Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против чумы крупного рогатого скота

Для служебного пользования^« № 4 дсп от 15.04.98 зкз.№ / У

На правах рукописи

УДК 619;616.98:578.831.2:615.371

БОРИСОВА ОЛЬГА АНАТОЛЬЕВНА

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЧУМЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Владимир -1998

Работа выполнена во Всероссийском научно - исследовательском институте защиты животных Минсельхозпрода России и

Научно-исследовательском сельскохозяйственном институте Республики Казахстан.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: ГУСЕВ Анатолий Алексеевич, Лауреат Государственной премии Российской Федерации, член - корреспондент РАСХН, член - корреспондент РАЕН, доктор ветеринарных наук, профессор

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

- РАХМАНОВ Анатолий Михайлович, заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор

(ВНИИЗЖ, г. Владимир)

- ЖЕСТЕРЕВ Виктор Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор (ВНИИВВиМ, г. Покров)

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ : Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ, г. Москва)

Защита состоится «2» июня 1998 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д120. 60. 01. по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно - исследовательском институте защиты животных по адресу: 600900, г. Владимир, пос. Юрьевец, ВНИИЗЖ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно -исследовательского института защиты животных.

Автореферат разослан «29» апреля 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Ю. А. Черняев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Чума крупного рогатого скота - острое высококонтагиозная болезнь, которая сопровождается лихорадкой, катарально-геморрагическим, крупоз-но - дифтеритическим воспалением слизистых оболочек, преимущественно пищеварительного тракта, диареей, характеризуется быстрым распространением, высокой заболеваемостью и летальностью до 90-100%.

В настоящее время в ряде зарубежных стран чума КРС регистрируется и достигнутое благополучие в Российской Федерации может быть нарушено в любой момент.

Самой надежной гарантией благополучия по чуме КРС явилось бы искоренение болезни, как нозоединицы. Для решения подобного рода задачи одним из главных условий является наличие надежных средств диагностики и вакцинопрофилактики заболевания.

В странах СНГ для профилактики чумы КРС применяются живые вакцины из штаммов К37 70 и ЛТ, полученных В.Н. Иванющенковым (1979г.) с соавторами и Н.И. Митиным (1963г.) с соавторами.

Технология изготовления живых вакцин является дешевой и несложной, а сами вакцины способствуют формированию прочного и продолжительного иммунитета у привитых животных.

Тем не менее, опасность реверсии, контаминация микоплазмами, неспособность преодолевать колостральный иммунитет у молодняка и другие недостатки, присущие живым вакцинам, указывают на необходимость создания инактивирован-ной вакцины против чумы КРС. Перспективным направлением ветеринарной биотехнологии является изготовление ассоциированных вакцин, создающих иммунитет к нескольким инфекциям в максимально короткие сроки.

Однако, иммунобиологические свойства этих вакцин недостаточно изучены. Отсутствуют данные о создании иммунитета против чумы КРС у различных видов животных. Противоречивы данные о сроках наступления иммунитета после вакцинации. В литературе отсутствуют данные о влиянии колострального иммунитета на вакци-

нацию телят инактивированной вакциной, об иммунизации ею овец. Нет литерат ных данных по изучению иммуногенной активности инактивированной ассоцииров; ной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС у различных видов сельс; хозяйственных животных. Указанные вопросы являются актуальными и послужи основой для проведения данной работы. Работа выполнялась в соответствии с ш нами НИР на 1992-1995 г.г. по теме 1-4.92.

Цель и задачи исследований. Основной целью данной работы являлось и чение иммунобиологических свойств разных форм инактивированной вакцины п[ тив чумы КРС и инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины прот ящура и чумы КРС на разных видах сельскохозяйственных животных. Для достил ния указанной цели были поставлены следующие задачи.

1. Изучение иммуногенной активности разрабатываемой инактивированн сорбированной вакцины против чумы КРС на крупном рогатом скоте:

- определение сроков наступления иммунитета после вакцинации;

- проверка напряженности иммунитета на 21 сутки после прививки;

- определение продолжительности иммунитета при однократной и двукратн вакцинации;

- изучение колострапьного иммунитета у телят, полученных от коров, привит! инактивированной сорбированной вакциной.

2. Определение иммуногенной активности различных форм инактивированн вакцины против чумы КРС на свиньях:

- проверка напряженности иммунитета на 21 сутки после прививки;

- определение продолжительности иммунитета при однократной и двукратн! иммунизации.

3. Изучение иммуногенной активности инактивированной сорбированной вг цины против чумы КРС на овцах:

- проверка напряженности иммунитета на 7,10,14 сутки после иммунизации;

- определение продолжительности иммунитета при однократной и двукратн* вакцинации.

4. Оценка иммуногенной активности инактивированной сорбированной вакцт

против чумы КРС на крупном рогатом скоте и овцах через 12 месяцев хранения.

