Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (Peck) Wollenweber, распространенного в зернофураже

ДИССЕРТАЦИЯ
Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (Peck) Wollenweber, распространенного в зернофураже - диссертация, тема по ветеринарии
АВТОРЕФЕРАТ
Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (Peck) Wollenweber, распространенного в зернофураже - тема автореферата по ветеринарии
Токарев, Сергей Викторович Москва 2009 г.
Ученая степень
кандидата ветеринарных наук
ВАК РФ
16.00.03
 
 

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (Peck) Wollenweber, распространенного в зернофураже

На правах рукописи

ТОКАРЕВ СЕРГЕЙ ВИКТОРОВИЧ

ОСОБЕННОСТИ ТОКСИНООБРАЗОВАНИЯ У ГРИБА FUSARIUM РОЛЕ (PECK) WOLLENWEBER, РАСПРОСТРАНЕННОГО В ЗЕРНОФУРАЖЕ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

003467942

Москва-2009

003467942

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии).

Научный руководитель: доктор биологических наук

Кононенко Галина Пантелеевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Долгов Виктор Андреевич (ГНУ ВНИИВСГЭ)

кандидат биологических наук Гулюшин Сергей Юрьевич (ГНУ ВНИТИП)

Ведущая организация: Федеральное государственное учреждение Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации

лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ)

*

Защита диссертации состоится « » Л4а Я 2009 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 006.008.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии)

Автореферат разослан « -/¿Э» сгя/'е**? 2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Павлова Н.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из важнейших условий успешного развития животноводства является обеспеченность хозяйств зерновыми кормами высокого санитарного качества. Загрязненность зернофуража токсинами, которые образуют грибы рода Fusarium, приводит к значительному экономическому ущербу, поскольку в последние годы поражение злаковых культур фузариозом отмечается в нашей стране практически повсеместно. В отдельные периоды, особенно в условиях повышенной влажности и температуры, заболевание способно приобретать характер эпифитотий. В разных эколого-географических зонах отмечено формирование специфической по составу фузариозной инфекции зерна, в которой, как правило, среди доминирующих патогенов встречается гриб F.poae (Peck) Wollenweber (Шипилова, 1994; Левитин и др., 1998; Иващенко и др., 2004; Малиновская и др., 2004).

Этот вид, обладающий экологической пластичностью, признаками резкой изменчивости и сложным биологическим статусом, в последние годы привлекает все большее внимание микотоксикологов. Его присутствие в зерне связывают с такими масштабными и эндемическими интоксикациями человека и животных как острый геморрагический синдром, алиментарно-токсическая алейкия, болезнь Кашина-Бека и др. (Joffe, 1978; Weidenborner, 2001). Зарубежные исследователи неоднократно высказывали предположение о том, что токсигенность F.poae связана с активным биосинтезом метаболитов трихотеценового ряда - диацетоксисцирпенола и ниваленола, которые являются близкими структурными аналогами таких широко известных фузариотоксинов как Т-2 токсин и 4-дезоксиниваленол (Marasas, 1991). Тем не менее, подробный анализ мировых данных литературы показывает, что сведения относительно токсигенного потенциала F.poae остаются весьма противоречивыми, а свойства природных популяций этого вида практически не исследованы.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилось изучение потенциала токсинообразования у гриба F.poae из состава микобиоты зерна колосовых культур фуражного назначения, а также у сопутствующих ему возбудителей фузариоза, с учетом разнообразия условий их обитания.

Для достижения этой цели были определены следующие задачи:

- оценить токсигенный потенциал региональных популяций F.poae в отношении группы токсинов трихотеценового ряда и зеараленона;

- изучить степень изменчивости токсинообразующих свойств F.poae в экспериментах, моделирующих разные условия его развития;

определить способность к биосинтезу высокотоксичных трихотеценов у других видов Fusarium, встречающихся в зерне;

- получить и охарактеризовать биологические и биохимические реагенты для иммуноферментного анализа диацетоксисцирпенола;

- разработать экспресс-метод индикации диацетоксисцирпенола в культурах грибов Fusarium и составить методические рекомендации для оценки степени токсигенности у санитарно-показательных видов.

Научная новизна работы состоит в следующем:

- впервые установлены основные факторы, степень и характер изменчивости токсигенных свойств региональных популяций гриба F.poae, участвующих в инфицировании возделываемого в России фуражного зерна;

- выявлен новый факт значительного варьирования признака биосинтеза ниваленолау морфологически однородного вида F.poae;

- впервые показано, что среди видов, часто встречающихся в фузариозном зерне, наибольшим потенциалом накопления диацетоксисцирпенола обладают F.poae и F.sporotrichioides\

- впервые в стране получены аналитические иммунореагенты для избирательного определения диацетоксисцирпенола и предложен новый высокочувствительный и экспрессный метод поиска продуцентов этого токсина среди санитарно-показательных видов Fusarium',

Практическая значимость работы.

Сведения об особенностях токсинообразования региональных популяций основных возбудителей фузариоза колоса, полученные в рамках данной работы, могут быть использованы для совершенствования приемов прогнозирования загрязненности микотоксинами зерна, возделываемого в нашей стране. Высокий токсигенный потенциал, установленный для отдельных популяций F.poae, указывает на необходимость контроля степени инфицирования зерна этим грибом при санитарно-микологической оценке качества зернофуража.

Разработанные «Методические рекомендации по определению диацетоксисцирпенола в культурах санитарно-показательных грибов рода Fusarium», утвержденные Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии в 2007 г., предназначены для микотоксикологической оценки грибов Fusarium и могут быть использованы как в научных исследованиях, так и в практических ветеринарных лабораториях для диагностики и профилактики фузариотоксикозов животных.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены: на I съезде ветеринарных фармакологов (Воронеж, 2007), на заседаниях ученого совета ВНИИВСГЭ (2007, 2008 гг.), на межлабораторном совещании научных сотрудников ВНИИВСГЭ (декабрь 2008 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объём работы и структура диссертации. Работа изложена на 103 страницах машинописного текста, содержит 26 таблиц и 8 рисунков. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования с обсуждением результатов, выводы, практические предложения, список литературы, включающий 180 источников (отечественных авторов - 30 и зарубежных - 150), список сокращений и приложение.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы исследований.

Диссертационная работа выполнена в период с 2005 по 2008 гг. в лаборатории микотоксикологии ВНИИВСГЭ.

Объектом исследований были природные штаммы грибов рода Fusarium, принадлежащие исследовательской коллекции культур лаборатории микотоксикологии ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (г. Москва), выделенные из зерна пшеницы, ячменя, овса и ржи фуражного назначения на разных территориях в 1991-2005 гг. Видовая идентификация культур выполнена ведущим научным сотрудником, кандидатом биологических наук Л.С.Малиновской и старшим научным сотрудником, кандидатом биологических наук Е.А.Пирязевой, в соответствии с таксономической системой Буса (Booth, 1971).

Среди изученных штаммов F.poae было представлено 9 популяций из разных регионов возделывания зерна - Центрального (40 штаммов), Центрально-Чернозёмного (107), Волго-Вятского (43), Поволжского (26), Северо-Кавказского (9), Уральского (115), Западно-Сибирского (100), Восточно-Сибирского (75), Дальневосточного (212). В работе также использовали 14 моноконидиальных культур F.poae из коллекции Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений, любезно предоставленные ведущим научным сотрудником лаборатории микологии и фитопатологии им. А,А.Ячевского, кандидатом биологических наук Т.Ю. Гагкаевой.

Оценку видовых особенностей токсинообразования проводили на 319 природных штаммах грибов Fusarium разного географического происхождения - F.poae - 46, F.sporotrichioides Sherb. - 45, F.acuminatum Ell. et Ev. - 48, F.avenaceum Corda ex Fr. - 49, F.graminearum Scliw. - 46, F.equiseti (Corda) Sacc. - 38, F.tricinctum (Corda) Sacc. - 23, F. semitectum Berk, et Rav. -20 и F.sambucinum Fuckel - 4.

Культивирование грибов проводили в лабораторных условиях на зерновом субстрате (зерно риса) стационарно в темноте в следующих режимах: I - 29°С, 4 нед; II - 22°С, 4 нед; III - 25°, 2 нед + 8°С, 2 нед; IV - 8°С, 16 нед., а также на агаризованных питательных средах в течение 7-10 суток. Экстракты образцов мицелиалыю-споровой биомассы смесью ацетонитрил-вода в объемном соотношении (6:1) далее анализировали на содержание фузариотоксинов. Количественное определение ниваленола (НИВ) и фузаренона X (ФУЗ-Х) проводили методом инструментальной тонкослойной хроматографии (ТСХ) - флуориметрии с использованием сканирующего денситометра «CAMAG TLC II» (Швейцария). Хроматографический анализ выполняли на пластинках силуфол (ЧСФР) в подвижных фазах хлороформ-метанол (6:1) и толуол-этилацетат-муравьиная кислота (5:4:1).

Обнаружение дерматотоксичных трихотец-9-енов в экстрактах культур грибов проводили методом локальной аппликации на депилированной коже кролика с учетом минимально-действующей дерматотоксической дозы, равной 0,004 мкг (Леонов и др., 1990). Для количественного определения Т-2 токсина (Т-2) и зеараленона (ЗЕН) использовали метод непрямого конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА), изложенный в ГОСТ Р 52471-2005.

Анализ диацетоксисцирпенола (ДАС) выполняли с помощью специфичных поликлональных кроличьих антител и иммобилизованного белкового конъюгата ДАС, получение и испытание которых проведено в рамках данной работы. Статистическую обработку результатов выполняли в соответствии с общепринятыми методами (Дерффель, 1994).

2. Результаты исследований.

2.1 Разработка ИФА диацетоксисцирпенола.

Для детального изучения токсигенного потенциала грибов Fusarium, прежде всего, было необходимо разработать высокоспецифичный и чувствительный метод определения трихотец-9-ена ДА С, который по уровню токсического действия не уступает Т-2 токсину.

