Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Ретроспективная диагностика и пероральная иммунизация норок против чумы плотоядных

.БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ! ЭКО'ШРИМШТГАЛЬНОЙ ВКТЕРИНАРИИ нм. С. Н. ВЫИШЛЕССКОГО

1ФЕО 1997

На правах ртаоптген

УДК 619: 616.988.27:591.531.2-07

КАШКО Леонид Степанович

РЕТРОСПЕКТИВНАЯ ДИАПЮСТИКА К ПЕРОРАЛЬНАЯ ИММУНИЗАЦИЯ КОРОК ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ

16.00,03. ■ ветеринарная микробиология, вирусология, жгаоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации па соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Минск - 1996

Работа выполнена в Белорусском научно - исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. С. II. Вышелесского

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор кафедры вете-рииарпо - санитарной экспертизы Витебской Государственной академш ветеринарной медицины Шашенько A.C.

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, профессор, академик Академии аграрных наук Республики Беларусь Ковалев H.A.

Официальные аннонеиты; доктор биологических наук, профессор Ерошов Л. й.

кандидат ветеринарных наук, доцент Кирничснок В. А.

Оппонирующая организация - Всероссийский Государственный тупко - ixc:ic-

доватеяьскии институт контроля, стандартизации и сертификации встрешратов

f к ' , /("J^

Защита состоится -о "Et ¿¿11996 года в / т часов на заседают Со-

вета но защите диссертаций Д 05.16.01 е Белорусском научно - исследовательском институте экспермиентальнон ветеринарии им. С. Н. Вышелесского по адресу: 223020. т. Минск, п/о Кунцевднна, БелНИИЭВ им. С. Н, Вышелесского

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белорусского научно - исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского

Автореферат разослан jlo^tf&j'^^XWb года

Ученый секретарь Совета по защите^-, диссертаций, доктор ьетеринариш^-^^

Дицнпк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальное» темы диссертации. Особенности биологическое развитая клеточных пушных зверей и необходимость защиты их от инфекционных болезней в возможно короткие сроки поставили перед учеными задачу по разработке новых высокоэффективных мстодоа контроля за иммунным состоянием животных и группового применения биологических препаратов,

Эффективных, относительно не длительных по времени, иммунологических методов оценки «оствакшнгального иммунитета против чумы плотоядных в настоящее время еще ие разработано.

Немаловажной проблемой, с которой сталкиваются при иммунизации животных против пумы плотоядных, является наличие материнских (колостральных) антител в организме молодых животных. По мнению многих исследователей (W. Chalmes and W. Baxcndale, 1994 и др.) материнские антитела, с одной стороны обеспечивают защиту молодняка от заболевания, а с другой, при их высоком уровне, препятствуют выработке антител в ответ на введение вакцин. Для решения этой проблемы одни авторы (S. Burionboy, S. Charlier, et al., 1991) рекомендуют вводить вакцины щенкам в более высоких титрах или вводить ее дважды, другие (J. Gillespie, 1966) предлагают определять сроки вакцинации по титрам антител у матерей и времени элиминации колостральных ашшел в организме молодых животных или использовать в качестве вакцинного штамма вирус кори (J. Baker, 1970; J. Wilson et al., 1976).

Для групповой вакцинации путных зверей против чумы плотоядных рядом авторов предложен аэрозольный метод {Jonhson et al., 1957; G. Chappuis, J. Terre, 1973; Г. A. Сафонов с соавт., 1976 и др.).

Этот метод отличается высокой производительностью, но имеются трудности в определении дозы вакцины, необходимы специальное оборудование, соответствующая подготовка помещений и при этом создается угроза рассеивания вакцинных штаммов во внешнюю среду.

Многие отечественные и зарубежные ученые для проведения массовых вакцинаций животных и птицы отдают предпочтение пероральной иммунизации Применение вакцин с водой или кормом (нероралъная иммунизация) метод простой, не требует специально»« оборудования, малотрудоемок, сводит до минимума воз-

можность рассеивания возбудителей вакцинных штаммов, доступен для применения в любых хозяйственных условиях и в дикой природе.

В медицинской практике показана возможность пероральной иммунизации людей против полиомиелита (М, П. Чумаков, I960; М. И. Чумаков, М. К. Ворошилова, С. Т. Дзатуров, 1963 и др.), брюшнотифозной инфекции (А. II. Мешадова, 1974; Б. Б. Першин, 1976) и др.