5. Изучение иммуногенной активности разрабатываемой инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на разных видах животных:

- проверка напряженности иммунитета на 7, 14,21 сутки после вакцинации крупного рогатого скота и овец;

- проведение испытаний инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на крупном рогатом скоте и овцах по срокам наступления иммунитета.

Научная новизна. Получены экспериментальные данные об иммунобиологических свойствах инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС и инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на различных видах сельскохозяйственных животных. Установлена принципиальная возможность использования инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС для экстренной защиты сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот,свиньи,овцы ) от чумы КРС. Изучена продолжительность иммунитета у сельскохозяйственных животных при однократной и двукратной иммунизации инактивированной сорбированной вакциной против чумы крупного рогатого скота.

Показано ,что инактивированная сорбированная вакцина против чумы КРС может быть использована для иммунизации стельных коров с целью получения телят с высоким уровнем колострального иммунитета, обеспечивающего их защиту в течение первых четырех месяцев их жизни.

Практическая ценность. На основании проведенных экспериментальных исследований на различных видах сельскохозяйственных животных разработана нормативно-техническая документация на инактивированную сорбированную вакцину против чумы КРС, которая утверждена ГУВ МСХ Республики Казахстан в 1993 г.

В результате проведенных исследований разработан метод одновременной вакцинации крупного рогатого скота и овец против ящура и чумы КРС. Эффективность метода с положительными результатами проверена в межведомственном ко-

миссионном испытании (акт от 07.01.1992г.) и позволяет успешно профилактировать ящур и чуму КРС. Нормативно - техническая документация на инактивированную ассоциированную поливалентную вакцину против ящура и чумы КРС утверждена Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России в 1994г. (ТУ - 9384 -102 -0049552 - 94).

Апробация результатов исследований. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на научно - практических конференциях: " Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии" (г. Покров, 1992), "Вирусные болезни сельскохозяйственных животных" (г. Владимир, 1995), «Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных»(Владимир,1997 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения иммунобиологических свойств инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС и инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на различных видах сельскохозяйственных животных.

2. Результаты исследований по определению возможности использования инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС и инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС для экстренной защиты сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, свиньи, овцы ) от ящура и чумы КРС.

3. Изучение колострального иммунитета у телят, полученных от коров, привитых инактивированной сорбированной вакциной против чумы КРС с целью определения стратегии вакцинопрофилактики чумы КРС

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 6 печатных работах.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит разделы: введение (6 стр.), обзор литературы (21 стр.), собственные исследования (37 стр.), обсуждение результатов (9 стр.), выводы (2

стр.), практические предложения (1 стр.), список литературы (20 стр.) и приложения (24 стр.). Список литературы включает 44 источников отечественных и 156 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 12 таблицами.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

При проведении наших исследований использовали:

Штаммы вируса чумы КРС и ящура. Патогенный вирус чумы КРС, штамм "К", с титром инфекционности на крупном рогатом скоте не менее 5,0 1д ЛД 50/ыл;

- аттенуированный вирус чумы КРС, штамм К377О, выращенный роллерным способом в культуре клеток СПЭВ, с титром инфекционности не менее 6,5 1д ТЦДбо/шъ

- культуральный вирус ящура вариантов А22, О] и Азия-1 с титром инфекционности не менее 7,0 1д ТЦД 50/ыл.

Вакцины. Экспериментальная серия инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС, изготовленная из штамма ^70, инактивированная димером этиленимина, сорбированная на ГОА и содержащая сапонин.

Экспериментальная серия инактивированной эмульсионной вакцины против чумы КРС, приготовленная путем смешивания 1 части масляного адъюванта (20% ланолина и 80% ангарского масла) и 1 части инактивированной сорбированной вакцины.

Экспериментальная серия инактивированной сорбированно-эмульгированной вакцины против чумы КРС, полученная путем смешивания 19 частей инактивированной сорбированной вакцины и 1 части эмульсионной вакцины.

Инактивированную ассоциированную поливалентную вакцину против ящура и чумы КРС готовили смешиванием вакцины против ящура трехвалентной А22, О) и Азия - 1 (изготовлена на заводе «Юрьевецветбиопрепарат», серия 224, контроль 224) с инактивированной сорбированной вакциной против чумы КРС (изготовлена в НИСХИ, лабораторная серия ) в соотношении 2 : 3 по объему.

Подопытные животные. Крупный рогатый скот алатауской породы и помеси с местным казахским скотом, неиммунный к чуме КРС, в возрасте от б месяцев до 7

лет;

овцы породы южно-казахстанский меринос в возрасте старше 1 года;

свиньи крупной белой породы в возрасте 4-6 месяцев.

Для проведения опытов было использовано 104 головы крупного рогатого скот; в том числе 22 теленка, а также 105 овец и 20 свиней.

Вирусологические и серологические методы исследований. Титровани вируса чумы КРС и ящура проводили в культурах клеток ПО, СП, выращенных в прс бирках и пенициллиновых флаконах. Вируснейтрализующую активность сыворотс крови против вируса чумы КРС определяли в реакции нейтрализации по общеприн? той методике. Поствакцинальный иммунитет против ящура у крупного рогатого скот и овец изучали в РН в культуре клеток свиной почки (СП) по общепринятой методи ке,используя двукратные разведения сывороток и постоянную (1000 ТЦДго/о.шл) доз вируса.