Для получения аналитических иммунореагентов после успешной химической модификации ДАС в гемисукцинат ДАС нами было проведено конъюгирование 5-, 10-, 25-, 50- и 80-кратных избытков гаптена с белками -бычьим сывороточным альбумином (БСА), яичным альбумином (ЯА), желатином (Жел) и глюкозоксидазой (ГО) через активированный эфир (а) и карбодиимидной конденсацией (к). Далее конъюгат БСА-гсДАС(а)-80 был использован в качестве иммуногена, а остальные конъюгаты - в качестве твердофазных антигенов (ТФ-АГ). В самом начале иммунизации кроликов конъюгатом гсДАС с БСА при втором взятии крови были получены сыворотки с высокими рабочими титрами, которые позволяли детектировать ДАС в концентрации 0,8 нг/мл (габл.1).

Таблица 1

Взаимодействие анти БСА-ДАС антител от второго взятия крови с твердофазными антигенами, гетерологичными по типу белкового носителя, методу синтеза или гаптенной нагрузке

ТФ-АГ Рабочий Процент связывания антител

тип с, мкг/мл титр концентрация раствора ДАС, нг/мл

100 20 4 0,8

БСА-ДАС(а)-5 0,05 1 10000 30 55 79 95

БСА-ДАС(а)-10 0,05 1 25000 56 75 92 96

ЯА-ДАС(а)-10 0,05 1 13000 37 69 89 97

Жел-ДАС(а)-5 0,05 1 1000 47 51 65 80

Жел-ДАС('а)-10 0,05 1 500 47 67 80 89

ГО-ДАС(а)-Ю 0,05 1 10000 27 62 90 100

Жел-ДАС(к)-10 0,15 1 1000 23 46 72 88

Жел-ДАС(к)-25 0,15 1 16000 16 43 77 98

Жел-ДАС(к)-50 0,15 1 25000 32 66 87 95

Антитела, полученные по завершении всего цикла иммунизации, показали высокую специфичность узнавания ДАС, перекрестная реактивность к его ближайшим структурным аналогам - неосоланиолу и Т-2 токсину - составила всего 0,01%, а с остальными метаболитами, взятыми для сравнения, даже в концентрации 10 мкг/мл какого-либо взаимодействия обнаружить не удалось (табл. 2).

Таблица 2

Результаты оценки перекрестной реактивности анти БСА-ДАС антител в отношении структурно-близких трихотец-9-енов

Трихотецен Заместители ИКи, нг/мл Перекрестная реактивность, %

Я] Я2 Яз я,

диацетоксисцирпенол Н СОСНз СОСНз н 10 100

неосоланиол Н СОСИ, СОСН, он ю4 0,01

Т-2 токсин Н СОСИ, СОСН, ОСОСН,СН(СНз)2 10" 0,01

ацетил-Т-2 токсин СОСН, СОСНз СОСНз ОСОСН2СН(СНз>г >104 <0.01

НТ-2 Н Н СОСНз ОСОСН2СН(СНз)з >104 <0.01

Т-2 триол Н Н II ОСОСН2СН(СНз)2 »ю4

Т-2 тетраол Н н н он >>104

сцирпентриол Н н н н >>104 -

Наилучшие показатели конкурентного анализа ДАС были достигнуты при иммобилизации конъюгата Жел-ДАС(к)-25 (рис. 1). При рабочем титре антител 1:10000 и нанесении этого ТФ-АГ из раствора с концентрацией 0,15 мкг/мл ** оказалось возможным обнаруживать ДАС в растворах до концентрации 0,0004 мкг/мл (^ с = - 3,4), при этом процент связывания антител соответствовал пороговому уровню 89-90%. При многократном повторении анализа для растворов, концентрации которых различались на порядок, - 0,1, 0,01 и 0,001 мкг/мл (^ с = -1, -2 и -3), были получены результаты 14±2%, 54±3% и 84±2%, соответственно. Для раствора с концентрацией 0,02 мкг/мл (1§ с = - 2,7) показатель процента связывания антител 77±2% находился на участке плавной линии, соединяющей эти значения для концентраций 0,1 и 0,01 мкг/мл (рис. 1).

Поскольку нижняя граница обнаружения ДАС на силикагеле при обработке пластинок реактивом Такитани составляла 400 мкг/мл, то в оптимизированных условиях ИФА чувствительность определения ДАС в

экстрактах культур грибов (4 нг/мл) была в 105 раз выше, чем при использовании ТСХ.

100 -"!

¡3 80 S

60 ■-

40

20

-4

-l

lg с (м кг/мл)

Рис.1. Калибровочный график ИФА ДАС. По оси ординат - % связывания антител, указаны пределы отклонения от средних значений при доверительной вероятности 0,95 (±2S, и=10).

Возможность влияния сопутствующих веществ, извлекаемых при экстракции водным ацетонитрилом, на результаты анализа была изучена в экспериментах с двумя моноконидиальными культурами F.poae (№№ Р12, Р14), не способными к биосинтезу этого токсина. При поверхностном культивировании на агаризованных питательных средах и на зерне измеряемый аналитический показатель (% связывания антител) находился выше значения 95±2%. Это свидетельствовало об отсутствии нежелательных фоновых эффектов и о возможности избирательного определения ДАС в нативных экстрактах мицелиально-споровых культур грибов без дополнительной очистки от примесей.

Результаты последующих экспериментов с другими моноконидиальными культурами F.poae показали, что в условиях

краткосрочного 1-нед. культивирования наибольшая интенсивность биосинтеза ДАС наблюдается на сусловом агаре (табл. 3).

Таблица 3

Количество ДАС (нг/мл экстракта) у коллекционных культур Fusarium роае, выращенных на агаризованных средах

№ штамма Питательная среда (п=4)

агар Чапека-Докса картофслыю-декстрозный агар сусловый агар

PI 0 20±1 182±9

Р10 18±1 400±18 1216А63

Р13 0 7±1 56±3

Р21 0 76±5 158-Ь9

Р22 0 158±10 490131

Как следует из данных, представленных в табл. 4, при выращивании культур на зерне их реакция на смену температурного режима была различной - при понижении температуры во второй половине инкубации интенсивность токсинобразования либо в разной степени снижалась, либо возрастала. Это свидетельствует о том, что для исчерпывающей оценки потенциала грибов в этих условиях целесообразно использовать варьирование сроков и температурного режима выращивания.

Таблица 4

Количество ДАС (нг/мл экстракта) у коллекционных культур Fusarium роае, выращенных на зерновом субстрате

№ штамма Рис (п = 2)

23 °С, 4 нед. 23°С, 2 пед. +8°С, 2 нед.

PI 126±9 71±9

Р13 445±29 125±7

Р16 1000±68 79±8

Р20 | 645±34 1120±56

Р21 158±10 ' 407±33

Р23 100±14 331±23

Р28 724±42 288±19

Выбранный нами прием стационарной экстракции (ацетонитрил-вода, 14 ч) по длительности совпадал с подготовительной процедурой нанесения ТФ-АГ на поверхность ячеек планшета, поэтому для получения аналитического результата по подготовленному образцу биоматериала были

необходимы те же затраты времени, что и для ИФА (3,5 - 4 ч). Разработка высокочувствительного, специфичного, быстрого и простого в исполнении ИФА метода определения ДАС позволила приступить к выполнению следующей задачи исследования - оценке потенциала токсинообразования у природных популяций гриба Р.роае.

2.2 Токсигенный потенциал региональных популяций Р.роае.

В экспериментах по выращиванию культур Р.роае на зерновом субстрате 79,8% штаммов показали способность образовывать ДАС. Общий диапазон уровней накопления токсина составил 0,02 - 76 мг/мг. Количества более 10 мг/кг были свойственны только 4,2% продуцентов, у остальных диапазоны 0,01-0,1 мг/кг и 1-100 мг/кг реализовывалисъ с примерно равной частотой 23,5% и 21,8%, а уровни накопления от 0,1 до 1 мг/кг - в 34,5% случаев (рис. 2).

ДАС, мг/кг

10-100 1-10 0,1-1

0,03-0,1 <0,01

18,5%

23,5%

20,2%

1 34'5%

Рис. 2. Распределение штаммов Р.роае по уровням накопления ДАС

Для совокупностей штаммов, выделенных из зерна на географически удаленных территориях Северо-Кавказского, Уральского, ЗападноСибирского и Дальневосточного регионов страны как по числу продуцентов ДАС, так и по интенсивности их токсинообразования, существенных различий не было выявлено (табл. 5).

Таблица 5

Потенциал образования ДАС у региональных популяций К роае из зерна колосовых культур

Продуценты/ штаммы в том числе по диапазонам токсинообразования

граница диапазона, мг/кг субстрата число продуцентов, шт. количество токсина, мг/кг субстрата (медиана)

Северо-Кавказский регион

0,01-0,1 1 0,09

9/9 0,1-1 1 0,16

1-10 4 0,3-7,4

10-100 3 11; 20; 25

Уральский регион

0,01-0,1 8 0,03-0,1

26/39 0,1-1 14 0,12-1.0

1-10 4 2,5-6,3

10-100 - -

Западно-Сибирский регион

0,01-0.1 2 0,02; 0,03

8/12 0,1-1 4 0,2-1,0

1-10 2 1,3; 1,8

10-100 - -

Дальневосточный рег ион

0,01-0,1 17 0,02-0,1

52/59 0,1-1 22 0,13-1,0

1-10 12 1,1-9,4

10-100 1 76

Потенциал Р.роае в отношении Т-2 был гораздо ниже. Почти половина исследованных штаммов могла продуцировать Т-2, но в крайне малых количествах от 0,002 до 0,9 мг/кг с преобладанием уровней содержания 0,010,1 мг/кг (рис. 3).

