Автореферат и диссертация по медицине (14.01.24) на тему:Влияние различных консервантов и антикоагулянтов на гемосовместимость кардиоваскулярных биопротезов

ДИССЕРТАЦИЯ
Влияние различных консервантов и антикоагулянтов на гемосовместимость кардиоваскулярных биопротезов - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Влияние различных консервантов и антикоагулянтов на гемосовместимость кардиоваскулярных биопротезов - тема автореферата по медицине
Кудрявцева, Юлия Александровна Кемерово 2011 г.
Ученая степень
доктора биологических наук
ВАК РФ
14.01.24
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние различных консервантов и антикоагулянтов на гемосовместимость кардиоваскулярных биопротезов

004619201

КУДРЯВЦЕВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ КОНСЕРВАНТОВ И АНТИКОАГУЛЯНТОВ НА ГЕМОСОВМЕСТИМОСТЬ КАРДИОВАСКУЛЯРНЫХ БИОПРОТЕЗОВ

(экспериментальное исследование) 14.01.24. - Трансплантология и искусственные органы

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 0ЙН3 2011

Москва-2011

004619201

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний Сибирского отделения РАМН, г. Кемерово.

Научный консультант

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Журавлева Ирина Юрьевна

член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук,

профессор Белов Юрий Владимирович

доктор медицинских наук, профессор Дан Василий Нуцович

доктор биологических наук, профессор Новикова Светлана Петровна

Ведущая организация: Федеральное государственное учреждение

«Новосибирский научно-исследовательский институт патологии кровообращения имени академика Е. Н. Мешалкина Росмедтехнологий»

Защита диссертации состоится 2011 г. в асов

на заседании диссертационного совета Д.208.055.01. при ФГУ «ФНЦ трансплантологии и искусственных органов имени академика В. И. Шумакова» Минздравсоцразвития РФ по адресу: 123182, г. Москва, ул. Щукинская, д. 1, конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФНЦ трансплантологии и искусственных органов имени академика В. И. Шумакова» Минздравсоцразвития РФ.

Автореферат разослан «¿г»2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.055.01 доктор медицинских наук, профессор

О. П. Шевченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Одним из важнейших направлений современной сердечно-сосудистой хирургии является создание новых моделей протезов для замещения пораженных клапанов сердца и сосудов, обладающих био- и гемосовместимостыо. Ежегодно в России проводится более 6 тыс. операций при окклюзии периферических артерий, более 17 тыс. операций по коррекции врожденных и приобретенных пороков сердца (Покровский А. В., 2007; Бокерия Л. А., Гудкова Р. Г., 2008), что обусловливает достаточно высокую потребность в кардиоваскулярных протезах.

Биологические протезы обладают рядом преимуществ, определяющих их широкое применение в реконструктивных операциях на сердце и периферических сосудах (Чернявский А. М. с соавт., 2002; Иванов С. В., 2005; Караськов А. М. с соавт., 2008; Барбараш Л. С. с соавт., 2009). Значительное влияние на отдаленные результаты операций оказывают качественные характеристики биопротезов, которые зависят от базовой консервации и последующей модификации консервированного биоматериала (Севастьянов В. И. с соавт., 1995; Барбараш Л. С. с соавт., 2002; Wang Е. Y. et al., 1993; Dardik H. A. et al., 2002; Jee K. S. et al., 2003).

Мономерное эпоксисоединение - диглицидиловый эфир этиленгликоля -весьма широко применяется в нашей стране для консервации кардиоваскулярных биопротезов. Консервация диэпоксидом позволяет придать биоматериалу резистентность к кальцификации, удовлетворительные физико-механические свойстваи гемосовместимость (Барбараш Л. С. с соавт., 1995; Журавлева И. Ю., 1995; Иванов С. В., 2005).

Как показывает анализ использования артериальных биопротезов, в структуре отдаленных послеоперационных осложнений преобладают тромбозы в зоне реконструкции (Ивченко О. А. с соавт., 1999; Гене А. П. с соавт., 2001; Иванов С. В. 2005). При использовании биопротезов клапанов сердца риск тромбозов и тромбоэмболий не столь значителен, но, тем не менее, требует оптимизации гемосовместимых свойств биоматериала (Аминов В. В., 2004; Чернявский А. М. с соавт., 2007; Барбараш Л. С. с соавт., 2009).

Для повышения гемосовместимости биопротезов перспективным направлением является использование в качестве базового консерванта биоматериала полиэпоксисоединений. Данная группа препаратов имеет в составе разветвленной полимерной цепи свободные эпоксигруппы, которые могут быть использованы для дополнительной модификации ткани биологически активными веществами.

Для антитромботической модификации кардиоваскулярных биопротезов в настоящее время применяется нефракционированный гепарин. В последние годы в медицинской практике широкое применение находят низкомолекулярные гепа-

рины, обладающие целым рядом преимуществ перед нефракционированным гепарином: высокой аититромботической активностью, сниженным риском развития тромбоцитопении и преимущественным ингибированием фактора Ха (Бар-каган 3. С., 2000; Зубаиров Д. М., 2000; Алиев М. А. с соавт., 2004; Hirsh J., 2001).

Кроме характеристик биологических протезов, на отдаленные результаты реконструктивных операций значительное влияние оказывает шовный материал. Хроническое воспаление в зоне сосудистого анастомоза, спровоцированное шовным материалом, может явиться причиной развития гиперплазии неоинтимы (Белоярцев Д. Ф., 2003; Рае W. Е. et al., 1981). Развитию гиперплазии неоинтимы на поврежденной швом поверхности предшествует адгезия тромбоцитов в зоне анастомоза и сорбция белков крови (Курьянов П. С. с соавт., 2008; Connolly R. et al., 1988).

Нарушение функции клапанов в магистральных венах нижних конечностей является основным фактором развития хронической венозной недостаточности (Стеммер Р., 1997, Богачев В. Ю., 2001). Различными формами хронической венозной недостаточности, в том числе посттромботическим синдромом, страдает около 35 миллионов населения России (Яблоков Е. Г. с соавт., 1999; Савельев В. С., 2000). Использование в восстановительных реконструктивных операциях клапаносодержащих аутотрансплантатов ограничено наличием подходящих участков необходимого диаметра с компетентными клапанами, а также спазмированием пересаженного аутотрансплантата, что в итоге приводит к тромбообразованию в зоне операции (Суковатых Б. С., 1991, Игнатьев И. М., 2002).

Следует заметить, что адекватной модели протеза венозного клапана в настоящее время не существует. Весьма перспективным решением этой проблемы является разработка протеза венозного клапана с использованием ксе-ногенного материала, консервированного эпоксисоединениями.

Таким образом, проблема тромборезистентности и гемосовместимости биологических протезов в настоящее время достаточно актуальна. Необходимы исследования новых перспективных полиэпоксидных соединений, а также оценка эффективности применения новых препаратов класса низкомолекулярных гепаринов с целью повышения био- и гемосовместимости кардиова-скулярных биопротезов. Разработка биопротеза венозного клапана позволит решить проблему коррекции венозной недостаточности.

Цель настоящего исследования - разработка способов повышения гемосовместимости кардиоваскулярных биопротезов путем использования полиэпоксидных соединений и иммобилизованных гепаринов различной молекулярной массы.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние консервации эпоксидными смесями оригинальной композиции на аминокислотный состав и физико-механические свойства ксе-ногенного биоматериала различной видовой и тканевой принадлежности.

2. Изучить влияние эпоксидных консервантов и гепаринов различной молекулярной массы на структуру поверхности ксеногенного биоматериала различной видовой и тканевой принадлежности.

3. Оценить в сравнительном аспекте количественные параметры иммобилизации нефракционированного и низкомолекулярного гепарина на биопротезы сосудов.

4. Изучить процессы контактной активации тромбоцитов и сорбции протеинов крови при взаимодействии с ксеногенными артериями, обработанными эпоксисоединеншши и модифицированными нефракционированным гепарином и низкомолекулярным гепарином «Эноксапарин натрия».

5. Обосновать подход к созданию гемосовместимых ксеногенных клапа-носодержащих венозных биопротезов.

6. Изучить in vitro процессы трансформации зоны сосудистых анастомозов после контакта с кровью при использовании различного шовного материала - нитей из полипропилена, полидиоксанона и никелида титана.

Научная новизна.

Для консервации биопротезов использованы новые смеси эпоксидных соединений оригинальной композиции.

Для повышения тромборезистентности кардиоваскулярных биопротезов впервые предложено использовать низкомолекулярный гепарин - Эноксапарин натрия.

Впервые показаны различия контактно-активационных свойств поверхности биоматериала в зависимости от способа консервации и модификации.

Впервые показано изменение морфологии поверхности биоматериала в зависимости от видовой и тканевой принадлежности при применении консервантов с различной структурой углеводородной цепи и гепаринов различной молекулярной массы.

Впервые качественно и количественно охарактеризован процесс сорбции белков крови при контакте с поверхностью эпоксиобработанного биоматериала до и после модификации антикоагулянтами.

Впервые рассмотрена возможность разработки протеза венозного клапана с использованием ксеногенного материала, консервированного эпоксн-соединениями.

Впервые использована технология послойной антитромботической модификации венозных сегментов крупного рогатого скота с целью максимального сглаживания поверхности биоматериала и повышения ее гемосов-местимости.

Впервые проведен сравнительный анализ взаимодействия различного шовного материала с компонентами крови и влияние модификации гепарином на сорбционные и контактно-активационные процессы в зоне сосудистого анастомоза.

Практическая значимость.

Результаты работы могут быть использованы при создании новых моделей биологических протезов клапанов сердца, артериальных и клапаносодер-жащих венозных заменителей.

Обосновано использование композиций эпоксисоединений с различной длиной и структурой углеводородной цепи для обеспечения заданных свойств биоматериала.

Предложен способ повышения тромборезистентных свойств кардиова-скулярных биопротезов путем модификации биоматериала низкомолекулярным гепарином («Эноксапарин натрия»).

Технология послойной модификации поверхности клапаносодержащих венозных сегментов, обработанных эпоксидными консервантами, может быть использована при создании биопротеза венозного клапана.

Установлены особенности влияния различных видов шовного материала на взаимодействие зоны сосудистого анастомоза с компонентами крови. Показана необходимость повышения гемо- и биосовместимости шовного материала, используемого в сердечно-сосудистой хирургии.

Предложена модель in vitro для оценки гемосовместимости сосудистых протезов и шовного материала при контакте с кровью.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Состав консервирующего раствора и химическая структура эпоксисоединений, используемых для консервации, в значительной мере определяют качество поперечной сшивки фибриллярных белков, физико-механические свойства и структуру поверхности биоматериала различной видовой и тканевой принадлежности.

2. Модификация кардиоваскулярных биопротезов с применением низкомолекулярных гепаринов обеспечивает снижение активации тромбоцитарного звена гемостаза, уменьшение количественных параметров сорбции протеинов крови и определяет преимущественную сорбцию альбумина.

3. На результаты реконструктивных операций на артериях малого диаметра значительное влияние оказывает шовный материал, способный провоцировать массивную сорбцию протеинов и компонентов крови в зоне сосудистого анастомоза.

Область применения и внедрение результатов исследования. Основные результаты работы внедрены в ЗАО «НеоКор» и применяются при серийном производстве биопротезов клапанов сердца и сосудов. Предложенная модель in vitro для оценки гемосовместимости сосудистых протезов и полученное по результатам исследования рационализаторское предложение по модификации способа антитромботической обработки сосудистых протезов используются в отделе экспериментальной и клинической кардиологии НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний СО РАМН.

Работа выполнена в рамках плановой тематики НИР Научно-исследовательского института комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний СО РАМН «Механизмы адаптации организма реципиента к имплантируемым биоматериалам» (номер государственной регистрации 01.200316097).

Апробация материалов диссертации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: Первой ежегодной научной сессии Кемеровского кардиологического центра СО РАМН (Кемерово, 1997), 11th Annual Meeting of the EACTS (Copenhagen, 1997), юбилейной конференции «Прогресс и проблемы в лечении заболеваний сердца и сосудов» (С.-Петербург, 1997), VII, XI, XIII, XIV Всероссийском съезде сердечнососудистых хирургов (Москва, 2001, 2005, 2007, 2010); Всероссийской конференции с международным участием «Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии» (Кемерово, 2001), Четвертых научных чтениях, посвященных памяти академика Е. Н. Мешалкина с международным участием (Новосибирск, 2004), региональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы сердечно-сосудистой хирургии» (Кемерово, 2006), Всероссийской научно-практической конференции «Стандартизация медицинских технологий, реабилитация в ангиологии и сосудистой хирургии» (Новокузнецк, 2006); ESAO Congress (Geneva-Switzerland 2008 and Compienue-France 2009); Объединенном Съезде кардиологов и кардиохирургов Сибирского федерального округа с международным участием (Томск, 2009), Всероссийской научно-практической конференции «Облитерирующие заболевания сосудов: проблемы и перспективы» (Кемерово, 2009), Is' Russian - Hellenic Symposium with International participation «Biomaterials and Bionanomaterials: Recent Advances Safety and Toxicology Issues» (Heraklion, Crete-Greece, 2010), на Международном конгрессе «Кардиология на перекрестке наук» (Тюмень, 2010), на Международном конгрессе «Современная кардиология: эра инноваций» (Томск, 2010).

Фрасмент диссертации, посвященный влиянию шовного материала на гемосовместимость зоны сосудистого анастомоза, занял III место во Всероссийском конкурсе «Будущее шовных материалов» (Москва, 2008).

Апробация работы состоялась 30.09.2009 г. (протокол № 1) на совместном заседании сотрудников кафедр кардиологии и сердечно-сосудистой хирургии, анестезиологии и реанимации ГОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия Росздрава», ученого совета Учреждения РАМН «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечнососудистых заболеваний СО РАМН и МУЗ «Кемеровский кардиологический диспансер».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 50 печатных работ в форме научных статей и тезисов в журналах, трудах научных съездов и конференций (из них 19 в журналах, рекомендованных ВАК), включая монографию «Биологические протезы артерий», и два патента на изобретение.

Личный вклад автора. Планирование и проведение всех экспериментов. Обработка и анализ полученных данных, подготовка публикаций.

Структура работы. Диссертация изложена на 259 страницах машинописного текста и состоит из введения, пяти глав, содержащих обзор литературы, описание материала и методов исследования, трех глав, содержащих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы. Список цитируемой литературы включает 383 источника, в т. ч. 233 зарубежных. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 66 рисунками.

В настоящем исследовании были изучены четыре вида биоматериала: створки аортальных клапанов свиньи, перикард, клапаносодержащие сегменты v. saphena medialis и сегменты внутренней грудной артерии крупного рогатого скота. Для консервации биоматериала применяли различные сшивающие агенты: глутаровый альдегид (ГА), диглицидиловый эфир эти-ленгликоля (ДЭЭ) и новые консерванты СМ1, СМ2 и СМЗ, представляющие собой смеси ДЭЭ и олигоэпоксидных препаратов. Препараты В2 и В4, входящие в состав смесей СМ1, СМ2 и СМЗ, синтезированы в Иркутском институте органической химии им. А. Е. Фаворского СО РАН (г. Иркутск). Структуры использованных эпоксидных соединений представлены на рис. 1.

Рис. 1. Структуры эпоксидных препаратов: а - диглицидиловый эфир этиленгликоля (ДЭЭ), б - препарат В2 (Ди-1-[2-(глицидилокси)этокси] этиловый эфир диэтиленгликоля), в - препарат В4 (1,2,3,4,6-Пента-О- {1 -[(глицидилокси)этокси]этил) -а-О-глюкопираноза)

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В.

Для антитромботической модификации биоматериала использовали нефрак-ционированные гепарины: «Биохеми» (Biochemie, Австрия) и «Белмедпрепарат» (РУП «Белмедпрепараты», Беларусь), а также низкомолекулярный гепарин «Эноксапарин натрия» («Клексан», Aventis, Франция). Модификацию образцов (артерии, аортальные створки и перикард) выполняли растворами антикоагулянтов с концентрацией 100 Ед/мл в течение 16 ч. Венозные сегменты с клапанным аппаратом модифицировали в три этапа: сначала венозные образцы инкубировали в растворе соответствующего антикоагулянта при pH 7,4 и 37 °С в течение 4 ч, затем в растворе соответствующего консерванта, далее после отмывки физиологическим раствором NaCl образцы помещали в раствор донорского альбумина с концентрацией 3 г/л при pH 4,5 и 37 °С на 4 ч и снова в консервирующий раствор. Далее после отмывки в физиологическом растворе сегменты подвергали повторной модификации в растворе соответствующего антикоагулянта.

До начала проведения экспериментов все образцы хранили в консервирующем растворе.

Для оценки структурной стабильности консервированного биоматериала использовали комплекс методов. Аминокислотный состав биоматериала (п=100) проводили на автоматическом аминокислотном анализаторе «Hitachi-835» (Япония). Данный раздел выполнен в отделе хроматографического анализа НИИ физико-химической биологии им. А. Н. Белозерского МГУ, Москва (зав. отделом доктор химических наук, профессор JI. А. Баратова).

Исследование физико-механических свойств биоматериала (п=300) выполнено в лаборатории полимерных и композиционных материалов Института физики прочности и материаловедения СО РАН г. Томска (руководитель лаборатории - доктор технических наук С. В. Панин). Испытания проведены в условиях продольного растяжения однотипно приготовленных образцов, в соответствии с ГОСТ 270-75. Эксперименты выполнены на разрывной машине «Instron-5582» (Великобритания);

Структуру биоматериала (п=135) исследовали методом световой микроскопии с окраской препаратов различными способами: гематоксилин-эозином - для анализа клеточных структур, пикрофуксином по Ван-Гизон -для оценки структуры коллагеновых волокон, для идентификации отложений кальция - специфичную окраску азотно-кислым серебром по Коссу. Гистологические препараты исследовали с помощью микроскопа МИКМЕД-2 («JIOMO», Санкт-Петербург).

Цитотоксичность биоматериала оценивали по величине гемолиза, индуцированного биоматериалом. Исследуемые образцы (п=130) инкубировали в растворе 0,9 % NaCl при 37 °С в течение 120 мин, после добавления 200 мкл свежей цитратной крови повторно инкубировали 60 мин. После инкубации полученный раствор центрифугировали и измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре.

Количество иммобилизованного гепарина определяли тремя различными методами: 1) в реакции с толуидиновым синим (по методике проф. С. П. Новиковой, НЦССХ им. А. Н. Бакулева, Москва, 1988) (п=1620), 2) радиоактивным методом с использованием Н3 (п=240) и 3) методом определения по количеству серы (п=150).

Влияние консервантов и антикоагулянтов на структуру поверхности биоматериала оценивали при помощи сканирующей электронной микроскопии (п=165). Исследования проведены совместно со старшим научным сотрудником Института геологии, геофизики и минералогии СО РАН, кандидатом химических наук А. Т. Титовым (г. Новосибирск) на растровом электронном микроскопе LEO 1430 VP (Carl Zeiss, Germany) при 20 кВт. Толщина напыления золотосодержащих пленок составила приблизительно 500 нм.

Для изучения влияния шовного материала в зоне сосудистого анастомоза были использованы сегменты ксеноартерий, консервированные ДЭЭ. В качестве шовного материала применяли «Prolene» 6/0 (Ethicon), рассасывающуюся нить полидиоксанон (PDS) (Ethicon) 6/0 и нить из никелида титана (TiNi), сопоставимую по диаметру с Prolene (НИИ медицинских материалов и имгшантатов с памятью формы, г. Томск).

Для изучения взаимодействия биоматериала с кровью была разработана модель in vitro. Для проведения исследований образцы всех групп (L=6 см, d=4,5-5 мм) (п=482) закрепляли на штуцерах магистралей многоканального перистальтического насоса Watson-Marlow 2054U/CA24 (Англия). Каждую магистраль с фиксированным образцом заполняли свежей цитратной донорской кровью. Скорость циркуляции крови составила 0,04 литра в минуту при температуре 37 °С. После проведения испытаний кровь от каждого образца собирали в отдельную пробирку. Особенность данной модели состоит в том, что испытание каждого образца и анализ параметров его гемосовместимости проводятся индивидуально.

Для оценки параметров агрегации тромбоцитов продолжительность контакта образцов с кровью составила 3 мин. Исследования проводили с помощью анализатора агрегации тромбоцитов АР 2110 (Solar, Беларусь). Агрегацию тромбоцитов индуцировали раствором АДФ с концентрацией 1,25 мкг/мл. Измеряли скорость агрегации тромбоцитов V (%/min), максимум агрегации МАХ (%) и время агрегации Т (с).

Для оценки количества и изучения качественного состава белков, сорбировавшихся при контакте с кровью, выполняли их десорбцию с внутренней поверхности сосудистых сегментов. Время контакта с кровью составило 5,10, 30, 60, 90 и 120 мин. Десорбцию протеинов крови проводили на шейкере при комнатной температуре в течение 30 мин в растворе 2 M NaCl, затем в течение 30 мин в растворе 6 M мочевины. Полученные растворы подвергали диализу против 0,9 % раствора NaCl в течение 24 ч с трехкратной сменой раствора.

Затем растворы концентрировали при комнатной температуре до объема 0,3 мл. Оценку суммарного количества сорбировавшихся белков крови осуществляли по методу Бредфорда с Coomassie G-250 (Sigma, Germany).

Идентификацию белков выполняли методом двумерною иммуноэлектрофо-реза в 1 % геле агарозы с моно- и полиспецифическими антисыворотками против сывороточных белков крови человека (Нижегородское госпредприятие по производству бактерийных препаратов «ИмБио», г. Нижний Новгород). Для идентификации преципитатов проводили окраску геля в растворе Coomassie R-250 (Sigma, Germany) в течение 30 мин при комнатной температуре, затем отмывали в дифференцирующем растворе (10 % раствор уксусной кислоты). Пластины высушивали и по линиям преципитации определяли качественный спектр белков.

Определение количества каждого белка проводили при помощи вертикального электрофореза диализата в акриламидном геле. Для этого использовали градиентный гель (5-15 %) с толщиной слоя 1 мм, полученный с помощью устройства Gradient-Forming devices (Sigma). Электрофореграмму высушивали при помощи GelAirCellophan Support (Bio-Rad). Количественную оценку белков крови проводили при помощи сканирующего денситометра ДМ 2120 (Solar, Беларусь).