Цифровой материал подвергали статистической обработке по методу Кербер; -Ашмарина.

Выявление вирусного антигена в патматериалах павших животных и специфи ческих антител против вируса чумы КРС в сыворотках крови привитых и контрольны) животных осуществляли в РСК и РДП в агаровом геле в соответствии < "Методическими указаниями по лабораторной диагностике чумы КРС и идентифика ции возбудителя" (1981г).

Иммуногенную активность экспериментальных серий вакцин определяли каче ственным и количественным методами на крупном рогатом скоте, овцах и свиньях.

Контрольное заражение вакцинированных животных осуществляли путем подкожного введения патогенного штамма "К" вируса чумы КРС в дозе 104 ЛД5о/Мл-

Проверку на безвредность осуществляли на крупном рогатом скоте и овцах, вакцину вводили подкожно в двойной прививочной дозе в область средней трет^ шеи.

2. 2. Результаты и обсуждение. 2.2.1. Изучение иммуногенной активности инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС на крупном рогатом скоте.

Для определения иммуногенной активности вакцины использовали крупный рогатый скот в возрасте 8-12 месяцев и испытывали две формы инактивированной вакцины против чумы КРС: сорбированную ГОА вакцину с сапонином и эмульсионную вакцину с адъювантом ВНИЯИ.

Животных иммунизировали вакциной подкожно в цельном виде и в разведениях 1 : 3, 1: 9, 1 : 27 и 1 : 81. Сорбированную вакцину вводили в дозе 3 мл, эмульсионную -1 мл. На 21 сутки после вакцинации всех привитых и контрольных животных заражали патогенным штаммом «К» вируса чумы КРС в дозе 104 ЛДбо/ил.

Из экспериментальных данных, представленных в табл. 1, следует, что'сорбированная форма инактивированной вакцины против чумы КРС обладает более высокой иммуногенной активностью для крупного рогатого скота, чем её эмульсионная форма.

Таблица 1

Иммуногенная активность разных форм инактивированной вакцины против чумы КРС в опытах на крупном рогатом скоте

Форма инактивированной вакцины Результаты контрольного заражения после введения вакцины Показатели-ИмД50 КРС, мл Кол-во ИмД50 КРС в прививном объеме вакцины

Ц 1:3 1:9 | 1:27 1:81

ГОА-вакцина с сапонином 2/2л 2/2 2/2 212 212 <0,02 >150

Эмульсионная вакцина 2/2 2/2 2/2 1/2 0/2 0,036 27,8 ,

Примечание: 'числитель - количество защищенных животных знаменатель - количество животных в опыте

Животные, иммунизированные ГОА-вакциной в цельном виде и в разведения: 1:3, 1:9, 1:27 и 1:81 противостояли контрольному заражению патогенным штаммол "К" вируса чумы КРС.

Результаты проведенных исследований по определению уровня антител свиде тельствуют о том, что сыворотки крови животных, иммунизированных ГОА-вакциной в цельном виде и в разведении 1:3, содержали антитела в высоких титрах, средние титр в РН составлял 8,0-8,5 лог2.

Снижение уровня вируснейтрализующих антител происходило в соответствии с разведениями вакцины. У животных, привитых вакциной в разведении 1:81, максимальный титр вируснейтрализующих антител составлял 3,00 лог2, а минимальный ■ 2,00 лог2.

ИмД5С1 сорбированной вакцины была < 0,02 мл, а в прививном объеме содержится > 150 ИмД 5о для крупного рогатого скота.

Животные, привитые эмульсионной вакциной в цельном виде и в разведении 1:3 и 1:9, были защищены от заражения вирусом чумы КРС, тогда как животные, вакцинированные этим препаратом в разведении 1:81 и одно животное из группы, привитых вакциной в разведении 1:27, пали на 8 сутки после заражения. У животных, привитых эмульсионной вакциной в цельном виде и в разведении 1:3, титры вируснейтрализующих антител на 21 день были достаточно высокими (7,00 - 8,25 лог2).

Уровень вируснейтрализующих антител у животных, иммунизированных эмульсионной вакциной в разведении 1:9, оказался ниже (5,50 лог2), чем у животных, привитых сорбированной вакциной в таком же разведении (7,50 лог2). Вируснейтрали-зующие антитела обнаружены в небольшом титре (2,5 лог2) у одного из двух животных, привитых эмульсионной вакциной в разведении 1:27. В группе животных, иммунизированных этой вакциной в разведении 1:81 вируснейтрализующие антитела не обнаружены. ИмД5о эмульсионной вакцины составила 0,036 мл. В прививочном объеме содержиться 27,8 ИмД 50 для крупного рогатого скота.

