Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные показатели отитов аллергической этиологии у собак

На правах рукописи

003054Э32

КОНОВАЛОВ Сергей Анатольевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОТИТОВ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ЭТИОЛОГИИ У СОБАК

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж 2007

003054932

Работа выполнена в ГНУ « Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт»

Научный руководитель: доктор биологических наук

Карташов Сергей Николаевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Алтухов Николай Михайлович

кандидат ветеринарных наук Золототрубов Алексей Петрович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Донской государственный

аграрный университет»

Защита состоится «¿¿^ » 2007 года в « • ' » часов на

заседании диссертационного совета^Д.220.010.05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки» (394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, I, факс 8-0732-53-86-51)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки»

Автореферат разослан « ¿2 » »о ¿-Ч

2007 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета .. . , / ---------- Хромова Л.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема воспалительных заболеваний наружного слухового прохода у собак занимает в настоящее время одно из первых мест в структуре заболеваемости этих животных (С.С. Бакшеева, 1995, 1996; А.Д. Белов, 1995; A.M. Ермаков, 1997, 1998; Д.Н. Карлотти, 1997; Д.Н. Казаков, 1999). Особое место в связи с широким распространением занимают наружные отиты, развившиеся на фоне аллергии (В.А Лукьяновский, 1988, 1995, 1998; А.И. Кашин, 1994; Э.А. Баткаев, 1996, 1997; Т.Р. Лещенко, 1998; Л.Ю. Карпенко, 1995, 1997, 1999; К.С. Медведев, 1999). Они возникают в любом возрасте, характеризуются длительным, затяжным течением, приводят к развитию необратимых изменений и нарушению рабочих качеств собаки, наносят огромный ущерб собаководству. Традиционные лекарственные и хирургические методы лечения собак, больных отитами, малоэффективны, потому, что вопросы этиопатогенеза изучены недостаточно полно.

Учитывая сложность патогенеза, стадийность течения, многоликость клинических проявлений и морфологических изменений аллергических отитов у собак, связанные с этим большие трудности в постановке правильного диагноза, а, следовательно, адекватной терапии мы поставили цель изучить морфофункциональные изменения при отитах у собак аллергической этиологии.

Цель работы: изучить причины возникновения и

морфофункциональную картину наружных отитов у собак аллергической этиологии.

Задачи исследования:

1) изучить распространение, выяснить сезонность и породную предрасположенность собак к аллергическим отитам;

2) изучить клинические признаки аллергических отитов у собак и систематизировать их в зависимости от тяжести клинической картины;

3) изучить морфологические и биохимические изменения крови при аллергических отитах у собак;

4) изучить состав микрофлоры, выделяемой при наружных отитах, и ее чувствительность к антибиотикам;

5) выяснить изменения, возникающие в цитологической и гистологической картине при аллергических отитах у собак;

6) выяснить взаимосвязь между тяжестью клинического проявления

аллергического отита, морфологическими и биохимическими показателями крови, а также изменениями в цитологической и гистологической картине при данном заболевании.

Научная новизна. Впервые выявлены морфологические и биохимические изменения в картине крови при аллергическом отите у собак; на основании цитологических и гистологических исследований изучены морфологические изменения в коже наружного слухового прохода при аллергическом отите у собак; выяснена связь между картиной цитологического мазка из уха, гистологическими изменениями и тяжестью течения аллергического отита у собак.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования позволяют объективно оценить тяжесть течения наружного аллергического отита. Проведенные морфологические исследования позволяют прогнозировать как тяжесть течения наружного отита, так и прогноз при этом заболевании, а также частоту рецидивов при консервативном лечении. Результаты морфологических исследований позволяют судить о стадийности течения аллергического отита у собак, на основании цитологических исследований определять стадию заболевания у конкретного животного, что имеет большое практическое значение.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ГНУ СКЗНИВИ; на заседаниях ученого сонета Донского ГАУ (1999-2002); на региональной конференции по актуальным проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных «Золотая осень Кубани - 2001» (г. Краснодар, 2001); на межрегиональной дистанционной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых учгных «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (п. Персиановка, 2003); на Республиканской научно-практической конференции, посвященной памяти известных ученых Дон ГАУ «Проблемы развития агропромышленного сектора экономики и пути их решения» (п. Персиановка, 2003).

Реализация результатов исследований. Разработанные практические предложения реализуются в работе ветеринарной клиники «Вита-Вет» (г. Шахты, г. Таганрог, г. Красный Сулин), в ветеринарной клинике «Неотложной ветеринарной помощи» г. Волгоград, используются в практической работе

ветеринарными специалистами Ростовской области, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах акушерства и хирургии, внутренних незаразных болезней и патофизиологии Дон ГАУ. На основании результатов собственных исследований написаны методические рекомендации: «Цитологическая диагностика наружных отитов у собак», «Местное лечение наружных отитов», «Эмпирическая антибиотикотерапия при атопических наружных отитах у собак с системными проявлениями», которые рассмотрены и рекомендованы НТС Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Ростовской области (протокол №1 от 12.10.2005)

Публикации. По диссертационной работе опубликовано 6 статей, в том числе три из списка бюллетеней ВАК, изданы три методические рекомендации, утвержденные НТС Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Ростовской области (протокол №1 от 12.10.2005 г.). Положения, выносимые на защиту: взаимосвязь между тяжестью клинического течения аллергического отита и изменениями морфологических и биохимических показаелей крови.

взаимозависимость цитологической и гистологической картины при аллергических отитах от длительности течения заболевания и качественного и количественного состава микрофлоры осложняющего аллергический процесс.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 144 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, а также обсуждения, выводов, предложений для практики и списка литературы. В диссертации приведено 12 таблиц и 50 рисунок. Список литературы включает 267 источников, в том числе 102 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Настоящая работа выполнена в 2000-2005 гг. на кафедре микробиологии и патанатомии ФГОУ ВПО «Дон ГАУ», лаборатории паразитологии с сектором синтеза ГНУ «СКЗНИВИ». Основные этапы, апробация и практическое применение разработанных методик проведены в ветеринарной клинике «Вита» (г. Шахты, Ростовской области) и ветеринарной клинике ГНУ «СКЗНИВИ».

За период с 2000 по 2004 гг. клиническому осмотру подвергнуто 8460 собак, больных различными инфекционными и незаразными болезнями. Из них у 1154 (13,6%) животных были обнаружены отклонения со стороны органа слуха, у 654 из них был диагностирован аллергический отит (56,7%), как местное проявление аллергического дерматита.

Животные для опытов отбирались по мере поступления в ветеринарные клиники. У всех животных с диагнозом «аллергический отит» проводился клинический осмотр, морфологические, биохимические исследования крови, а также цитологические и гистологические исследования. Кровь получали из поверхностных вен плеча и голени (вены сафена). В цельной крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов путем подсчета в камере с сеткой Горяева (П.С. Ионов с соавт.,1937), количество гемоглобина гемоглобинцианидным методом, цветовой показатель по A.A. Кудрявцеву с соавт. (1974), гематокрит (B.C. Камышников, 2000) в полистирольных трубках путем центрифугирования при 4000 об./мин. в течение 15 минут.

Из биохимических исследований проводили определение уровней альбумина в сыворотке крови реакцией с бромкрезоловым зеленым, общего белка в сыворотке крови - биуретовым методом (метод Кингслея - Вейксельбаума), мочевины - цветной реакцией с диацетилмонооксином, креатинина - методом Поппера, основанного на цветной реакции Яффе, глюкозы —методом Гультмана в модификации Хиваринена — Никкила с ортотолуидиновым реактивом, фибриногена - гравиметрическим методом по Рутбергу (B.C. Камышников, 2000), сиаловых кислот - методом Гесса (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1974) , С-реактивного белка - методом реакции преципитации в капилляре.

Все данные подвергнуты математической обработке с оценкой достоверности различий при р<0,05 - р<0,001, с этой целью использовали методы математической статистики, принятые в биологии и медицине (Г.Ф. Лакин, 1990). Числовой материал представлен в единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и стандартизации СЭВ 1062-68.

Мазок для цитологического исследования брали путем однократного проведения тампоном по ушному каналу и переносили полученный материал на предметное стекло, после чего делали мазок, который окрашивали готовым красителем «гемокрафиксом». Мазок исследовали при увеличении ок.10, об. 40 и увеличении ок.10, об. 90, обращали внимание на клеточный состав (эритроциты,

нейтрофилы, эозинофилы, эпителиальные клетки, макрофаги, атипичные клетки, бактерии); однородность клеток (размер и форма клеток; соотношение размера цитоплазмы и ядра, форма, восприимчивость к красителям, размер ядра, различия в форме и размере ядер, деформацию, форму и размер ядрышек, наличие вакуолей и митозов).

