Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Влияние гелий-неонового лазерного излучения на систему гемостаза при стрессе (экспериментальное исследование)

АВТОРЕФЕРАТ
Влияние гелий-неонового лазерного излучения на систему гемостаза при стрессе (экспериментальное исследование) - тема автореферата по медицине
Беспалова, Татьяна Александровна Саратов 1997 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.17
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние гелий-неонового лазерного излучения на систему гемостаза при стрессе (экспериментальное исследование)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ САРАТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ

УНИВЕРСИТЕТ

; На правах рукописи

Беспалова Татьяна Александровна

УДК (616-005.1-08+616.155.2+612.115.4):б 16.45-001.1/.3:615/849/19(04)

ВЛИЯНИЕ ГЕЛИИ-НЕОИОВОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА СИСТЕМУ ГЕМОСТАЗА ПРИ СТРЕССЕ

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.17. - НОРМАЛЬНАЯ ФИЗИОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

Саратов 1997

Диссертация выполнена на кафедре физиологии человека и Центральной научно-исследовательской

лаборатории Саратовского государственного

медицинского университета.

Научные руководители: - академик МАНВШ, доктор медицинских наук, проф. В.Ф.Киричук, член-корр. АЕ, доктор медицинских наук,

проф.Г.Е. Брилль.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Л.И. Прокофьева; Доктор биологических наук, профессор Т.Г. Анищенко.

Ведущая организация:

Волгоградская медицинская академия.

Защита диссертации состоится г- ¿г 1997 года в часов на Заседании диссерационного Совета К 034.37.04 при Саратовском государственном медицинском

университете, 410710 Саратов, ул. Б. Казачья, 112

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Саратовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан " 1996 г.

Ученый секретарь диссерационного Совета кандидат медицинских наук, доцент Н.Е. Бабиченко.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

В последние годы внимание исследователей привлекают физические методы воздействия на биосистему, в частности, использование различных видов лазерного излучения. Низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) в настоящее время широко применяется в медицине (Данилевский Н.Ф. и соавт., 1989; Корочкин И.М. и соавт., 1989; Кошелев В.Н., 1992; Балакирева С.Ю и соавт., 1994; Солун М.Н., 1994; Gallachi G. et al., 1981; Kato H„ 1985; Lunde O.C., 1985; Castorina N. P., Padva R., 1993; Coulter A. H., 1994; Oriba H.A. et al., 1994). Специалисты, имеющие большой опыт лечебного использования излучения гелий-неонового лазера, отмечают, что достигаемый клинический эффект нередко бывает лучше, чем при использовании традиционных методов лечения (Савицкий С.Ю., Попова Л.И., 1989; Бабиченко Е.И. и соавт., 1994; Lowe A.S. et al., 1994). Лазерное воздействие имеет ряд безусловных преимуществ перед методами лекарственной терапии: оно не вызывает аллергических реакций, хорошо переносится больными, как правило, не дает нежелательных побочных эффектов, легко дозируется, обладает значительной терапевтической широтой (Охширо Т., Калдерхед Р.Г. , 1991). Однако лазерное облучение стали применять в клинике, не имея четких представлений о точках приложения и механизме действия когерентного света на живой организм, и при лечении многих заболеваний параметры излучения и дозы воздействия выбирались произвольно, без теоретического и практического обоснования. Вследствие этого результаты, получаемые в клинике, нередко противоречивы.

Излучение гелий-неонового лазера с успехом используется при лечении ряда заболеваний, в патогенезе которых значительное место принадлежит изменениям в системе регуляции агрегатного состояния крови. Так, имеются данные о нормализующем действии лазерного излучения на измененные при патологических состояниях тромбоцитарно-сосудистый гемостаз, плазмо-, гемокоагуляцию и фибринолиз (Бугаев М.В., 1989; Чипченко Е.И. и соавт., 1992). Наряду с этим, имеются сведения о повышении коагулирующей активности облученной крови, росте антитромбинового потенциала, активации фибринолитической и тромбоцитарной активности (Войтенок Н.К. и соавт., 1988). Литературные данные о влиянии низкоинтенсивного лазерного излучения на систему гемокоагуляции и фибринолиза весьма противоречивы.

Ряд концепций, объясняющих биологические эффекты НИЛИ, фиксируют внимание на его способности изменять структуру и конформационную подвижность элементов биомембран (Илларионов В.Е., 1992), а также возможности изменения структуры мезоморфной жидкокристаллической матрицы (Минц Р.И., Скопинов С.А., 1989). Следовательно, лазерное излучение может воздействовать на основные компоненты, играющие важнейшую роль в формировании гемостатического потенциала.

