Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Естественный ингибирующий фактор и его взаимосвязь с иммунным статусом крупного рогатого скота

На правах рукописи

ИЛЬИНА Наталья Александровна

ЕСТЕСТВЕННЫЙ ИНГИБИРУЮЩИЙ ФАКТОР И ЕГО ВЗАИМОСВЯЗЬ С ИММУННЫМ СТАТУСОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2004

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН (ГНУ ВНИВИПФиТ) г.Воронеж

Научный руководитель: Лауреат Премии СМ СССР

доктор ветеринарных наук, профессор

Ануфриев А.И.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор

кандидат ветеринарных наук

Кузьмин Г.Н. Сашнина Л.Ю.

Ведущая организация: Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова

Защита диссертации состоится «4» ноября 2004 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.220.010.01 при Воронежском государственном аграрном университете им. К.Д. Глинки (Россия, 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114а).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета. Автореферат разослан « ^ » 0 _2004 года

Учёный секретарь диссертационного совета

Соловьева Т.Е.

1.Общая характеристика работы

Актуальность темы. Основной задачей современного животноводства является увеличение производства высококачественных экологически чистых продуктов (мяса, молока и др.). Однако практика последних десятилетий ведения продуктивного животноводства показывает, что, не смотря на нарастающую интенсивность применения биологических и химиотерапевтических средств, остается стабильно высокой заболеваемость маточного поголовья и молодняка (М.М. Ковалев, 2002; В.И. Рыбин, 2002; А.Г. Шахов, 2002; А.Г. Нежданов, A.B. Мануйлов, 2003; В.Т. Самохин, 2003). В связи с этим возникла необходимость разработки новых подходов к пониманию причин и механизмов возникновения патологии животных для обоснования более эффективной стратегии ветеринарной защиты их здоровья и сохранения высокой продуктивности.

Влияние возрастной и приобретенной иммунной недостаточности у сельскохозяйственных животных на их заболеваемость и продуктивность доказано многими исследователями. Зарубежные специалисты при откорме или закупке телят обязательно учитывают уровень иммуноглобулинов в крови, от этого зависит цена животного (В.М. Апатенко, 1992; Ю.Н. Масьянов и соавт., 1995; М.М. Ковалев, 2002; Э.Д. Джавадов и соавт., 2003).

При иммунодефицитах чаще всего наблюдаются осложнения за счет инфекций, снижение продуктивности, высокая выбраковка (М.М. Ковалев, 2002). У молодняка иммунодефициты, как правило, сопровождаются желудочно-кишечными расстройствами и болезнями органов дыхания (И.М. Карпуть и соавт., 1997; В.М. Прощенко, 1997). В современных условиях за счет приобретенного иммунодефицита у 30-50% животных снижен синтез антител в 2-4 раза по отношению к животным с нормальным иммунным статусом, а у 10-15% - ответная реакция либо отсутствует, либо титр антител не достигает уровня, способного защитить организм от размножения в нем возбудителя (А.И. Ануфриев и соавт., 2000; Е.И. Большакова и соавт, 2000; К.О. Зернов, Л.И. Ефанова, 2002; В.Б. 2002).

Однако, несмотря на экономическую и общебиологическую значимость, иммунодефицита остаются скрытым патологическим состоянием при оценке здоровья молодняка и взрослых животных. До настоящего времени нет общепринятых, доступных, с одной стороны, и информативных - с другой, методов перманентного контроля и диагностики за развитием и состоянием иммунной системы животных в условиях хозяйств.

В связи с этим проблема разработки и внедрения новых методов диагностики иммунодефицитов сельскохозяйственных животных является актуальной и представляет интерес для ветеринарной медицины в теоретическом и практическом отношениях.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований является изучение возможности использования метода определения естественного инги-бирующего фактора макромолекулярных антител (ЕИФ) для диагностики приобретенных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить параметры ЕИФ, характеризующие наличие иммунодефицита.

2. Изучить в сравнительном аспекте ЕИФ и другие показатели иммунного статуса.

3. Изучить показатели ЕИФ и других иммунологических данных в сравнительном аспекте мать-плод-новорожденный.

4. Изучить влияние фонового уровня антител на эффективность иммунопрофилактики и показатели ЕИФ.

5. Изучить влияние вакцинации с применением и без применения иммуно-модулятора на показатели ЕИФ.

Научная новизна. В результате экспериментальных исследований медицинский тест первого уровня (метод определения ЕИФ) адаптирован к определению вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. На примере этого вида животных изучена взаимосвязь ЕИФ с показателями иммунного статуса. Обнаружена взаимосвязь между обнаружением ЕИФ в сыворотке крови короле и снижением показателей клеточного и гуморального иммунитета у полученных от них телят. Изучено влияние фонового уровня антител к антигену ПГ-3

на эффективность гомологичной иммунопрофилактики и показатели ЕИФ. Получена приоритетная справка на изобретение «Способ диагностики вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота» №2004106803 от 9.03.2004г.

Практическая значимость. Для использования в ветеринарной медицине рекомендован доступный, не требующий больших материальных и временных затрат, метод диагностики вторичных иммунодефицитов крупного рогатого скота.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на международной научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиок-сиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004), ежегодных отчетных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии в период 2001 - 2004 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научные статьи, 1 информационный листок.

Внедрение результатов исследований. Материалы диссертации вошли в проект методических рекомендаций «Система коррекции иммунного статуса у животных» (Воронеж, 2004).

На защиту выносятся следующие основные положения:

- о влиянии условий кормления и содержания на возникновение вторичных иммунодефицитов;

- обнаружение в сыворотке крови индекса ингибирования >1,1 свидетельствует о наличии вторичного иммунодефицита в организме;

- о снижении показателей клеточного и гуморального иммунитета у телят, родившихся от коров, у которых за 1,0-1,5 месяца до отела в сыворотке крови выявлялся ЕИФ;

- ЕИФ является одним из механизмов, тормозящим беспредельное образование антител в организме.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка использованной литературы. Диссертация изложена на 156

страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 16 рисунками. Библиография содержит 240 источников, в том числе 42 - иностранных авторов.

2.Собственные исследования

2.1.Материалы и методы исследований

Работа выполнена в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии

и других подразделениях Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии в 2001-2004 гг. в соответствии с планом НИР ВНИВИПФиТ по заданию 04.02. «Изучить системные иммунодефицита в возникновении массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных и разработать средства и способы их коррекции для профилактики и терапии» (№ гос. регистрации 01.200.117019). Научно-производственные опыты и апробация полученных результатов проведены в хозяйствах Воронежской области: в ООО «Воро-нежпищепродукт» Новоусманского района, СПК «Лискинском» Лискинского района и на Опытной станции ВГАУ на 78 коровах и 100 телятах симментальской породы.

Ингибирующие свойства сыворотки крови изучали с помощью постановки реакции ингибирования активности антител (Журавлева Н.В. 1970). Реакция ингибирования активности антител осуществляется следующим образом. Агглютинирующие сыворотки разводят физиологическим раствором 1:20, испытуемые сыворотки - 1:40. Оба раствора соединяют в равных объемах (1,0 мл) в пробирках емкостью 2,0-2,5 мл и плотно закрывают резиновыми пробками. Смеси выдерживают 18 часов при + 37° С. С полученными смесями ставят реакцию агглютинации, начиная с разведения 1:80 с соответствующим диагностикумом. На другой день учитывают результаты реакции агглютинации в каждой пробирке по общепринятой четырехкрестной схеме оценки ее интенсивности. Если исследуемая сыворотка обладает ингибирующими свойствами, то агглютинат при встряхивании легко распадается, и интенсивность по сравнению с контролем оказывается ниже. Результаты реакции выражали индексом ингибирования, который определяли как отношение суммарного титра тест-сыворотки, определяв-

мого после ее контакта с физиологическим раствором, к суммарному титру после ее контакта с испытуемой сывороткой.