В ветеринарии имеются данные по пероральной вакцинопрофклактике коли-бактериоза и сальминеялеза телят и поросят (М. Л. Сидороа с соавт., 1979, 1981, 1981; В. С. Прудников, 1990), рожи свиней (Р. В. Душук и соавт., 1982), рола! и классической чумы (И. И. Кулеско, 1966), классической чумы диких свиней (А. С. Шашенъко, И. И. Добродеревец, Н. А. Ковалев, 1979; Е. М. Хрипунов, В. А. Мищанин, А, Н. Егоров и др., 1995), диких плотоядных животных ирогив бешенства (G. Baer et.al., 1971; G. Debbie el. а!., 1974; G. Winkler et. al„ 1975; А. С. Шашенъко, H. А. Ковалев, В. П. Да-выденко, 1986; и др.) и других болезней сельскохозяйственных животных и типы.

Сведений о пероральной иммунизации пушных зьерей, в частности норок, против чумы плотоядных в отечественной и доступной иностранной литературе нет.

Поэтому разработка методов ретроспективной диагностики и пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных является актуальной проблемой (В. Н. Сю-рин, Р. В. Белоусова и др,, 1991; G. Chappuis et, al., 1995).

Связь работы с крупными научными программами, темами. Работа выполнялась в БслНИИЭВ им С. Н. Вышелесского в рамках темы 04 научных исследований лаборатории острых вирусных инфекций "Па основе биотехнологических методов разработать и усовершенствовать средства диагностики и профилактики наиболее распространенных инфекционных болезней, позволяющие обеспечить стойкое благополучие хозяйств и сохранность животных до 95 - 98%" (Ks госрегистрации 142 от 6.12.93г.).

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилась разработка методов определения поствакцяналыюго противочумного иммунитета и пероральной иммунизации клеточных пушных зверей (норок) против чумы плотоядных. Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1.Разработать метод контроля поствакщшального иммунитета против чумы плотоядных у животных С помощью РИГА;

-32. Адаптирован, вакцинный штамм чумы плотоядных "ЭПМ" к культуре клеток куриных эмбрионов я разработать метод пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных;

3. Отработать дозы вакцинного штамма "ЭПМ"' при пероральной иммунизации норок против чумы пгогоядчых;

4. Изучить сроки формирования и продолжительность противочумного иммунитета у порок при пероральной иммунизации;

5. Изучить пропгвоэатооотеческл'Ю эффективность пероролыюпо метода иммунизации норок против чумы в производственных условиях;

6. Изучить экономическую эффективность пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных и метода определения поствакцинального противочумного иммунитета с помощью РИГА.

Научная новизна полученных результатов. Впервые предложен высокоэффективный способ изг отовления эритроцитарного диагностикума, основанный на сенсибилизации стабилизированных акролдеином, танизироваштых эритроцитов крунно-го рогатого скота вирусам чумы плотоядных с помощью коныогирующих веществ хлорида хрома с тртшанояым синим для диагностики и контроля ноствакшшадьного иммунитета у жизот!!ых с помошыо РИГА. Впервые разработан метод пероральной иммунизации клеточных пушных зверей (норок) против чумы плотоядных, проведена адаптация вакцинного штамма ВЧП "ЭПМ" к культуре клеток КЭ. Определены долы пероральной вакцинации зверей, сроки формирования и продолжительность противочумного иммунитета. Изучены некоторые морфологические и биохимические показатели крови норок нри пероральной иммунизации против чумы плотоядных.

Практическая значимость полученных результатов. На основания проведенных исследований разработаны:

3. Нормативно-техническая документация на набор жидкого эритроцитарного диагностикума чумы плотоядных для определения гуморального иммунитета в РИГА (ТУ РК 00028493,105-95; временная инструкция но изготовлению контролю и временное наставление по применению набора жидкого цветного эритроцитарного диагностикума чумы плотоядных).

2. Рекомендации по пероральной иммунизации порск против чумы плотоядных. (Утверждены департаментом ветеринарии МСХиП РФ).

Экономячсская значимость полученных результатов. Разработанный набор жидкого эритроцнтарного диагностикума чумы плотоядных животных для определения гуморального иммунитета в РНГА повышает производительность труда ветеринарных специалистов и сокращает сроки исследований при снижении затрат труда и материалов в 7 раз. Экономический эффект РНГА для диагностики чумы плотоядных на один рубль затрат составил 7,8 рубля.

Псроральная иммунизация норок против чумы плотоядных позволяет в 6 раз повысить производительность труда ветеринарных специалистов и обслуживающего персонала и при этом снизить затраты труда и материалов на 45%. Экономическая эффективность перорзльной иммунизации норок против чумы плотоядных составляет 548,7 руб. на один рубль затрат.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- материалы по разработке эритроцнтарного диагностикума с антигеном ВЧН для выявления антител в РНГА, позволяющей выявлять в короткие срою! колостраль-ные, пэстоакщшалыклг н поепшфекццошше противочумные антитела у плотоядных животных;

- материалы по разработке метода пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных, показывающие его преимущество перед общепринятыми методами вакцинации зверей в условиях промышленного звероводства;

- результаты определения иммунологической перестройки организма порок при пероральной иммунизации против '¡умы плотоядных, показывающие

изменения в состоянии иммунной системы животных в ответ на пероральное введение вакцины,

- результаты производственной проверки методов определения противочумных антител с помощью РНГА и пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных, показывающие их высокую противоэпнзоогаческую и экономическую эффективность.

