Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.08) на тему:Ветеринарно-гигиенические основы применения биологически активных веществ растительного происхождения для профилактики лучевых поражений

РГб од

На правах рукописи

О 6 ЯИй 1998

Курило Александр Иванович

Ветеринарно-гигиенические основы применения биологически активных веществ растительного происхождения для профилактики лучевых поражений

16.00.08 - гигиена животных, продуктов животноводства и ветеринарно-санитарная экспертиза 03.00.01 -Радиобиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург 1997 г.

Диссертация выполнена на кафедрах зоогигиены, радиологии, безопасности жизнедеятельности при чрезвычайных ситуациях Санкт-Пеггербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Мухина Н. В.(СПбГАВМ);

заслуженный деятель наук РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Киршин В. А. (МГУПБТ);

доктор медицинских наук, главный научный сотрудник СПНИИРГ Шубик В. М.;

Ведущая организация - Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана л

Защита диссертации состоится ""¿^ " 1998г.

в /// часов на заседании Диссертационного совета д 120.20.04 в Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Отзывы на автореферат просим отправлять по адресу: 196084,

г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

СПбГАВМ. .

Автореферат разослан " " ^тЩиЛ-- 1997г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат ветеринарных наук,

доцент / V Сафронов Е. Н.

Введение

Актуальность проблемы. Развитие животноводства и птицеводства с каждым годом приобретает все больший размах как в нашей стране, так и в большинстве стран мира. В естественных условиях в организм человека, животных и птиц биологически активные вещества (БАВ) в определенных количествах прямым или косвенным путем обязательно попадают.

В мировой литературе имеются многочисленные подтверждения целесообразности использования биологически активных веществ в рационах животных и птиц. В начальных этапах исследований основное внимание ученых было уделено изучению их влияния на продуктивность и экономические показатели. Однако, несмотря на большие успехи в этой области, остаются нерешенными многие вопросы, связанные с физиолого-биохимическими показателями, иммунобиологическими параметрами организма в экстремальных условиях при пролонгированном применении биологически активных веществ.

За последние годы из наиболее перспективных направлений использования БАВ стало их применение как лечебно-профилактических и кормовых добавок (Ягодин В.И., 1981; Кузнецов А.Ф., 1984-91; Злобин B.C., 1987; Болотников И. А.. 1991).

Однако в доступной нам литературе отсутствуют сведения о пролонгированной профилактике организма животных биологически активными веществами из древесной зелени в экстремальных условиях.

Опыт эксплуатации ядерных реакторов показал реальную возможность аварийных ситуаций, связанных с выбросом радиоактивных веществ во внешнюю среду за пределы активной зоны реактора. С 1944 г. в мире произошло около' 300 аварий ядерных реакторов с выбросом радионуклидов в окружающую среду. Эти аварии происходили в различных странах и в разное время. В качестве примеров можно привести аварии на ядерном реакторе в Уиндскейле (Великобритания, 1957); на атомном предприятии химкомбината «Маяк» (СССР, 1957. 1967гг.); на Южном Урале; на АЭС Тримайле-Айленд (США, 1979г.); на Чернобыльской АЭС (СССР, 1986г.) и на АЭС в Хамме (ФРГ, 1986г.). Крупнейшей из них

является Чернобыльская катастрофа с выбросом в окружающую среду долгожнвущих радионуклидов активностью более 50 МКи.

Многие российские ученые занимались и участвуют до сих пор в работах по изучению воздействия радионуклидов и ионизирующих излучений в поражающих дозах на организм человека и животных. Большой вклад в развитие отечественной радиобиологии внесли такие ученые как В. М. Клечновский, ПГ.Воккен (1960-1972); Е. Н.Анненков (1973); Н. А.Корнев (1991); Р. МАлексахин (1973, 1991); В. АКузин, Л.А. Ильин (1991), В. Г.Ильин, А. Н.Сироткнн, А. ДБелов, В. АКиршин, В.А. Бударков, И. М.Буров, Е. А Жербин, П. АКаргашев, Б. ПКругликов, Н. Н Исамов, Р. Г.Ильязов и др..

Однако несмотря на большие успехи в этой области вредные вещества научно-технического прогресса, не утрачивая токсичности по длинным биологическим цепям, попадают в организм животных и птиц, а затем с продуктами питания - в организм человека. Важную роль по защите организма животных и птиц в экстремальных условиях приобретают биологически активные вещества.

Практическая значимость подобного рода исследований представляется очевидной. Работа является самостоятельным разделом изысканий уникальных свойств БАВ из древесной зелени (дз) высших растений на кафедрах зоогигиены, радиологии и курса безопасности жизнедеятельности при чрезвычайных ситуациях Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (№ государственной регистрация 01860125583)

Цель и задачи работы. Цель работы - провести оценку защитных свойств БАВ в ДЗ., таких как провитаминный концентрат (ПК) и хлорофилл-каротнновая паста (ХКП) и дать биохимическую характеристику естественной резистентности экспериментальных животных. Кроме того, выяснить механизмы влияния БАВ на формирование факторов защиты иммунной, кроветворной системы и восстановление клеток после облучения на ультраструктурном уровне.

Исходя из поставленной цели, было необходимо решить следующие

задачи:

" Провести токсилогическнй анализ БАВ,таких как провитаминного концентрата и хлорофилл-каротиновой пасты.

■ Изучить механизмы защитных свойств провитаминного концентрата и хлорофилл-карагановой пасты при пролонгированном введении экспериментальным животным.

■ Определить влияние провитаминного концентрата и хлорофиял-каротиновой пасты на состояние гемопоэза и содержание витамина А в печени экспериментальных животных.

■ Изучить влияние провитаминного концентрата и хлорофилл-каротиновой пасты на иммунную систему и резистентность животных с последующей оценкой морфологических и ультраструктурных изменений в некоторых иммунокомпетентных органах экспериментально облученных животных

■ Выяснить стимулирующее влияние провитаминного концентрата и хлорофиял-каротиновой пасты на количественное восстановление ДНК и РНК у экспериментальных животных

Научная новизна. Принципиально новым в реализации поставленной проблемы является изучение механизмов пролонгированной профилактики БАВ факторов неспецифической защиты иммунитета у облученных животных, что позволило дать конкретную оценку их состояния.

Впервые изучена иммунобиохимическая характеристика комплекса белков сыворотки крови, концентрация гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов у экспериментальных крыс при применении ПК и ХКП.

Изучены концентрации общего белка и нуклеиновых кислот РНК и ДНК в печени и селезенке у экспериментальных животных

Впервые показана зависимость концентрации витамина А в печени у экспериментальных животных при применении ПК и ХКП до и псхпе облучения.

Вскрьгш некоторые особенности механизма тушения синглетногс кислорода, в частности его перевозбужденной формы('Хё+), образующегося в организме при действии высоких доз ионизирующих излучений, комплексными соединениями БАВ, такими как ХКП И ПК, находящимися в активной форме только при установившемся равновесном состоянии.

Практическая ценность работы:

1. Теоретически обосновано профилактическое применение БАВ с целью оздоровительных мероприятий для усиления гемопоэза, повышение уровня общего белка сыворотки крови и его фракций при облучении.

2. В результате выполненных исследований выявлена уникальная возможность пролонгированной подготовки иммунной системы организма к лучевым поражениям, обеспечивающей

„ повышенную рфистснтность у животных, а также более ранее н ускоренное восстановление иммунной и белоксингезирукяцей системы при лучевой патологии.

3. Предложен способ пролонгированной защиты животных перед их возможным облучением ионизирующей радиацией.

Полученные данные позволяют расширить наши представления о влиянии БАВ на показатели естественной резистентности, иммунный статус . облученных животных и могут быть использованы в практике.

Положения, выносимые на защиту:

1. Характеристика морфологических, биохимических показателей крови крыс линии «Вистар», получавших в виде кормовой добавки ПК и ХКП по определенным срокам исследования

2. Морфофункциональное состояние органов иммунной системы по содержанию РНК и ДНК у облученных лабораторных животных при применений БАВ.

3. Механизмы радиозащитных свойств биологически активных веществ из древесной зелени высших растений( ель, сосна) таких, как провитаминиый концентрат и хлорофилл-каротиновая паста.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы опубликованы:

В журнале «Ветеринария», №2, 1986; в материалах Всесоюзной конференции «Проблемы использования древесной зелени в народном хозяйстве СССР», Ленинград (1984); в материалах Всесоюзной конференции «Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных», Москва(1985); в материалах Всесоюзной конференции «Применение достижений биотехнологии в народном хозяйстве», Уфа (1987); в сборнике научных трудов ЛВИ «Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц».-Л., 1987; в материалах Всесоюзной научно-технической конференции «Производство кормовых и биологически активных продуктов на основе низкосортной древесины и отходов лесопромышленного комплекса», Красноярск (1989); В материалах третьей всесоюзной конференции по сельскохозяйственной радиологии», Обнинск (1980); в материалах конференции «Медико-экологические проблемы здоровья населения Севера». Материалы выездного заседания «Врачи за предотвращение ядерной войны» и «Глобальной комиссии по ядерной экологии» г.Архангельск (1991); в материалах 4, 5, 6-й Межгосударственных, Межвузовских научно-практических конференций « Новые фармакологические средства в ветеринарии», Санкт-Петербург (1992-1994); в материалах научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПВИ «Актуальные проблемы ветеринарии», Санкт-Петербург (1991-1994); в Межакадемическом информационном бюллетене «Академия», Санкт-Петербург.-1996, №3.- 1997, №3(6).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 24 печатных работы. Материалы диссертационной работы,.нашедшие отражение в опубликованных статьях, используются в учебном процессе на кафедрах зоогигиены, радиологии и курса безопасности жизнедеятельности при чрезвычайных ситуациях Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины и ряда других вузов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 222 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований,

выводов, предложений для науки и производства, списка использованной 'Ф «■

литературы и приложения. Список литературы включает 308 источников, из которых 98 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 54 таблицами, 18 рисунками.

Содержание работы

1.Материал и методы исследования

Работа выполнена на кафедрах зоогигиены, радиологии и курса безопасности жизнедеятельности при чрезвычайных ситуациях Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Тема работы утверждена Ученым «бветом академии 16 октября года. Для исследования радиомодифицирующих свойств биологически активных веществ из листвы хвойных растение (ель и сосна) были приготовлены хлорофилл-каротиновая паста и провитаминный концентрат в учебном хозяйстве Лисино-корпус Тосненского района Ленинградской области Санкт-Петербургской государственной лесотехнической академии.

Работа по исследованию радиомодифицирующих свойств БАБ из ДЗ была выполнена на половозрелых крысах - самцах линии «Вистар» - в возрасте 7-8 месяцев, массой 280-300 граммов.