В качестве тест-сыворотки использовали гемолитическую сыворотку к эритроцитам барана производства НПО «Биомед» г. Пермь. В качестве диагно-стикума - 3% взвесь эритроцитов барана.

Бактерицидную, лизоцимную и комплементарную активности сыворотки крови определяли фотоэлектроколориметрически при помощи фотометра КФК. Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), лизоцимную - по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), комплементарную - по Г.Ф. Вагнеру (1963). Фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число определяли по B.C. Гостеву (1950) (Плященко С.И., Сидоров В.Т., 1979).

Для выделения лимфоцитов из крови применяли метод, основанный на принципе различной скорости седиментации их в градиенте плотности. Т-лимфоциты идентифицировали методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Абсолютное количество Т-лимфоцитов рассчитывали по формуле: Т-лимфоциты=ахбхв/10000, где а— количество лейкоцитов в 1л крови, б -процент лимфоцитов в крови, в - процент розеткообразующих Т-лимфоцитов. В-лимфоциты идентифицировали по выявлению рецепторов к третьему компонешу комплемента (ЕАС-РОК). Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови устанавливали методом простой радиальной иммунодиффузии по G. Manchini (1965).

Совместно с отделом физико-химических исследований в крови определяли: содержание лейкоцитов и эритроцитов на счетчике частиц Культер Каун-тер (Франция); количество гемоглобина - гемоглобинцианидным методом. Лей-кограмму выводили на основании подсчета 100 клеток в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза. В сыворотке крови определяли: общий белок - рефрактометрическим методом, учитывая коэффициенты преломления; белковые фракции - путем электрофоретического разделения белков сыворотки в агаровом геле; общие липиды - по Бауману. Глюкозу, мочевину, фосфор, щелочную фосфа-тазу, аланинаминотрансферазу, аспартатаминотрансферазу определяли колориметрическим методом с использованием спектрофотометра Specol 211.

Определение содержания диеновых конъюгатов (Стальная И.Д., 1977), малонового диальдегида (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977), активности ка-талазы (Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е., 1988), глута-тионпероксидазы (Крутиков Г.О., Штутман И.М., 1976), глутатионредуктазы (Кругликов Г.О., Штутман И.М., 1976) и содержание витамина А (по методу Бессея в модификации A.A. Анисовой, 1969) проводили в отделе фармакологии.

За телятами после рождения и в течение 3-х месяцев вели клинические наблюдения, определяли температуру тела, частоту сердечных сокращений и дыхательных движений, учитывали аппетит, состояние слизистых оболочек, тур-гор кожи. Учитывали характер кашля, хрипов, одышки, истечений из носовой полости. Определяли цвет, запах и консистенцию фекалий. Измеряли диаметр пуповины при рождении, в начале и разгаре омфалита. Учитывали заболеваемость, течение и исход болезни.

Посевы патологического материала (печень, почка, брыжеечные лимфоузлы, легкие, селезенка, кровь из сердца) делали на чашки с кровяным агаром, среду Эндо и МПБ. У выделенных чистых культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные, культурально-биохимические свойства общепринятыми в бактериологии методами. Патогенность выделенных культур определяли на белых мышах. Серологическую типизацию эшерихий проводили в реакции агглютинации с О-колисыворотками Краснодарской биофабрики согласно «Наставлению по применению агглютинирующих О-колисывороток».

Для изучения влияния вакцинации на показатели ЕИФ и иммунного статуса телят, животных иммунизировали сухой культуральной вирусвакциной «Бивак» согласно наставлению по ее применению. В качестве иммуномодулятора в серии опытов использовали тимоген, который вводили одновременно с вакцинацией, внутримышечно в дозе 1 мл 0,01% раствора на теленка.

В сыворотке крови коров и телят при помощи соответствующих наборов эритроцитарных диагностикумов определяли антитела к антигенам возбудителей инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - в реакции непрямой гемагг-лютинации, а также парагриппа-3 - в реакции торможения гемагглютинации.

Оценку температурно-влажностного режима в животноводческих поме-

щениях осуществляли при помощи психрометра 1-2 раза в декаду. Замеры проводили в трех точках помещения - отступив от продольных стен на 1-3 метра, от торцовых стен - на 1 метр и в центре помещения.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием персонального компьютера IBM (программа «Microsoft Excel 2000»),

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1.Этиология иммунодефицитов

Наиболее распространенными причинами возникновения приобретенных иммунодефицитов у сельскохозяйственных животных являются нарушения зоогигиены содержания и не соблюдение разработанных нормативов полноценного сбалансированного питания. При изучении этого вопроса в зимне-весенние периоды 2001-2004гг нами были проведены исследования, направленные на выяснение условий содержания и рационов кормления сухостойных коров, принадлежащих ООО «Воронежпищепродукт» и их связь с частотой обнаружения иммунодефицитов.

Было установлено, что коровы содержались в типовых четырехрядных коровниках, на бетонных полах без подстилки, запуск животных проводился за 22,5 месяца до отела. Условия для регулярного моциона животных отсутствовали и были созданы только в период 2003-2004гг. В родильное отделение животных переводили за две недели до отела, где они содержались привязным способом, на деревянных полах. В 2002-2003 годах в коровниках был проведен ремонт и утепление ограждающих конструкций (полов, потолков, дверей), что позволило улучшить условия содержания коров и требования по этому вопросу приблизились к нормативным. Так, температура воздуха в коровнике в зимне-весенний период времени должна быть равна 10 °С, а относительная влажность не должна превышать 85% (Мурусидзе Д.Н., Левин А.Б., 1992). Нами было установлено, что в 20032004г средняя температура воздуха была равна 10°С, а относительная влажность 77,5%. В тоже время эти показатели до проведения ремонта коровников были равны 4° С и 87,5% соответственно.

От коров, содержащихся в указанных условиях, в зимне-весенние пе-

риоды 2001-2004 годов получали телят, с которыми проводили комплекс клинико-диагностических и других исследований. Необходимо отметить, что если в 2002-2003 г народившиеся телята молозиво употребляли только утром, т.е. через 6-10 часов после рождения, то в 2003-2004 годах мы добились, чтобы в хозяйстве были ночные дежурные по приему отелов и новорожденные телята получали молозиво не позднее 1,5 часов с момента рождения.

При анализе зимне-весеннего рациона кормления сухостойных коров в 2001-2002г по отношению к нормам кормления ВИЖа был выявлен дефицит переваримого протеина и сахара. Из макроэлементов в рационе наблюдался недостаток фосфора. Нарушение кальциево-фосфорного соотношения на фоне недостаточного поступления витамина Д сказывалось на клиническом состоянии животных: у 62,0% коров было установлено размягчение последних хвостовых позвонков, повышенная шаткость резцов, утолщение и болезненность суставов, хромота. Из микроэлементов отмечался дефицит меди, цинка и кобальта.

В 2003-2004г за счет добавления в рацион подсолнечного жмыха, а также увеличения количества патоки, был восполнен дефицит переваримого протеина и сахара. Благодаря использованию трикальцийфосфата было достигнуто рекомендуемое кальциево-фосфорное соотношение - 1,5:1. Потребность животных в микроэлементах и витаминах была удовлетворена за счет использования премикса с корректированной рецептурой.