В результате проведенных исследований установлено, что инактивированная сорбированная вакцина обладает более высокой иммуногенной активностью для крупного рогатого скота, чем эмульсионная форма препарата. У животных, привитых

эмульсионной вакциной, кроме того, отмечалась более выраженная местная реакция на вакцину. В связи с этим для иммунизации КРС была рекомендована инактивиро-ванная сорбированная вакцина против чумы КРС.

Одним из важных моментов в оценке эффективности вакцин является определение сроков наступления иммунитета у животных после иммунизации.

В опыт по определению сроков наступления иммунитета были отобраны клинически здоровые животные в количестве 8 голов КРС, которых разделили на 4 группы.

Каждую группу животных, кроме контрольной, иммунизировали инактивирован-ной сорбированной вакциной против чумы КРС в дозе 3 мл за 5, 3 и 1 сутки до заражения. По истечении указанного срока всех животных каждой группы заразили патогенным штаммом" К" вируса чумы КРС в дозе 104 ЛД50.

Установлено, что животные, иммунизированные за 3 и 5 суток до заражения, противостояли контрольному инфицированию патогенным вирусом чумы КРС.

Общее состояние животных было удовлетворительным, клинических признаков заболевания не обнаружено. В сыворотке крови животных обнаружены вируснейтра-лизующие антитела на третьи сутки после вакцинации в титре 2,0 - 2,5 логг; на пятые сутки - титр вируснейтрализующих антител составил 3,5 - 4,0 логг-

У животных, зараженных патогенным вирусом через сутки после иммунизации отмечали повышение температуры тела и характерные клинические признаки чумы КРС. Они пали на 9 и 12 сутки после заражения.

Контрольные животные пали от чумы КРС на 7 и 8 сутки после инфицирования.

В результате испытаний инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС по срокам наступления иммунитета установлено, что однократная вакцинация животных в дозе 3 мл формирует у крупного рогатого скота напряженный иммунитет на 3 сутки после прививки.

Для изучения продолжительности иммунитета после однократной и двукратной прививки инактивированной вакциной против чумы КРС использовали телят 8-12 -месячного возраста.

Животных первой группы прививали однократно, второй - двукратно с интервалом в 30 суток.

С целью изучения гуморального иммунитета у животных брали пробы крови до вакцинации, а затем ежемесячно.

Титры вируснейтрализующих антител в сыворотках крови телят в разные сроки наблюдения представлены в табл. 2.

Контрольное заражение было проведено через 165 и 350 суток после иммунизации, в то время, когда титры антител снизились у однократно вакцинированных животных до 1,75+0,29, а у двукратно - до 2,5+0,14 и 2,0+0,15 лог2.

Телята, иммунизированные одно- и двукратно, противостояли контрольному заражению через 165 и 350 суток после вакцинации.

Таблица 2

Уровень вируснейтрализующих антител у КРС, вакцинированного одно- и двукратно инактивированной сорбированной вакциной против чумы КРС

N Схема вакци- Титры ВНА в лог2 по суткам Результаты

Ф нации после вакцинации контрольного

30 суг 60 сут 90 сут 120 сут 165сут 350 сут заражения

1 Однократная 8,00+ 9,00+ 9,00+ 3,00+ 1,75+ _ Животные

вакцинация 0,29 0,14 0,15 0,14 0,29 не заболели

2 Двукратная 8,00+ 10,50+ 10,5+ 4,00+ 2,50+ 2,00+ Животные

вакцинация 0,14 0,15 0,15 0,29 0,14 0,15 не заболели

3 Не вакцинир. (контроль) И.О. Н.О. Н.О. Н.О Н.О. Н.О. Заболели и пали

Примечание: И.О.-не обнаружено

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что инактиви-

рованная сорбированная вакцина против чумы создает при однократной иммунизации напряженный иммунитет продолжительностью до 5,5 месяцев, а при двукратной -11,5 месяцев (срок наблюдения).

С целью изучения колострального иммунитета у телят против чумы КРС 12 коров в возрасте 3-7 лет во второй половине стельности привили инактивированной сорбированной вакциной против чумы КРС. Вакцинация не оказала неблагоприятного воздействия на стельных коров. Беременность протекала нормально, не было случаев абортов, телята родились здоровыми, жизнеспособными и в срок.

От новорожденных телят в динамике с интервалом в 30 суток отбирали пробы сывороток крови для определения напряженности колострального иммунитета против чумы КРС. У всех новорожденных телят в течение 4 месяцев после отела обнаруживали вируснейтрализующие антитела против чумы КРС.

Наиболее высокие титры антител (7,67+0,17лог2) были выявлены в сыворотках крови телят в первый месяц после рождения. Уровень вируснейтрализующих антител против чумы КРС в сыворотках крови в этом возрасте был примерно такой же, как и уровень вируснейтрализующих антител против чумы КРС в сыворотках крови и молозиве коров-матерей.