В эксперименте по определению токсичности н выживаемости животных после скармливания БАВ из ДЗ использовались: 2,5-3 месячные щенки «Немецкой овчарки», доставленные из питомника «Суоярви» республика Карелия, массой 3-4 кг, кролики «Серый великан» массой 2,5-3 кг в возрасте 8-10 месяцев, цыплята кросса «Бройлер-6» в возрасте 45-60 суток массой 1,0-1,5 кг, хомяки линии «Золотистый» в возрасте 6-7 месяцев массой 80-100 г и мыши линии ВАЬВ коричневый в возрасте 3-4 месяца массой 20-25 г. Все животные, которые использовались в эксперименте, кроме собак, были доставлены го зверопитомннка АМН России «Рапполово», а цыплята кросса «Бройлер-6» - с птицефабрики «Русско-Высоцкая».

Крыс линии «Вистар» разбили на десять групп по 100 в каждой:

■ 1 группа - физиологический контроль;

■ 2 группа -физиологический контроль (животные, получавшие ПК в виде кормовой добавки в течении 30 дней);

" 3 группа -физиологический контроль (животные, получавшие ХКП в виде кормовой добавки в течении 30 дней);

■ 4 группа - контрольная (облученные животные);

» 5 группа - животные, получавшие ПК до облучения в течении 30 дней;

■ 6 группа -животные, получавшие ХКП до облучения в течении 30 дней;

• 7 группа -животные, получавшие ПК до и после облучения в течении 60 дней;

■ 8 группа -животные, получавшие ХКП до и после облучения в течении 60 дней;

■ 9 группа -животные, получавшие ПК после облучения в течении 30 дней;

■ 10 группа -животные, получавшие ХКП после облучения в течении 30 дней;

Содержали и кормили животных по нормам, утвержденным Министерством здравоохранения СССР (приказ № 163 от 10.03.1966) животным 2, 3,5,6,7,8, 9 и 10 групп в рацион добавляли БАВ в количестве 0,2 мг/кг массы тела крысы. Животных (4-10 группы) подвергли однократному тотальному облучению во ВНИИРР на аппарате РУМ-17 в дозе 7,2 Гр при мощности дозы 0,56 ГрЛган., фокусном расстояние 56 см, времени облучения 12, 85 мин., силе тока 15 мА., напряжении 200 кВ фильтр 0,5 мм СИ и 1 мм. AL. Экспериментальным животным (7-10 группы) после облучения в рацион добавляли БАВ из ДЗ. Для объективной оценки радиозащитных свойств, выделенных БАВ из ДЗ необходимо было сравнить их с витамином А, с известными радиопрсгтективными свойствами. Витамин А вводили внутримышечно в количестве 250 МЕ/кг массы тела в течение семи дней перед облучением.

Для изучения радиопротективных свойств полученных нами ПК и ХКП был использован пробиг-аналнз. ФИД — фактор изменения дозы определяли как отношение эффективности доз равно для защищенных животных и не защищенных,, облученных в дозах 3,84; 4,8; 7,2 Гр, по отношению к витамину А.

ЛД 50/30 заишта

ФИД ---:-

ЛД 50/30 контроль

Животных убивали согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденным МСХ СССР (приказ от 31.07.78), по срокам на 1, 3,6, 10,14,21, 30,45 и 60 сутки.

Для определения показателей неспецифических факторов защиты брали кровь у экспериментальных животных по-общепринятым правилам. Содержание гемоглобина определяли на фотоэлекгроколориметре КФК-УХА 4.2 по методу Г.В.Дервиз и АИ.Воробьева.

Лейкоцитарная формула крови подсчитывалась в мазках, окрашенных по методу Филлипсона, а количество лейкоцитов и эритроцитов - на аппарате Пикоскель.

Для объективной оценки насыщения эритроцитов гемоглобином, а также о суждении наличия у экспериментальных животных гипохромии, пшерхромии и нормохромии определяли величину цветного показателя и среднего содержания гемоглобина в одном эритроците.

Содержание общего белка в сыворотке крови определяли общепринятыми методами, а белковые фракции - на ацетат-целлюлозной пленке прибором АФ-1 анализатор фореграмм с денсиметром.

Определение бактерицидной активности сыворотки крови проводили по методу

В.С.Смирновой н Т.АКузьминой, а определение опсонно-фагоцитарной реакции по методу В.ВНикольского. Активность лизоцима сыворотки крови проводили по методу АХ.Дорофейчука, бста-лизииы сыворотки крови - по методу О. В. Бухарина, Б.АФлорова и АП. Луда. Витамин А в печени экспериментальных животных определяли реакцией Карр-Прайса.

Определение ДНК и РНК в печени и селезенке проводили по методу Р.Г.Цанева и Г.Т.Маркова, а измерение количества нуклеиновых кислот проводили на спектрофотометре СФ-46. Для измерений ДНК пользовались длинами волн 268 нм и 284 нм; а для измерений РНК - 260 нм

и 286 нм; в качестве контроля использовали однонормальный раствор НС104.

Электронно-микроскопические исследования материала (печень) экспериментальных животных проводили обычным методом в модификации И.Б.Токина и П.Релиха. Срезы толщиной 400-600 А изготавливали на ультротоме LKB, контрастировали уксусно-кислым свинцом по метод}' Reynolds и просматривали на электронном микроскопе JEM -7А при ускорении напряжения 80 кВ. подсчет количества гепатоцитов и купферовских клеток, участвовавших в фагоцитозе, проводили после гистологической обработки с помощью светового микроскопа МБИ-1, с бинокулярной насадкой АУ-12 * 1,5. Определение количества купферовских клеток печени на условной единице площади производили с помощью окулярной сетки при увеличении микроскопа об. 40 * ок.15 в средней части препарата.

Статистическая обработка материала была произведена с помощью микрокалькулятора Б-3-34 и на персональном ЭВМ «Искра 1030-11» с принтером СМ-6337 с использованием программы «Статтрафик» .

2. Токсичность хлорофилл-каротиновой пасты и

провитаминного концентрата

Изучение биологической активности ХКП и ПК начали с определения токсичности препарата, для чего крысам , мышам, кроликам, хомякам, курам и собакам вводили БАВ в дозах ОД г/кг до 1 г/кг массы тела. БАВ растворяли на персиковом масле с учетом дозировки и вводили внутримышечно и внутрибрюшинно. Животным отдельных подопытных групп задавали БАВ в качестве кормовой добавки длительное время в дозах от 0,1 г/кг до 1 г/кг массы тела. За животными наблюдали в течение 10 дней в одно и то же время суток в 12 часов дня, определяя у них температур)' тела, дыхание и пульс.

Вводимые нами в организм подопытных животных препараты в максимальных дозах не вызывали гибели и каких-либо внешних клинических признаков интоксикации, то есть все животные,

использованные в эксперименте, ничем не отличались от биологического контроля.

При наблюдении за экспериментальными животными не было обнаружено повышения температуры тела, снижения его массы, уменьшения или увеличения пульса и дыхания.

В связи с этим можно заключить, что полученные БАВ из древесной зелени атоксичны и не вызывают гипертермической реакции у подопытных животных.

3. Морфологическое, биохимическое и иммунобиологическое состояние организма у здоровых животных, которым в рацион добавляли БАВ

Добавление в рацион животных провшаминного концентрата и хлорофилл-каротиновой пасты в первый день наших исследований не повышало количества эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина (при скармливании ПК эритроциты - 5,1-1012л; лейкоциты - 8,5-109л; гемоглобин 94,0г/л; при скармливании ХКП соответственно: 5,1-1012л; 8,6-109л; 92,0г/л).--На 10-14-е сутки наблюдений произошло незначительное повышение числа эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина (*Р<0,05). Увеличение этих показателей наблюдалось до 30-60-е суток. При скармливании ПК на 30-45-е сутки количество эритроцитов держалось на уровне 5,9-6,3- 1012л; лейкоцитов - 12,2-109л; гемоглобина - 111,0-129,0/т/л и сохранялось на таком уровне до 60-х суток (*Р<0,05). При скармливании ХКП на 30-45-е сутки исследований уровень эритроцитов составлял 5,3-5,4 -1012л; лейкоцитов 11,0-12,2-10\ гемоглобина 99,0-126,0 г/л (*Р=0,05) и держался до 60-х суток наблюдений. У животных, которым в виде кормовой добавки скармливали ПК и ХКП, средняя величина содержания гемоглобина в одном эритроците и цветного показателя на 6-30 день наблюдений была достоверно выше, чем у животных, которые служили физиологическим контролем (*Р< 0,05).

Результаты наших исследований, показали, что скармливание БАВ вызывает определенные изменения в белковом составе крови. Следует

отметить, что количество общего белка в сыворотке крови крыс в результате скармливания им ПК и ХКП возрастало к 6-м суткам до 71,5 г/л (*Р<0,05). Разница между данным показателем и таковым животных физиологического контроля составила 15,7 г/л. В дальнейшем, вплоть до 60, этот показатель носил волновой характер.

Содержание альбуминов в сыворотке крови мало, чем отличалось от такового у животных физиологического контроля. Увеличение данной фракции белка начиналось с 3-х суток, и далее при ПК оно приходилось на 10,14, 21,45,60-е дни, а при ХКП - на 3, 14,45-е.

Изменение количества а-, {5-, у-глобулинов сыворотки крови у животных, которым скармливали БАВ, имело волновой характер, что, по нашему мнению, связано с функцией печени. Показатели данных фракций белков мало, чем отличались от таковых в физиологическом контроле и находились при скармливании ХКП в пределах: 10,1-14,7 г/л - а -глобулинов; 10,9-14,8 г/л - Р -глобулинов и 7,9-12,8 г/л у-глобулннов; при ПК в пределах: 11,1-15,8 г/л- а -глобулинов; 10,7-15,0 г/л-15- глобулинов и 7,0-16,6 г/л - у -глобулинов. Исследование фракций белков крови при применении ПК в сроки на 3-е, 6-е, 10-е, 21-е сутки были достоверными (Р <0,05). у - глобулиновая фракция, исследованная на 3-е, 14-е, 21-е, 30-е и 45-е сутки у экспериментальных животных, была также достоверна в большем количестве, чем таковая в физиологическом контроле. При применении хлорофилл-каротиновой пасты результаты исследований, проведенных на 10-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки дали достоверны результаты по разным фракциям (Р<0,05).

При анализе полученных результатов исследования бактерицидной, В-лизиновой и лизоцимной активности сыворотки крови видно, что бактерицидная активность 93,3% оказалась меньше активности сыворотки крови животных физиологического контроля на 2%; В-лизиновая - 49,0% -одинакова с. актиносгью в контрольной группе, а активность лизоцима -ниже на 5,2% и составата 9,7%. Дальнейшие наблюдения показали, что усиление бактерицидной активности до 97,2% приходится на 3-е сутки исследований и держится на уровне 92,0-98%, что выше активности в

физиологическом контроле на 6-10%. В-лизиновая активность усиливается по отношению к таковой в контрольной группе с 6-х до 30-х суток наблюдений н составила от 45% до 65%, где *Р<0,05 приходилось на 3-й, 21-е и 45-е дни наблюдений. Активность лизоцима находилась в пределах физиологического контроля, за исключением показаний на 14-е, 21-е и 30-е сутки, где показатели активности лизоцима были выше на 3-4%

Применение ХКП в виде кормовой добавки значительных изменений в показателях гуморальных факторов иммунитета не дает. Отмечалось незначительное повышение бактерицидной активности сыворотки крови на 10,14% (45-е и 60-е сутки) и составило 92,7-%,6%. В-лизиновая н лизоцимная активность носила волновой характер. Однако, можно отметить, что В-лизиновая активность на 6-е, 14-е и 45-е сутки наблюдений была достоверно выше и находилась в пределах 44,7-65% (*Р< 0,05). Активность лизоцима по отношению к активности в физиологическом контроле была в пределах 13,8-15,3%.

