Фармакогностическое изучение иссопа лекарственного

Сень, Татьяна Владимировна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение иссопа лекарственного

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Сень, Татьяна Владимировна Курск 2007 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение иссопа лекарственного

На правах рукописи

Сень Татьяна Владимировна

□ОЗОБТ4Э2

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ИССОПА ЛЕКАРСТВЕННОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск-2006

003067492

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Бубенчикова Валентина Николаевна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук

Баландина Ирина Анатольевна

доктор фармацевтических наук, профессор Новиков Дмитрий Алексеевич

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится «¿5 » 200 е! г. в часов на заседании

диссертационного совета К 208.03^.01 при Государственном образовательном учреждении - высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К.Маркса, 3.)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

200 6 г.

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Настоящий период развития медицины и фармации характеризуется отчетливой тенденцией к более интенсивному использованию лекарственных средств растительного происхождения. Однако, ресурсы лекарственных растений не безграничны. В настоящее время достаточно остро стоит проблема укрепления сырьевой базы лекарственных растений. Это связано с резким ухудшением экологической обстановки в России, а также ограниченными возможностями использования естественных растительных ресурсов. В связи с этим важная роль отводится культивируемым растениям.

С этой точки зрения большой интерес приобретают отходы промышленной переработки растительного сырья, в частности при производстве эфирных масел. Выход целевого продукта-эфирного масла не превышает 2% от массы исходного сырья, что отражает низкий уровень использования растительного сырья. Одним из таких растений является иссоп лекарственный (Hyssopus officinalis L., сем. Яснотковые - Lamiaceae).

Иссоп лекарственный издавна применяется в народной медицине в качестве вяжущего, противоспалительного, отхаркивающего, ранозаживляющего средства. Он включен в фармакопеи ряда стран (Франции, Португалии, Румынии). Достаточно хорошо изучен состав эфирного масла иссопа лекарственного, в то время как другие группы биологически активных веществ исследованы недостаточно. Разнообразный химический состав, высокое содержание фенольных соединений и полисахаридов является основанием для углубленного изучения травы иссопа лекарственного: выделения и исследования групп действующих веществ, установления показателей качества сырья, а также выяснения возможности использования в научной медицине.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение травы иссопа лекарственного, с выделением основных групп действующих веществ, выборе методов стандартизации и диагностики сырья.

Для решения поставленной цели решались следующие задачи:

■ провести критический анализ данных литературы по современному состоянию изученности иссопа лекарственного;

■ провести фитохимический анализ травы иссопа лекарственного по содержанию основных групп биологически активных веществ;

■ выделить комплексы БАВ, содержащиеся в траве иссопа лекарственного, разделить их на индивидуальные компоненты;

■ изучить структуру фенольных соединений;

■ разработать методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов в сырье иссопа лекарственного для возможной его стандартизации;

■ провести морфолого-анатомические исследования и установить диагностические признаки для сырья «Иссопа трава»;

■ разработать числовые показатели качества сырья «Иссопа трава»;

■ провести фармакологический скрининг настоя из травы иссопа лекарственного и комплексов БАВ, получаемых из него.

Научная новизна

Проведено фитохимическое изучение травы иссопа лекарственного. Установлено наличие эфирного масла, фенольных соединений (флавоноидов, кумаринов, оксикоричных кислот, дубильных веществ), углеводных производных, азотсодержащих соединений, органических кислот, каротиноидов, тритерпеновых соединений. Изучен минеральный и аминокислотный состав.

Впервые проведено изучение фенольных соединений травы иссопа

лекарственного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

(ВЭЖХ). Идентифицировано 17 веществ фенольной природы, из них 14

впервые для данного растения. Впервые установлено наличие:

фенолкарбоновых кислот (изоферуловая кислота, хлорогеновая кислота, салициловая кислота), флавоноидов (витексин, хризоэриол, гиперозид, рутин, гесперидин, виценин, кверцетин, лютеолин, апигенин), кумаринов (скополетин, умбеллиферон).

Из травы иссопа лекарственного в индивидуальном состоянии выделено 9 индивидуальных веществ фенольной природы: оксикоричная кислота-хлорогеновая; кумарины - скополетин, умбеллиферон; флавоноиды -хризоэриол, диосмин, витексин, гиперозид, рутин, виценин.

Впервые проведено изучение полисахаридов по фракциям: водорастворимые полисахаридные комплексы, пектиновые вещества, гемицеллюлоза А и гемицеллюлоза Б. Определен их качественный и количественный моносахаридный состав. Проведено изучение функциональных групп пектиновых веществ.

Проведены исследования по стандартизации травы иссопа лекарственного, в результате чего разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов (спектрофотометрическая методика в пересчете на гиперозид) и суммы полисахаридов (гравиметрический метод).

Проведено морфолого-анатомическое изучение травы, установлены диагностические признаки для определения подлинности сырья. Разработаны числовые показатели, регламентирующие качество сырья.

В результате фармакологического скрининга установлено наличие у травы иссопа лекарственного отхаркивающей, противоспапительной, анальгезирующей, антиоксидантной и антимикробной активности.

Практическая значимость Полученные результаты исследований позволят расширить сведения о химическом составе травы иссопа лекарственного. Результаты фармакологических исследований свидетельствуют о том, что трава иссопа лекарственного является перспективным лекарственным растительным сырьем для применения в научной медицине. Предложены методики стандартизации сырья иссопа

лекарственного, позволяющие объективно оценивать его доброкачественность.

На основании проведенных исследований разработаны, апробированы и внедрены:

■ методика количественного определения суммы флавоноидов в траве иссопа лекарственного (Акт внедрения в работу ОГУЗ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» (г.Белгород): № 6 от 10 апреля 2006г.; Акт внедрения в работу ОКК ЗАО Фирма «Здоровье»: № 8 от 26 апреля 2006г.);

• методика количественного определения суммы полисахаридов в траве иссопа лекарственного (Акт внедрения в работу ОГУЗ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» (г.Белгород): № 7 от 11 апреля 2006г.; Акт внедрения в работу ОКК ЗАО Фирма «Здоровье»: № 5 от 19 апреля 2006г.);

■ результаты микродиагностического анализа цельного сырья «Иссопа трава» (Акт внедрения в работу ОКК ЗАО Фирма «Здоровье»: № 6 от 21 апреля 2006г.)

Положения, выносимые на защиту

■ результаты химического изучения травы иссопа лекарственного;

■ методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов;

■ результаты морфолого-анатомического изучения с установлением диагностических признаков сырья;

■ итоги разработки и определения показателей качества сырья сырья иссопа;

■ результаты фармакологического скрининга настоя и комплексов БАВ, полученных из травы иссопа лекарственного.

юбилейной научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ (Курск, 2005); на региональной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, член-корреспондента АМН СССР, проф. Г.Е.Островерхова «Современные вопросы медицинской науки и практики» (Курск, 2004); на XI, XII, XI11 Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2004, 2005, 2006); на VI11, IX, X Международных съездах Фитофарм «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2005, 2006, Миккели, Финляндия, 2004); на научных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004,2005, 2006); на 6 национальном съезде фармацевтов Украины «Досягнення та перспективи розвитку фармацевтично! галуз! Украши» (Харьков, 2005).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета.

Публикации По материалам диссертации опубликована 21 работа.

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 178 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы, приложения. В тексте содержится 32 таблицы, 30 рисунков. Список цитируемой литературы включает 188 источников, из них - 26 на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная новизна и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту.

Обзор литературы представлен в первой главе и включает краткую

ботаническую характеристику иссопа лекарственного, сведения о химическом

составе и применении в научной и народной медицине. Здесь же обосновывается выбор объектов исследования.

Вторая глава посвящена «Объектам и методам исследования», где приведены данные об объектах исследования, используемых методах, приборах.

В последующих 4-х главах экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава травы иссопа лекарственного, разработке методик количественного определения, действующих веществ, морфолого-анатомических характеристик сырья, разработке числовых показателей качества травы иссопа лекарственного, результаты фармакологического скрининга.

В приложение вынесены документы о внедрении материалов диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследований

Объектом исследования служила трава иссопа лекарственного, заготовленная в Курской и Белгородской областях в 2002-2005 годах. Все образцы сырья хранились в соответствии с ГОСТ 17768-90 в сухом, прохладном, хорошо проветриваемом помещении, без прямого попадания солнечных лучей, в бумажных мешках в условиях лаборатории. Для идентификации в сырье основных групп биологически активных веществ применяли известные качественные реакции и хроматографические методы исследований. Хроматографические исследования проводили методами восходящей и нисходящей хроматографии на бумаге «РИйак», тонкослойной хроматографией на пластинках «ВПиШ», «БогЬШ», ВЭЖХ. Для количественного анализа биологически активных веществ использовали общепринятые методики, регламентированные соответствующими статьями ГФ XI.

Для установления структуры выделенных соединений использовали традиционные химические, а также инструментальные методы анализа.

Фармакологические исследования проводили по общепринятым методикам, а также в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета (Сернов, 2000).

Определение уровня Ре+2-индуцированной хемилюминесценции проводили на приборе биохемилюминометр БХЛ-06 по общепринятому методу (Бодаев, 1999).

Антимикробную активность изучали методом культивирования микробов на питательную среду с добавлением исследуемых препаратов в сравнении с контролем (Бандюкова и др., 1990).

Статистическую обработку результатов исследований проводили в соответствии с требованием ГФ XI, вып. 1 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» с использованием критерия Стьюдента.

Изучение качественного состава и выделение биологически активных веществ

Фитохимическое изучение сырья включало анализ качественного состава основных групп биологически активных веществ и их количественное определение.

При проведении качественного анализа на различные группы природных соединений в траве иссопа лекарственного обнаружены фенольные соединения (кумарины, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, преимущественно конденсированной группы), полисахариды, азотсодержащие соединения (аминокислоты, азотистые основания), органические кислоты (лимонная, щавелевая, винная, аскорбиновая), тритерпеновые соединения (урсоловая,олеаноловая кислоты), каротиноиды, эфирное масло.

При количественном определении установлено, что содержание суммы

азотистых оснований в исследованной траве иссопа лекарственного составляет

от 0,50% до 0,57% (в том числе холина - от 0,08% до 0,10%); аскорбиновой

кислоты - от 0,13% до 0,38%; суммы свободных органических кислот - от

5,07% до 13,87%; тритерпеновых соединений - от 0,04% до 0,08%; дубильных

веществ - от 18,32% до 19,24%; каротиноидов - 5,70 мг%; эфирного масла - от 0,60% до 1,98%.