Количество иммуноглобулинов IgG, IgM и IgA определяли методом иммуноферментного анализа при помощи набора реагентов «Иммуноскрин-G,M,A- ИФА-БЕСТ» (Новосибирск, Россия).

Кальций-связывающую активность исследовали in vivo путем подкожной имплантации образцов биоматериала крысам линии Wistar весом 55-60 г. Использовали створки аортального клапана свиньи, консервированные ГА, ДЭЭ, СМ1, СМ2 и СМЗ (п=100). Удаление образов производили через 60 суток. Удаленные образцы отмывали от окружающих тканей в 0,9 % растворе NaCl, после чего высушивали до постоянной массы. Гидролиз образцов проводили на песочной бане (t=150 °С) в 0,5 мл раствора 50 % хлорной кислоты. Количество кальция определяли на атомно-адсорбционном спектрофотометре («Perkin Elmer, 5100», USA). Содержание кальция в образце рассчитывали по формуле:

С = С xV : m,

пр íip. 1

где С - содержание кальция (мкг) в 1 мг сухой массы образца, Спр-концентрация кальция (мкг/мл) в 1 мл пробы, полученная по калибровочной кривой; Vnp - объем пробы (мл), m - масса исследуемого образца (мг).

Изучение влияния шовного материала на кальций-связывающую активность биоткани (образцы ксеностворок, консервированные ДЭЭ, прошитые Prolene, TiNi, PDS) проводили путем подкожной имплантации крысам. По истечении 60 суток образцы были извлечены, отмыты в 0,9 % растворе NaCl и подвергнуты визуальному осмотру. Затем часть биоматериала помещали в 1,0 % раствор ГА с последующим морфологическим изучением при помощи

световой микроскопии (п=35). В оставшихся образцах оценивали количество кальция методом атомно-абсорбционной спектроскопии (п=105).

Статистическую обработку данных проводили при помощи пакета 81ай8Йса 6.0. Рассчитывали значение средней арифметической величины (М) и стандартной ошибки (±ш); достоверность различий оценивали по критерию Стьюдента (I).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние различных эпоксидных препаратов на качество консервации биоматериала

Известно, что е-1ЧН2 группы лизина и гидроксилизина являются химической основой образования интра- и интермолекулярных поперечных связей при фиксации нативного биоматериала такими консервантами, как ГА и ДЭЭ (\Voodrof Е. А., 1979; Ти Я. е1 а1., 1994). Результаты проведенного аминокислотного анализа показали общие закономерности взаимодействия консервантов и биоматериала. ГА взаимодействует только с лизином и гидроксилизином коллагеновой матрицы. В отличие от ГА, ДЭЭ и эпоксисмеси СМ1, СМ2 и СМЗ, помимо лизина и гидроксилизина, активно вступают в реакцию с метио-нином, гистидином и тирозином. Данная закономерность установлена для всех видов изучаемого биоматериала.

Установлено, что при консервации образцов ксеностворок ГА в процесс сшивки вовлекается 86,6 % лизина и гидроксилизина. Использование диэпок-сида и эпоксидных смесей (рис. 2а) обеспечивает более значительную плотность сшивки. По сшивающей активности в отношении лизина и гидроксилизина (суммарно) консерванты можно расположить в следующем порядке: ДЭЭ (95,1 %) > СМ2 > (94,9 %) > СМ1 (93,9 %) > СМЗ (93,2 %) > ГА (86,6 %).

35,00 г 30,0025,0020,00 15,00 10,00 5,00 0,00

Рис. 2а. Относительное содержание некоторых аминокислот в ткани ксеностворок, консервированной различными способами

Максимальное вовлечение в сшивку гистидина обеспечивали ДЭЭ и СМЗ - 92,8 % этой аминокислоты вступило в реакцию с консервантом. Оценивая убывание свободных остатков всех пяти аминокислот, следует признать, что наибольшая суммарная плотность связей в ткани ксеносгворок достигается при использовании консерванта СМ1 (84,4 %), затем ДЭЭ (83,7 %), СМ2 (82,2 %) и СМЗ (81,2 %).

При изучении аминокислотного состава образцов ксеноперикарда наблюдали иную картину (рис. 26). По степени убывания свободных остатков лизина I и гидроксилизина все полиэпоксидные смеси несколько уступают ДЭЭ -эффективность сшивки уменьшается в ряду ДЭЭ>СМ1>СМ2>СМЗ. Вместе с тем, эпоксидные смеси весьма эффективно вовлекают в сшивку тирозин -использование СМ 1 обеспечивает связывание 100 % этой аминокислоты, СМ2 и СМЗ - около 97 %.

Анализируя суммарное количество вовлеченных в сшивку аминокислот, можно отметить, что для ксеноперикарда наилучший сшивающий эффект оказывает ДЭЭ, превосходя эпоксидные смеси в 2,5 раза. Столь выраженные различия в сшивающей активности ДЭЭ и эпоксисмесей обусловлены различиями сшивки по метионину. По-видимому, особенности структуры углеводородной цепи препаратов, входящих в состав эпоксисмесей, производят эффект «структурной некомплементарности», когда затруднено взаимодействие реакционной эпоксигруппы с определенной аминокислотой.

Рис. 26. Относительное содержание некоторых аминокислот в ткани ксеноперикарда, консервированного различными способами

Для образцов ксеноартерий максимальный сшивающий эффект по лизину и гидроксилизину был отмечен при использовании СМЗ - 94 % данных аминокислот было вовлечено в сшивку фибриллярных белков (рис. 2в). Сопоставляя исследуемые консерванты по эффективности вовлечения свободных аминогрупп лизина и гидроксилизина в процесс сшивки, их можно расположить в ряду:

СМЗ(94 %)>СМ 1(93,3 %)>ДЭЭ(93 %)>СМ2(92 %)>ГА(87,7 %). Сшивающая способность ГА во всех исследуемых образцах достоверно (р<0,05) уступает эпоксидным консервантам. Суммарно по Lys, OHLys, Туг, His и Met максимальный сшивающий эффект был отмечен при обработке ДЭЭ - 89,5 %. Изучаемые эпоксидные смеси практически не уступают ДЭЭ: СМ1 и СМЗ - 88,5 %, СМ2 -87,5 %. Несколько более высокая сшивающая активность ДЭЭ обусловлена более эффективным вовлечением в сшивку метионина.

30,00 25,00 20,00 15,00 10,00 5,00 0,00

Рис. 2в. Относительное содержание некоторых аминокислот в ткани ксеноартерий, консервированных различными способами

Рис. 2г. Относительное содержание некоторых аминокислот в ткани ксеновен, консервированной различными способами

В венозных образцах, консервированных как ДЭЭ, так и эпоксисмесями СМ1, СМ2 и СМЗ, отмечено практически полное отсутствие свободных остатков лизина и гидроксилизина (рис. 2г). По эффективности вовлечения в сшивку данных аминокислот консерванты можно расположить в ряду: СМ 1(95,6 %)>СМ2(95%)=СМЗ(95 %)>ДЭЭ (94,3 %)>ГА(84,2 %).

Если рассматривать суммарное уменьшение свободных остатков лизина, | гидроксилизина, метионина, гистидина и тирозина в венозных сегментах, то максимальная сшивка была отмечена в образцах, консервированных СМЗ: суммарное содержание свободных остатков всех пяти аминокислот снизилось на 90,2 % (р<0,05), несколько меньше - на 88,4 % - при использовании ДЭЭ. 1 Эпоксисмеси СМ1 и СМ2 оказывали сшивающее воздействие практически одинаково - на 85,3 и 86,5 % соответственно (р>0,05). В целом можно утверждать, что воздействие на биоматериал всех эпоксисоединений однотипно и заключается в образовании специфических для данного класса консервантов связей со свободными остатками лизина, гидроксилизина, метионина, гистидина и тирозина коллагеновой матрицы. Максимальную суммарную плотность поперечной сшивки ткани артерий и перикарда обеспечивает ДЭЭ, вен - СМЗ и створок аортального клапана - СМ 1.

При гистологическом исследовании эпоксиобработанных ксеностворок было установлено, что все образцы имели однотипное строение - деление на слои сохранено, коллагеновые волокна расположены компактно в фиброзном слое и более рыхло в спонгиозном, сохранена их характерная извитость (рис. 3). Максимально компактное расположение коллагеновых волокон в ткани обеспечила обработка эпоксисмесью СМЗ, содержащей в своем составе препарат В4 с разветвленной структурой углеводородной цепи, за счет которой, по-видимому, и происходит более плотная интерфибриллярная сшивка.

Для образцов ксеноперикарда, ксеновен и ксеноартерий отмечена аналогичная зависимость. Таким образом, результаты гистологического исследования свидетельствуют, что использование эпоксидных препаратов СМ 1, СМ2 и СМЗ обеспечивает высокую сшивающую активность, что в итоге определяет удовлетворительную структуру коллагена.

111

■" -г- - -'-.-А.-"- " • ■ - ' -V \ *

в*

Рис. 3. Гистологические препараты ксеностворок, консервированных: а) ДЭЭ, б) СМ1, в) СМ2, г) СМЗ. Окраска гематоксилин-эозином. Ув. х200

Установлено, что все изучаемые консерванты придают биоматериалу удовлетворительные физико-механические свойства. Показатели прочности образцов створок, консервированных ГА, ДЭЭ, СМ1 и СМ2, не имели достоверных различий (р>0,05) (рис. 4а). Наибольшие показатели прочности были отмечены в образцах, консервированных с использованием СМЗ, что обусловлено структурой консервированного биоматериала: высокой плотностью упаковки сшитых коллагеновых волокон, обеспечивающих устойчивость биоматериала к нагрузкам на разрыв.

По прочности ГА-обработанный ксеноперикард значительно превосходил все группы эпоксиобработанного (р<0,01), кроме обработанных СМЗ (р>0,05). Прочность образцов, консервированных ДЭЭ, СМ1 и СМ2, практически не различалась (р>0,05).

Среди ксеноартерий наибольшей прочностью обладали обработанные ГА и СМЗ (р>0,05), несколько уступали им образцы, консервированные СМ2 (р>0,05). Для венозных образцов, консервированных эпоксисоединениями, характерна тенденция к увеличению прочности в ряду: СМ1<ДЭЭ(р<0,05)< СМ2(р>0,05)<СМЗ(р>0,05)<ГА (р>0,05).

Полученные данные согласуются с результатами гистологического исследования биоматериала, обработанного эпоксидными консервантами - максимально компактное расположение коллагеновых волокон, отмеченное в биоматериале, обработанном СМЗ, обеспечивает его более высокую прочность. При использовании СМЗ показатели прочности максимальны для всех видов изучаемых биотканей, а у образцов ксеностворок даже превосходят ГА-обработанный биоматериал.

. ЕЭГА ЕЗ ДЭЭ И СМ1 И СМ2 ИЛ СМЗ

Артерии

Вены Створки

Биоматериал

Перикард

Рис. 4а. Показатели прочности образцов створок, перикарда, артерий и вен, обработанных различными консервантами

Оценивая эластичность образцов ксеноартерий, можно отметить незначительное увеличение относительного удлинения биоматериала, консервированного ДЭЭ и СМЗ (рис. 46), хотя в целом различия между группами были недостоверны (р>0,05). Среди образцов ксеновен наибольшей эластичностью I обладали образцы, консервированные СМ2 и СМЗ.

Эластичность образцов ксеностворок, обработанных ГА, достоверно ниже | (р<0,05), чем биоматериала, консервированного ДЭЭ, СМ 1 и СМЗ. Среди групп образцов, консервированных эпоксисоединениями, достоверных различий по эластичности не установлено. Среди образцов ксеноперикарда наибольшую эластичность биоматериапу придавали эпоксидные смеси СМ1 и СМЗ (р<0,05); | СМ2-обработанные образцы занимали промежуточное положение (р>0,05). | При сравнении толщины исследуемого биоматериала было установлено,

i что независимо от тканевой принадлежности толщина образцов, обработанных ГА, меньше, чем эпоксиобработанных. Достоверных различий по толщине биоматериала при использовании различных эпоксисоединений не обнаружено.

Оценка цитотоксичности свидетельствует о высокой биосовместимости био-■ материала, консервированного всеми изучаемыми консервантами. Модификация

гепарином позволяет существенно уменьшить гемолиз эритроцитов, j Использование эпоксидных препаратов СМ 1, СМ2 и СМЗ в качестве кон-

сервантов биоматериала обеспечивает высокую сшивающую активность и определяет удовлетворительную структуру коллагена. Все эпоксиобработан-ные образцы обладают удовлетворительными физико-механическими свойствами. Применение сшивающих агентов с разветвленной структурой углеводородной цепи позволяет повысить прочность ксеногенных тканей за счет более компактного расположения коллагеновых волокон.

Биоматериал

Рис. 46. Относительное удлинение образцов створок, перикарда, артерий и вен, обработанных различными консервантами

Оценка кальций-связывакнцей активности биоматериала

Было установлено, что содержание кальция в створках, консервированных эпоксидными препаратами и имплантированных крысам на 60 суток, лишь на 1 мг превышает уровень кальция в контрольных (неимплантирован-ных) образцах (табл. 1). В то же время в образцах, обработанных ГА, количество кальция через 60 суток после имплантации возрастает в 240 раз (р<0,001). Полученные результаты доказывают, что эпоксидные смеси СМ1, СМ2, СМЗ и ДЭЭ, в отличие от ГА, придают биоматериалу достаточно высокую резистентность к кальцификации.

Таблица 1

Содержание кальция в биоматериале, обработанного различными консервантами

Количество каль- Консервант

ция, мкг/г ДЭЭ СМ1 СМ 2 СМЗ ГА

сухой ткани 1 2 3 4 5

До имплантации 0,57+0,09 0,54+0,12 0,59+0,08 0,55±0,10 0,48+0,11

После имплан- 1,40+0,18 1,53+0,32 1,48+0,22 1,54+0,30 121,85+15,7

тации (60 сут) р,_5<0,01 р12>0,05 р,3>0,05 рм>0,05

Изучение иммобилизации различных гепаринов на эпоксиобработанный биоматериал

Для определения количества иммобилизованных гепаринов были использованы образцы ксеноартерий и ксеновен, консервированные ДЭЭ. При оценке количества гепарина, сорбированного артериальными образцами, по реакции с 0-толуидиновым синим была отмечена максимальная сорбция гепарина «Белмедпрепарат» - 6,6±0,9 мкг/мг сухой ткани (рис. 5а). Количество иммобилизованного Эноксапарина и нефракционированного «Биохеми» было значительно меньше, по сравнению с гепарином «Белмедпрепарат» и составило 3,6+0,5 и 3,1+0,5 мкг/мг (р<0,05) соответственно.

Количество иммобилизованного гепарина, определенного при помощи радиоактивной мегки 3Н, совпадает с данными, полученными толуидиновым методом: «Белмедпрепарат» сорбировался в количестве 6,7+0,4 мкг/мг, гепарин «Биохеми» -3,6+0,3 мкг/мг. В то же время количество Эноксапарина, определенного радиоактивным методом, составило 5,3+0,5 мкг/мг, что на 52 % больше количества, полученного с использованием толуидинового метода (р<0,05). Результаты определения количества иммобилизованного гепарина по содержанию серы подтвердили полученную ранее зависимость - наибольшие показатели были отмечены при иммобилизации гепарина «Белмедпрепарат» - 6,5+0,6 мкг/мг; количество сорбированного гепарина «Биохеми» было на 50 % (р<0,05), а Эноксапарина - на 35 % (р<0,05) меньше, чем количество гепарина «Белмедпрепарат».

Эноксапарин Биохеми Белмедпрепарат

Рис. 5а. Количество различных антикоагулянтов (мкг/мг сухой ткани), . иммобилизованных на ксеноартериях, определенное различными методами: I Т.С. - реакция с толуидиновым синим, Б - по содержанию серы,

Н3 - при помощи радиоактивной метки

| При изучении количественных параметров модификации антикоагулян-

тами образцов ксеновен была получена аналогичная зависимость (рис. 56). При оценке количества иммобилизованного гепарина методом связывания с толуидиновым синим наиболее высокие значения были отмечены при исполь-I зовании «Белмедпрепарата» - 4,1 мкг/мг сухой ткани. Количество иммобили-I зованного Эноксапарина (2,2 мкг/мг) было в 2,0 раза, а нефракционирован-| ного гепарина «Биохеми» (1,5 мкг/мг) - в 2,7 раза меньше (р<0,01). Методики I определения при помощи радиоактивной метки и по количеству серы продемонстрировали аналогичную закономерность.

Далее был выполнен сравнительный анализ эффективности связывания гепарина образцами ксеностворок и ксеноперикарда, консервированных инди-| видуальным ДЭЭ и смесями эпоксидных соединений СМ1, СМ2 и СМЗ и дополнительно модифицированных нефракционированным гепарином «Белмедпрепарат».

Результаты проведенных исследований показали, что количество иммо-: билизованного гепарина зависит не только от используемого консерванта, но и от вида биоматериала. Так, образцы аортальных ксеностворок связывали гепарин в 1,6-1,8 раза более активно (р<0,01), чем образцы ксеноперикарда (рис. 6).

Достоверных различий между образцами, консервированными различными эпоксисоединениями, не установлено.

Эноксапарин Биохеми Белмедпрепарат

Рис. 56. Количество различных антикоагулянтов (мкг/мг сухой ткани), иммобилизованных на ксеновенах, определенных различными методами: Т.С. - реакция с толуидиновым синим, в - по содержанию серы, НЗ - при помощи радиоактивной метки

Для модификации биоматериала наиболее целесообразно использовать нефракционированный гепарин «Белмедпрепарат» и низкомолекулярный Эноксапарин. Наиболее точным и воспроизводимым методом оценки количества иммобилизованного гепарина является метод с использованием радиоактивной метки 3Н. Методы, основанные на связывании антикоагулянта с толуидиновым синим и расчетах по содержанию серы, могут применяться для скрининговых исследований.

Перикард

Створки

Рис. 6. Количество иммобилизованного гепарина в образцах ксеностворок и ксеноперикарда, обработанных различными консервантами (мкг/г сухой ткани). Время сорбции 16 ч

Изучение структуры поверхности биоматериала методом сканирующей электронной микроскопии

Была проведена оценка in vitro гемосовместимых свойств биоматериала, консервированного изучаемыми эпоксидными консервантами и модифицированного гепаринами различной молекулярной массы. Значительное влияние на тром-борезистентность биоматериала оказывает структура поверхности - чем ровнее ее рельеф, тем более высокими гемосовместимыми свойствами она обладает.

Индивидуальные эпоксидные соединения и их смеси, состав которых потенциально весьма разнообразен, могут оказывать различное влияние на рельеф и сорбционные свойства поверхности биоматериала. Изучение образцов изучаемых биотканей методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) позволило выявить некоторые особенности структуры поверхности.

Все ксеностворки имели характерное гофрированное строение: «макрогофры» выражены слабо, «микрогофры» в большинстве случаев рельефны, рельеф представляет собой правильно упакованные «жгуты» или ячеистые образования (рис. 7). Однако, в зависимости от использованного эпоксиконсерванта, рельеф поверхности образцов различался. Поверхность ДЭЭ-обработанных ксе-ностворок более рельефна по сравнению с образцами, консервированными эпок-сисмесями (рис. 7а). Поверхность, близкая по структуре к ДЭЭ-консервированной, отмечена у образцов, обработанных СМЗ (рис. 7г). Наиболее ровный рельеф придает аортальным ксеностворкам консервация эпоксисмесью СМ1.

ни

Рис. 7. Сканирующая электронная микроскопия поверхности ксеностворок, обработанных 5 % раствором: а) ДЭЭ, б) СМ1, в) СМ2, г) СМЗ. Ув. х 3000

Полученные различия вполне объяснимы, учитывая структуру препаратов, входящих в состав эпоксисмесей, и их соотношения. Преобладание в

составе смеси СМЗ высокомолекулярного препарата В4 с разветвленной структурой обеспечивает высокую плотность сшивки коллагеновых волокон, что оказывает выраженное влияние и на структуру поверхности. Длина углеводородной цепи препарата В1 в 2 раза превышает длину ДЭЭ, что снижает плотность сшивки коллагеновых волокон в образцах, обработанных СМ1, и, как следствие, формирует более сглаженный рельеф поверхности.

При изучении ксеноперикарда было отмечено, что образцы, обработанные ДЭЭ и СМЗ, также имели схожую структуру поверхности - «микрогофры» рельефны, вытянуты. В образцах, консервированных СМ1, «микрогофры» образуют ячеистые структуры с относительно ровными ячейками. Наиболее ровная поверхность была отмечена у образцов, консервированных СМ1 и СМ2.

Дополнительная модификация антикоагулянтами обеспечивает сглаживание рельефа образцов, консервированных всеми изучаемыми эпоксисоеди-нениями. Низкомолекулярный Эноксапарин, в отличие от НФГ, образует более равномерное покрытие, сквозь которое проступают лишь контуры «микрогофр». Наиболее ровный рельеф после модификации Эноксапарином отмечен в образцах ксеноперикарда, обработанных СМ1.

Особенно важен ровный рельеф поверхности для сосудистых протезов, имеющих большую площадь контакта с кровью. Структура поверхности образцов ксеноартерий, консервированных различными эпоксисоединениями, имеет свои характерные особенности. В биоматериале, обработанном ДЭЭ, поверхность более рыхлая по сравнению с образцами, консервированными эпоксисмесями (рис. 8а). «Макро- и микрогофры» упорядочены. Рельеф поверхности образцов, консервированных СМ1, по структуре был наиболее близок к образцам, обработанным ДЭЭ (рис. 86).

Рис. 8. Сканирующая электронная микроскопия поверхности ксеноартерий, обработанных 5 % раствором: а) ДЭЭ, 6) СМ1, в) СМ2, г) СМЗ. Ув. х 1000

Характерная особенность структуры поверхности, выявленная при изучении створок и перикарда, присутствует и у образцов ксеноартерий, обработанных СМЗ - поверхность имеет волнообразный рельеф и наиболее плотную упаковку «микрогофр». Наиболее ровную поверхность приобрел биоматериал, консервированный СМ2 - в данных образцах микрорельеф более однороден и упорядочен, «макрогофры» отсутствуют, «микрогофры» сглажены (рис. 8в).