В дальнейшем отмечена тенденция постепенного снижения титров вируснейтрализующих антител в сыворотках крови телят. Так, в двухмесячном возрасте титр вируснейтрализующих антител был равен 6,50+0,24лог2, в трехмесячном -5,15 +0,18 лог2, в четырехмесячном -2,08+0,19 лог2. Через 5 месяцев после отела вируснейтрализующие антитела против чумы КРС были обнаружены в сыворотках крови только у 25% наблюдаемых телят.

Данные проведенных экспериментов указывают на возможность надежной защиты от заболевания чумой КРС до четырех месячного возраста телят, родившихся от коров-матерей, иммунизированных во второй половине стельности инактивированной сорбированной вакциной против чумы КРС.

Результаты этих опытов показали также, что стельность, независимо от срока, не является противопоказанием для вакцинации коров против чумы.

2.2.2. Сравнительное изучение иммуногенной активности сорбированной, эмульсионной и сорбированно-эмульгированной форм инактивирован-ной вакцины против чумы КРС на свиньях.

Для изучения иммуногенных свойств различных форм инактивированной вакцины против чумы КРС были использованы свиньи крупной белой породы в возрасте 4-6 месяцев.

Испытывали три экспериментальные серии инактивированной вакцины против чумы КРС, из которых одна - сорбированная, вторая - эмульсионная и третья - сор-бированно-змульгированная. Этими вакцинами иммунизировали соответственно три группы свиней.

Независимо от форм инактивированной вакцины, всем животным вакцину вводили в область шеи внутримышечно в дозе 1 мл. Часть животных первой группы через 1 месяц ревакцинировапи инактивированной сорбированной вакциной. Для определения напряженности гуморального иммунитета у свиней получали сыворотки крови через 7, 14 и 21 сутки после вакцинации, затем ежемесячно.

Установлено, что у свиней, привитых инактивированной сорбированной вакциной, на 7 сутки выявляются вируснейтрализующие антитела в титре 2,59+0,07 логг, затем уровень вируснейтрализующих антител быстро нарастает и к 40 суткам титры антител достигают 7,12 +0,43 лог2.

Через месяц после первой иммунизации часть свиней этой группы была ревак-цинирована. Титры вируснейтрализующих антител через 10 суток после повторной прививки значительно повысились и составили 8,25 + 0,25 лог2, а еще через 2 месяца - 9,34 + 0,18 лог2.

После введения эмульсионной вакцины у свиней в сыворотках крови титры вируснейтрализующих антител против чумы КРС были заметно выше, чем в группах свиней, привитых сорбированной и сорбированно-эмульгированной формами вакцин, и составляли через 7, 14, 21, 40 и 100 суток: 2,25 + 0,31 логг; 4,25 +0,14 лог2; 5,91 +0,28лог2; 7,85+0,11 лог2 и 9,12 + 0,13 лог2, соответственно.

В группе свиней, иммунизированных сорбированно-эмульгированной формой инактивированной вакцины против чумы КРС, титры вируснейтрализующих антител были достаточными для защиты от заболевания животных чумой КРС, но были более низкими в сравнении с другими формами инактивированной вакцины. На основании проведенных исследований установлено, что наиболее высокой иммуногенной активностью для свиней обладает эмульсионная форма инактивированной вакцины против чумы КРС по сравнению с сорбированной и сорбированно-эмульгированной. После двукратной иммунизации сорбированной вакциной титры вируснейтрализующих антител против чумы КРС не уступают титрам вируснейтрализующих антител в сыворотках крови свиней, однократно иммунизированных эмульсионной вакциной.

Следовательно, все испытанные формы инактивированной вакцины являются эффективными препаратами для профилактики чумы КРС у свиней.

2.2.3. Проверка иммуногенной активности инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС на овцах.

Для определения иммуногенной активности инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС на овцах вакцину вводили в цельном виде и в разведениях 1:3 и 1:9 подкожно в области бедра в дозе 1 мл. Установлено, что уровни вируснейтрализующих антител у овец, привитых цельной вакциной, на 7, 10 и 14 сутки составили 3,35 +0,26 лог2; 4,00 ±0,14 лог2 и 6,35 +0,17 лог2, соответственно. У овец, привитых вакциной в разведении 1:3, титры вируснейтрализующих антител в вышеуказанные сроки были несколько ниже - 3,30 +0,23 лог2; 3,67 +0,22 лог2 и 5,85+0,44 лог2, соответственно. У привитых вакциной в разведении 1:9 уровень вируснейтрализующих антител были еще ниже - 2,31+ 0,24 лог2; 2,70+0,15 лог2 и 4,20+0,18 лог2, соответственно. Все овцы, иммунизированные цельной вакциной и в разведениях 1:3 и 1:9, противостояли контрольному заражению патогенным вирусом чумы КРС через 14 суток после вакцинации.

Контрольные непривитые овцы после заражения патогенным вирусом перебо-

лели чумой КРС с проявлением гипертермии и характерного клинического симптомо-комплекса.

Установлено, что ИмДбо инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС для овец была равна 0,063 мл, а в прививном объеме содержиться 15,8 ИмД50 для овец.