Изучен аминокислотный состав травы иссопа лекарственного и определено его количественное содержание. Аминокислоты травы иссопа лекарственного представлены 11 соединениями: аспарагиновой кислотой, треонином, серином, глицином, аланином, валином, лейцином, тирозином, лизином, фенилаланином, гистидином. Суммарное содержание свободных аминокислот составило 14,24 мг%. Доминирующими свободными аминокислотами травы иссопа лекарственного являются треонин и серии (7,63 мг%). Суммарное содержание связанных аминокислот составляет 45,32 мг%. Доминирующими связанными аминокислотами являются аспарагиновая кислота (9,13 мг%), треонин, серин (18,06 мг%), гистидин (6,19 мг%).

Проведено изучение макро- и микроэлементаого состава травы иссопа лекарственного с использованием элементного спектрального анализа. Установлено, что сырье иссопа содержит железо, калий, натрий, кальций, магний, алюминий, кремний, медь, цинк, серебро, стронций, фосфор, марганец, титан. Из макроэлементов преобладающими являются калий (1%), кальций (1%), магний (1%), из микроэлементов - кремний (0,3%), алюминий (0,1%).

Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве иссопа лекарственного идентифицировано 17 веществ фенольной природы, из которых 3 производных фенолкарбоновых кислот, 3 кумарина, 11 флавоноидов.

Выделение фенольных соединений осуществляли экстракцией 70% спиртом этиловым. Для разделения суммы веществ и выделения основных компонентов в индивидуальном состоянии использовали методы избирательной жидкостной экстракции, адсорбционной колоночной хроматографии на силикагеле и полиамиде, препаративной бумажной хромато1рафии, дробной кристаллизации. В качестве элюэнтов применяли хлороформ, этилацетат, водно-спиртовые смеси различных соотношений, воду

дистиллированную. Для выделения диосмина использовали ДМСО.

В результате из травы иссопа лекарственного выделено 9 индивидуальных соединений фенольной природы (рис. 1).

Полисахаридные комплексы выделяли по методике Н.К. Кочеткова и М. Sinner из шрота сырья, после экстракции, полифенольных соединений (рис. 1). Полисахаридные комплексы получали фракционно: водорастворимые полисахаридные комплексы (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлоза А (ГЦА) и гемицеллюлоза Б (ГЦБ).

Выход их составил: ВРПС - 13,7%, ПВ - 13,9%, ГЦА - 7,2%, ГЦБ - 2,7% от массы воздушно-сухого сырья.

Химическое изучение фенольных соединений и полисахаридов

При установлении структуры выделенных веществ использовали инструментальные физико-химические (УФ- и ИК-спектроскопию) и химические (кислотный, ферментативный гидролиз, щелочное расщепление) методы исследований (табл. 1).

Вещества 3.01 и 3.02 по флуоресценции пятен на хроматограммах в УФ-свете отнесены к кумаринам (таблица 1). Кумариновая природа исследуемых веществ подтверждена также их деструкцией кислотой йодистоводородной в среде жидкого фенола. Результаты изучения УФ- и ИК-спектров, продуктов химических превращений, сравнения величин Rf в различных системах растворителей позволили охарактеризовать вещество 3.01 как 6-метокси-7-оксикумарин или скополетин, а вещество 3.02 как 7-оксикумарин или умбеллиферон.

Вещество 3.03 по флуоресценции пятен на хроматограммах и качественным цветным реакциям с железа хлоридом, диазотированной кислотой сульфаниловой и бромкрезоловым зеленым отнесены к оксикоричным кислотам (табл. 1). Наличие в УФ-спектре исследуемого соединения максимумов поглощения в области 325 нм и 240 нм также подтверждает отнесение его к оксикоричным кислотам. Продукты щелочного гидролиза данного соединения идентифицировали с кофейной и D-хинной

Таблица 1

Физико-химические свойства фенольных соединений, выделенных из иссопа лекарственного

Номер вещества Наименование вещества Обшая формула Т.пл., "С Молекулярная масса УФ-спектр, Хмакс. нм Величина ИГ

Оксикумарины

3.01 Скополетин (6-метокси -7-оксикумарин) С10Н8О4 204 - 205 196,60 230,256, 298, 340 0,20 Г 0,60 3

3 02 Умбеллиферон (7-оксикумарин) С9Н603 233-234 162,88 250, 328 0,32 А 0,25 3

Оксикоричные кислоты

3.03 Хлорогеновая кислота (5-0 -кофенл-О-хииная кислота) С16Н1809 203-205 353,08 325,240, 330,375, 360,350 0,65 Е 0,70 Б

Флавоноидные соединения

3.07 Хризоэриол (5,7,4' -триокси, 3' -метоксифлавон) С16Н1206 330-331 300.00 350,270,255,395, 400,405,350 0,83 И

3 08 Диосмин (5,3' -диокси- 4' - метокси-7-О-рамноглюкозид флавона) С28Н32015 270-280 608,56 344,267,257, 384, 398 0,30 В 0,40 Г

3 09 Внтексин (8 С-З-Э-глюкопиранозил апигенияа) С21Н20О10 263-265 432,20 335,270, 380, 395 0.35 Д 0,20 В

3 10 Гиперозид (кверцетин-3-0-Р-С)-галактопиранозид) С21№ОО|2 235-237 464,00 365,265,255, 375,440,405, 380 0,49 В

3.11 Рутнн (кверцетин-3-0-|5-0-глгокопираноэо-(1-6)-0-а-Ь-рамнопиранозид) С27Н30О16 188-190 610.52 360,260, 395,420,410. 390. 360 0,68 Е 0,55 В

3 12 Виценин (6,8-С-|3-0-диглюкопнранозид апигенина) С27Н30О15 232-234 594.00 335,270, 390, 395,400 0,61 В 0,42 Ж

Примечание: системы растворителей для хромато трассирования:

А - бензол-этилацетат (2.1) - ТСХ («511иГо1»),

Б - 2%-й раствор кислоты уксусной - БХ,

В - 15%-Я раствор кислоты уксусной - БХ.

Г - хлороформ - зтанол - вола (100 50:2)-ТСХ («5ПиГо1»),

Д - 30%-П раствор кислоты уксусной - БХ

С- и-бутанол- кислота уксусная -вода (4:1.2)-БХ;

3 - хлороформ-формами! -БХ.

И - н танол- кислота укс) сная -подл (4 I 5)-БХ

Ж- 5°о-П раствор кислоты >кс\сноП -ЬХ

кислотами. С целью определения места присоединения остатка кофейной и Э-хинной кислот проводили нагревание вещества 3.03 с ледяной кислотой уксусной. При этом образование лактона не происходило, что указывает на замещение оксигруппы в С-5 положении Э-хинной кислоты остатком кислоты кофейной. Таким образом, вещество 3.03 охарактеризовано как 5-О-кофеил-В-хинная или хлорогеновая кислота.

Соединения 3.07-3.12 на основании качественных реакций, хроматографической подвижности и физико-химических характеристик отнесены к флавоноидам (табл. 1).

В ИК-спектре этих соединений имеются характерные для ароматической части флавоноидов полосы поглощения: 3385-2850 см"1 (фенольные оксигруппы), 1680-1615 см"1 (карбонильная группа у-пирона), 1620-1470 см"1 (колебания ароматических колец).

На основании положительной цианидиновой реакции в модификации Брианта, хроматографической подвижности в различных системах растворителей вещество 3.07 отнесено к агликонам флавоноидов. Положение свободных оксигрупп доказывали на основании данных прямой и дифференциальной УФ-спектроскопии, применяя ионизирующие и комплексообразующие реактивы. Продуктом щелочной деструкции вещества 3.07 являются флороглюцин и изовалериановая кислота. При дезметилировании исследуемого соединения образуется лютеолин. В результате вещество 3.07 охарактеризовано как 5,7,4'-триокси, З'-метоксифлавон или хризоэриол.

Вещества 3.08-3.12 на основании отрицательной цианидиновой пробы в модификации Брианта, результатов кислотного гидролиза отнесены к гликозидам флавоноидов. В дифференциальном ИК-спектре этих соединений, кроме полос поглощения, характеризующих их флавоноидную природу, обнаружены три полосы в области 1100-1010 см"1, указывающие на наличие в их структуре углеводов в пиранозной форме, полосы поглощения в области 900-880 см'1, характеризующие р-конфигурацию гликозидной связи между углеводом и агликоном.

При изучении конечных продуктов и динамики гидролиза установили, что вещества 3.08, 3.10, 3.11 сравнительно легко гидролизуются, что позволило отнести их к О-гликозидам, вещества же 3.09, 3.12 в обычных условиях гидролиза не расщепляются, что было основанием отнесения их к С-гликозидам.

Количественным кислотным гидролизом, сравнением УФ-спектров гликозидов и их агликонов, данными молекулярной массы показано, что О-гликозиды представлены О-монозидом (вещество 3.10) и О-биозидами (вещества 3.08, 3.11). Углеводная часть вещества 3.10 присоединена по 3 положению молекулы и представлена Б-галактозой. В результате вещество 3.10 охарактеризовали как кверцетин-З-О-р-Б-галактопиранозид или гиперозид. Флавоноидные биозиды разделились на производные флавона (вещество 3.08) и флавонола (вещество 3.11). Углеводная часть у вещества 3.11 присоединяется по 3 положению молекулы, а у вещества 3.08 по 7 положению. В продуктах кислотного гидролиза вещества 3.11 обнаружили кверцетин, Б-глюкозу и Ь-рамнозу, а вещества 3.08 - диосметин, Ь-рамнозу и В-глкжозу. Таким образом, вещество 3.08 идентифицировали как 5,3'-диокси, 4'-метокси-7-0-рамноглюкозид флавона или диосмин, а вещество 3.11 как кверцетин-З-О-р-В-глюкопиранозо-(1-6)-0-а-Ь-рамнопиранозид или рутин.

Структуру выделенных С-гликозидов устанавливали по продуктам кислотной окислительной деструкции, изомеризации, данным УФ- и ИК-спектров. Исследуемые С-гликозиды разделились на С-монозиды (вещество 3.09) и С-дигликозиды (вещество 3.12). Углеводный компонент данных соединений представлен В-глюкозой, у вещества 3.09 он присоединяется по 8 положению, а у вещества 3.12 по 6 и 8 положению молекул. В результате С-гликозиды охарактеризованы: вещество 3.09 как 8-С-Р-В-глюкопиранозид апигенина или витексин, а вещество 3.12-6,8-С-р-В-диглюкопиранозид апигенина или виценин.

Фенольные соединения: скополетин, умбеллиферон, хлорогеновая кислота, хризоэриол, гиперозид, витексин, рутин, виценин выделены из травы иссопа лекарственного впервые.