Личный вклад соискателя. Разработка набора жидкого эритроцнтарного диагностикума чумы плотоядных для определения гуморального иммунитета в РИГА и НТД па него проведена в соавторстве с академиком ААН РБ Н. А. Ковалевым, д.в.н. А. С. Шашекько, к.в.н. П. А. Красочко, м.н.с. М. М. Усеней.

Материалы по изучению лозы, сроков формирования и продоялштелытоста иммунитета, определению клинических, гематологических и биохимических показателей у перорально иммунизированных животных получены лично автором.

Работа по адаптации вакцинного штамма ВЧП "ЭПМ" к культуре клеток КЭ, разработке метода пероральпой иммунизации норок нротнв чумы плотоядных проведена совместно с д.в.н. А. С. Щашенько.

Иммуноморфологическне изменения в лимфатических узлах и внутренних органах перорально иммунизированных норок изучены совместно с д.в.н. А. С. Шашенько, зав. вирусологическим отделом Витебской облветлабораюрии И, В. Шадснко, зав. диагностическим отделом Смоленской облветлаборатории Г. Л. Белоусовой.

Апробация результатов днсссртацин. Результаты исследований доложены и обсуждены:

1. На Ученом Совете Смоленской научно - исследовательской ветеринарной станции (1994, Смоленск).

2. На международной научно - практической конференции (1995, Смоленск),

3. На Еетбиофармкомиссии МСХ РБ (1995, Минск)

4. На производственном совещании ветеринарных специалистов АОЗТ "Гагаринекий зверонлемхоз"(1996, Татарии),

5. На заседании лаборатории острых вирусных инфекций Белорусского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелееско-го (¡996, Минск).

6. На международной научно - практической конференции (! 996, Витебск).

Оиубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 3 научных работ, в которых изложены основные положения выполненных исследований.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах машинописи и включает: введение, общую характеристику работы, основную часть, выводы, список использованных источников. Работа иллюстрирована 18 таблицами, 15 рисунками, 20 страницами приложений. Список использованной литературы включает 224 источника, в том числе 113 иностранных авторов.

ОБЩАЯ МЕТОДИКА И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основная часть экспериментальной работы выполнена в 1994-1996 годах в лаборатории острых вирусных инфекций Белорусского научно - исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. С. Н, Вышелесского, в Смоленской, Витебской областных, и Гагаринской районной ветеринарных лабораториях.

Производственные испытания пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных проведены в АОЗТ " Гагаринский звероилемхоз " Смоленской области.

В опытах использовали клинически здоровых норок и тхорзофреток 2 - 6-ти месячного возраста, а также серебристо - черных лисиц, беспородных собак и кошек не содержащих антител к ВЧП.

Всего в лабораторно - производственных опытах использовано 880 норок и 40 тхорзофреток.

Для подтверждения диагноза па чуму плотоядных использовали метод обнаружения внутриклеточных включений в эпителиальных ¡слетках слизистой оболочки мочевого пузыря (В. П. Рютова, 1965).

Для заражения подопытных животных использовали вирулентный штамм ВЧП "Sneyder Hill", полученный из ВГТПСИ.

Пероральную иммутшзацию норок проводили с использованием вакцинного штамма чумы плотоядных "ЭПМ", адаптированным к культуре клеток КЭ, с добавлением стабилизатора.

Для приготовления культуры клеток использовали 10-11 дневные КЭ. Трипси-низацто проводили но общепринятым методикам.

Накопление ВЧП в культуре клеток КЭ происходило с явлением четко выраженного ци гопатогенного эффекта.

Парэнтералькую вакцинацию зверей проводили препаратом "Вакчум".

Титры специфических антител в сыворотке крови у вакцинированных зверей определяли в РН на культуре клеток КФ и РИГА по общепринятым методикам.

Клинические исследования включали в себя ежедневное наблюдите за подопытными животными (беспокойство, угнетение, аннстит, температура тела).

Местную реакцию организма па парэпгералыгое введение вакцины оценивали по характеру уплот нений и инфильтратов, их болезненности и припухлости в точках инъекций препаратов.

Морфолотчесхиц состга крови издали путем определения количества гемоглобина, зригроштш, лейкоцитов и выведения лейкоцитарной формулы по общепринятым методикам (А, А. Кудрявцев, Л, А, Кудрявцева, 1974).