Известно, что корректировка рационов является одним из условий предупреждения нарушения обмена веществ и снижает цену адаптации животных к факторам внешней среды. Как показали проведенные морфологические и биохимические исследования крови, многие показатели метаболизма стельных коров в 2001 г отличались от норм, принятых для этого вида животных. В то же время в 2003г на фоне оптимизации кормления происходила нормализация белкового, углеводного, липидного и витаминно-минерального обмена веществ.

Таким образом, наиболее благоприятные условия для сухостойных коров, а, следовательно, и народившихся от них телят, были созданы в зимне-весенний период 2003-2004г, а в 2001-2002г - они были наихудшими.

Одной из причин нарушения иммунологического статуса у животных

являются и инфекционные заболевания. В результате проведенных бактериологических и серологических исследований было установлено, что хозяйство является стационарно неблагополучным по колибактериозу, а среди коров и телят циркулируют вирусы парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи.

Подводя итог изучению факторов внешней среды, способствующих возникновению иммунной недостаточности, мы провели параллельные исследования, направленные на выявление наличия иммунодефицитов у этих же животных. Причем, сравнительную диагностику иммунодефицитов осуществляли как классическими методами исследований, так и методом реакции ингибирования активности антител (РИА), при помощи которой определяли наличие естественного ингибирующего фактора (ЕИФ). Эта реакция хорошо изучена в медицине, однако возможность применения ее в ветеринарии не изучена.

2.2.2.Естественный ингибирующий фактор и его взаимосвязь с иммунным статусом крупного рогатого скота

2.2.2.1 .Усовершенствование метода определения естественного ингибирующего фактора

Для адаптации РИА к массовым исследованиям в ветеринарии нами было

предложено усовершенствование методики, предложенной Н.В. Журавлевой (1970).

Технический результат достигался постановкой второй части реакции гемагглютинации не в пробирках, а на планшетах. В этом случае учет результатов проводили визуально по степени агглютинации эритроцитов по 4-х крестной системе. При этом отпадала необходимость для оценки интенсивности реакции встряхивать агглютинат, на что уходило в 5-10 раз больше времени, а сама реакция становится более наглядной.

Было установлено, что при постановке 2 части РИА на планшетах величина индекса ингибирования (ИИ) уменьшается в 1,08 (Р<0,01) раз по сравнению с величиной ИИ, рассчитанной при постановке 2 части реакции с теми же сыворотками в пробирках. Поэтому РИА при постановке на планшетах должна считаться положительной при ИИ равном 1,1 и более (1,2:1,08=1,11).

Для подтверждения данного теоретического вывода нами была сделана выборка животных (п=35) у которых индекс ингибирования был меньше 1,1 и равным или больше, чем 1,1. Было установлено, что при ИИ равном 1,1 и больше у животных достоверно ниже процент Т-лимфоцитов по сравнению с животными, у которых он менее 1,1. Так у коров за 2,5-2 месяца до отела с ИИ меньше 1,1 процент Т-лимфоцитов был выше в 1,3 раза (Р<0,001) по сравнению с животными, у которых ИИ был равен или больше 1,1. Та же тенденция сохранялась и у коров после отела: при величине ИИ меньше 1,1, процент Т-лимфоцитов был выше в 1,2 раза (Р<0,05), чем у животных с ИИ равным или больше 1,1.

Таким образом, было установлено, что при постановке реакции ингибирования агглютинации на планшетах, она должна считаться положительной, если ИИ равен 1,1 и более.

2.2.2.2.Устойчивость ЕИФ при хранении сывороток

По данным Н.В. Журавлевой (1979) естественный ингибирующий фактор не стоек - ингибирующая активность сыворотки исчезает после 3-4 дней хранения при +4 С0.

В результате проведенных на коровах (п=12) с положительной РИА исследований было установлено, что при хранении сыворотки в холодильнике при температуре +4-6 °С в течение суток, величина ЕИФ уменьшается на 3,4%. При хранении в течение 2 суток - на 7,6% (Р<0,05) от первоначального значения. При исследовании сыворотки через 3 суток ИИ был равен 1,0 (т.е. суммарный титр тест-сыворотки, определяемый после ее контакта с физиологическим раствором стал равным суммарному титру тест-сыворотки после ее контакта с испытуемой сывороткой).

Таким образом, для получения достоверных результатов необходимо реакцию ингибирования агглютинации ставить в первые сутки после получения сыворотки.

2.2.2.3.Взаимосвязь ЕИФ с процессами ПОЛ и системой АОЗ.

Взаимосвязь между ЕИФ и состоянием процессов перекисного окисления липидов и системой антиоксидантной защиты изучена на сухостойных коровах (п=30). Нами проведен корреляционный анализ результатов исследований этих показателей, полученных на одних и тех же животных (п=30). Кровь у коров исследовали за 2 и 1 месяц, а также за несколько дней до отела.

Была обнаружена средняя обратная взаимосвязь между ИИ и содержанием диеновых конъюгатов (ДК) (г =-0,5) и малонового диальдегида (МДА) (г =-0,42). По всей видимости, она обусловлена инактивацией БН-групп естественного ингиби-рующего фактора, продуктами ПОЛ - гидроперикисями и альдегидами. В связи с этим понятно наличие средней (г =+0,41) положительной взаимосвязи между ИИ и каталазой, участвующей в обезвреживании реактогенных форм кислорода, а также тесной (г =+0,63) положительной взаимосвязи между ИИ и содержанием витамина А, являющегося эндогенным антиоксидантом.

Глутатионпероксидаза (ГПО) является одним из компонентов антипере-кисного комплекса, включающего глутатион и глутатионредуктазу. Последняя осуществляет восстановление окисленного глутатиона, образующегося в процессе формирования глутатионзависимой антиперекисной системы (Петрович Ю.А., Гуткин Д.В., 1981). Поэтому наличие средней обратной взаимосвязи между величиной ИИ и ГПО (г =-0,39), а также отсутствие корреляции между ИИ и глутати-онредуктазой (ГР) может служить косвенным подтверждением того, что в качестве небелкового тиола в состав ЕИФ входит цистеин, а не глутатион.

Таким образом, на основании проведенного корреляционного анализа установлено, что продукты перекисного окисления липидов могут инактивиро-вать естественный ингибирующий фактор.

2.2.2.4.Взаимосвязь ЕИФ с показателями иммунного статуса.

Взаимосвязь ЕИФ с показателями иммунного статуса изучена на сухостойных коровах (п=30). Нами проведен корреляционный анализ результатов исследований этих показателей, полученных на одних и тех же животных. Кровь у

коров исследовали за 2 и 1 месяц, а также за несколько дней до отела.

Была обнаружена средняя обратная взаимосвязь между ИИ и комплементарной активностью сыворотки крови (КАСК) (г=-0,46), фагоцитарной активностью лейкоцитов (ФАЛ) (г=-0,31), фагоцитарным индексом (ФИ) (г=-0,41) и фагоцитарным числом (ФЧ) (г=-0,42). Корреляция между ИИ и лизоцимной активностью сыворотки крови (ЛАСК) выявлена не была.

В тоже время обнаружена положительная связь средней степени (r=+0,31) между ИИ и бактерицидной активностью сыворотки крови (БАСК). По всей видимости, это явление носит компенсаторно-приспособительный характер. Организм старается восстановить нарушенный иммунный гомеостаз за счет других, возможно еще не изученных механизмов саморегуляции.