Фагоцитарная активность клеток РЭС печени крыс линии «Вистар» при скармливании им БАВ (311-460 клеток) была немного выше активности этих клеток у животного в контрольной группе (301-430 клеток).

Исследования выявили незначительные колебания РНК н ДНК при применении крысам ПК и ХКП, которые имели волновой характер и мало чем отличались от показаний в физиологическом контроле. При применении ПК уровень РНК был от 45,0 ыг%-Р до 66,0 мг%-Р, а ДНК - от 35,5 мг%-Р до 60,0 М1%-Р. Использование ХКП в виде кормовой добавки показало, что концентрация РНК и ДНК в печени и селезенки крыс также была на уровне Указателей физиологического контроля, за исключением показателей на 30, 45, 60-е сутки, где уровень данной кислоты был 73,4 мг%-Р - 60,0 мг%-Р. Показатель ДНК в печени* крыс не превышал контрольных значений. Определенная активация ДНК в печени отмечалась на 30-е и 60-е сутки наших исследований и находилась в пределах 53,3 мт% - Р - 66,5 мг%-Р. Отмечено влияние ХКП на снижение синтеза РНК и ДНК в селезенке, хотя в некоторые сроки отмечалось превышение уровня РНК и ДНК на 1,2% Показатель отношения РНК/ДНК, как показатель синтеза белка в органе, не был нарушен при применении БАВ и мог служить фоном значением при

применении ПК и ХКП, как защитного средства организма до облучения, до и после облучения, а также после облучения.

При исследовании концентрации витамина А в печени его количество составило 6,1 мг% при применении ПК и 5,3 мг% - при применении ХКП. На 10-е, 14-е и 21-е сутки наблюдений показатели содержания витамина А в печени были достоверно выше показателей физиологического контроля (Р< 0,05). Определение витамина А на 30-е, 45-е и 60-е сутки существенных изменений не дало.

Таким образом, результаты проведенных исследований животных, которых в качестве кормовой добавки служил провитаминный концентрат и хлорофилл-каротиновая паста, показали их стимулирующую способность как по отношению морфологического и белкового состава крови, так и иммунобиологической реактивности организма, что явилось толчком для проведения дальнейших исследований вышеописанных показателей крови у облученных крыс.

4. Радиозащитные свойства биологически-активных веществ растительного происхождения по отношению к витамину А

Оценка радиозащитных свойств провитаминного концентрата и хлорофилл-каротнновой пасты по отношению к витамину А проводили согласно принятым методическим указаниям.

Радиозащитную эффективность препаратов оценивали в условиях кратковременного воздействия облучения с определением ЛД 50/30. При исследовании радиозащитной эффективности хлорофилл-карагановой пасты и провитаминного концентрата, а также витамина А, животные были разбиты на 9 групп по 100 штук в каждой.

» 1 группа - физиологический контроль;

• 2 группа - облученный контроль;

■ 3 группа - животные, которым до облучения в качестве кормовой добавки в течение 30 дней скармливали ПК;

■ 4 группа - животные, которым до облучения и после в качестве кормовой добавки в течение 60 дней скармливали ПК;

■ 5 группа - животные, которым после облучения в качестве кормовой добавки в течение 30 дней скармливали ПК;

• 6 группа - животные, которым до облучения в качестве кормовой добавки в течение 30 дней скармливали ХКП;

■ 7 группа - животные, которым до и после облучения в качестве кормовой добавки в течение 60 дней скармливали ХКП;

■ 8 группа - животные, которым после облучения в качестве кормовой добавки в течение 30 дней скармливали ХКП;

■ 9 группа - животные, которым до облучения в течение недели внутримышечно вводили витамин А в дозе 250 МЕ/кг массы тела.

В случае гибели животных в группе биологического контроля опыт прекращали. Во всех группах подбирали животных, одинаковых по весу, возрасту и полу (самцов). На протяжении всего опыта животных содержали в одинаковых условиях с равноценным кормлением. Животных 2-9 групп подвергали однократному тотальному облучению на аппарате РУМ-17 в дозе 7,2 Гр в пенале, выполненном из органического стекла по 5 ппук в серии.

Пролонгированное скармливание БАВ обладает более выраженным защитным эффектом по сравнению с витамином А на 15-30% в зависимости от препарата и его применения до облучения, до и после облучения и после облучения. ФИД для БАВ составили 1,3-1,5 в зависимости от применения препарата.

Выживаемость облученных крыс линии «Вистар» при применении БАВ при пролонгированном скармливании препарата до и после облучения составила 60%; до облучения - от 55 до 60%; после облучения - 30%,как и при применении витамина' А, что свидетельствует об эффективности провитаминного концентрата и хлорофилл-каротиновой пасты как защитного средства от облучения. Однократное внутримышечное и внутрибрюшинное введение БАВ (ПК и ХКП) за 20 минут до облучения н в другие сроки не давало столь высокого эффекта выживаемости, как его пролонгированное использование (таблица 1).

Таблица 1

Выживаемость облеченных крыс линии «Вистар» в

Группа Сроки наблюдения, сутк»

животных 1 3 6 10 14 21 30 45 60

1 группа 20 20 20 20 20 20 20 20 20

физиал. 100 100 100 100 100 100 100 100 100

контроль

2 группа 20 11 4 1 0 0 0 0 0

облуч 100 55 20 5 - - - - -

контроль

3 группа 20 20 17 13 13 11 11 11 11

Примен. ПК 100 100 100 85 75 60 60 60 60

до облуч.

4 группа 20 20 20 17 15 12 12 12 12

Примен. ПК 100 100 100 85 75 60 60 60 60

до и после

облуч

5 группа 20 20 18 12 9 7 6 6 6

Примен. ПК 100 100 90 60 45 35 30 30 30

после облуч.

6 группа 20 20 18 15 13 12 12 12 12

Примен. 100 100 90 75 65 60 60 60 60

ХКПдо

облуч.

7 группа 20 20 20 18 15 13 12 12 12

Примен. 100 100 100 80 75 65 60 60 60

ХКПдо и

после облуч.

8 группа 20 20 - 17 13 13 6 6 6 б

Примен. 100 100 85 65 65 30 30 30 30

ХКП после

облуч.

9 группа 20 20 18 9 6 6 6 6 6

Примен. 100 100 90 45 30 30 30 30 30

Витамина

А

5. Исследования морфологического, биохимического и иммунологического организма облученных животных при применении провитаминного концентрата

С целью профилактики и лечения лучевой болезни крысам линии «Вистар» до облучения , до и после облучения, а также после воздействия рентгеновского излучения в рацион экспериментальных животных добавлялся провигамииный концентрат (ПК). В процессе наблюдений за облученными крысами, мы отмечали признаки улучшения состояния животных.

Установлено, что при применении ПК до облучения число эритроцитов у облученных крыс в первые сутки равнялось 5,71012л, что немного выше, чем этот показатель в физиологическом контроле (*Р< 0,05). Снижение числа эритроцитов отмечалось с 6-х суток и составляло 2,5-10,2л (*Р<0,05). Наименьшее число эритроцитов в периферической крови наблюдали на 14-е сутки, их число равнялось 2,4-1012л. Начиная с 21-х суток наблюдался подъем количественного состава эритроцитов до 4,1 -10,2л (*Р< 0,05). К 30-му дню данный показатель достигал 4,5-1012л, а к 45-м 60-м суткам равнялся показателю физиологического контроля (5,1*1012л-5,3-1012л) (Р>0,05).

Количество гемоглобина в процессе применения ПК до облучения животных в первый день исследования был выше на 6,5 г/л, чем таковой в физиологическом контроле (*Р< 0,05), а на 3-й сутки эта величина равнялась 127,5 г/л. С 6-х по 14-е сутки отмечали снижение уровня гемоглобина до 46,0 г/л (*Р< 0,05), что в 2 раза ниже показателя здоровых животных в тот же срок наблюдения.

На 21-й день отмечали подъем гемоглобина и возвращение его к норме на 45-е сутки наблюдений (Р< 0,05).

Снижение содержания лейкоцитов отмечалось с 6-х суток и равнялось 3,5-109л (*Р< 0,05). Наибольшее снижение количества

лейкоцитов наблюдали на 14-й день после облучения, количество лейкоцитов было на уровне 2,2-109л (*Р< 0,05). Лейкопения была устойчивой с 6-х по 21-е сутки, а затем к 30-м суткам отмечался подъем

числа лейкоцитов до 8,4-109л (Р< 0,05). Восстановление уровня лейкоцитов произошло к 30-м суткам и устойчиво держалось до 60-хсуток, т.е. до конца эксперимента. Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците отражает абсолютное содержание этого белка в одном эритроците в пикограммах. Наши исследования показали, что среднее содержание гемоглобина в эритроцитах крыс варьировало от 14,2 пг до 24,6 пг. Среднее содержание его в одном эритроците было достоверно в 10-е, 14-е, 21-е и 60-е сутки наблюдения. Цветной показатель был стабильным и не превышал значений 0,4±0,7 во все сроки наблюдений, что соответствует нормохромной анемии при лучевой патологии с применением протекторов. При применении ПК до и после облучения количество эритроцитов в первый день исследований составляло 5,2-1012л, и было равно количеству эритроцитов в физиологическом кошроле. Через 3 дня после облучения этот показатель превысил норму на 0,7-1012л. На 6-е сутки наблюдений число эритроцитов в крови снижалось до 4,3-10|2л, а к 14-м суткам их количество держалось на уровне 3,5-1012л (Р< 0,05). К 21-м суткам отмечалось увеличение эритроцитов в крови до 3,7-1012л, а к 30-45 дню исследований этот показатель не отличался от такого в физиологическом кошроле и был равен 5,5-1012л (*Р<0,05).

Уровень гемоглобина у опытной группы крыс в первоначальное исследование оставался в пределах показаний физиологического контроля и был равен 102,5 г/л (Р> 0,05). Снижение гемоглобина нами было отмечено с 6-х суток. В этот период его уровень был 95,0 г/л (*Р< 0,05). Его минимальное содержание приходилось на 14-й день наблюдений и составило 53,2 т/ж (*Р< 0,05). С 21-х суток происходит достоверный подъем гемоглобина в крови и его. восстановление до показателя в физиологическом контроле к 30-60-м суткам наблюдений (*Р< 0,05).