Важным патогенетическим звеном в развитии многих заболеваний является стресс-реакция, вызванная различными факторами окружающей среды,

и предупреждение стрессорных повреждений является важным этапом в разработке эффективных методов их патогенетической терапии (Alonso J., Navarro Е., 1993; Steptol А., 1993). В литературе описаны изменения состояния

различных звеньев системы регуляции агрегатного состояния крови при стрессе (Piepot H.A. et al., 1994). Одним из факторов, способным оказать модифицирующее действие на измененную гемокоагуляцию при стрессе,

является низкоинтенсивное лазерное излучение. Для уточнения влияния лазерного излучения на систему гемостаза, измененную в условиях стресса, важная информация может быть получена в экспериментальных исследованиях, где создаются относительно стандартные условия.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящей работы явилось экспериментальное изучение влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на коагуляционный потенциал, фибринолитическую активность крови и функцию тромбоцитов на различных этапах формирования стрессорной реакции, а также выявление возможности модификации плазмокоагуляции и функции тромбоцитов при облучении плазмы крови в условиях in vitro.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить влияние гелий-неонового лазерного излучения на систему гемокоагуляции и фибринолиза, а также на состояние тромбоцитарного звена системы гемостаза в экспериментах in vitro.

2. Исследовать состояние гемокоагуляционного гомеостаза, агрегационную и адгезивную активность тромбоцитов на этапе запуска стресс-реализующих систем.

3. Изучить модифицирующее влияние лазерного излучения на систему гемостаза на этапе запуска стрессорного ответа.

4. Изучить характер нарушения гемокоагуляции и функции тромбоцитов в условиях патологического стресса.

5. Апробировать возможность предупреждения изменений гемокоагуляции при патологическом стрессе с помощью предварительного облучения светом гелий-неонового лазера.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

В работе впервые установлено, что лазерное облучение плазмы в условиях in vitro может изменять ее коагуляционную и фибринолитическую активность, оказывать влияние на агрегационную способность тромбоцитов и их поведение на экстраклеточном матриксе. Впервые изучены изменения состояния системы гемостаза на ранних этапах формирования стрессорного ответа. Показана возможность модифицирующего влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на формирование ранних стрессорных изменений гемокоагуляции и нарушение функции тромбоцитов. Доказано, что при патологическом стрессе, сопровождающемся развитием ишемических и геморрагических изменений в сердце и мозге, возникает отчетливая гиперкоагуляция, повышается адгезивная и агрегационная активность тромбоцитов. Предварительное транскутанное облучение гелий-неоновым лазером препятствует развитию индуцированной стрессом гиперкоагуляции и модифицирует агрегационную активность тромбоцитов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Результаты проведенного исследования дополняют имеющиеся представления об изменениях, происходящих в системе гемостаза, на различных этапах

формирования стрессорного ответа и свидетельствуют о возможности влияния НИЛ И на компоненты системы гемостаза. Применение транскутанного лазерного облучения позволяет предотвратить развитие изменений гемостаза, характерных для стресса, что является теоретическим

2

(экспериментальным) обоснованием возможности использования НИЛИ в клинической практике с целью профилактики стрессорных повреждений. Проведенные исследования также расширяют существующие представления о механизмах действия лазерного излучения на живую систему.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты данного диссертационного исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах патологической физиологии, физиологии человека Саратовского государственного медицинского университета.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты исследований доложены и обсуждены на научных конференциях кафедры физиологии, Центральной научно-исследовательской лаборатории, на совместном заседании кафедр патологической физиологии, физиологии человека и фармакологии Саратовского государственного медицинского университета. Фрагменты работы доложены на 17-м Международном симпозиуме по реологии (Саратов, 1994) и представлены в виде стендовых докладов на 5-ом Конгрессе Азиатско-Тихоокеанской ассоциации лазерной медицины и хирургии ("5th Congress of the Asian-Pacific' Association for Laser Medicine and Surgery", Tel Aviv, Israel, 1994); на Международной конференции "Light and Biological Systems" (Wroclaw, Poland, 1995); на XV Международном конгрессе "Thrombosis and Haemostasis" (Jerusalem, Israel, 1995), на 6-м Всемирном конгрессе по микроциркуляции ("Sixth World Congress for Microcirculation", Munich, Germany, 1996); на 1-м Всемирном конгрессе по лазеротерапии ("1st Congress of the World Association for Laser Therapy", Jerusalem, Israel, 1996).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Облучение богатой тромбоцитами плазмы крови светом гелий-неонового лазера в условиях in vitro сопровождается повышением ее коагуляционного потенциала, активацией фибринолиза и стимуляцией агрегационной активности тромбоцитов. Этот эффект имеет дозозависимый характер.

2. При кратковременном иммобилизационном и комбинированном иммобилизационно-звуковом стрессе развиваются однотипные изменения в системе регуляции агрегатного состояния крови, проявляющиеся активацией процесса свертывания крови по внутреннему механизму, повышением активности тромбоцитарного звена системы гемостаза, активацией антикоагулянтной и фибринолитической систем.