Для определения продолжительности иммунитета у овец против чумы КРС 40 животных разделили на 4 равные группы.

Первую группу иммунизировали однократно в дозе 1 мл, вторую группу - в дозе 2 мл, третью и четвертую группы прививали двукратно, с интервалом 1 месяц, в дозах 1 мл и 2 мл.

У овец первой группы титры вируснейтрализующих антител достигали максимального уровня на 30 сутки (7,50+0,40 лог2), а затем медленно снижались и через 10 месяцев определялись в титре 3,00+0,11лог2.

У овец второй группы титры вируснейтрализующих антител были несколько выше, чем у животных, вакцинированных меньшей дозой, и имели максимальное значение 8,16+0,24 лог2, а через 10 месяцев сохранились на уровне 3,25+0,18 лог2.

У животных третьей группы накопление вируснейтрализующих антител продолжалось до 40 дня, причем титры антител были несколько выше, чем у животных, привитых однократно: максимальное значение 8,78+0,08 лог2 и через 10 месяцез -3,43+0,15 лог2.

У овец четвертой группы накопление вируснейтрализующих антител было наивысшим: максимальный титр 9,50+0,09 лог2, а через 10 месяцев - 4,16+0,13 лог2.

Полученные данные позволяют заключить, что независимо от схемы и кратности вакцинации, в крови овец длительное время циркулируют вируснейтрализующие антитела в высоких титрах.

Результаты контрольного заражения свидетельствует о том, что однократная иммунизация животных в дозе 1 мл достаточна для того, чтобы обеспечить у овец напряженный иммунитет в течение 10 месяцев (срок наблюдения).

2.2.4. Оценка иммуногенной активности инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС на крупном рогатом скоте и овцах через 12 месцев

хранения

Немаловажное значение при оценке вакцин придается сохранности их иммуногенной активности при длительном хранении.

Для этого вакцину хранили в течение 12 месяцев при температуре 4-6°С, после чего определяли ее иммуногенную активность количественным методом на крупном рогатом скоте и овцах.

Крупный рогатый скот прививали в дозе 1 мл цельной вакциной и в разведениях 1:5 и 1:25. Спустя 14 суток после вакцинации всех подопытных животных и двух контрольных заражали патогенным штаммом "К" вируса чумы КРС. Установлено, что инактивированная сорбированная вакцина против чумы КРС, хранившаяся в течение 12 месяцев при температурном режиме от 4 до 6°С, не снизила иммуногенной активности. Показатель иммуногенной активности ИмД50/ыл вакцины для крупного рогатого скота составляет < 0,02 мл.

Результаты испытания на овцах инактивированной вакцины против чумы КРС через 12 месяцев хранения показали, что за указанный срок она не снизила иммуногенной активности. Об этом свидететельствует то, что однократная иммунизация в дозе 1 мл вакцины в разведениях 1:9, 1:27 и 1:81 .предохраняет овец от контрольного заражения патогенным вирусом чумы КРС. Показатель иммуногенной активности ИмД50 для овец составил 0,063 мл, а в прививном объеме содержалось 15,8 ИмДбо для овец, т.е. соответствовали исходным показателям.

2.2.5. Проверка иммуногенной активности и безвредности инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС

Для определения иммуногенной активности инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на крупном рогатом скоте препарат испытывали в цельном виде и в разведениях 1:5 и 1:25.

Полученные данные свидетельствуют о том, что у крупного рогатого скота, вакцинированного инактивированной ассоциированной поливалентной вакциной против ящура и чумы КРС, вырабатывались вируснейтрализующие антитела в высоких титрах. Уровень вируснейтрализующих антител против чумы КРС в сыворотках крови у животных, привитых цельной вакциной, на 7,10 и 14 сутки составил 3,20+0,14 лог2; 5,50+0,15 лог2; 8,00+0,20 лог2, соответственно.

У крупного рогатого скота, привитого вакциной в разведении 1:5, титры вируснейтрализующих антител были достаточно высокие: - 2,50+0,15 лог2; 4,75+0,13 лог2 7,00+0,20 лог2; у привитого в разведении 1:25, несколько ниже - 2,50+0,13 лог2; 4,50+0,17 лог2; 6,50+0,14 лог2, соответственно.

Титры вируснейтрализующих антител против вируса ящура вариантов А22, О) и Азия-1 учитывались на 14 сутки после иммунизации.

У крупного рогатого скота, привитого вакциной в цельном виде, титры вируснейтрализующих антител против вируса ящура А22, О) и Азия-1 соответствовали 7,00+0,11 лог2; 6,46+0,14 лог2; 7,16+0,09 лог2. У животных, привитых вакциной в разведении 1:5, титры были ниже: 6,76+0,12 лог2; 6,34+0,11 лог2; 6,83+0,11 лог2, а иммунизированных вакциной в разведении 1:25, ещё ниже: - 4,13+0,12 лог2; 6,40+0,14 лог2; 4,86+0,14 лог2, соответственно.