Количество лейкоцитов в крови облученных животных, которым на протяжении всего опыта в рацион добавляли ПК, имело тенденцию к резкому снижению с первых по 6-е сутки наблюдений. Наименьшее число лейкоцитов отмечали на 3-й сутки, их количество в этот период равнялось 1,9-109л (*Р< 0,05). Затем с 10-х суток отмечали увеличение числа

лейкоцитов до 4,Г109л. Восстановление лейкоцитов в крови облученных крыс с применением ПК отмечалось планомерно до 30-х суток (*Р< 0,05).

Исследования содержания гемоглобина в одном эритроците варьировало во все сроки исследований и равнялось 20,7-25,0 пг, цветной показатель держался на уровне 0,7, кроме значения этого показателя на 3-й и 10-е сутки (Р< 0,05).

Проведенные нами исследования морфологического состава крови облученных крыс, получавших ПК после облучения, показали, что содержание эритроцитов в крови экспериментальных животных снижалось до 1,0-1012л к 14-м суткам (*Р< 0,05), затем отмечалось восстановление этого показателя до 5,6- 10,2л к 60-м суткам (Р> 0,05).

Уровень гемоглобина у опытной труппы крыс в первоначальное исследование был равен 125,0 г/л. Резкое снижение концентрации гемоглобина отмечалось на 14-й день и было ниже, чем в кошроле в 2,5 раза (*Р< 0,05).

Результаты определения общего числа лейкоцитов показали, что снижение их числа происходит с 6-го по 14-й день наблюдений (1,9-109л) (*Р< 0,05). Абсолютного содержания данный показатель достигал к 45-м-бО-м сутках! (*Р< 0,05).

Определение концентрации гемоглобина в 1 эритроците и цветного показателя завершило исследования морфологического состава крови у облученных животных с применением ПК. Можно отметить, что увеличение содержания гемоглобина в одном эритроците приходилось на 3-й, 14-е, 30-е сутки (Р< 0,05). В другие сроки этот показатель был в пределах данных контроля. Цветной показатель имел мало отличий от такого в контроле и равнялся 0,5-0,8 (Р< 0,05). Исключением являются 14-е сутки, в которые цветной показатель был выше единицы и равнялся 1,1 (*Р< 0,05), что дает возможность судить о гиперхромной анемии у облученных крыс.

При применении БАВ др облучения снижение общего белка сыворотки крови отмечали лишь на 14 сутки, его показатель был на уровне 55,7 г/л (*Р< 0,05). Подъем общего белка к 30-м суткам превышал данные по общему белку в физиологическом контроле на 4,6 г/л (*Р< 0,05). К 60-му

дню наблюдений уровень общего белка был в пределах 73,2 г/л (Р> 0,05), что на 9 г/л больше, чем показатели физиологического контроля.

Показатель альбуминовой фракции через день после облучения превышал таковой в физиологическом контроле и держался на уровне 28,0 г/л. Статистически достоверное снижение уровня этой фракции наблюдалось с 10-х по 14-е сутки. В эти дни исследования альбуминовая фракция была на уровне 21,5-19,4 г/л. С21-х суток отмечался достоверный подъем уровня альбуминовой фракции до 31,0 г/л (*Р< 0,05) с последующем восстановлением.

Альфа-глобулиновая фракция у подопытных животных на всем протяжении наших исследований носила волновой характер и была на уровне 11,6-14,6 г/л. Исключением были 6-е, 10-е сутки, когда уровень альфа-глобулинов был 16,2-20,1 г/л (*Р< 0,05). Изменения по бета-глобулиновой фракции белка сыворотки крови были отмечены нами в первый день исследований (Р> 0,05), на 3-й (Р< 0,05) и на 10-е ¿утки (Р> 0,05), но в основном, количество бета-глобулинов держалось на уровне 11,111,9 г/л Гамма-глобулиновая фракция имела низкие показатели по отношению к данным контроля в 1-е, 6-е, 14-е сутки наблюдений. Количественные изменения гамма-глобулиновой фракции носили волновой характер и к 21-м, '30-м суткам их уровень поднимался до уровня в контрольной группе и был равен 12,7-14,3 г/л (*Р< 0,05).

Анализируя влияние ионизирующего облучения ка общий белок сыворотки крови и его фракции с использованием ПК до и после облучения, можно отметить, что снижение уровня общего белка происходило на 3-й сутки до 53,2 г/л, что на 2,6 г/л меньше, чем показатель контрольной группы. К 10-м суткам эта разнила увеличивается до 10 ,г/л (Р< 0,05). Действие ПК при применении его до и посЙе облучения сказывается на перестройке основного спектра сыворотки крови у облученных крыс. Так, с 14-х суток снижается рост показателя по общему белку, и к 30-м суткам он выше по сравнению с таковым в контрольной группе на 22,8 г/л (*Р< 0,05).

Количество альбуминов в первые сутки исследования составило 32,2 г/л, на 3-й сутки уровень альбуминов упал до 25,0 г/л и имел тенденцию к снижению до 10-х суток. К 14-м суткам уровень альбуминов был равен их

уровню в кошроле, т.е. 27,2 г/л, а к 30-м — на 4,8 г/л больше этого показателя в физиологическом контроле в тот же день наблюдений(Р>0,05).

Альфа-глобулин овая фракция белка у опытной группы на всем протяжении исследований была выше нормы. Исключением являются 3-й сутки, когда этот показатель был ниже, чем в контроле на 2,7 г/л (Р<0,05). Изменения бета-глобулиновой фракции белков отличались от изменений в контроле к 10-м суткам и показатель был равен 8,6 аденьше такового

в контроле на 5 г/л. К 21-м и 30-м суткам отмечали пбдьем уровня бета-глобулинов до 18,1-19,1 г/л. До конца опытов эта фракция держалась на более высоком уровне, чем в контрольной группе.

Динамика гамма-глобулинов также имела тенденцию к снижению,«, что отмечалось нами с первых до 10-х суток. В последующих исследованиях, т.е. на 21-е и 30-е сутки уровень гамма-глобулинов составил 13,5-17,1 г/л, что в 1,2 раза больше, чем данный показатель физиологического контроля. ....

Применение ПК после облучения показало, что снижение общего белка до 56,2 г/л' происходит на 3-й сутки и этот спад отмечался до 14-х суток (Р< 0,05). С 21-х суток количество общего белка возрастало до 58,3 г/л (*Р< 0,05). С 30-го по 60-й день уровень'общего белка был равен его уровню в контрольной группе и составил 62,2-66,7 г/л (Р>0,05).

Через день после облучения животных альбуминовая фракция сыворотки крови превышала данный показатель контрольной труппы на 6,1 г/л. Снижение количества альбуминов отмечалось в период с 6-х по 10-е сутки. С 14-х суток отмечалось увеличение этого показателя с последующим восстановлением др уровня такого в физиологическом контроле (28,6 г/л) (Р< 0,05).

Снижение уровня альфа-глобулиновой фракции также происходило с 3-х суток и продолжалось до 6-х суток, составив к этому моменту 6,5 г/л (*Р< 0,05). С 10-х по 14-е сутки отмечалось незначительное увеличение альфа-глобулинов на 1,5 г/л с последующим восстановлением до его уровня в контрольной группе.

Бета-глобулиновая фракция имела тенденцию к снижению с 3-х по 6-е сутки. Затем изменения количества этой фракции носили переменный характер с небольшими подъемами и снижениями.

Гамма-глобулиновая фракция на всем протяжении данных наблюдений имела более низкие показатели, чем в группах животных, которым до облучения, до и после облучения скармливали ПК Снижение этой фракции происходило с 3-х суток, что составляло 8,0 т/л (*Р< 0,05). Уменьшение количества гамма-глобулинов отмечено за период до 6-х суток, а затем, с 10-х до 21-х суток, уровень этих белков варьировал от 8,5 г/л до 10,4 г/л (*Р< 0,05) и держался в пределах нормы.

Анализируя влияние ионизирующего излучения на фагоцитарную активность купферовских клеток печени при применении животным ПК можно отметить, что при пролонгированном скармливании ПК до облучения изменения в количественном составе купферовских клеток (КК) отмечались с 3-х суток и продолжались до 21-х суток, хотя на 6-е сутки отмечался подъем количественного состава КК до 575 ед. (на площади окулярной сетки) (Р> 0,05). К 30-м суткам данный показатель был на уровне 542 КК, а к 60-м суткам этот показатель держался в пределах 515 КК Отношение фагоцитирующих и не фагоцитирующих купферовских клеток держалось от 0,7±0,02 до 6,5±0,95. Достоверные показатели приходятся на 1, 3, 21 и 60-е сутки (*Р< 0,05), что говорит о положительном эффекте при применении ПК.

Нами отмечено снижение количества КК при применении ПК до и после облучения с 3-х суток; затем количественный состав варьировал от 383 до 606 КК, хотя уровень фагоцитирующих КК в те же сроки исследований держался от 180 КК до 507 КК, что в 1,3 раза больше, чем показатели контрольной группы. Отношение фагоцитирующих и не фагоцитирующих КК находилось в тех же параметрах, что и у животных, получавших ПК до облучения, т.е. от 0,6±0,09 до 7,0±0,16 КК Аналогичные исследования были проведены нами по подсчету общего числа КК, а затем клеток, участвующих и не участвующих в фагоцитозе у облученных животных при применении ПК после облучения.

Количественный состав КК при скармливании ПК был в пределах 593-376 на единицу площади окулярной сетки. Достоверное снижение и увеличение КК приходилось на 3-й -14-е сутки (Р> 0,05). В остальные сроки наблюдений их численный состав был на уровне результатов исследования контрольной группы (Р> 0,05).

Подсчет количества фагоцитирующих клеток при применении ПК после облучения показал, что их наименьшее количество приходится на 3-й -14-е сутки (*Р< 0,05). С 21-х суток отмечается подъем фагоцитоза (Р> 0,05), а к 30-м -60-м суткам количество фагоцитирующих клеток равнялось 447,5-462,5 (Р< 0,05). Фактор отношения ФКК и НФКК в основном держался на уровне 2,2-5,2 балла. Исключением были данные 6-х, 10-х, 14-х и 21-х суток исследований, когда в разгар лучевой болезни активность фагоцитоза падала с 1,3 до 0,4 балла (*Р< 0,05).

Пролонгированное использование ПК до облучения показало, что снижение гуморальных факторов иммунитета по отношению к таковым в контрольной группе отмечалось с 3-х до 10-х суток (Р< 0,05). С 14-х суток наблюдали рост бактерицидной, бега-лизиновон и лизоцимной активности сыворотки крови облученных животных с последующим восстановлением вышеперечисленных показателей до уровня данных физиологического контроля (Р>0,05). При использовании ПК до н после облучения можно отметить, что эффекты спада бактерицидной активности приходилось в основном на 6-е-14-е сутки. В эти моменты она равнялась 41,4-50,3% (*Р< 0,05).