Изучен качественный и количественный моносахаридный состав выделенных полисахаридных комплексов (табл. 2).

Таблица 2

Содержание моносахаридов в полисахаридных комплексах из травы

иссопа лекарственного

Фракции полисахаридов Моносахаридный состав, %

галактоза глюкоза рамноза араби-ноза ксилоза галактуроновая кислота глюку- роновая кислота

ВРПС 10,8 13,4 4,6 5,0 - 1,5 1,6

ПВ 3,4 - 1,1 4,6 1,0 89,7 -

ГЦА 3,8 1,9 1,1 2,5 8,6 - -

ГЦБ 3,4 1,5 1,2 2,9 7,8 - -

В водорастворимых полисахаридных комплексах преобладающими являются глюкоза - 13,4% и галактоза - 10,8%. Основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота (89,7%). В ГЦА и ГЦБ преобладающим моносахаридом является ксилоза (8,6% и 7,8% соответственно), что указывает на наличие полисахаридов типа ксиланов.

Проведено количественное определение функциональных групп пектиновых веществ. Содержание свободных карбоксильных групп составляет 3,03%, метоксилированных карбоксильных групп - 0,79%, метоксильных групп - 0,54%. По степени этерификации карбоксильных групп (Х=20,94%, <50%), пектиновые вещества травы иссопа лекарственного отнесены к низко этерифицированным.

Исследование показателей качества лекарственного сырья «Иссопа трава»

Возможность применения в медицинской практике травы иссопа лекарственного вызывает необходимость разработки показателей качества и характеристик подлинности для сырья иссопа.

Для определения подлинности сырья проведены морфолого-анатомические исследования. Основными морфологическими признаками травы иссопа являются: стебель четырехгранный, коротко-опушенный; листья

короткочерешковые, почти сидячие, супротивные, ланцетные, заостренные, цельнокрайние; цветки мелкие, собраны по 5-7 в пазухах листьев, образующие продолговатые колосовидные соцветия; венчик двугубый, синий, фиолетовый, реже розовый или белый. Запах сырья ароматный, вкус пряный.

При исследовании микродиагностических признаков установлено: лист дорзовентрального строения, клетки верхнего эпидермиса листа извилисто-стенные, устьица отсутствуют или очень редко расположены, имеются простые одноклеточные колпачковидные волоски; клетки нижнего эпидермиса листа сильно извилистостенные, с многочисленными устьицами, эфиромасличными 8-клеточными железками и волосками: головчатыми - с одноклеточной ножкой и одноклеточной шаровидной головкой и простыми одноклеточными колпачковидными с бородавчатой поверхностью. Черешок в поперечном сечении округло-треугольный, с одним крупным проводящим пучком в центре. Стебель непучкового типа строения, лубяные волокна не образуют компактных пучков; по граням стебля одноклеточные и двух-, трехклеточные однорядные волоски. Эпидермис венчика и по краю чашечки опушен 2-3 клеточными простыми бородавчатыми волосками, имеется много эфиромасличных железок.

При установлении доброкачественности сырья определены числовые показатели: влажность не более 13%, зола общая не более 11%, зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной, не более 1%, экстрактивных веществ, извлекаемых 50% спиртом этиловым не менее 40%.

Одними из групп действующих веществ травы иссопа лекарственного являются флавоноидные соединения и полисахариды. Это послужило предпосылкой к разработке методик их количественного определения.

Для количественного определения суммы флавоноидов разработана

методика спектрофотометрического анализа, основанная на реакции

комплексообразования с алюминия хлоридом в среде 70% спирта этилового.

Измерение оптической плотности окрашенного комплекса проводили в области

максимума светопоглощения при длине волны 405 нм. Изучены и установлены

оптимальные условия экстрагирования, обеспечивающие максимальный выход

флавоноидов из сырья иссопа лекарственного: степень измельченное™ сырья -1,0 мм; экстрагент - 70% спирт этиловый; время экстракции - 1,5 часа, при соотношении сырья и эксграгента 1:100. Устойчивое окрашивание извлечений из травы с алюминия хлоридом наступает через 45 минут и сохраняется в течение 1,5 часа, что достаточно для проведения анализа.

Проведенные исследования позволили разработать методику количественного определения суммы флавоноидов. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 4,53%. Расчет содержания суммы флавоноидов вели в пересчете на гиперозид. Установлено, что содержание суммы флавоноидов в траве иссопа лекарственного колеблется от 0,33 % до 0,56 %. На основании данных эксперимента предлагаем установить норму содержания суммы флавоноидов в траве иссопа лекарственного - не менее 0,30 %.

Для количественного определения суммы водорастворимых полисахаридов за основу был взят гравиметрический метод, как наиболее распространенный для анализа лекарственного растительного сырья, содержащего полисахариды. Метод основан на экстракции суммы полисахаридов водой из сырья с последующим осаждением их 96% спиртом этиловым, высушиванием осадка и его взвешиванием. Проведенные исследования позволили определить оптимальные условия извлечения и осаждения ВРПС (табл. 3). Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 3,88%.

Таблица 3

Оптимальные условия количественного определения суммы ВРПС в траве

иссопа лекарственного гравиметрическим методом

Навеска сырья, г Степень измел ьче-ния, мм Уел экепц овия -¡акции Время экстракции, мин Условия осаждения Содержание суммы ВРПС, %

экстрагент соотношен ие сырье-экстрагент осадитель объем

10,0 2 вода 1:10 90 (3x30) 96% спирт этиловый 4 10,7-14,3

Экспериментально установлено, что содержание суммы полисахаридов в траве иссопа лекарственного колеблется от 10,7% до 14,3 %. На основании этих данных установлена норма содержания суммы полисахаридов в сырье «Иссопа трава» - не менее 10,0%.

Фармакологические исследования травы иссопа лекарственного

При определении острой токсичности установлено, что настои травы иссопа лекарственного в дозах до 9 г/кг массы тела в пересчете на сухое сырье и полисахаридные комплексы в дозах от 100 мг/кг до 300 мг/кг по классификации К.К. Сидорова относятся к классу практически не токсичных.

При исследовании отхаркивающей активности установлено, что настой из травы иссопа лекарственного повышает двигательную активность мерцательного эпителия на 24,32%, следовательно, обладает отхаркивающими свойствами.

Установлено, что настой травы иссопа лекарственного оказывает противовоспалительное действие, способствуя уменьшению выраженности воспалительной реакции на разных ее стадиях. Настой угнетает степень развития отека конечности белых мышей при асептическом воспалении, вызванном введением формалина на 45,55%, а также оказывает влияние на образование фиброзно-грануляционной ткани (процесс развития гранулемы угнетается на 43,51%).

При изучении влияния на проницаемость капилляров установлено, что при введении настоя в дозе 1 г/кг и полисахаридного комплекса в дозе 100 мг/кг увеличивается латентный период появления пятен окрашивания по сравнению с контролем на 32,80% и 38,66% соответственно, а также уменьшается их диаметр на 44,26% и 44,81% соответственно.

Обезболивающее действие настоя травы иссопа лекарственного изучали на двух моделях: модели «горячей пластинки» и модели «уксусных корчей». Исследуемый настой увеличивал латентный период болевой реакции (выпрыгивание на край цилиндра), а так же оказывая обезболивающее действие

при химическом раздражении, вызванном 0,75% раствором кислоты уксусной.

Изучение диуретической активности настоя по методу Е.В. Берхина показало наличие умеренного диуретического эффекта, статистически недостоверного по сравнению с контролем.

Исследование влияния настоя травы иссопа лекарственного на параметры Ре2+ - индуцированный хемилюминесценции (ХЛ) показало, что он оказывает ингибирующее влияние на кинетику ХЛ, о чем свидетельствует снижение свечения модельной системы на 37,25%, следовательно, обладает антиоксидантными свойствами.

В ходе исследования антибактериальной активности настоя, пектиновых веществ, полифенольного комплекса установлено, что антибактериальной активностью обладают настой и полифенольный комплекс, при этом наиболее активное действие наблюдалось у полифенольного комплекса.

ВЫВОДЫ

1. Проведено фитохимическое изучение травы иссопа лекарственного. Установлено наличие эфирного масла, фенольных соединений (флавоноидов, кумаринов, оксикоричных кислот, дубильных веществ), углеводных производных, азотсодержащих соединений, органических кислот, каротиноидов, тритерпеновых соединений.

2. Изучен компонентный состав фенольных соединений травы иссопа лекарственного. Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) идентифицированы 17 соединений, из которых 9 выделены в индивидуальном состоянии и установлена их структура. Среди выделенных соединений: 1 оксикоричная кислота - хлорогеновая; 2 кумарина -скополетин, умбеллиферон; 6 флавоноидов: хризоэриол, диосмин, витексин, гиперозид, рутин, виценин. Хлорогеновая кислота, скополетин, умбеллиферон, хризоэриол, витексин, гиперозид, рутин, виценин выделены из травы иссопа лекарственного впервые.

3. Впервые проведено изучение полисахаридов травы иссопа

лекарственного по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс

(ВРПС) - 13,6%; пектиновые вещества (ПВ) - 13,9%; гемицеллюлоза А (ГЦА) -

7,16% и гемицеллюлоза Б (ГЦБ) - 2,76%. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Определено содержание функциональных групп пектиновых веществ. Общая степень этерификации пектиновых веществ - 20,84%, что позволяет отнести их к низкоэтерифицированным и свидетельствует об их высокой комплексообразующей способности.

4. Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид и суммы полисахаридов. Содержание суммы флавоноидов в траве иссопа лекарственного составляет 0,33%-0,56%; суммы полисахаридов 10,7% -14,3%.

5. Проведено морфолого-анатомическое изучение травы иссопа лекарственного. Установлены диагностические признаки травы иссопа лекарственного: простые одноклеточные колпачковидные волоски и 2-3 клеточные, коленчато-изогнутые волоски, 8 клеточные эфиромасличные железки с радиально расположенными выделительными клетками.

0.3%, содержание полисахаридов, не менее 10,0%, влажность, не более 13,0%, содержание золы общей не более 11,0%, золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, не более 1,0%, экстрактивных веществ, извлекаемых 50% спиртом этиловым, не менее 40,0%.

7. Результаты скрининговых фармакологических исследований показали наличие у фитопрепаратов травы иссопа лекарственного (настоя, полисахаридных комплексов, полифенольных комплексов) отхаркивающей, противовоспалительной, анальгезирующей, антиоксидантной и антимикробной активности.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Бубенчикова, В.Н. Тритерпеновые соединения иссопа лекарственного / В.Н.

Бубенчикова, Т.В. Сень, Т.И. Егорова // Сб. работ 69 итог, сессии КГМУ и

отделения медико-биолог. наук Центрально-Черноземного науч. центра РАМН.