Согласно классической теории Г.Селье (1960) разнообразные действующие на организм повреждающие факторы могут выступать в качестве стрессоров. Стресс рассматривается как неспецифическая реакция организма, проявляющаяся активацией ведущего эндокринного механизма - гипотапамо-гипофизарно-надпочечниковой системы. В зависимости от характера, интенсивности стрессового фактора описаны различные реакции иммунной системы при стрессе. Известно, что Т-лимфоциты более чувствительны к иммуносупрессив-ному действию глюкокортикоидов, чем B-лимфоциты (Шапорова Н.Л., Трофимов В.И., 2000). Некоторые авторы при стрессе отмечают снижение (Редькин Ю.В., Соколова Т.Ф., 1983) или исчезновение (Кузьмин С.Н., Першин Б.Б., 1988) из крови отдельных классов иммуноглобулинов, в том числе Ig М.

В исследованиях Н.В. Журавлевой и Н.К. Родосской (1988, 2003) показано эффекторное действие стресс-гормона гидрокортизона, реализующееся в индуцировании им ингибирующей активности сыворотки крови. В связи с этим становится понятной наличие средней обратной взаимосвязи между ИИ и Т-лимфоцитами (г=-0,32), а также между ИИ и содержанием Ig М (г=-0,34). Между ИИ и IgA обнаружена слабая обратная взаимосвязь (г=-0,22). Между ИИ и В-лимфоцитами, а также ИИ и Ig G корреляция отсутствовала.

Таким образом, при обнаружении в сыворотке крови естественного ин-гибирующего фактора, можно говорить о наличии в организме иммунодефицит-

ного состояния, проявляющегося снижением комплементарной активности сыворотки крови, активности фагоцитоза, содержания Т-лимфоцитов и иммуноглобулинов.

2.2.2.5.Частота обнаружения иммунодефицитов у крупного рогатого скота

Распространение иммунодефицитов, диагностированных путем определения в сыворотках крови естественного ингибирующего фактора, изучали в 2002-2004гг на коровах и телятах, принадлежащих ООО «Воронежпищепро-дукт». Сыворотку у коров исследовали дважды - в период сухостоя и после отела, у телят - в 2-7 и 8-14 дневном возрасте.

Было установлено, что наибольший процент животных, в сыворотке крови которых обнаруживался естественный ингибирующий фактор, был зарегистрирован в 2002 году, наименьший - в 2004. Так, если в 2002г процент сухостойных коров, у которых регистрировался ЕИФ, был равен 65, то в 2004 - 17,9, процент коров после отела - 35,7 и 7,1, телят 2-7 дневного возраста - 50 и 10,7, телят 8-14 дневного возраста 28,5 и 7,1 соответственно.

По данным отдела патологии размножения и молочной железы наибольшее количество коров с клиническим маститом и послеродовой патологией (эндометриты, острая и подострая субинволюция матки) также было зарегистрировано в 2002г - 15,7 и 81,3%, а наименьшее - в 2004г - 10,7 и 64,3% соответственно.

При клиническом исследовании телят было установлено, что в 2004г по сравнению с 2002г процент животных, у которых диагностировался омфалит, уменьшился в 3,3 раза, диарейный синдром - в 1,6 раз и патология респираторного тракта - в 1,1 раза.

Таким образом, из вышеизложенного видно, что снижение заболеваемости, как коров, так и телят, происходило на фоне уменьшения частоты обнаружения естественного ингибирующего фактора в сыворотке крови животных (т.е. снижения числа иммунодефицитных животных), улучшения условий содержания и кормления.

2.2.2.6.Изменение показателей ЕИФ и иммунного статуса у коров в зависимости от физиологического состояния

Многие исследователи указывают на то, что состояние клеточного и гуморального иммунитета у коров в течение всего периода репродукции постоянно изменяется, в то же время данных об изменении величины ИИ в доступной нам литературе мы не обнаружили. Изменение показателей ЕИФ и иммунного стату- »

са у коров в зависимости от физиологического состояния, изучили на 30 животных. Кровь у коров исследовали за 1,5-1 мес до отела, перед отелом, на 1-7 и 8- ' 14 сутки после отела.

Было установлено, что у коров перед отелом происходило снижение величины ИИ. Одновремено снижалось содержание IgM и G, связанное с их переходом из сыворотки крови в молозиво. Известно, что около 90% всех иммуноглобулинов поступает в молозиво из сыворотки крови, при этом основным классом является IgG (Б.Г. Орлянкин, Т.И. Алипер, 2001). Уменьшалось содержание В-лимфоцигов, снижалась БАСК. В то же время повышались комплементарная и лизоцимная активности сыворотки крови, увеличивалось за счет моноцитов и сегментоядерных нейтрофилов количество лейкоцитов, активизировался фагоцитоз. Содержание Т-лимфоцитов повышалось, возможно, это связано с увеличением Т-супрессоров, которые необходимы для создания толерантности, направленной на подавление изо иммунных реакций матери против фето плацентарного комплекса (B.C. Авдеенко, 1993).

После отела начинался процесс постепенного возвращения показателей к исходным величинам: происходило увеличение ИИ, содержания иммуноглобулинов класса G, В-лимфоцитов и БАСК. Лизоцимная и комплементарная активности сыворотки крови снижались. Сразу же после отела происходило снижение Т- , лимфоцитов. Отмечался регенеративный сдвиг нейтрофилов. Продолжала увеличиваться фагоцитарная активность лейкоцитов, что говорит о преимущественном участии неспецифического клеточного звена в репаративной функции организма. В более поздние сроки после отела наблюдалась обратная тенденция: показатели фагоцитоза снижались, а Т-клеточное звено активизировалось.

Таким образом, было установлено, перед отелом величина ИИ достоверно уменьшалась, а к 8-14 дню после отела достоверно увеличивалась.

2.2.2.7.Возрастные взаимосвязи показателей ЕИФ и иммунного статуса

у телят.

Возрастные взаимосвязи показателей ЕИФ и иммунного статуса у телят изучили на 30 животных. Кровь у телят исследовали до приема молозива, в 2-7, 8-14 дневном и месячном возрасте.

У безмолозивных животных отмечался низкий уровень иммуноглобулинов, слабая лизоцимная и бактерицидная активности сыворотки крови. ИИ был равен 1. ЕИФ обнаруживался у 13,3% телят. После приема молозива у телят происходило увеличение величины ИИ. Положительная РИА регистрировалась у 40% животных. Значительно увеличивалось содержание всех классов иммуноглобулинов. Тем не менее, колостральный иммунодефицит (содержание в сыворотке крови иммуноглобулинов менее 15 мг/мл) был выявлен у 14 (46,7%) 2-7 дневных телят. Причем, у животных с положительной РИА, колостральный иммунодефицит регистрировался в 75% случаев, а у животных, в сыворотке крови которых ЕИФ не обнаруживался - в 27,8% случаев. В этот же период у телят наблюдалось повышение бактерицидной и лизоцимной активностей сыворотки крови, количества моноцитов и лимфоцитов. Увеличивалась фагоцитарная активность лейкоцитов, что связано с опсонизацией возбудителей за счет колост-ральных иммуноглобулинов. В то же время происходило снижение комплементарной активности сыворотки крови, связанное с незрелостью системы комплемента, а также с увеличением потребления в реакции компонентов комплемента. Уменьшалось содержания сегментоядерных нейтрофилов.

В 8-14 дневном возрасте величина ИИ снижалась. ЕИФ обнаруживался у 10% животных. В это же время происходило физиологически обусловленное снижение концентрации иммуноглобулинов, падала интенсивность фагоцитоза, однако отмечалось увеличение содержания Т-лимфоцитов.

В месячном возрасте у телят происходило дальнейшее снижение содержания нейтрофилов при одновременном повышении лимфоцитов, уменьшалось содержание моноцитов. Активизировалось В-клеточное звено иммунитета, ответственное за синтез различных классов иммуноглобулинов, соответственно

возрастал уровень иммуноглобулинов. Увеличивалась бактерицидная активность сыворотки крови. Величина ИИ в этот период практически не изменялась. ЕИФ регистрировался у 10% животных.