3. Транскутанное лазерное облучение на фоне кратковременного стресса препятствует развитию индуцированных стрессом изменений в системе гемостаза.

4. При патологическом стрессе отмечается гиперкоагуляция за счет активации протромбиназы по внешнему механизму и повышения активности тромбоцитарного звена системы гемостаза на фоне повышения антикоагулянтной и фибринолитической активности.

5. Предварительное транскутанное облучение светом гелий-неонового лазера предотвращает развитие гиперкоагуляции при патологическом стрессе, за счет стабилизации протромбинового комплекса и торможения освобождения фосфолипидных компонентов из мембран тромбоцитов.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 20 работ, в том числе 10 в зарубежной печати.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 192 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, описывающей материал и методы исследований, главы собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы. Указатель использованной литературы включает 181 отечественный источник и 111 зарубежных. Работа содержит 35 таблиц и 27 рисунков.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 390 беспородных белых крысах-самцах массой 180-220 г. Для проведения опытов в условиях in vitro, кроме плазмы крови беспородных белых крыс, была использована кровь 10 здоровых доноров.

Для воспроизведения стресс-реакции в эксперименте использовались следующие модели: а) жесткая иммобилизация крыс в положении на спине в течение 5 минут; б) действие акустического раздражителя (120 дБ, 150-500 Гц) на фоне жесткой иммобилизации в течение 2 минут; в) действие прерывистого звукового сигнала (120 дБ, 150-500 Гц) на фоне жесткой иммобилизации в течение 2-х часов по схеме, исключающей развитие охранительного торможения (Романова Т.П., 1989).

В отдельных сериях опытов иммобилизованные животные подвергались транскутанному облучению гелий-неоновым лазером ( X • 632,8 нм). Облучался предварительно депилированный участок кожи на бедре в области проекции сосудисто-нервного пучка. Во всех экспериментах использовали лазер ЛГ-75, мощность на выходе - 15-17 мВт, плотность мощности во всех экспериментах составляла в среднем 5 мВт/см2.

Чрескожное лазерное облучение проводилось: а) одновременно со стрессорным воздействием в течение 2 минут; б) непосредственно перед воспроизведением 2-часового комбинированного стресса в течение 15 минут.

Контролем для всех групп являлись интактные животные. Кроме того проводился сравнительный анализ изменения исследуемых показателей гемостаза при стрессе без лазерного облучения и после лазерного воздействия.

Состояние свертывающей системы и фибринолитическую активность крови определяли при помощи приборов электрогемокоагулографа Н-334, тромбоэластографа ГКГМ1-03 и стандартных лабораторных тестов. Кровь у животных получали после декапитации через 5 минут после завершения действия стрессорного агента, помещали в рабочие кюветы приборов и проводили записи тромбоэластограммы (ТЭГ) и электрокоагулограммы (ЭКоГ). Для постановки лабораторных тестов использовали богатую тромбоцитами плазму, полученную после центрифугирования цитратной крови при 1000 об/мин в течение 10 минут. Кровь у животных собирали в пластиковую пробирку, стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1.

Для оценки коагуляционного потенциала крови определяли следующие показатели: время рекальцификации плазмы (Bergerhof, Roka, 1954); силиконовое время свертывания плазмы крови (Beller F.K., Graeff Н., 1971); каолиновое время

богатой и бедной тромбоцитами плазмы (Rabiner S.F., Hrodek О., 1968); активированное парциальное тромбопластиновое время (Caen J. et al., 1968); протромбиновое время богатой и бедной тромбоцитами плазмы (Quick A. J., 1935); тромбиновое время (Biggs R.M., Macfarlam R.G., 1962); количество фибриногена в крови (Рутберг P.A., 1961). Состояние антикоагулянтного звена системы гемостаза оценивали по активности антитромбина-III (Kuick, Schwic, 1965) и уровню гепарина (Beaumont J.L., 1953).

Для выяснения состояния фибринолитической активности крови использовали тесты по определению суммарной фибринолитической активности (Astrup T., MullertzS., 1952), плазминовой активности (Astrup T., Mullertz S., 1952), активности активаторов плазминогена (Lassen M., 1952), антиплазминовой активности (метод ВИх в модификации В.Ф. Киричука, 1977). Продукты паракоагуляции определяли по содержанию в крови фибриногена В (Gummine H., Lyons R.N., 1948), этаноловому (Godai H.С. et al., 1966) и протаминсульфатному тестам (Lipinski В., Worowski К., 1968).

Изучение функциональной активности тромбоцитов проводили традиционным методом (Born G.V.R., 1962) и с использованием экстраклеточного матрикса (ЭКМ). Для этих исследований кровь забирали в условиях силиконирования из брюшной аорты наркотизированных нембуталом (40 мг/кг). крыс. Полученную кровь стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1.