- Курск, 2004.- Ч. 2. -С.250-251.

2. Бубенчикова, В.Н. Минеральный состав иссопа лекарственного / В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень, Т.И. Егорова // Сб. работ 69 итог, сессии КГМУ и отделения медико-биолог. наук Центрально-Черноземного науч. центра РАМН.

- Курск, 2004,- Ч. 2. -С. 249-250.

3. Сень, Т.В. Изучение пектиновых веществ иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis) / Т.В. Сень // Молодежная наука и современность: материалы 69 межвуз. науч. конф. студентов и молодых ученых. - Курск, 2004,- 4.2. - С. 142143.

4. Сень, Т.В. Аминокислотный состав иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis) / Т.В. Сень, Е.В. Рыжова // Молодежная наука и современность: материалы 69 межвуз. науч. конф. студентов и молодых ученых. - Курск, 2004,4.2. - С.143-144.

5. Полисахаридный и аминокислотный состав некоторых растений флоры Центральной России / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Кондратова, Н.Ф. Гончаров, Т.В. Сень // Человек и лекарство: тез. докл. 11 Рос. нац. конгр. (г. Москва, 19-23 апр. 2004.). - М., 2004. - С. 768.

6. Бубенчикова, В.Н. Содержание и состав углеводов Hyssopus officinalis L. / В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень, Н.Ф. Гончаров // Актуальные вопросы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 8-го международ, съезда ФИТОФАРМ (г. Миккели, Финляндия; 21-23 июня 2004 г.). -Миккели, 2004. - С.240-242.

7. Бубенчикова, В.Н. Органические кислоты иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis L.) / В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2004.-Вып. 59. - С.10-11.

8. Бубенчикова, В.Н. Азотистые основания иссопа лекарственного / В.Н.

Бубенчикова, Т.В. Сень, О.В. Печенова // Современные вопросы мед. науки и

практики: сб. науч. тр. / КГМУ. - Курск, 2004,- С.295-296.

9. Бубенчикова, В.Н. Изучение веществ первичного биосинтеза иссопа лекарственного / В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень, Н.М. Проскурнина // Молодежная наука и современность: сб. тр. юбилей, науч. конф. КГМУ и сессии Центрально-Черноземного науч. центра РАМН / КГМУ. - Курск, 2005-4.2.-С. 215-216.

Ю.Сень, Т.В. Изучение анатомического строения листа иссопа лекарственного / Т.В. Сень, Н.Н. Жеребятьева, И.Ю. Вислогузова // Университетская наука: взляд в будущее: сб. тр. науч. конф. КГМУ и сессии Центрально-Черноземного науч. центра РАМН / КГМУ. - Курск, 2005.- Т. 2. - С. 126.

11 .Исследование антибактериальной активности некоторых представителей семейства норичниковые и губоцветные / О.Д. Печенин, В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Кондратова и др.// Человек и лекарство: тез.докл.12 Рос. нац. конгр. (г. Москва, 18-22 апр. 2005 г.). М., 2005,- С.694.

12.Определение подлинности сырья иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis L.) В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень, Л.И. Прокошева, Н.Н. Жеребятьева // Актуальные вопросы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 9-го международ, съезда ФИТОФАРМ (г.С.Петербург; 2005). - СПб., 2005. -С.416-419.

13.Бубенчикова, В.Н. Применение ВЭЖХ для идентификации кумаринов в траве иссопа лекарственного / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Кондратова, Т.В. Сень // Материалы 6 нац. съезда фармацевтов Украины: досягнення та перспективи розвитку фармацевтично1 галуз1 Укрши (г. Харьков, 28-30 сент. 2005 г.).-Харьков: Изд. Харьков. НфаУ, 2005. - С. 682.

14.Бубенчикова, В.Н. Обезболивающее действие иссопа лекарственного / В.Н. Бубенчикова, М.П.Гладченко, Т.В.Сень // Университетская наука: взгляд в будущее: сб. тр. юбилей, науч. конф. КГМУ и сессии ЦентральноЧерноземного науч. центра РАМН / КГМУ. - Курск, 2005 - 4.2. - С. 212-213.

15. Бубенчикова, В.Н. Фенолкарбоновые кислоты травы иссопа лекарственного / В.Н.Бубенчикова, Т.В.Сень, Е.В.Рыжова // Разработка,

исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. -Пятигорск, 2005,- Вып. 60. - С.16-17.

16.Исследование антибактериальной активности полифенольного комплекса иссопа лекарственного / О.Д. Печенин, В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень, Е.В. Рыжова // Университетская наука: взгляд в будущее: сб. тр. 71 науч. конф. и сессии Центрально-Черноземного науч. центра РАМН / КГМУ. - Курск, 2006.Ч. 2.-С. 188-189.

17.Изучение противоспалительной активности некоторых представителей семейства норичниковые и губоцветные / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Кондратова, Т.В. Сень, В.В. Гуреев И Тез. докл. 13 Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (г. Москва, 3-7 апр. 2006 г.). - М., 2006. -С.620.

18.Бубенчикова, В.Н. Изучение флавоноидов травы иссопа лекарственного методом ВЭЖХ / В.Н. Бубенчикова, Т.В. Сень, Н.Ф. Гончаров // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. -Пятигорск, 2006,- Вып. 61. - С. 7-8.

19.Изучение фармакологической активности Hyssopus officinalis Linn . / М.А. Смирнова, А.Я. Гусейнов, А.Г. Шабанов, В.Н. Бубенчикова и др. // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 10-го международ, съезда ФИТОФАРМ (г.С.Петербург; 2006). - СПб., 2006. -С.289-291.

20.Сень, Т.В. Изучение антифлогистической активности иссопа лекарственного / Т.В.Сень, Ю.А.Старчак // Молодежная наука и современность. Курск, 2006.-4.2.-С. 111-112.

21.Бубенчикова, В.Н. Изучение фенольных соединений надземной части лабазника шестилепестного и иссопа лекарственного методом ВЭЖХ / В.Н.Бубенчикова, Ю.А.Сухомлинов, Т.В.Сень // Вестник Ставропольского государственного университета. 2006. № 47.- С. 140-142.

Лицензия на издательскую деятельность ИД №06248 от 12.11.2001 г. Подписано в печать 21.12.2006 г. Формат 60x84/16 Усл.печ.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 1729.

Издательство Курского государственного университета 305000, г. Курск, ул. Радищева, д.ЗЗ

Отпечатано в лаборатории информационно-методического обеспечения КГУ

Оглавление диссертации Сень, Татьяна Владимировна :: 2007 :: Курск

Введение

Глава 1 ИССОП ЛЕКАРСТВЕННЫЙ, ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ,

ПРИМЕНЕНИЕ.

1.1 Ботаническая характеристика иссопа лекарственного

1.2 Химический состав иссопа лекарственного.

1.3 Фармакологические исследования иссопа лекарственного и применение его в народной медицине.

Глава 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Характеристика объектов исследования.

2.2 Методы фитохимического исследования.

2.2.1 Приготовление водных экстрактов для проведения качественных реакций.

2.2.2 Углеводные производные.

2.2.2.1 Свободные сахара.

2.2.2.2 Связанные сахара.

2.2.3 Азотсодержащие соединения.

2.2.3.1 Азотистые основания.

2.2.3.1 Качественное обнаружение.

2.2.3.1 Количественное определение.

2.2.3.2 Аминокислоты.

2.2.4 Дубильные вещества.

2.2.4.1 Качественное обнаружение.

2.2.4.2 Количественное определение.

2.2.5 Органические кислоты.

2.2.5.1 Качественное обнаружение.

2.2.5.2 Количественное определение свободных органических кислот.

2.2.5.3 Количественное определение аскорбиновой кислоты.

2.2.6 Приготовление спирто-водных извлечений и фракционирование природных соединений органическими растворителями.

2.2.7 Ку марины.

2.2.8 Оксикоричные кислоты.

2.2.9 Флавоноиды.

2.2.10 Тритерпеновые соединения.

2.2.10.1 Качественное обнаружение.

2.2.10.2 Количественное определение.

2.2.11 Каротиноиды.

2.2.11.1 Приготовление гексановых экстрактов.

2.2.11.2 Качественное обнаружение.

2.2.11.3 Количественное определение.

2.2.12 Эфирное масло.

2.2.13 Минеральный состав растения.

2.3 Методы изучения фенольных соединений.

2.3.1 Хроматографический анализ.

2.3.1.1 Хроматорграфический анализ фенольных соединений методом ВЭЖХ.

2.3.2 Физические методы анализа.

2.3.3 Химические методы доказательства структуры.

2.4 Методы изучения углеводов.

2.4.1 Кислотный гидролиз.

2.4.2 Хроматографический анализ.

2.4.3 Количественное определение моносахаридного состава.

2.4.3.1 Количественное определение моносахаридного состава полисахаридных комплексов денситометрическим методом.

2.4.4 Количественное определение функциональных групп пектиновых веществ.

2.5 Определение числовых показателей сырья.

2.5.1 Определение влажности.

2.5.2 Определение золы.

2.5.3 Определение экстрактивных веществ.

2.6 Морфолого-анатомические исследования.

2.7 Методы токсико-фармакологических исследований.

2.7.1 Изучение острой токсичности.

2.7.2 Изучение отхаркивающего действия.

2.7.3 Изучение противовоспалительной активности.

2.7.3.1 Влияние на процессы экссудации.

2.7.3.2 Влияние на пролиферацию.

2.7.3.3 Влияние на проницаемость капилляров у кроликов.

2.7.4 Изучение анальгезирующего действия.

2.7.4.1 Изучение анальгезирующего действия на модели горячая пластинка».

2.7.4.2 Изучение анальгезирующего действия на модели корчей».

2.7.5 Изучение диуретического действия.

2.7.6 Изучение антиоксидантной активности методом хемилюминисценции.

2.7.7 Изучение антимикробной активности.

2.8 Статистическая обработка результатов эксперимента.

Глава 3 ИЗУЧЕНИЕ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА, ВЫДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ ГРУПП БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИССОПА

ЛЕКАРСТВЕННОГО.

3.1 Изучение качественного состава основных групп биологически активных веществ.

3.1.1 Качественное определение углеводных производных.

3.1.1.1 Свободные сахара.

3.1.1.2 Связанные сахара.

3.1.2 Азотсодержащие соединения.

3.1.2.1 Качественное и количественное определение.

3.1.2.2 Качественное и количественное определение аминокислот.

3.1.3 Качественное и количественное определение дубильных веществ.

3.1.4 Органические кислоты.

3.1.4.1 Качественное и количественное определение органических кислот.