Оценку мазка проводили путем подсчитывания количества поверхностных клеток эпителия, глубоких клеток эпителия, нейтрофилов, а также наличия бактерий и грибов в 10 полях зрения с последующим их подсчетом по полям зрения. Исследования проводили под иммерсией светового микроскопа (объектив х90, окуляр х10).

Для микробиологического исследования мазок из наружного слухового прохода берется по определенной методике. Сначала в наружный слуховой проход вводится стерильная канюля отоскопа. Затем ушной канал тщательно осматривается, стерильный тампон, смоченный физиологическим раствором, закрепленный на изогнутом зажиме Кохера, вводят по каналу канюли отоскопа и собирают материал для бактериологического исследования. Затем тампон помещают в стерильную чашку Петри. Микробиологические исследования проводили по общепринятой схеме.

Гистологические исследования проводились по общепринятой методике (Ю.И. Афанасьев с соавт., 1967). Образцы тканей фиксировали в 10%-ном формалине, обезвоживали в спиртах нарастающей концентрации и хлороформе, заливали в парафин, гистосрезы делали на санном микротоме толщиной 6-8 мкм, окрашивали гематоксилин-эозином, изучали и фотографировали с помощью светового микроскопа МБИ-15.

Цифровой материал обрабатывали с использованием методов вариационной статистики (Г.Ф. Лакин, 1990), компьютерной программы «Stadia» и электронных таблиц Microsoft Excel (B.B. Чудинов, 2000).

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Распространение, сезонность и породная предрасположенность к аллергическим отитам у собак

Мы провели ретроспективный анализ заболеваемости собак незаразными болезнями, среди которых заболевания кожи составили 32,4% от всего нозологического фона, при этом более 50% всех животных с кожными

проблемами имели аллергический дерматит. Лишь у 12% собак аллергия протекает с системными поражениями кожи, в остальных случаях - это локальные формы заболевания, первое место среди которых занимает аллергический отит.

Клиническое проявление наружных отитов имеет выраженную сезонность. Так. на лето 2000 г. пришлось 22.8% всех случаен заболевания; на осень - 28.3%; зиму - 13,9%: весну - 35,0% (рис. 1).

□ лето Носень Озима Овесна 35%

Рис. !. Заболеваемость отитом в разные сезоны года.

Выявлена породная предрасположенность к наружным отитам у собак. 1 {аиболыпая предрасположенность имеется у спаниелей, доля которых в городской популяции собак составляет 9.38%. а среди всех заболевших собак -Еб:21%. Второе место по предрасположенности к отитам занимает порода чау-чау: при распространении в популяции их доля составила 4,95%. тогда как среди заболевших собак 8,01%. Менее предрасположены к наружным отитам сенбернары, московские сторожевые, французские бульдоги, немецкие овчарки и боксеры,

2.2.2. Клинические исследования собак, больных аллергическим отитом

Клинические исследования проведены у всех собак с наружным отитом.

Симптомы наружного отита у собак довольно разнообразны. Тяжесть и продолжительность болезни зависят от целого ряда факторов: неспецифической резистентности организма и патогенности микрофлоры, осложняющей наружный отит. В зависимости от степени выраженности местных и системных проявлений воспалительного процесса заболевания мы выделили четыре степени тяжести

заболевания, в соответствии с которыми распределили животных по группам:

I степень - минимальные локальные поражения, без системных проявлений. Умеренный зуд, невыраженное покраснение, выделений из уха нет или они очень скудные. Лабораторные показатели без отклонений.

II степень - умеренные локальные поражения, незначительные выделения. Сильный зуд или боль, вторичная инфекция, небольшие отклонения лабораторных показателей.

III степень - выраженные локальные поражения, проявляющиеся острыми воспалительными явлениями, отеком, интенсивным пароксизмальны зудом, тяжелыми бактериальными осложнениями, выраженными отклонениями лабораторных показателей (эозинофилия, анемия, лейкопения или лейкоцитоз, моноцитоз или моноцитопения, повышенная СОЭ, диспротеинемия, снижение общего числа лимфоцитов).

В редких случаях регистрируется IV степень тяжести - максимальная, характеризующаяся выраженными воспалительными явлениями, постоянным зудом, вторичной инфекцией, лихорадкой, астенией, анорексией и тяжелым общим состоянием, значительными изменениями лабораторных показателей.

Среди всех обследованных животных больше всего отмечалось собак с тяжестью течения наружного отита первой степени - 348, II степень тяжести течения отмечалась у 159 собак, третья и четвертая степень соответственно у 126 и 21 собаки. Таким образом, тяжелые системные проявления встречаются только у 3,2% животных с наружным отитом. Чаще всего наружный отит протекает как локальное заболевание без системных проявлений с тяжестью течения I и II степени, что составляет 77,4%; у 19,4% собак наружный отит протекает с невыраженными системными проявлениями.

2.2.3. Изменения морфологических и биохимических показателей крови при аллергических отитах у собак

Морфологические показатели крови характеризовались отсутствием изменений при I и II степени тяжести наружного отита и незначительным снижением числа эритроцитов при III степени тяжести течения воспалительного процесса, достоверным снижением при IV степени тяжести течения наружного отита. При этом число эритроцитов и количество гемоглобина снижались соответственно до 5,9±0,21*1012/л и 135+3,48 г/л при норме у клинически здоровых собак 8,3+0,16* 1012/л и 165+2,8 г/л с высокой степенью достоверности (Р<0,01).

Таблица 1

Гематологические показатели у собак, больных аллергическим отитом

Показатели, ед. измерения Здоровые Степень тяжести наружного отита

I II III IV

Эритроциты, 10и/л 8,3+0,16 8,3+0,16 8,3±0,16 6,5±0,18* 5,9+0,21*

Гемоглобин, г/л 165±2,8 165+2,8 165+2,8 150±2,6 135±3,5*

Гематокрит 0,48±0,1 0,48+0,1 0,48+0,1 0,44±0,02 0,42±0,02

СОЭ, мм/ч. 2,8+1,3 2,8+1,3 2,8±1,3 16,0+4,3* 30,0+6,8*

Примечание: * - Р<0,01 относительно здоровых собак

Отмечены значительные отклонения в СОЭ у собак, больных наружным отитом III и IV степени тяжести, до 44±12,3 мм/ч при норме 2,0±1,1 мм/ч. Скорость оседания эритроцитов четко отображала тяжесть течения заболевания: по мере утяжеления процесса происходило повышение СОЭ. Так, относительно здоровых животных СОЭ у собак с 111 и IV степенью тяжести было выше в 5,7 и 10,7 раза соответственно.

У собак, больных наружным отитом, число лейкоцитов в крови

повышалось при III и IV степени тяжести до 15,2+0,21 и 29,6+1,23109/л соответственно, что превышало этот показатель относительно здоровых животных в 1,6 и 3,1 раза (табл. 2), в основном, за счет палочкоядерных нейтрофилов, при четвертой степени тяжести появились юные формы, при IV степени тяжести число моноцитов возросло в 1,9 раза в сравнении со здоровыми животными.

Таблица 2

Лейкограмма собак, больных аллергическим отитом

Показатели, ед. измерения Здоровые Степень тяжести наружного отита

I И III IV

Лейкоциты, *10'/л 9,66±0,2 9,66±0,2 9,66±0,2 15,2±0,21' 29,6±1,23*

Эозинофилы, % 5,5+0,2 5,5±0,2 5,5±0,2 6,5±0,12 1,3±0,3*

Юные, % - - - - 5,2+0,14

Палочкоядерные нейтрофилы, % 4,8±0,14 4,8±0,14 4,8±0,14 7,4±0,18* 23,4±0,34*

Сегментоядерные нейтрофилы, % 52,7+1,4 52,7+1,4 52,7±1,4 53,1±1,4 51,1+1,13

Лимфоциты, % 32,4+1,2 32,4±1,2 32,4+1,2 28,5±1,1 11,4±0,4*

Моноциты, % 4,6±0,12 4,6±0,12 4,6±0,12 3,8±0,24 8,6±0,11*

Примечание: * - Р<0,01 относительно здоровых собак.

При IV степени тяжести заболевания установлено снижение числа эозинофилов в 4,2 раза и лимфоцитов — в 2,8 раза.