Однократная вакцинация в дозе 5 мл неразведенной вакциной, а также в разведениях 1:5 и 1:25 предохраняет крупный рогатый скот от контрольного заражения вирусом чумы КРС. В 5 мл ассоциированной вакцины против ящура и чумы КРС содержится более 50 ИмД50для крупного рогатого скота (по чуме КРС).

Проверка инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на безвредность показала, что у животных, привитых цельной вакциной в дозе 10 мл, отклонений от физиологической нормы и повышения температуры тела не отмечено. Максимальное увеличение кожной складки на месте инъекции вакцины до 2,8 х 3,7 см наблюдалось на 4-5 сутки после иммунизации,

Таким образом установлено, что инактивированная ассоциированная поливалентная вакцина против ящура и чумы КРС безвредна и обладает высокой иммуно-генной активностью для крупного рогатого скота.

Для проведения испытания по проверке иммуногенной активности инактивиро-ванной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на овцах препарат вводили в неразведенном виде и в разведениях 1:3 и 1:9 подкожно в области бедра в прививном объеме 2 мл.

Результаты экспериментов по определению иммуногенной активности инаети-вированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС свидетельствуют о том, что у овец, вакцинированных ассоциированной поливалентной вакциной против ящура и чумы КРС, вырабатывались вируснейтрализующие антитела в высоких титрах. Уровень вируснейтрализующих антител против чумы КРС в сыворотке крови у животных, привитых цельной вакциной, на 7, 10 и 14 сутки составил 3,50+0,17 лог2; 4,15+0,13 лог2; 6,50+0,11 лог2,соответственно.

У овец, привитых вакциной в разведении 1:3, титры вируснейтрализующих антител были также высокие - 3,15+0,12 лог2; 3,65+0,13 лог2 и 6,2010,15 лог2, у привитых вакциной в разведении 1:9 - достаточными для защиты от заболевания: 2,65+0,19 лог2; 3,10+0,16 лог2 и 4,05+0,12 лог2 .соответственно.

Титры вируснейтрализующих антител против вируса ящура А22. О1 и Азия-1 учитывали на 14-е сутки после иммунизации.

У овец, привитых вакциной в цельном виде, титры вируснейтрализующих антител против вируса ящура А22, О1 и Азия-1 соответствовали 3,90+0,06 лог2; 3,75+0,11 лог2; 3,50+0,11 лог2.

У животных, привитых вакциной в разведении 1:3, титры вируснейтрализующих антител были ниже 3,70+0,22 лог2, 3,55+0,09 лог2 ; 3,10+0,15 лог2, а у иммунизированных вакциной в разведении 1:9, ещё ниже -3,00+0,11 лог2; 3,35+0,17 лог2; 2,55+0,12 лог2, соответственно.

Установлено, что в 2 мл ассоциированной поливалентной вакцины содержится более 15 ИмДбо для овец против чумы КРС.

Однократная вакцинация в дозе 2 мл неразведенной вакциной и в разведении 1:3 и 1:9 предохраняет овец от контрольного заражения патогенным вирусом чумы КРС. Результаты испытаний инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на безвредность показали, что у овец, привитых

цельной вакциной в дозе 4 мл, повышения температуры тела и отклонений от физиологической нормы не отмечено. Увеличение кожной складки на месте инъекции вакцины до 0,7x1,6 см наблюдалось на 4-5 сутки после иммунизации.

Полученные результаты подтверждают высокую иммуногенность ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС при вакцинации овец.

Для проведения испытаний вацины по срокам наступления иммунитета животных иммунизировали инактивированной ассоциированной поливалентной вакциной против чумы КРС и ящура в дозе 5 мл для крупного рогатого скота и 2 мл для овец за 5,3 и 1 сутки до контрольного заражения по одному животному каждого вида.

После контрольного заражения общее состояние телят, иммунизированных за 3 и 5 суток до заражения, было удовлетворительным. Повышения температуры тела и клинических признаков чумы КРС не отмечено. ■

• У телят, контрольно зараженных патогенным вирусом через сутки после иммунизации отмечали повышение температуры тела и характерные клинические признаки чумы КРС. Они пали на 9 и 12 сутки после заражения. Контрольный теленок пап на 8 сутки после инфицирования.

После контрольного заражения общее состояние овец, иммунизированных за 5 суток до заражения, было удовлетворительным. Повышения температуры тела и клинических признаков чумы КРС не отмечено.

Из 2 овец, иммунизированных за 3 суток до заражения, 1 овца осталась здоровой, а 1 овца заболела с характерными клиническими признаками чумы КРС и пала на 8 сутки после заражения.

Обе контрольные овцы заболели чумой КРС, одна из них пала на 7 сутки после заражения.

В комиссионных испытаниях на КРС инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС по срокам наступления иммунитета подтверждено, что однократная вакцинация в дозе 5 мл защищает КРС от чумы на 3 и 5 сутки после иммунизации и в указанные сроки у животных появляются вирус-нейтрализующие антитела против ящура и чумы КРС.