Обработка нефракционированным гепарином (НФГ) привела к сглаживанию «микро- и макрогофр» у всех эпоксиобработанных образцов. Наиболее ровный рельеф отмечен для образцов, консервированных СМ2. В сравнении с НФГ, низкомолекулярный гепарин (НМГ) «Эноксапарин» оказал более выраженный эффект сглаживания — поверхность биоматериала ровная, однородная (рис. 9). Наиболее гладкий рельеф отмечен у сегментов ксеноартерий, обработанных СМ2 и модифицированных низкомолекулярным Эноксапарином (рис. 9г).

Более ровный рельеф поверхности биоматериала, модифицированного Эноксапарином, вероятно, обусловлен различиями химической структуры изучаемых антикоагулянтов. Для низкомолекулярных гепаринов характерны короткие полисахаридные цепи - 16-18 моносахаридных единиц. В структуре НФГ минимальная длина полисахаридной цепи составляет не менее 25-32 моносахаридных единиц. Таким образом, Эноксапарин, благодаря меньшему размеру молекул, образует более компактное, ровное покрытие на поверхности биоматериала.

Рис. 9. Сканирующая электронная микроскопия поверхности ксеноартерий,

обработанных по схеме: а) ДЭЭ+НФГ, б) ДЭЭ+НМГ, в) СМ2+НФГ, г) СМ2+НМГ. Ув. х 1000

Изучение ксеновен при помощи СЭМ показало, что поверхность образцов, консервированных различными эпоксисоединениями, имеет продольные складки,

образуя тем самым рельеф, близкий по струюуре к рельефу артерий. Поверхность образцов, консервированных ДЭЭ, наиболее подвержена изменениям - складчатость выражена, образует своеобразные «гребни» по всей поверхности биоматериала. Образцы, консервированные эпоксидными смесями, имеют более ровный рельеф поверхности. Ксеновены, обработанные СМ1 и СМ2, обладают волнообразным рельефом, а консервация СМЗ придает поверхности складчатый характер, но менее выраженный, чем при использовании ДЭЭ.

Иммобилизация гепарина, как НФГ, так и Эноксапарина, позволяет изменить рельеф поверхности венозных образцов. Рельеф поверхности вены сглаживается, становится более упорядоченным, гепарин как бы заполняет углубления на поверхности биоматериала, тем самым выравнивая рельеф.

Однако, в отличие от артерий, где скорость кровотока достаточно высока и время контакта компонентов крови с поверхностью протеза минимально, в венозных сосудах скорость кровотока во много раз ниже, поток крови нередко принимает турбулентный характер. Помимо этого, венозной крови свойственно состояние гиперкоагуляции. Эти особенности венозного кровотока влекут за собой увеличение времени контакта крови с поверхностью протеза и, соответственно, большую активацию компонентов крови, поэтому клапано-содержащим венозным протезам необходимо обеспечить максимально гладкую, тромборезистентную поверхность.

Для модификации ксеновен был предложен метод стадийной модификации «Гепарин-Альбумин-Гепарин». Преимущество данного метода состоит в том, что, во-первых, слои альбумина и гепарина позволяют дополнительно сгладить рельеф поверхности, во-вторых, комплекс «Альбумин-Гепарин» может усиливать антитромбогенный эффект антикоагулянта.

Данные СЭМ показали, что послойная модификация «НФГ-Альбумин-НФГ» позволяет дополнительно сгладить рельеф поверхности. Поверхность образцов, модифицированная по схеме «Эноксапарин+Альбумин+Эноксапа-рин», имеет наиболее гладкий рельеф. Для образцов, консервированных ДЭЭ и СМ 1, обработка как «НФГ+Альбумин+НФГ», так и «НМГ+Альбумин+НМГ» позволила существенно сгладить рельеф поверхности. В большей степени данный эффект коснулся образцов с базовой консервацией СМЗ (рис. 10). Альбумин и Эноксапарин равномерно заполнили углубления рельефа, создав на поверхности ксеновен ровное покрытие.

Таким образом, изучение поверхности биоматериала с использованием СЭМ показало, что эпоксиконсерванты оказывают индивидуальное воздействие на рельеф биоткани. Значительное влияние оказывает состав смесей и структура эпоксидных препаратов, входящих в состав консервирующего раствора. Оптимальный рельеф поверхности достигается при использовании СМ1 - для консервации створок аортального клапана и СМ2 - для обработки ксеноперикарда и ксеноартерий. Для консервации ксеновен оптимально использовать СМЗ.

Рис. 10. Сканирующая электронная микроскопия поверхности ксеновен

с базовой консервацией СМЗ и дополнительно модифицированных: а) НФГ, б) по схеме «НФГ - Альбумин - НФГ», в) НМГ, г) по схеме «НМГ - Альбумин - НМГ». Ув. х 3000

Дополнительная модификация гепарином позволяет сгладить рельеф, сформированный в процессе базовой консервации. Наибольший сглаживающий эффект оказывает иммобилизация низкомолекулярного гепарина «Эноксапарина». Максимально гладкий рельеф поверхности ксеновен обеспечивает послойная модификация «Эноксапарин-Альбумин-Эноксапарин».

Взаимодействие поверхности ксеноартерий с компонентами крови

При имплантации ксенопротеза в сосудистое русло большое значение имеют первые минуты его контакта с кровью: в этот период происходит сорбция белков плазмы и адгезия тромбоцитов на луминальной поверхности протеза. От состава и количества сорбированных белков зависит дальнейшая судьба протеза.

Результаты исследований показали, что через 5 мин контакта с кровью на поверхности образцов, обработанных эпоксисмесями, количество сорбировавшегося белка достоверно меньше (р<0,05), чем на образцах, консервированных ДЭЭ (рис. На). Оптимальными параметрами различаются сегменты ксеноартерий, консервированных СМ2 - в образцах этой группы отмечено минимальное количество белковых депозитов. После модификации ксеноартерий гепаринами количество сорбированных белков значительно снижается. На ДЭЭ-консервированных образцах после модификации НФГ количество белковых отложений уменьшается в 1,7 раза (р<0,01), а при использовании Эноксапарина - в 3,8 раза (р<0,001) по

сравнению с ^модифицированными образцами. Для ксеноартерий, обработанных СМ 1, дополнительная модификация антикоагулянтами позволила в 2,2 раза (р<0,01) снизить количество сорбированных белков.

Для образцов, консервированных СМ2 и СМЗ, эффект гепаринизации не столь выражен - снижение количества сорбированного белка не имеет статистической достоверности (р>0,05), при этом различий в использовании НФГ или Эноксапарина не выявлено. С другой стороны, на образцах, консервированных СМ2 и СМЗ, исходно сорбировалось минимальное количество белков. В то же время к 90-й минуте контакта с кровью на образцах, обработанных эпоксисмесями, количество сорбированных белков увеличилось всего в 3 раза, в то время как на образцах, консервированных ДЭЭ, данный показатель возрос в 9 раз (рис. 116).

Исследование сорбции протеинов позволило утверждать, что дополнительная обработка биоматериала гепаринами достоверно (р<0,05) снижает количество сорбированных белков в 1,2-1,4 раза. Различия при использовании НФГ и Эноксапарина недостоверны (р>0,05). Наименьшее количество белков сорбировано на ксеноартериях, консервированных СМ2 и дополнительно модифицированных Эноксапарином.

Модификация антикоагулянтом позволила не только уменьшить количество сорбированных белков, но и повлияла на их состав, сдвинув процесс сорбции в сторону альбумина и «легких» иммуноглобулинов. На образцах, консервированных СМ2 и модифицированных Эноксапарином, сорбировалось до 80 % альбумина. Среди сорбированных иммуноглобулинов около 95 % представлены

ДЭЭ СМ1 СМ2 СМЗ

Консервант

Рис. 11а. Количество сорбированных белков крови на образцах ксеноартерий, обработанных различными способами. Длительность контакта с кровью 5 мин

Дээ

смз

СМ1 СМ2 Консервант

Рис. 116. Количество сорбированных белков крови на поверхности ксеноартерий, обработанных различными способами.

Длительность контакта с кровью 90 мин

Преимущественная сорбция альбумина и препятствует адгезии и контактной активации тромбоцитов, что подтвердили результаты проведенных исследований. При взаимодействии с поверхностями, дополнительно модифицированными как нефракционированным гепарином, так и Эноксапарином, активация тромбоцитов значительно снижается (рис. 12а и 126). Минимальная контактная активация тромбоцитов отмечена для образцов, консервированных СМ2 и модифицированных Эноксапарином.

60 т

50

: 40 ! зо 1 20 -10

-контроль

■Н-Ч

^ ^ > ^ / ^

¿V ЛЭГ

Рис. 12а. Показатели скорости агрегации тромбоцитов в зависимости от базовой модификации и дополнительной обработки гепарином (НФГ - нефракционированный гепарин, НМГ - низкомолекулярный гепарин «Эноксапарин»)

Рис. 126. Показатели максимума агрегации тромбоцитов в зависимости от базовой модификации и дополнительной обработки гепарином (НФГ - нефракционированный гепарин, НМГ - низкомолекулярный гепарин «Эноксапарин»)

Контактная активация тромбоцитов также зависит от способа обработки биоматериала. Поверхность ГА-обработанного биоматериала более интенсивно провоцирует активацию -тромбоцитов, чем эпоксиобработан-ного. Модификация эпоксиобработанных ксеноартерий как НФГ, так и Эноксапарином препятствует адгезии тромбоцитов на поверхности биоматериала.

Полученные результаты позволяют утверждать, что на гемосовмести-мость биоматериала значительное влияние оказывают такие факторы, как рельеф поверхности, полученный в процессе консервации, и свойства антикоагулянта, используемого для модификации биоткани. В свою очередь, рельеф и свойства поверхности, приобретенные в процессе обработки, определяют количество и состав протеинов, сорбирующихся на биоматериале при контакте с кровью. Обоснованный подбор консерванта и антикоагулянта позволяет оптимизировать свойства поверхности биоматериала.

Для ксеноартерий базовая консервация эпоксисмесью СМ2 с последующей иммобилизацией низкомолекулярного Эноксапарина позволяет создать поверхность с гладким и упорядоченным рельефом, обладающую наименьшей контактно-активационной способностью в отношении тромбоцитов, низкой сорбционной активностью по отношению к белкам плазмы крови.

Влияние шовного материала на биосовместимость кардиоваскулярных биопротезов

Исследовано влияние шовного материала на гемосовместимость зоны анастомозов, выполненных нитями Prolene, PDS и TiNi. Данные СЭМ показали, что через 5 мин контакта с кровью в зоне анастомоза белковые депозиты визуализируются во всех исследуемых образцах (рис. 13).

Рис. 13. Сканирующая электронная микроскопия зоны анастомозов после 5 мин контакта с кровью, выполненных: а - нитью Prolene; б - нитью PDS; в - нитью TiNi. Ув. х 150

При использовании нити TiNi белковый слой более компактен, покрывает зону анастомоза в виде пленки. В зоне анастомозов из PDS отмечены более массивные, рыхлые отложения белков. Еще более массивные белковые депозиты, простирающиеся за пределы анастомоза, отмечены при исследовании нити Prolene. При большем увеличении видно, что среди белковых отложений находится большое количество форменных элементов крови, свидетельствующее о формировании красного тромба (рис. 14).

Рис. 14. Сканирующая электронная микроскопия зоны анастомоза, выполненного нитью Рго1епе, после 5 мин контакта с кровью. Образование красного тромба. У в. х 10 ООО

Помимо этого, при использовании нитей Prolene и PDS около 80 % эритроцитов, вовлеченных, в формирование красного тромба, были трансформированы в эхиноциты (рис. 15). Появление эхиноцитов свидетельствует о неблагоприятном воздействии, в частности о реакции эритроцитов на инородное тело. В отличие от Prolene и PDS, в зоне анастомоза, выполненного нитью из TiNi, отмечены лишь единичные эхиноциты.

Рис. 15. Сканирующая электронная микроскопия эритроцитов и эхиноцитов в зоне анастомоза после 5 мин контакта с кровью, выполненных: а - нитью Prolene, б - нитью PDS, в - нитью TiNi. Ув. х 3000

Модификация зоны анастомозов НФГ позволила нормализовать реакцию эритроцитов. Помимо благоприятного влияния на эритроциты, модификация гепарином зоны анастомозов способствовала снижению количества белковых отложений, что морфологически проявилось в более компактном расположении слоя протеинов.

К 120-й минуте контакта с кровью зона анастомоза, выполненного TiNi, равномерно покрыта слоем белка. Более рыхлый, по сравнению с нитью TiNi, слой протеинов отмечен в зоне анастомоза, прошитого PDS. Наиболее массивные, рыхлые белковые отложения с грубой структурой характерны для анастомозов, выполненных Prolene.

Изучение поверхности самого шовного материала показало, что нить Prolene на протяжении всего контакта с кровью оставалась гладкой, интактной к белкам крови: шовный материал как бы провоцировал массивную сорбцию белка, но сам не участвовал в процессе (рис. 16). Нить TiNi обладала шероховатой поверхностью, в процессе контакта с кровью покрывалась протеинами и, сливаясь с адсорбированными белками, образовала равномерное покрытие зоны анастомоза.

Поверхность нити PDS к 120-й минуте контакта с кровью, помимо протеинов, была покрыта и адгезированными форменными элементами крови.

Как показали полученные результаты, реакция компонентов крови на шовный материал различается и зависит от вида используемых нитей. Модификация гепарином оказывает положительное влияние на процессы, протекающие в зоне анастомоза в первые часы контакта с кровью. Так как при

имплантации кардиоваскулярных протезов рассасывающийся шовный материал не используется, дальнейшие сравнительные исследования проводили с нитями Рго1епе и И№.

Рис. 16. Сканирующая электронная микроскопия поверхности шовного материала после 120 мин контакта с кровью: а - нить Prolene, б - нить PDS, в - нить TiNi. Ув. х 1500

Изучение динамики сорбции белков крови в зоне анастомоза позволило установить, что нить ИМ) обладает гемосовместимыми свойствами в большей мере, чем Рго1епе - через 120 мин контакта с кровью на анастомозах, выполненных ТлМ, сорбировалось меньше белков (р<0,01) (рис. 17). Предварительная модификация анастомозов нефракционированным гепарином позволила снизить сорбцию протеинов, причем на анастомозах, выполненных нитью Рго1епе, количество сорбировавшихся белков было почти в два раза меньше, чем на немодифицированных.

Время контакта, мин

Рис. 17. Количество сорбированных белков в зоне анастомозов после контакта с кровью (мкг/см2). Влияние шовного материала и дополнительной модификации гепарином

Обработка гепарином зоны анастомоза, прошитого TiNi, практически не повлияла на количество сорбированных белков. Возможно, это обусловлено тем, что во время контакта с кровью сама нить покрывается слоем протеинов, что в итоге увеличивает суммарное количество сорбированного белка. Полученный результат едва ли следует рассматривать как отрицательный, поскольку на риск тромбообразования в зоне анастомоза в большей степени оказывает влияние характер сорбции протеинов (их видовая специфичность и последовательность), а также адгезия и агрегация тромбоцитов.

Как показал качественный анализ протеинов, сорбированных в зоне анастомозов, выполненных Prolene, после 30 мин контакта с кровью белковый слой состоит на 55-60 % из альбумина, на 10 % - из трансферина, остальная часть протеинов приходится на иммуноглобулины IgG , IgA и IgM и до 90-й минуты контакта с кровью состав белков не изменяется. При использовании TiNi к 30-й минуте контакта белковый слой представлен: альбумином - на 60 %, трансферином - на 18 % и иммуноглобулинами - на 20 %. К 90-й минуте контакта с кровью соотношение белков несколько изменилось - альбумин составил 66-70 %, трансферин - не более 7 %, а иммуноглобулины - около 6 %, причем основная доля представлена IgG. Модификация нефракционированным гепарином зоны анастомозов, выполненных как Prolene, так и TiNi, позволила оптимизировать состав сорбированных белков - сорбция протеинов сместилась в сторону альбумина и иммуноглобулинов. На анастомозах, выполненных TiNi и модифицированных гепарином, на всем протяжении эксперимента доля сорбированного альбумина составляла 75-85 %, трансферина - не более 4-6 % и IgG - 6-9 %.

Таким образом, дополнительная модификация нефракционированным гепарином зоны анастомозов, выполненных как TiNi, так и Prolene, изменила избирательность сорбции протеинов крови в пользу альбумина и иммуноглобулинов малой молекулярной массы, что, в свою очередь, позволяет надеяться на снижение риска тромбообразования. Помимо этого, значительно снизились показатели агрегации тромбоцитов; максимальное снижение скорости агрегации тромбоцитов отмечено при контакте крови с анастомозами, выполненными нитью TiNi и модифицированными нефракционированным гепарином (рис. 18).

Изучение кальций-связывающей активности биоматериала, прошитого Prolene, TiNi и PDS, показало, что шовный материал способен провоцировать образование кальциевых депозитов. Установлено, что характер накопления кальция зависит от качественных характеристик шовного материала. В образцах, прошитых TiNi, отложения кальция располагались вокруг шовного материала и имели мелкозернистую форму. За пределами

кальцинатов коллагеновые волокна сохраняли извитость и компактное расположение (рис. 19). Напротив, использование нити Рго1епе провоцировало образование крупных кальциевых депозитов, причем не только в перилигатурной зоне, но и в других отделах аортальной створки, при этом коллагеновые волокна приобретали рыхлое расположение.

Скорость агрегации

— контроль

Г-Н |-Ь

1

Рго1епе Рго1епе+геп.

ПМ

ТМ ¡+геп.

Максимум агрегации

—контроль

т 1

Рго1епе Рго1епе+геп. "ПМ "ПМ1+теп.

Рис. 18. Показатели скорости и максимума агрегации тромбоцитов в зависимости от шовного материала и дополнительной обработки гепарином

Рис. 19. Отложения кальция вокруг шовного материала: а - нить Рго1епе, б - нить Т1№. Окраска по Коссу. Ув. х 200

Оценка количества кальция в биоматериале после подкожной имплантации лабораторным животным показала, что применение нити Prolene достоверно провоцирует кальцификацию консервированных аортальных створок -через два месяца после имплантации количество кальция в биоматериале возрастает в 63 раза (р<0,001), при использовании TiNi данный показатель увеличился в 17,5 раза (р<0,001), а нити PDS - в 15 раз (р<0,001).

Модификация опытных образцов нефракционированным гепарином позволила значительно снизить интенсивность отложения кальция в биоматериале. В образцах, прошитых нитью Prolene, уровень кальция снизился почти в 3 раза (до 58,6+4,53 мг/г) (р<0,01), прошитых PDS - в 3,4 раза (до

10.6+1,7 мг/г)(р<0,01), а при использовании Т1№ - в 10 раз (до 4,3±0,6 мг/г) (р<0,001), что незначительно превысило метаболический уровень кальция в биоматериале.

В целом проведенные исследования показали, что шовный материал оказывает значительное влияние на реакцию плазменных белков и форменных элементов крови в зоне сосудистого анастомоза и, кроме того, способен провоцировать кальцификацию биоткани протезов клапанов сердца. Доказано, что удовлетворительными параметрами био- и гемосовместимости обладает нить Т1№. Дополнительная модификация гепарином позволяет минимизировать негативное влияние шовного материала в зоне анастомоза.

ВЫВОДЫ:

1. Качественные показатели сшивки эпоксисоединениями фибриллярных белков биоматериалов различной видовой и тканевой принадлежности однотипны и заключаются в образовании связей со свободными остатками лизина, гидроксилизина, метионина, гистидина и тирозина. Максимальную суммарную плотность поперечной сшивки ткани артерий и перикарда крупного рогатого скота обеспечивает консервация диглицидиловым эфиром этиленгликоля (ДЭЭ), вен - эпоксидной смесью СМЗ и створок аортального клапана свиньи - эпоксидной смесью СМ 1.

2. Все исследованные эпоксидные консерванты придают биоматериалу удовлетворительные физико-механические свойства. Наличие в составе консервирующей смеси эпоксисоединений с разветвленной структурой углеводородной цепи определяет повышение прочности биоматериала: максимальные показатели прочности обеспечивает эпоксисмесь СМЗ с наибольшим содержанием 1,2,3,4,6-Пента-О-{1 -[(глицидилокси)этокси] этил}-а-0-глюкопиранозы.

3. Значительное влияние на рельеф поверхности ксеногенного биоматериала оказывает структура эпоксидных соединений и состав их смесей. Эпоксидная смесь СМ1 положительно влияет на рельеф поверхности створок аортального ксеноклапана и ксеноперикарда, СМ2 - на поверхность ксеноар-терий. Модификация биоматериала низкомолекулярным Эноксапарином натрия позволяет максимально сгладить рельеф поверхности биоматериала.

4. Основанные на разных подходах методы определения иммобилизованного гепарина (реакция с толуидиновым синим, использование радиоактивной метки и оценка количества серы) позволяют получить сопоставимые результаты. Наиболее высокие количественные параметры иммобилизации демонстрирует нефракционированный гепарин «Белмедпрепарат».

5. Консервация ксеноартерий эпоксисоединениями обеспечивает сведение к минимуму адгезии и значительное снижение агрегации тромбоцитов.

Модификация антикоагулянтами повышает антиагрегационный эффект консервации эпоксисоединениями. Наиболее эффективно снижает показатели агрегации тромбоцитов консервация эпоксидной смесью СМ2 с последующей модификацией низкомолекулярным Эноксапарином.

6. Состав и динамика формирования белковых слоев на поверхности биоматериала в первые часы контакта с кровью в значительной мере зависят от способа базовой консервации и дополнительной модификации. На поверхности ксеноартерий, консервированных СМ2 и модифицированных низкомолекулярным Эноксапарином, сорбируется преимущественно альбумин, что определяет высокую гемосовместимость биоматериала.

7. Для создания протеза венозного клапана перспективно использовать эпоксиобработанные клапаносодержащие венозные сегменты крупного рогатого скота. Консервация эпоксисмесью СМЗ с дополнительной модификацией по схеме «Эноксапарин-Альбумин-Эноксапарин» обеспечивает удовлетворительные физико-механические свойства биоматериала и максимально гладкий рельеф поверхности.

8. Шовный материал способен оказывать значительное негативное влияние на гемосовместимость зоны анастомозов: провоцировать сорбцию высокомолекулярных белков крови, вызывать трансформацию эритроцитов и потенцировать агрегацию тромбоцитов. Модификация зоны анастомоза гепарином позволяет значительно снизить уровень негативного воздействия шовного материала на компоненты крови: уменьшается контактная активация тромбоцитов, сорбция белков крови смещается в пользу альбумина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для повышения прочности биоматериала целесообразно включать в состав консервирующего раствора препарат 1,2,3,4,6-Пента-0-{1 -[(глици-дилокси)этокси]этил}-а-В-глюкопиранозу. Для повышения эластичности -добавлять препарат Ди-1-[2-(глицидилокси)этокси] этиловый эфир диэтилен-гликоля.