Исследование агрегационной способности тромбоцитов проводили с помощью лазерного анализатора агрегации тромбоцитов "BIOLA Ltd". В качестве индуктора агрегации использовали АДФ (фирмы "Биохиммак") в концентрации 2,5 мкМ. При обработке агрегатограмм определялись следующие показатели: максимальная амплитуда агрегации, время достижения максимальной амплитуды агрегации, скорость агрегации, время достижения максимальной скорости агрегации. Кроме этого учитывались показатели, характеризующие размер и скорость образования агрегатов: максимальный радиус агрегатов, время достижения агрегатами максимального размера, скорость образования агрегатов максимального размера, время достижения максимальной скорости arpera тообразования.

Для изучения адгезивной и агрегационной способности тромбоцитов на экстраклеточном матриксе использовали кровь здоровых доноров или крыс. Забор крови у доноров осуществляли из кубитальной вены. Платы с ЭКМ, представляющим собой комплекс продуктов, вырабатываемых эндотелиальными клетками роговицы быка, были изготовлены в лаборатории проф. Naphtali Savion (Tel-Aviv University, School of Medicine, Israel). Платы с биоматериалом (кровью, плазмой) инкубировали на шейкере в осцилляторных условиях в течение 30 минут. Адгезированные на ЭКМ тромбоциты окрашивали красителем May-Grunwald. При микроскопии в проходящем свете наблюдали адгезированные тромбоциты и агрегаты непосредственно на дне лунок. Окрашенные тромбоциты и агрегаты изучали с помощью имидж-анализатора "Bioscan". При оценке адгезивной и агрегационной активности тромбоцитов строили гистограммы распределения объектов, осевших на ЭКМ, по размеру. Все объекты были разделены на одиночные тромбоциты и агрегаты. Одиночными тромбоцитами считали объекты размером (площадью) от 1 до 7 мкм2 (Гусейнов Ч.С., 1971; Бондарцев П.Д., 1990), а агрегатами - объекты размером от 7,1 до 49 мкм2. Одиночные тромбоциты разделяли по размеру (площади) на 3 группы: мелкие (1-3 мкм2), средние (3,1-5 мкм2) и крупные 5,1-7 мкм2), а тромбоцитарные агрегаты разделяли на 4 класса (I - 7-13; II -13,1 -19; III - 19,1 -25; IV - 25,1 -49 мкм2).

Результаты всех серий экспериментов обрабатывали статистически обычным и разностным методами с использованием t-критерия Стьюдента. Все расчеты проводили с помощью специальных программ на ЭВМ IBM-PC/AT.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние излучения гелий-неонового лазера на коагуляционный потенциал плазмы крови при ее облучении in vitro

Первым этапом нашего исследования явилось выяснение принципиальной возможности влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на компоненты системы гемостаза при облучении богатой тромбоцитами плазмы крови в условиях in vitro. Была использована плазма крови 65 самцов беспородных белых крыс.

Проведенные исследования показали, что после 15- минутного лазерного облучения плазмы крови in vitro наблюдается стимуляция контактной фазы активации процесса свертывания рекальцифицированной цитратной плазмы на поверхности стекла (р<0,05). Уровень фибриногена в плазме после облучения остается неизменным (р>0,5). Однако в облученных образцах плазмы крови выявляется фибриноген В в 100%, тогда как в контрольных образцах плазмы крови он присутствует в 20% случаев. Достоверно укорачивается тромбиновое время (р<0,05), что, по-видимому, связано со снижением активности плазменного антитромбина-III (р<0,05). После лазерного облучения достоверно возрастают суммарная фибринолитическая активность плазмы (р<0,05), активность плазмина (р<0,01) и снижается антиплазминовая активность (р<0,01).

Лазерное облучение плазмы крови не оказывает существенного влияния на участие в процессе свертывания плазмы тромбоцитарных факторов, о чем свидетельствуют отсутствие изменений индекса тромбоцитарной активности (р>0,2) и активности 3-го тромбоцитарного фактора (р>0,5).

Влияние излучения гелий-неонового лазера на функцию тромбоцитов при облучении плазмы крови in vitro

Использование только биохимических тестов не вполне адекватно для всесторонней оценки функции тромбоцитов. Важным фактором регуляции функции тромбоцитов в естественных условиях являются биологически активные продукты, вырабатываемые сосудистым эндотелием и контактирующие с тромбоцитами при обнажении субэндотелиальной поверхности.

Учитывая этот факт, далее, для более детального изучения влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на функциональную активность тромбоцитов, нами были проведены серии экспериментов по облучению обогащенной тромбоцитами плазмы в условиях in vitro в течении 5, 15 и 30 минут с последующим изучением поведения тромбоцитов на ЭКМ. Для исследования была использована плазма крови 10 здоровых доноров.