Из вышеизложенного видно, что величина ИИ у телят после приема молозива достоверно увеличивалась, а в период полураспада колостральных антител достоверно снижалась. Эти данные свидетельствуют о том, что ЕИФ, как и факторы клеточной и гуморальной защиты, может передаваться от матерей потомству. Необходимо отметить, что колостральный иммунодефицит у телят с положительной РИА, регистрировался в 2,7 раз чаще, чем у телят, в сыворотке крови которых ЕИФ не обнаруживался.

2.2.2.8.Взаимосвязь между ЕИФ и заболеваемостью коров

Изучение взаимосвязи между ЕИФ и заболеваемостью коров маститом и послеродовыми болезнями провели на 58 коровах. По результатам исследований сыворотки крови, взятой за 2,0-2,5 месяца до отела, животных разделили на 2 группы. В 1 группу вошли коровы с положительной РИА (п=20), во 2 - с отрицательной (п=38).

Было установлено, что содержание лейкоцитов было одинаковым в обеих группах. При этом в первой группе было повышено содержание сегментоя-дерных нейтрофилов - на 26,1% (Р<0,05), при одновременном снижении лимфоцитов - на 8,6% (Р<0,05). Таким образом, исходя из лейкоформулы, можно констатировать тот факт, что животные первой группы находились в стадии мобилизации стресса. В 1 группе комплементарная активность сыворотки крови была на 77,4 (Р<0,001), фагоцитарная активность лейкоцитов на 10,7, фагоцитарное число на 23,1 (Р<0,05) и фагоцитарный индекс на 9,7% ниже, чем во второй группе. Содержание Т- и В-лимфоциты, также было ниже в 1 группе: на 41,7% (Р<0,001) и 56,6% (Р<0,001) соответственно. В то же время в 1 группе бактерицидная активность была на 44,4% (Р<0,001), лизоцимная - на 32,4% больше, чем во второй.

Снижение показателей иммунологического статуса сказалось на заболеваемости животных: в 1 группе на момент исследования было зарегистрировано

15,0% коров с клиническим маститом и 45% - с субклиническим, в то время как во 2 группе аналогичная патология диагностировалась у 10,5 и 39,4% животных.

При исследовании коров за 1-1,5 месяца до отела показатели иммунного статуса имели сходные значения в обеих группах. Достоверно отличались только данные по бактерицидной активности сыворотки крови и Т-лимфоцитам. Однако и между этими показателями прослеживалась явная тенденция к уменьшению разницы между их величинами по сравнению с предыдущим исследованием.

В этот период естественный ингибирующий фактор продолжал функционировать только у 6,9% животных. У остальных коров происходила компенсация иммунодефицита. Тем не менее, процент послеродовых заболеваний в последующем в 1 группе составил 80%, а во второй - 57,9%. Из полученных результатов видно, что у животных 1 группы субклинический мастит регистрировался в 1,1, а клинический мастит и послеродовая патология - в 1,4 раза чаще, чем у животных 2 группы.

Таким образом, при обнаружении в сыворотке крови естественного инги-бирующего фактора можно говорить о наличии иммунологической недостаточности в организме, появление которой на определенном этапе способствует возникновению различных заболеваний.

2.2.2.9.ЕИФ и показатели иммунного статуса в аспекте мать-плод-новорожденный

Изучение взаимосвязи между ЕИФ и другими показателями иммунологической резистентности в сравнительном аспекте мать-плод-новорожденный провели на 44 коровах и полученных от них телятах. По результатам исследований сыворотки крови, взятой за 1-1,5 месяца до отела, животных разделили на 2 равные группы. В 1 группу вошли коровы с положительной РИА, во 2 - с отрицательной.

В результате проведенных исследований было установлено, что содержание сегментоядерных нейтрофилов в 1 группе было на 27,3% (Р<0,01) выше, а лимфоцитов - на 11,2% (Р<0,05) ниже, чем во 2 группе. Такие изменения - снижение уровня лимфоцитов при одновременном повышении нейтрофилов указы-

вают на стадию мобилизации стресса (реакция тревоги).

У коров 1 группы была понижена лизоцимная и комплементарная активность сыворотки крови на 41,2 и 7,3% соответственно. Величина бактерицидной активности в обеих группах отличалась незначительно. У животных с положительной реакцией ингибирования агглютинации была снижена активность фагоцитоза: ФАЛ на 10,8% (Р<0,05), ФЧ на 12,9%, ФИ на 7,5%. Содержание иммуноглобулинов было ниже также у животных 1 группы: 1£ М на 26,3% (Р<0,01), в на 12,2% (Р<0,05) и ^ А на 22,2% (Р<0,05).

В последующем телята были также разделены на две группы. В 1 группу вошли животные, полученные от коров с положительной РИА, во 2 - с отрицательной.

На 2-7 сутки среди телят 1 группы положительная РИА регистрировалась у 15 (68,2%), во 2 - у 4 (18,2%) животных. У телят 1 группы лейкоцитов было на 21 ,8% (Р<0,05) больше, чем у телят 2 группы. Увеличение лейкоцитов происходило за счет сегментоядерных нейтрофилов - в 1 группе их было на 45,3% (Р<0,001) больше. В то время как содержание моноцитов и лимфоцитов было снижено на 54,4% (Р<0,05) и 20,3% (Р<0,05) соответственно. Таким образом, телята, как и их матери, находились в состоянии стресса. У животных 1 группы была снижена лизоцимная и комплементарная активность сыворотки крови на 44 и 10,7% соответственно. В то же время бактерицидная активность в 1 группе была на 6,5% (Р<0,05) выше, чем во 2. Фагоцитарная активность лейкоцитов на 5,1% (Р<0,01), фагоцитарное число на 8,1% и фагоцитарный индекс на 10,3% были ниже у телят 1 группы. У животных, полученных от коров с положительной РИА, значительно ниже было содержание иммуноглобулинов: ^ М на 38,1% (Р<0,05), ^ в на 32,3% (Р<0,05) и А на 38,5% (Р<0,05).

Таким образом, у телят 2-7дневного возраста, полученных от коров, у которых за 1-1,5 месяца до отела наблюдалась положительная реакция ингибирования агглютинации, показатели гуморального и клеточного иммунитета были снижены по сравнению с телятами, у матерей которых в сыворотке крови в аналогичный период ЕИФ не выявлялся.

При клиническом исследовании было установлено, что в 1 группе диа-

рея регистрировалась у 21 (95,5%), во 2 - у 22 (100%) животных, тяжелое и средней тяжести течение заболевания в 1 группе было отмечено у 11 (50%), во 2 - у 6 (27,3%). Омфалит в 1 группе регистрировался у 17 (77,3%) телят, умеренное и тяжелое течение заболевания было у 13 (59,1%), во 2 группе аналогичная патология диагностировалась у 13 (59,1%) животных, а умеренное и тяжелое течение отмечалось только у 6 (27,3%).

К 8-14 дневному возрасту у телят, полученных от коров с положительной РИА содержание Т-лимфоцитов становилось на 24,3% (Р<0,05) меньше, чем у телят, полученных от коров с отрицательной РИА. К этому времени бронхопневмония в 1 группе регистрировалась у 22 (100%) животных, во 2 - у 21 (95,5%). Заболевание средней степени тяжести у телят 1 группы отмечалось в 59, а во 2 - в 18,2% случаев.