К 21-м суткам этот показатель поднимался до 63,3%, а с 30-х по 60-е сутки держался на уровне 93,0-96,1% (Р>0,05). Бета-лизиновая активность сыворотки кровн снижался на 6-е сутки до 32,7%, что на 11,9% меньше, чем активность в контрольной группе ^в те же сроки исследований. К 10-м суткам активность бета-лнзинов снижалась до 22,3%, а с 21-х по 60-е сутки носила волновой характер с увеличением показателя до 57,6% и его уменьшением до 33,0%. Активность лизоцима была на более стабильном уровне, исключение составили показатели активности на 3-й-10-е сутки, когда уровень активности был 8,0-8,8%, что меньше показателей в контрольной группе в среднем 6,0%. Применение ПК после облучения

показало, что уровни активности гуморальных факторов иммунитета также в основном снижались с 3-х по 10-е сутки (*Р< 0,05) н равнялись для бактерицидной активности 32,1-78,4%; для бета-лязиновой активности -11,3-27,6% и для активности лнзоцима - 5,2-7,9% Затем с 30-х суток отмечалось достоверное повышение бета-лизиновой и лизоцимнон активности сыворотки крови (*Р< 0,05) до 33,8% и 11,0% соответственно. К 60-м суткам эти показатели были в пределах показателей в физиологическом контроле. Бактерицидная активность сыворотки крови при применении ПК после облучения увеличилась с 14-х суток (Р< 0,05), а к 30-м-60-м суткам была равна норме.

Результаты исследований содержания ДНК и РНК в печени и селезенки крыс линии «Вистар», получавших ПК до облучения, показывают высокую степень достоверности различий концентрации РНК в печени и селезенке крыс опытной и контрольной групп. Стимулирующее влияние добавок ПК в рацион отразилось также на концентрации ДНК в вышеуказанных группах животных Тенденция к повышению концентрации данной кислоты отмечалась с 30-х суток (*Р< 0,05) в печени, а в селезенке с 21-х суток и ее уровень составит 33,4 мг%-Р (Р>0,05), что на 14,6 мг%-Р меньше, чем у контрольной группы. Во всех случаях применения препарата до облучения, до и посте облучения, а также посте облучения снижение активности синтеза ДНК и РНК, их концентрации, приходится на 3-й 14-е сутки в разгар лучевой болезни (Р< 0,05).

Так, применение ПК до облучения характеризуется достоверным снижением и повышением уровня РНК в печени с 3-х по 30-е сутки (*Р< 0,05), а в селезенке с 10-х по 30-е (*Р< 0,05). Снижение синтеза ДНК отмечено с 3-х по 14-е сутки, с последующим ростом концентрации ДНК в печени до 60 мг%-Р (*Р< 0,05). К 60-м суткам уровень отношения синтеза < РНК к синтезу ДНК был в печени на 1,7, а селезенке на 0,5 ниже (Р>0,05), чем у крыс в группах, служивших физиологическим контролем.

Концентрации нуклеиновых кислот в печени крыс при применении им ПК до и посте облучения снижается на 3-й сутки и составляет для РНК -33,9 мг%-Р, для ДНК - 27,7 мг%-Р. В эти же сроки исследований уровень ДНК и РНК в селезенке был 48,5 мг%-Р и 55,0 мг%-Р соответственно

(Р>0,05). В наших последующих исследованиях наблюдалось достоверное снижение уровня РНК и ДНК в печени и селезенке опытных крыс (Р< 0,05). С последующим увеличением концентрации нуклеиновых кислот как в печени, так и в селезенке с 21-х суток. У контрольной группы животных синтез РНК и ДНК был немного ниже в 1,2-1,6 раза. Дальнейшая активизация РНК и ДНК отмечалась вами на всем протяжении опыта.

Особый интерес представляют наблюдения за содержанием РНК и ДНК в печени и селезенке крыс при применении ПК после облучения.

Концентрация РНК и ДНК в печени и селезенке снижалась с первых дней наблюдений. С 6-х по 14-е сутки в опытной группе уровень РНК н ДНК достигал своего минимума (*Р< 0,05) и равнялся: для РНК

печени 17,0-17,5 ш%-Р; для РНК селезенки 17,2-25,0 мг%-Р: для ДНК печни 12,0-13,3 мг%-Р и для ДНК селезенки 9,0-10,0 мт%-Р, что в 2,5-8,0 раза меньше, чем соответствующие данные у трупп крыс, служивших физиологическим контролем. С 21-х по 30-е сутки отмечался подъем уровня концентрации РНК и ДНК с его дальнейшим увеличением к 60-м суткам исследований для печени (Р>0,05) и для селезенки (Р<0,05). Что касается индекса РНК/ДНК печени и селезенки, то ее наибольшая величина приходилась на 6, 10 и 30-е сутки в печени, и на 3-6 и 21-е сутки в селезенке.

Концентрация нуклеиновых кислот в определенной мере коррелирует с процессами синтеза витамина А в печени облученных животных, которым в виде кормовой добавки задавали ПК, в составе которого находился бета-каротин. С учетом этого нами изучена концентрация витамина А в печени крыс, которым ПК задавали до облучения, до и после облучения и после облучения.

Концентрация витамина А при применении ПКП в первые сутки наблюдений была выше, чем у физиологического контроля на 1,1; 1,2; 0,8 мг%. В дальнейшем, уровень витамина А плавно снижался до 5,0; 5,2 и 4,0 мт% (Р< 0,05) к 10-м суткам. Исследования, проведенные на 14-е сутки показали, что уровень концентрации витамина А в печени при применении ПК до облучения был равен 6,7 ъп%, а при использовании ПК до и после облучения 6,5 мг%, после облучения 3,4 мг% (Р< 0,05). С 21-х по 60-е сутки

количество витамина А при скармливании ПК до облучения поднялось до уровня результатов контрольной группы и имела разницу в 0,1 мг% (Р>0,05). При добавлении ПК в корм до и после облучения показатели витамина А между опытной и контрольной группами имели разницу в'0,8 мт%. При введении в рацион крыс ПК после облучения отмечено, что увеличение концентрации витамина А наблюдалось с 45-х суток (*Р< 0,05), до уровня физиологического контроля н на 60-й день исследований разница между показаниями этих групп составила 1,8 мг% (Р< 0,05). '

Таким образом, результаты проведенных нами наблюдений за крысами, которым до облучения, до и после облучения, а "также после » облучения с кормом задавали ПК, показали, что аналопгщые исследования морфологического, биохимического и иммунологическЬго" состояния организма облученных животных следует провести с ХКП, полученной из ДЗ, в составе которой содержится бега-карогин.

6. Результаты исследования морфологического, биохимического и иммунологического состояния организма у облученных животных при применении % хлорофилл-каротиновой пасты ... .

В первые сутки исследований количество эритроцитов держалось на уровне данных физиологической нормы (*Р<0,05). Уменьшение количества эритроцитов до 4,63 1012л отмечали с 6-х суток (*Р< 0,05).

Дальнейшее уменьшение числа эритроцитов наблюдали с 10-х по 21-е сутки, их уровень составил 3,30-3,87 -10,2л (Р< 0,05). К 30-м суткам был отмечен рост данного показателя до 5,58 -1012л (*Р< 0,05), а на 60-й день 5,36 -1012л (Р>0,05), что на 0,16 *1012л выше показателя в физиологическом контроле. Концентрация гемоглобина также оказалась большей в крови крыс, получавших ХКП до облучения. Так, к 3-м суткам уровень гемоглобина был 139,0 г/л (*Р< 0,05). К 10-му дню исследований количество гемоглобина было 48,5 г/л, что в 2,1 раза меньше данных первоначальных наблюдений. С 21-х по 60-е сутки отмечался рост гемоглобина от 81,0 т/л (*Р< 0,05) до 114,5 г/л (Р>0,05), что меньше показателя физиологического контроля на 6,0 г/л

Снижение содержания лейкоцитов нами было отмечено с 1-х по 14-е сутки. Количественный состав лейкоцитов был в пределах 6,4-3,4 -109л (Р<0,05). Наименьший уровень лейкоцитов приходился на 3-й сутки и составил 2,8 -109л (*Р< 0,05). Восстановление лейкоцитов до нормы отмечалось на 30-й день и к концу наших исследований их количество достигало 11,9 -109л (*Р< 0,05). *т- Содержание гемоглобина в пикограммах в одном эритроците в

первоначальное исследование было равно 22,4 пг (Р<0,05), затем уровень гемоглобина в эритроците понижался к 10-14-м суткам до 15,1-15,5 пг (*Р< 0,05) с дальнейшей стабилизацией этого показателя с 21-х по 60-е сутки до уровня 21,0-21,6 пг в одном эритроците. Цветной показатель был низким с 10-х по14-е сутки (Р< 0,05), а затем, как и все показатели морфологического . * состава крови, повышался до величины, соответствующей норме.

Количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, а также содержание гемоглобина в одном эритроците и цветной показатель в первоначальном исследовании крыс при применении ХКП до и посте облучения были незначительно, но достоверно выше (Р< 0,05), чем показатели морфологического состава крови у крыс физиологического контроля. С 3-х суток отмечались изменения вышеуказанных показателен, особенно в количестве лейкоцитов (их уровень был на 4,5 109л меньше, чем в первоначальном исследовании) (*Р< 0,05) н гемоглобина (его количество составило 88,5 г/л, что на 37,5 г/л меньше, чем данные первого наблюдения). Резкое уменьшение эрэтроцигов, лейкоцитов и гемоглобина в крови отмечалось с 6-х по 10-е сутки. Количество эритроцитов упало до 1,7- 1012д (*Р<0,05). ' .

С 14-х суток отмечался достоверный рост всех вышеуказанных показателей (Р<0,05), который отмечался во все последующие сроки исследований, т.е. до 30-х суток. Исключением был показатель уровня лейкоцитов, который равнялся 9,8-10^ (Р>0,05). К 60-м суткам значительных изменений в количестве эритроцитов и гемоглобина не наблюдалось (РЮ,05), однако уровень содержания лейкоцитов был достоверно выше по сравнению с результатами исследования крыс,

служивших физиологическим контролем (Р<0,05) и держался в пределах 11,5-13,0-10*1.

Средняя величина содержания гемоглобина, как индекс эритроцитов (Mean corpuscular hemoglobin), отражает абсолютное содержание этого белка в одном эритроците в пикограммах. Наши исследования показали, что средняя величина содержаний гемоглобина в эритроцитах крыс, получавших ХКП до и после облучения изменялась. Максимальной она была в эритроцитах крови крыс на 10-й, 14-й и 30-й день наблюдений, минимальной - на 21-й день (Р< 0,05). Характер изменения цветного показателя был волновым до 21-х суток с последующей стабилизацией с 30-х по 60-е сутки опыта Особый интерес представляют исследования крови у облученных крыс, которым после облучения в корм добавляли ХКП.

Резкое достоверное уменьшение всех показателей отмечалось с 3-х суток (Р<0,05) и продолжалось до 6-х суток Низкое содержание эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина держалось до 14-х суток (*Р<0,05). С 21-х суток отмечался рост вышеуказанных показателей: количество эритроцитов было на уровне 3,9-1012л, лейкоцитов 4,8-109л, а концентрация гемоглобина была равна 90,0 г/л (*Р<0,05). К 30-му дню уровень эритроцитов был 5,1-1012л (Р>0,05), лейкоцитов 5,1-109л (*Р<0,05) и гемоглобина 99,0 г/л (Р>0,05). К 45-м суткам отмечалась стабилизация этих показателей (Р<0,05), а затем увеличение до уровня нормы. Что же касается содержания гемоглобина в одном эритроците, то эти показатели волнообразно изменялись с 1-х по 14-е сутки исследований. С 21-х по 60-е сутки показатели мало чем отличались от соответствующих значений в физиологической группе животных.