Т-2, мг/кг

0,1-1 0,01-0,1 0,001-0,01 > 0,001

......; 6.:

33,4%

6,8%

53,0%

Рис. 3. Распределение штаммов Р.роае по уровням накопления Т-2

Таким образом, в целом возможности Р.роае по накоплению в зерне высокотоксичных трихотец-9-енов имеют среднюю степень выраженности и обеспечены в большей мере ДАС, чем Т-2.

Среди штаммов гриба Р.роае, выделенных из зерна в Европейской части страны, доля продуцентов НИВ составляла 47,6% (табл. 5). У популяций с территорий Центрального, Волго-Вятского и Поволжского регионов характер распределения продуцентов по уровням накопления токсина имел черты сходства - преобладающими были количества НИВ от 10 до 100 мг/кг субстрата. В Центрально-Черноземном регионе половина положительных штаммов реализовывапа уровни накопления от 100 мг/кг и более (табл. 5).

Таблица 5

Потенциал образования НИВ у региональных популяций Р.роае в Европейской части России

Продуценты/ штаммы в том числе по диапазонам токсинообразования

граница диапазона, мг/кг субстрата число продуцентов, шт. количество токсина, мг/кг субстрата (медиана)

Северо-Кавказский регион

2/9 1-10 - -

10-100 2 15; 15(15)

100-1000 -

> 1000 -

Центральный регион

22/40 1-10 4 2-9 (3)

10-100 10 30-100 (76)

100-1000 8 104-909(130)

> 1000 - -

Центрально-Черноземный регион

41/107 1-10 3 2-7(3)

10-100 16 19-98(58)

100-1000 20 102-539(266)

>1000 2 1288;1940

Волго-Вятский регион

28/43 1-10 7 1-8 (7)

10-100 18 13-92(430)

100-1000 3 145; 222; 312

>1000 - -

Поволжский регион

14/26 1-10 5 1-10(5)

10-100 8 11-88(29)

100-1000 1 177

> 1000 - -

НИВ, мг/кг

>1000 . 1,0%

100-1000 " ~ I 14,2%

SÄE... „__I

10-100

24,0%

1-10

<1

] 52,4%

Рис. 4. Распределение штаммов Р.роае по уровням накопления НИВ

{Европейская часть России)

В целом для F.poae на Европейской территории страны характерна средняя степень выраженности интенсивности биосинтеза НИВ -большинство продуцентов (73 штамма из 107) накапливали НИВ в количествах не более 100 мг/кг (рис. 4). В популяциях гриба из зерна в Уральском и Западно-Сибирском регионах продуценты не были обнаружены, а в Восточно-Сибирском и Дальневосточном они встречались крайне редко. Таким образом, сообщества^ исследованных природных штаммов гриба F.poae в отношении биосинтеза НИВ оказались неоднородными, что было связано, главным образом, с их ареалом.

При варьировании экспериментальных условий (температуры и продолжительности роста) у природных штаммов F.poae не удалось выявить каких-либо отчетливых тенденций в смещении интенсивности накопления трихотеценов ДАС, Т-2 и НИВ. В стрессовом режиме продолжительного роста при низкой температуре даже у наиболее активных продуцентов не наблюдалось резкого возрастания интенсивности образования ДАС и Т-2 в зерновом субстрате. Таким образом, ранее высказанные предположения о решающей роли фактора снижения температуры для токсинообразования F.poae (Joffe, 1974) не получили подтверждения при нашем исследовании.

2.3 Видовые особенности биосинтеза трихотец-9-енов.

Результаты, полученные на выборке из 46 природных штаммов F.poae разного географического происхождения, показали, что ускоренный способ выращивания культур на сусловом агаре позволяет адекватно определять токсигенный потенциал гриба и при этом имеет явные преимущества перед продолжительным и затратным культивированием на зерновом субстрате. Так, доля продуцирующих ДАС штаммов составила 76,1% на сусловом агаре (табл. 6) и 79,8% на зерне риса по обобщенным данным многофакторных экспериментов. В этой связи для сравнительной оценки видовых особенностей токсинообразования у грибов Fusarium мы использовали экспериментальный прием, включающий поверхностное выращивание культур на агаре в течение 7 суток, жидкостную экстракцию и ИФА.

Таблица 6

Результаты сравнительной оценки токсинообразования F.poae и F.sporotrichioides

Диапазон концентраций Число продуцентов токсинов

токсинов, ДАС Т-2

нг/мл экстракта

Р.роае

4-20 6 1

20-100 10 4

100-1000 11 -

> 1000 8 -

Всего 35/46 5/46

F.sporotrichioides

4-20 16 -

20-100 13 3

100-1000 4 7

> 1000 1 18

> 10000 - 16

Всего 34/45 45/45

Среди трех видов Р.сыепасеит, Р.зрого^сИШскя и Р.аситтаШт, которые, как и Рроае, преобладают в составе микобиоты фузариозного зерна (Малиновская и др., 2004), способность продуцировать ДАС показали только представители ^.^рото/пс/г/о;^. Число продуцентов ДАС оказалось близким таковому для Р.роае и составило 75,6%, хотя уровни накопления

были несколько меньшими (табл. 6). Среди сопоставимых по объемам выборок культур F.avenaceum (49 штаммов) и F.acuminatum (48 штаммов) продуценты ДАС не были найдены.

У локально распространенного вида F.graminearum ни один из 46 штаммов не имел способности продуцировать ДАС и Т-2, что подтверждалось высокой чувствительностью использованных методов. Для F.equiseti при значительном числе продуцентов как ДАС, так и Т-2, степень их накопления была низкой. Для двух видов, отличающихся меньшей частотой и рассеянной встречаемостью в фузариозном зерне, - F.tricinctum и F.semitectum, токсинообразование оказалось еще менее выраженным.

Полученные данные свидетельствуют о том, что виды F.poae и F.sporotrichioides являются наиболее вероятными источниками контаминации фузариозного зерна ДАС.

Как показали наши исследования, методическая схема, которая включает поверхностное культивирование грибов Fusarium на питательных средах или на зерне, жидкостную экстракцию мицелиалыго-споровой биомассы и ИФА экстрактов на содержание ДАС, может быть использована специалистами научно-исследовательских и практических ветеринарных лабораторий, занимающихся оценкой санитарного качества кормов. В этой связи были разработаны «Методические рекомендации по определению диацетоксисцирпенола в культурах санитарно-показательных грибов рода Fusarium», которые после комиссионной апробации были утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 20.11.2007 г.

ВЫВОДЫ

1. Для оценки токсинообразования грибов рода Fusarium разработан высокоспецифичный, быстрый и простой в исполнении метод непрямого конкурентного ИФА, обеспечивающий определение ДАС с чувствительностью в 105 раз выше, чем при тонкослойной хроматографии.

2. Установлено, что гриб Г.роае, широко представленный в составе микобиоты фузариозного зерна, является политоксигенным и способен к биосинтезу трихотец-9-енов (ДАС, Т-2), трихотец-9-ен-8-онов (НИВ, ФУЗ-X) и ЗЕН.

3. Показано, что потенциал накопления ДАС у Г.роае имеет среднюю степень выраженности - при значительной доле продуцентов (79,8%) уровни накопления токсина не превышают 10 мг/кг; популяции гриба из географически удаленных районов не имеют различий в способности к накоплению ДАС.

4. По степени продуцирования Т-2 и ЗЕН все исследованные популяции Ероае являются однотипными - на территориях Европейской части страны, в Уральском и Западно-Сибирском регионах при значительной доле образующих пггаммов уровни накопления не превышают 1 мг/кг.

5. Установлено, что Г.роае имеет высокую степень неоднородности в отношении биосинтеза НИВ и ФУЗ-Х, связанную с его ареалом. Для продуцентов НИВ (47,6% от общего числа штаммов), выделенных из зерна в Европейской части страны, характерны уровни накопления токсина до 100 мг/кг субстрата, способность к образованию ФУЗ-Х обнаружили 6,9% штаммов; в Уральском и Западно-Сибирском регионах продуценты НИВ и ФУЗ-Х не найдены, а в Восточно-Сибирском и Дальневосточном регионах встречались крайне редко.

6. Метаболические реакции на понижение температуры и продолжительность культивирования на зерне у природных штаммов Е.роае являются индивидуальными и не приводят к единообразному смещению интенсивности накопления ДАС, Т-2 и НИВ.

7. Среди основных возбудителей фузариоза наибольшим потенциалом накопления ДАС обладают виды Ероае и Е.$рого1г1сЫо1(1е$, у Е.аситгпаШт и ЕедшзеИ продуцирующая способность является низкой и отсутствует у Е^гаттеапт.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для повышения эффективности санитарной оценки качества зернофуража, пораженного фузариозом, необходимо осуществлять контроль степени его инфицирования токсигенными штаммами F.poae, способными к продуцированию ДАС и НИВ.

Разработанные «Методические рекомендации по определению диацетоксисцирпенола в культурах санитарно-показательных грибов рода Fusarium», утвержденные Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 20.11.2007 г., могут быть использованы как в научных исследованиях, так и в практических ветеринарных лабораториях для диагностики и профилактики фузариотоксикозов животных.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Токарев C.B. Микотоксикологическая оценка фузариозного зерна в Уральском регионе» // Кормопроизводство. - 2008. - №12. - С. 27-28.

2. Токарев C.B., Соболева H.A. Токсигенный потенциал Fusarium роае из зерна в Европейской части России // Материалы I съезда ветеринарных фармакологов России, Воронеж. - 2007. - С. 586-590.

3. Буркин A.A., Кононенко Г.П., Токарев C.B. Иммуноферментный анализ диацетоксисцирпенола в токсикологической оценке грибов рода Fusarium // Доклады Россельхозакадемии. - 2007. - № 6. - С. 28 - 30

СПИСОК СОКРАЩЕННЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ДАС - диацетоксисцирпенол

Т-2-Т-2 токсин

НИВ - ниваленол

ФУЗ-Х - фузаренои X

ЗЕН - зеараленон

ИФА - иммуноферментный анализ

ТСХ - тонкослойная хроматография

ВНИИВСГЭ, г. Москва, Звенигородское шоссе д. 5 Заказ 313/3, тираж 80 экз.