Содержание гемоглобина (ИЬ) в крови определяли с помощью гемоглобинометра Сади (ГС-3). Подсчет эритроцитов и лейкоцитов проводили в счетной камере Горяе-ва.

Дифференцированный подсчет лейкоцитов проводили в мазках крови, окрашенных по Палпенгейму.

Общий белок в сыворотке крови подопытных животных определяли рефрактометрическим методом (рефрактометр РДУ), белковых фракций - нефелометрнческим методом с помощью фотоэлектрокалориметра КФК-3.

Кровь для исследований брали путем надреза мякиша пальцев утром до кормления животных.

Материал для морфологических исследований (лимфатические узлы, селезенка, печень, легкие, сердце) фиксировали в 10% -ном растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. Гистологические срезы изготавливали на замораживающем микротоме и с парафиновых блоков, окрашивали гематоксилин - эозином, поВап-Гизо-ну, РНК - но .методу Браше. Для цитологических исследований из лимфатических узлов готовили мазки - отпечатки, фиксировали их в метиловом спирте и окрашивали по Браше.

Для расчета экономической эффективности результатов исследования использовали "Методику определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", утвержденную Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 4 мая 1982 года.

Цифровой материал опытов подвергали статистической обработке по Б. А. До-спсхову (1968) с использованием таблиц Стмодента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Разработка способа изготовления эритрошгтаряого диашоетякума для выявления антител к ВЧП в РИГА.

При разработке жидкого эритроцитарного диагностикума с антигеном ВЧП за основу был взят метод J. Jandl, R, Simmons (1957) в модификации В, М. Жавненко (198S).

Исследования были направлены на отработку различных режимов стабилизации, танизации и сенсибилизации эритроцитов крупного рогатого скота.

Первоначально была изучена способность эритроцитов различных видов млекопитающих и птиц агглютинироваться нормальными сыворотками крови и проверена их сорбционная способность в отношении ВЧП,

Эритроциты крупного рогатого скота в меньшей степени штлютнировались нормальными сыворотками и при этом обладали максимальной сорбциошюй способностью в отношении вируса чумы плотоядных.

При отработке оптимальных параметров стабилизации эритроцитов крупного рогатого скога проверены различные концентрации акролеина, эритроцитов, температура и время стабилизации, сроки хранения стабилизированных эритроцитов. При отработке параметров типизации испытаны различные концентрации танина, время и оптимальная температура танизации.

Изучение процесса сенсибилизации позволило выяснить активность различных штаммов ВЧП при изготовлении диагностикума, концентрацию вируса, эритроцитов, оптимальное количество хлорида хрома, его концентрацию, время сенсибилизации, способность различных красок повышать когшогирующую способность хлорида хрома, их концентрацию и обьем.

Отработка параметров изготовления эритроцитарного диагностикума с антиг еном ВЧП показала, что стабилизация эритроцитов осуществляется в 5 - 10 %-ной концентрации 0,2 - 0,5%-ным раствором акролеина при 37 °С в течение 60 - 75 минут.

Для повышения сорбциошюй способности эритроцитов и скорости оседания та-низацию необходимо проводить в растворе танина 1 : 20000 - 1 ; 50000 при температуре 37 °С в течение 45 - 90 минут.

При отработке режимов сенсибилизации было установлено, что более активным был днагностикум, для изготовления которого были использованы стабилизированные эритроциты крупного рогатого скота и вакцинный штамм ВЧП "ЭГПУГ с титром 4,5 -

5,0 1цТЦД 50/ки.

Повышению чувствительности диагностикума и его стабильности способствовало использование в процессе сенсибилизации коньюгирующих веществ, вызывкшшх

.гучшее соединение глгяггга со стромой зрн фоцитов. Установлено, что 0,1 - 0,2^-о-иый раствор хлорида хром г. с 1 - 2 - мя обьемами раствора тринанового синего в разведении ! : 500 повышает чуюттельность диагностического препарата в 2 - 4 раза.

В целом, при изготовлении зритроцитарного диагаоетикума с антигеном вируса чумы плотоядных наиболее оптимальной оказалась методика, согласно которой компонент!.! соединяли в следующих пропорциях'

-1-1,5 обьема 50 - 60%-ной взвести стабилизированных 0,2 - 0,5%-ным раствором акролеина при 37°С в течение 60 - 75 минут, и ганизировапных раствором тзшша 1 • 20000 - I : 50000 в течеипе 45 - 90 минут при 37°С эритроцитов крупного рогатого скота;

- 1 обьем антигена вируса чумы плотоядных штамм "ЭПМ" с активностью 4,0 -4,5 18ТВД.«„п;

-1 - 2 обьема раствора тринанового синего в разведении 1 : 500;

- 1 - 2 обьема изотонического раствора натрия хлорида;

- 4,5 - 6,5 обьемов 0,1 - 0,2%-ного раствора хлорида хрома.