Таблица 3

Биохимические показатели у собак, больных аллергическим отитом

Показатели, ед. измерения Клинически здоровые Степень тяжести наружного отита

I 11 III IV

Общий белок, г/л 67,7+2,8 66,1±1,8 65,9+1,7 65,5+0,6 61,9±0,9

Альбумины, г/л 26,4+0,5 25,4±0,5 24,6±0,31 23,6±0,7 19,1+0,8

Глобулины, г/л 39,9±0,6 40,8+0,6 41,4±0,5 41,8±0,8 42,8±0,6

- глобулины 3,3±0,2 3,8±0,2 4,1+0,2' 4,7±0,2* 5,4±0,3*

а2 - глобулины 7,1 ±0,3 7,9+0,3 8,3±0,2 8,9±0,3* 9,2±0,3*

Р - глобулины 8,7±0,2 8,4+0,2 8,1±0,3 8,0+0,2 8,2+0,4

у - глобулины 20,9+0,3 20,6+0,2 20,5+0,3 20,2±0,3 19,1 ±0,2

Креатинин, мкмоль/л 80,0±5,3 82,0+5,3 83,4±3,3 95,0+10,3 110,0±20,3*

Мочевина ммоль/л 6,0±1,5 6,0+1,1 9,0±2,3 9,0+1,7* 12,0±3,3*

Фибриноген, г/л 3,2±0,08 3,3±0,1 3,8±0,09 4,2±0,09* 6,1+0,1*

С-реактивный белок, кресты - - - 1,2±0,02 1,7+0,01

Аланинаминотрансфераза, Е/л 82,35±9,46 82,35+9,46 86,77±15,7 86,77+15,7 86,77+15,7

Щелочная фосфатаза, Е/л 49,41±9,7 58,41±9,9 60,27±12,2 61,38±11,4* 94,27±12,7*

Билирубин, мкмоль/л 5,31+0,94 5,31+0,94 7,38+0,42 8,64+0,33* 9,04±0,48*

Глюкоза, ммоль/л 4,8±0,23 4,98+0,21 4,2+0,18 3,91 ±0,21 3,57+0,18

Примечание: Р<0,01 относительно здоровых собак

У животных с наружным отитом I - III степени тяжести уровни общего белка, альбуминов, аланинаминотрансферазы были близки к таковым у здоровых собак.

Протеинограмма характеризовалась уменьшением содержания альбуминов и увеличением уровня а — глобулинов на фоне незначительного снижения общего белка. При наружном отите I - III степени тяжести количество общего белка мало изменялось, и только при IV степени тяжести количество общего белка снижалось до 61,9 г/л за счет уменьшения альбуминов до 19,1 г/л. Диспротеинемия обуславливается усилением биосинтеза белков острой фазы (С-реактивный белок, фибриноген) и подавлением синтеза альбумина токсического или компенсаторного характера.

При развитии заболевания III и IV степени тяжести уровень креатинина возрос в 1,2 и 1,4 раза соответственно, мочевины - в 1,5 и 2,0 раза, щелочной фосфатазы в 1,24 и 1,91, билирубина в 1,6-1,7 раза.

2.2.4. Бактериальные осложнения при аллергических отитах у собак

Мы выделили при аллергическом отите у собак 4 основных микроорганизма. При этом Staphylococcus intermedius выделялся от 64,0% собак, Proteus vulgaris от 31,0 % собак, Pseudomonas aeruginosa от 8,0% собак и Malassezia

расЫс!егта& от 85,0% собак. Как правило, при высокой степени пролиферации бактерий в ушном канале, в микробной ассоциации превалирует один микроорганизм, нередки ассоциации бактерий и грибов, в 90, 0% - это были грибы рода Ма1аз5ег1а.

У 32 собак с аллергическим отитом при цитологическом исследовании и последующем бактериологическом преимущественной микрофлорой ушного канала были грамположительные кокки 0,5-1 мкм. У остальных животных эти микроорганизмы присутствовали в меньших количествах, а у 21 собаки из 60 исследованных они не были выявлены (табл.4).

Таблица 4

Микрофауна при аллергическом отите у собак (п=60)

Возбудитель Количество животных

Голов %

Staphylococcus intermedius 38 63,3

Proteus vulgaris 21 35,0

Pseudomonas aeruginosa 7 11,6

Malassezia pachidermatis 51 85,0

Pseudomonas aeruginosa в мазках при цитологическом исследовании -прямые или изогнутые грамотрицательные палочки; средние размеры 0,5-1,0x1,5-5,0 мкм. В нативных препаратах подвижны (имеют один или два полярных жгутика). Pseudomonas aeruginosa патогенные свойства чаще проявляет в организме собак с ослабленным иммунитетом, поэтому наиболее часто отмечается при четвертой степени тяжести наружного отита у особей, имеющих анемию, гепатопривный синдром, почечную недостаточность и другие тяжелые расстройства.

Практически у всех собак в наружном слуховом проходе пролиферируют грибы рода малассезия. В мазках их наружного слухового прохода они выявляются в виде коротких изогнутых гифов и дрожжеподобных клеток («земляной орех»), при облучении лампой Вуда наблюдается жёлтое свечение.

Malassezia pachidermatis - широко распространённые микроорганизмы, колонизирующие кожные покровы практически всех собак (наиболее часто паховые складки и наружные слуховые проходы). У щенков до трех месяцев мы малассезию не выявляли; частота выделения резко возрастает после 1 года, что связано с активизацией работы сальных желёз, т.к. Malassezia pachidermatis для роста нуждается в сложных жирных кислотах.

Патогенез поражений остается недостаточно изученным. Malassezia

расЫскпгаПз может поражать роговой слой эпидермиса и вызывать лихенизацию с развитием черного акантоза, особенно часто у гладкошерстных собак, подверженных атопии. Именно у этих собак чаще всего и встречаются отиты третьей и четвертой степени тяжести, вызванные Ма1аззег1а расЫскгтайз.

2.2.5. Цитологические и гистологические изменения при аллергических отитах у собак

Одним из наиболее информативных методов диагностики формы и этиологии наружного отита является цитологический метод.

При проведении отоцитологических исследований у собак с атопическим наружным отитом всегда увеличивается количество слущенных клеток поверхностного эпителия. Эти клетки однообразны, больших размеров - около 2025 мкм, при форсированном выполнении мазка из уха клетки могут втулкообразно сворачиваться. Форма клеток полигональная, реже приближающаяся к округлой или слегка вытянутой. Ядро округлое, ярко окрашено, пикнотическое, очень мелкое, но чаще ядра в клетках полностью отсутствуют. При отоцитологическом исследовании у здоровых собак обнаруживается от 3 до 10 клеток поверхностного эпителия, бактерии и грибы отсутствуют. При утяжелении процесса все поля зрения покрывают эти клетки. На фоне слущивающегося эпителия наружного слухового канала обнаруживаются различные бактерии. В зависимости от их вида и степени пролиферации, а также выраженности гиперкератоза и экссудативных процессов ставился комплексный цитологический диагноз, при этом необходимо учитывать:

I - по выраженности гиперкератоза, дискератоза и десквамации эпителия наружного слухового прохода (исследования проводились в поле зрения микроскопа, об. 90, ок. 10)) выделяли три степени гиперкератоза:

1) невыраженный гиперкератоз - количество ороговевших клеток от 10 до 40, ядерные клетки отсутствуют (десквамации эпителия нет);

2) гиперкератоз средней степени с начальной десквамацией - количество ороговевших безъядерных клеток от 40 до 80 в поле зрения от 10 до 20 эпителиальных ядерных клеток в поле зрения;

3) выраженный гиперкератоз с выраженной десквамацией эпителия - в каждом поле зрения более 80 безъядерных ороговевших клеток, большинство из них свернуты в трубочку, более 20 ядерных эпителиальных клеток имеющих полиморфизм, сюда же относили мазки, в которых обнаруживались только ядерные эпителиальные клетки, роговых чешуек нет;

II - по бактериальной обсемененности выделяли 3 степени:

1) бактериальной обсемененности нет;

2) невыраженная бактериальная обсемененность (а. наличие малассезий от 20 до 80 в поле зрения, бактерии отсутствуют; б. наличие грамположительной микрофлоры от 20 до 80 в поле зрения; в. наличие грамотрицательной микрофлоры до 20 бактерий в поле зрения; возможно наличие малассезий и бактерий одновременно в одном поле зрения;

3) выраженная бактериальная обсемененность (наличие малассезий более 80 в поле зрения; грамположительных бактерий более 80 в поле зрения; грамотрицательных бактерий более 20 в поле зрения; наличие общего количества бактерий более 100 в поле зрения или больших конгломератов бактерий независимо от их тинкториальных свойств);

III - по выраженности экссудативной реакции выделяли три степени:

1) лейкоциты отсутствуют или имеются единичные нейтрофилы;

2) умеренная лейкоцитарная реакция, десквамация эпителия - от 10 до 80 нейтрофилов в поле зрения, единичные эозинофилы;

3) выраженная лейкоцитарная реакция, тяжелая десквамация эпителия - по всем полям зрения нейтрофилы, имеются эритроциты, в мазке встречаются единичные макрофаги, лимфоциты, эозинофилы и плазматические клетки, фибрин, эластические и коллагеновые волокна (продукты распада тканей).