3.1.4.2 Количественное определение аскорбиновой кислоты.

3.1.5 Качественное определение кумаринов.

3.1.6 Качественное определение оксикоричных кислот.

3.1.7 Качественное определение флавоноидов.

3.1.8 Качественное и количественное определение тритерпеновых соединений.

3.1.9 Качественное и количественное определение каротиноидов.

3.1.10 Эфирное масло.

3.1.11 Минеральный состав растения.

3.2 Выделение основных групп биологически активных веществ.

3.2.1 Выделение фенольных соединений.

3.2.1.1 Разделение веществ хлороформной фракции.

3.2.1.2 Разделение веществ этилацетатной фракции.

3.2.1.3 Разделение веществ водного остатка.

3.2.1.4 Выделение диосмина.

3.2.2 Выделение углеводов.

3.2.2.1 Выделение водорастворимых полисахаридных комплексов

3.2.2.2 Выделение пектиновых веществ.

3.2.2.3 Выделение гемицеллюлозы А и гемицеллюлозы Б.

Глава 4 ХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

И УГЛЕВОДОВ ИССОПА ЛЕКАРСТВЕННОГО.

4.1 Исследование фенольных соединений иссопа лекарственного.

4.1.1 Оксикумарины.

4.1.2 Оксикоричные кислоты.

4.1.3 Флавоноидные соединения.

4.1.4 Изучение фенольных соединений травы иссопа лекарственного методом ВЭЖХ.

4.2 Исследование углеводов иссопа лекарственного.

4.2.1 Исследование качественного состава полисахаридных комплексов методом хроматографии на бумаге.

4.2.2 Количественное определение моносахаридного состава полисахаридных комплексов.

4.2.3 Количественное определение функциональных групп пектиновых веществ.

Глава 5 ИССЛЕДОВАНИЕ ПОДЛИННОСТИ, ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СЫРЬЯ «ИССОПА

ТРАВА».

5.1 Разработка характеристик подлинности.

5.1.1 Изучение морфологических признаков.

5.1.2 Изучение микродиагностических признаков.

5.2 Разработка показателей качества.

5.2.1 Определение влажности.

5.2.2 Определение золы.

5.2.3 Определение экстрактивных веществ.

5.2.4 Определение эфирного масла.

5.3 Разработка методик количественного определения основных групп действующих веществ травы иссопа лекарственного.

5.3.1 Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в траве иссопа лекарственного.

5.3.1.1 Методика количественного определения суммы флавоноидов.

5.4 Разработка методики количественного определение суммы полисахаридов в траве иссопа лекарственного.

5.4.1 Изучение условий гравиметрического определения суммы полисахаридов.

5.4.2 Методика количественного определения суммы полисахаридов.

Глава 6 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ИССОПА

ЛЕКАРСТВЕННОГО.

6.1 Изучение острой токсичности.

6.2 Изучение отхаркивающего действия.

6.3 Изучение противовоспалительной активности.

6.3.1 Влияние на процессы экссудации.

6.3.2 Влияние на пролиферацию.

6.3.3 Влияние на проницаемость капилляров у кроликов.

6.4 Изучение анальгезирующего действия.

6.4.1 Изучение анальгезирующего действия на модели «горячая пластинка».

6.4.2 Изучение анальгезирующего действия на модели корчи».

6.5 Изучение диуретической активности.

6.6 Изучение антиоксидантной активности.

6.7 Изучение антимикробной активности.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Сень, Татьяна Владимировна, автореферат

Цель и задачи исследования

Для выполнения поставленной цели решались следующие задачи: провести критический анализ данных литературы по современному состоянию изученности иссопа лекарственного; провести фитохимический анализ травы иссопа лекарственного по содержанию основных групп биологически активных веществ; выделить комплексы БАВ, содержащиеся в траве иссопа лекарственного, разделить их на индивидуальные компоненты; изучить структуру фенольных соединений; разработать методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов в сырье иссопа лекарственного для возможной его стандартизации; провести морфолого-анатомические исследования и установить диагностические признаки для сырья «Иссопа трава»; разработать числовые показатели качества сырья «Иссопа трава»; провести фармакологический скрининг настоя из травы иссопа лекарственного и комплексов БАВ, получаемых из него.

Научная новизна

Впервые проведено изучение фенольных соединений травы иссопа лекарственного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Идентифицированы 17 веществ фенольной природы, из низ 14 впервые для данного растения. Впервые установлено наличие: фенолкарбоновых кислот (изоферуловая кислота, хлорогеновая кислота, салициловая кислота), флавоноидов (витексин, хризоэриол, гиперозид, рутин, гесперидин, виценин, кверцетин, лютеолин, апигенин), кумаринов (скополетин, умбеллиферон).

Из травы иссопа лекарственного в индивидуальном состоянии выделены 9 индивидуальных веществ фенольной природы: оксикоричная кислота-хлорогеновая; кумарины - скополетин, умбеллиферон; флавоноиды -хризоэриол, диосмин, витексин, гиперозид, рутин, виценин.

В результате фармакологического скрининга установлено наличие у травы иссопа лекарственного отхаркивающей, противоспалительной, анальгезирующей, антиоксидантной и антимикробной активности.

На основании проведенных исследований разработаны, апробированы и внедрены: методика количественного определения суммы флавоноидов в траве иссопа лекарственного (Акт внедрения в работу ОГУЗ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» (г.Белгород): № 6 от 10 апреля 2006г.; Акт внедрения в работу ОКК ЗАО Фирма «Здоровье»: № 8 от 26 апреля 2006г.); методика количественного определения суммы полисахаридов в траве иссопа лекарственного (Акт внедрения в работу ОГУЗ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» (г.Белгород): № 7 от 11 апреля 2006г.; Акт внедрения в работу ОКК ЗАО Фирма «Здоровье»: № 5 от 19 апреля 2006г.); результаты микродиагностического анализа цельного сырья «Иссопа трава» (Акт внедрения в работу ОКК ЗАО Фирма «Здоровье»: № 6 от 21 апреля 2006г.)

Положения, выносимые на защиту результаты химического изучения травы иссопа лекарственного; методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов; результаты морфолого-анатомического изучения с установлением диагностических признаков сырья; итоги разработки и определения показателей качества сырья иссопа; результаты фармакологического скрининга настоя и комплексов БАВ, полученных из травы иссопа лекарственного.

Апробация работы Основные положения диссертации апробированы и представлены на межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2004, 2005, 2006); на итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2004); на юбилейной научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ (Курск, 2005); на региональной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, член-корреспондента АМН СССР, проф. Г.Е.Островерхова «Современные вопросы медицинской науки и практики» (Курск, 2004); на XI, XII, XI11 Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2004, 2005, 2006); на VI И, IX, X Международных съездах Фитофарм «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2005, 2006, Миккели, Финляндия, 2004); на научных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004, 2006); на 6 национальном съезде фармацевтов Украины «Досягнення та перспективи розвитку фармацевтичноГ галуз1 УкраГни» (Харьков, 2005).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Публикации По материалам диссертации опубликована 21 работа.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение иссопа лекарственного"

Общие выводы:

1. Проведено фитохимичеекое изучение травы иссопа лекарственного. Установлено наличие эфирного масла, фенольных соединений (флавоноидов, кумаринов, оксикоричных кислот, дубильных веществ), углеводных производных, азотсодержащих соединений, органических кислот, каротиноидов, тритерпеновых соединений.

2. Изучен компонентный состав фенольных соединений травы иссопа лекарственного. Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) идентифицированы 17 соединений, из которых 9 выделены в индивидуальном состоянии и установлена их структура. Среди выделенных соединений: 1 оксикоричная кислота - хлорогеновая; 2 кумарина - скополетин, умбеллиферон; 6 флавоноидов: хризоэриол, диосмин, витексин, гиперозид, рутин, виценин. Хлорогеновая кислота, скополетин, умбеллиферон, хризоэриол, витексин, гиперозид, рутин, виценин выделены из травы иссопа лекарственного впервые.

3. Впервые проведено изучение полисахаридов травы иссопа лекарственного по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПС) - 13,6%; пектиновые вещества (ПВ) - 13,9%; гемицеллюлоза А (ГЦА) - 7,16% и гемицеллюлоза Б (ГЦБ) - 2,76%. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Определено содержание функциональных групп пектиновых веществ. Общая степень этерификации пектиновых веществ - 20,84%), что позволяет отнести их к низкоэтерифицированным и свидетельствует об их высокой комплексообразующей способности.

5. Проведено морфолого-анатомичеекое изучение травы иссопа лекарственного. Установлены диагностические признаки травы иссопа лекарственного: простые одноклеточные колпачковидные волоски и 2-3 клеточные, коленчато-изогнутые волоски, 8 клеточные эфиромасличные железки с радиально расположенными выделительными клетками.

6. Установлены числовые показатели, характеризующие доброкачественность сырья «Иссопа трава»: содержание эфирного масла, не менее 0,6%, содержание флавоноидов, в пересчете на гиперозид, не менее 0,3%, содержание полисахаридов, не менее 10%, влажность, не более 13%, содержание золы общей не более 11,0%, золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, не более 1,0%, экстрактивных веществ, извлекаемых 50% спиртом этиловым, не менее 40%.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2007 года, Сень, Татьяна Владимировна

1. Антимикробная активность некоторых растений Черноморского побережья Кавказа, Йемена и Марокко / Т.Н.Ващенко, Н.В.Постникова,

2. B.А.Бандюкова. Несер Абдо Галее // Материалы 49 регион, конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров.- Пятигорск, 1994. С. 160-161.

3. Антибактериальная активность извлечений из некоторых видов цветковых растений / В.А. Бандюкова, O.A. Андреева, Н.И. Богаевская и др. // Раст. ресурсы. 1990. - Т.26, вып.2. - С. 169-178.

4. Антиокислительная активность флавоноидов в различных системах перекисного окисления липидов / В. А. Костюк, А.И. Потапович,

5. C.М. Терещенко и др. // Биохимия. 1988. - Т. 53, N8. - С. 1365-1370.

6. Антиокислительная активность флавоноидов в системе микросомального окисления / А.И. Потапович, В.А. Костюк, С.М. Терещенко и др. // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине. Рига, 1989. - С. 187190.

7. Антиоксидантная активность показатель качества эффективности фитопрепаратов / Е.И. Шкарина, Т.В. Максимова, В.П. Пахомов и др. // Фармация на современном этапе - проблемы и достижения: сб. науч. тр. НИИФ. - М., 2000. - Т. 39, ч. 2. - С. 168-174.