Из вышеизложенного видно, что омфалит во 2 группе диагностировался в 1,3 раза реже, чем в 1. Диарея и бронхопневмония регистрировались среди животных обеих групп с одинаковой частотой. Необходимо отметить, что у телят, полученных от коров, у которых за 1-1,5 месяца до отела наблюдалась положительная РИА, умеренное и тяжелое течение омфалита и диареи встречалось в 2, а бронхопневмонии средней степени тяжести - в 3,2 раза чаще, чем среди телят, у матерей которых ЕИФ в аналогичный период не выявлялся.

Таким образом, по наличию ЕИФ в сыворотке крови стельных коров можно с определенной долей уверенности говорить о возможности развития патологии у телят, а наличие этого фактора у народившихся телят - о включении их в группу риска по возникновению инфекционных заболеваний.

2.2.2.10.Влияние вакцинации на показатели ЕИФ и иммунного статуса

Влияние вакцинации на показатели ЕИФ и иммунного статуса изучали в двух сериях опытов. В первой серии опытов влияние вакцинации на показатели ЕИФ изучали на 10 телятах. Животных иммунизировали вакциной «Бивак» согласно наставлению по ее применению. Сыворотку крови исследовали до иммунизации, спустя 14 и 30 дней после 1 введения вакцины, а также через 30 дней после второго введения.

Было установлено, что до вакцинации у всех животных РИА была отрицательной. Через 14 дней после 1 введения вакцины ИИ увеличивался на 16,7 % (Р<0,001). При этом положительная РИА отмечалась у 90% животных. Спустя месяц после первого введения вакцины, его величина снижалась на 10,9% (Р<0,05), оставаясь тем не менее выше фонового значения. Положительная РИА в этот период наблюдалась у 30% животных. Через месяц после вторичного введения вакцины ИИ снижался еще на 9,4% (Р<0,05), положительная РИА не выявлялась.

Таким образом, через 14 дней после иммунизации наблюдалось самое высокое значение ИИ и самый высокий процент животных с положительной РИА.

Во второй серии опытов изучали влияние на ЕИФ, а также на показатели естественной резистентности и иммунного статуса вакцинации с применением, а также без применения иммуномодулятора (п=30). Животные по принципу аналогов были разделены на 3 равные группы. Животных 1 и 2 групп иммунизировали вакциной «Бивак» согласно наставлению по применению, причем телятам 1 группы одновременно с иммунизацией вводили 1 мл 0,01% раствора тимогена, животных 3 группы не иммунизировали. Кровь и сыворотку исследовали в месячном возрасте (фон), а также через месяц после каждого введения вакцины.

Установлено, что у телят перед иммунизацией отношение лимфоцитов к нейтрофилам находилось на границе стадий мобилизации и резистентности. РИА у всех телят была отрицательной.

Через месяц у вакцинированных и невакцинированных телят соотношение лимфоцитов к нейтрофилам отклонялось в сторону стадии мобилизации. Причем у животных, вакцинированных без иммуномодулятора, это отклонение было наиболее существенным. В то же время у телят, иммунизированных с одновременным введением тимогена, величина отношения лимфоцитов к нейтрофилам была характерной для стадии резистентности. ЕИФ у животных, иммунизированных с одновременным введением тимогена, в этот период не обнаруживался. У телят, иммунизированных без тимогена, он был зарегистрирован в 30%, а у не иммунизированных - в 10% случаев. Величина ИИ достоверно увеличивалась только у животных, вакцинированных без тимогена. У телят всех групп на-

блюдалось увеличение на 6-7% (Р<0,001) бактерицидной активности сыворотки крови. Лизоцимная активность достоверно возрастала только у телят 1 группы -на 41,3% (Р<0,01). Наблюдалась активизация фагоцитоза. Наиболее интенсивно этот процесс происходил у вакцинированных животных: в 1 группе фагоцитарная активность лейкоцитов увеличивалась на 8,5% (Р<0,01), фагоцитарный индекс - на 131,2% (Р<0,001), фагоцитарное число - на 117,0% (Р<0,01), во 2 - на 6,5 (Р<0,01), 106,4 (Р<0,01) и 95,3% (Р<0,01) соответственно. Отмечалось повышение количества Т-лимфоцитов. Однако достоверное увеличение содержания Т-лимфоцитов было только в 1 группе - 56,2% (Р<0,05).

В 90 дневном возрасте ЕИФ выявлялся в 1 группе у 10% животных. Во 2 и 3 группах ЕИФ не регистрировался. У телят в этот период происходило некоторое уменьшение содержания сегментоядерных нейтрофилов при одновременном увеличении лимфоцитов. За счет этого увеличивалось соотношение лимфоцитов к ней-трофилам. Лизоцимная активность сыворотки крови в 1 группе снижалась на 46,2% (Р<0,01), в то время как во 2 и 3 группах она повышалась на 78,3 (Р<0,01) и 76,8% (Р<0,05) соответственно. Показатели фагоцитоза снижались во всех 3 группах, однако, их величины все равно оставались выше фоновых.

Таким образом, тимоген при одновременном введении с вакциной оказывал стресс-корректорное действие.

В результате иммунологического анализа было установлено, что у животных, иммунизированных вакциной «Бивак» с тимогеном и без него фоновые значения антител к антигену парагриппа-3 были равны. Через 30 дней после введения вакцины титр антител к этому антигену у животных, вакцинированных с тимогеном, увеличился в 1,4 раза, в то время как у животных вакцинированных без него, он остался прежним. Через месяц после второй вакцинации, у телят, вакцинированных с тимогеном, титр антител к антигену ПГ-3 снизился в 2,2, а без тимогена - в 1,1 раза, т.е. через месяц после первого введения вакцины прирост титра антител был отмечен только у телят, иммунизированных с одновременным введением тимогена. Через месяц после второго введения вакцины титры антител заметно снижались.

Сюрин В.Н. и соавторы (1985) наблюдали снижение титров антител к

вирусу ГТГ-3 при персистенции в этом организме возбудителя вирусной диареи. Учитывая, что в хозяйстве кроме наличия иммунодефицитных животных, циркулирует вирус диареи, возможно, что титры антител снижались и по этой причине, так как вирус ВД является иммунодепрессантом в отношении других возбудителей болезней.

2.2.2.11.Влияние остаточных уровней антител против антигена вируса ПГ-3 на формирование гомологичного поствакцинального иммунитета у телят

Изучение влияния остаточных уровней антител против антигена вируса ПГ-3 на формирование гомологичного поствакцинального иммунитета у телят изучили на 100 животных, принадлежащих ООО «Воронежпгацепродукт», СПК «Лискинский» и ОПХ ВГАУ.

Животных иммунизировали вакциной «Бивак» согласно наставлению по ее применению. Исследование сывороток крови на наличие антител к вирусу ПГ-3 проводили перед вакцинацией, а также через 30 дней после каждого введения вакцины.

В соответствии с уровнем колостральных или поствакцинальных антител животных разделили на группы: в 1 группу вошли телята, у которых антитела против антигена ПГ-3 в сыворотках крови отсутствовали, во 2 вошли телята, титр антител у которых был равен 1:20, в 3 - 1:40, в 4 - 1:80, в5 - 1:160 и в 6 -1:320.

В результате проведенных исследований было установлено, что в 1 группе на вакцинацию прореагировало 91,7% телят. Из них у 33,3% титр антител через месяц составил 1:20, у 54,2% - 1:40 и у 4,2% - 1:80. Во 2 группе титр остался прежним у 23,3%, повысился в 2-4 раза (1:40-1:80) у 65,1% и стал отрицательным у 11,6% животных. В 3 группе титр антител остался прежним у 46,7%, в 2 раза повысился (1:80) у 21,3% и снизился в 2-4 раза (1:20-отр.) у 32% телят. В 4 группе прежним остался титр у 10,8%, повысился в 2 раза (1:160) у 5,4%, снизился в 2-4-8 раз (1:40-1:20-отр.) у 83,8%. В 5 и 6 группах увеличения уровня титра антител не произошло.