После облучения богатой тромбоцитами плазмы крови в течение 5 минут в 80% экспериментов площадь, занимаемая адгезированными объектами, статистически достоверно увеличивалась в среднем на 271% (р<0,05) по сравнению с необлученной плазмой. Изменялось процентное соотношение между группами тромбоцитов различного размера. Так, на 26,3 % по сравнению с контролем уменьшалось количество кровяных пластинок малого размера (р<0,05), и на 44% (р<0,02) увеличивалось количество тромбоцитов среднего размера. Следовательно, при 5-минутном лазерном облучении плазмы в условиях in vitro происходит увеличение размера кровяных пластинок.

После лазерного воздействия в течение 15 минут отмечается отчетливая тенденция к увеличению количества объектов, осевших на ЭКМ: в

90% случаев их число увеличивается и превышает количество объектов в контрольной группе в среднем на 119% (р>0,05), что свидетельствует о повышении адгезивной активности тромбоцитов. Площадь, занимаемая адгезированными объектами, в 90% случаев увеличивается на 203% (р<0,02) по сравнению с контролем. Количество кровяных пластинок малого размера после лазерного воздействия уменьшается на 27% (р<0,02), на 39% увеличивается количество пластинок среднего размера (р<0,02), количество крупных тромбоцитов увеличивается на 73% (р<0,02). Следовательно, 15-минутное облучение плазмы гелий-неоновым лазером в условиях in vitro сопровождается повышением адгезивной активности тромбоцитов. Наряду с этим отмечается увеличение размера одиночных пластинок.

При облучении плазмы светом He-Ne лазера в условиях in vitro в течение 30 минут количество объектов, адгезированных на ЭКМ , не отличается от контроля (р>0,5). Однако, изменяется процентное соотношение тромбоцитов и тромбоцитарных агрегатов: количество одиночных тромбоцитов уменьшается до 77% (р<0,001) и до 23% (р<0,001) увеличивается количество агрегатов, по сравнению с необлученной плазмой. Количество пластинок малого размера уменьшается на 26,6% (р<0,01) по сравнению с контролем, на 50,5% (р<0,05) увеличивается количество пластинок среднего размера, тогда как количество тромбоцитов крупного размера не отличается от контроля. Статистически достоверно увеличивается площадь, занимаемая тромбоцитарными агрегатами (р<0,02). При этом происходит изменение процентного соотношения между площадью занимаемой пластинками и их агрегатами. Так, площадь, занимаемая одиночными пластинками, уменьшается до 64% (р<0,001), тогда как площадь, занимаемая агрегатами, увеличивается до 36% (р<0,001). Следовательно, при 30-минутном облучении плазмы крови гелий-неоновым лазером в условиях in vitro происходит увеличение агрегационной активности тромбоцитов, что проявляется увеличением количества тромбоцитарных агрегатов и занимаемой ими площади.

Резюмируя результаты, представленные в данном разделе, можно отметить, что облучение плазмы крови светом гелий-неонового лазера приводит, с одной стороны, к повышению ее коагуляционного потенциала за счет увеличения активности тромбина и снижения активности антитромбина-III, а с другой -вызывает активацию системы фибринолиза. Облучение плазмы крови гелий-неоновым лазером в условиях in vitro сопровождается увеличением адгезивной и агрегационной активности тромбоцитов. Этот эффект является дозозависимым.

Изменение коагуляционного потенциала крови при 5-мш!утном иммобилизационном стрессе

Известно, что стресс существенно изменяет функцию системы гемостаза. Характер и степень развивающихся нарушений различны в зависимости от природы стрессорного агента, его силы и длительности воздействия (Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н, 1986; Фурдуй Ф.И., 1986). Иммобилизационный стресс вызывали путем жесткой иммобилизации животных в положении на спине в течение 5 минут. Исследования выполнены на 75 беспородных белых крысах-самцах. На ТЭГ стрессированных животных выявлено уменьшение линейных показателей: константы тотального свертывания (р<0,001), константы свертывания крови (р<0,01), константы синерезиса р<0,001), что указывает на ускорение процесса свертывания крови.

При проведении биохимических тестов плазмы наблюдается ускорение процесса коагуляции при стимуляции контактной фазы свертывания каолином (р<0,02). После 5-минутного иммобилизационного стресса отмечается укорочение времени свертывания цитратной плазмы в условиях

стандартизации контактной и фосфолипидной активности (АПТВ, р<0,001), что свидетельствует об усилении процессов свертывания по внутреннему механизму активации. Параллельно отмечается увеличение индекса тромбоцитарной активности (р<0,001), что указывает на возрастание функциональной активности тромбоцитов. Увеличение активности антитромбина-Ш (р<0,05),

свидетельствует о стимулирующем влиянии стресса на антикоагулянтное звено системы гемостаза. Изменения в фибринолитической системе характеризуются лишь тенденцией к увеличению активности активаторов плазминогена (р>0,05).