 
 

Оглавление диссертации Токарев, Сергей Викторович :: 2009 :: Москва

Введение.

Обзор литературы.

Глава 1. Токсигенные грибы рода Fusarium.

1.1 Методология изучения популяций.

1.2 Современные подходы к систематике.

Глава 2. Фузариотоксины трихотеценового ряда.

2.1 Строение и биологическая активность.

2.2 Методы анализа культур грибов.

Глава 3. Характеристика гриба Fusarium роае.

3.1 Биологические особенности.

3.2 Причастность к фузариотоксикозам.

3.3 Токсичные метаболиты.

Собственные исследования.

Глава 4. Материалы и методы.

4.1 Объекты исследования.

4.2 Условия культивирования грибов.

4.3 Анализ культур на содержание фузариотоксинов.

4.4 Синтез белковых конъюгатов диацетоксисцирпенола.

4.5 Индукция антител и их характеристика.

Глава 5. Результаты исследований.

5.1 Разработка ИФА диацетоксисцирпенола.

5.1.1 Получение и тестирование иммунореагентов.

5.1.2 Оптимизация условий анализа.

5.2 Токсигенный потенциал региональных популяций Fusarium роае

5.2.1 Диацетоксисцирпенол и Т-2 токсин.

5.2.2 Ниваленол и фузаренон X.

5.2.3 Зеараленон.

5.3 Видовые особенности биосинтеза трихотец-9-енов.

5.3.1 Г.роае и другие распространенные возбудители фузариоза.

5.3.2 Локализованные и редко встречающиеся виды.

Обсуждение результатов исследований.

Выводы.,.

Практические предложения.

 
 

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Токарев, Сергей Викторович, автореферат

Актуальность темь!. Одним из важнейших условий успешного развития животноводства является обеспеченность хозяйств зерновыми кормами высокого санитарного качества. Загрязненность зернофуража токсинами, которые образуют грибы рода Fusarium, приводит к значительному экономическому ущербу, поскольку в последние годы поражение злаковых культур фузариозом отмечается в нашей стране практически повсеместно. В отдельные периоды, особенно в условиях повышенной влажности и температуры, заболевание способно приобретать характер эпифитотий. В разных эколого-географических зонах отмечено формирование специфической по составу фузариозной инфекции зерна, в которой, как правило, среди доминирующих патогенов встречается гриб F. роае (Peck) Wollenweber (7, 15, 21, 30).

Этот вид, обладающий экологической пластичностью, признаками резкой изменчивости и сложным биологическим статусом, в последние годы привлекает все большее внимание микотоксикологов. Его присутствие в зерне связывают с такими масштабными и эндемическими интоксикациями человека и животных как острый геморрагический синдром, алиментарно-токсическая алейкия, болезнь Кашина-Бека и др. (91, 171). Зарубежные исследователи неоднократно высказывали предположение о том, что токсигенность F. роае может быть связана с активным биосинтезом метаболитов трихотеценового ряда - диацетоксисцирпенола и ниваленола, которые являются близкими структурными аналогами таких широко известных фузариотоксинов как Т-2 токсин и 4-дезоксиниваленол (31, 110, 134, 154).

Тем не менее, подробный анализ мировых данных литературы за период с 1960 по 2005 гг. показывает, что сведения относительно токсигенного потенциала F. роае остаются весьма противоречивыми, а свойства природных популяций этого вида практически не исследованы.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилось изучение потенциала токсинообразования у гриба F. роае из состава микобиоты зерна колосовых культур фуражного назначения, а также сопутствующих ему возбудителей фузариоза, с учетом разнообразия условий их обитания.

Для достижения этой цели были определены следующие задачи:

- оценить токсигенный потенциал региональных популяций F.poae в отношении группы токсинов трихотеценового ряда и зеараленона;

- изучить степень изменчивости токсинообразующих свойств F.poae в экспериментах, моделирующих разные условия его развития;

- определить способность к биосинтезу высокотоксичных трихотеценов у других видов Fusarium, встречающихся в зерне;

- получить и охарактеризовать биологические и биохимические реагенты для иммуноферментного анализа диацетоксисцирпенола;

- разработать экспресс-метод индикации диацетоксисцирпенола в культурах грибов Fusarium и составить методические рекомендации для оценки степени токсигенности у санитарно-показательных видов.

Научная новизна работы состоит в следующем:

- впервые установлены основные факторы, степень и характер изменчивости токсигенных свойств региональных популяций гриба F. роае, участвующих в инфицировании возделываемого в России фуражного зерна;

- выявлен новый факт значительного варьирования признака биосинтеза ниваленола у морфологически однородного вида F. роае;

- впервые показано, что среди видов, часто встречающихся в фузариозном зерне, наибольшим потенциалом накопления диацетоксисцирпенола обладают F.poae и F.sporotrichioides\

- впервые в стране 'получены аналитические иммунореагенты для избирательного определения диацетоксисцирпенола и предложен новый метод поиска продуцентов этого токсина среди санитарно-показательных видов Fusarium.

Практическая значимость работы.

Сведения об особенностях токсинообразования региональных популяций основных возбудителей фузариоза колоса, полученные в рамках данной работы, могут быть использованы для совершенствования приемов прогнозирования загрязненности микотоксинами зерна, возделываемого в нашей стране. Высокий токсигенный потенциал, установленный для отдельных популяций F.poae, указывает на необходимость контроля степени инфицирования зерна этим грибом при санитарно-микологической оценке качества зернофуража.

Разработанные «Методические рекомендации по определению диацетоксисцирпенола в культурах санитарно-показательных грибов рода Fusarium», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН в 2007 г., предназначены для микотоксикологической оценки грибов Fusarium и могут быть использованы как в научных исследованиях, так и в практических ветеринарных лабораториях для диагностики и профилактики фузариотоксикозов животных.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены: на I съезде ветеринарных фармакологов (Воронеж, 2007), на заседаниях ученого совета ВНИИВСГЭ (2007, 2008 гг.), на межлабораторном совещании научных сотрудников ВНИИВСГЭ (декабрь 2008 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объём работы и структура диссертации. Работа изложена на 103 страницах машинописного текста, содержит 26 таблиц и 8 рисунков. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования с обсуждением результатов, выводы, практические приложения, список литературы, включающий 180 источников (отечественных авторов - 30 и зарубежных - 150), список сокращений и приложение.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (Peck) Wollenweber, распространенного в зернофураже"

выводы

1. Для оценки токсинообразования грибов рода Fusarium разработан высокоспецифичный, быстрый и простой в исполнении метод непрямого конкурентного ИФА, обеспечивающий определение ДАС с чувствительностью в 105раз выше, чем при тонкослойной хроматографии.

2. Установлено, что гриб F.poae, широко представленный в составе микобиоты фузариозного зерна, является политоксигенным и способен к биосинтезу трихотец-9-енов (ДАС, Т-2), трихотец-9-ен-8-онов (НИВ, ФУЗ-X) и ЗЕН. i

3. Показано, что потенциал накопления ДАС у F.poae имеет среднюю степень выраженности - при значительной доле продуцентов (79,8%) уровни накопления токсина не превышают 10 мг/кг; популяции гриба из географически удаленных районов не имеют различий в способности к накоплению ДАС.

4. По степени продуцирования Т-2 и ЗЕН все исследованные популяции F.poae являются однотипными - на территориях Европейской части страны, в Уральском и Западно-Сибирском регионах при значительной доле образующих штаммов уровни накопления не превышают 1 мг/кг.

5. Установлено, что F.poae имеет высокую степень неоднородности в отношении биосинтеза НИВ и ФУЗ-Х, связанную с его ареалом. Для продуцентов НИВ (47,6% от общего числа штаммов), выделенных из зерна в Европейской части страны, характерны уровни накопления токсина до 100 мг/кг субстрата, способность к образованию ФУЗ-Х обнаружили 6,9% штаммов; в Уральском и Западно-Сибирском регионах продуценты НИВ и i '

ФУЗ-Х не найдены, а в Восточно-Сибирском и Дальневосточном регионах встречались крайне редко.

6. Метаболические, реакций на понижение температуры и i 1 , ♦ ! продолжительность культивирования на зерне у природных штаммов F.poae являются индивидуальными и не приводят к единообразному смещению интенсивности накопления ДАС, Т-2 и НИВ.

7. Среди основных возбудителей фузариоза наибольшим потенциалом накопления ДАС обладают виды F.poae и F.sporotrichioides, у F.acuminatum и F.equiseti продуцирующая способность является низкой и отсутствует у F.graminearum.

Практические предложения

Для повышения эффективности санитарной оценки качества зернофуража, пораженного фузариозом, необходимо осуществлять контроль Г степени его инфицирования токсигенными штаммами F.poae, способными к продуцированию ДАС и НИВ.

Разработанные «Методические рекомендации по определению диацетоксисцирпенола в культурах санитарно-показательных грибов рода Fusarium», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН 20.11.2007 г., могут быть использованы как в научных исследованиях, так и в практических ветеринарных лабораториях для диагностики и профилактики фузариотоксикозов животных.

 
 

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2009 года, Токарев, Сергей Викторович

1. Билай, В.И. Компонентный состав трихотеценов, продуцируемых Fusarium sporotrichiella Bilai / Билай В.И., Тутельян В.А., Элланская И.А., Эллер К.И., Соболев B.C. // Микробиологический журнал. 1983. - Т. 45. -№ 5. - С. 45-49.

2. Буркин, A.A. Иммунохимические свойства спонтанных конъюгатов афлатоксинов с бычьим сывороточным альбумином / Буркин A.A., Кононенко Г.П., Соболева H.A. // Прикладная биохимия и микробиология. -2003. Т. 39. - №2. - С. 228-236.