При I степени тяжести воспалительного процесса мы чаще всего ставили следующий цитологический диагноз: невыраженный гиперкератоз без бактериальной обсемененности и нейтрофильной реакции - это был самый частый диагноз при отоцитологическом исследовании собак с аллергическим отитом.

Чаще всего при II, III степени тяжести воспалительного процесса цитологический диагноз - гиперкератоз средней степени с начальной десквамацией, невыраженной бактериальной обсемененностью: преимущественно малассезии, единичные нейтрофилы.

Таблица 5

Цитологические изменения при отите разной степени тяжести у собак.

Показатель Степень выраженности гиперкератоза

1 2 3

Заболело собак, гол. 342 221 91

Степень клинической тяжести I I, II, III II, III, IV

Показатель Степень бактериальное обсемененности

1 2 3

Заболело собак, гол. 127 498 29

Степень клинической тяжести I, II I, II, III III, IV

Степень выраженности экссудативных процессов

Показатель 1 2 3

Заболело собак, гол. 396 237 21

Степень клинической тяжести I, II II, III IV

При III - IV степени тяжести воспалительного процесса чаще других ставился диагноз - выраженный гиперкератоз с тяжелой десквамацией эпителия и бактериальной обсемененностью, много нейтрофилов. В таблице 5 показана корреляция между клинической картиной и отоцитологией.

Первая (реактивная) стадия аллергического отита клинически начинается появлением нечетко ограниченных, эритематозных, отечных, иногда слегка возвышающихся над уровнем неизмененной кожи очагов поражения. Как правило, свежие случаи таких поражений регистрируются редко вследствие их быстротечности. Чаще наблюдаются хронические очаги с красновато-синеватым оттенком, покрытые чешуйками - гиперкератоз с папилломатозными изменениями, реже атрофические поражения.

Гистологически в начальной стадии заболевания наблюдается резкий отек преимущественно верхней половины собственно кожи, расширение кровеносных сосудов, возможны экстравазаты. Кроме отека в сосочковом слое наблюдаются клеточные инфильтраты, состоящие преимущественно из гистиоцитов и единичных нейтрофильных гранулоцитов.

В дальнейшем по мере нарастания инфильтрации в ее составе начинают преобладать лимфоциты, среди которых находится небольшое количество плазмоцитов. Инфильтраты располагаются периваскулярно и очагами в сосочковом слое кожи. Часто можно видеть проникновение инфильтратов в эпидермальные слои.

В тяжелых случаях отек собственно кожи и отек базальных эпидермоцитов может быть настолько сильно выражен, что приводит к образованию трещин и даже пузырьков между эпидермисом и собственно кожей.

Воспалительный инфильтрат в результате отека разрежен, но имеет диффузный характер, состав его аналогичен описанному выше. В раде случаев акантоз сочетается со спонгиозом с образованием мелких пузырьков и паракератоза. После вскрытия пузырей и пузырьков они чаще всего покрываются корками, содержащими распавшиеся ядра клеток воспалительного инфильтрата.

Атрофические изменения при аллергическом отите характерны для хронического течения. При этом отмечается длительного течения процесс, гистологические изменения развиваются через 4 - 10 месяцев от начала заболевания. Начало заболевания соответствует процессам, описанным выше.

Клинически в начальной стадии появляются умеренно

инфильтрированные пятна синюшно-розового цвета, которые в дальнейшем сливаются. С течением времени кожа становится сухой, морщинистой, истончается, напоминая папиросную бумагу. Сквозь нее просвечивают кровеносные сосуды. В некоторых случаях развиваются очаги фиброза. Характерные гистологические признаки, позволяющие выявить патогномоничные морфологические изменения кожи, наблюдаются в стадии атрофии.

В ранней стадии атрофии эпидермис истончен, эпителиальные выросты сглажены. В собственно коже и отчасти в подкожной основе — периваскулярные инфильтраты из лимфоидных клеток и гистиоцитов. В верхней части собственно кожи инфильтрация принимает полосовидный характер, инфильтрат иногда отделен от эпидермиса узкой зоной неизмененной соединительной ткани. Позднее собственно кожа истончается, в верхних отделах нередко встречаются участки фиброзной ткани. Подкожная основа подвергается атрофии. Коллагеновые волокна истончены, эластические отсутствуют. Кровеносные сосуды, особенно венозные, нередко расширены.

Гипертрофические изменения при аллергическом отите могут носить папилломатозную форму и вилли, каждая из которых может сопровождаться гиперкератозом или протекать без нарушения ороговения.

Характерные признаки: акантоз, папилломатоз, гиперкератоз, иногда с участками паракератоза над вершинами сосочков собственно кожи. Эпителиальные выросты длинные и направлены своими нижними концами от периферии к центру очага, располагаясь по отношению к нему радиально. Клетки верхней части шиповатого и зернистого слоев вакуолизированы, крупные, не содержат гранул кератогиалина. Их ядра округлой формы, резко базофильные, окружены светлым ободком. Изменения могут быть без увеличения сосочкового слоя кожи. При этом выявляют акантоз, гиперкератоз с наличием большого

количества вакуолизированных клеток верхних отделов шиповатого и зернистого слоев. Отмечается вакуолизация роговых клеток. В базальном слое иногда наблюдается большое количество меланина. Для процесса характерно отсутствие папиллломатозных изменений.

Фиброзные поражения при наружном отите развиваются при длительном течении аллергического отита без серьезных клинических проявлений. Слуховой проход при этом резко сужен, иногда в виде щелей. У некоторых пород собак такие поражения носят наследственный характер, например, у шарпеев. В этом случае гистологически отмечается муциноз собственно кожи. В сосочковом слое отмечается выраженный отек, местами образуются щели, заполненные муцином. При взятии гистологического материала от фрагмента кожи тянется тяж густой слизи.

При фиброзных поражениях в сосочковом слое собственно кожи имеются различных размеров периваскулярные пролифераты, состоящие из лимфоидных элементов, гистиоцитов, иногда плазмоцитов. В пролифератах постепенно появляются веретенообразные или вытянутые клетки с удлиненными ядрами, располагающиеся в виде тяжей, переплетающихся в различных направлениях. Пролиферация фиброцитов имеет диффузный характер, занимая всю толщу собственно кожи.

Бактериальные осложнения по глубине поражения могут быть поверхностными и глубокими.

Аллергический дерматит, протекающий в виде пустулезного дерматита, характеризуется наличием пустул с эритематозным основанием на коже наружного слухового прохода, возможны поражения на других участках кожи.

В эпидермисе отмечается умеренный акантоз с удлинением и расширением эпидермальных выростов. В базальном и шиповатом слоях -эпидермоциты с явлениями внутриклеточного отека и сморщивания ядер. В расширенных межклеточных промежутках часто находятся гранулоциты.

3. ВЫВОДЫ

1. В нозологической структуре болезней собак в условиях Ростовской области болезни органа слуха составляют 13,6 %, из которых на долю наружных отитов приходится 56,7 %. Частота встречаемости по породам: спаниели, чау-чау, сенбернары, московские сторожевые, французские бульдоги, немецкие овчарки, боксеры. Клиническое проявление заболевания имеет выраженную сезонность: лето - 22,8%, осень - 28,3%; зима - 13,9%; весна - 35,0%.

2. По клиническим и лабораторным показателям выделяются 4 степени тяжести наружного отита: I степень - минимальные локальные поражения без системных проявлений, лабораторные показатели без отклонений; II степень -умеренные локальные поражения, небольшие отклонения лабораторных показателей; III степень - обширные локальные поражения, характеризующиеся признаками острого воспаления, выраженные отклонения лабораторных показателей; IV степень характеризуется ярко выраженными признаками местного воспаления и тяжелым общим состоянием, значительными изменениями лабораторных показателей.

При IV степени тяжести течения наружного отита число эритроцитов и количество гемоглобина достоверно (Р<0,01) снижаются в сравнении со здоровыми животными соответственно до 5,9±0,21*1012/л и 135+3,48 г/л, уровень общего белка снижается до 61,9 г/л за счет уменьшения количества альбуминов. .