Следовательно, при 5-минутном иммобилизационном стрессе, наблюдается повышение тромбопластических свойств плазмы крови, увеличение скорости формирования фибринового сгустка, а также стимуляция функциональной активности тромбоцитов, активация антикоагулянтного и фибринолитического звеньев системы гемостаза.

Изменение коагуляционного потенциала крови при кратковременном иммобилизационно-звуковом стрессе

Исследования выполнены на 60 беспородных белых крысах-самцах. Стресс вызывали путем действия интенсивного звукового раздражителя (120 дБ, 150-500 Гц) на жестко иммобилизованное животное в течение 2 минут. Кратковременность действия стрессора позволяла выявить изменения в системе гемостаза, возникающие на ранних этапах формирования стрессорного ответа.

При анализе тромбоэластограмм обращает на себя внимание достоверное уменьшение константы тотального свертывания (р<0,001), константы свертывания крови (р<0,001) и константы синерезиса (р<0,001), характеризующих процесс образования фибринового сгустка и начало его ретракции. На электрокоагулограмме при остром комбинированном стрессе достоверно увеличивается лишь скорость свертывания (р<0,02), что подтверждает усиление процессов гемокоагуляции.

Комбинированное действие звука и иммобилизации в течение 2-х минут вызывает также усиление процессов плазмокоагуляции. Так, укорачивается время рекальцификации в силиконированных (р<0,001) и несиликонированных пробирках (р<0,001), каолиновое время богатой тромбоцитами плазмы (р<0,001) и активированное парциальное тромбопластиновое время (р<0,01), что свидетельствует об усилении процессов свертывания по внутреннему механизму активации. Достоверное увеличение индексов тромбоцитарной активности (р<0,01) и активности 3-го тромбоцитарного фактора (р<0,001) указывает на возрастание в условиях данной модели стресса коагуляционного потенциала тромбоцитов. Обращает на себя внимание укорочение тромбинового времени (р<0,02), при одновременном увеличении содержания фибриногена (р<0,01) в плазме. Наблюдаются изменения в антикоагулянтном звене: повышается содержание плазменного гепарина (р<0,05) при неизменном количестве антитромбина-Ш (р<0,2). Комбинированный 2-минутный стресс сопровождается достоверным увеличением суммарной фибринолитической активности (р<0,05).

Следовательно, кратковременное стрессорное воздействие оказывает существенное влияние на систему гемостаза, что выражается в активации коагуляционного потенциала плазмы и цельной крови, увеличении протромбиназной активности, повышении скорости образования фибринового сгустка. Отмечается увеличение фибринолитической и антикоагулянтной активности крови. Обращает на себя внимание возрастание функциональной активности тромбоцитов, о чем свидетельствуют повышение активности 3-го тромбоцитарного фактора и индекса тромбоцитарной активности. 8

Влияние гелин-неонового лазерного излучения на коагуляционнын

гемостаз при кратковременном иммобилизационно-звуковом стрессе

С целью изучения возможности коррекции (или модификации) стрессорных изменений с помощью низкоинтенсивного лазерного излучения мы провели транскутанное облучение Не-Ые лазером одновременно с действием стрессорным. Это давало возможность исследовать влияние лазерного излучения на механизмы, участвующие в формировании раннего стрессорного ответа (стресс-реализующие механизмы).

На ТЭГ при действии лазерного облучения выявляется удлинение линейных параметров, укороченных при стрессе: константы тотального свертывания (р<0,01), константы свертывания (р<0,01), константы синерезиса (р<0,01). На электрокоагулограмме при действии лазера увеличивается время свертывания крови Тг (р<0,02), что свидетельствует о тенденции к гипокоагуляции.

По данным лабораторных методов исследований системы гемостаза после лазерного облучения не выявляется типичного для стресса укорочения времени рекальцификации в силиконированных и несиликонированных пробирках, каолинового времени богатой тромбоцитами плазмы. Снижается индекс тромбоцитарной активности (р<0,05). Действие лазерного излучения сопровождается изменениями в антикоагулянтном звене системы гемостаза, которые характеризуются увеличением активности антитромбина-Ш в плазме (р<0,001) при тенденции к снижению количества гепарина (р>0,05). Транскутанное лазерное облучение во время стрессорного воздействия препятствует развитию изменений в системе фибринолиза, типичных для данной формы стресса.

Следовательно, лазерное облучение в значительной мере предотвращает гиперкоагуляционный эффект, формирующийся на ранних этапах стресса, что, возможно, обусловлено торможением освобождения фосфолипидных компонентов из мембран тромбоцитов, снижением активности протромбиназы и замедлением скорости формирования фибринового сгустка. Наряду с этим при действии лазера наблюдается стимуляция антикоагулянтного звена системы гемостаза и фибринолитической активности плазмы крови.