3. Буркин, A.A. Т-2 токсинообразующая способность штаммов Fusarium роае из зерна хлебных злаков Восточно-Сибирского и Дальневосточногорегионов / Буркин A.A., Соболева H.A., Кононенко Г.П. // Микология ифитопатология. 2008. - Т. 42. - №4. - С. 354-358.

4. Гагкаева, Т.Ю. Современное состояние таксономии грибов рода Fusarium секции Sporotrichiella / Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П., Левитин М.М. // Микология и фитопатология. 2008. - Т. 42. - №3. - С. 201 -214.

5. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии / К. Дерффель. — М.: Мир, 1994.-268 с.

6. Елистратов, И.С. Естественная резистентность организма животных при аспергилло- и фузариотоксикозе / Елистратов И.С., Беспалов В.Л. // Ветеринария. 1983. - Т. 1. - С. 57-59.

7. Иващенко, В.Г. Фузариоз колоса хлебных злаков / В.Г. Иващенко, Н.П. Шипилова, Л.А. Назаровская. СПб., 2004. - 164 с.

8. Квашнина Е.С. Физиолого-экологическая характеристика видов рода Fusarium секций Sporotrichiella // Бюллетень Всесоюзного Ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии. Москва, 1978. - Вып. 32. — С. 42-45.

9. Квашнина, Е.С. Морфолого-культуральные свойства видов рода Fusarium секции Sporotrichiella и их ареал в СССР / Квашнина Е.С. // Микология и фитопатология. 1979. - Т. 13. — №1. - С. 3-10.

10. Кононенко, Г.П. Система микотоксикологического контроля объектов ветеринарно-санитарного и экологического надзора: Дис. докт. биол. наук: 16.00.03 / Г.П. Кононенко; М., 2005.-256 с.

11. Кононенко, Г.П. Видовой состав и токсигенность возбудителей фузариоза всходов пшеницы в Московской области / Кононенко Г.П., Малиновская JI.C., Пирязева Е.А., Соболева H.A. // Микология ифитопатология. 1998. - Т. 32. - №4. - С. 37-41.

12. Кононенко, Г.П. Иммунохимическая оценка белковых конъюгатов 15-гемисукцината З-ацетил-4-дезоксиниваленола / Кононенко Г.П., Буркин A.A., Соболева H.A. // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии: Сб. науч. тр./М., 2003.-Т. 115.-С. 173-183.I

13. Кудинова, Г.П. Токсигенные свойства грибов Fusarium Lk. секции Sporotrichiella Wr. emend. Bilai / Кудинова Г.П. // Микология и фитопатология. 1980. - Т. 14. - №5. - С. 416-422.

14. Левитин, М.М. Возбудители фузариоза колоса зерновых культур иIформ проявленйя болезни на Северо-западе России / Левитин М.М.,1 I

15. Иващенко В.Г.<, Шипилова Н.П., Нестеров А.Н., Гагкаева Т.Ю., Поторочина

16. И.Г., Афанасьева О.Б. // Микология и фитопатология. 1994. - Т. 28. - №3. -С. 58-64.

17. Леонов, А.Н. Дерматотоксическое действие структурно-близких трихотеценов грибов Fusarium / Леонов А.Н., Зотова Е.В., Соболева H.A., Кононенко Г.П. // Доклады ВАСХНИЛ. Москва, 1990. - №2. - С. 52-55.

18. Леонов, А.Н. Особенности биосинтеза трихотеценов у изолятов

19. Fusarium graminearum Schwabe (579А ВНИИЗ) на зерне / Леонов А.Н.,

20. Кононенко Г.П., Соболева H.A. // Микология и фитопатология. 1990. - Т. 4.-№6. -С. 551-557.

21. Леонов, А.Н. Образование фузарина С грибами, вызывающими фузариоз зерновых культур / Леонов А.Н., Малиновская Л.С., Кононенко Г.П., Соболева H.A., Путина Т.Г. // Прикладная биохимия и микробиология. -1993. Т. 29. - №1. - С. 39-43.

22. Леонов, А.Н. Токсигенность изолятов Fusarium graminearum Schw. из зерна фузариозной пшеницы в Краснодарском крае / Леонов А.Н.,

23. Малиновская Л.С., Соболева H.A., Кононенко Г.П. // Доклады ВАСХНИЛ.t

24. Москва, 1990.-Вып. 11.-С. 21-26.

25. Малиновская Л.С. Выявление доминантных видов рода Fusarium Link, в зерне из различных регионов РФ / Малиновская Л.С., Пирязева Е.А., Кислякова О.С. // Успехи медицинской микологии Т. 3. - М.: Национальная Академия Микологии, 2004. - С. 278-280.

26. Методические рекомендации по микотоксикологическому контролю фузариозного зерна фуражного назначения, М. 2006. — 26 с.

27. Перезимовавшие под снегом зерновые культуры (причина ядовитости,диагностика, болезнетворность, профилактика) (под ред. А.Х.Саркисова), М.:iизд-во МСХ СССР, 1948. 107 с.

28. Рухляда, В.В. Вр1ды Fusarium Lk. ex Fr. на кормах и их токсикологическая характеристика / Рухляда B.B., Элланская И.А., Шайда ДА. // МикробиЬлогическйй журнал. 1981. - Т. 43. - №4. - С. 468-474.

29. Соболев, B.C. Изучение токсинообразования Fusarium sporotrichiella / Соболев B.C., Эллер К.И., Болтянская Е.В., Дмитриева И.В., Тутельян В.А. // Известия АН СССР. Сер. биол. 1984.-Вып. 1. - С. 137-141.

30. Тремасов, М.Я. Изучение токсикогенеза Fusarium sporotrichiella приIповышенной температуре культивирования / Тремасов М.Я., Сергейчев А.И., Равилов А.З. // Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - №4. - С. 59-61.

31. Тутельян, В. А. Микотоксины (медицинские и биологические аспекты) / В.А. Тутельян, JI.B. Кравченко М.: Медицина, 1985. - 319 с.

32. Хроматография в тонких слоях (под ред. Э.Шталя). М.: «Мир», 1965. -508 с.

33. Шипилова, Н.П. Видовой состав и биоэкологические особенности возбудителей фузариоза семян зерновых культур: Автореф. дисс. канд. биол. наук: 03.00.16 / Н.П. Шипилова; СПб., 1994. - 20 с.

34. Abbas Н.К. Mycotoxins produced from fungi isolated from foodstuffs and soil: comparison of toxicity in fibroblasts and rat feeding tests / Abbas H.K., Mirocha C.J., Shier W.T. // Applied and Environmental Microbiology. 1984. -Vol. 48.-P. 654-660.

35. Abbas H.K. Sensitivity of cultured human and mouse fibroblasts to trichothecenes / Abbas H.K., Shier W.T., Mirocha C.J. // Journal of the Association of Official Analytical Chemists. 1984. - Vol. 67. - №3. - P. 607-610.

36. Ademoyero A.A. Mouth lesions in broiler chickens caused by scirpenol mycotoxins / Ademoyero A.A., Hamilton P.B. // Poultry Science. 1991. - Vol. 70.-P. 2082-2089.

37. Alexander N.J. Genetic and molecular aspects of the biosynthesis of trichothecenes by Fusarium / Alexander N.J., Proctor R.H., McCormick S.P., Plattner R.D. // Cereal Research Communication. 1997. - Vol. 25. - P. 315-320.

38. Aust S.D. Observation on mouldy corn toxicosis / Aust S.D., Albright J.L., Olsen R.E., Byers J.H., Broquist H.P. // Journal of Animal Science. 1963. - Vol. 22. -№3. - P. 831-832.

39. Bamburg J.R. The structures of toxins from two strains of Fusarium tricinctum / Bamburg J.R., Riggs N.V., Strong F.M. // Tetrahedron. 1968. - Vol. 24.-№8.-P. 3329-3336.

40. Bilgrami K.S. Incidence of zearalenone, DON and T-2 toxin producing strains of Fusarium sp. on food items / Bilgrami K.S., Sahay S.S., Shrivastava A.K., Rahman M.F. I I Proceedings of Indian National Science Academy. 1990. — Vol. 56.-№2.-P. 223-228.

41. Booth C. The Genus Fusarium. Surrey: Commonwealth Mycological Institute, United Kingdom, 1971. 237 p.

42. Brian P.W. Phytotoxic compounds produced by Fusarium equiseti / Brian P.W., Dawkins A.W., Grove J.F., Hemming H.G., Lowe D., Norris G.L.F. // Journal of Experimental Botany. 1961. - Vol. 12. - №34. - P. 1-12.

43. Brown D.tV. Functional demarcation of the Fusarium code trichothecene, Ji • * ' s gene cluster / Brown D.W., Dyer R.B., McCormick S.P., Kendra D.F., Plattner

44. R.D. // Fungal Genetics and biology. 2004. - Vol. 41. - P. 454-462.

45. Bosch U. Production of zearalenone, moniliformin and trichothecenes in intact sugar beets under laboratory conditions / Bosch U., Miricha C.J., Wen Y. // Mycopathologia. 1992. -Vol. 119.-№3.-P. 167-173.

46. Brake J. Effects of the trichothecene mycotoxin diacetoxyscirpenol on fertility and hatchability of broiler breeders / Brake J., Hamilton P.B., Kittrel R.S. // Poultry Science. 1999. - Vol. 78. - P. 1690-1694.

47. Brake J. Effects of the trichothecene mycotoxin diacetoxyscirpenol on feed consumption, body weight, and oral lesions of broiler breeders / Brake J,, Hamilton P.B., Kittrel R.S. // Poultry Science. 2000. - Vol. 79. - P. 856-863.

48. Burgess L.W. General ecology. In: Nelson P.E., Toussoun T.A., Cook R.J., eds. Fusarium: Diseases, Biology and Taxonomy / Burgess L.W. // University Park, Pennsylvania, USA: Pennsylvania State University Press, P. 225-235.

49. Burkin M.A. Enzyme-linked immunosorbent assays of fluoroquinolones with selective and group specificities / Burkin M.A. // Food and Agricultural Immunology.-2008.-Vol. 19.-№2.-P. 131-140.