При III и IV степени тяжести наружного отита число лейкоцитов в крови повышается соответственно до 15,2+0,21 и 29,6+1,23*109/л с достоверным увеличением числа нейтрофилов и моноцитов, уменьшением количества лимфоцитов и эозинофилов; уровень креатинина возрастает в 1,2 и 1,4 раза соответственно, мочевины - в 1,5 и 2,0 раза, шелочной фосфатазы в 1,24 и 1,91, билирубина в 1,6-1,7 раза, СОЭ в 5,7 и 10,7 раза соответственно в сравнении со здоровыми животными.

3. В 77,4% случаев наружный отит протекает как локальное заболевание без системных проявлений с тяжестью течения I и II степени, у 19,4% собак протекает с невыраженными системными проявлениями (III степень); тяжелые системные расстройства встречаются у 3,2% животных (IV степень).

4. Staphylococcus intermedius обнаружен у 64%, Proteus vulgaris у 31 %, Pseudomonas aeruginosa у 8% и Malassezia pachidermatis у 85% собак, больных наружным отитом чаще в ассоциации бактерий и грибов. При высокой степени пролиферации бактерий в ушном канале, как правило, превалирует один микроорганизм.

5. Наименьшее число выделенных культур стафилококков (28%) оказалось чувствительно к ципрофлоксацину и генгамицину (35%), наибольшее - к цефкиному (59%) и доксицшлину (64%); наименьшее число выделенных культур Proteus vulgaris оказалось чувствительно к цефазолину (10%) и цефацроксилу (30%), наибольшее- к цефоперазону (69%) и цефкиному (73%); наименьшее число выделенных

культур Pseudomonas aeruginosa оказалось чувствительно к ципрофлоксацину(10%)и цефазолину (14%), наибольшее-ксинулоксу (54%) ицефоперазону (64%).

6. Отоцитологический диагноз: при I степени тяжести воспалительного процесса - невыраженный гиперкератоз без бактериальной пролиферации и нейтрофильной реакции; при II степени тяжести - гиперкератоз средней степени с начальной десквамацией эпителия, невыраженной бактериальной пролиферацией и единичными нейтрофилами; при III, IV степени тяжести - выраженный гиперкератоз с тяжелой десквамацией, сильно выраженной бактериальной пролиферацией и многочисленными нейтрофилами.

7. Гистологическим исследованием выявлено, что в начале аллергического отита всегда развивается реактивная стадия, для которой характерны отек и инфильтративные процессы. При продолжающемся процессе и хронизации возможны изменения атрофические и гипертрофические. Атрофические изменения развиваются чаще у пуделей и балонок во второй половине жизни. Гипертрофические изменение более характерны для жесткошерстных собак. Наиболее распространены гипертрофические поражения ушного канала с развитием папилломатоза и гиперкератоза различной степени выраженности.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Степень тяжести наружного отита определяется с учетом клинических признаков, данных отоцитологического мазка, морфологических и биохимических исследований крови.

2. Гистологическое исследование проводить с целью выявления инфильтративных, гипертрофических или атрофических процессов, определяющих индивидуальность течения заболевания у данного животного.

5. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Коновалов С.А. Ореховое масло в лечении неспецифических отитов у собак. /С.А. Коновалов, Ю.А. Морозов // Материалы региональной конференции. Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных «Золотая осень Кубани». - Краснодар, 2001. - С. 27-28.

2. Коновалов С.А. Эмпирическая антибиотикотерапия при атопических наружных отитах у собак с системными проявлениями. / С.А. Коновалов, С.Н. Карташов, С.Н. Лысенко, A.B. Шаповалов // Ростов н/Д., «ЦВВР», 2005. - 22 с.

3. Коновалов С.А. Местное лечение наружных отитов. / С.А. Коновалов, С.Н. Карташов, A.B. Шаповалов, Т.П. Федорова, Л.Н. Федоров // Ростов н/Д., «ЦВВР», 2005.- 17 с.

4. Коновалов С.А. Цитологическая диагностика наружных отитов у собак. / С.А. Коновалов, С.Н. Карташов, С.Н. Лысенко, A.B. Шаповалов // Ростов н/Д., «ЦВВР», 2005. - 23 с.

5. Коновалов С.А. Морфологические и биохимические изменения крови при атопическом отите у собак. /С.А. Коновалов, Л.П. Миронова, Федоров Л.Н., Т.П. Федорова, А.И. Бутенков //Научная мысль Кавказа. Северо-Кавказский научный центр высшей школы. - Ростов на Дону, 2006. №3. С. 229-233.

6. Коновалов С.А. Наследственная предрасположенность собак к атопическому отиту. /С.А. Коновалов, Л.П. Миронова, Федоров Л.Н., Т.П. Федорова, А.И. БутенкоЕ! //Научная мысль Кавказа. Северо-Кавказский научный центр высшей школы. - Ростов на Дону, 2006. №4. С. 178-180.

7. Морозов Ю.А. Мазь Конькова при лечении гнойных отитов у собак. / Ю.А. Морозов, С.А. Коновалов, А.П. Кравченко // Межрегиональная дистанционная научно-практическая конференция студентов, аспирантов и молодых учены «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекс России». - Персиановка, 2003. - С. 58.

8. Морозов Ю.А. Мазь Конькова при лечении гнойных отитов у собак. / Ю.А. Морозов, С.А. Коновалов, А.Г. Смирнов, А.П. Кравченко // Материалы Республиканской научно-практической конференции, посвященной памяти известных ученых ДонГАУ «Проблемы развития агропромышленного сектора экономики и пути их решения». - Персиановка, 2003. - С. 210.

9. Миронова Л.П. Клиническая классификация атопических отитов у собак. / Л.П. Миронова, С.А. Коновалов, Федоров Л.Н., Т.П. Федорова, А.И. Бутенков //Научная мысль Кавказа. Северо-Кавказский научный центр высшей школы. -Ростов на Дону, 2006. №1. С. 185-189.

На правах рукописи

КОНОВАЛОВ Сергей Анатольевич

Морфофункциональные показатели отитов аллергической этиологии у собак 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Формат 60х84'/]6

Гарнитура Тайме. Печать офсетная. П. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 483

Отпечатано в типографии ООО «Формат», г. Воронеж, Московский пр-т, 36-а

Ак1уалыюсть iewbi. Проблема воспали 1ельных заболеваний наружного слуховою прохода у собак занимает в настоящее время первое место в cipymype заболеваемосш Э1их животных (С.С. Бакшеева 1995, 1996; Л.Д. Белов, 1995; A.M. Ермаков, 1997, 1998; Д.Н. Карлотти, 1997; Д.11. Казаков, 1999). Во всех странах мира в последние годы отмечен значительный рост pacnpociранения наружных отитов у собак (А.А. Кузьмин, 1992; С.П. Лепилов, 1993; А.И. Кашин, 1994; ПЛ. Ишаюв, 1991, 1995; Н.А. Калинин, 1997; Д.Н. Карлогги, 1997). В России за последние 5 ле1 Macioia эюй патоло1ии увеличилась на 48% и продолжает расти.

Особое мест в свя?и с широким pacripociранением занимаюi наружные 01и1ы, развившиеся на фоне аллерши (В.А Лукьяновский, 1988, 1995, 1998; А.И . Кашин, 1994; Э.А. Багкаев, 1996, 1997; I. Р. Лещепко, 1998; J1.K). Карпенко ,1995, 1997, 1999; К.С. Медведев, 1999). Они возникают в любом возрасте, характеризуюiся длительным, затяжным 1ечением, приводяi к раз-ви1ию необратимых изменений и нарушению рабочих качеав собаки, наносят огромный ущерб собаководству. Вторично вовлекаются в иаюло1иче-ский процесс нервная, сердечно-сосудиаая, эндокринная, выделительная и другие системы организма. Глубокие изменения зафа1ивают и сосудиаую систему органа слуха. Традиционные лекареiвенные и xnpypiические мею-ды лечения отитов собак и их осложнений малоэффекшвны, потому чю вопросы морфологических изменений при этой паюлогии изучены недостаточно полно.

Учитывая сложность патогенеза, стадийноеib течения, мноюликость клинических проявлений и морфологических изменений аллергических ош-тов > собак, связанные с этим большие фудности в постановке правильного диагноза, а, следовательно, адекватной терапии мы поаавили цель изучим, морфофункциональные изменения при отитах у собак аллергической тюло-гии.

Цель работы: изучить распространение, патогенез и морфофункцио-нальные изменения при аллергических отитах у собак.