2. При создании тромборезистентных биопротезов артерий возможно использование эпоксисмеси СМ2, биопротезов клапанов сердца и изделий из ксеноперикарда - эпоксисмеси СМ 1, биопротезов венозного клапана - СМЗ.

3. Для эффективной антитромботической модификации кардиоваскуляр-ных биопротезов перспективно применение низкомолекулярного гепарина «Эноксапарин натрия» (Клексан). Для придания тромборезистентных свойств поверхности протеза венозного клапана целесообразно использовать послойную модификацию «Эноксапарин-Альбумин-Эноксапарин».

4. Метод, основанный на использовании радиоактивной метки 3Н, при оценке количества иммобилизованного гепарина является наиболее точным.

Однако для рутинных исследований или сравнительной оценки образцов может быть использован метод определения количества гепарина с толуиди-новым синим - менее трудоемкий, легко воспроизводимый и безопасный.

5. В комплекс методов оценки гемосовместимых свойств биоматериала целесообразно включать разработанную модель in vitro, позволяющую оценивать морфологические изменения в зоне анастомоза после контакта с кровью, трансформацию компонентов крови, показатели активации тромбоцитов, а также количество и качественный состав адсорбировавшихся белков.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Барбараш JI. С., Журавлева И. JL, Гантимурова И. JL, Кудрявцева Ю. А. Влияние факторов реципиента на кальцификацию ксеноимплантатов, консервированных глутаровым альдегидом // Трансплантология и искусственные органы. - 1995. - № 3. - С. 48-52.

2. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Климов И. А. Разработка новых моделей биопротезов на основе консервации эпоксидными препаратами // Биологические протезы артерий / ред. J1. С. Барбараш, А. С. Криковцов, И. Ю. Журавлева. - Кемерово, 1996. - С. 171-188.

3. Кудрявцева Ю. А. Новые методы консервации биопротезов для сердечно-сосудистой системы // Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии: материалы Симпозиума с международным участием. - Кемерово, 1996. -С. 146-151.

4. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Борисов В. В. Влияние рельефа поверхности биоматериала на тромборезистентные свойства ксенососудов, консервированных различными эпоксисоединениями // Прогресс и проблемы в лечении заболеваний сердца и сосудов: материалы юбилейной конференции. Декабрь 1997 г., Санкт-Петербург. - СПб., 1997. - С.120-121.

5. Zhuravleva I., Kudryavtseva Yu., Borisov V. New heart valve bioprosthe-ses with high thromboresistance and antibacterial activity //1 llh Annual Meeting of the EACTS: Abstracts. - Copenhagen, 1997. - P. 78.

6. Барбараш JI. С., Климов И. А., Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю. Антитромбогенная модификация эпоксиобработанного биоматериала // Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии: материалы Всероссийской конференции с международным участием (21-23 июня 2001 г., Кемерово, Россия). - Новосибирск: ЦЕРИС, 2001. - С. 18-19.

7. Журавлева И. Ю., Борисов В. В., Климов И. А., Кудрявцева Ю. А., Барбараш Л. С. Новое поколение биологических протезов для сердечнососудистой хирургии // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН «Сердечно-сосудистые заболевания». - М., 2001. - № 3. — С. 248.

8. Журавлева И. Ю., Ларионов П. М., Кудрявцева Ю. А., Барбараш Л. С. Влияние иммобилизованного гепарина и структуры поверхности биоматериала на тромборезистентные свойства биологических протезов // Четвертые научные чтения, посвященные памяти академика Е. Н. Мешалкина с международным участием: тезисы докладов. - Новосибирск: Сибмедиздат, 2004. -С. 169.

9. Глушкова Т. В., Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Трофимов Б. А. Влияние различных эпоксисоединений и антикоагулянтов на структуру ксе-ногенного митрального клапана // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН «Сердечно-сосудистые заболевания». - М., 2005. - Т. 6, № 3. - С. 250.

10. Кудрявцева Ю. А., Зинченко С. С., Бураго А. Ю., Глушкова Т. В. Влияние шовного материала на биосовместимость кардиоваскулярных биопротезов // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН «Сердечнососудистые заболевания». - М., 2005. - Т. 6, № 5. - С. 303.

11. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Иванов С. В., Климов И. А., Барбараш Л. С. Пути и перспективы совершенствования инфраингвинальных артериальных биопротезов // Патология кровообращения и кардиохирургия. — 2005. -№ 1.-С. 78-83.

12. Кудрявцева Ю. А., Глушкова Т. В., Титов А. Т., Опарина Л. А. Влияние различных консервантов на гемо- и биосовместимость ксеногенного митрального клапана // Актуальные проблемы сердечно-сосудистой хирургии: материалы региональной научно-практической конференции, 23-25 сентября, 2006 г., г. Кемерово. - Кемерово, 2006. - С. 215.

13. Барбараш Л. С., Иванов С. В., Журавлева И. Ю., Ануфриев А. И., Казачек Я. В., Кудрявцева Ю. А., Зинец М. Г. 12-летний опыт использования биопротезов для замещения инфраингвинальных артерий // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2006. - Т. 12, № 3. - С. 91-97.

14. Кудрявцева Ю. А., Титов А. Т., Журавлева И. Ю. Перспектива создания биологического протеза венозного клапана // Стандартизация медицинских технологий, реабилитация в ангиологии и сосудистой хирургии: материалы X Всероссийской научно-практической конференции, 12-13 октября 2006 г., г. Новокузнецк. - Кемерово, 2006. - С. 133-134.

15. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Трофимов Б. А. Влияние различных консервантов и иммобилизованного гепарина на тромборезистентные свойства артериальных биопротезов // Стандартизация медицинских технологий, реабилитация в ангиологии и сосудистой хирургии: материалы X Всероссийской научно-практической конференции, 12-13 октября 2006 г., г. Новокузнецк. - Кемерово, 2006. - С. 58.

16. Кудрявцева Ю. А., Зинченко С. С., Бураго А. Ю., Глушкова Т. В. Влияние шовного материала на биосовместимость кардиоваскулярных биопротезов // Стандартизация медицинских технологий, реабилитация в ангио-

логии и сосудистой хирургии: материалы X Всероссийской научно-практической конференции, 12-13 октября 2006 г., г. Новокузнецк. - Кемерово,

2006. - С. 73-74.

17. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Климов И. А., Барбараш Л. С. Сравнительная оценка сшивающей активности новых консервантов из класса эпоксисоединений // Вестник трансплантологии и искусственных органов. -

2007.-№2(34).-С. 44-^8.

18. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Титов А. Т., Барбараш JI. С. Новые технологии повышения биосовместимости биологических протезов клапанов сердца // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН «Сердечнососудистые заболевания». - М., 2007. - Т. 8, № 6. - С. 305.

19. Кудрявцева Ю. А., Глушкова Т. В., Веремеев А. В., Лосева С. В., Журавлева И. Ю. Новая технология антикальциевой обработки биопротезов клапанов сердца // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН «Сердечнососудистые заболевания». - М., 2007. - Т. 8, № 6. - С. 305.

20. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Зинченко С. С., Титов А. Т., Барбараш JI. С. Трансформация зоны анастомоза «Биопротез-артерия» при контакте с кровью: влияние шовного материала // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2007. - Т. 13, № 4. - С. 132-136.

21. Niemiec-Cyganek A., Pawlus-Lachecka L., Wszolek J., Stnzalka-Mrozik В., Adamaska J., Kudrjavtseva J., Jouravleva I., Mazurek U. Effect of epoxide fixation to degradation of porcine endogenous retrovirus DNA in porcine valves // The International Journal of artificial organs. - 2008. - Vol. 31, N 7. - P. 627.

22. Кудрявцева Ю. А., Зинченко С. С., Журавлева И. Ю., Иванов С. В., Барбараш Л. С. Трансформация зоны анастомоза «биопротез-артерия» при контакте с кровью: влияние шовного материала (сообщение II) // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2008. - Т. 14, № 1.-С. 113-117.

23. Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю., Опарина Л. А., Хилько М. Я., Трофимов Б. А., Барбараш Л. С. Применение смесей моно- и олигоэпоксид-ных соединений для консервации биологических протезов клапанов сердца // Патология кровообращения и кардиохирургия. - 2008. - № 1. - С. 79-84.

24. Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю., Титов А. Т., Барбараш Л. С. Разработка биологического протеза венозного клапана для лечения клапанной недостаточности // Ангиология и сосудистая хирургия. — 2008. - Т. 14, № 3. -С. 64-70.

25. Кудрявцева Ю. А., Веремеев А. В., Хрячкова О. Н., Барбараш Л. С. Влияние различных гепаринов на динамику адсорбции белков крови на поверхности биоматериала // Сибирский медицинский журнал. - 2009. - Т. 24, №1.- С. 83-84.

26. Кудрявцева Ю. А., Бурков Н. Н., Сизова И. Н., Журавлева И. Ю., Барбараш Л. С. Диагностика и выявление факторов риска развития стенозов

биопротезов в бедренно-проксимально-подколенной позиции // Сибирский медицинский журнал. - 2009. - Т. 24, № 1. - С. 84.

27. Барбараш JI. С., Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Ганти-мурова И. Л., Леванова P. X. Патент 2350075 РФ. Способ консервации и стерилизации биологических протезов для сердечно-сосудистой хирургии. Опубл. 27.03.09, Бюл. № 9.

28. Барбараш Л. С., Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Гантимуро-ва И. Л., Леванова P. X. Патент 2357766 РФ. Способ стерилизации и предим-плантационного хранения биологических протезов для сердечно-сосудистой хирургии. Опубл. 10.06.09, Бюл. № 16.

29. Кудрявцева Ю. А., Бурков H. Н., Сизова И. Н., Барбараш Л. С. Комплексный лечебно-диагностический подход у пациентов с облитерирую-щими заболеваниями артерий нижних конечностей. Выявление факторов риска и диагностика стенозов анастомозов биопротезов в отдаленном периоде после бедренно-проксимально-подколенного протезирования // Обли-терирующие заболевания сосудов: проблемы и перспективы: материалы Всероссийской научно-практической конференции. Кемерово, 19-20 июня 2009 г. - Кемерово, 2009. - С. 91-92.

30. Кудрявцева Ю. А., Веремеев А. В., Хрячкова О. Н., Журавлева И. Ю. Пути повышения тромборезистентности сосудистых биопротезов // Обли-терирующие заболевания сосудов: проблемы и перспективы: материалы Всероссийской научно-практической конференции. Кемерово, 19-20 июня 2009 г. - Кемерово, 2009. - С. 117-118.

31. Кудрявцева Ю. А., Глушкова Т.В., Журавлева И.Ю. Разработка технологий повышения биосовместимости ксеноперикардиальных заплат для ангиопластики // Облитерирующие заболевания сосудов: проблемы и перспективы: материалы Всероссийской научно-практической конференции. Кемерово, 19-20 июня 2009 г. - Кемерово, 2009. - С. 119-120.

32. Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю., Трофимов Б. А. Использование новых консервантов класса эпоксисоединений для создания биопротеза венозного клапана // Материалы 21-й (XXV) Международной конференции Российского общества ангиологов и сосудистых хирургов, Самара, 29 июня -1 июля 2009 г. - Самара, 2009. - С. 217.

33. Niemiec-Cyganek A., Baranska A., Nozynski J., Pawlus-Lachecka L., Wilozek P., Wszolek J., Kudrjavtseva J. A., Barbarash L. S. Chemical fixed acel-lular porcine tissue as biomaterials for tissue engineering // The International Journal of artificial organs. - 2009. - Vol. 32, N 7. - P. 459.

34. Baranska A., Niemiec-Cyganek A., Wilozek P., Pawlus-Lachecka L., Wszolek J., Kudrjavtseva J. A., Barbarash L. S. The biochemical properties of 1 acellular porcine valve scaffold fixed with different crosslink agent // The International Journal of artificial organs. - 2009. - Vol. 32, N 7. - P. 461.

35. Кудрявцева Ю. А., Тогулева А. Г., Журавлева И. Ю. Разработка технологии антитромботической модификации биопротеза венозного клапана // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева. - М„ 2010. - С. 187.

36. Кудрявцева Ю. А., Насонова М. В., Акентьева Т. Н., Журавлева И. Ю. Роль шовного материала в кальцификации биопротезов // Бюллетень НЦССХ им. А. Н. Бакулева. - М., 2010. - С. 189.

37. Kudryavtseva Ju. A., Toguleva A. G., Nasonova М. V., Zhuravleva I. Ju. Technology of antithrombotic modification of the venous valve bioprosthesis // Biomaterials and Bionanomaterials: Recent Advances Safety and Toxicology Issues: Abstracts: lsl Russian - Hellenic Symposium with International participation, 3-9 May, 2010, Heraklion, Crete-Greece. - P. 51.

38. Kudryavtseva Ju. A., Zhuravlyova I. Ju., Trofimov B. A. Effect of the epoxy preservatives and immobilized heparin on hemocompatibility of arterial bio-prostheses // Biomaterials and Bionanomaterials: Recent Advances Safety and Toxicology Issues: Abstracts: 1st Russian - Hellenic Symposium with International participation, 3-9 May, 2010, Heraklion, Crete-Greece. - P. 50-51.

39. Кудрявцева Ю. А., Глушкова Т. В., Журавлева И. Ю. Пути повышения биосовместимости ксеноперикардиальных заплат для интракардиальной и ангиопластики // Кардиология на перекрестке наук: тезисы докладов Международного конгресса. - Тюмень, 2010. - С. 153-154.

40. Журавлева И. Ю., Кудрявцева Ю. А., Борисов В. В., Барбараш Л. С. Сравнительный анализ применения различных гепаринов для антитромботической модификации биоматериала // Медицина в Кузбассе. - 2010. - № 3. -С. 17-22.

41. Кудрявцева Ю. А., Насонова М. В., Тогулева А. Г., Акентьева Т. Н., Журавлева И. Ю. Пути предупреждения тромбозов сосудистых биопротезов // Новые возможности в диагностике, лечении и снижении смертности от ССЗ: тезисы Всероссийской научно-практической конференции. - М., 2010.-С. 35.

42. Бурков Н. Н., Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю., Барбараш Л. С. Профилактика тромбозов биопротезов в инфраингвинальной позиции // Новые возможности в диагностике, лечении и снижении смертности от ССЗ: тезисы Всероссийской научно-практической конференции. - М., 2010. -С. 36-37.

43. Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю., Борисов В. В. Применение различных гепаринов для повышения тромборезистентности биоматериала // Новые возможности в диагностике, лечении и снижении смертности от ССЗ: тезисы Всероссийской научно-практической конференции. - М., 2010. -С. 38-39.

44. Кудрявцева Ю. А., Насонова М. В., Бураго А. Ю., Акентьева Т. Н., Журавлева И. Ю. Использование нефракционированного гепарина с целью

предупреждения кальцификации биоматериала // Сибирский медицинский журнал. - 2010. - Т. 25, № 2. - С. 181-182.

45. Глушкова Т. В., Кудрявцева Ю. А., Лосева С. В., Журавлева И. Ю. Предупреждение кальцификации эпоксиобработанного биоматериала с использованием аминодифосфоната // Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов: тезисы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием.-СПб., 2010. - С. 50-51.

46. Кудрявцева Ю. А., Глушкова Т. В., Опарина Л. А., Трофимов Б. А., Журавлева И. Ю. Перспективы применения смесей моно- и олигоэпоксисо-единений для консервации биоматериала // Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов: тезисы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием.-СПб., 2010.-С. 115-116.

47. Бурков Н. Н., Веремеев А. В., Кудрявцева Ю. А., Журавлева И. Ю. Состояние гуморального иммунитета у пациентов после бедренно-прок-симально-подколенного протезирования биологическим протезом «Кеман-гиопротез» // Актуальные проблемы сердечно-сосудистой патологии: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Кемерово, 2010. -С. 45-46.

48. Журавлева И. Ю., Глушкова Т. В., Кудрявцева Ю. А. Оценка антикальциевой эффективности аминодифосфоната для обработки биологических протезов клапанов сердца // Актуальные проблемы сердечно-сосудистой патологии: материалы Всероссийской научно-практической конференции. -Кемерово, 2010. - С. 102-103.

49. Кудрявцева Ю. А., Глушкова Т. В., Насонова М. В., Опарина Л. А., Журавлева И. Ю. Использование смесей моно- и олигоэпоксисоединений для консервации биоматериала // Актуальные проблемы сердечно-сосудистой патологии: материалы Всероссийской научно-практической конференции. -Кемерово, 2010.-С. 154-155.

50. Кудрявцева Ю. А., Тогулева А. Г., Акентьева Т. Н., Насонова М. В., Журавлева И. Ю. Выбор технологии антитромботической модификации биопротеза венозного клапана // Актуальные проблемы сердечно-сосудистой патологии: материалы Всероссийской научно-практической конференции. -Кемерово, 2010.-С. 155-156.

Соискатель:

Ю. А. Кудрявцева

Подписано к печати 19.11.2009. Формат 60х84'/16. Бумага офсетная № 1. Печать офсетная. Усл. псч. л. 2,5 Тираж 120 экз. Заказ № 368

Издательство «Кузбассвузиздат». 650000, г. Кемерово, пр. Советский, 60Б. Тел. 58-29-34

 
 

Оглавление диссертации Кудрявцева, Юлия Александровна :: 2011 :: Кемерово

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ПОВЫШЕНИЮ ГЕМО-СОВМЕСТИМОСТИ КАРДИОВАСКУЛЯРНЫХ БИОПРОТЕЗОВ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

ГЛАВА II МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Методы химической обработки биоматериала.

2.1.1 Базовая консервация биоматериала.

2.1.2 Антитромботическая модификация биоматериала.

2.2 Методы определения структурной стабильности консервированного биоматериала.

2.2.1 Аминокислотный анализ.

2.2.2 Изучение физико-механических свойств биоматериала.

2.3 Методы определения количества сорбировавшегося гепарина.

2.3.1 Определение количества гепарина методом реакции с о-толуидиновым синим.'.

2.3.2 Определение количества гепарина радиоактивным методом.

2.3.3 Оценка количества гепарина по содержанию серы.

2.4 Исследование поверхности биоматериала методом сканирующей электронной микроскопии.

2.5 Изучение взаимодействия биоматериала с белками и форменными элементами крови.

2.5.1 Характеристика образцов биоматериала.

2.5.2 Моделирование взаимодействия биоматериала с кровью in vitro.

2.5.3 Оценка параметров агрегации тромбоцитов.

2.5.4 Получение белковых диализатов.

2.5.5 Метод определения суммарного количества белка.

2.5.6 Изучение белкового спектра диализатов.

2.5.7 Метод определения количества отдельных белков.

2.5.8 Метод определения количества иммуноглобулинов.

2.6 Изучение структуры биоматериала методом световой микроскопии.

2.7 Изучение кальций-связывающей активности биоматериала

2.8 Изучение влияния шовного материала на кальций-связывающую активность биоматериала.

2.9 Определение величины гемолиза, индуцированного биоматериалом.

2.10 Методы статистической обработки материала.

ГЛАВА III ИССЛЕДОВАНИЕ БИОСОВМЕСТИМОСТИ КАРДИО

ВАСКУЛЯРНЫХ БИОПРОТЕЗОВ.

3.1 Влияние различных эпоксидных препаратов на качество консервации биоматериала.

3.1.1 Сравнительный анализ аминокислотного состава консервированного биоматериала.

3.1.2 Изучение структуры эпоксиобработанного биоматериала методом световой микроскопии.

3.1.3 Изучение упруто-деформативных свойств биоматериала.

3.1.4 Влияние аминокислотного состава биоматериала на его уп-руго-деформативные свойства.

3.2 Оценка кальций-связывающей активности биоматериала.

3.3 Изучение иммобилизации различных гепаринов на эпоксиоб-работанный биоматериал.

3.3.1 Оценка количества иммобилизованных антикоагулянтов с использованием различных методов.

3.3.2 Сравнительный анализ эффективности связывания гепарина эпоксиобработанным биоматериалом.

3.3.3 Оценка цитотоксичности биоматериала.

ГЛАВА IV ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ПАРАМЕТРОВ ГЕМОСОВ

МЕСТИМОСТИ ЭПОКСИОБРАБОТАННЫХ БИОПРОТЕЗОВ.

4.1 Изучение структуры поверхности биоматериала методом сканирующей электронной микроскопии.

4.2 Взаимодействие поверхности ксеноартерий с компонентами крови.

4.2.1 Изучение динамики сорбции белков крови на поверхности ксеноартерий.

4.2.2 Взаимодействие ксеноартерий с тромбоцитами и морфологические изменения поверхности биоматериала после контакта с кровью.<.

ГЛАВА V ВЛИЯНИЕ ШОВНОГО МАТЕРИАЛА НА БИОСОВМЕСТИМОСТЬ КАРДИОВАСКУЛЯРНЫХ БИОПРОТЕЗОВ.

5.1 Трансформация зоны сосудистого анастомоза при контакте с кровью.

5.2 Влияние шовного материала на сорбционные и контактно-активационные свойства зоны анастомоза.

5.2 Влияние шовного материала на кальций-связываюшую активность биоматериала.

 
 

Введение диссертации по теме "Трансплантология и искусственные органы", Кудрявцева, Юлия Александровна, автореферат

Одним из важнейших направлений современной сердечно-сосудистой хирургии является создание новых моделей протезов для замещения пораженных клапанов сердца и сосудов, обладающих био- и гемосовместимо-стью. Потребность в кардиоваскулярных протезах, как и в предыдущие годы, остается достаточно высокой. Ежегодно в России выполняется более 6000 шунтирующих операций при окклюзии инфраингвинальных артерий [103], около 17000 операций по коррекции пороков клапанов сердца [17]. Более 12000 пациентов с врожденными пороками-сердца ежегодно подвергаются оперативному лечению, из них около 6000 — это дети-до трех лет [17].

Биологические протезы обладают рядом преимуществ, определяющих их широкое применение в реконструктивных операциях на сердце и периферических сосудах [1, 12, 14, 81, 114, 185, 203]. На отдаленные результаты операций значительное влияние оказывают качественные характеристики биопротеза, которые зависят от базовой консервации и последующей модификации консервированного биоматериала [14, 23, 33, 41, 185, 203, 214, 219, 238, 383].