Таким образом, из вышеизложенного видно, что при исходном уровне

антител 1:80, вакцинация негативно сказывается на приросте антител к вирусу ПГ-3 и у большинства телят вызывает снижение их титра. При остаточном титре гомологичных антител в сыворотке крови 1:160 и выше, увеличения титра поствакцинальных антител к вирусу ПГ-3 не происходит.

2.2.2.12.Влияние ЕИФ на формирование поствакцинального иммунитета у

телят

Влияние ЕИФ на формирование поствакцинального иммунитета у телят изучили на 40 животных. Телят иммунизировали вакциной «Бивак» согласно наставлению по применению. Сыворотку исследовали перед вакцинацией, а также через 30 дней после каждого введения вакцины.

Телята в зависимости от уровня колостральных или поствакцинальных антител, были разделены на 5 групп: в 1 группу вошло 6 животных, у которых антитела против антигена ПГ-3 отсутствовали, во 2 - 15 телят, титр антител у которых был равен 1:20, в 3 - 28 телят с титром 1:40, в 4 -26 телят с титром 1:80 и в 5 - 5 телят с титром 1:160.

Через месяц после вакцинации ЕИФ в 1 группе не выявлялся, во 2 группе он обнаруживался у 3 (20%) телят, в 3 - у 8 (28,6%), в 4 - у 7 (26,9%) и в 5 - у 4 (80%). Животные, у которых через месяц после иммунизации выявлялась положительная РИА, т.е. ЕИФ функционировал более 14 дней, на вакцинацию реагировали следующим образом. У 1(33,3%) теленка 2 группы в результате введения вакцины антитела из сыворотки крови исчезали, у 2 (66,7%) телят этой же группы титр антител оставался прежним. В 3 группе у 2 (25%) титр снижался в 2 раза (1:20), а у 6 (75%) оставался прежним. В 4 группе у 3 (42,8%) телят титр антител уменьшался в 4 раза (1:20), у 2 (28,6%) уменьшался в 2 раза (1:40) и у 2 (28,6%) оставался прежним. В 5 группе у всех животных титр антител снижался - у 1 (25,0%) теленка в 8 раз (1:20), у 2 (50,0%) - в 4 раза (1:40) и у 1 (25,0%) - в 2 раза (1:80).

Из вышеизложенного следует, что если через месяц после иммунизации в сыворотке крови обнаруживается ЕИФ, то увеличения титра антител не происходит. При этом ЕИФ наиболее часто встречается у телят с исходным титром антител равным 1:160. Учитывая тот факт, что естественный ингибирующий фактор

возникает в условиях максимального для каждого индивидуума гуморального ответа, то эти данные согласуются с результатами иммунизации телят, имеющих низкий и высокий титры антител. Таким образом, ЕИФ является одним из механизмов, тормозящим беспредельное образование антител в организме.

З.Выводы

1. В результате экспериментальных исследований медицинский тест первого уровня (метод определения ЕИФ) адаптирован к определению вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. Величина индекса ингибиро-вания, показывающего наличие иммунодефицита, должна быть >1,1.

2. Обнаружение в сыворотке крови естественного ингибирующего фактора свидетельствует о наличии вторичного иммунодефицита в организме, проявляющегося снижением комплементарной активности сыворотки крови, активности фагоцитоза, содержания Т-лимфоцитов и иммуноглобулинов, и появление которого на определенном этапе способствует возникновению различных заболеваний.

3. Колостральный иммунодефицит у телят с положительной РИА, регистрировался в 2,7 раз чаще, чем у животных, в сыворотке крови которых ЕИФ не обнаруживался.

4. У телят 2-7 дневного возраста, родившихся от коров, у которых за 1,01,5 месяца до отела наблюдалась положительная РИА, показатели гуморального и клеточного иммунитета снижены по сравнению с телятами, у матерей которых в сыворотке крови в аналогичный период ЕИФ не выявлялся. Причем у телят, родившихся от коров с положительной РИА, умеренное и тяжелое течение омфалита и диареи встречается в 2, а бронхопневмонии - в 3,2 раза чаще, чем среди телят, полученных от отрицательно реагировавших коров в РИА в аналогичный период.

5. Иммунизация телят вакциной «Бивак» через 14 дней вызывает возникновение положительной РИА у 90% животных. Через месяц уровень ИИ снижается, но остается выше фонового показателя и положительная РИА регистрируется еще у 30% животных. Через месяц после повторно-

го введения вакцины ИИ снижается еще сильнее и ЕИФ не выявляется.

6. Остаточный титр антител в сыворотке крови телят 1:160 и выше против ПГ-3 препятствует повышению уровня антител у этих животных при гомологичной вакцинации.

7. Функционирование ЕИФ в организме телят более 14 дней тормозит образование антител при иммунизации животных против ПГ-3.

8. Иммуномодулятор тимоген, вводимый одновременно с вакциной «Бивак», в дозе 1 мл 0,01% раствора на теленка, оказывал стресс-корректорное действие.

9. Нарушения белкового, углеводного, липидного, витаминно-минерального обмена веществ, а также в гигиене ухода и содержания животных вызывают снижение иммунного статуса, а их нормализация способствует компенсации вторичных иммунодефицитов.

4.Практические предложения

Для диагностики вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота рекомендуется использовать метод определения естественного ингибирующе-го фактора макромолекулярных антител.

б.Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Золотарева H.A. Иммунодефицита, профилактика и борьба с ними. / H.A. Золотарева. // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Мат. межд. научно-практической конференции 23-25 сентября 2002г. -Воронеж. - 2002. - С. 271-274.

2. Ильина H.A. Роль ЕИФ в диагностике иммунодефицитов у крупного рогатого скота и его взаимосвязь с некоторыми пред- и послеродовыми болезнями. / H.A. Ильина. // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных. Мат. межд. научной конференции молодых ученых 24-26 марта 2004г. - Владимир. - 2004. - С. 163-165.

3. Ильина H.A. Естественный ингибирующий фактор и его связь с иммунологической резистентностью, процессами ПОЛ и АОЗ. / H.A. Ильина, Ю.Н. Мась-янов, Н.В. Пасько. // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье живот-

ных. Мат. межд. научно-практической конференции 21-23 сентября 2004г. -Воронеж. - 2004. - С. 52-56.

4. Ильина H.A. Определение ЕИФ в сыворотке крови коров и его связь с возникновением неонатальной патологии телят./ H.A. Ильина, А.И. Золотарев. // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Мат. межд. научно-практической конференции 21-23 сентября 2004г. -Воронеж. - 2004. - С. 375-378.

5. Ильина H.A. Использование метода определения естественного ингиби-рующего фактора (ЕИФ) для диагностики вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. / H.A. Ильина. // Информ. листок. Воронежского ЦНТИ. - 2004. - №79-013-04. - Зс.