При применении ХКП до облучения снижение общего белка сыворотки крови отмечалось с 6-х по 14-е сутки. Наименьшее содержание общего белка приходилось на 10-е сутки и держалось на уровне 44,0 г/л (*Р<0,05). К 21-м суткам наблюдали увеличение содержания общего белка сыворотки крови до 61,0 г/л (*Р<0,05). С 30-х до 60-х суток уровень общего белка держался от 69,5 г/л до 72,5 г/л (РХ),05), что в среднем больше на 4,3 г/л, чем показатели физиологического контроля.

Альбуминовая фракция в первые сроки исследования превышала показатели физиологического контроля на 4,5 г/л (*Р<0,05). Достоверное снижение этой фракции наблюдалось с 6-х до 14-х суток и держалось на уровнях 22,0 г/л-18,0 г/л (*Р<0,05), что меньше, чем показатель физиологического, контроля на 8,0-10,0 г/л. С 21-х суток отмечали достоверный подъем альбуминовой фракции до 28,0 г/л (*Р<0,05) с последующим восстановлением до нормы.

Альфа-глобулиновая фракция сыворотки крови при применении ХКП до облучения в наших исследованиях носила волнообразный характер и держалась в пределах от 10,0 до 17,2 г/л. Тогда как у группы животных, служивших физиологическим контролем альфа-глобулиновая фракция в основном держалась на уровне 12,1-12,8 г/л.

Изменения в показателях по бега-глобулиновой фракции белка сыворотки крови были нами отмечены с 3-х суток (Р>0,05) , к 6-м суткам уровень крови бета-глобулинов снизился до 9,0 г/л, что на 2,9 г/л меньше, чем у физиологического контроля в те же сроки исследований. С 10-х до 21-х суток изменения бета-глобулиновой фракции имели волновой характер, ее содержание находилось в пределах 8,0-11,0 г/л. Стабилизация уровня бета-глобулиновой фракции приходилась на 30-е - 60-е сутки ваших исследований и ее содержание держалось на уровне 14,6-16,4 г/л (*Р<0,05).

Гамма-глобулиновая фракция имела низкие показатели на 6-е, 10-е, 14-е сутки наблюдений. К 21-м -30-м суткам уровень гамма-глобулинов мало че*ч отличался от уровня этой фракции в физиологическом контроле и держался в пределах от 6,1 до 10,0 г/л (*Р<0,05), не претерпевая значительных изменений до завершения опыта.

При рассмотрении показателей изменения биохимического состава крови крыс линии «Вистар», получавших ХКП до и после облучения видно, что снижение уровня общего белка отмечалось на 3-й сутки (*Р<0,05), с последующим увеличением этого показателя до 72,8 г/л к 6-м суткам (*Р<0,05). К 10-м суткам отмечали уменьшение общего белка до 46,9 г/л (*Р<0,05). С 14-х до 60-х суток отмечалось увеличение общего белка сыворотки крови с 53,6 г/л до 70,1 г/л. Действие ХКП при ее скармливании до и после облучения сказывалось и на перестройку альбуминовой фракции.

Так, снижение этого белка по отношению к таковому показателю в контрольной группе отмечалось лишь на 3-й, 10-е и 14-е сутки (Р<0,05). В остальные сроки исследований количество альбуминов было на уровне показателей в контрольной группе и держалось в пределах 32,7-35,1 г/л (*Р<0,05). Альфа-глобулиновая фракция белка на протяжении всех сроков исследований была выше, чем у контрольной группы, хотя носила переменный характер и лишь на 3-й сутки она была на 1,8 г/л меньше, чем в контроле (*Р< 0,05).

Изменения бета-глобулиновой фракции отмечали с 3-х суток, когда их уровень был 8,9 г/л (*Р<0,05). В остальные сроки бета-глобулиновая фракция держалась на уровне таковой в контроле. Исключением были 45-е сутки, когда уровень данной фракции поднялся до 15,8 г/л (*Р<0,05). К 60-м суткам бета-глобулиновая фракция была на уровне этой фракции в физиологическом контроле (Р>0,05) и равнялась 11,9 г/л. Снижение гамма-глобулиновой фракции отмечалось с 1-х суток, а наименьший показатель был нами отмечен на 10-е сутки и держался на уровне 4,6 г/л (*Р<0,05). Повышение гамма-глобулинов до 8,3 г/л наблюдали с 21-х суток (*Р<0,05). С 30-х до 60-х суток фракция гамма-глобулинов стабильно держалась в среднем на уровне 10,2 г/л.

Применение ХКП после облучения показало, что снижение общего белка происходило на 3-й сутки до 46,7 г/л (*Р<0,05). Низкие показатели держались до 14-х суток, затем к 30-м Суткам уровень общего белка поднимался до 74,0 г/л (*Р<0,05), что на 3,4 г/л больше чем показатель контрольной группы. К 60-м суткам уровень общего белка у опытных животных был в пределах нормы (Р>0,05). Альбуминовая фракция через день после воздействия излучения превышала данные контроля на 6,0 г/л. Спад уровня альбуминов приходился на 3-21-е сутки опыта и был равен 20,2-27,5 г/л (*Р<0,05). Достоверное увеличение содержания альбуминов до уровня контрольной группы отмечено на 30-60-е сутки (Р>0,05) и держалось в пределах 36,7-31,4 г/л. Снижение альфа-глобулиновой фракции

происходило с 3-х суток до 8,6 г/л (*Р< 0,05), а затем с 6-х до 10-х суток наблюдали повышение содержания альфа-глобулинов до 17,4 г/л (Р>0,05) за счет компенсаторных факторов организма облученных животных. На

14-е-30-е супсн уровень альфа-глобулинов был в норме (Р>0,05), а с 45-х до 60-е сутки - превышал значения контроля на 4,2 - 2,7 г/л.

Бета-глобулиновая фракция имела тенденцию к снижению с 3-х по 6-е сутки. Затем изменения этой фракции носили переменный характер со стабилизацией уровня бета-глобулинов до уровня контроля к 14-м суткам до 13,0 г/л (*Р< 0,05) и спадом к 21-м суткам до 9,8 г/л (Р>0,05).К 30-м - 45-м суткам уровень этой фракции был равен 12,0 г/л (*Р<0,05) и держался в норме до конца наблюдений. Гамма-глобулиновая фракция до 14-х суток имела низкие показатели по отношению к показателям контрольной группы. С 21-х суток отмечался рост уровня гамма-глобулинов от 12,3 г/л (*Р<0,05) до 13,1 г/л (Р>0,05) к 30-м суткам. В наших дальнейших исследованиях наблюдался незначительный спад уровня гамма-глобулиновой фракции до 8,0 г/л (*Р< 0,05) к 45-м суткам, а к 60-м - до 9,3 г/л (Р>0,05), что было в пределах нормы.

Сравнивая влияние ионизирующего излучения на фагоцитарную активность купферовских клеток печени при применении ХКП до облучения по отношению к таковому в контрольной группе, можно отметить, что количественный состав клеток с 1-х по 60-е сутки наших наблюдений был в пределах нормы (Р>0,05).

В фагоцитозе в основном действовало 309,0-475,5 КК. Чисто фагоцитирующих клеток при (Р< 0,05) приходилось на 6,21 и 60-е сутки, в остальные сроки исследований уровень фагоцитоза был при (Р>0,05) одинаков с уровнем такого в контроле. Отношение ФКК к НФКК держалось в пределах 0,6±0,08; 5,2±0,06.

При введении ХКП до и после облучения отмечали снижение количественного состава КК с 6-х суток (*Р< 0,05), затем число КК изменялось волнообразно и наименьший их уровень был зарегистрирован на 21-е супсн и равнялся 386,0. К 60-м суткам количественный состав КК был на уровне нормы. Подсчет количества фагоцитирующих клеток показал, что их наименьшее число было зафиксировано на 6, 10 и 21-е сутки (Р< 0,05), что равнялось 117,0-130,5 КК на единицу площади окулярной сетки. В основном же количественный состав КК, участвовавших в фагоцитозе имел волнообразный характер (Р<0,05 и Р>0,05). Фактор отношения ФКК и

НФКК в основном держался на уровнях от 0,3±0,11 до 8,2 ±0,80 балла (*Р<0,05). Исключением являлись 30-е сутки, когда фактор ФКК и НФКК поднимался до 15,2 балла (Р>0,05). Аналогичные исследования были проведены нами по подсчету общего числа КК, а затем фагоцитирующих и не фагоцитирующих клеток с последующим определением фактора ФКК/НФКК при применении ХКП после облучения. Количественный состав КК был на уровне состава в контроле до 60-х суток, и их наименьшее число было отмечено лишь на 21-е сутки (Р>0,05). В фагоцитозе от общего числа КК участвовало от 213,0 до 482,5 клеток (*Р<0,05). Фактор отношения ФКК/НФКК был в пределах 0,6-5,2 балла Наименьший уровень показало отношение ФКК/НФКК на 3-21-е сутки в разгар лучевой болезни.

Применение ХКП до облучения показало, что снижения бактерицидной и бега-лизиновой активности сыворотки крови по отношению к таковому в контрольной группе наблюдалось с 6-х по 14-е сутки. Наименьший процент бактерицидной активности 47,1% (*Р< 0,05) был отмечен на 6-е сутки, а бета-лизиновой - 20,0% - на 10-е сутки активность сыворотки крови была на уровне таковой в контроле (Р>0,05). Активность лнзоцима у крыс опьггной группы была незначительно сроки исследования активность лнзоцима держалась на уровне нормы.

Применение ХКП до и после облучения также благополучно сказывается на гуморальных факторов иммунитета у облученных животных. • Так, бактерицидная активность сыворотки крови имела низкие показатели с 1-х по 1-е сутки и равнялась 69,7-53,3% в остальные сроки уровень бакгерицидности держался в пределах 86,1-95,1% (Р>0,05). Бета-

лизиновая активность сыворотки крови имела волновой характер развития. Наименьший уровень активности приходился на 1-е, 6-е и 21-е сутки и держался в пределах 17,9-18,7% и 21,6% (*Р< 0,05). На 30-е - 45-е сутки бета-лизиновая активность поднималась до 38,0-50,0% (*Р< 0,05), а к 60-м -снижалась до 31,5% (Р>0,05). Активность лнзоцима падала в период с 3-х по 21-е сутки и была в пределах 4,4-8,2% (*Р<0,05). С 30-х суток отмечалась стабилизация активности лнзоцима, которая держалась до 60-х суток с 11,1% до 13,2% (Р>0,05), что соответствовало уровню активности в контроле.