В 1987 г. исследователи обратили внимание на эпоксидные соединения [159, 172, 197, 240, 306]. Мономерное эпоксисоединение - диглицидило-вый эфир этиленгликоля«- на протяжении ряда лет успешно применяют в нашей- стране для консервации биоматериала, используемого в изготовлении кардиоваскулярных биопротезов. Консервация, диэпоксидом обеспечивает резистентность биоматериала к кальцификации, придает биоматериалу прочность и эластичность, не уступающие нативной ткани, и повышает гемо-совместимость за счет гидрофильных свойств биоматериала [5, 37, 69, 153, 172, 234]

Как показывает анализ результатов, в структуре-отдаленных послеоперационных осложнений при использовании эпоксиобработанных артериальных биопротезов преобладают тромбозы в зоне реконструкции - около 46% [31, 41]. Риск тромбозов в отдаленном периоде после имплантации биопротезов клапанов сердца не столь значителен [1, 81, 114, 132], но, тем не менее, требует оптимизации гемосовместимых свойств данного вида биоматериала.

Для повышения гемосовместимости биопротезов перспективным направлением является использование в качестве базового консерванта биоматериала полиэпоксисоединений [32, 37, 41, 61, 86, 159; 197. 234]. Особенностью данной группы препаратов является наличие в составе разветвленной полимерной структуре свободных эпоксигрулп, которые предоставляют-возможность дополнительной модификации ксеноткани биологически активными веществами [6, 61, 89].

В настоящее время для антитромботической модификации клапанных и сосудистых протезов, широко применяют антикоагулянт прямого действия — нефракционированный гепарин - вещество, обладающее высокой эффективностью и узкой направленностью воздействия на процесс тромбообразо-вания [7,40, 84,111].

Вместе с тем, низкомолекулярные гепарины обладают рядом преимуществ перед нефракционированным гепарином: высокой антитромботической активностью, отсутствием существенной зависимости эффекта от уровня антитромбина П1, преимущественным ингибированием фактора Ха, сниженным риском развития тромбоцитопении [94j 119, 302, 323, 379]. Кроме того, низкомолекулярные гепарины в значительно меньшей степени связываются с белками плазмы, способными ингибировать их активность. Существующий ассортимент низкомолекулярных гепаринов; позволяет подобрать препарат с учетом цели модификации и особенности биопротеза.

Кроме характеристик биологических протезов, на отдаленные результаты реконструктивных операций значительное влияние оказывает шовный материал [12, 15,146,276, 322]. Хроническое воспаление в зоне сосудистого анастомоза, обусловленное влиянием шовного материала, может явиться причиной развития гиперплазии неоинтимы и последующего тромбоза [53, 63, 169, 252]. Развитию гиперплазии неоинтимы на поврежденной швом поверхности предшествует адгезия тромбоцитов в зоне анастомоза и сорбция белков крови [138,140, 205, 279, 355].

Нарушение функции клапанов в магистральных венах нижних конечностей является основным фактором развития хронической венозной недостаточности [34, 104, 134, 141, 149, 168, 350, 377]. Актуальность этой проблемы обусловлена распространенностью патологии среди пациентов трудоспособного возраста. Различными формами хронической венозной недостаточности, в том числе посттромботическим синдромом, страдает около 35 миллионов населения России [16, 25, 52, 103, 104]. Через 10 лет от начала заболевания около 30% пациентов становятся инвалидами.

Использование в восстановительных реконструктивных операциях клапаносодержащих аутотрансплантатов ограничено наличием* подходящих участков необходимого диаметра с компетентными клапанами, а также спаз-мированием пересаженного аутотранстплантата, что в итоге приводит к тромбообразованию в зоне операции [89, 137, 70, 310]. Применение венозных аллографтов лимитировано возможностью забора материала.

В настоящее время адекватной модели протеза венозного клапана не существует. В связи с этим разработка протеза венозного клапана с использованием ксеногенного материала, консервированного эпоксисоединениями, является перспективным направлением.

Таким образом, проблема тромборезистентности и гемосовместимости биологических протезов является весьма актуальной. Необходимы исследования новых перспективных полиэпоксидных соединений, а также оценка эффективности применения новых препаратов класса низкомолекулярных гепаринов. Разработка биопротезов венозного клапана позволит решить проблему коррекции венозной недостаточности.

Цель настоящего исследования — разработка способов повышения гемосовместимости кардиоваскулярных биопротезов путем использования полиэпоксидных соединений и иммобилизованных гепаринов различной молекулярной массы.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние консервации эпоксидными смесями оригинальной композиции на аминокислотный состав и физико-механические свойства ксеногенного биоматериала различной видовой и тканевой принадлежности.

2. Изучить влияние эпоксидных консервантов и гепаринов различной молекулярной массы на структуру поверхности ксеногенного биоматериала различной видовой и тканевой принадлежности.

3. Оценить в сравнительном аспекте количественные параметры иммобилизации нефракционированного и низкомолекулярного гепарина на биопротезы сосудов.

4. Изучить процессы контактной активации тромбоцитов и сорбции протеинов крови при взаимодействии с ксеногенными артериями, обработанными эпоксисоединениями и модифицированными нефракционирован-ным гепарином и низкомолекулярным гепарином Эноксапарином натрия.

5. Обосновать подход к созданию гемосовместимых ксеногенных кла-паносодержащих венозных биопротезов.

6. Изучить in vitro процессы трансформации зоны сосудистых анастомозов после контакта с кровью при использовании различного шовного материала - нитей из полипропилена, полидиоксанона и никелида титана.

Новизна исследования

- впервые показана эффективность применения новых смесей эпоксидных соединений оригинальной композиции для консервации биопротезов;

-9- впервые для повышения тромборезистентности кардиоваскулярных биопротезов предложено использовать низкомолекулярный гепарин - Энок-сапарин натрия;

- впервые показаны различия контактно-активационных свойств поверхности биоматериала, в зависимости от способа консервации и модификации; .

- впервые показано изменение морфологии поверхности, биоматериала, в зависимости от видовой и тканевой принадлежности при применении консервантов с различной структурой углеводородной цепи и гепаринов различной молекулярной массы;

- впервые качественно и количественно охарактеризован процесс сорбции белков крови при контакте с поверхностью эпоксиобработанного биоматериала до и после модификации антикоагулянтами;

- впервые рассмотрена возможность разработки протеза венозного клапана с использованием ксеногенного материала, консервированного эпок-сисоединениями;

- впервые использована технология послойной антитромботической модификации венозных сегментов крупного рогатого скота с целью максимального сглаживания, поверхности, биоматериала и повышения ее гемосов-местимости;

- впервые проведен сравнительный анализ взаимодействия различного шовного материала с компонентами крови и влияние модификации гепарином на сорбционные и контактно-активационные процессы в зоне сосудистого анастомоза.

Практическая значимость работы. Результаты работы могут быть использованы при создании новых моделей« биологических протезов клапанов сердца, артериальных и клапаносодержащих венозных заменителей.

Обосновано использование композиций эпоксисоединений с различной длиной? и структурой углеводородной цепи для; обеспечения заданных свойств биоматериала.

Предложен способ повышения тромборезистентных свойств кардиова-скулярных биопротезов; путем модификации биоматериала низкомолекулярным гепарином (Эноксапарином натрия);

Технология послойной модификации поверхности клапаносодержащих венозных сегментов, обработанных эпоксидными консервантами, может быть использованашри? создании биопротеза венозного клапана.

Установлены особенности влияния различных; видов шовного материала1 на, взаимодействие зоны сосудистого анастомоза с компонентами крови. Показана необходимость повышения гемо- и биосовместимости шовного материала^ используемого в сердечно-сосудистой хирургии.

Предложена модель in vitro для оценки гемосовместимости сосудистых протезов и шовного материала при контакте с кровью.

Положения, выносимые на защиту:

1. Состав! консервирующего * раствора и химическая структура; эпоксисоединений; используемых для> консервации, в значительной мере определяют качество поперечной сшивки фибриллярных белков, физико-механические свойства и структуру поверхности: биоматериала различной: видовой и тканевой'принадлежности;

2. Модификация« кардиоваскулярных биопротезов с применением низкомолекулярных гепаринов обеспечивает снижение активации тромбоцитар-ного звена гемостаза, уменьшение количественных параметров; сорбциишро-теинов крови и определяет преимущественную сорбцию- альбумина; на поверхности биоматериала:

3; На результаты реконструктивных операций на артериях малого диаметра значительное влияние оказывает шовный материал, способный провоцировать массивную сорбцию протеинов и компонентов крови в зоне сосудистого анастомоза.

Область применения и внедрение результатов исследования: Основные результаты работы внедрены в практическую деятельность ЗАО «Не-оКор» и используются при серийном производстве биопротезов клапанов сердца, сосудов и ксеноперикардиальных заплат для интракардиальной и ангиопластики. Предложенная модель для оценки гемосовместимости сосудистых протезов in vitro и полученное по результатам исследования рационализаторское предложение по модификации способа антитромботической обработки сосудистых протезов используются в отделе экспериментальной и клинической, кардиологии НИИ Комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний СО РАМН.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 259 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трех глав; содержащих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы. Указатель литературы содержит 150 отечественных и 233 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 66 рисунками.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние различных консервантов и антикоагулянтов на гемосовместимость кардиоваскулярных биопротезов"

ВЫВОДЫ:

1. Качественные показатели сшивки эпоксисоединениями фибриллярных белков биоматериалов различной видовой и тканевой принадлежности однотипны и заключаются в образовании связей со свободными остатками лизина, гидроксилизина, метионина, гистидина и тирозина. Максимальную суммарную плотность поперечной сшивки ткани артерий и перикарда крупного рогатого скота обеспечивает консервация диглицидиловым эфиром эти-ленгликоля (ДЭЭ), вен - эпоксидной смесью СМЗ и створок аортального клапана свиньи - эпоксидной смесью СМ1.

2. Все исследованные эпоксидные консерванты придают биоматериалу удовлетворительные физико-механические свойства. Наличие в составе консервирующей смеси эпоксисоединений с разветвленной структурой углеводородной цепи определяет повышение прочности биоматериала: максимальные показатели прочности обеспечивает эпоксисмесь СМЗ с наибольшим содержанием 1,2,3,4,6-Пента-0-{ 1 - [(гл ицидилокси)этокси] этил } - а-Б-глюкопиранозы.

3. Значительное влияние на рельеф поверхности ксеногенного биоматериала оказывает структура эпоксидных соединений и состав их смесей. Эпоксидная смесь СМ1 положительно влияет на рельеф поверхности створок аортального ксеноклапана и ксеноперикарда, СМ2 — на поверхность ксеноар-терий. Модификация биоматериала низкомолекулярным Эноксапарином натрия позволяет максимально сгладить рельеф поверхности биоматериала.

4. Основанные на разных подходах методы определения иммобилизованного гепарина (реакция с толуидиновым синим, использование радиоактивной метки и оценка количества серы), позволяют получить сопоставимые результаты. Наиболее высокие количественные параметры иммобилизации демонстрирует нефракционированный гепарин «Белмедпрепарат».

5. Консервация ксеноартерий эпоксисоединениями обеспечивает сведение к минимуму адгезии и значительное снижение агрегации тромбоцитов.

Модификация антикоагулянтами повышает антиагрегационный эффект консервации эпоксисоединениями. Наиболее эффективно снижает показатели агрегации тромбоцитов консервация эпоксидной смесью СМ2 с последующей модификацией низкомолекулярным Эноксапарином.

6. Состав и динамика формирования белковых слоев на поверхности биоматериала в первые часы контакта с кровью в значительной мере зависят от способа базовой консервации и дополнительной модификации. На поверхности ксеноартерий, консервированных СМ2 и модифицированных низкомолекулярным Эноксапарином, сорбируется преимущественно альбумин, что определяет высокую гемосовмесгимость биоматериала.

7. Для создания протеза венозного клапана перспективно использовать эпоксиобработанные клапаносодержащие венозные сегменты крупного рогатого скота. Консервация эпоксисмесью СМЗ с дополнительной модификацией по схеме «Эноксапарин-Альбумин-Эноксапарин» обеспечивает удовлетворительные физико-механические свойства биоматериала и максимально гладкий рельеф поверхности.

8. Шовный материал способен оказывать значительное негативное влияние на гемосовместимость зоны анастомозов: провоцировать сорбцию высокомолекулярных белков крови, вызывать трансформацию эритроцитов и потенцировать агрегацию тромбоцитов. Модификация зоны анастомоза гепарином позволяет значительно снизить уровень негативного воздействия шовного материала на компоненты крови: уменьшается контактная активация тромбоцитов, сорбция белков крови смещается в пользу альбумина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для повышения прочности биоматериала целесообразно включать в состав консервирующего раствора препарат 1,2,3,4,6-Пента-0-{1-[(глицидилокси)этокси]этил}-а-В-глюкопиранозу. Для повышения эластичности - добавлять препарат Ди-1-[2-(глицидилокси)этокси] этиловый эфир диэтиленгликоля.

2. При создании тромборезистентных биопротезов артерий возможно использование эпоксисмеси СМ2, биопротезов клапанов сердца и изделий из ксеноперикарда - эпоксисмеси СМ1, биопротезов венозного клапана — СМЗ.

3. Для эффективной антитромботической модификации кардиоваску-лярных биопротезов перспективно применение низкомолекулярного гепарина - Эноксапарина натрия (Клексан). Для придания тромборезистентных свойств поверхности протеза венозного клапана целесообразно использовать послойную модификацию «Эноксапарин-Альбумин- Эноксапарин».

4. Метод, основанный на использовании радиоактивной метки 3Н, при оценке количества иммобилизованного гепарина является наиболее точным. Однако для рутинных исследований или сравнительной оценки образцов может быть использован метод определения количества гепарина с толуиди-новым синим - менее трудоемкий, легко воспроизводимый и безопасный.

5. В комплекс методов оценки гемосовместимых свойств биоматериала целесообразно включать разработанную модель in vitro, позволяющую оценивать морфологические изменения в зоне анастомоза после контакта с кровью, трансформацию компонентов крови, показатели активации тромбоцитов, а также количество и качественный состав адсорбировавшихся белков.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Кудрявцева, Юлия Александровна

1. Аминов, В.В. Применение бескаркасных эпоксиобработанных ксенобиопротезов при хирургической коррекции пороков аортального клапана: Автореф. Дис. канд. мед. наук / В.В. Аминов Новосибирск, 2004. - 25с.

2. Антимикробные, тромборезистентные, низкопористые эксплантаты «БАСЭКС» в реконструкции аорты и магистральных артерий / Л.А.Бокерия, Р.А.Абдулгасанов, В.С.Аракелян и др. // Бюллетень НЦССХ им. А.НБакулева РАМН. 2008 - Т.9. - №4. - С.28-38.

3. A.c. № 892887 СССР (1981).Способ получения полиглицидиловых эфиров многоатомных спиртов / Б.А.Трофимов, H.A. Недоля, М.Я. Хилько др. Опубл. 1981.

4. A.c. № 1074881 СССР (1983). Способ-получения эпоксипроизводных углеводов / Б.А.Трофимов, Н.А.Недоля, МЛ.Хилько, В.К. Станкевич и др.; опубл. Б.И. 1984.-№7.

5. Барбараш, JI.C. Биологические протезы артерий / JI.C. Барбараш, A.C. Криковцов, И.Ю. Журавлева. Кемерово, 1996. - 208 с.

6. Барбараш, JI.C. Биопротезы клапанов сердца. Проблемы и перспективы / JI.C. Барбараш, H.A. Барбараш, И.Ю. Журавлева. Кемерово, 1995. - 400 с.

7. Баркаган, З.С. Очерки антитромботической фармакопрофилактики и терапии / З.С.Баркаган. М.: Ньюдиамед, 2001. - 296 с.

8. Баркаган, З.С. Метаболически-воспалительная концепция атеро-тромбоза и новые подходы к терапии больных / З.С.Баркаган, Г.И.Костюченко // Бюллетень СО РАМН. 2002. - №2. - С.132-138.

9. Баскова И.П. Медицинская пиявка — источник ингибитора калликреина плазмы крови человека //Гирудотерапия и гирудофарма-кология. Материалы 2-й конференции федерации гирудологов. М., 1992. -С. 137.

10. Белов, Ю.В. Наш опыт применения сосудистых биопротезов / Ю.В. Белов, А.Б. Степаненко // Материалы симпозиума «Биопротезы в сердечнососудистой хирургии». Кемерово, 1996. - С.63-67.

11. И. Белорусов, О.С. Трансплантация аллогенных вен и ксеногенных артерий в реконструктивной хирургии окклюзионных поражений артерий нижних конечностей / О.С. Белорусов, Б.Л. Гамбрин, Г.А. Азизов // Хирургия. 1989. - №3. - С.3-5.

12. Белоярцев, Д.Ф. Ближайшие результаты реконструкций внутренней сонной артерии рассасывающимся шовным материалом / Д.Ф. Белоярцев, И.Е. Тимина // Ангиология и сосудистая хирургия. 2003. - Т. 9. - №4. - С.79-88.

13. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин.— М.: Медицина, 1998. — 704 с.

14. Биосовместимость / Под ред. В. И. Севастьянова. — М.: Медицина, 1999. 368 с.

15. Бобровская, В.А. Проблема шовного материала в сосудистой хирургии / В.А. Бобровская, В.А. Липатов. (http://www.drli.hl .пГ).

16. Бокерия, Л.А Сердечно-сосудистая хирургия — 2008. Болезни и врожденные аномалии системы кровообращения / Л.А. Бокерия, Р.Г.Гудкова. М., 2009. 162с.

17. Бокерия, Л.А. Протезы кровеносных сосудов и кардиохирургические заплаты с тромборезистентными, антимикробными свойствами и нулевой пористостью / Л.А.Бокерия, С.П.Новикова // Бюллетень НЦССХ им. А.Н.Бакулева РАМН. 2008 - Т.9. - №4. - С.5-20.

18. Вавилова, T.B. Антитромботическая терапия и методы ее лабораторного контроля / Т.В. Вавилова. Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 12. - С. 21-32.

19. Васютков, В .Я. Трофические язвы стопы и голени / В.Я. Васютков, Н.В. Проценко. Москва, Медицина. - 1993 187 с.

20. Введенский, А. Н. Новый способ коррекции патологического кровотока в венах голени / А.Н. Введенский. //Вестн. хир. -1988.- N4. -С.143-145.

21. Влияние биохимического состава стенки сосудов бедра человека на ее механические свойства / Б.А. Пуриня, Л.И. Слуцкий, В.А. Касьянов и др. // механика полимеров. 1974. - №2. — С.316-327.

22. Влияние способа консервации биоткани на механизм взаимодействия ксенопротезов кровеносных сосудов малого диаметра с компонентами крови / В.И.Севастьянов, И.Ю. Журавлева, З.М. Беломестная, и др. //Биосовместимость. 1995. - Т.З. - № 3-4. - С.133-148.

23. Гавриленко, A.B. Новые возможности лечения клапанной недостаточности глубоких вен / А.В.Гавриленко, Ф.А. Радкевич // Вестник трансплантологии и искусственных органов. — 2004. — № 1. — С.61-70.

24. Гаибов, А.Д. Ранние послеоперационные осложнения при реконструктивных операциях на сосудах / А.Д. Гаибов, С.А. Мирзоев // Сердечно-сосудистые заболевания: Бюл. НЦССХ им. А.Н. Бакулева. — 2003. — Т. 4. -№ 11. С.132.

25. Гиперплазия интимы как причина рестеноза после реконструктивных и эндоваскулярных операций на артериях нижних конечностей /П. Г.

26. Швальб, Р. Е. Калинин, Ю. И. Ухов и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. 2007. -Т.13. - №4. - С.144-147.

27. Гистология / Ю.А.Афанасьев, Н.А.Юрина, Б.В.Алешин и др., Под редакцией Ю.А. Афанасьева, Н.А. Юриной.—М.: Медицина, 1989. 672 с.

28. Годлевска, М.А. Сопоставление механических и биохимических характеристик артериальных сосудов головного мозга человека / Н.А. Годлевска, ЛИ. Слуцкий, Б.А. Пуриня //Механика полимеров. -1974. №6.—С.1096-1106.

29. Диэпоксиды и их производные в консервации биопротезов клапанов сердца / И.Ю.Журавлева, П.В.Кузнецов, И.Л.Гантимурова, Л.С.Барбараш // Биосовместимость. 1994.- Т.2.- №1.- С. 13-22.

30. Дронов, А.Ф. Имплантаты с направленными действиями для реконструктивной хирургии сосудов (экспериментально-клиническое исследование): Дис. . д-ра мед. наук / А.Ф. Дронов. — М., 1990. 482 с.

31. Егиев, В.Н. Шовный материал (лекция) / В.Н. Егиев // Хирургия.-1998.- №3.- С.33-38.

32. Егорова, В.А. Сравнительный анализ двух подходов к оценке тромбогенности биоматериалов в условиях in vitro / В.А. Егорова, Е.А.Немец, В.И. Севастьянов// Медицинская техника. — 2003. №6. — С.29-32.

33. Жуковский, В.А. Проблемы и перспективы разработки производства хирургических шовных материалов / А.В.Жуковский / Химические волокна. -2008.-№3.-С.31-38.

34. Журавлева, ИЛО. Патогенетическое обоснование и разработка новых способов консервации ксенобиопротезов клапанов сердца: Автореф; Дис. . д-ра мед. наук /И.Ю; Журавлева. М., 1995. - 39 с.

35. Зубаиров, Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования / Д.М. Зубаиров.—Казань: Фэн, 2000. — 364 с.

36. Иванов, C.B. Применение биопротезов, обработанных диэпоксидом, вхирургии периферических артерий: Автореф. Дисд-ра. мед. наук / C.B.

37. Иванов. Кемерово, 2005. - 48с.

38. Игнатьев, И.М. Сравнительная оценка способов восстановления клапанной функции глубоких вен нижних конечностей при посттромботической болезни / И.М. Игнатьев //Грудная и сердечнососудистая хирургия.-2002.г№ 3.-С.52-58.

39. Изменения ригидности биологических сосудистых протезов в зависимости от способа консервации / В. Рейхерт, Т. Шмитц-Риксен, А. Антонов и др. // Ангиология и сосудистая хирургия: -1999. Т.5. - №4. -С.58-70.

40. Иммунологические методы /Под редакцией Г. Фримеля пер. с нем.