50. Chatterjee K. Production of deepoxy-diacetoxyscirpenol in a culture of Fusarium graminearum / Chatterjee K., Pawlosky R.J., Mirocha C.J., Zhu T.X. // Applied and Environmental Microbiology. 1986. - Vol. 52. - №2. - P. 311-313.

51. Chelkowski J. Fusarium poae (Peck) Wollenw. Occurrence in maize ears, nivalenol production and mycotoxin accumulation in cobs / Chelkowski J., Lew H., Pettersson H. // Mycotoxin Research. - 1994. - Vol. 10. - №2. - P.l 16-120.

52. Chelkowski J. Formation of mycotoxins by Fusarium species from cereals in Poland / Chelkowski J., Visconti A., Solfrizzo M., Bottalico A. // Phytopathology Mediterranean. 1984. - Vol. 23. - P. 43-48.

53. Chu F.S. Production and characterization of antibody against diacetoxyscirpenol / Chu F.S:, Clien Liang M.Y., Zhang G.S. // Applied and Environmental Microbiology. 1984. - Vol. 48. - №4. - P. 777-780.

54. Claddock V.M. Stimulation of DNA replication in rat esophagus and stomach by the trichothecene mycotoxin diacetoxyscirpenol / Claddock V.M., Hill R.J., Henderson A.R. // Cancer Letters. 1987: - Vol. 38. - P. 199-208.

55. Cole R.J., Cox R.H. Handbook of Toxic Fungal Metabolites / Cole R.J., Cox R.H. // Academic Press, New York-London-Toronto-Sydney-San Francisco, 1981.-937 p.

56. Collett M.G. Diacetoxyscirpenol detected in mouldy pig feed in the western

57. Cape / Collett M.G., Zumpt I.F. // Journal of the South African Veterinary Association 1986. - Vol. 57. - № 1. - P. 74-78.

58. Compel P. Characterization of dsRNA elements in Fusarium poae / Compel P., Papp I., Fekete C, Hornok L. // Cereal Research Communication. 1997. — Vol. 25. - №3/1. - P. 265-266.

59. Coppock R.W. The acute toxicopathy of intravenous diacetoxyscirpenol (anguidine) administration in swine / Coppock R.W., Gelberg H.B., Hoffmann W.E., Buck W.B. // Fundamental Applied Toxicology. 1985. - Vol. 5. - P. 1034-1049.i

60. Coppock R.W. Pharmacokinetics of diacetoxyscirpenol in cattle and swine: effects of halothane / Coppock R.W., Swanson S.P., Gelberg H.B., Koritz G.D., Buck W.B., Hoffmann W.E. // American Journal of Veterinary Research. 1987. -Vol. 48.-№4.-P. 691-695.

61. Criseo G. 12-13, Epoxytrichothecenes and zearalenone production byi

62. Fusarium isolated from Sicilian cereals / Criseo G., Guerrisi R., Medici M.A., Pernice I., Urzi C. // Microbiologie Aliments - Nutrition. - 1989. - Vol. 7. - P. 157-160.

63. Dawkins À.W. Phytoioxic compounds produced by Fusarium equiseti. Part II. The chemistry Bf diacetoxyscirpenol / Dawkins A.W. // Journal of the Chemical Society (C). 1966. - Vol. 5^. - P. i Î6-123.

64. Dawkins A.W., Grove J.F., Tidd B.K. Diacetoxyscirpenol and some related compounds / Dawkins A.W., ¡Grove J.F., Tidd B.K. // Chemical Communications. 1965.-№2.-P. 27-28.

65. Duan J. Development of an indirect competitive ELISA for ciprofloxacin residues in food animal edible tissues / Duan J., Yuan Z. // Journal of Agricultural and Food Chemistry 2001. - Vol. 49. - P. 1087-1089.

66. Engelhardt G. Occurrence of toxin-producing mould fungi of the genus Fusarium on cereals from the 1982 harvest in Bavaria / Engelhardt G., Rintelen J., Wallnofer P.R. // Bayerisches Landwirtschaftliches Jahrbuch. 1984. - Vol. 61. -№'/2. - P. 338-347.

67. Evidente A. Isolation' of 15-acetoxyscirpenol from culture of Fusarium poae on corn / Evidente A., Randazzo G., Visconti A., Bottalico A. // Mycotoxin Research. 1989. - Vol. 5. -№1. - P. 30-34.

68. Farber J.M. Production of fusarin C by Fusarium spp. / Farber J.M., Sanders G.W. II Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1986. - Vol. 34. -№6.-P. 963-966.

69. Fekete C. High-frequency occurrence of virruslike particles with double-standed RNA genome in Fusarium poae / Fekete C., Giczey G., Papp I., Szabo L., Hornok L. // FEMS Microbiology Letters. 1995. - Vol. 131. - P. 295-299.

70. Fekete C. A repetitive DNA sequence associated with kariotype variability in Fusarium poae / Fekete C., Hornok L. // Acta Phytopathologica and Entomologica Hungarica. 1997. - Vol. 32. - P. 29-38.

71. Fekete C. Electrophoretic karyotypes and gene mapping in eight species of1 ! ,the Fusarium sections Arthrosporiella and Sporotrichiella / Fekete C., Nagy R., Debets A.J.M., Hornok L. // Current Genetics. 1993. - Vol. 24. - P. 500-504.

72. Flury E. The constitution of diacetoxyscirpenol / Flury E., Mauli R., Sigg H.P. // Chemical Communications. 1965. - №2. - P. 26-27.

73. Gagkaeva T.Yu. Genetic diversity of Fusarium graminearum in Europe and Asia / Gagkaeva T.Yu., Yli-Mattila T. // European Journal of Plant Pathology. — 2004.-Vol. 110.-P. 551-562.

74. Gedek B. Trichothecene problems in the Federal Republic of Germany / Gedek B., Bauer J. // In Trichothecenes — Chemical, Biological and Toxicological Aspects, Ueno Y., Ed., Elsevier, Amsterdam 1983, P. 301-307.

75. Gentles A.B. Teratogenic effects of orally administrated diacetoxyscirpenol in mice / Gentles A.B., Small M.H., Smith E.E., Phillips T.D., Duffus E., Braithwaite C.E. // Toxicologist. 1993. - Vol. 13. - P. 208-212.

76. Gerlach W. The genusFusarium a pictorial atlas / Gerlach W., Nirenberg H. // Mitteilunggen aus der Bioloischen Bundesansalt fur Land- und Forstwirschaft, Berlin: Dahlem. - 1982. - 406 p.

77. Gilgan M.W. Isolation and partial characterization of a toxin from Fusarium tricinctum on moldy corn / Gilgan M.W., Smalley E.B., Strong F.M. // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1966. - Vol. 114. - P. 1-3.

78. Gordon W.K. The occurrence of Fusarium species in Canada. II. Prevalence and taxonomy of Fusarium species in cereal seed / Gordon W.K. // Canadian Journal of Botany. 1952. - Vol. 30. - P. 209-251.

79. Hack R. A monoclonal antibody to the trichothecene mycotoxin diacetoxyscirpenol / Hack R., Klaffer U., Terplan G. // Letters in Applied Microbiology. 1989. - Vol. 8. -№2. - P. 71-75.

80. Hacking A. Zearalenone-producing species of Fusarium on barley seed / Hacking A., Rosser W.R., Dervish M.T. // Annals of Applied Biology. 1976. -Vol. 84.-P. 7-11.

81. Hassanane M.S. Mutagenicity of the mycotoxin diacetoxyscirpenol on somatic and germ cells of mice / Hassanane M.S., Abdalla E.S.A., El-Fiky S., Amer M.A., Hamdy A. // Mycotoxin Research. Vol. 16. - P. 53-63.

82. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques. Academic Press. San Diego, 1995.-785 p.

83. Hoerr F.J. Mycotoxicosis caused by a single dose of T-2 toxin or diacetoxyscirpenol in broiler chickens / Hoerr F.J., Carlton W.W., Yagen B. // Veterinary Pathology. 1981.'-Vol. 18. - P. 652-664.

84. Ischinoe M. Chemotaxonomy of Gibberella zeae with special reference to production of trichothecenes and zearalenone / Ischinoe M., Kurata Y., Sugiura Y., Ueno Y. // Applied and Environmental Microbiology. 1983. - Vol. 46. - №6. -P. 1364-1369.

85. Joffe A.Z. The mycoilora of overwintered cereals and its toxicity / Joffe A.Z.//Bulletin of Research Council of Israel. 1960. - V. 9D.-P. 101-126.

86. Joffe A.Z. Toxicity and antibiotic properties of some Fusaria / Joffe A.Z. //

87. Bulletin of Research Council of Israel. 1960. - V. 8D. - P. 81-95.i

88. Joffe A.Z. Fusariunh species of the Sporotrichiella section and relations between their toxicity io plants arid animals / Joffe A.Z. // Journal of Plant

89. Diseases and Protectibn. 1973. - №2i - P. 92-99.t

90. Joffe A.Z. A modern system of Fusarium taxonomy / Joffe A.Z. // Mycopathologica and Mycologica Applicata. 1974. — Vol. 53. - №1-4. - P. 201-228.

91. Joffe A.Z. Growth and toxigenity of Fusaria of the Sporotrichiella section as related to environmental factors and culture substrates / Joffe A.Z. // Mycopathologica and Mycologica Applicata. 1974. - Vol. 54. - №1. - P. 35-46.

92. Joffe A.Z. Fusarium species, Their Biology and Toxicology, John Wiley & Sons, New York, 1986. 207 p.

93. Joffe A.Z. Comparative study of the yield of T-2 toxin produced by Fusarium poae, F.sporotrichioides and F.sporotrichioides var.tricinctum strains from different sources / Joffe A.Z., Yagen B. // Mycopathologia. 1977. - Vol. 60. -P. 93-100.