Применение ХКП после облучения также положительно сказывается на показатели гуморальных факторов иммунитета. Снижение бактерицидной, бета-лизиновон и лизоцимной активности сыворотки крови отмечалось с 1-х по 21-е сутки, с дальнейшей стабилизацией этих показателей с 30-х пл 60-е сутки. Наименьший уровень бактерицидной активности приходился на 10-е сутки и был равен 41,8% (*Р<0,05); бета-лизиновон активности - на 3-6-е сутки и был равен 16,8-18,5% (*Р< 0,05); активности лизоцима - на 6-е 14-е сутки и был равен 6,6-6,9% (*Р< 0,05).

Как было отмечено нами ранее восстановление гуморальных факторов иммунитета заканчивалось к 60-м суткам и держалось на уровне таковых в группе физиологического контроля (Р>0,05).

Применение ХКП до облучения показало, что изменения концентрации РНК и ДНК в печени отмечалось с 3-х по 14-е сутки (*Р< 0,05). Наименьший уровень содержания РНК и ДНК приходился на 10-е сутки. Количество РНК было равно 13,1 мг%-Р, а ДНК - 19,5 мг%-Р (*Р< 0,05). Увеличение содержания РНК и ДНК в печени облученных животных наблюдали с 21-х суток. Восстановление концентрации нуклеиновых кислот до уровня таковой в контроле отмечали к 30-м-60-м суткам (Р>0,05). Можно также отметить то, что количество РНК и ДНК в селезенке у крыс, получавших ХКП до облучения равномерно снижалось с 3-х до 14-х суток и их концентрация была на уровне 18,3 мг%-Р (РНК) и 17,4 мт%-Р (ДНК) (*Р< 0,05).

Снижение концентрации нуклеиновых кислот в селезенке отмечалось нами до 14-х суток (Р< 0,05), а с 21-х - увеличение (Р<0,05) с последующим восстановлением до уровня в контроле к 30-60-м суткам (Р>0,05). Отношение синтеза РНК/ДНК на всем протяжении опыта держалось на уровне 1,2-2,4% для печени и 1,3-2,5 селезенки, что соответствовало уровню их отношения в контрольной труппе. При применении ХКП до и после облучения отмечалось снижение концентрации нуклеиновых кислот в печени и селезенке с 3-х суток (Р<0,05). Наименьший уровень содержания РНК и ДНК приходился на 10-е сутки в разгар лучевой болезни и был соответственно равен для печени 28,1 мг%-Р и 17,5 мх%-Р, для селезенки - 19,5 мг%-Р и 18,2 мг%-Р (*Р< 0,05). С 21-х суток опыта

отмечали увеличение содержания нуклеиновых кислот в исследуемых органах до уровня содержания их в контроле. Завершение стабилизации содержания нуклеиновых кислот в печени отмечали на 45-е сутки. Их содержание составило 41,2 мг%-Р (РХ),05), а ДНК 40,0 мг%-Р (*Р< 0,05). В селезенке количество РНК было в пределах 46,0 мг%-Р (*Р<0,05), а ДНК -50,0 мг%-Р (Р>0,05). Нами были проведены исследования по применению ХКП после облучения.

Концентрация РНК и ДНК в исследуемых органах снижалась с 3-х и продолжалась до 14-х-21-х суток (Р>0,05). Наименьшие значения по содержанию РНК в печени и селезенке были отмечены на 14-е сутки наблюдений. Концентрация РНК в печени была на уровне 16,0 мг%-Р (*Р< 0,05), а в селезенке 10,0 мг%-Р (*Р< 0,05), что на 20,0-25,0 мг%-Р меньше, чем показатели физиологического контроля. Содержание ДНК в органах с критическим уровнем отмечалось нами на 10-14-е сутки опыта. В эти сроки концентрация ДНК в печени держалась на уровне 16,6-18,6 мг%-Р (*Р<0,05), а в селезенке 12,7-13,6 мг%-Р (*Р<0,05). С 30-х суток отмечался подъем нуклеиновых кислот (Р>0,05), который завершился к 60-м суткам, но был по некоторым показателям ниже чем в контрольной группе. Так, концентрация ДНК в печени была на 28,5 мг%-Р меньше (*Р< 0,05), а РНК на 8,1 мг%-Р больше (Р< 0,05); в селезенке - РНК на 42,7 мгУо-Р

меньше и ДНК на 37,6 мг%-Р меньше (*Р< 0,05), чем таковые показатели у контрольных крыс, что указывает на незавершенность восстановительных процессов в облученном организме.

Синтез РНК и ДНК в печени экспериментальных животных в определенной мере коррелирует с процессами синтеза витамина А в печени. С учетом этого нами прослежены динамические изменения этого витамина при применении ХКП у опытных трупп животных.

Применение БАВ до облучения, до и после облучения, а также после облучения положительно влияет на синтез витамина А в печени у облученных животных.

Концентрация витамина А в печени экспериментальных животных в первые сутки наблюдений была незначительно выше, чем в контрольной группе. Снижение уровня витамина А отмечалось с 6-х суток у всех трупп

животных (Р< 0,05). Наименьшее содержание витамина А в печени было нами отмечено с 14-х ио 21-е сутки опыта. Его уровень держался для группы животных, получавших ХКП до облучения от 4,0-4,8 мг% (*Р< 0,05), для группы животных, которым ХКП задавали с кормом до и после облучения -4,2-6,0 мг% (*Р<0,05), а для группы крыс, которым ХКП скармливали после облучения - 3,0=3,3 мг% (*Р<0,05). К 30-м суткам отмечалось достоверное увеличение концентрации витамина А в печени (Р<0,05), с последующим восстановлением до уровня показателей в контрольной группе животных.

7. Ультраструктурные изменения в печени у облученных крыс при скармливании им биологически активных веществ

Вопросы радиационной чувствительности ткани и органов, а также их ранних морфологических изменений дают возможность определить наиболее чувствительные структуры клеток и характер патологического процесса, глубину поражения и предсказать ответную реакцию организма на применение БАВ.

Проведенные нами электронно-микроскопические исследования печени у облученных животных, которым пролонгирование в рацион добавляли БАВ показали, что в первые 3 дня после воздействия излучения происходят изменения в ультраструктуре печени, которые характеризуются изменениями в митохондриях.

Следует отметил», что не все митохондрии изменяются одновременно, существует определенная последовательность вступления этих структур в процесс. В клетках печени в первые же сутки после облучения наблюдается набухание этих структур, мзтрикс митохондрий просветляется и образу ется светлая вакуоль, что приводит к сглаживанию и полному исчезновению крист, а в дальнейшем и к распаду митохондрий. Необходимо отметить, что некоторые изменения митохондрий обратимы. В период выздоровления в клетках печени отмечено образование новых структур, т.е. явление внутриклеточной регенерации.

Рибосомы - структуры, ответственные за синтез РНК, -представлены в виде свободных и связанных с мембранами ЭПС гранул.

При облучении организма количество рибосом уменьшается, что согласуется с данными биохимического исследования, при котором отмечается снижение содержания РНК в протоплазме клеток. Особенно хорошо заметно образование в клетках печени гигантских лизосом.

Реакция ядра на воздействие ионизирующего излучения проявлялась расширением пор в ядерной мембране и отслойкой ее наружного слоя с образованием светлого перинуклеарного пространства.

Помимо увеличения ядер, происходит изменение их формы перераспределения хроматина, крупные глыбки которого скапливаются возле ядерной оболочки. В клетках печеночной паренхимы нар^у с картиной разрушения отмечается появление митозов.

Восстановление структуры печени у экспериментальных животных при применении БАВ наблюдалось, в основном, с 21-х суток и продолжалось до 60-х суток. В период восстановления увеличивалось число рибосом в виде свободных и связанных с мембранами ЭПС, а также отмечалось восстановление крист , митохондрий и сужение эндоплазматической сети и перинуклеарного пространства. В клетках печени в период выздоровления отмечалось образование гигантских лизосом и других внутриклеточных структур. В некоторых клетках в процессе деления происходило увеличение числа двухвдерных клеток и клеток с увеличенными ядрамд и часто неправильной формы.

Применение БАВ показало, что'реакция ядра на воздействие излучения протекает в слипании и распределении хроматина в оболочке ядра и содержании ДНК Нами отмечалось также, что восстановление структуры печени при применении БАВ заканчивалось к 30-60-м суткам.

Выводы

1. Изучение токсичности н пнрогенности полученных из древесной зелени биологически активных веществ: провитаминного концентрата и хлорофилл-каротиновой пасты на крысах, мышах, хомяках, кроликах, собаках и курах при внутрибрюшинной, внутримышечной, пероральной инъекциях, как при дробном, так и при одноразовом введении до общего количества 1,0 г/кг массы тела выявило их атоксичность и апирогенностъ.

2. Пролонгированное скармливание БАВ индуцировало усиление гемопоэза, увеличение содержания гемоглобина, содержание гемоглобина в одном эритроците; повышало уровень общего белка крови и его фракций; увеличивало "показатель естественной резистентности сыворотки крови, повышало количество участвовавших в фагоцитозе купферовских клеток печени и витамина А в ней, а также содержание ДНК и РНК в иммунокомпетентных органах, что послужило возможностью применение БАВ при лучевых поражениях.

3. Пролонгированное применение БАВ, таких как ПК или ХКП, полученных из зелени низкосортной древесины (ель, сосна), содержавших в своем составе в качестве основного действующего фактора бета-каротин, применяемых в количестве 0,2 мг/кг массы тела облученных в дозе 7,2 Гр животных, обладают профилактическими и лечебными свойствами. Так, выживаемость животных к 60-м суткам при применении ПК или ХКП до и после облучения составляла 60%, в то время как облученная в контроле группа животных гибла на 10-14-е сутки.

4. БАВ обладают стимулирующим действием на кроветворную функцию организма. Так, при их применении до и после облучения, на 14-е сутки количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина держалось на следующих уровнях 3,5±0,05 (ПК); 4,1±0,1 (ХКП)1012л; 8,9±0,01 (ПК); 5,3±0,4 (ХКП)-109л;

53,2±0,25 (ПК); 90,0^2,0 (ХКП) г/л соответственно, с их последующим восстановлением до нормы к 30-60-м суткам. Тогда как, к 14-м суткам у облученных животных контрольной группы к моменту их гибели количество эритроцитов держалось на уровне 1,6=Ь0,07-10пл; лейкоцитов - 1,9±0,1-109л; гемоглобина - 34,5±0,05 г/л.