41. A.П.Тарасова. М.: Медицина, 1987. - 472 с.

42. Ингибирование калликреина плазмы крови человека секретом слюнных желез и экстрактом из медицинской пиявки Hirudo medicinalis. / И.П.Баскова, С.Халиль, Г.И.Никонов и др. // Биохимия. — 1988. -Т.53. № 9. — С.1467-1473.

43. Интраоперационное применение низкомолекулярных гепаринов при реконструктивных сосудистых операциях //А.В.Покровский, В.С.Демидова, М.И.Титова и др.// Ангиология и сосудистая хирургия.- 2008. — Т.14. №3. -С.11-17.

44. Использование биопротезов кровеносных сосудов малого диаметра с гепаринсодержащими покрытиями /Л.И.Волынец, Е.А.Немец, A.B. Бельков,

45. B.И. Севастьянов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. — 2004.-№2.-С. 41-44.

46. Исследование зависимостей между различными» механическими свойствами И' биохимическим составом костной ткани человека / Ю.Ж. Саулгозис, Л.И: Слуцкий, И.В. Кнетс, Х.А. Янсон // Механика полимеров .1973. -№1. С.138-145.

47. К вопросу о новой технологии сосудистого шва с использованием нитей из сплавов на основе никелида титана / O.A. Ивченко, В.Э.Гюнтер, А.Н.Дворянинов и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. — 1999. Т.5. -№2. — С.63-64.

48. Качество жизни больных с хронической ишемией нижних конечностей / К.Г. Абалмасов, Ю.И. Бузиашвили, К.М1 Морозов и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. -2004. Т.10. - №2. - С.8-12.

49. Клеточное повреждение в сосудистой хирургии. Интимальный гиперпластический ответ / Т. Зублевич, Ю. Вронски, П. Дегранже и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. -1999. Т.5. - №2. - С.17-24.

50. Клинико-морфологическая оценка результатов имплантации биопротеза «Гомографт» / B.C. Алябьев, В.А. Гуляев, З.П. Милованова и др. // Материалы симпозиума «Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии». -Кемерово, 1996. С.75-77.

51. Клинико-морфологические изменения при дисфункциях биологических протезов сердца / А.М.Караськов, С.И.Железнев, В.М. Назаров и др. // Патология кровообращения и кардиохирургия. — 2006. № 2. — С. 21-26.

52. Комплексообразование низкомолекулярного гепарина с белками свертывания крови тромбином и фибриногеном / Б.А. Кудряшов, Л.А. Ляпина, В.Е. Пасторова / Успехи физиол. наук. — 1989. — Т. 20. - № 1. — С. 90105.

53. Композиции на основе биополимеров для модификации сосудистых протезов / Н.В. Кислиновсая, С.П. Новикова, Н.Б. Доброва и др. // Тезисы симпозиума «Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии». Кемерово, 1995. - С.123-131.

54. Кохан, Е.П. Ранние тромботические осложнения после бедренно-подколенного шунтирования / Е.П. Кохан, О.В. Пинчук, C.B.- Савченко // Ангиология и сосудистая хирургия. 2001. - Т.7. - №2. - С.83-87.

55. Криковцов, A.C. Биологические протезы в реконструктивной хирургии артерий: Автореф. Дис. . д-ра мед. наук. Кемерово, 1996. - 37 с.

56. Кудрявцева, Ю.А. Новые подходы к созданию тромборезистентного биоматериала для сердечно-сосудистой хирургии: Автореф. Дис. . канд. биол. наук / Ю.А. Кудрявцева. М., 1997. -21 с.

57. Кузнецов, A.B. Осложнения реконструктивных операций на сосудах /А.В.Кузнецов, Д.Е.Епифанов // Материалы 12 (XYI) международной конференции Российского общества ангиологов и сосудистых хирургов. -Казань, 2001.-С.84-86.

58. Курьянов, П.С. Гиперплазия интимы в зоне сосудистого анастомоза / П.С.Курьянов, A.C. Разуваева, В.Н Вавилов //Ангиология и сосудистая хирургия. -2008. Т. 14. - №4. - С.146-150.

59. Крохин, Д.И. Экспериментальное обоснование метода получения аутопротезов для восстановительной хирургии сосудов: Автореф. Дис. . канд. мед. наук / Д.И. Крохин. — Екатеринбург, 2007. — 23 с.

60. Лазебник, Л.Б. Тромбоэмболия легочной артерии: диагностика, лечение и профилактика./ Л.Б.Лазебник, В.В.Волков, М.В. Котельников // М.: Издатель Е.Разумова. 2004. — 44 с.

61. Латыпов, А.К. Клинико-функциональная оценка биологических клапаносодержащих кондуитов в послеоперационном периоде у детей: Автореф. Дисс.канд. мед. наук. — Новосибирск. — 2005. — 23 с.

62. Лебедев, Л.В. Протезы кровеносных сосудов / Л.В. Лебедев, Л.Л. Плоткин, А.Д. Смирнов. Л., 1981. - 192 с.

63. Лопатин, Ю.М. Низкомолекулярные гепарины в лечении нестабильной стенокардии. http://www.volgarmin.ru.vorma/archiv/7/4/htm.

64. Лучанкин, A.A. Использование сосудистого ксенобиопротеза, обработанного эпоксисоединением, в реконструкции артерий: Автореф. Дис. . канд. мед. наук / A.A. Лучанкин. Кемерово, 1995. - 24 с.

65. Магометов, М.Г. Хирургический метод коррекции абсолютной клапанной недостаточности при посттромбофлебитической болезни.нижних конечностей. / М.Г. Магометов, A.A. Дюжиков, М.Р. Рамазанов // Ангиология и сосудистая хирургия. -2005.- Т.11 — № 2.- С.77-82.

66. Мазуров, В.И. Биохимия коллагеновых белков / В.И. Мазуров // М.: Медицина. 1974. - 248 с.

67. Материалы для изучения роли рельефа поверхности имплантируемых конструкций в модулировании поведения клеток / Л.Ю. Басырева, М.Н. Чегренец, К.О. Сочилина и др. // Перспективные материалы. 2008. - №1. — С. 31-38.

68. Методика измерения активации тромбоцитов в присутствии чужеродной поверхности / Е.А. Ремеева, Е.А. Немец, И.Б. Розанова, В.И. Севастьянов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. — 2004. -№ 1. С. 19-23.

69. Методические указания по стерилизации ксенобиопротезов раствором глутарового альдегида: Метод. Указания. ВНЦХ АМН СССР/ ММИ им. Сеченова. М., 1986. - 18 с.

70. Милованова, З.П. Оценка отдаленных результатов ксенобиопротезирования артерий в клинике и эксперименте / З.П. Милованова, Г.Ф. Липская, А.Ф. Дронов // Тезисы докладов объединенной конференции ангиологов. — Тбилиси, 1990. — С. 100.

71. Морозов, K.M. Анатомические причины, вызывающие недостаточность клапанов глубоких вен, и хирургические методы их купирования / K.M. Морозов, К.Г. Абалмасов // Анналы хирургии. 2002. -№ 6.- С.60-63.

72. Морозов, K.M. Гепарин и его место в сосудистой хирургии / K.M. Морозов, A.B. Лаврентьев, А.Л. Мелкумян //Русский медицинский сервер. Пластическая и микрохирургия. Гепарин. Часть 1.

73. Мочалов, O.A. Индивидуальная изменчивость архитектоники кровеносныхсосудов почки: Автореф. диссд-ра мед. наук / O.A. Мочалов. —Кишинэу, 2006.-17 с.

74. Немец, Е.А. Взаимодействие гепарина с аминосодержащими материалами / Е.А. Немец, Д.А. Касатов, В.И.Севастьянов // Вопросы медицинской химии. — 2001. Т.47. -Вып.5. - С.526-536.

75. Низкомолекулярные гепарины сходство и различия. Маргитич В. http://www.apteka.ua/archives/303/15942.html

76. Никулин, A.A. Кровеносные сосуды (структура, функция и физиология) / А.А.Никулин, В.К. Петров. — Тула. 1981. - 208 с.

77. Новикова, С.П. Повышение тромборезистентности искусственных органов иммобилизацией интерполимерных коньюгатов биологически активных веществ: Дис. . .д-ра мед. наук / С.П. Новикова. М., 1988. - 435 с.

78. Новикова, С.П. Способы создания биоматериалов с повышенной тромборезистентностью / С.П. Новикова, Н.Б. Доброва // Материалы симпозиума «Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии». Кемерово, 1995. - С.105-122.

79. Новое поколение биопротезов клапанов сердца, обладающих повышенной тромборезистентностью и антибактериальной активностью / Л.С.Барбараш, И.Ю.Журавлева, В.В.Борисов и др. // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2002. - №2. - С.42-49.

80. Новый метод хирургической коррекции дисфункции клапанов глубоких вен / А.В.Гавриленко, С.И.Скрылев, Ф.А.Радкевич, И.Л. Жидков // Ангиология и сосудистая хирургия. — 2002. — Т.8. № 2. - С.60-64.

81. Опыт применения ксенопротезов у больных с критической ишемией нижних-конечностей / А.П. Гене, Е.А. Мачерет, Р.Е. Мамонтов и др. // Тезисы Всероссийской конференции «Биопротезы в сердечно-сосудистой хирургии». Кемерово, 2001. - С.35-36.

82. Основы Иммунологии. Пер. с англ. М.: Мир, 1991.-328с.

83. Основы применения радиоиндикаторного метода в биологии / Г.В.Косова, С.Ю. Егоров, Н.В. Алексеева и др. // М., МГУ. 2004 - 166 с.

84. Панченко, Е.П. Возможности применения гепаринов с низкой молекулярной массой в кардиологии / Е.П. Панченко // Сердечная недостаточность. 2000. - Т.1.- № 4. - С. 144-147.

85. Пат. РФ № 2008767. Способ консервирования биоткани для протезирования клапанов сердца и сосудов / J1.C. Барбараш, С.П. Новикова, И.Ю. Журавлева и др.; опубл. 1994., бюл. №5.

86. Пат. РФ № 2074739. Способ предимплантационной обработки протезов / С.П.Новикова, Н.Б. Доброва; опубл. 1997.

87. Пат. РФ № 2122321. Способ обработки биологических протезов для сердечно-сосудистой хирургии / Л.С. Барбараш, И.Ю. Журавлева, СЛ.Новикова и др.; опубл. 27.11.99, бюл.- № 33.

88. Пат. РФ № 2129847 «Протез клапана кровеносной системы», опубл. 10.05.1999.

89. Пат. РФ № 2134963 «Способ консервации венозного биопротеза», опубл. 27.08.1999

90. Пат. РФ № 216113 Способ хирургического лечения дисфункции глубоких вен.

91. Пат. РФ 2196424 РФ. Способ обработки биоматериалов для сердечнососудистой хирургии / Л.С. Барбараш, И.Ю. Журавлева, В.В. Борисов, ИА.Климов; опубл. 20.01.03, Бюл.№ 2.

92. Патофизиологическая физиология периферического кровообращения (учебник для студентов мед. вузов) / Н.Н.Зайко, Ю.В. Быць, A.B. Атаман и др.// К.: «Логос», 1996. с.648.

93. Покровский, A.B. Состояние сосудистой хирургии в России в 2006 году / A.B. Покровский // Российское Общество ангиологов и сосудистых хирургов. 2007. - 16 с.

94. Покровский, A.B. Хроническая венозная недостаточность нижних конечностей — современные проблемы диагностики, классификации, лечения / A.B. Покровский, C.B. Сапелкин // Ангиология и сосудистая хирургия. -2003. №1. — С.53-60.

95. Полимерные системы для контролируемого выделения биологически активных соединений / Л.И.Валуев, Т.А. Валуева, И.Л.Валуев, H.A. Платэ // Успехи биологической химии. 2003. — Т.43. — С. 307-328.

96. Применение биологических трансплантатов в бедренно-подколенно-берцовой позиции / A.B. Покровский, В.Н. Дан, A.B. Чупин и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. 1996. - №3. - С.91-98.

97. Применение низкомолекулярных гепаринов в реконструктивной хирургии аневризм восходящего отдела аорты/ М.А.Алиев, В.А. Джакупов,

98. A.О. Сейдалин и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. -2004. Т. 10. - № 3. - 25-28.

99. Причины возникновения осложнений первичных реконструктивных операций на аорте и артериях нижних конечностей / А.Н. Щербинюк, Т.С. Индербиев, Д.А. Ульянов, Н.Г. Артюхина // Военно-медицинский журнал. -2003. №6. — С.42-47.

100. Проблемы прочности в биомеханике / Под ред. И.Ф. Образцова. — М.: Высшая школа, 1988. — 311с.

101. Профилактика тромботических осложнений в реконструктивной хирургии с использованием низкомолекулярных гепаринов /

102. B.Н:Гончаренко, C.B. Сапелкин, М.И.Титова и др. // Вестник Национального медико-хирургического центра им: Н;И.Пирогова. — 2008. — Т.З. №2.- С. 102-105.

103. Прямые, антикоагулянты, или ингибиторы тромбина. «Клиническое применение антитромботических препаратов». Глава 4. http://wvm.kuban.Su/medicine/shtm/baza/lek/kJfhtm/part4/4.htm

104. Пути и перспективы совершенствования инфраингвинальных артериальных биопротезов / И.Ю. Журавлева, Ю.А. Кудрявцева; C.B. Иванов и др. //Патология кровообращения и кардиохирургия. 2005.- № 1. — С.78-83.

105. Рестеноз в реконструктивной хирургии магистральных артерий (клинико-морфологическое исследование) /П.Г. Швальб, Р.Е.Калинин, Ю.И.Ухов и др. // Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия. 2008.-№4.- С.52-55.

106. Рестенозы анастомозов после аорто-бедренных реконструкций и их иммуноморфологические особенности / Б.В. Шехонин, A.B. Покровский, А.Е. Зотиков и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. 1995. - №3. - С.90-99.

107. Решетняк, Т.М. Низкомолекулярные гепарины в ревматологии: патогенетические обоснования применения / Т.М. Решетняк, Л.В.Кондратьева. Ревматология. - 2005.- Т.7. - №8. — С.45-49.

108. Роль гидрофильности органосиликатов в процессах взаимодействия поверхности материалов с тромбоцитами человека / Е.А.Ремеева, И.Б. Розанова, Е.А. Немец, В.И. Севастьянов // Перспективные материалы. 2005. -№5.-С. 60-67.

109. Роль эноксапарина (клексана) в профилактике и лечении тромбоэмболических осложнений / C.B. Сапелкин, A.B. Покровский // Ангиология и сосудистая хирургия. 1998. - Т.4. -№ 3-4. - С.119-123.

110. Сборник методических рекомендаций по оценке биосовместимых свойств искусственных материалов, контактирующих с кровью / Под ред. Н.Б. Добровой, Т.И. Носковой, С.П. Новиковой, В.И. Севастьянова. — М:, 1990. -70 с.

111. Севастьянов, В.И. Особенности взаимодействия белков плазмы крови человека с гепаринизированной поверхностью / В.И. Севастьянов, Е.А.Немец, Д.А.Касатков // Перспективные материалы. 2000. — №3. -С.65-69.

112. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В.Серов, А.Б. Шехтер. М. Медицина, 1981.-312 с.

113. Сидоренко, Е.С. Эколого-физиологические механизмы адаптации при имплантации гемо- и биосовместимых материалов. Автореф. дис. д-ра мед. наук. — Москва, 2007. — 40 с.

114. Скоблов, Ю.М. Радиоактивные изотопы в физико-химической биологии/ Ю.М.Скоблов // http://molbiol.ru/bio/001/004.html.

115. Смирнов, В.Ю. Опыт трансплантации криоконсервированных подкожных вен для реконструкции артерий / В.Ю. Смирнов // Тезисы докладов объединенной конференции ангиологов. Тбилиси, 1990. - С. 143144.

116. Современные возможности трансплантации сосудов / В.И. Шумаков, А.З. Трошин, Ю.М. Зарецкая и др. // Хирургия. 1990. - №8. - С.11-17.

117. Сорокина, Т.П. Физика и биофизика (электронный учебно-методический комплекс) / Т.П. Сорокина, О.П.Квашнина. http://www.kgau.ru/distance/etf 04/Ыор11У5Ю5/е12.1Щт1

118. Сорок лет сосудистому протезу / Л.В. Лебедев, Л.Л. Плоткин, А.Д. Смирнов и др. // Ангиология и сосуд, хирургия. 2002. - Т.8. - № 1. - С.112-117.

119. Стеммер, Р. Лечение хронической венозной недостаточности нижних конечностей / Р. Стеммер. // Флеболимфология. 1997. - № 4.- С. 1-4.

120. Степаненко, А.Б. Применение ксеногенных биопротезов и заплат, обработанных эпоксисоединениями, в сосудистой хирургии / А.Б.Степаненко, Ю.В. Белов, А.П. Гене // Материалы 10 (ХГУ) международной конференции

121. Российского общества ангиологов и сосудистых хирургов. Кемерово, 1999. -С.101-102.

122. Струков, А. И. Нарушения обмена кальция / А. И. Струков, В. В.Серов // Учебник по медицине. Патологическая анатомия. http://www.medichelp.ru/posts/view/3057

123. Суковатых, B.C. Восстановительно-реконструктивная хирургия клапанного аппарата глубоких вен нижних конечностей / В.С.Суковатых, П.М. Назаренко //Вестник хирургии им. И. И. Грекова. -1991.-Т.146.-№1.-С.136-140.

124. Сыченков, И.А. Шов и пластика артерий / И.А.Сыченков. — М: Медицина. 1980. - 152 с.

125. Типовые изменения обратимой агрегации эритроцитов при патологических процессах разного генеза / Н.В.Рязанцева, В.В. Новицкий, Е.А.Степовая и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. -Т.135. - №1. - С.33-36.

126. Тромбогенез и формирование неоинтимы на синтетических и биологических артериальных протезах среднего диаметра / B.JI. Барсуков, В.И. Хлызов, Л.Ф. Сысоева и др. // Тезисы докладов объединенной конференции ангиологов. Тбилиси, 1990. - С.119-120.

127. Флебология: руководство для врачей // В.С.Савельев, В.А.Гологорских, А.И.Кириенко и др. // Под ред. В.С.Савельева. — М.: Медицина, 2001. 664 с.

128. Цедерс, Э.Э. Связь между механическими характеристиками брюшной аорты человека и его биохимическим составом / Э.Э Цедерс, Л.И. Слуцкий, Б.А. Пуриня // Механика полимеров. 1975. - №4. - С.722-729.

129. Цитология. Под редакцией Г.Е.Елисеева, Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной/ 3-е изд. -М.: Медицина. 1983. - 592 с.

130. Шиффман, Ф.Д. Патофизиология крови / Ф.Д. Шиффман. Пер. с англ. Москва. -2000. - С. 182-191.

131. Шоно, Н.И. Метод определения белка по Бредфорду: область применения, преимущества, недостатки / Н.И. Шоно // Лабораторное дело. 1989. №4. - С.4-7.

132. Штильман, М.И. Полимеры медико-биологического назначения /М.И.Штильман Москва, ИКЦ Академкнига. — 2006. - 399 с.

133. Эпоксидные соединения в консервации ксенопротезов кровеносных сосудов / Л.С. Барбараш, И.Ю. Журавлева, А.С. Лучанкин и др. // Ангиология и сосудистая хирургия. -1996. №2. - С.86-92.

134. Яблоков, Е.Г. Хроническая венозная недостаточность / Е.Г. Яблоков, А.И. Кириенко, В.Ю. Богачев // М.: Издательство «Берег». -1999. 127 с.

135. Ямпольская, Г.П. Модифицированные поверхности полистирола комплексом бычий сывороточный альбумин-ТВИН -80 и прогнозирование биосовместимости. // Г.П. Ямпольская, В.Д. Должикова // Вестн. Моск. Унта. Сер. 2. Химия. -2007. - Т.48. - С.33-37.

136. A clinical experience with the NCGT graft. / K. Reddy, S.N. Haque, L. Cohen, et al. // J. Biomed. Mater. Res. 1981. - Vol.15. - №3. - P.335-341.

137. A comparative study of complement activation by Denaflex, Bioflow, arid BioPolyMeric vascular grafts / E.Y. Wang, P.C. Giclas, R. Tu, et al // ASAIO-J. 1993.-Vol. 39. №3. - P.691-694.

138. A compliant biological vascular prostheses / R. Tu, C. Hata, E.Wang , et al. // Int. J. Artif. Organs.-1993.- Vol.16. -P.141-145.

139. A multi-step approach in anti-calcification of glutaraldehyde-preserved bovine pericardium / W.M. Neethling, AJ. Hodge, P. Clode, et al. // J. Cardiovasc. Surg. (Torino). 2006. - Vol.47. - №6. - P.711-718.

140. A natural compound (reuterin) produced by Lactobacillus reuteri for biological-tissue fixation / H.W. Sung, C.N. Chen, H.F. Liang, et al. // Biomaterials. 2003. - Vol.24. - №8. - P.1335-1347.

141. A new antithrombogenic RV-PA valved conduit / Y. Ichikawa, Y. Noishiki, T. Soma, et al. // ASAIO J. 1994. - Vol.40. - №3. -P.714-718.

142. A new storage solution for porcine aortic valves / M. Mirzaie, E. Brunner, A.H. Mahbubul Latif, et al.// Ann Thorac Cardiovasc Surg. 2007. - Vol. 13.-№2.- P. 102-109.

143. A novel chemical modification of bioprosthetic tissues using L-arginine / K.S. Jee, Y.S. Kim, K.D. Park, Y.H. Kim // Biomaterials 2003. - Vol.24. -№20.-P.3409-3416.

144. A preliminary study of the fixation mechanism of collagen reaction with a polyepoxy fixative / R. Tu, R.C. Quijano, C.L. Lu, et al.// IntJ.Artif. Organs. — 1993. Vol.16. -P.537-544.

145. A self-renewing, tissue-engineered vascular graft for arterial reconstruction / K. Torikai, H. Ichikawa, K. Hirakawa, et al. // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. -2008. -Vol.136. №1.- P.37-45.

146. Abbot, W.M. Prosthetic above knee femoro-popliteal bypass grafting: Results of a multi-center randomized prospective trial / W.M. Abbot, R.M. Green, T. Matsumoto // Vase. Surg. -1997. Vol. 25. - P. 19-28.