8. Аверина, В.Ю. Особенности накопления эфирного масла в онтогенезе интродуцированных видов сем. Яснотковых / В.Ю. Аверина, Н.Г.Гемеджиева, М.К.Кукенов и др. // Четверта м1жнародна конференщя з медичноГ боташки: тези доповщей.- Киев, 1997.- С.372-373.

9. Акопов, И.Э. Кровоостанавливающие растения / И.Э. Акопов. Ташкент: Медицина, 1981.- 295 с.

10. Аслани, У. Эфиромасличные растения Албании / У. Аслани // Раст. ресурсы. 1992. - Т. 28, вып. 2. - с. 80 - 84.

11. Атлас лекарственных растений СССР.- М.: Гос. изд-во мед. лит., 1964.- 702 с.

12. Ахрем, A.A. Тонкослойная хроматография / A.A. Ахрем, А.И. Кузнецова. М.: Наука, 1964. - 176 с.

13. Ахмедов, Р. В растениях целебная сила / Р.В. Ахмедов. М.: АО «Байт», 1994. -200 с.

14. Балицкий, К.П. Лекарственные растения и рак / К.П. Балицкий, А.П. Воронцова. Киев, 1982. - 375 с.

15. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды /

16. B.А. Бандюкова // Химия природ, соединений. 1983. - № 3. - С. 263 - 273.

17. Бандюкова, В.А. Каталитическое ацетилирование флавоноидов / В.А. Бандюкова, В.Д. Пономарев // Химия природ, соединений. 1971. - № 4.1. C. 215-219.

18. Бандюкова, В.А. Методы исследования природных флавоноидов / В.А. Бандюкова, A.J1. Шинкаренко, A.JI. Казаков. Пятигорск: Бальнеологический ин-т, 1977. - 72 с.

19. Бандюкова, В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге / В.А.Бандюкова // Раст.ресурсы.-1965. Т.1, вып.4. - С.391.

20. Барабой, В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой. Киев: Наукова думка, 1976. - 260 с.

21. Барнаулов, О.Д. Влияние присыпок и отваров из некоторых растений флоры Монгольской народной Республики на заживление ран у мышей / О.Д. Барнаулов // Раст. ресурсы. 1981. - Т. 17, вып. 3. - С. 462-469.

22. Беликов, В.В. Избирательный метод анализа флавоноидов и фитохимических препаратов. ВНИИХ-ТЛС / В.В. Беликов, Т.В. Точкова, Н.Т. Колесник // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. М., 1991. - Т. 2, ч. 2. - С. 13.

23. Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата, 1973. - С. 168-172.

24. Беликов, В.В. Спектрофотометрия комплексных соединений флавоноловых смесей / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Совр. проблемы фармацевт, науки и практики: тез. докл. II съезда фармацевтов УССР. Киев, 1972.-С. 572-575.

25. Беликов, В.В. Методы анализа флавоноидных соединений / В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация. 1970. - № 1. - С. 68-72.

26. Беллами, Л. Инфракрасные спектры сложных молекул / Л. Беллами. -М.: Изд-во иностр. лит., 1963. 590 с.

27. Беллами, Л. Новые данные по ИК-спектрам сложных молекул / Л. Беллами. М.: Мир, 1971. - 318 с.

28. Беляков, К.В. Количественное определение полисахаридов в листьях мать-и-мачехи (Tussilago farfara L.) / K.B. Беляков, Д.М. Попов // Фармация. -1999.-№ 1.-С. 23-24.

29. Бодоев, A.B. Влияние экстракта черных листьев бадана толстолистного и его лекарственной формы на течение раневых повреждений кожи: автореф. дис. . канд. мед. наук / A.B. Бодоев. Улан-Уде, 1999. - 24 с.

30. Бранги, Т.А. К вопросу о механизмах успокаивающего влияния аминокислот на сократительную способность миокарда / Т.А.Бранги // Вопросы фармакологической регуляции деятельности сердца.- М., 1969. С. 84-85.

31. Бубенчикова, В.Н. Изучение состава фенольных соединений донника лекарственного методом ВЭЖХ / В.Н. Бубенчикова, И.Л. Дроздова // Хим. -фармацевт, журн. 2004. - Т. 38, № 4. - С. 24-25 .

32. Бузиашвили, Ш.Ш. Химическое изучение природных полифенолов: автореф. дис. . канд. фармац. наук / Ш.Ш. Бузиашвили. Харьков, 1972. - 20 с.

33. Василенко, В.Е. Определение хлорхолинхлорида в объектах внешней среды методом тонкослойной хроматографии / В.Е. Василенко // Гигиена и санитария. 1980. - № 10. - С. 54-56.

34. Виноградова, Р.П. Физико-химические методы анализа в биохимии / Р.П. Виноградова, Б.Л. Цидзевич, С.Н. Храпунов. Киев, 1983. - 387 с.

35. Вичканова, С.А.Эфирные масла как источник новых противогрибковых препаратов / С.А. Вичканова, В.В. Адгина, С.Б. Изосимова // Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных растений, Москва.-С.123-126.

36. Волягина-Малютина, Е.Т. Лекарственные растения / Е.Т.Волягина-Малютина. СПб: Специальная литература, 1996. - 233 с.

37. Гажев, Б.Н. Лечение болезней органов дыхания у взрослых и детей / Б.Н. Гажев, Т.А. Виноградова, В.К.Мартынов.- СПб.: МиМ, 1997. 200 с.

38. Гаммерман, А.Ф. Антимикробные свойства лекарственных растений тибетской медицины / А.Ф. Гаммерман, К.Ф. Блинова, А.Н. Бадмаев // Фитонциды. Киев, 1967. - С. 107-114.

39. Гацура, В.В. Методы первичного фармакогностического исследования биологически активных веществ / В.В. Гацура. М.: Медицина, 1974. - 143 с.

40. Гейссман, Т. Цветные реакции на флавоноидные соединения / Т. Гйссман // Химические методы анализа растений: сб. ст. М.: Изд-во ИП, 1960.- 469 с.

41. Гиниатулин, P.A. Механизм действия холина на тионевральную передачу: автореф. . дис.д-ра. мед.наук / Р.А.Гиниатулина. М., 1981. - 37 с.

42. Гончаров, А.Г. Исследования растительного полисахаридного комплекса / А.Г. Гончаров, Т.И. Исакова, Л.Д. Халеева // Актуальные вопросы поиска и технологии лекарств: тез. докл. Республик, науч. конф. Харьков, 1981.-С. 139.

43. Горбунова, Т.А. Стандартизация сухого сока каланхое / Т.А. Горбунова, Т.Д. Даргаева // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР. М., 1991. - Т. 29. - С. 190-195.

44. Горин, А.Г. Получение и фитохимическое исследование полисахаридов из лекарственных растений / А.Г. Горин // Всерос. съезд фармацевтов: тез. докл.- Свердловск, 1975. С. 313-314.

45. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

46. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989.-400 с.

47. Государственный Реестр лекарственных средств. М., 2003. -1300 с.

48. Гребнева, Н.Ю. Некоторые фармакологические свойства водных извлечений растительного сбора "Полестелл" для лечения легочных заболеваний / Н.Ю. Гребнева, Е.Е. Лесиовская, Н.П. Харитонова // Раст. ресурсы. 1999. - Т. 35, вып. 3. - С. 25-34.

49. Гусева, Л.П. Иссоповое масло подмосковного района / Л.П. Гусева // Исследование состава русских эфирных масел: тр. науч. хим.-фармац. ин-та.-1927.-Вып. 17.-С. 159-165.

50. Делова, Г.В. Антибактериальные и антифунгальные свойства эфирных масел некоторых видов Губоцветных / Г.В. Делова, И.Н. Гуськова // Комплексное изучение полезных растений Сибири. Новосибирск: Наука, 1974.-С.131-141.

51. Деканосидзе, Г.Е. Биологическая роль, распространение и химическое строение тритерпеновых гликозидов / Г.Е. Деканосидзе, В.Я. Чирва, Т.В. Сергиенко. Тбилиси, 1984. - 348 с.

52. Джисман, Т. Биогенез фенолов растительного происхождения / Т. Джисман // Биогенез природных соединений. М., 1965. - С.482-527.

53. Драник, Л.И. Выделение и химическое изучение полифенольных соединений артишока: автореф. дис. . канд. фармац. наук / Л.И. Драник. Л., 1967.- 16 с.

54. Енгалычева, Е.И. Полисахариды из листьев мать-и-мачехи / Е.И. Енгалычева, Л.И. Линевич, Е.Я. Ладыгина// Фармация.- 1984. №3. - С.13-16.

55. Забазная, Е.И. Полисахариды Viloa tricolor / Е.И. Забазная // Химия природ. соединений. 1985. - № 1. - С. 113.

56. Завражнов, В.И. Лекарственные растения / В.И. Завражнов. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1993. - 478 с.

57. Замятина, Н. Лекарственные растения / Н. Замятина. М., 1998.- 493 с.

58. Запрометов, М.Н. Фенольные соединения и методы их исследования // Биохимические методы в физиологии растений / М.Н. Запрометов. М., 1971. -С. 185-207.

59. Зеленская, К.Л. Обезболивающий эффект спиртовых извлечений из Inula Heenium / К.Л. Зеленская, Т.Н. Поветьева, В.Г. Пашинский // Раст. ресурсы. -2003. вып. 2. - С. 82.

60. Землинский, С.Е. Лекарственные растения СССР / С.Е. Землинский. М.: Изд-во моек, о-ва испытателей природы, 1949.- 355 с.

61. Зяблицева, Н.С. Изучение полисахаридов клубней топинамбура и создание на их основе лечебно-профилактических средств: дис. . канд. фармац. наук / Н.С. Зяблицева. Пятигорск, 1998. - 158 с.

62. Иванов, С. Рецепты природы / С. Иванов.- СПб., 1992. Кн. 1. - 346 с.

63. Ивашев, М.Н. Выделение диосмина из растений рода Вика и Иссопа лекарственного и его влияние на свертывание крови / М.Н. Ивашев, O.A. Андреева, В.А. Бандюкова,Т.Д. Драгалева // Хим.- фармацевт, журн. 1995. - № 10.-С. 39-41.

64. Изучение пектинов диких яблок / М.Х.Маликов, Д.А.Рахимов, Э.Л.Кристаллович и др. // Химия природных соединений. 1993. - № 3. С. 355358.

65. Исследование взаимодействия пектиновых веществ с солями меди, ртути, цинка и кадмия / Г.Н. Коцева, Е.П. Кухта, Э.П. Панова, В.Я. Чирва // Химия природ, соединений. 1988. - № 2. - С. 171-179.

