьева В.И., Медведенко Ю.К., Фатова Е.Ю. Анализ лекарственных средств, производных фенотиазина /Дезисы докладов Ш съезда фармацевтов Казахстана. - Казахстан, 1987. - С.225.

27. Применение дериватографии для идентификации лекарственных средств, производных фенотиазина/ В.А.Попков, В.Ю.Решетняк, Ю.К.Медведенко, В.И.Прокофьева и др.//Хим.-фарм.журн. - 1987.-Т.21, № 12. - С.1503-1506.

28. Кал1ю бромат як ушфскований реактив для идентиф£кац££ алк1лпох1дних фенотсазину (укр.)/ ВЛ. Прокофьева, Г.П. Егорен-кова, Е.Ю.Фатова и др.// Фармац.журн.- 1987. - № 3.- С.65-67.

29. Совершенствование методов стандартизации и контроля качества лекарственных средств, производных фенотиазина /В.И. Прокофьева, Г.И.Егоренкова, В.В.Васина, А.В.Сибилев и др.// Тез. докладов научн. конф. Ш съезда фармацевтов Узбекистана. -Ташкент, 1987. - С.148-149.

30. Прокофьева В.И., Васина В.В., Егоренкова Г.И. Идентификация лекарственных средств, производных фенотиазина, на основе унифицированной методики окисления калия броматом в кислой среде// Материалы У Всеросс. съезда фармацевтов, Ярославль, 15-16 сент. 1987 г.: Тез.докл.- Ярославль, 1987. - С.292.

31. Прокофьева В.И., Нечаева Е.Б., Чернова С.В. Селективный способ определения дипразина //Тезисы докл. 1У съезда фармацевтов Литовской ССР. - Вильнюс, 1987. - С.137-138.

32. Прокофьева В.И., Нечаева Е.Б., Чернова C.B. Применение реакции окисления калия броматом в кислой среде в анализе лекарственных средств, производных фенотиазина// Метод, рекомендации аптекам г. Москвы. - M., 1988. - Вып. I. - С.34-35.

33. Идентификация 10-ацилпроизводных фенотиазина по реакции окисления калия броматом в кислой среде/ В.И.Прокофьева, Е.Б.Нечаева, В.В.Васина и др.// Фармация. - 1989. - Т.38,

№ I. - С.40-42.

34. Разделения лёкарських речовин, похг'дних I0-aлк¿лaм¿нo-фенотг-азину, i напив продуктьв ¿х синтезу методом выбкоефек-THBHoi р ¡.данной хроматограф^^ (укр.) /0.В.Сиб£льов, А.Е.Егоров, О.П.Арзамасцев, В.Cl. Прокоф'ева // Фармац. ayjH. -1989. - № I.- С.40-42.