147. Abbott, W.M. Control of physical characteristics (elasticity and compliance) of vascular grafts / W.M. Abbot, R.P. Cambria // Biologic and synthetic vascular Prostheses. New York, Grune & Stratton, 1982. - P. 189-220.

148. Achieving the ideal properties for vascular bypass grafts using a tissue engineered approach: a review / S. Sarkar, T. Schmitz-Rixen, G. Hamilton, A.M. Seifalian // Med. Biol. Eng. Comput. 2007. - Vol.45. - №4. - P.327-336.

149. Activation of blood coagulation at heparin-coated surfaces / R. Blezer, B. Fouache, G.M. Willems, T. Lindhout // J. Biomed. Mater. Res. 1997. - Vol.37. -P.108-113.

150. Adsorption> of vitronectin, collagen and immunoglobulin-G to plasma polymer surfaces by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) / J.D. Whittle, N.FA. Bullett, R.D. Short, et al. // J. of Mater. Chem. -. 2002. Vol. 12. - №9. - P.2726-2732.

151. Albumin impregnated vascular grafts: albumin resorption and tissue reactions / D.J. Cziperle, K.A. Joyce, C.W. Tattersall, et al. // J. Cardiovasc. Surg. 1992 - Vol.33. —№4. - P.407-414.

152. Allegra, C. Essential functional venous pathology / C.Allegra, M.Bonifacio, A. Caplizza // Phlebolymphology. 1998.- №20. - P.20.

153. Anastomic intimal hyperplasia: mechanical injuiy or flow induced / H. Bassionti, S. White, S. Gladov, et al. // J. Vase. Surg. 1992. - April 15. - P. 806-815 (discussion 7).

154. Annotation: low molecular weight heparin (S). Brit. J. Haemotol. 1995; 90:1.

155. Anticoagulant Activity of Immobilized Heparin on the Polypropylene Nonwoven Fabric Surface Depending upon the pH-of Processing Environment / Yu-Ch.Tyan, J.-Der Liao, Yi-Te Wu, R. Klauser // J. Biomater. Applic. 2000.-Vol.17. №.2. - P.153-178.

156. Aorto-coronary bypass grafting wits hydrophilic small caliber vascular grafts / Y. Tomizava, Y. Noishiki, T. Okoshi, et.al. // ASAIO Trans. 1989. -Vol. 35.-P.199-202:

157. Artificial blood vessel: the Holy Grail of peripheral vascular surgery / J.D. Kakisis, C.D. Liapis, C.Breuer, et al. // J. Vase. Surg. 2005. - Vol.41. - №2. -P.349-354.

158. Aventis Pharmaceuticals. Lovenox (enoxaparin) package insert. Parsippany, NJ; January 2001.

159. Bair, R.E. Processed human umbilical veins for vascular reconstuctive surgery / R.E. Bair, C.K. Akers, H.J. Dardik // Trans. Amer. Soc. Artif. Int. Organs. 1976. -Vol.22. - P.514-526.

160. Bandyk, D.F. Hemodynamics of vein graft stenosis / D.F. Bandyk, G.R. Seabrook, P. Moldenhauer // J. Vase. Surg. -1988. Vol.8. - №6. - P.688-695.

161. Bartlett, S.T. The reoperative potential of infrainguinal bypass: Long-term limb and patient survival / S.T. Bartlett, A.J. Olinde, W.R. Flinn // J. Vase. Surg. 1987.-Vol. 5. - №1. - P.170-177.

162. Biasi, M. Processed bovine pericardium as patch angioplasty for carotid endarterectomy: a preliminary report / M. Biasi, P. Mingazzini, L. Baronio // Cardiovascular Surgery. -1996. Vol. 4. - № 6. - P. 848-852.

163. Biocompatibility study of biological tissues fixed by a natural compound (reuterin) produced by Lactobacillus reuteri / H.W. Sung, C.N. Chen, Y. Chang, et al. // Biomaterials. 2002. - Vol.23.- №15.- P.3203-3214.

164. Biomaterials with permanent hydrophilic surfaces and low protein adsorption properties / B.E Rabinow, Y.S. Ding, C.Qin, et al. // J. of Biomater. Science, Polymer Edition. 1995. - Vol.6. - №1. - P.91-109.

165. Blood compatibility of surfaces with immobilized albumin-heparin conjugate and effect of endothelial cell seeding on platelet adhesion / G.W. Bos, N.M. Scharenborg, A.A. Poot, et al. // J.Biomed. Mater. Res. 1999.- Vol. 47. -P. 279-291.

166. Boundary layer Infusion of Heparin Prevents Thrombosis and Reduces Neointimal Hyperplasia In Venous PTFE Grafts Without Systemic

167. Anticoagulation / Ch. Chen, St.R. Hanson, A.B. Lumsden // J. Vas. Surg. — 1995. Vol.22. - P.237-247.

168. Bordenave, L. Developments towards tissue-engineered, small-diameter arterial substitutes / L. Bordenave, P. Menu, C. Baquey // Expert Rev. Med. Devices. -2008. Vol.5. - №3. - P.337-347.

169. Bornstein, P. The Biosynthesis of Collagen /P. Bornstein // Ann. Rev. Biochem. 1974. -Vol.43. -P.567-603.

170. Bovine Mesenteric Vein Graft (ProCol) in Critical Limb Ischaemia with Tissue Loss and Infection / J. Schmidli, H. Savolainen, G. Heller et al. / Eur.J. Vase. Endovasc. Surg. 2004. - Vol.27. - №3. - P. 251-253.

171. Brash, J.L. Studies of protein adsorption relevant to blood compatible materials / In: Missirlis Y.F, Lemm W, editors. //Modern aspects of protein adsorption on biomaterials. The Netherlands: Kluwer Academic Publishers. -1991.- P.38-47.

172. Brewster, D.C. Prosthetic Grafts / D.C. Brewster // Vascular Surgery. -Colorado, 1995. -Vol.1. P.492-521.

173. Broockbank, K.G. Functional analysis of ciyopreserved veins. Preliminary report / K.G. Broockbank, TJ. Donovan, S.T. Ruby // J. Vase. Surg. -1990. -Vol.11. -P.94-100.

174. Calcification and degeneration characteristics of the Biocor No-React bovine internal mammary artery (BIMA) — in vivo evaluation in a sheep model / RJasharia, P. Herijgersa, E. Verbekenb, et al. // Cardiovascular Surg. 2001. -Vol. 9. - №1. -P.44-49.

175. Calcification resistance with aluminum-ethanol treated porcine aortic valve bioprostheses in juvenile sheep / M.F.Ogle, S.J. Kelly, R.W. Bianco, R.J. Levy // Ann. Thorac. Surg. 2003. - Vol.75. - №4. - P. 1267-1273.

176. Capila, I. Heparin-protein interactions / I." Capila, R.J. Linhardt // Angew. Chem. In.t Ed. Engl. 2002.-Vol.41. - P. 390-412.

177. Carpantier, A. The concept of bioprosthesis// Thoraxchirurgie .-1971.-Vol.19. -№5.-P. 379-383.

178. Casu, B. Structural characterization of low-molecular weight heparins / B. Casu, G. Torri // Semin Thromb Hemost 1999. Vol. 25 (suppl 3). P. 17-25.

179. Cell-matrix biology in vascular tissue engineering / S. Stephan, S.G. Ball, M. Williamson, et al. // J. Anat. 2006. - Vol.209 - №4.- P.495-502.

180. Chanda, J. Heparin coupling in inhibition of calcification of vascular bioprostheses / J.Chanda,, R. Kuribayashi, T. Abe // Biomaterials. — 1999. Vol. 20.- №19. — P.1753-1757.

181. Characterization and biocompatibility of epoxy-crosslinked dermal sheep collagens / P.B. van Wachem, R. Zeeman, P. J. Dijkstra, et al. // J. of biomed. materials res. 1999. - Vol.47. - №2. - P.270-277.

182. Characterization of a polyepoxy compound fixed porcine heart valve bioprostheses / S.N. Shen, H.W. Sung, Tu R., C. Hata, et al. // J.Appl. Biomater.-1994.-Summer 5(2).-P. 159-162.

183. Chemical modification of bovine pericardium and its effect on calcification in the rat subdermal model / G.M. Bernacca, W.R. Dimitri, A.C. Fisher, et al. //Biomaterials. -1992. Vol. 13. - № 6. - P.345-352.

184. Chen, C. Local infusion of heparin reduces anastomotic neointimal hyperplasia in aortoiliac expanded polytetrafluoroethylene bypass grafts in baboons / C.Chen, A.Lumsden, S.Hanson // J. Vase. Surg.- 2000.- Vol.31. № 2.- P.354-363.

185. Chen, J.-S. The use of Afunctional polyethyleneglycol derivatives for coupling of proteins to and crosslinking of collagen matrices / J.-S.Chen, E.M.Noah, N. Pallua, G.C.M Steffens // J. Mat. Sc.: Mat. Med. 2002. - Vol.3.1. P.1029-1035.

186. Chen, W. Mechanism of efficacy of 2-amino oleic acid for inhibition of calcification of glutaraldehyde-pretreated porcine bioprosthetic heart valves / W. Chen, F.J.Schoen, R.J.Levy // J. Circulation. 1994. - Vol.90. - P.323-329.

187. Cornerota, AJ. Graft trombosis and thromboembolic complications / A.J. Comerota, R.B. Rutherford // Vascular Surgery. W.B.Saunder Company. -Colorado, 1995. Vol.1. - P.571-587.

188. Comparative decades of experience with glutaraldehyde-tanned human umbilical cord vein graft for lower limb revascularization: an analysis of 1275 cases / H. Dardik, K. Wengerter, F. Qin et al. // J. Vase. Surg. 2002. - Vol.35. -№1. -P. 64-71.

189. Comparative study of the L-hydro process and glutaraldehyde preservation / V.J. Nina, P.M. Pomerantzeff, I.S. Casagrande, et al.// Asian Cardiovasc Thorac Ann. 2005. -Vol.13.- №3.- P.203-207.

190. Complement activation by vascular sutures both alone and in combination with synthetic vascular prostheses / J.E. Coleman, C.S. McEnroe, J.A. Gelfand, et al. // Eur. J. Vase .Surg. 1991. - Vol.5. - №3. - P.287-290.

191. Compliance mismatch may promote graft-artery intimai hyperplasia by altering suture-line stresses / P.D. Ballyk, C. Walsh, J. Butany, et al. // J. Biomech. 1998. - Vol.31. - №3. - P.229-237.

192. Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimai hyperplasia in nonhuman primates / P. Zilla, P. Human, M. Wolf, et al. // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2008. - Vol.136. - P.717-725.

193. Coronary bypass grafting with biological grafts in a canine model / Y. Tomizawa, M.R. Moon, A. Deanda et al. // J. Circulation/ 1994. - Vol. 90. -№5. - P. 160-166.

194. Correlation between mechanical properties and wall composition of the canine superior vena cava / J. Minten, A. Verheyer, F. Cornelissen et al. // Arch. Int. physiol. Et biochem. 1986. - Vol.94. - №5. - P.349-362.

195. Couet, F. Macromolecular biomaterials for scaffold-based vascular tissue engineering / F. Couet, N. Rajan, D. Mantovani // Macromol. Biosci. — 2007. -Vol.7.-№5.- P.701-718.

196. Covalent linkage of heparin provides a stable anti-coagulation surface of decellularized porcine arteries // Journal of Cellular and Molecular Medicine. Published Online: 18 Nov 2008.http://www3.interscience.wiley.com/iournal/121521830/abstract

197. Covalentntly-bound heparin makes collagen thromboresistant / Jeffrey F.W. Keuren, Simone J.H. Wielders, et al. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2003. -Vol.24.-P. 613-617.

198. Craig, S.R. The use of bovine internal mammary artery (Bioflow) grafts in coronary surgeiy / S.R. Craig, W.S. Walker // Eur. J. Cardiothorac. Surg. -1994. -Vol.8. P.43-45.

199. Creisler, H.P. Vascular grafts healing Interfacial phenomena / H.P. Creisler // New Biologic Sintetic Vascular Prostheses. TX, R.G. Landes. Austin, 1991.-P.1-19.

200. Cross-linking characteristics and mechanical properties of bovine pericardium fixed with a naturally occurring cross-linking agent / H.W. Sung, Y. Chang, C.T. Chuit, et al. //J. Biomed. Mater. Res.-1999.- Vol.47. №2. - P. 116126.

201. Cutshi, S. Results of arterial femoro-popliteal bypass with ovine collagen prosthesis / S. Cutshi, G. Koch // Card. Vase. Surg. -1996. -Vol.4. P.24.

202. Dale, W.A. Further experiences with bovine arterial grafts / W.A. Dale, M.R. Lewis // Surgery. -1976. -Vol.80. P.711-721.

203. Dardik, H. A decade of experience with the glutaraldehyde tanned human umbilical cord vein graft for revascularization of the lower limb / H. Dardik, N. Miller, A. Dardik//J. Vase. Surg. -1988. -Vol.7. P.336-346.

204. Dardik, H. Biodégradation and aneurism formation in umbilical vein grafts. Observation and realistic strategy / H. Dardik, J.M. Ibrahim, B. Sussmann // Ann. Surg. -1984. -Vol.199. P.61-68.

205. Dardik, H. The second decade of experience with the umbilical vein graft for lower-limb revascularization / H. Dardik// Cardiovasc. Surg. -1995. -V.3. P.265-269.

206. Davies, M.G. Pathophysiology of vein graft failure: a review / M.G. Davies, P.O. Hagen // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. 1995. -Vol.9. - P.7-18.

207. Detoxification process for glutaraldehyde-treated bovine pericardium: biological, chemical and mechanical characterization / C. Stacchino, G. Bona, F. Bonetti, et al.// J. Heart Valve Dis. 1998. - Vol.7. - №2. - P.190-194.

208. Development of small-diameter vascular grafts / X. Wang, P. Lin, Q. Yao, C. Chen // World J. Surg. 2007 - Vol.31. - №4. - P.682-689.

209. Development of the vascular prosthesis research / A. Zhu ., J. Shen,. Sheng Wu Yi, et al. // 2003. Vol.20. -№3. - P.537-540.

210. De Backer, G. Epidemiology of chronic venous insufficiency / G. De Backer //Angiology. 1997. - Vol.48. - P.569-576.

211. Dobrin, Ph.B. Mechanical properties of arteries / Ph.B. Dobrin // Physiol. Rew. -1978. Vol. 58. - №2. - P.397-460.

212. Down-stream anastomotic hyperplasia: a mechanism of failure in Dacron arterial grafts / F.W. Lo Gerfo, W.C. Quist, M.D. Nowak, et al. // Ann. Surg. 1983.- Vol.197. №2. - P.479-483.

213. Dumont, C. Effect of glutaraldehyde on experimental arterial iso- and allografts in rats / C. Dumont, D. Plissonnier, C. Guettier// J. Surg. Research. -1993. -Vol.54. -P.61-67.

214. Dupont Pharma. Innohep (tinzaparin) package insert. Wilmington, DE; July 2000.

215. Ebert, C.D. The anticoagulant activity of derivatized and immobilized heparins. // C.D.Ebert, E.S.Lee, S.W.Kim // Adv. Chem. Series. 1982. - №199. -P.161-176.

216. Epoxy compounds as a new.cross-linking agent stadies in rats / Imamura E., O. Savatani, H. Koyanagi, et al. //J. Card. Surg. 1989.-Vol4.-№ 1.- P. 50-57.

217. Evaluation of a Polyepoxy Compound Fixed Biological Vascular Prosthesis and an Expanded Polytetrafluoroethylene Vascular Graft / C. Hata, E. Wang, Y. Noishiki, et al.//Artificial Organs. 1992.- Vol.16.- №3. - P.263 - 266.

218. Evaluation of a porcine internal mammary artery (No-React II) as a small-diameter conduit / S. Ostapczuk, J. Poniewierski, A. Thiel, et al. // Ann. Thorac. Surg. 1998. - Dec.66(6 Suppl).- P. 115-117.

219. Evaluation of epoxy ether fixed bovine arterial grafts for mutagenic potential / J. M. Lohre, L. Baclig, E. Wickham, et all // ASAIO J. -1993-Vol.39.-P.106-113.

220. Experimental : Study of Thrombogenicity and Foreign Body Reaction Induced by Heparin-Coated Coronary Stents / I. D. Scheerder, K. Wang, K. Wilczek, et al J! Circulation. 1997. - Vol.95. - P. 1549-1553.

221. Farred, J. Low-molecular-weight heparins: Pharmacologic profile andiproduct differentiation / J.Farred, W. Jeske, D. Hoppensteadt, et al.// Am. J. Cardio.- 1998.- Vol. 82. P.3L-10L.

222. Femoral vein valve incompetence: treatment with a xenograft monocusp patch. Preliminary report / R. Garcia-Rinaldi, J.M. Revueita, MJ. Martinez, et al. // J. Vase. Surg. 1986. - Vol.3.- №6. - P.932-935.

223. Femoropopliteal prosthetic bypass with glutaraldehyde stabilized' human umbilical vein (HUV) / A. Neufang, C. Espinola-Klein, B. Dorweiler, et al. //J. Vase. Surg. 2007. - Vol.46. -№2. - P.280-288.

224. Fibrin: a natural biodegradable scaffold in vascular tissue engineering /

225. F.M. Shaikh, A. Oallanan, E.G. Kavanagh, et al. // Cells .Tissues Organs. -2008. Vol.88. - №4. - P.333-346.

226. Fibrin-based tissue-engineered blood vessels: differential effects of biomaterial and culture parameters on-mechanical strength and vascular reactivity /L.Yao, D.D. Swartz, S.F. Gugino, et al. //Tissue. Eng. -.2005. Vol.11. №7-8.-P.991-1003.

227. Fibrinogen adsorption, platelet adhesion and thrombin generation at heparinized surfaces exposed to flowing blood / J.F.W. Keuren, S J.H. Wielders,

228. G.M. Willems, et. al. // Thromb Haemost- 2002. Vol.87. - P.742-747.

229. Field, P.L. The chemically treated bovine ureter-clinical performance of a novel biological vascular prosthesis / P.L. Field // Cardiovasc Surg. 2003. -Vol.1 l.-№l.-P.30-34.

230. Jantet, G. RELIEF study: fist European, consolidated data / G. Jantet // Angiology. 2000. - Vol.51. - №4. - P.31-37.

231. Gerlock, A.J. Venous prosthetic valves. The first step toward an investigation, in the canine model / A J. Gerlock, T.J. Phifer, J.C. McDonald // Invest Radiol. 1985. - Vol.20.- №1.- P.42-44.

232. Girardot, M.N. Effect of AOA® on Glutaraldehyde-Fixed Heart Valve Cusps and Walls; Binding and Calcification Studies. / M.N. Girardot, M.Torrianni, J.M.Girardot // Int. J. Artif. Org. 1994. - Vol.17. - №2. - P.76-82.

233. Glowes, A.W. Early endothelial coverage of synthetic arterial grafts. Porosity revisited // A.W. Glowes, R.F.Zacharias, T.R. Kirkman // Am. J. Surg. -1987.- Vol.153. -P.501-504.

234. Glowes, A.W. Pathologic intimal hyperplasia as a response to vascular injury and reconstruction / A.W. Glowes // Vascular Surgery. W.B. Saunder Company. -Colorado, 1995. -Vol.1. P.285-295.

235. Glutaraldehydepreserved venous valve transplantation in the dog / M. Kaya, J.B. Grogan, D. Lentz, et al. // J.Surg. Res. 1988. - Vol.5. - P.294-297.

236. Glutaraldehyde-tanned bovine carotid artery graft for infrainguinal vascular reconstruction: 5-year follow-up / R.J. Holdsworth, S. Naidu, P. Gervaz, P.T. McCollum // Eur.J. Vase. Endovasc. Surg. 1997. - Vol.14. - №3. - P.208-211.

237. Golomb, G. The role of glutaraldehyde-induced cross-links in calcification of bovine pericardium used in cardiac valve bioprostesis / G. Golomb, F.J. Schoen, M.S. Smith // Am. J. Pathol. -1987. -Vol.127. P.122-130.

238. Gomez-Jorge, J. Percutaneous deployment of a valved bovine jugular vein in the swine venous system: a potential treatment for venous insufficiency / J. Gomez-Jorge, A.C. Venbrux, C.J. Magee // Vase. Interv. Radiol. — 2000. -Vol.11.-P.931-936.

239. Gross, J. Collagen / J. Gross // Scient. Am. 1961. - Vol.204. - P. 120-130.

240. Harkness, RD. Mechanical properties collagenous tissues / R.D. Harkness // Intern. Review of connect. Tiss. Res. -1968. Vol.54. -P.255-263.

241. Heparin* and low-molecular-weight heparin. Mechanisms of action, pharmacokinetics, dosing, monitoring, efficacy, and safety ,/ J. Hirsh, T.E.Warkentin, S.G. Shaughnessy, et al. // Chest 2001.-Vol.119. -P.64-94.

242. Heparin immobilization onto segmented polyurethane-urea surfaces-effect of hydrophilic spacers / K.D. Park, T. Okano, C. Nojiri, S.W. Kim // J. Biomed. Mater. Res. 1988. - Vol.22. - №11. -P.977-992.

243. Heparin immobilization reduces thrombogenicity of small-caliber expanded polytetrafluoroethylene grafts / J.M. Heyligers, H.J. Verhagen, J.I. Rotmans, et al. // J. Vase. Surgi 2006. -Vol.43. - №3. -P.587-591.

244. Heparinization of biological vascular graft reduces fibrin deposition / L.E. Boerboom, G.N. Olinger, B:J. Karas, et al. // Int. T. Artif. Organs. -1993. -Vol.16.-№5.-P.263-267.

245. Heparinized bovine pericardium as a novel cardiovascular bioprosthesis / W.K. Lee, K.D; Park, D.K. Han, et al.// Biomaterials. 2000. - Vol.21. - №22. P.2323-2330.

246. Heparinized human umbilical vein grafts. Delayed heparin desorption after alcohol treatment / C.O. Esquivel, C.G. Björck, D. Bergqvist, S.E. Bergentz // Eur. Surg. Res. 1983. - Vol.15. - №6. - P.289-296.

247. Hirsch, S.A. The use of stabilized human-umbilical vein for femoropopliteal bypass / S.A. Hirsch, F. Jarrett // Ann. Surg. -1984. -Vol.200. P. 147-152.