Изучение тромбоцитарной активности при кратковременном иммобилизационно-звуковом стрессе

В исследованиях, выполненных на богатой тромбоцитами плазме 20-и беспородных белых крыс с использованием АДФ (2,5 мкМ) в качестве индуктора агрегации, установлено, что при 2-х минутном комбинированном иммобилизационно-звуковом стрессе происходит увеличение максимальной скорости агрегации на 127% (р<0,02), увеличивается максимальный размер тромбоцитарных агрегатов на 68% (р<0,01) и на 95% возрастает максимальная скорость образования тромбоцитарных агрегатов максимального размера (р<0,01).

Для изучения адгезивной активности тромбоцитов на ЭКМ была использована обогащенная тромбоцитами плазма крови 20 животных. При 2-х минутном действии стрессорного агента происходит усиление адгезивной

активности тромбоцитов. Так, количество объектов, осевших на матриксе, увеличивается по сравнению с контролем на 90% (р<0,001), причем возрастает как количество одиночных тромбоцитов (на 82%, р<0,02), так и тромбоцитарных агрегатов (на 83%, р<0,01). Площадь, занимаемая фиксированными объектами, увеличивается на 76% (р<0,001), что сопровождается увеличением площади, занимаемой тромбоцитами, на 82% (р<0,02) и агрегатами на 71% (р<0,05). Остается неизменным процентное соотношение между площадью, занимаемой одиночными тромбоцитами (53%), и площадью, занимаемой агрегатами (47%). В то же время процентное соотношение между количеством одиночных тромбоцитов и их агрегатов не отличается от контроля и составляет соответственно 82% и 18%. Среди одиночных тромбоцитов в наибольшей степени увеличивается количество тромбоцитов среднего и крупного размера (р<0,01). Наблюдается тенденция к увеличению количества мелких тромбоцитов (р>0,05). Процентное соотношение между представленными группами одиночных тромбоцитов не отличается от контроля. Вместе с тем при стрессе почти в 2 раза увеличивается количество мелких тромбоцитарных агрегатов (р<0,01).

Таким образом, при кратковременном стрессорном воздействии наблюдается активация коагуляционного потенциала плазмы и цельной крови, повышение протромбиназной активности и скорости образования фибринового сгустка, изменение фибринолитической и антикоагулянтной активности плазмы. О стимуляции тромбоцитов при кратковременном стрессе свидетельствует повышение активности тромбоцитарных факторов и индекса тромбоцитарной активности. Исследования агрегационной активности тромбоцитов при АДФ-индуцируемой агрегации указывают на повышение агрегационных свойств тромбоцитов при стрессе и увеличение размера образующихся агрегатов. При исследовании функциональной активности тромбоцитов на ЭКМ отмечается активация адгезивной активности тромбоцитов.

Влияние лазерного излучения на тромбоцитарную активность при кратковременном нммобилизационно-звуковом стрессе

Опыты на 10 беспородных белых крысах показали, что проводимое одновременно с действием стрессорного агента транскутанное облучение экспериментальных животных гелий-неоновым лазером сопровождается уменьшением максимальной скорости АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов (р<0,001).

Опыты на 10 беспородных белых крысах показали, что при лазерном облучении, проведенном одновременно с действием стрессорного агента, наблюдается почти 8-кратное уменьшение, по сравнению со стрессом без облучения, количества объектов, фиксированных на ЭКМ (р<0,001), за счет уменьшения количества одиночных пластинок на 89% (р<0,001) и агрегатов на 90% (р<0,001). Площадь, занимаемая объектами, уменьшается по сравнению со стрессом на 90% (р<0,001), за счет уменьшения площади, занимаемой одиночными тромбоцитами на 89%, и агрегатами на 89% (р<0,001). Процентное соотношение между пластинками и агрегатами не отличается от контроля и стресса (соответственно 82% и 18%). В одинаковой степени уменьшается количество одиночных тромбоцитов во всех группах (р<0,001). По сравнению со стрессом без облучения уменьшается количество тромбоцитарных агрегатов в первых трех группах.

Таким образом, после проведенного параллельно со стрессом облучения экспериментальных животных гелий-неоновым лазером отмечается уменьшение коагуляционной активности крови и плазмы, снижение активности протромбиназы и скорости образования фибринового сгустка.

Наряду с этим происходит активация антикоагулянтного звена гемостаза и фибринолитической активности. Снижается скорость АДФ-индуцируемой агрегации и тормозится адгезия тромбоцитов наЭКМ, стимулированная в условиях стресса.

Изменение коагуляционного потенциала крови при патологическом стрессе

В сериях экспериментов, результаты которых приводятся в настоящем разделе, использована модель патологического стресса, возникающего при действии прерывистого звукового сигнала на жестко иммобилизованных животных в течение 2 часов. Результатом этого стрессорного воздействия является развитие ишемических и геморрагических изменений в мозге и миокарде (Романова Т.П., 1989), что является явным доказательством патологического характера стресса.