Компоненты перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 5 - 6 минут, реакцию останавливают 0.02М фосфатным буферным раствором и после центрифугирования при 3000 об/мин. еще двукратно отмывают этим же буфером.

Полученный эритроцитарный диагностикум ресуспендируют в консерванте (растворителе) и хранят при ч2+4 °С в условиях холодильника в течение 1 года.

Разработка метода яероралышй иммунизации норок против чумы плотоядных.

Первоначальные исследования при разработке метода пероральной иммунизации норок были посвящены изучению возможности репродукции вакцинного штамма чумы плотоядных "ЭПМ" на культуре клеток КЭ. С этой целью проведено 20 пассажей ВЧП при температуре 37,0 ± 0,5 °С до получения его инфекционной активности (титра) 4,5-5,01ёТЦДЖмл.

Полученный штамм не отличался по антигенным свойствам от исходного и не у ступал ему по иммутенности. Штамм безвреден и арсактогекен для тхорзофреток, норок, серебристо - черных лисиц, кошек, собак.

Для изучения дозы, сроков формирования и продолжительности иммунитета при пегюралыюй иммунизации порок протта чумы плотоядных проведено три серии опытов.

-10В первой серии опытов пероралыю иммунизировали 50 - 60 -ти дневных щенков норок вакцинным штаммом "ЭПМ" с титром вируса J0 5 ТЦД в дозе 1,0 (10000 ТЦД); 1,5 (15000); 2,0 (20000 ТТЩ); и 4,0 (40000 ТЦД) мл и парэкгералыю преиаратом "Вакчум" согласно наставления.

Серокопверсия отмечена во всех опытных группах. Величина титров анти тел, в определенных пределах, зависела от дозы вакцина. Максимальные титры антител к ВЧП выявлены в сыворотке крови зверей, вакцинированных пероралъно в дозе 2,0 (20000 ТЦД) и 4,0 (40000 П (Д) мл. Через 30 и 150 дней после вакцинации титры антител у зверей этих групп составили в РИГА 8,0 - 8,2 и 4,2 - 5,2, в РН 5,2 и 2,8 logi соответственно. Титры антител у них существенно не отличались от показателей у зверей, вакцинированных внутримышечно согласно наставления.

Во второй серии опытов сроки формирования и продолжительность противочумного иммунитета при использовании различных доз пероральной иммунизации изучили на тхорзофретках.

Как показали опыты, тхорзофретки, иммунизированные пероралыю в дозе 2,0 мл (20000 ТЦД) и 4,0 мл (40000 ТЦД), оказались устойчивы к заражению вирулентным штаммом ВЧП "Sneyder Hill" в дозе 1000 ЛД через 21 день и спустя 5 месяцев после вакцинации.

В группе тхорзофреток, иммунизированных в дозе 1,0 мл (10000 ТЦД) в результате экспериментального заражения через 5 месяцев после вакцинации заболели и пали от чумы плотоядных 2 головы. В группе зверей, иммуннзировашшх в дозе 1,5 мл (15000 ТЦД) после заражения в этот срок переболела с клиникой чумы плотоядных одна тхорзофретка.

В третьей серии опытов напряженность противочумного иммунитета изучали на щенках норок, пероралыю и парэнтерально иммунизированных против чумы плотоядных.

Пероральная вакцинация щенков норок в дозе 2,0 мл (20000 ТЦД) также оказалась эффективной и обеспечивала их устойчивость к экспериментальному заражению вирулентным штаммом ВЧП через 21 и 150 дней после вакцинация.

Не вакцинированные тхорзофретки и норки заболевали и погибали с клиникой характерной для чумы плотоядных.

Наиболее высокий титры вируснейтрализующих антител в сыворотке крови пероралыю вакцинированных зверей в РИГА (8,8 log2) и РН (5,6 !og2) выявлялись на 30

день после вакцинации, при внутримышечном введении на 15 день. В дальнейшем содержание атитсл в сыворотке крови порок «искалось независимо от метода иммунизации.

Специфические антитела к ВЧП у норок перорально иммунизированных против чумы плотоядных в дозе 2,0 мл (20000 ТЦЦ) перед заражением в РНТ'Л и РН через 150 дней вакцинации составили 4,2 и 2,8 1о& соответственно.

При исследовании сывороток крови щенков от перорально иммунизированных норок установлено, что новорожденный молодняк приобретает от матерей молозивпые противочумные антитела. Титры анги гел в сыворотках крови щенков з возрасте 30, 45, 60 дней составили 5,6 - 5,8; 3,2 - 3,6; 1,6 - 1,8 к^вРНГА и 2,4 - 2,8; 1,6 - 1,8; 0,6 - 0,8 1о§2вРН.