Задачи исследования:

1) изучить распространение, выяснить сезонность и породную предрасположенность собак к аллергическим отитам;

2) изучить клинические признаки аллергических отитов у собак и систематизировать их в зависимости от тяжести клинической картины;

3) изучить морфологические и биохимические изменения крови при аллергических отитах у собак;

4) изучить состав микрофлоры, выделяемой при наружных отитах, и ее чувствительность к антибиотикам;

5) выяснить изменения, возникающие в цитологической и гистологической картине при аллергических отитах у собак;

6) выяснить взаимосвязь между тяжестью клинического проявления аллергического отита, морфологическими и биохимическими показателями крови, а также изменениями в цитологической и гистологической картине при данном заболевании.

Научная новизна. Впервые выявлены морфологические и биохимические изменения в картине крови при аллергическом отите у собак; на основании цитологических и гистологических исследований изучены морфологические изменения в коже наружного слухового прохода при аллергическом отите у собак; выяснена связь между картиной цитологического мазка из уха, гистологическими изменениями и тяжестью течения аллергического отита у собак.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования позволяют объективно оценить тяжесть течения аллергического отита. Проведенные морфологические исследования позволяют прогнозировать как тяжесть течения аллергического отита, так и прогноз при этом заболевании, а также прогноз при этом заболевании. Результаты морфологических исследований позволяют судить о стадийности течения аллергического отита у собак, на основании цитологических исследований определять стадию заболевания у конкретного животного, что имеет большое практическое значение.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ГНУ СКЗНИВИ (19992002); на региональной конференции по актуальным проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных «Золотая осень Кубани - 2001» (г. Краснодар, 2001); на межрегиональной дистанционной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (п. Персиановка, 2003); на Республиканской научно-практической конференции, посвященной памяти известных ученых ДонГАУ «Проблемы развития агропромышленного сектора экономики и пути их решения» (п. Персиановка, 2003).

Реализация результатов исследований. Разработанные практические предложения реализуются в работе ветеринарной клиники «Вита-Вет» (г. Шахты, г. Таганрог, г. Красный Сулин), в ветеринарной клинике «Неотложной ветеринарной помощи» г. Волгоград, используются в практической работе ветеринарными специалистами Ростовской области, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах акушерства и хирургии, внутренних незаразных болезней и патофизиологии ДонГАУ. На основании результатов собственных исследований написаны методические рекомендации: «Цитологическая диагностика наружных отитов у собак», «Местное лечение наружных отитов», «Эмпирическая антибиотикотерапия при атопических наружных отитах у собак с системными проявлениями», которые рассмотрены и рекомендованы НТС Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Ростовской области (протокол №1 от 12.10.2005) Публикации. По диссертационной работе опубликовано 6 статей, в том числе три из списка бюллетеней ВАК, изданы три методические рекомендации, утвержденные 111С Федеральной службы по ве1еринарному и фи-тосантарному надзору Ростовской области (протокол №1 от 12.10.2005 i.).

Положения, выносимые на защиту: взаимосвязь между 1яжес1ью клинического течения аллер! ическою оIиIа и изменениями морфолог ичееких и биохимических показаелей крови. зависимое!ь циюло!ической и ihctojioiической картины при аллергических ошгах от длительности течения заболевания, качественного и количественною соаава микрофлоры осложняющего аллер1 ический процесс.

Структура и обьем работы. Диссер1ация изложена на 144 араницах компью1ерного текста, состоит из введения, обзора литературы, резулыаюв собственных исследований, а 1акже обсуждения, выводов, предложений для пракшки и списка литературы. В диссертации приведено 12 таблиц и 50 рисунок. Список литературы включая 267 исючпиков, в юм числе 102 иностранных авторов.

4. ВЫВОДЫ

1. Критерием постановки диашоза на ajuiepiический othi является отсутствие парам тарных, бактериальных, грибковых и аутоиммунных поражений кожи при одновременном увеличении сывороточного IgE выше 100 МЕ/мл, наличии полиморфных поражений кожи наружною слуховою прохода.

2.В нозологической структуре болезней собак в условиях Ростовской области болезни opi ana слуха составляют 13,6 %, из коюрых на долю аллергических отитов приходится 56,7 %. Часюта встречаемости гю породам: спаниели, чау-чау, сенбернары, московские сторожевые, французские буль-д01и, немецкие овчарки, боксеры. Клиническое проявление заболевания имеет выраженную сезонность: лето - 22,8%, осень - 28,3%; зима - 13,9%; весна-35,0%.

3. По клиническим и лабораторным показателям выделяются 4 степени Iяжести аллергическою oinia: I степень - минимальные локальные поражения без системных проявлений, лабораторные показатели без отклонений; II степень - умеренные локальные поражения, небольшие отклонения лабораторных показателей; III степень - обширные локальные поражения, характеризующиеся признаками острого воспаления, выраженные отклонения лабораторных показателей; IV степень характеризуется ярко выраженными признаками местного воспаления и тяжелым общим состоянием, значительными изменениями лабораторных показателей.

Аллергический отит, протекающий с клиническим течением 1-й и П-й степени гяжести, характеризуется отсутствием бактериальных осложнений, тяжесть течения аллергическою отита Ш-й и IV-й степени, обусловлена бактериальными осложнениями.

При IV-й степени гяжести течения наружною oi и га число эритроциюв и количество гемоглобина достоверно (Р<0,01) снижаются в сравнении со

1 ^ здоровыми животными соответственно до 5,9±0,21*10 7л и 135±3,48 i/л, уровень общего белка снижается до 61,9 г/л за счет уменьшения количества альбуминов.

При 111-й и IV-й степени тяжести наружного oima число лейкоцитов в крови повышается соответственно до 15,2±0,21 и 29,6±1,23*109/л с достоверным увеличением числа нейтрофилов и моноцитов, уменьшением количества лимфоцитов и увеличением зозипофилов; уровень Kpeaiинина возрастает в 1,2 и 1,4 раза соответственно, мочевины - в 1,5 и 2,0 раза, щелочной фосфаты в 1,24 и 1,91, билирубина в 1,6-1,7 раза, СОЭ в 5,7 и 10,7 раза соо1вет-cibciiho в сравнении со здоровыми живошыми.

4. В 77,4% случаев аллергический отит протекает как локальное заболевание без системных проявлений, с тяжесгыо 1ечепия 1-й и П-й степени и без бактериальных осложнений. У 19,4% собак протекает с невыраженными системными проявлениями (111-я степень); тяжелые сиаемные рассгрой-ciBa и бактериальные осложнения варечаются у 3,2% животных (lV-я степень).

5. При осложнении аллергического отита микрофлорой, Staphylococcus intermedius обнаружен у 64%, Proteus vulgaris у 31 %, Pseudomonas aeruginosa у 8% и Malassezia pachidermatis у 85% собак. При высокой степени бактериальной обсемененности ушного канала, как правило, превалирует один микроорганизм. При аллер1 ическом отите 1-й и П-й степени тяжести отмечается умеренный рост Staphylococcus intermedius.

6. Наименьшее число выделенных кулыур стафилококков (28%) оказались чувствительными к ципрофлоксацину и гентамицину (35%), наибольшее - к цефкиному (59%) и доксициклину (64%); наименьшее число выделенных культур Proteus vulgaris оказались чувствительными к цефазолину (10%) и цефад-роксилу (30%), наибольшее- к цефоперазону (69%) и цефкиному (73%); наименьшее число выделенных культур Pseudomonas aeruginosa оказались чувствительными к ципрофлоксацину (10%) и цефазолину (14%), наибольшее - к сину-локсу (54%) и цефоперазон> (64%).

7. Оюциюлогический диагноз: при 1-й степени ajuiepi ическо1 о oima -невыраженный гиперкератоз без бактериальной обсемененности и пейтрофильной реакции; при 11-й сгепени тяжесж - гиперкераюз средней сгепени с начальной десквамацией эпителия, отсутствием или невыраженной бактериальной обсемененностью и единичными нейгрофилами; при II 1-й, IV-и степени гя/кесги - выраженный гиперкераюз с тяжелой десквамацией, выраженной бакгериальной обсемененностью и многочисленными нейгрофилами.

8. Гистологическим исследованием выявлено, чю в начале аллергического отита всегда развивается реактивная стадия, для которой характерны отек и инфильтративные процессы. При продолжающемся процессе и хронизации, возможны, как атрофические, гак и гипертрофические изменения. Наиболее распространены гипертрофические поражения ушного капала с развитием папилломагоза и гиперкератоза различной сгепени выраженности. Гипертрофические изменения с гиперкератозом, изменяют функциональные свойства наружного слухового прохода, обуславливая тяжелые бактериальные осложнения.