5. У облученных животных контрольной группы к моменту их гибели, т.е. на 14-е сутки, уровень общего белка составлял 44,4±4,0 г/л; альбуминов - 18,8±1,2 г/л; альфа-глобулинов -9,4±1,9 г/л; бета-глобулинов - 10,4±1,3 г/л и тамма-глобулинов - 5,7±0,9 г/л. Тогда как, при применении ПК или ХКП до и после облучения в те же сроки исследований уровень общего белка составлял 60,0±5,7 и 53,6±1,1 г/л; уровень его альбуминовой, альфа-глобулиновой, бета-глобулиновой и гамма-глобулнновой фракций - 27,2±3,3 и 21,3±0,6 г/л; 12,0±1,4 и 14,4±0,3 г/л; 11,4 ±1,4 и 11,9±0,04 г/л; 9,2±1,3 и 6,1±0,2 г/л соответственно, с дальнейшим восстановлением до нормы к 2130-м суткам. 1

6. Фагоцитарная активность купферовсикх клеток (КК) печени у 1 облученных животных контрольной группы к 14-м суткам

/; Га

равнялась 170,6±47,7 КК, а при применении ПК или ХКП до и' * после облучения 200,0± 16,5 и 195,5±52,5 КК, с дальнейшим увеличением к 30-60-м суткам участвовавших в фагоцитозе купферовских клеток до 507,5±32,5 и 476,0±6,0 на единицу площади окулярной сетки микроскопа.

7. БАВ при их применении до и после облучения животных обладают стимулирующим действием на иммунобиологические процессы организма. Так, к 14-м суткам бактерицидная активность сыворотки крови составляла 46,0±11,6% (ПК) и 82,6±3,5% (ХКП); бета-лизиновая активность - 45,0±5,5% (ПК) и 25,1±7,0% (ХКП), а активность лизоцима- 10,7±1,6 (ПК) и 8,8±1,2% (ХКП). Восстановление иммунологических факторов до нормы отмечалось к 30-м суткам Бактерицидная, бета-

лизиновая в лизоцимная активность в этот период составляла 96,1±0,9% (ПК) н 94,3±4,8% (ХКП); 55,4±1,9% (ПК) и 38,0±2,2% (ХКП); 15.3±0,3% (ПК) и 11Д±0,2 % (ХКП) соответственно.

8. Концентрация РНК в печени и селезенке у облученных животных контрольной группы к 14-м суткам находилась на уровне мг%-Р и 11,0±1,4 мг%-Р, а концентрация ДНК в этих органах составила 18,2±0,5 мг%-Р и 12,1±5,4 мг%-Р соответственно. При применении БАВ у экспериментальных животных показатели РНК и ДНК в те же сроки исследований были выше. РНК в печени и селезенке при применении ПК - на 13,5 мг%-Р и 19,0 мг%-Р; при применении ХКП - на 4,6 мг%-Р 13,2 мг%-Р, а ДНК - на 7,4 ш%-Р и 14,9 мг%-Р, на 4,3 мг%-Р и 13,9 мг%-Р соответственно. Восстановление концентрации РНК/ДНК в исследуемых органах отмечалось к 60-м суткам.

9. Рекомендованные БАВ при их применении до и после облучения к 14-м суткам повышали содержание витамина А в печени крыс в 1,7 раза по отношению к его содержанию у облученных животных контрольной группы. Концентрация витамина А в печени к 21-м суткам исследований для ПК и для ХКП составляла 7,5±0,06 мг% и 6,0±0,06 мг%, что соответствовало норме.

10. Электронно-микроскопическое исследование показало, что защитный эффект БАВ обусловлен более быстрым восстановлением ультраструктуры гепатоцитов: ядра, перинуклеарного пространства, эндоплазматической сети, митохондрий, полирибосом, рибосом и других- структур. Регенерация в печени начиталась на 10-14-е сутки и проявлялась в перестройке ретикулярного каркаса дольки с вновь образующимися сосудами, между которыми располагались гнезда печеночных клеток, в то время как у облученных животных контрольной группы восстановление гепатоцнтов не наблюдалось.

11. Широкие научно-практические исследования, выполненные в 30-километровой зоне Чернобыльской аварии с плотностью радиоактивного загрязнения от-15 до 40 Ки/км" и других хозяйствах, подтвердили благоприятное влияние препаратов на морфологические и биохимические показатели крови молодняка крупного рогатого скота и птиц.

Практические предложения

1. Предложены методические указания по пролонгированному применению БАБ из древесной зелени высших растений в сельскохозяйственном производстве, таких как ПК и ХКП, в составе которых содержится бета-каротин с одиннадцатью двойными связями, который является основой действующего фактора для профилактики возможных лучевых повреждений, стимуляции кроветворения и функции иммунной системы животных и птиц.

2. Предложенные про витаминный концентрат и хлорофилл-каротиновая паста обладают широким спектром действия на облученный организм и могут служить основой для создания лекарственных препаратов по защите кроветворной, клеточной и иммунобиологической систем, с использованием их для лечения и профилактики лучевой болезни.

3. Рекомендуются применение БАВ в зонах с повышенным радиоактивным фоном, загрязненных радионуклидами при ведении сельскохозяйственного производства.

4. Результаты наших исследований относятся к основам ветеринарной гигиены и радиобиологии и могут был. использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий в академиях, университетах, колледжах, на факультетах ветеринарной медицины и зоотехнического профиля.

Список

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Курило А. И., Злобин В. е., Малиев В. М, Ягодин В. И. Применение хлорофилл-каротиновой насты, провитаминного концентрата, бета-каротина для тушения синглетного кислорода // Тезисы докладов Всесоюзной конференции «Проблемы использования древесной зелени в народном хозяйстве СССР.- Ленинград, 1984,- с.63.

2. Курило А. И., Малиев В. М. Применение биомассы морских микроводорослей для профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных .// Тезисы Всесоюзной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных».-Москва, 1985.- с.165-166.

3. Курило А. И., Васильев М. Ф. Возвратные изменения биохимических показателей крови и неспецифических факторов иммунитета у крыс // Журнал «Ветеринария».-№2,1986,- с.8.

4. Курило А. И., Злобин В. С. Реактивные изменения неспецифических факторов иммунитета при скармливании «CK» (смесь каротиноидов) из Platimonas viridis // Сборник научных трудов ЛВИ. Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц.- Ленинград, 1987,-с.58-60.

5. Курило А. И., Ягодин В. И., Злобин В. С., Левинталь Ю. К Влияние провитаминного концентрата из древесной зелени на изменение количества бета-лизина у животных // Тезисы докладов «Применение достижений биотехнологии в народном хозяйстве,- Уфа, 1987,- с. 17-18.

6. Курило А. И., Ягодин В. И., Злобин В. С, Левинталь Ю. К. Продукты переработки древесной зелени и их биологическая активность // Тезисы докладов научно-технической конференции «Производство кормовых и биологически активных продуктов на основе низкосортной древесины и отходов лесопромышленного комплекса.- Красноярск, 1989.- с.48-50.

7. Курило А. И. О содержании ДНК и РНК в тканях экспериментальных животных при сочетанном действии постоянных электромагнитных полей и ионизирующих излучений при применении биологически

активных веществ // Тезисы докладов Третьей Всесоюзной конференции по сельскохозяйственной радиологии.- Обнинск, 1990,-Т.4.-С.85.

8. Курило А. И., Левенталь Ю. К Изменение количества бета-лизина в сыворотке крови у лабораторных животных при скармливании «ПК» (провигаминного концентрата) до лучевого воздействия // Тезисы докладов «Актуальные проблемы ветеринарии»,- Ленинград, 1991.-е.53-54.

9. Курило А. И. Провитамииный концентрат как стимулятор кроветворения при острой форме лучевой болезни // Медико-экологически проблемы здоровья населения севера. Материалы выездного заседания «Врачи за предотвращения ядерной войны» и «Глобальной комиссии по ядерной экологии»,- Архангельск, 1991.- с.26-31.

10. Курило А И., Болотников И. А. Защитные свойства провигаминного концентрата // Медико-экологические проблемы здоровья населения Севера. Материалы выездного заседания «Врачи за предотвращение ядерной войны» и «Глобальной комиссии по ядерной экологии».-Архангельск, 1991,-с.31-35.

11. Курило А. И. Конопатов Ю. В. Использование провигаминного концентрата в кормлеции птиц .// Тезисы докладов к 4-ой Межгосударственной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1992,- с.49.

12. Курило А. И., Конопатов Ю. В. Влияние хлорофилл-карогановой пасты на белковый спектр плазмы крови облученных животных // Тезисы докладов к 4-ой Межгосударственной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии»,- Санкт-Петербург, 1992,- с.49-50.

13. Курило А И. Ультроструктурные изменения печени облученных животных // Материалы научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПВИ «Актуальные проблемы ветеринарии»,- Санкт-Петербург, 1993,- с.38-39.

14. Курило А. И., Конопатов Ю. В. Фагоцитарная активность гепатоцитов у облученных крыс // Материалы научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников н аспирантов СПВИ «Актуальные проблемы ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1993,- с.39-40.

15. Курило А И., Конопатов Ю. В. Показатели неспецифической защиты у облученных крыс при применении хлорофилл-каротиновой пасты//

. Тезисы докладов к 5-ой Межгосударственной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1993.- с. 42.

16. Курило А. И., Конопатов Ю. В., Болотников И. А. Морфологические изменения в печени облученных животных при применении хлорофилл-каротиновой пасты // Тезисы докладов к 5-ой Межгосударственной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1993.-с.81.

17. Курило А И., Конопатов Ю. В. сравнительная оценка радиозащитных свойств витамина А и хвойной пасты // Актуальные проблемы ветеринарии.- Санкт-Петербург, 1994,- с.79-80.

18. Курило А. И., Конопатов Ю. В. Влияние хлорофилл-каротиновой пасты на уровень ДНК печени, селезенки после облучения животных // Тезисы докладов к 6-ой Межгосударственной межвузовской научно-практической конференция «Новые фармакологические средства в ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1994,- с.55.

19. Курило А. И., Конопатов Ю. В. Защитное действие хлорофилл-каротиновой пасты при облучении животных // Тезисы докладов к 6-ой Межгосударственной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1994,-с.82.

20. Курило А. И., Конопатов Ю. В. Влияние провитаминного концентрата на уровень ДНК в печени крыс // Материалы научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПВИ «Актуальные проблемы ветеринарии».- Санкт-Петербург, 1994,- с.27.

¡1. Курило А. И., Конопатов Ю. В. Хлорофилл-каротиновая паста как стимулятор кроветворения // Материалы научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПВИ «Актуальные проблемы ветеринарии»,- Санкт-Петербург, 1994,- с.28

12. Курило А. И. Взаимодействие ионизирующей радиации с нуклеиновыми кислотами и их защита биологически активными веществами // Межакадемический информационный бюллетень. -Академия,-1996,-№3.-с. 18-20.

:3. Курило А. И., Малек М А., Злобнн В. С., Барулин В. Н. Воздействие гамма-излучений на биологические мембраны // Межакадемический информационный бюллетень,- Академия. -1997,-№2 (6).- с. 15-16.

4. Курило А. И. Защитное действие хлорофилл-каротиновой пасты из. древесной зелени при воздействии ионизирующих излучений на организм животных // Межакадемический информационный бюллетень. - Академия. - 1997.- №2 (6).- с.20-21.

Заказ №25. Подписано в печать 28.11.97. Формат 60х 84 1/16 Печать офсетная. Бумага писчая. 2,5 п. Л. Тираж 100 экз. Офсет «Новости Петербурга».