94. Karppanen E. Fusarium mycotoxins as a problem in Finnish feeds and cereals / Karppanen E., Rizzo A., Berg S., Lindfors E., Aho R. // Journal of Agricultural Science. 1985. - Vol. 57. - P. 195-205.

95. Klaffer U. Development of a sensitive enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of diacetoxyscirpenol / Klaffer U., Martlbauer E., Terplan G. // International Journal of Food Microbiology. 1988. - Vol. 6. - №1. - P. 9-17.

96. Kubena L.F. Individual and combined effects of fumonisin Bj present in

97. Fusarium moniliforme culture material and diacetoxyscirpenol or ochratoxin A initurkey poults / Kubena L.F.', Edringtön T.S., Harvey R.B., Phillips T.D., Sarr A.B.,i

98. Rottinghaus G.E-. // Poultry Science. 1997. - Vol. 76. - P. 256-264.

99. Lafont P. Toxic 'metabolites from Fusarium causing alimentary toxic aleukia / Lafont P., Lafarge-Frayssinet C., Lafont J., Bertin G., Frayssinet C. // Annales de Microbiologie (Institut Pasteur). 1977. - Vol. 128B. - №2. - P. 215-220.

100. Langseth W. Cytotoxicity and mycotoxin production of Fusarium strains isolated from Norwegian grain / Langseth W., Bernhoft A., Rundberget T., Brekke T., Kosiak B., Gareis M. // Cereal Research Communication. 1997. - Vol. 25. -№3/1. -P. 419-421.

101. Lau H.P. Preparation and characterization of aflatoxin Qrhemisuccinate / Lau H.P., Fan S.L., Chu F.S. // Journal of the Association of Official Analytical Chemists. 1981,-Vol. 64. -№3. - P. 681-683.

102. Leslie J.F. Icebergs and species in populations of Fusarium / Leslie J.F., Zeller K.A., Summerell B.A. // Physiological and Molecular Plant Pathology. -2001.-Vol. 59.-P. 107-117.

103. Liu W. Nitrate nonutilizating mutants and vegetative compatibility groups in Fusarium poae / Liu W., Sundheim L. // Fungal Genetics and Biology. — 1996. -Vol. 20. P. 12-17.I

104. Liu W. Trichothecene production and the relationship to vegetative compatibility groups in Fusarium poae / Liu W., Sundheim L., Langseth W. // Mycopathologia. 1998. -Vol. 140.-P. 105-114.

105. Logriego A. Epidemiology of toxigenic fungi and their associated mycotoxins for some Mediterranean crops / Logriego A., Bottalico A., Mule G., Moretti A., Perrone G. // European Journal of Plant Pathology. 2003. - Vol. 109. - №7. - P. 645-667.

106. Logrieco A. Further data on specific trichothecene production by Fusarium sect. Sporotrichiellà strains / Logrieco A., Chelkowski J., Bottalico A., Visconti A. // Mycological Research. 1990. - Vol. 94. - №5. - P. 587-589.

107. Logrieco A. Phylogenetic affinities of the species in Fusarium section Sporotrichiellà / Ldgriëco A., Peterson S.W., Bottalico A. // Experimental Mycology. 1991. - Vol. 15. -№2. - P.1174-179.

108. Lucia G.E. Rabbit skin sensitivity to culture extracts of Fusarium poae / Lucia G.E., Martin A.A., Lory G., Alippi H.E. // Revista Argentina de Microbiologia. 1984. - Vol. 16. - № 1. - P. 27-32.

109. Magan N. Post-harvest fungal ecology: impact of fungal growth and mycotoxin accumulation in stored grain / Magan N., Hope R., Cairns V., Aldred D. // European Journal of Plant Pathology. 2003. - Vol. 109. - №7. - P. 723-730.

110. Marasas W.F.O. Toxigenic Fusaria, In: Mycotoxins and animal foods / editors, J.E.Smith, R.S.Henderson, 1991.- P. 119-139.

111. Marasas W.F.O. Occurrence of toxigenic strains of Fusarium in maize and barley in Germany / Marasas W.F.O., Leistner L., Hofmann G., Eckardt C. // European Journal of Applied Microbiology and Biotechnology. 1979. - Vol. 7. — P. 289-294.

112. Marasas W.F.O., Nelson P.E., Toussoun T.A. Toxigenic Fusarium Species. Identity and Mycotoxicology. The Pennsylvania State University Press, University Park, 1983. 282 p.

113. Mayura K. Developmental toxicity of diacetoxyscirpenol in the mouse / Mayura K., Smith E.E., Clement B.A., Harvey R.B., Kubena L.F., Phillips T.D. // Toxicology. 1987. - Vol. 45. - P. 245-255.

114. McCormick S.P. The, role of DON in pathogenicity Fusarium head blight of wheat and barley. Eds. K.J. Leonard, W.R.Bushnell: APS Press, 2003. - 202 P

115. Miller J.D. Production df deoxynivalenol and related compounds in liquid culture by Fusarium gramihearum / Miller J.D.,Taylor R., Greenhalgh R. // Canadian Journal of Microbiology: 1983. - Vol. 29. - P. 1171-1178.

116. Mills E.N.C. Aii eiizyrhe-linked immunosorbent assay for diacetoxyscirpen'ol appliéd tb thé analysis of wheat / Mills E.N.C., Johnston J.M.,

117. Kemp H.A., Morgan M.R.A. I I Journal of the Science of Food and Agriculture. -1988. Vol. 42. - №3. - P. 225-233.

118. Mirocha C.J. Identification of the toxic principle in a sample of poaefusarin / Mirocha C.J., Pathre S. // Applied Microbiology. 1973. - Vol. 26. -№5.-P. 719-724.

119. Molto G.A. Production of trichothecenes and zearalenone by isolates of Fusarium spp. from Argentinian maize / Molto G.A., Gonzalez H.H.L., Resnik S.L., Pereyra Gonzalez A. // Food Additives and Contaminants. 1997. - Vol. 14. -№3. - P. 263-268.

120. Morooka N. Studies on the toxic substances in barley infected with Fusarium spp. / Morooka N., Uratsuji N., Yoshizawa T., Yamamoto H. // Japanese Journal of Food Hygiene. 1972. -№13. - P. 368-375.

121. Morozumi S. Synthetic medium for production of trichothecene mycotoxins by Fusarium species / Morozumi S., Wauke T., Hitokoto H., Kudoh Y. // Japanese Journal of Food Microbiology. 1988. - Vol. 5. - №2. - P. 131-136.

122. Moss M.O. Variability in the production of trichothecenes by Fusarium sporotrichioides // International Biodeterioration. 1988. - Vol. 24. - №4-5. - P. 445-453.

123. Mule G. Clustering of trichothecene-producing Fusarium strains determined from 28S ribosomal DNA sequences / Mule G., Logrieco A., Stea G., Bottalico A. // Applied and Environmental Microbiology. 1997. - Vol. 63. - №5. -P. 1843-1846.

124. Neish G.Ä. Zearalenbne and trichothecene production by some Fusariumi , ispecies associated with Canadian grain /. Neish G.A., Farnworth E.R., Cohen H. 11 Canadian Journal of I*Iant Pathology. 1982. - Vol. 4. - №2. - P. 191-194.1.t

125. Nelson P.E. Fusarium species: An Illustrated Manual for Identification / Nelson P.E., Toussoun T.A., Marasas W.F.O. // The Pennsylvania State University, University Park, 1983. 192 p.

126. Nesterov A.I. The clinical course of Kashin-Beck disease / Nesterov A.I. // Arthritis and Rheumatism. 1964. - №7. - P. 29-48.

127. Parry D.W. Fusarium ear blight (scab) in small grain cereals a review / Parry D.W., Jenkinson P., McLeod L. // Plant Pathology. - 1995. - Vol. 44. - P. 207-238.

128. Parry D.W., Nicholson P. Development of a PCR assay to detect Fusarium poae in wheat / Parry D.W., Nicholson P. // Plant Pathology. 1996. -Vol. 45. -№2. -P. 383-391.

129. Pathre S.V. Monoacetoxyscirpenol. A New Mycotoxin produced by Fusarium roseum Gibbosum / Pathre S.V., Mirocha C.J., Christensen C.M., Behrens J. 11 Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1976. - Vol. 24. -№1.-P. 97-103.

130. Pauly JiU. Proddctioii and characterization of a monoclonal antibody to the! 1trichothecene niycotoxin diacetoxyscirpenbl / Pauly J.U., Bitter-Suermann D.,

131. Dose K. // Biological Chemistry Hoppe-Seyler. 1988. - Vol. 369. - №6. - P. 487-492.

132. Pettersson H. Nivalenol production by Fusarium poae / Pettersson H. // Mycotoxin Research. 1991. - Vol. 7A. -№1. - P. 26-30.

133. Pettersson H. Nivalenol in Swedish cereals — occurrence, production and toxicity towards chickens / Pettersson H., Hedman R., Engstrom B., Elwinger K., Fossum O. // Food Additives and Contaminants. 1995. - V. 12. - №3. - P. 373 -376.

134. Polley R.W. Surveys of stem base diseases and fusarium ear diseases in winter wheat in England, Wales and Scotland, 1989-1990 / Polley R.W., Turner J.A. //Annalls of Applied Biology. 1995. - Vol. 126. -№1. - P. 45-59.

135. Porcher J.M. Determination of cytotoxic trichothecenes in corn by cell culture toxicity assay / Porcher J.M., Lafarge-Frayssinet C. // Journal of the Association of Official Analytical Chemists. 1987. - Vol. 70. - №5. - P. 844-849.

136. Proctor R.H., Hohn T.M., McCornick S.P. Reduced virulence of Gibberella zeae caused by disruption of a trichothecene toxin biosynthetic gene / Proctor R.H., Hohn T.M., McCornick S.P. // Molecular Plant-Microbe Interactions. 1995.-Vol. 8.-P. 593-601.