9. Отоцитологические изменения коррелируют с гяжесгыо течения аллергического отита, характерными гистологическими изменениями и могуг служить дополнительным методом диаг ностики аллерг ическою огита.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для определения степени тяжести аллергического отита предлагаем использовать цитологический метод диагностики, основанный на трех критериях: гиперкератоз, бактериальная обсемененность и нейтрофильная экссудация.

2. Во всех случаях длительного течения аллергического отита предлагаем проводить гистологическое исследование с целью выявления инфильтративных, гипертрофических или атрофических процессов, определяющих прогноз и индивидуальность течения заболевания у данного животного.

3. Полученные данные по морфологическим и цитологическим изменениям при аллергическом отите у собак могут быть использованы при написании соответствующих разделов справочных и учебных пособий по цитологии, гистологии и физиологии животных, чтении лекций и проведении практических занятий по цитологии и гистологии для студентов ветеринарных факультетов.

118

1.7 Заключение

Ajuiepi ия - иммуноопосредованная болезнь с хронически рецидивирующим течением и определенной эволюшвной возрааной динамикой. Характеризуем аномалиями клеточного иммунитета в коже с дисрегуляцией I-клеточного звена и гиперчуветвителыюс1ью ко mhoihm иммунным и неиммунным стимулам. Проявляется зудящими воспали 1ельными изменениями кожи. По данным разных авторов, от 50% до 80 % собак с аллер! ией арада-Ю1 ее локальной формой - аллергическим наружным ошгом. Причиной лому являйся длшельная ремиссия процесса на поверхности кожи. В наружном ушном канале у собак с некоторыми конституциальными особенное 1ями создаются блаюприягные условия для размножения микрофлоры. Учишвая mhoi очисленные научные факты, полученные в последние годы и уточняющие ряд сторон паго1енеза аллергического отита, можно mwiaiaib, чю основную роль в хронизации аллергическою дермашш и формировании непрерывного или часто рецидивирующего типа его течения играет условпопа-югенная флора, в том числе грибковая (у собак чаще всею стафилококки, Pseudomonas и Pityrosporon.), на что ранее обращали гораздо меньше внимания, чем на алиментарные факторы. Подобные ишеркурреншые заболевания, также как друые поражения внутренних органов, формируки паголсни-ческий, отягчающий фон для развития аллергического ornia, но не являются основой формирования этой болезни, имеющей специфический пато! енез.

Иммунопаю! енез аллергического дерматита стаповикя более понятным в результате выяснения характера аберрашной циюкиновой регуляции 1-хелперов и цитокиновой продукции в иммунном ответе кожи у больных. Тем не менее, остаются неясными первичный продукт юнов аллергического дерма!иIа, первичное звено его патологии, а также детали взаимодействия в этом процессе разных клеточных популяций в коже: Гх1 и Тх2, кератиноци-тов, тканевых базофилов, эозинофилов, эндотелиальных клеток, апгшеп-представляющих клеток, Т-супресеоров.

Таким образом, в настоящее время в разных источниках предла1аю1ся различные классификации аллергических oihiob у собак, основанные на предрасполагающих и основных факторах действующих постоянных и временных причинах. Однако такие классификации не всегда дак>1 полную ха-рактериаику заболеванию. Недосшочно изучены системные проявления при аллергическом отите, а также морфологические изменения при данной паюло1ии. Некоторая разноречивость сведений об отитах у собак различной этиологии, их патоморфоло! ии, ограниченная информация по этому вопросу, дало основание для исследования этой проблемы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и меюды исследования

Настоящая работа выполнена в 2000-2005 п. в лабораюрии паразитологии с сектором синтеза ГНУ «СКЗНИВИ». Основные этапы, апробация и практическое применения разработанных методик проведены в ветеринарной клинике «Вита» (г. Шахты Ростовской области) и ветеринарной клинике ГНУ «СКЗНИВИ».

При изучении pacupociранения отиюв использовались отчетные материалы ветеринарных клиник «Вига» (г. Шахгы, г. Красный Сулин, Роаов-ской области), ветеринарной клиники «Скорой неотложной помощи» (г. Волгоград).

За период с 2000 по 2004 гг. клиническому осмотру подвершу Го 8460 собак, больных различными инфекционными и незаразными болезнями. Из них у 1154 (13,6%) живоIных были обнаружены отклонения со стороны органа слуха, у 654 из них был диагностирован Аллергический оiиi (56,7%), как местное проявление аллергическою дерматит.

Критерием постановки диагноза на аллергический отит являемся oicyi-ствие паразитарных, бактериальных, грибковых и аутоиммунных поражений кожи при одновременном увеличении сывороючного IgE выше 100 ML/мл, наличии полиморфных поражений слизистой наружною слуховою прохода, а в анамнезе и других участков кожи.

Диагноз аавили на основании результатов клинических, лабораторных, иммунологический, цитологических и гистологических методов исследования. К отитам относили все заболевания в обласги наружного, среднею и внутреннего уха, протекающие на фоне любого преморбидного состояния. При поступлении животных в клинику для исследования оiбирали животных, имеющих любые отклонения со стороны органа слуха. Всех животных подвергали тщательному клиническому осмотру, затем у них брали кровь для морфологических и биохимических исследований, а также мазки из наружного слухового прохода для оюци iojioi ического исследования.

Исследование проводили на животных со спошапным аллергическим отитом разной степени активности воспали 1ельного процесса.

При поаановке диагноза всех животных разбили на чешре группы с разной тяжестью аллергического отита. За всеми живошыми было установлено наблюдение с момента возникновения заболевания и отслежены все стадии аллер1 ическою оiиiа оi легкою до тяжелого и очень 1яжелою течения.

При сборе анамнеза жизни и заболевания особое внимание уделяется характеру питания собаки, моциону, моменту начала заболевания и возможной ею связи со временем юда, нарушением кормления и содержания. Особенно тщательно изучается характер выделений из ушною канала (внешний вид, запах, наличие примесей крови, i ноя).

Клинический осмотр проводили по общеприпяюй меюдике. Исследовали цвеI и сосюяпие кожных покровов, iyprop тканей, мышечный юнуе, состояние языка, форму и размер живота.

Исследование ор1анов фудной и брюшной полостей проводили с применением методов пальпации, перкуссии и аускулыации. Оценивается состояние мышц, сусмавов, скелет, а также неврологический ciaiyc живошо-го.

Главной задачей диагностики является установление диатоза патологии со стороны наружного уха. Эта задача в основном решается при первичном приеме больного животного. Уточненная диа1носгика проводится с помощью специализированных методов исследования.

После установления диатоза у всех собак с наружным oihiom проводили морфологические и биохимические анализы крови.

Лабораторные исследования проводили в лаборатории пара зи iojioi и и с сектором синтеза ГНУ «СКЗНИВИ». Кровь для биохимическою и морфоло-I ического исследования брали из подкожной вены предплечья, ла1еральной вены сафена, а при их плохой выраженности из яремной вены.

Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, определение концентрации 1емоиюби-на гемитлобинцианидным методом, гематокрита, лейкограммы по общепринятым методикам (В.Г.Колб с соавт, 1976).

Биохимический анализ крови включал определение следующих показателей: щелочной фосфатазы по ферментивпому гидролизу п-нитрофенилфоефата, активности аспартатаминотрансферазы и аланинами-но1рансферазы но меюду Райтмана-Френкеля, а-амилазы - по Каравею, глюкозы - орто-толуидиновым методом, мочевины - с помощью био-лахема-теста, белка - с помощью биуреювой реакции, билирубина - по методу Рнд-ратника-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креаж-пина - методом Яффе, мочевины - но реакции с диацегилмонооксимом в сильно кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа (В.А. Корячкин с соавт, 2001).

Из биохимических исследований, характеризующих воспалительный процесс, проводили определение фибрино1ена гравиметрическим меюдом но Рутбергу (B.C.Камышников, 2000), сиаловых кислот - по меюду Гесса (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1976), общей активности лактатдетидро1 еназы, основанном на оптическом тесте Варбурга (оптическом эффекте, связанном с превращением НАД в НАД'Н), С-реактивного белка - меюдом реакции преципитации в капилляре (В.В. Меньшиков, 1987).