Характер иммуноморфолопгческих изменений у порок при энтералъном и внутримышечном методах вакцинации качественно одинаков. Однако, у вакцинированных перорально норок пролиферация антителообразующих клеток начинается позже, чем у вакцинированных внутримышечно. Так, при пероральной иммунизации уровень анти тел был наивысшим на 15 - 30-й, плазмоцитарная реакция достигала своего пика на 15-й день после введения вакцины. При парентеральной иммунизации совпадение наибольшого количества плазматических клеток и титра антител отмечали на 10-й день после вакцинации.

Содержание общего количества лейкоцитов у перорально иммунизированных зверей снижалось через 14-21 день с 8,5 до 7,4 тыс/мкл, при этом наблюдалось достоверное снижение сегментоядерных нейтрофилов с 39,0 до 30,4%. Содержание палочко-ядерных нейтрофилов увеличивалось с 1,0 до 2,9%, лимфоцитов с 57,6 до 64,6%.

Данные по изучению белковой картины кропи у перорально имуннзированных зверей характеризовались увеличением содержания общего белка с 7,17 до 7,56 г% и гамма-гдобулиновой фракци с 12,4 до 13,2%, при одновременном уменьшении содержания альбуминов с 58,7 до 57,8%, на 14-21 день после вакцинации,

У парэнтерально иммунизированных норок аналогичные гематологические, морфологические и биохимические изменения были более выражены и наблюдались г, ранние сроки после вакцинации.

ТТрогаводсгвешше испытания показали высокую протпвозпизоошческую эффективность метода пероральной пероральной иммунизации порок против чумы плотоядных.

У вакцинированных зверей в течение 5 месяцев (срок наблюдения) не отмечено клинических признаков чумы плотоядных.

Предлагаемые методы определения гуморального противочумного иммунитета в РИГА и псроральной иммунизации порох против чумы плотоядных показал!! не только га высокую диагностическую и иммунологическую, но и экономическую эффективность.

ВЫВОДЫ

1. Сенсибилизация стаблилизированных акролеином, танизироваипых эритроцитов крупного рогатого скота антигенов вирукса чумы плотоядных "ЭПМ" с помощью коньюгирующих веществ хлорида хрома с трипановым синим позволяет получить стабильный, чувствительный и высокоэффективный эритроцигарный диагностики, сохраняющий свою активность в течение 12 месяцев. В РИГА с указанным диагностику-мом проводится ретроспективная диагностика и контролируется состояние поствакцн-иального противочумного имунитега.

2. Проведена адаптация вакцинного ВЧП "ЭПМ1' к культуре клеток КЭ, который использован для разработки метода пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных.

Адаптированный штамм в реакции нейтрализации не отличается по антигенным свойствам от исходного, ареактогенен и иммуногенен для норок и тхорзофреток.

3. Пероральная иммунизаация норок прошв чумы плотоядных вакцинным штаммом "ЭПМ" с титром вируса 10 5 ТЦЦ 51-,Ди в дозе 2,0 (20000 ТЦД) мл с добавлением стабилизатора (пектин) создает напряженный иммунитет у вакцинированных зверей продолжительностью не менее 5 месяцев (срок наблюдения).

4. Новорожденные щенки норок от перорально иммунизированных матерей с молозивом приобретают противочумные антитела, которые обеспечивают напряженный иммунитет до 45-дневного возраста.

5. Пероральная иммунизация корок против чумы плотоядных сопровождается выработкой специфических антител и пролиферацией клеток лимфоидно - плазмоци-тарного ряда. Уровень антител наиболее выражен и плазмоцитарная реакция достигают своего пика соответственно па 15 - 30 и 1.5-й день после вакцинации. При парэнте-ралыюй вакцинации эти показатели достигают максимального значения через 10 дней.

-136. У нерок, нероргдыю иммунизированных против чумы плотоядных, ке отмечено существенных изменений в клиническом состоянии, количественном содержании гемоглобина, эритроцитов периферической крови.

Изменения в лейкоцитарной формуле характеризуются уменьшением сетмспто-ядерпых и увеличением налочкоааерных пейтрофилов и лимфоцитов.

В сыворотке крови отмечается увеличение общего белка за счет гамма глобули-новой фракции на фоне уменьшения альбуминов.

7. Производственные испытания реакции непрямой темагглютинации с разработанным эритроцитарным диагностакумом для определения протнвочумгкп о иммунитета и нероральной иммунизации норок против чумы плотоядных показали их высокую иммунологическую и прошвоэпизоотическую эффективность.