Подписано в печать 30.09.2004г. Формат 60x84 1/16. Бумага кн.-журн. П.л. 1,0. Гарнитура Тайме. Тираж 100 экз. Заказ № 371

Типография Воронежского государственного аграрного университета

им. К.Д. Глинки 394087 Воронеж, ул. Мичурина, 1

РНБ Русский фонд

2007-4 4670

2 7 OKI 2004

Актуальность темы. Основной задачей современного животноводства является увеличение производства высококачественных экологически чистых продуктов (мяса, молока и др.). Однако практика последних десятилетий ведения продуктивного животноводства показывает, что, не смотря на нарастающую интенсивность применения биологических и химиотерапевтических средств, остается стабильно высокой заболеваемость маточного поголовья и молодняка (М.М. Ковалев, 2002; В.И. Рыбин, 2002; А.Г. Шахов, 2002; А.Г. Нежданов, A.B. Мануйлов, 2003; В.Т. Самохин, 2003). В связи с этим возникла необходимость разработки новых подходов к пониманию причин и механизмов возникновения патологии животных для обоснования более эффективной стратегии ветеринарной защиты их здоровья и сохранения высокой продуктивности.

Влияние возрастной и приобретенной иммунной недостаточности у сельскохозяйственных животных на их заболеваемость и продуктивность доказано многими исследователями. Зарубежные специалисты при откорме или закупке телят обязательно учитывают уровень иммуноглобулинов в крови, от этого зависит цена животного (В.М. Апатенко, 1992; Ю.Н. Масьянов и соавт., 1995; М.М. Ковалев, 2002; Э.Д. Джавадов и соавт., 2003).

При иммунодефицитах чаще всего наблюдаются осложнения за счет инфекций, снижение продуктивности, высокая выбраковка, слабая реакция на вакцинацию (М.М. Ковалев, 2002). У молодняка иммунодефициты, как правило, сопровождаются желудочно-кишечными расстройствами и болезнями органов дыхания (И.М. Карпуть и соавт., 1997; В.М. Прощенко, 1997).

В современных условиях за счет приобретенного иммунодефицита у 3050% животных снижен синтез антител в 2-4 раза по отношению к животным с нормальным иммунным статусом, а у 10-15% - ответная реакция либо отсутствует, либо титр антител не достигает уровня, способного защитить организм от размножения в нем возбудителя (А.И. Ануфриев и соавт., 2000; Е.И. Большакова и соавт, 2000; К.О. Зернов, Л.И. Ефанова, 2002; В.Б. Шилов, E.H. Корсакова, 2002).

Однако, несмотря на экономическую и общебиологическую значимость, иммунодефициты остаются скрытым патологическим состоянием при оценке здоровья молодняка и взрослых животных. До настоящего времени нет общепринятых, доступных, с одной стороны, и информативных - с другой, методов перманентного контроля и диагностики за развитием и состоянием иммунной системы животных в условиях хозяйств.

В связи с этим проблема разработки и внедрения новых методов диагностики иммунодефицитов сельскохозяйственных животных является актуальной и представляет интерес для ветеринарной медицины в теоретическом и практическом отношениях.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований является изучение возможности использования метода определения естественного инги-бирующего фактора макромолекулярных антител (ЕИФ) для диагностики приобретенных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить параметры ЕИФ, характеризующие наличие иммунодефицита.

2. Изучить в сравнительном аспекте ЕИФ и другие показатели иммунного статуса.

3. Изучить показатели ЕИФ и других иммунологических данных в сравнительном аспекте мать-плод-новорожденный.

4. Изучить влияние фонового уровня антител на эффективность иммунопрофилактики и показатели ЕИФ.

5. Изучить влияние вакцинации с применением и без применения иммуно-модулятора на показатели ЕИФ.

Научная новизна. В результате экспериментальных исследований медицинский тест первого уровня (метод определения ЕИФ) адаптирован к определению вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. На примере этого вида животных изучена взаимосвязь ЕИФ с показателями иммунного статуса. Обнаружена взаимосвязь между обнаружением ЕИФ в сыворотке крови коров и снижением показателей клеточного и гуморального иммунитета у полученных от них телят. Изучено влияние фонового уровня антител к антигену ПГ-3 на эффективность гомологичной иммунопрофилактики и показатели ЕИФ. Получена приоритетная справка на изобретение «Способ диагностики вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота» №2004106803 от 9.03.2004г.

Практическая значимость. Для использования в ветеринарной медицине рекомендован доступный, не требующий больших материальных и временных затрат, метод диагностики вторичных иммунодефицитов крупного рогатого скота.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на международной научно-практической конференции «Свободные радикалы, анти-оксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004), ежегодных отчетных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии в период 2001 -2004 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научные статьи, 1 информационный листок.

Внедрение результатов исследований. Материалы диссертации вошли в проект методических рекомендаций «Система коррекции иммунного статуса у животных» (Воронеж, 2004).

На защиту выносятся следующие основные положения:

- о влиянии условий кормления и содержания на возникновение вторичных иммунодефицитов;

- обнаружение в сыворотке крови индекса ингибирования >1,1 свидетельствует о наличии вторичного иммунодефицита в организме;

- о снижении показателей клеточного и гуморального иммунитета у телят, родившихся от коров, у которых за 1,0-1,5 месяца до отела в сыворотке крови выявлялся ЕИФ;

- ЕИФ является одним из механизмов, тормозящим беспредельное образование антител в организме.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка использованной литературы. Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 16 рисунками. Библиография содержит 240 источников, в том числе 42 - иностранных авторов.

4. Выводы

1. В результате экспериментальных исследований медицинский тест первого уровня (метод определения ЕИФ) адаптирован к определению вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота. Величина индекса ингибиро-вания, показывающего наличие иммунодефицита, должна быть >1,1.

2. Обнаружение в сыворотке крови естественного ингибирующего фактора свидетельствует о наличии вторичного иммунодефицита в организме, проявляющегося снижением комплементарной активности сыворотки крови, активности фагоцитоза, содержания Т-лимфоцитов и иммуноглобулинов, и появление которого на определенном этапе способствует возникновению различных заболеваний.

3. Колостральный иммунодефицит у телят с положительной РИА, регистрировался в 2,7 раз чаще, чем у животных, в сыворотке крови которых ЕИФ не обнаруживался.

4. У телят 2-7 дневного возраста, родившихся от коров, у которых за 1,0-1,5 месяца до отела наблюдалась положительная РИА, показатели гуморального и клеточного иммунитета снижены по сравнению с телятами, у матерей которых в сыворотке крови в аналогичный период ЕИФ не выявлялся. Причем у телят, родившихся от коров с положительной РИА, умеренное и тяжелое течение омфалита и диареи встречается в 2, а бронхопневмонии - в 3,2 раза чаще, чем среди телят, полученных от отрицательно реагировавших коров в РИА в аналогичный период.

5. Иммунизация телят вакциной «Бивак» через 14 дней вызывает возникновение положительной РИА у 90% животных. Через месяц уровень ИИ снижается, но остается выше фонового показателя и положительная РИА регистрируется еще у 30% животных. Через месяц после повторного введения вакцины ИИ снижается еще сильнее и ЕИФ не выявляется.

6. Остаточный титр антител в сыворотке крови телят 1:160 и выше против ПГ-3 препятствует повышению уровня антител у этих животных при гомологичной вакцинации.

7. Функционирование ЕИФ в организме телят более 14 дней тормозит образование антител при иммунизации животных против ПГ-3.

8. Иммуномодулятор тимоген, вводимый одновременно с вакциной «Бивак», в дозе 1 мл 0,01% раствора на теленка, оказывал стресс-корректорное действие.

9. Нарушения белкового, углеводного, липидного, витаминно-минерального обмена веществ, а также в гигиене ухода и содержания животных вызывают снижение иммунного статуса, а их нормализация способствует компенсации вторичных иммунодефицитов.

5.Практические предложения

Для диагностики вторичных иммунодефицитов у крупного рогатого скота рекомендуется использовать метод определения естественного ингибирующего фактора макромолекулярных антител.