Для определения состава микрофлоры осложняющей аллер1 ический отит, мы провели микробиологические исследования. Посевы naiматериала проводили на МПБ, после первичной инкубации пересевали на MI1A. Через 24 -56 часов на МПА появлялись колонии, каждую из которых микроскопиро-вали и проводили посевы на соответствующие селективные среды: кровяной агар, среда Плоскирева, висмут-сульфитный aiap, атар МакКони и Эттдо, среда с тирозином и триптофаном, лизино-железный агар (В.1 . Колб, B.C. Камышников, 1976).

У изолированных бактерий изучили чувствительность к антибиогикам. Исследования проводили согласно "Инструкции по применению дисков для определения чувствительное!и к ашибиошкам" и "Методическим указаниям но определению чувавшельпосш к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней с/х живо!пых".

Для цитологического исследования окраску мазков проводили готовым красителем гемокрафиксом (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1976).

Оценку мазка проводили путем подсчитывания количества поверхностных клеток эпителия, [лубоких клеюк эпителия, пейфофилов, а также наличия бактерий и грибов в 10 полях зрения с последующим их подсчеюм по полям зрения. Исследования проводили под иммерсией свеювою микроскопа (объектив х90, окуляр *7). OicyiciBne бактерий по всем полям зрения имело диагностическое значение - исключало бактериальное поражение наружного слухово1 о прохода.

Гистологические исследования были основой постановки диагноза. Образцы тканей фиксировали в 10%-пом формалине в течение суток, затем промывали в проточной воде в течение суток. Далее ткань проводили через ряд спиртов возрастающей крепости (60,70,80,90,96%-ный 1 и 2 спирi), в каждом из них кусочек ткани находился в течение суюк. Из второго 96%-ю спирта кусочек ткани переносили в смесь : спирт+ксилол в равных пропорциях (1:1) на 1,5-2часа, затем в чистый ксилол на 1,5-2 часа, о iсюда в смесь ксилола с парафином (при температуре 37°С) на 2 часа и далее в чиаый парафин с содержанием пчелиного воска 5%-ного па 2часа, затем в парафин с содержанием пчелиною воска 10%-ного на 1,5часа (при температуре 59-61°С). После этого чистый парафин с содержанием 15% пчелиною воска заливали в специальные формочки, в которые затем помещали в нужном положении заливаемые кусочки органов. С парафинового блока при помощи микротома делали срезы юлщиной 6-8 мкм. Срезы окрашивали гемаюксилин-эозином (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1976).

Уровень сывороточного IgE определяли с помощью набора «IgE - ИФА - БЕСТ - стрип» предназначенного для определения концентрации суммармою иммуноглобулина С (IgE) в сыворотке (плазме) крови. В наборе, используемый 1вердофазный меюд иммуноанализа основан на принципе "сэндвича". Анализ проводится в две стадии. Па первой стадии калибровочные пробы с известной концешрацией IgE и исследуемые образцы инкубируюiсм в лупках стрипированного планшета с иммобилизованными моноклональны-ми ан1и1елами (MKAI) к IgE. Затем планшет отмывается. На второй стадии связавшийся в лунках IgE обрабатываю! коныо1аюм МКА I к Igh с перокси-дазой (конькиai MKAI и иммобилизованные в лунках планшета MKAI специфичны к разным участкам молекулы IgE). После отмывания избытка коныогата образовавшиеся иммунные комплексы "иммобилизованные МКАТ- IgF - коныо1ат" выявляют ферментативной реакцией перокеидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена (орю-фенилендиамина). Интенсивность окраски хромотена пропорциональна копценграции IgF в анализируемом образце. После остановки пероксидазной реакции с топ-реагентом результаты учитываю гея фо г оме три чески.

Согласно результатам, опубликованным в литературе (S.J. Withrou, 1989; Y. Uchida, 1990), нормальный уровень суммарного IgE в сыворогке крови у собак обычно не превышает 5,5-7,0 МЕ/мл. В наших исследованиях мы использовали правило - концентрация IgE ниже или равна 15 MF/mji — аллергический отит маловероятен; концентрация IgF в пределах 15-50 МЕ/мл - аллергический отит нельзя исключить; концентрация Igl выше 50 MF/мл - аллергический отит весьма вероятен.

Для дальнейших исследований нами отбирались живошые с концентрацией сывороточного IgE выше 100 МЕ/мл.

Все данные подверг нугы математической обработке с оценкой достоверности различий при р<0,05 и р<0,001, с этой целью использовали методы математической статистики, принятые в биологии и медицине (B.C.Камышников, 2000). Числовой материал представлен в единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и стандартизации СЭВ 1062-68 (Л.В. Козловская, 1975).

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Распространение, сезонность и породная предрасположенность к аллер! ическим 01итам у собак

Аллергический отит диагностируют на основании данных анамнеза, клинического и лабораторных исследований. Прежде всего, обращают внимание на возрастную эволюцию, сезонность, локализацию предшествующих высыпаний. При ajuiepiическом oinie, как правило, удается выявить единственный аллерген, например на яичный белок или пыльцу цвеюв. В первом случае ajuiepi ия будет возникать сразу после приема корма, содержащею аллерген, во втором случае имеется выраженная сезонность, связанная с цветением данного растения. В обоих случаях имеется период i иперсенсибилиза-ции opiанизма с последующим проявлением в виде острого уртикарно1 о oiи-ia, а при хроническом течении зудящею оiиia с лихенизациями и экскориациями.

С помощью специфических методов ицательно исключались паразитарные заболевания и заболевания связанные с поражением иммунной системы (системная красная волчанка, листовидная пузырчатка, буллезный пемфигоид). Непереносимость компонентов корма исключалась назначением редуцированной диет при длительном наблюдении за животным.

Критерием постановки диагноза на аллергический отит является oicyi-ствие паразитарных, бактериальных, грибковых и аутоиммунных поражений кожи при одновременном увеличении сывороточного IgE выше 100 МЬ/мл, наличии полиморфных поражений кожи наружного слуховою прохода, а в анамнезе и других участков кожи.

При аллергическом отите поражения кожи, локализуясь в области наружного слухового прохода, при обострении процесса могут вновь распространяться за пределы наружного слухового прохода (рис. 1.).

Рис. 1. Аллергический отит, места поражения распространяются за пределы наружного слухового прохода.

При аллергическом отите характерны эволюторные изменения от эри-тематозно-сквамозных с небольшой лихенизацией до папуловезикулокру-стозных с последующим развитием гнойного поражения наружного слухового прохода.

Таким образом, при аллергии в анамнезе всегда есть системные поражения кожи, но примерно у 80% собак после системных поражений кожи наступает спонтанная ремиссия без проводимой терапии, но у всех этих животных аллергия протекает локально в виде наружного отита без бактериальных осложнений. Только при длительном течении происходит бактериальные осложнения аллергического отита. б 0,0%

50,0%

40,0%

30,0%

20,0%

10,0%

0,0%

I Заболевания ЖКТ

Заболевания ССС i Заболевания органов дыхания

Q Заболевания выделительной системы

I Заболевания репродуктивной системы

3 Заболевания опорно-двигательной системы И Заболевания нервной системы В Заболевания кожи В Аллергический отит 8 Гоибковые заболевания кожи

Паразитарные заболевания кожи d Пиодермия i Аутоиммунные поражения кожи

I Эндокринные поражения кожи Щ2Ш

Рис. 2. Распространенность аллергии среди всей патологии собак.

Мы провели ретроспективный анализ заболеваемости собак незаразными заболеваниями, среди которых заболевания кожи составили 32,4% от всего нозологического фона. Таким образом, каждая третья собака, поступающая на прием в ветеринарные клиники города страдает заболеваниями кожи. Более 50% всех животных с кожными проблемами имели аллергический дерматит (рис. 2).

Системный дерматит

Отит

Пододерматит Парапроктит

Хейлит

Дерматит хвоста

Акродерматит

Рис. 3. Распространение различных форм аллергического дерматита у собак.

Лишь у 12% собак аллергия протекает с системными поражениями кожи, в остальных случаях - это локальные формы заболевания. При этом доля аллергического отита составила 56% (рис. 3). Интересно отметить, что на втором месте по распространенности стоит пододерматит. По всей видимости, это не случайно, так как у собак с наследственной предрасположенностью к различным стимулам поражения кожи развиваются именно в тех местах, где вероятность этих воздействий значительно выше. Гак, на дистальных участках конечностей воспалительные процессы у собак с аллер Системный дерматит

Отит

Пододерматит В Ларапроктит о Хейлит

Дерматит хвоста,

Ц Акродерматит гией развиваются чаще в связи с постоянным контактом лих частей тела с поверхностью земли, их гравматизацией, мацерацией и 3diрязнением. Но, тем не менее, наружный слуховой проход оказался наиболее уязвимым при этой патоло! ии у собак.