У животных, через 1 сутки после иммунизации, контрольно зараженных, отме-

чается 2-5 суточная задержка в гибели от чумы КРС. Однократная вакцинация в дозе 2 мл защищает против чумы КРС 100% овец на 5 сутки и 50% животных на 3 сутки после иммунизации. Инактивированная ассоциированная поливалентная вакцина создает иммунитет против ящура у крупного рогатого скота и овец на 5 сутки после иммунизации.

III. ВЫВОДЫ

1. В экспериментальных условиях показано, что разработанная инактивированная сорбированная вакцина против чумы КРС обладает высокими иммунобиологическими свойствами, безвредна и пригодна для профилактической иммунизации крупного рогатого скота, овец и свиней.

2. Установлено, что инактивированная сорбированная вакцина против чумы КРС через три дня после иммунизации полностью предохраняет крупный рогатый скот от прямого заражения патогенным вирусом чумы КРС.

3. Определены иммунизирующие дозы инактивированной сорбированной вакцины против чумы КРС, которые обеспечивают индукцию напряженного и продолжительного иммунитета у крупного рогатого скота и овец. Показатели ИмД50 вакцины составили: для крупного рогатого скота <0,02 мл,а для овец - 0,063 мл, т.е. в прививном объеме вакцины содержится >150 ИМД50 для КРС и 15,8 ИМД50 для овец.

4. Показано, что после однократной иммунизации крупного рогатого скота инактивированной сорбированной вакциной против чумы КРС напряженный иммунитет длится 5,5 месяцев, а у овец - 10 месяцев. Двукратные прививки с интервалом в 30 дней увеличивают продолжительность иммунитета у КРС до 11,5 месяцев (срок наблюдения).

5. Установлено, что в процессе хранения в течение 12 месяцев при положительных температурах от 4 до 6 °С инактивированная сорбированная вакцина против чумы КРС сохраняет исходные иммунобиологические свойства и показатели ИмД50 вакцины при определении на КРС и овцах остаются в тех же пределах, как и при изготовлении.

6. Однократная иммунизация коров во второй половине стельности инактивиро-ванной сорбированной вакциной против чумы КРС обеспечивает создание иммунитета у родившихся от них телят до четырехмесячного возраста за счет наличия ко-лостральных антител. Установлено, что в сыворотках крови четырехмесячных телят уровень вируснейтрализующих антител ( 1,5 - 3,5 логг) был достаточен для защиты животных от чумы КРС.

7. Установлено, что для иммунизации свиней целесообразно применение эмульсионной инактивированной вакцины против чумы КРС, которая безвредна и обладает более высокими иммуногенными свойствами по сравнению с сорбированной вакциной и создает напряженный иммунитет у свиней.

8. Экспериментально установлено, что инактивированная ассоциированная поливалентная вакцина против ящура и чумы КРС обладает высокими иммунобиологическими свойствами, безвредна и пригодна для профилактической иммунизации крупного рогатого скота и овец против ящура и чумы КРС.

При однократной иммунизации у животных образуется напряженный иммунитет через 3 суток у КРС и через 5 суток у овец.

IV. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предложены инактивированная сорбированная вакцина против чумы КРС и инак-тивированная ассоциированная поливалентная вакцина против ящура и чумы КРС для иммунизации различных видов сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, свиньи, овцы), которые могут быть использованы для экстренной защиты сельскохозяйственных животных против чумы КРС.

2. Разработана и утверждена ГУВ МСХ Республики Казахстан нормативно - техническая документация на инактивированную сорбированную вакцину против чумы КРС.

3. Разработана и утверждена Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России нормативно - техническая документация на инактивированную ассоциированную поливалентную вакцину против ящура и чумы КРС.

V. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Борисова O.A., Гусев A.A., Старов С.К., Хайруллин Б.М. Иммуногенная активность инактивированной вакцины против чумы крупного рогатого скота для овец . // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии.Часть 1 . Покров, 1992 г. с. 154.

2. Старов С.К, Гусев A.A., Хайруллин Б.М., Борисова O.A.

Изучение иммуногенной активности инактивированной вакцины против чумы крупного рогатого скота. // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. Часть 1 . Покров. 1992 г. с. 152-153.

3. Борисова O.A., Гусев A.A., Старов С.К.

Сроки наступления иммунитета на введение инактивированной вакцины против чумы КРС. // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных, Владимир, 1995 г. с. 121.

4. Борисова O.A., Гусев A.A., Старов С.К.

Иммуногенная активность инактивированной вакцины против чумы КРС для овец. Н Вирусные болезни сельскохозяйственных животных, Владимир, 1995 г. с. 122.

5. Борисова O.A., Гусев A.A., Старов С.К., Михалишин В.В. Иммуногенная активность инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС на овцах . // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных, Владимир, 1995 г. с. 123.

6. Борисова O.A., Старов С.К., Гусев A.A.

Изучение колострального иммунитета у телят против чумы КРС. // Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных. Владимир,1997. с.79