66. Казаринова, Н.В. Лекарственные растения в лечении разных форм туберкулеза (обзор русскоязычной литературы) / Н.В. Казаринова, К.Г. Ткаченко // Раст. ресурсы. 2000. - Т. 36, вып. 1. - С. 92-106.

67. Кемертелидзе, Э.П. Физико-химические методы анализа некоторых биологически активных веществ растительного происхождения / Э.П. Кемертелидзе, В.П. Георгиевский. Тбилиси, 1976. - 224 с.

68. Кит, С.М. Лекарственные растения в эндокринологии / С.М. Кит, И.С. Турчин. Киев.: Здоров'я, 1986.- 80 с.

69. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.

70. Ковалев, И.П. Инфракрасные спектры поглощения некоторых природных соединений / И.П. Ковалев, Е.В.Титов. Харьков: Изд-во Харьковского ун - та, 1966.-203 с.

71. Ковалев, И.П. Исследование флавоноидных гликозидов I Моногликозиды / И.П. Ковалев, В.И. Литвиненко // Химия природ, соединений. 1965. - № 4. -С. 233-241.

72. Ковалев, В.Г. Нейроактивные аминокислоты и регуляция кровообращения / В.Г.Ковалев. Тр.ин-та // Волгоградский мед.ин-т. 1977. -Т.ЗО. -вып.З. - С.13-16.

73. Ковалева, Н.Г. Лечение растениями / Н.Г. Ковалева. М.: Медицина, 1971.-350 с.

74. Коган, В.Е. Соотношение активности антиоксидантных систем и перекисного окисления липидов в миокарде левого и правого желудочков сердца / В.Е. Коган, В.М. Савов, В.В. Диденко // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1984. - № 6. - С. 664-666.

75. Количественное определение тритерпеновых сапонинов в пя-тикомпонентной растительной композиции / Т.Г. Заркуа, Д.М. Попов, А.Д. Бакуридзе, Р.В. Махарадзе // Современные аспекты изучения лекарственных растений: науч. тр. М., 1995. - Т. 34. - С. 177.

76. Комиссаренко, С.Н. Пектины их свойства и применение / С.Н. Комиссаренко, В.Н. Спиридонов // Раст. ресурсы. - 1998. - Т. 34, вып. 1. - С. 111-119.

77. Компанцева, Е.В. Идентификация и количественное определение флавоноидов в многокомпонентном лекарственном средстве кардиотонического действия / Е.В. Компанцева, А.Ю. Айрапетова // Фармация. -2000.-№ 1.-С. 40-41.

78. Королев, В.А. Фармакогностическое изучение представителей рода Донник: автореф. дис. . канд. фармац. наук / В.А. Королев. Пермь, 1996. - 26 с.

79. Коршун, М.О. Новые методы элементного микроанализа / М.О. Коршун, Н.Е. Гельман. М., Д.: Госхимиздат, 1949. - 119 с.

80. Котуков, Г.Н. Лекарственные и эфиромасличные культуры / Г.Н.

81. Котуков. Киев: Наукова Думка, 1964.- 200 с.

82. Кочеткова, A.A. Классификация и применение пектинов / A.A. Кочеткова, А.Ю. Колесов // Пищевая промышленность. 1995. - № 9. - С. 28-29.

83. Кудрицкая, O.E. Каротиноиды плодов и ягод / O.E. Кудрицкая. Киев: Высш. шк., 1990.-С. 212.

84. Кузнецова, Г.А. Природные кумарины и фурокумарины / Г.А. Кузнецова. Л.: Наука, 1967. - 248 с.

85. Лигай, Л.В. Изучение углеводов Malva neglecta / Л.В.Лигай, Д.А.Рахимов, В.А.Бандюкова // Химия природных соединений. 1989. - № 2.-С.280-281.

86. Литвиненко, В.И. Некоторые принципы и методические разработки в исследовании фенольных соединений / В.И. Литвиненко // Современные проблемы науки и практики: тез. докл. II Съезда фармацевтов УССР. Киев, 1972. - С. 674-676.

87. Литвиненко, В.И. Химия природных флавоноидов и создание препаратов при комплексной переработке растительного сырья: автореф. дис. . д-ра хим. наук / В.И. Литвиненко. Харьков, 1990. - 80 с.

88. Литвиненко, В.И. Щелочной гидролиз флавоноидных гликозидов / В.И. Литвиненко, В.А. Макаров // Химия природ, соединений. 1969. - № 5. - С. 366-369.

89. Литвиненко, В.И. Спектральные исследования флавоноидов: обнаружение оксигрупп в различных положениях / В.И. Литвиненко, Н.П. Максютина// Химия природ, соединений. 1965. - № 6. - С. 420-424.

90. Лавренова, Г.В. Лекарственные травы / Г.В. Лавренова.- М.: Тера, 1999.- Кн. 2. -477 с.

91. Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова.- М.: ОЛМА-ПРЕСС, 1999.- Т.1.- 735 с.

92. Лавренова, Г.В. Лекарственные травы / Г.В. Лавренова. М.: Тера, 1999. -Кн. 2. -477 с.

93. Ладынина, Е.А. Траволечение / Е.А. Ладынина, P.C. Морозова. М., 1991. - Вып. 1.- 44 с.

94. Лукманова, К.А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерон / К.А.Лукманова, В.А.Рябчук. Н.Х.Салихова // Фармация. 2000.1. С.25-27.

95. Лященко, А. БАД в аптеке: быть или не быть / А. Ляшенко // Новая аптека: Аптека и рынок. 2003.- № 1.- С. 57.

96. Максимов, О.Б. Распространение антиоксидантов среди травянистых цветковых растений Приморского края / О.Б. Максимов, П.К. Горовой, O.E. Кривощекова// Раст. ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 4. - С. 426-431.

97. Максимов, О.Б. Скрининг для обнаружения антиоксидантов в экстрактах из растений / О.Б. Максимов, Н.М. Ребачук, Л.В. Богуславская // Раст. ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 2. - С. 216-220.

98. Максютина, Н.П. Спектральные исследования флавоноидов: обнаружение оксигрупп в различных положениях / Н.П. Максютина // Химия природ, соединений. 1965. - № 6. - С. 420-424.

99. Максютина, Н.П. Методы выделения и исследования флавоноидных соединений / Н.П. Максютина, В.И. Литвиненко // Фенольные соединения и их физиологические функции. М., 1968. - С. 7-21.

100. Макарчук, Н.М. Фитонциды в медицине / Н.М. Макарчук, Я.С. Лещинская, Ю.А. Акимов и др.- Киев: Наукова Думка, 1990.- 211 с.

101. Малогулова, Т.Н. Перспективные лекарственные растения в Северном Зауралье / Т.Н. Малогулова, Г.З. Берсон // Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации: тез. докл. науч.- практ. конф. -Самара, 1996.- 150-151.

102. Машанов, В.И. Пряно-ароматические растения / В.И. Машанов, A.A. Покровский. М.: ВО «Агро-промиздат», 1991.- 287 с.

103. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Машковский.- 14-е изд., перераб., испр. и доп. М.: ООО "Издательство Новая Волна", 2000. -Т.1.- 540 е.; Т.2.-608 с.

104. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М., 2000.

105. Муравьева, Д.А. Азотистые основания омелы белой и формианы простой / Д.А. Муравьева, О.И. Попова, К.О. Гаспарян // Фармация. 1991. - № 1.-С. 16-17.

106. Наканиси, К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений / К. Наканиси. М.: Мир, 1965. - 216 с.

107. Ноздрюхина, Л.Р. Биохимическая роль микроэлементов в организме животных и человека / Л.Р.Ноздрюхина. М., 1986. - С. 184.

108. Новые эфиромасличные культуры. Симферополь, 1988.- С.34-38.

109. Ойвин, И.А. О роли фибрина в механизме сосудистой проницаемости / И.А. Ойвин, В.И. Ойвин, В.П. Балуда // Бюл. эксперим. биол. 1962. - Т. 54, № 10.-С. 45-47.

110. Оголевиц, Г.С. Энциклопедический словарь лекарственных, эфиромасличных и ядовитых растений / Г.С. Оголевиц. М.: Гос. изд. сельхоз. лит., 1951.- 486 с.

111. Оценка показателей антиоксидантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев, Е.И. Шкарина, Т.В. Максимова и др. // Хим. фармац. журн. - 1999. - № 11. - С. 17-20.

112. Парфенов, Э.А. Фармакологический потенциал антиоксидантов на основе кумарина: обзор / Э.А. Парфенов, Л.Д. Смирнов // Хим. фармац. журн.- 1988.-Т. 22, № 12.-С. 1438-1448.

113. Полная энциклопедия народной медицины.- М., 2003. Т. 3.

114. Патент 2207143. Пилат, Т. Л. Б АД «Бронхоастмин» для профилактики и поддерживающей терапии бронхиальной астмы и воспалительных заболеваний органов дыхания / Т.Л. Пилат // Бюл. изобретений. 2003. - С. 773.

115. Пектин. Производство и применение / Н.С. Карпович, Л.В. Донченко, В.В. Нелина и др. Киев, 1988. - С. 125.

116. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного растительного сырья / В.Д. Пономарев. М.: Медицина, 1978. - 204 с.

117. Почему растения лечат / М.Я.Ловкова, А.М.Рабинович, С.М.Пономарева и др. // М.: Наука, 1989. 256 с.

118. Прокопенко, А.Г. Влияние холина на синтез антител печенью / А.Г.Прокопенко / Тр.ин-та // Курский мед.ин-т. 1983. - вып.28. - С. 167-190.

119. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав и использование; Семейства. Л.: Наука, 1985. - 336 с.

120. Руководящие методические материалы по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств. М., 1986. - 4.6. - С. 5166.

121. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: ЗАО «ИИА Ремедиум», 2000. - 398 с.

122. Русакова, В.Х. Экологическая и фитоценотическая характеристика

123. Hyssopus officinalis L. sabsp.aristatus в Болгарии / В.Х. Русакова // Раст.ресурсы.- 1999.- Вып. 2,- С.131-135.

124. Рабинович, A.M. Лекарственные травы и рецепты древних времен / A.M. Рабинович. М.: Росагропромиздат, 1991.- 173 с.

125. Рутовский, Б.Н. Эфирные масла. Т. 1 / Б.Н. Рутовский. М.-Л.: Изд-во сельхоз. и. колхозно - кооператив, лит., 1931.- 594 с.

126. Сернов, Л.М. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.М. Сернов, В.В. Гацура. М., 2000. - 352 с.

127. Скакун, Н.П. Применение антиоксидантов и антигипоксантов при туберкулезе (обзор литературы) / Н.П. Скакун // Врачеб. дело. 1991. - № 3. -С. 52-56.