137. Rabie C.J. T-2 toxin production by Fusarium acumiatum isolated from oats and barley / Rabie C.J., Sydenham E.W., Thiel P.G., Lubben A., Marasas W.F.O. // Applied and Environmental Microbiology. 1986. - Vol. 52. - №3. - P. 594-596.

138. Rensburg J.D.F. ' Short-term effects of two Fusarium toxins, diacetoxyscirpenol and neosolaniol monoacetate, in male Wistar rats / Rensburg J.D.F., Thiel P.G., Jaskiewicz K. // Food Chemistry and Toxicology. 1987. -Vol. 25.-P. 767-771.

139. Ryu J.C. The acute and chfonic toxicities of nivalenol in mice / Ryu J.C., Ohtsubo K., Izumiyama N., Nakamura K., Tanaka T., Yamamura H., Ueno Y. // Fundamental and Applied Toxicology. 1988. - Vol. 11. - P. 38-47.

140. Salas B., Steffenson B.J., Casper H.H., Prom L.K. Fusarium species pathogenic to barley and their associated toxins / Salas B., Steffenson B.J., Casper H.H., Prom L.K. // Cereal Research Communication. 1997. - Vol. 25. - №3. - P. 483-487.

141. Schmidt H. AFLP analysis of Fusarium species in the section Sporotrichiella evidence for Fusarium langsethiae as a new species / Schmidt H., Niessen L., Vogel R.F. // International Journal of Food Microbiology. - 2004. - Vol. 95. - №2. - P. 297-304.

142. Schubring S.L. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of diacetoxyscirpenol in wheat and corn / Schubring S.L., Chu F.S. // Mycotoxin Research. 1987. - Vol. 3. - P. 97-106.

143. Scott P.M. Screening Fusarium strains isolated from overwintered Canadian grains for trichothecenes / Scott P.M., Harwig J., Blanchfield B.J. // Mycopathologia. 1980. - Vol. 72. - P. 175.

144. Scott P.M. Detection of mycotoxins by thin-layer chromatography: application to screening of fungal extracts / Scott P.M., Lawrence J.W., Walbeek W. // Applied Microbiology. 1970. - Vol. 20. - №5. - P. 839-842.

145. Snyder W.C. The species concept in Fusarium with reference to Discolor and other Sections / Snyder W.C., Hansen H.N. 11 American Journal of Botany. -1945.-Vol. 32.-P. 657.

146. Sugiura Y. Occurrence Of Gibberella zeae strains that produce both nivalenol and deoxynivalenol / Sugiura Y., Watanabe Y., Tanaka T., Yamamoto S., Ueno Y. // Applied and Environmental Microbiology. 1990. - Vol. 56. — №10.-P. 3047-3051.

147. Suzuki T. Production of trichothecene mycotoxins of Fusarium species inwheat and barley harvested in Saitama Prefecture / Suzuki T., Kurisu M., Hoshinoi i

148. Suzuki T. Determination of butenolide {Fusarium toxin) by gas chromatography with an electron capture detector / Suzuki T., Kurisu M., Nose N., Watanabe A. // Journal of the Food Hygiene Society of Japan. 1981. - Vol. 22. -№3. - P. 197- 202.

149. Sydenham E.W. The simultaneous determination of diacetoxyscirpenol and T-2 toxin in fungal cultures and grain samples by capillary gaschromatography / Sydenham E.W., Thiel P.G. // Food Additives andi

150. Contaminants. 1987. - Vol. 4. -№3. - P. 277-284.

151. Tanaka T. Production of mycotoxins by Fusarium isolates from scabby wheat harvested in Hokkaido, Japan / Tanaka T., Hasegawa A., Yamamoto S., Toyazaki M., Matsuda Y., Sugiura Y., Ueno Y. // Proceedings of the Japanese

152. Association of Mycotoxicology. 1987. -№25. - P. 31-33.i

153. Tatsuno T. Nivalenol, a toxic principle of Fusarium nivale / Tatsuno T., Saito M., Enomoto M., Tsunoda H. // Chemical Pharmaceutical Bulletin. 1968. -Vol. 16.-№12.-P. 2519-2520.

154. Tatsuno T. Toxicological research on substances from Fusarium nivale. III. The structure of nivalenol and its monoacetate / Tatsuno T., Fujimoto Y., Morita Y. // Tetrahedron Letters. 1969. - Vol. 33. - P. 2823-2826.

155. Terse P.S. Comparison of in vitro and in vivo biological activity of1 r\ *mycotoxins / Terse P.S., Madhyästha M.S., Zurovac O., Stringfellow D.,

156. Marquardt R.R., Kemppainen B.W. // Toxicon. 1993. - Vol. 31. - №7. - P. 913-919.

157. Thompson W.L. Structure-function relationships of 12,13-epoxytrichothecene mycotoxins in cell culture: comparison to whole animal lethality / Thompson W.L., Wannemacher R.W. // Toxicon. 1986. - Vol. 24. -№10.-P. 985-994.

158. Torp M. Production of T-2 toxin by a Fusarium resembling Fusarium poae / Torp M., Langseth W. // Mycopathologia. 1999. - Vol. 147. - №2. - P. 89-96.

159. Ueno Y. Fusarenon-X, a toxic principle of Fusarium nivale culture filtrate / Ueno Y., Ueno I., Tatsuno T., Ohokubo K., Tsunoda H. // Experientia. -1969. - Vol. 25. - №10. - P. 1062-1068.

160. Ueno Y. Biological and chemical detection of trichothecene mycotoxins of Fusarium species / Ueno Y., Sato N., Ishii K., Sakai K., Tsunoda H., Enomoto M. //Applied Microbiology. 1971. - Vol. 22. -P.718-726.

161. Ueno Y. Solaniol, a toxic metabolite of Fusarium solani / Ueno Y., Sato N., Ishii K., Sakäi K.; Tsundda H., Enomoto M. // Applied Microbiology. 1973. -Vol. 25.-P. 699-705.

162. Ueno Y. Mode of action of trichothecenes / Ueno Y. // Pure and Applied Chemistry 1977. - Vol. 49. -№11. - P. 1737-1745.

163. Ueno Y. Trichothecenes: Chemical, Biological and Toxicological Aspects: Elsevier, Amsterdam, 1983. — 375p.

164. Vesonder R.F., Ciegler A., Jensen A.H. Isolation of the emetic principleifrom Fusarium-infected corn / Vesonder R.F., Ciegler A., Jensen A.H. // Applied Microbiology 1973. - Vol. 25. - P. 1008-1010.

165. Vesonder R.F. Swine refusal factors elaborated by Fusarium strains and identified as trichothecenes / Vesonder R.F., Ellis J.J., Rohwedder W.K. 11 Applied and Environmental Microbiology. 1981. - Vol. 41. -№>1. - P. 323-324.

166. Weaver G.A. Acute toxicity of the mycotoxin diacetoxyscirpenol in swine / Weaver G.A., Kurtz HJ., Mirocha C.J., Bates F.Y., Behrens J.C. // Canadian Veterinary Journal. 1978. - Vol. 19. - P. 267-271.

167. Weidenborner M. Encyclopedia of Food Mycotoxins. Springer-Verlag: Berlin-Heidelberg-New York, 2001. 295 p.

168. Wilcoxcon R.D. Occurrence of Fusarium species in scabby wheat from Minnesota and their pathogenicity to wheat / Wilcoxcon R.D., Kommedahl T., Ozmon E.A., Windeis C.E. // Phytopathology. 1988. - Vol. 78. - №5. - P. 586-589.

169. Windeis C.E. Economic and social impacts of Fusarium head blight: changing farms and rural communities in the northern Great Plains / Windeis C.E. //Phytopathology. -2000. -Vol. 90. -P. 17-21.

170. Wollenweber H.W., Reinking O.A. Die Fusarium, ihre Beschreiburg,

171. Schadwirkung und Bekämpfung. Berlin: Paul Parey, 1935. 355 p.

172. Yagen B. Screening of toxic isolates of Fusarium poae and F.sporotrichioides involved in causing alimentary toxic aleukia / Yagen B., Joffe A.Z. I I Applied and Environmental Microbiology. 1976. - Vol. 32. - №2. - P. 423-427.

173. Yagen B., Joffe A.Z., Hbrh P., Mor N., Lutsky I.I. Toxins from a strain involved in A.T.Ä., In: Mycotoxins in Human and Animal Health, Rodricks J.V., Hesseltine C.W., Melilman M.A., Eds. Pathotox Publishers, Park Forest South, II, 1977.-P. 329-336.

174. Yoshizawa Т. Deoxynivalenol and its monoacetate: new mycotoxins from Fusarium roseum and moldy barley / Yoshizawa Т., Morooka N. // Agricultural and Biological Chemistry. 1973. - Vol. 37. - P. 2933-2934.

175. Zhang G.S. Improved method for production of antibodies against T-2 toxin and diacetoxyscirpenol in rabbits / / Zhang G.S., Schubring S.L., Chu F.S. / Applied and Environmental Microbiology. 1986. - Vol.51. -№1. - P. 132-137.

176. Ziprin R.L. Listeriosis in diacetoxyscirpenol-treated mice / Ziprin R.L., Corrier D.E. // American Journal of Veterinary Research. 1987. - Vol. 48. — P. 1516-1519.

177. Список сокращенных обозначений

178. АДОН З-ацетил-4-дезоксиниваленол

179. АДОН 15-ацетил-4-дезоксиниваленол

180. АТА алиментарно-токсическая алейкия1. ДАС диацетоксисцирпенол1. ДМФА диметилформамид1. ДОН 4-дезоксиниваленол1. ЗЕН зеараленон

181. ИФА иммуноферментный анализ1. MAC моноацетоксисцирпенол1. НЕО неосоланиол1. НИВ ниваленол1. Т-2 Т-2 токсин1. ТГФ тетрагидрофуран

182. ТСХ тонкослойная хроматография /

183. ФСБ фосфатно-солевой буфер ФУЗ-Х - фузаренон Xв2