248. Hirsh, J. Trombos Haemostas / J. Hirsh et.al. -.1995; 74(1):360.

249. Histopathologic findings in synthetic and biologic explanted grafts used in peripheral arterial reconstruction / E. Wagner, R. Guidoin, M. Marois, et al. //ASAIO J. -1994. Vol.40. - №3. -P.279-283.

250. Hyers, T.M. Antithrombotic therapy for venous tromboembolic disease / T.M. Hyers, G. Agnelly, R.D .Hull. // Chest. -1998. №114. - P. 561-578.

251. Immobilization of heparin to EDC/NHS-crosslinked collagen. Characterization and in vitro evaluation / M. J. B. Wissink, R. Beernink, J. S. Pieper, et. al. // Biomaterials. 2001. - Vol.22. - P. 151-163.

252. Imparato, A.M. Intimai and neointimal fibrous proliferation causing failure of arterial reconstructions / A.M. Imparato, A. Bracco, G.E. Kim // Surg. -1972. -Vol.72.-P.1007-1011.

253. Implantation of cryopreserved allograft pulmonary monocusp patch to treat nonthrombotic femoral vein incompetence / R. Garcia-Rinaldi, E. Soltero, J. Gaviria, et al. // Tex Heart Inst J.- 2002. Vol.29. - №2. - P.92-99.

254. Improved biocompatibility of bioprosthetic heart valves by L-glutamic acid treatment / M.Grimm, M.Grabenwôger, E. Eybl, et al.// J. Card. Surg. -1992.-Vol.7. №1.- P.58-64.

255. Improved calcification resistance and biocompatibility of tissue patch grafted with sulfonated PEO or heparin after glutaraldehyde fixation / W.K. Lee , K.D. Park, Y.H. Kim, et al. //. J Biomed Mater Res.- 2001.- Vol.58. №1.- P.27-35.

256. Intimal hyperplasia and neointima: An ultrastructural analysis of thrombosed grafts in humans / V.S. Sottiurai, J.S. Yao, W.R. Flinn, et al. // Surgery. -1983. -Vol.93. -№6.- P.809-817.

257. Is percutaneous implantation of a bovine venous valve in the inferior vena cava a reliable technique to treat chronic venous insufficiency syndrome? / Y. Boudjemline, D. Bonnet, D. Sidi, P. Bonhoeffer // Medical Science Monitor. — 2004.-№10.-P.61-66.

258. Kempczinski, R.F. Vascular grafts. Overview / R.F. Kempczinski // Vascular Surgery. W.B. Saunder Company. Colorado, 1995. -Vol.1. - P.470-474.

259. Kieffer, E. In situ allograft replacement of infected infrarenal aortic prosthetic grafts: Results in 43 patients / E. Kieffer, A. Bachnini, F. Koshas // J. Vase. Surg. -1993. -Vol.17. P.349-353.

260. Khor, E. Methods for the treatment of collagenous tissues for bioprostheses / E. Khor // Biomaterials. 1997. - Vol.18 - №2. - P.95-105.

261. Kovalic, A.J. Outcome of ProCol, a bovine mesenteric vein graft, iniinfrainguinal reconstruction / A.J. Kovalic, D.K. Beattie, A.H. Davies // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. 2002. - Vol.24. - №6. - P. 533-534.

262. Lee, J.M. Effect of molecular structure of poly (glycidyl ether) reagents on crosslinking and mechanical properties of bovine pericardial xenograft materials / J.M. Lee, C.A. Pereira, W.K. Kan // J. Biomed. Mat. Res. -1994. -Vol.28. P.981-982.

263. Liao, K. Improved biocompatibility of bovine pericardium using a new method of cross linking / K. Liao, E. Seifter, G. Gong // ASAIO Trans. -1991. -Vol.37.-P.175-176.

264. Lohre, J. Evaluation of epoxy ether treated arterial grafts for mutagenic potential / J. Lohre, L. Bacling, S. Guida // ASAIO Abstracts. -1992. Vol.12. - P.l 17-118.

265. Long-term study of a compliant biological vascular graft. / T. SchmitzRixen, J. Megerman, J.M. Anderson, et al. // Eur. J. Vase. Surg. 1991. - Vol.5. - №2.-P. 149-158.

266. Macintosh, F.C., A Colorimetric Method For The Standardization of Heparin Preparations / F.C. Macintosh // Biochem. J. 1941. - Vol.35. - P.776-782.

267. McGinlay, P.B. The kinetics of adsorption of human immunoglobulin G to poly(vinyl chloride) enzyme-linked-immunoadsorbent-assay vessel walls / P.B. McGinlay, W.G.Bardsley // J. Biochem. 1989. - Vol. 261. - P.715-720.

268. Maleti, O. Neovalve construction in postthrombotic syndrome / O. Maleti, M. Lugli // J. Vase. Surg. 2006. - Vol. 43. - №4. - P.794-799.

269. Mamode, N. Graft type for femoro-popliteal bypass surgery / N. Mamode, R.N . Scott// Cochrane Database SystRev. 2000. - (2):CD001487.

270. Menger, M. In vivo assessment of neovascularization and incorporation of prosthetic vascular biografts / M. Menger, F. Hammersen, K. Messmer // Thorac. Cardiovasc. Surg. -1992. -Vol.40. P. 19-25.

271. Minns, R.J. The role of the fibrous components and ground substance in the mechanical properties of biological tissues: a preliminary investigation / R.J. Minns, P.D. Soden, D.S. Jackson. // J.Biomech. 1973. - Vol.6. - №2. - P. 153165.

272. Moazami, N. Photo-oxidized bovine arterial graft. Short-term results / N. Moazami, M. Argenziano, M. Williams // ASAIO Journal. -1998. Vol. 44. - P.89-93.

273. Muñoz, E.M. Heparin-Binding Domains in Vascular Biology / E.M. Muñoz, RJ. Linhardt // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. -2004.-Vol.24.-P. 1549.

274. Neglen, P. Venous reflux repair with cryopreserved vein valves / P. Neglen, S Raju // J.Vasc. Surg. 2003. - Vol.37. - P.552-557.

275. Nemets, E.A. The interaction of heparinized biomaterials with human serum albumin, fibrinogen, antithrombin III and platelets. / E.A. Nemets, V.I. Sevastianov // Artif. Organs. 1991. - Vol.15. - P.381-385.

276. Nerem, R.M. Vascular tissue engineering / R.M. Nerem, D. Seliktar // Annu. Rev Biomed. Eng. -2001. №3. -P.225-243.

277. Nighttingel, S.L. Appropriate use of low molecular weight heparins (LMWH)/ S.L. Nighttingel//JAMA. 1993. -Vol.270. -P.1672.

278. Ninomiya, J. Late results of clinical experiments with small caliber biological grafts / J. Ninomiya, S. Tanaka, T. Shoji, Y. Noishiki // Artif. Organs.- 1995.-Vol.19. P.46-50.

279. Noishiki, Y. Development of a small caliber vascular graft by a new cross-linking method incorporated slow heparin release collagen and natural tissue compare / Y. Noishiki, T. Miyata, K. Kodaira // ASAIO Trans. 1986. -Vol.32. -P.114-119.

280. Nojiri, C. Aorto-coronary bypass grafting with heparinized vascular grafts in dogs / C. Nojiri, Y. Noishiki, H. Koyanagi // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. -1987.-Vol.93.-P.867-877.

281. No-React Detoxification Process: A Superior Anticalcification Method for Bioprostheses /A. Abolhoda, S. Yu, J. R. Oyarzun, et al. // Ann. Thorac. Surg.- 1996. Vol.62.-P. 1724-1730.

282. Okoshi, T. A new bioprosthetic cardiac valve with reduced calcification / T. Okoshi, Y. Noishiki, Y. Tomizawa // ASAIO Trans. -1990. -Vol.36. P.411-414.

283. Oscar M., Aguilar MD., Neal S., Kleiman MD. Low-molecular-weight heparins. J. Invas. Cardiol. 2001; 13 (Suppl. A): 3A-7A.

284. Pavcnik, D. Update on Venous Valve Replacement: Long-Term Clinical Results / D. Pavcnik // Vascular. 2006. - Vol. 14 (Suppl 1). - P. 106.

285. Percutaneous bioprosthetic venous valve: a long-term study in sheep / D. Pavcnik, B.T. Uchida, H.A. Timmermans, et al. // J. Vase. Surg. — 2002. Vol. 5.- P.598-602.

286. Pharmacia & Upjohn. Fragmin (dalteparin) package insert. Kalamazoo, MI; May 1999.

287. Physiologic pulsatile flow bioreactor conditioning of poly(ethylene glycol)-based tissue engineered vascular grafts / M.S. Hahn, M.K. McHale, E. Wang, et al. //Ann. Biomed. Eng. 2007. - Vol.35. - №2.- P. 190-200.

288. Porcine stentless bioprostheses: Prevention of aortic wall calcification by dye-mediated photooxidation. / B. Meuris, R. Phillips, M.A. Moore, et al. // Artif. Organs. 2003. - Vol.27. - № 6. - P. 537- 543.

289. Preliminary Evaluation of a Technique for Inhibiting Intimai Hyperplasia: Implantation of a Resorbable Luminal Collagen Membrane / K.Kent, S.Mii, L Brown, et al. // Annals of Vase. Surg. 1995. - Vol.9. - № 2. -P.135-139.

290. Preliminary observations on the use of human arterial grafts in the treatment of certain cardiovascular defects / R. Gross, E. Hierwitt, A. Bill et al. // N. Engl. J. Med. 1998. - Vol.239 - P.578-584.

291. Preparation and characterization of collagen-elastin matrices from blood vessels intended as small diameter vascular grafts / G. Goissis, S. Suzigan, D.R. Parreira, et al. // Artif. Organs. 2000. - Vol.24. - №3. -P. 217-223.

292. Preparation of porcine carotid arteries for vascular tissue engineering applications /P.S. McFetridge, J.W. Daniel, T. Bodamyali, et al. //J. Biomed. Mater. Res. 2004. - Vol.70. - №2. - P.224-234.

293. Prevention of Bioprosthetic Heart Valve Calcification by Ethanol Preincubation Efficacy and Mechanisms / N.Vyavahare, D.Hirsch, E. Lerner, et al. // J. Circulation. 1997. - Vol.95. - P.479-488

294. Prevention of deep vein thrombosis after hip replacement: randomised comparison between unfractionated heparin and low molecular weight heparin / P.F. Leyvraz, F. Bachmann, J. Hoek, et al. // BMJ. 1991. Vol.303(6802). -P.543-548.

295. Prevention of neointimal proliferation by immunosuppression in synthetic vascular grafts / B.H. Walpotha, M. Pavliceka, B. Celika, et al. // Eur. J. Cardiothorac. Surg.- 2001. Vol.19. - P.487-492.

296. Primary vascular anastomosis in growing pigs: comparison of polypropylene and polyglycolic acid sutures / W.E. Pae Jr, J.A. Waldhausen, G.A. Prophet, W.S. Pierce // J. Thorac. Cardiovasc. Surg.- 1981.- Vol.81. -P.921-927.

297. Racine R. Différentiation of the low-molecular-weight heparins / R.Racine // Pharmacotherapy. 2001. - Vol. 21(6 Pt 2). - P.62S-70S. •

298. Rahlf, G. Morphology of healing in vascular prostheses / G. Rahlf, P. Urban, R.M. Bonhle // Thorac. Cardiovasc. Surgeon. -1986. -Vol.34. P.43-48.

299. Raju, S. Venous insufficiency of the lower limb and stasis ulceration. Changing concepts and management / S. Raju // Ann. Surg. 1983.-Vol. 197.-P.688-697.

300. Ramos, J.R. Histologist fate and endothelial changes vein grafts / J.R. Ramos, K. Berger, P.B. Mansfield // Ann. Surg. -1976. -Vol.183. P.205-228.

301. Ratcliffe, A. Tissue engineering of vascular grafts/ A. Ratcliffe // Matrix Biol. -2000. Vol.19. -P.353-357.

302. Refinement of the alpha amino oleic acid bioprosthetic valve anticalcification technique. / J.P.Gott, M.Girardot, J.Girardot, et al. // Ann. Thorac. Surg. 1997. - Vol.64. - P.50-58.

303. Results of a bovine collagen vascular graft (Solcograft-P) in infra-inguinal positions / A. Schroder, H. Imig, U. Peiper, et al. // Eur. J. Vase. Surg. — 1980. — Vol.2. №5.- P.315-321.

304. Rheological analyses of coagulation of blood from different individuals with special reference to procoagulant activity of erythrocytes. /M.Kaibara, H.Iwata, H. Ujiie, et al. // Blood Coagul. Fibrinolysis. 2005. -Vol.16.- №5. -P.355-363.

305. Rosenberg, N. Use of enzyme-treated heterografts as segmental arterial substitutes / N. Rosenberg,, J. Henderson, G.H. Lorol // Arch. Surg. -1962. -Vol.85. -P.192-197.

306. Rubin, B.G. Platelet interactions with the vessel wall and prosthetic grafts / B.G. Rubin, S.A. Santoro, G.A. Sicard // Ann. Vase. Surg. 1993. Vol.7. -P.200-207.

307. Rutherford, R.B. Fundamental techniques in vascular surgery / R.B. Rutherford // Vascular Surgery. Colorado, 1995. -Vol.1. - P.397-420.

308. Sawyer, P.N. Potency of small-diameter negatively charged glutaraldehyde-tanned (St.Jude Medical Biopolymeric) grafts / P.N. Sawyer, A.M. O'Shaughnessy, Z. Sophie // Modern Vascular Grafts. McGraw-Hill. New York, 1987. - P. 163-180.

309. Scales, J.T. Tissue reactions to synthetic materials / J.T. Scales // Proc. R. Soc. Med. 1953. - Vol.46.- P.647-651.

310. Schmidt, C.E. Acellular vascular tissues: natural biomaterials for tissue repair and tissue engineering / C.E. Schmidt J.M. Baier // Biomaterials. 2000. - Vol.21. - №22.-P.2215-2231.

311. Schmidt, S. Bioflow small diameter graft implants / S. Schmidt, M. Evanche // Clinical Brief. -1989. -Vol.1.- №1-4.

312. Schroder, A. Results of a bovine collagen vascular graft (Solcograft-P) in infra-inguinal positions / A. Schroder, H. Imig, U. Peiper // Eur. J. Vase. Surg. -1988.-Vol.2.-P.315-321.

313. Scott, W.J. Proliferation and substrate effects on endothelial cell thrombogenicity / W.J. Scott, P. Mann // ASAIO Trans.- 1990.- Vol.36.- №3. -P.737-738.

314. Sevastianov, V.I. Interrelation of protein adsorption and blood compatibility of biomaterials. In: High performance biomaterials: A comprehensive guide to medical/pharmaceutical application. Szycher M.(ed). Technomic Press. Lancaser. 1991. -P.313-341.

315. Sharma, C.P. Blood compatible materials and devices: perspectives towards the 21st centuiy (Surface modification: Blood Compatibility of Small Diameter Vascular Graft) /G. P. Sharma, Ml Szycher // CRC Press, 1991. 303 p.

316. Short-term results of bovine internal mammary artery use in cardiovascular surgery / F. Esposito, N.Vitale, B. Crescenzi, et al // Heart Inst J. — 1994. Vol. 21(3).- P. 193-197.

317. Small-caliber heparin-coated ePTFE grafts reduce platelet deposition and neointimal hyperplasia in a baboon model / P:H. Lin, C. Chen, R.L. Bush, et al. //J. Vase. Surg.-2004. Vol.39. - №6. - P. 1322-1328.

318. Smith, P.K. Colorimetric Method For Assay of Heparin Content in Immobilized Heparin Preparation / P.K.Smith, A.K. Mallia, G.T. Hermanson //. Analytical Biochem. 1990. - Vol.109. - P.466-473.

319. Somogui, E. Morphological experiences with a new bovine carotid xenograft (Solcograft-P) in experimental vascular surgery / E. Somogui, A. Nemes, P. Sotonyi // Acta Morphol. Acad. Sci. Hung. -1982. -Vol.30. P.199-208.

320. Stegemann, J.P. Review: advances in vascular tissue engineering using protein-based biomaterials / J.P. Stegemann, S.N. Kaszuba, S.L. Rowe // Tissue Eng. 2007. - Vol.13. - №l l. - P.2601-2613.

321. Stelzer, P. Stentless Aortic Valve Replacement: Porcine and Pericardial. Cohn Lh, ed. Cardiac Surgery in the Adult. New York: McGraw-Hill, 2008. -P.915-934.-256/

322. Storck, M. Absorbable suture in vascular surgery / M. Storck, K.-H. Orend, Schmitz-Rixen T. //Vascular surgery. 1993. - Vol. 27. - №6. -P.413-424.

323. Tahery, S. Vein valve transplantation / S. Tahery, D. Pendergast, E. Lazar // Amer. J.Surg. 1985.- Vol.150.- P.201-210.

324. Taheri, S.A. Experimental prosthetic vein valve long-term results / S.A.Taheri, R.O. Schultz // American College of Angiology. Annual meeting — 1995. Orlando FL , ETATS-UNIS (10/1993).- Vol. 46. - №4. - P.299-303.

325. Tang, L. Fibrin(ogen) mediates acute inflammatory responses to biomaterials. / L.Tang, J.W. Eaton // J. Exp. Med. 1993. - Vol.78. - №6. -P.2147-2156.

326. Tang, L. Inflammatory responses to implanted polymeric biomaterials: Role of surface-adsorbed immunoglobulin G. / L.Tang, A.H. Lucas, J.W. Eaton // J. Lab. Clin. Med. 1993. - Vol. 122. - №3. - P.292-300.

327. Technology insight: the evolution of tissue-engineered vascular grafts-from research to clinical practice / N. L'Heureux, N. Dusserre, A. Marini, et al. // Nat. Clin. Pract. Cardiovasc. Med. 2007. - Vol.4. -№7. - P.389-395.

328. The effect of suture material on platelet deposition onto prosthetic material / R. Connolly, C.S. McEnroe, S. Li, et al.// ASAIO Trans. 1988. -Vol.34. - №3. — P.874-877.

329. The ultrastructure and mechanics of elastic ligaments / A. Serafini-Fracassini, J.M. Field, J.M. Smith, W.G.S. Stephens // Adv. Exp. Med. Biol. -1977.- Vol.79. -P.97-103.

330. Thomas, A.C. Advances in vascular tissue engineering / A.C. Thomas, G.R. Campbell, J.H. Campbell //Cardiovasc. Pathol. 2003. - Vol.12. - №5. -P.271-276.

331. Thrombogenicity of polysaccharide-coated surfaces/ J.F.W. Keuren, S J.H. Wielders, G.M. Willems, et al. // J. Biomaterials. 2003.- Vol.24. - P. 19171924.

332. Tissue engineered small-diameter vascular grafts / R.H. Schmedlen, W.M. Elbjeirami, A.S. Gobin, J.L. West // Clin. Plast. Surg. 2003. - Vol.30. - №4. -P.507-517.

333. Tissue-Engineered Bioprosthetic Venous Valve: a Long-Term Study in Sheep / O.E. Teebken, C. Puschman, T. Aper, et al. // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. 2003. Vol.25. - P.305-312.

334. Tissue characterization and calcification potential of commercial bioprosthetic heart valves. / C.M. Cunanan, C.M. Cabiling, T.T. Dinh, et al. // Ann.Thorac. Surg. 2001. - Vol.71 (5 Suppl). -P.417-421.

335. Tomizawa, Y. Development of a small-caliber vascular graft with antithrombogenicity induced by extreme hydrophilicty / Y. Tomizawa, Y. Noishiki, T. Okoshi // ASAIO Trans. -1988. -Vol.34. P.644-650.

336. Towne, J.B. The autogenous vein / J.B. Towne // Vascular surgery. -Denver, 1995. -Vol.1. P.482-491.

337. Trofimov, B.A. A New Strategy in the Synthesis of Epoxy Resins / B.A. Trofimov, N.A. Nedolya // Reviews on heteroatom Chemistry. 1993. -Vol.9. -P.205-229.

338. Turpie, A.J. New therapeutic opportunities for heparins: what does low molecular weight heparin offer? // Thrombosis and Thrombolysis. — 1996. №3. -P.145.

339. Tu, R. Fixation of bioprosthetic tissues with monofiinctional and multifunctional polyepoxy compounds./ R. Tu, S.H.Shen, C. Hata, Y. Noishiki // J. Biomed. Mater. Res. 1994. - Vol.28. - №6. - P.677-684.

340. Use of Heparin-Coated Stents to Reduce Subacute Stent Thrombosis: Outcome in «Real-World» Patients / V. Gupta, T.A. Fischell, B.R. Aravamuthan, et al. // Am. J. Cardiol. 2002. - Vol. 90. (Suppl 6A). - P. 7H.

341. Ustuner, T.E. Comparison of nylon and polypropylene sutures in a microvenous thrombosis model // T.E. Ustuner, Feng Zhang , Lineaweaver W.C. //Microsurgery. 1995. - Vol. 16. - №.8. - P.533-535.

342. US Patent 6503272. Stent-based venous valves. Publication Date 01.07.2003.

343. US Patent 6608040. Chemical modification of biomedical materials with genipin. Publication Date 19.08.2003.

344. US Patent 20050123583 Medical use of reuterin. Publication Date 09.06.2005.

345. US Patent 20030171802. Venous valve and graft combination. Publication Date 09.11.2003

346. Virchov, R. Gesammelte Abhandlungen zur wissenschaftlichen Medicin. Frankfurt am Main, 1 Meidinger, 1856; 2nd edition, Berlin, 1862. Thrombose undEmbolie. Gefässentzündung und septische Infektion. P. 219-732.

347. Whittemore, A.D. Infrainguinal bypass / A.D. Whittemore // Vascular Surgery. Colorado, 1995. -Vol.1. - P.795-814.

348. Wright, M.P.J. Late reoperation in vascular surgery / M.PJ. Wright, A.H. Davies, C. Grath // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. -1995. Vol.10. - P.304-307.

349. Woodrof, T.A. The chemistry and biology of aldehyde treated tissues heart valves / London-Boston. 1979.-P.347-362.

350. Xue, L. Biomaterials in the development and future of vascular grafts / L. Xue, H.P. Greisler // J. Vase. Surg. 2003. - Vol.37. - P.472-480.

351. Zilla, P. Carbodiimide treatment dramatically potentiates the anticalcific effect of alpha-amino oleic acid on glutaraldehyde-fixed aortic wall tissue. / P. Zilla, D. Bezuidenhout, P. Human // Ann. Thorac. Surg. 2005. - Vol.79. -P.905-910.