128. Смирнова, Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного / Л.П. Смирнова, Л.Н. Первых // Хим. фармац. журн. - 1998. - № 6. - С. 35-38.

129. Смирнова, Н.И. Галактоманнаны некоторых видов сем. Fabaceae / Н.И. Смирнова, И.Е. Лобанова, О.В. Анулов // Раст. ресурсы. 1998. - Т. 34, вып. 4. -С. 68-71.

130. Смит, Л. Прикладная ИК спектрометрия / Л. Смит. - М.: Мир, 1982. -237 с.

131. Соколов, С .Я. Справочник по лекарственным растениям / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Медицина, 1990. - 510 с.

132. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Моносахариды) / Б.Н. Степаненко. М.: Высш. шк., 1977. - 222 с.

133. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. М.: Высш. шк., 1978. - 256 с.

134. Сапронова, H.H. Растения, запрещенные к использованию в составе БАД / H.H. Сапронова // Новая аптека: Аптека и рынок.-2003.- № 4.- С. 60.

135. Сур, C.B. Методы выделения, идентификации и определения терпеновых соединений (обзор) / C.B. Сур // Хим. фармац. журн.- 1990.- № 5.-С.42-50.

136. Ткаченко, В.Х. Особенности переработки растительного сырья для увеличения выхода эфирных масел / К.Г. Ткаченко, И.Г. Зенкевич, М.М. Коробова //Раст. ресурсы.- 1998. Вып. 3.- С. 129 - 131.

137. Точкова, T.B. Аналитическое исследование препаратов и растительного сырья, содержащего флавоноиды: автореф. дис. . канд. фармац. наук / Т.В. Точкова. Харьков, 1984. - 22 с.

138. Тринус, Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф.П. Тринус, H.A. Мохорт, Б.М. Клебанов. Киев, 1975. - 240 с.

139. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова. М.: Медицина, 1974. - 424 с.

140. Туроходжаев, М.Т. Растительные пектиновые вещества. Способ выделения пектиновых веществ / М.Т. Туроходжаев, М.А. Ходжаев // Химия природ, соединений. 1993. - № 5. - С. 635-643.

141. Удельнова, Т.Н. Микроэлемент, экология и здоровье человека / Т.Н. Удельнова. С.Г. Торгин, В.А. Ягодин // Успехи современной биологии. 1990. -вып. 2.-С.279.

142. Физико-химические свойства пектинов / E.H. Губенкова, В.К. Сомов, В.А. Шеенсон, А.И. Сомова // Пищевая промышленность. 1988. - № 5. - С. 1316.

143. Филиппов, М.П. Колориметрическое определение уронидной части в пектиновых веществах / М.П. Филиппов // Изв. АН МССР: Сер. биол. и хим. наук. 1973.-№3.-С. 76-79.

144. Фитотерапия антиоксидантами биофлавоноидами / В. К. Колхир, H.A. Тюкавкина, В.А. Быкова и др. // Человек и лекарство: тез. докл. V Рос. нац. конгр. -М., 1998. - С. 374.

145. Фогель, И.В. Характеристика пряноароматических растений из семейства Губоцветные (Lamiaceae L.) по количественному содержанию и качеству эфирных масел: автореф. дис. . канд. биолог, наук / И.В. Фогель. -СПб., 1997.-21 с.

146. Харборн, Д. Биохимия фенольных соединений / Д. Харборн.- М.: Мир, 1969. -572 с.

147. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М.: Высш. шк., 1984. - 176 с.

148. Химия и биохимия бобовых растений / под ред. Н.М. Запрометова. -М.: Агропромиздат, 1986. С. 21-22.

149. Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайца, К. Мацека. М.: Изд-во иностр. лит., 1962. - 851 с.

150. Хроматография. Практическое приложение метода. М.: Мир, 1986. -397 с.

151. Ходжиматов, К.Х. Некоторые биологические особенности, динамика содержания и состав эфирного масла Иссопа лекарственного, выращиваемого в Ташкентской области / К.Х. Ходжиматов, Н. Рамазанова // Раст. ресурсы. -1975.- Т.11, вып.2. С.238-242.

152. Черонис, Н. Микро- и полумикрометоды органического функционального анализа / Н. Черонис. М.: Химия, 1973. - 576 с.

153. Чушенко, В.Н. Исследования в области анализа полисахаридных препаратов: автореф. . канд. фармац. наук / В.Н. Чушенко. Харьков, 1980. -16 с.

154. Шаварда, A.JI. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая / A.JI. Шаварда, И.И. Чемесова, JI.M. Беленовская // Раст. ресурсы. 1998. - Т. 34, вып. 2.-С. 1-8.

155. Штабский, Б.М. К методике определения среднесмертельных доз и концентраций химических веществ /Б.М. Штабский // Гигиена и санитария. -1980. -№ 10.-С. 49-61.

156. Шаварда, A.JI. Эфиромасличные растения Монголии. Терпеноидный состав эфирных масел некоторых видов сем. Губоцветных / A.JI. Шаварда, Л.П. Маркова, Т.П. Надежина и др. // Раст. ресурсы.- 1980.-Т. 16, вып.2.- С. 286-290.

157. Эндокринология и метаболизм / Ф.Фелинг, Д.Бакетер, А.Бродус и др. // М.: Мир, 1985.-Т.2.-360 с.

158. Лпсарсыа рослини: енциклопедичний довщник / под ред. A.M. Гродзшского. КиГв, 1990. - 580 с.

159. Йорданов, Д. Фитотерапия / Д. Йорданов, П. Николов, Асп. Бойчинов. -3-е изд. София: Медицина и физкультура, 1972. - 346 с.

160. Стоянов, Н. Нашите лекарственные растения: в 2 ч. София, 1972. -Ч. 1.- 542 е.; Ч. 2.-551 с.

161. Agronomical and phytochemical investigation of Hyssopus officinalis. K.P. Svoboda, B.Galambosi, S.G. Deans, E. Hethelyi // Agric. Sci. Finl. 1993. - P. 293301.

162. Antioxidant activity of flavonoids is governed by number and location of the their aromatic groups / Z.Y. Chen, P.T. Chan, K.P. Ho et al. // Chemistry and Physics of Lipids. 1996.-N 79. - P. 157-163.

163. Arti, A. Structure-activity relationships for antioxidant activities of a siries of flavonoids in a liposomal system / A. Arti, G.N. Muraleedharan, M. Gale // Free Radic. Biol, and Med. 1998. - Vol. 24, N9. - P. 1355-1363.

164. Bate-Smith, E.E. The phenolic constituents of plants and their toxonomic significance / E.E. Bate-Smith // Bot. J Linn. Soc. 1962. - Vol. 58, N 371. - P. 95173.

165. Bors, W. Flavonoids as antioxidants: Determinations of radical-scavenging effeciens / W. Bors, W. Heller, C. Michael // Metods Ensimol. Academic Press. San Diego, 1990. - Vol. 186. - P. 343-355.

166. Briant, E.T. A note of the differentiation between flavonoid gicosides and their aglicones / E.T. Brifnt // J. Amer. Pharm. Assoc.- 1950.- Vol. 39, N 8. P. 480488.

167. Cao, G. Antioxidant and prooxidant behavior of flavonoids: Structure-activity relationships / G. Cao, E. Sofie, R.L. Prior // Free Radic. Biol, and Med. -1997.-N22.-P. 749-760.

168. Cumminys, I. A sequential probability ratio method for detection compounds with diuretic activity in rats /1. Cumminys, J. Haynes, L. Upchuck // J. Pharmacol E. Eper. Ther. 1960. -Vol. 128.-P. 414-418.

169. Dutton, G.J. Glucuronic acid / G.J. Dutton. New-York, London: Acad. Press, 1966. - 699 p.

170. Geissman, T.A. Chemistry of flavonoid compounds / T.A. Geissman. -Oxford: Pergamon Press, 1962. 666 p.

171. Haraguichi, H. Ingibition of lipid peroxidation and super-oxide generation by diterpenoids from Rosmsrinus officinalis / H. Haraguichi, T. Saito, N. Okamura // Planta Med. 1995. - Vol. 61, N 4. - P. 333-336.

172. Harborn, J.B. Plant polyphenols XXI: Characterisation of flavonoid glycosides by acid and ansimatic hydrolyses / J.B. Harborn // Phytochemistry. 1965. - Vol.4, N1.-P. 107-121.

173. Harborne, J.B. The flavonoids / J.B. Harborne, T.J. Mabry, H. Mabry. -New York: Charman and Hall, 1975. 1200 p.

174. Hartwell, J.L. Plants used ageinst cancer / J.L. Hartwell. Lloydia, 1968. -Vol. 31, N2. - P. 71-170.

175. Larson, R.A. Antioxidants of higher plamts / R.A. Larson // Phytochemistry. 1988. - Vol. 27, N 4. - P. 969-978.

176. Mabry, T.J. The systematic identification of flavonoids / T.J. Mabry, K.R. Markham, M.B. Thomas.- New York: Springer, 1970. 354 p.

177. Maridonneau-Parini, J. Flavonoids as antioxidants / J. Maridonneau-Parini, P. Braguet, R.P. Garay // Pharmacol. Res. Commun. 1986. - Vol. 18. - P. 61-72.

178. Mathiesen, L. Antioxidant activity of fruit exudate and C-metilated dihydrochalcones from Myrta gale / L. Mathiesen, K.E. Malterud, R.B. Sund // Planta Med. 1995. - Vol. 61, N 6. - P. 515-518.

179. Misik, V. Lipoxygenase inhibition and antioxidant properties of protoberberin and aporphine alcaloid from Mahonia aguifolium / V. Misik, L. Besakova, L. Malekova//Planta Med. 1995. - Vol. 61, N4. - P. 372-373.

180. Quantitative structure-activity relationship analysis of phenolic antioxidants / J.L. Eric., R. Shijun., B. Huynh-Hoa et al. // Free Radic. Biol, and Med. 1999. -Vol. 26, N 3-4. - P. 285-299.

181. Shibata, K. Untersuchungen iber das baikalin, eine neue flavonglukuronsaure Verbindung aus den Wurzein von Scutellaria baicalensis / K. Shibata, S. Iwata, N. Nakamura // Acta Phytochem. 1973. - Vol. 1, N 1. - P. 106139.

182. Shimiat, N. New method for location of organic asids on paper chromatogramms / N. Shimiat, C. Pischer, J.N. Mecoven // J. Pharm. Sei.- 1963. -Vol. 52. P. 468-472.

183. Uber die structur neuer und bekannter Flavon-C-glycoside / L. Horhammer, H. Wagner, L. Rosprim et al. // Tetrahedron Lett. 1965. - N 22. - P. 1707-1711.