8. Применение набора эритроцитарного диагностикума для определения гуморального иммунитета и нероральная иммунизация норок против чумы плотоядных позволяет в 4 - 6 раз повысить производительность труда ветеринарных специалистов и на 45 - 50% уменьшить затраты труда и материалов в сравнении с существующими методами.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

1. "Временная инструкция по изготовлению и контролю набора жидкого цветного эритроцитарного диагностикума чумы плотоядных для реакции непрямой ге-мап'лютинации (РНГЛ'Г, утверждено БелНИИЭВ им. С.Н. Вышелесского 7.07,95г.

2. "Временное наставление по применению набора жидкого цветного эритроцитарного диагностикума чумы плотоядных для реакции непрямой гемагглютмнации (РИГА)", утверждено ГУВ МСХиПРБ 6.03.96г.

3." ТУ РБ 00028493.105-95 Набор жидкого эритроцитарного диагностикума чумы плотоядных животных для определения гуморального иммунитета в реакции непрямой гемаплтотинации (РИГА)", утверждено ГУВ МСХиП РБ 6.03.96г.

4. "Рекомендации по пероральпой иммунизации норок против чумы плотоядных в порядке широкого производственного опыта", утверждены Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 22. ¡1.96г. № 13 - 4 - 22/19.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кашко Л. С., Шашег.ько А. С., Шаденко И. В. Пероральная иммунизация порок прошв чумы плотоядных // Пути интенсификации производства продуктов жиаот-новодства в условиях Нечерноземья Российской Федерации. Тез. докл. научи, конф. -Смоленск, 1995,-С. 141.

2. Диагностическая эффективность РНГА для определения поствакципального и постинфекнионного иммунитета при чуме плотоядных /Л. С. Кашко, А. С. Шашенько,

__________II, А. Ковалев, П, Л..Красочно, И. В. Шаденко. В, М. Лемеш //Актуальные проблемы

ветеринарной медицины. Тез. докл. паучп. конф, Смоленск, 1996.-С.35 -36.

3. Динамика белка и белковых фракций у норок, пероральш иммунизированных против чумы плотоядных / Л. С. Кашко, А. С. Шашенько, В. В, Косыгина, В. Б. Резников, А, Н. Говрашков // Актуальные проблемы ветеринарной медицины Тез. докл. научи, конф. Смоленск, 1996,- С.ЗЗ - 34,

4. Иммуноморфологическая реакция у норок при пероральной иммунизации против чумы плотоядных /Л. С. Кашко, А. С. Шашенько, И, В, Шаденко, М. М. Усеня //Ветеринария, М,- 1996,- №5,- С.ЗО - 31.

5. Кашко Л.С. Морфологические изменения периферической крови у норок при пероральной иммунизации против чумы плотоядных // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Тез, докл. паучп. конф. Смоленск, 1996.-С. 30 - 32,

6. НТД на набор жидкого эритроцитарного диагностикума чумы плотоядных животных для определения гуморального иммунитета в реакции непрямой гемагглю-ганации (РИГА)" (временная инструкция по изготовлению и контролю; временное наставление по применению; ТУ РБ 00028493.105-95.)./11. А. Ковалев, А. С. Шашенько, II А. Красочко, М. М. Усеня, Л. С. Кашко.

7. Рекомендации по пероральной имунизации норок против чумы плотоядных /Л. С. Кашко, А. С, Шашенько, Н, А. Ковалев, П. А. Красочко.

8. Кашко Л. С., Шашенько А. С., Ковалев Н. А. Передача колостральных противочумных антител от перорально иммунизированных самок молодняку но-рок'/Ветерищрные и зооипженерные проблемы животноводства. Матер, научн. конф. Витебск, 1996.-С. 109.

V } 3 ю л! Э

Каш ко Лгешд Сциианавг!

Рзтраснектыуная дыягностыка I пераралыш! ¡.чушзацыя норак сунраць чумы драисжных.

Юпочавыя слови: в<рус чумы драпежпых, хвароба, дыяпюешка, ¡муштэт, прышэпка, нераральиая 1'мутзацыя, прафшэктыка, рэашыя непрамой гемаглютынацъи, настаулеппс, шструкцыя.

Аб' сктам даследавання У яуляюапа порю, а мэтай - расрацоука спосабау рзтр-спектыунай дыяптостыю 1 пераральнай ¡мушзащн норак супрапь чумы драпежпых. Рэзлшш.м пастауленных задач ажыццяулялась шляхам экспериментальных даслед-ванняу на тхорзафрзтках, норках, лкдпах 1 кошках.

Выгворчыя доследы прааедзены на 600 галавах норак стандартней афарбоукт

Даследваняя нраводзш на нарэнтэральна 1 пераральна 1мутнз1'раванных супрапь чумы драпежпых жывелах з вызначэннем штрау спецыф1чных спрацьчумных антыцел у РН1 РНГА, клннчных, гематалапчных, б1яхлм1чных 1 марфалапчных змяпенпяу.

Навуковая навша даследванняу заключавши у тым, што распрацован эрытрацы-тарны дыягпостыкум чумы драпежпых для вызпачэиня гумаральнага муттэта с дапа-могай рзакцьп непрамой гемаглютынацьн. Вакцынны штам чумы драпежпых "ЭПМ" адаптыраван да культуры клетак курыных эмбрыенау. Упершышо распрацован спосаб пераральнай ¡мутнзапьп норак супрапь чумы драпежпых. Атрыманы дадзенныя аб ¡му-намзрфалапчных змяненнях у органах 1 тканях норак пры пераральнай ¿мушзацьп супрапь чумы драпежпых..

На аснове вышкау прыватных даследванняу раенрацаваны 1 рэкамепдаваны да прымянення: нарматыуна - тэхш'чная дакуметацыя па набор вадкага эрытрапытарнага дыягностыкума чумы драпежпых жывел для вызначэння гумаральнага ¡муттзга у рэак-цьн непрамой гемаглютьшацьн (часовая шструкцыя па вырабленню 1 кантролю, часовае настауленне па прымяненню набора вадкага цвяптога эрытрапытарнага дыягностыкума, ТУ РБ 00028493,105-95. Рэкамедацьп па перархтыий ¿мутзацьп норак супраць чумы драпежпых.

РЕЗЮМЕ

Кашгсо Леонид Степанович

Ретроспективная диагностика и пероральная иммунизации норок против чумы плотоядных.

Ключевые слова: вирус чумы плотоядных, болезнь, диагностика, иммунитет, вакцина, пероральная иммунизация, профилактика, реакция непрямой гемагглктша-ции, наставление, инструкция.

---------Обьсктом иеследоваши являются норки, а целью- разработка методов ретро-______

спективной диагностики и пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных. Реализация поставленных задач осуществлялась путем экспериментальных исследований на тхорзофретках, норках, лисицах, собаках и кошках.

Производственные испытания проведены на 600 головах норок стандартного окраса.

Исследования проводили на парэнтсрально и перорально иммунизированных против чумы плотоядных животных с определением титров специфических противочумных антител в реакциях нейтрализации и непрямой гемагппотинации, клинических, гематологических, биохимических и морфологических изменений.

Научная новизна исследований заключается в том, что разработан эритроцитар-ный диагностикум чумы плотоядных для определения гуморального иммунитета с помощью реакции непрямой гемагглкшшации. Вакцинный штамм чумы плотоядных "ЭПМ" адаптирован к культуре клеток куриных эмбрионов. Впервые разработан метод пероральной иммунизации порок против чумы плотоядных. Получены данные об им-муноморфологических изменениях в органах и тканях норок при пероральной иммунизации против чумы плотоядных.

11а основании результатов собственных исследований разработаны и рекомендованы к применению: нормативно - техническая документация на набор жидкого эри-троцитарного диагностикума чумы плотоядных животных для определения гуморального иммунитета в реакции непрямой гемап лютинацин ( временная инструкция по изготовлению и контролю; временное наставление но применению набора жидкого цветного эритроцигарного диагностикума; ТУ РБ 00028493.105 - 95.); рекомендации по пероральной иммунизации норок против чумы плотоядных.

S I. M M A {{ ¥

Kashfco Leonid St«paiiovitch

Retrospective diagnostics and oral vaccination of minks against Canine distemper.

Key words: Canine distemper virus , disease, diagnostics, immunity, vaccine, oral vaccination, preventive maintenance, indirect haemaggiutination test, manual, instruction,

The object of research is minks, and the purpose ist development of the methods of retrospective diagnostics and oral vaccination of minks against Canine distemper. The realization of delivered problems was carried out by experimental researches on tchorzofretkas, minks, foxes, dogs and cats. The industrial tests are conducted on 600 heads of minks.

The researches were conducted on the animals vaccinated intramuseulary and orally against Canine distemper with the determination of the titer of specific antibodies and clinical, haematological, biochemical and morphological changes in the tests of virus neutralization and indirect haemaggiutination.

The scientific novelty of researches means that erythrocyta! test of Canine distemper for determination of humoral immunity with the help of indirect haemaggiutination has been developed.

Modified live of a Canine distemper "3nM" has been adapted to the culture of chicken embrions crates. For the first time the method of oral vaccination of the mink against Canine distemper was developed. The data about immunomorphological changes in the bodies and fabrics of minks when vaccinating them orally against Canine distemper has been received.

According to the results of our own researches the following recommendations has been developed and given: scientific - engineering specifcations on the set ofaliquid erythro-cytal test of Canine distemper for the determination of humoral immunity with the help of indirect haemaggiutination test (a temporary instruction on manufacturing and control; a temporary manual on the application of the set of aliquid colour eiythrocytal test, TY PE 00028493.105 - 95.); the recommendations or. oral vaccination of minks against Canine distemper.