Исследования, описываемые в данном разделе, проведены на 70 самцах беспородных белых крыс. Установлено, что в условиях стресса достоверно изменяются линейные параметры ТЭГ, отражающие процесс формирования фибринового сгустка и начало его ретракции: уменьшаются константа тотального свертывания (р<0,02), константа свертывания крови (р<0,05) и константа синерезиса (р<0,02). Отмечается увеличение тромбодинамического показателя синерезиса (р<0,001). На электрокоагулограмме (ЭКоГ) при патологическом стрессе достоверно уменьшается время свертывания крови Тг (р<0,05).

По данным лабораторных исследований, выполненных на

рекальцифицированной цитратной плазме, у белых крыс после стрессорного воздействия отмечается усиление процессов свертывания крови при стимуляции контактной фазы активации плазменных факторов каолином (р<0,01), а также наблюдается тенденция к укорочению времени рекальцификации цитратной плазмы в силиконированных (р>0,05) и несиликонированных (р>0,05) пробирках. Однако индекс диапазона контактной активации при стрессе существенно не изменяется (р>0,2), что свидетельствует об отсутствии активации протромбиназы по внутреннему пути ее формирования. Укорочение протромбинового времени богатой тромбоцитами плазмы (р<0,001), а также увеличение протромбинового индекса (р<0,05) указывают на активацию при стрессе протромбиназы по внешнему механизму ее образования. После стресса у крыс отмечено снижение концентрации фибриногена в крови (р<0,001), что, по-видимому, связано с его повышенным расходованием в результате стимуляции процесса коагуляции. При этом тромбиновое время имеет тенденцию к укорочению (р>0,05). Заметно активируется образование фибрин-мономерных комплексов, о чем свидетельствует присутствие в плазме крови фибриногена В. Отмечается повышение уровня гепарина (р<0,001). Изменения в фибринолитическом звене при стрессе характеризуются снижением антиплазминовой активности (р<0,001). Стрессорное воздействие не оказывает влияния на степень активации коагуляционного потенциала тромбоцитов, о чем свидетельствует отсутствие изменений индекса тромбоцитарной активности (р>0,5), активности 3-го тромбоцитарного фактора (р>0,5), а также независимость от количества тромбоцитов степени активации процесса свертывания каолином.

Таким образом, патологический комбинированный иммобилизационно-звуковой стресс вызывает отчетливое усиление процессов гемокоагуляции, что подтверждается активацией протромбиназы по внешнему механизму ее образования, а также активацией антикоагулянтного звена системы гемостаза.

Влияние гелий-неонового лазерного излучения на коагуляционный гемостаз при патологическом стрессе

С целью профилактики изменений гемокоагуляции, возникающих при патологическом стрессе, нами апробировано транскутанное облучение животных светом гелий-неонового лазера. В экспериментах использовали 35 белых беспородных крыс-самцов. Лазерное облучение проводили за 15 минут до моделирования стресса.

Опыты показали, что после предварительного лазерного облучения на ТЭГ уменьшается константа свертывания крови (р<0,001), характеризующая период уплотнения сгустка. На ЭКоГ уменьшается скорость свертывания крови (р<0,05), возрастает время конца (р<0,01) свертывания крови.

Лазерное облучение предотвращает индуцированное стрессом уменьшение времени рекальцификации плазмы при контактной активации свертывания каолином (р<0,05). При этом, по сравнению со стрессом без лазерного облучения, достоверно возрастает время свертывания в силиконированных (р<0,01) и несиликонированных пробирках (р<0,05). Обращает на себя внимание достоверное снижение, по сравнению с контролем, индекса тромбоцитарной активности (р<0,05) и активности 3-го тромбоцитарного фактора (р<0,05). Следствием предварительного лазерного облучения является нормализация потребления плазменного фибриногена (р>0,5). Однако, как и при стрессе без лазерного облучения, в плазме крови присутствует фибриноген В. В то же время у облученных животных заметно снижается активность антитромбина-Ш (р<0,001), но, возможно компенсаторно, повышается уровень плазменного гепарина (р<0,001).

Предварительное транскутанное лазерное воздействие приводит к отчетливым изменениям в системе фибринолиза. Так, достоверно возрастают по сравнению с контролем суммарная фибринолитическая (р<0,01) и плазминовая активность плазмы (р<0,001). Антиплазминовая активность (р<0,001), как и при стрессорном воздействии, снижается.

Следовательно, предварительное транскутанное облучение животных светом гелий-неонового лазера в значительной мере предотвращает гиперкоагуляционный эффект патологического стресса. Протективное действие низкоинтенсивного лазерного излучения при стрессорной гиперкоагуляции обусловлено стабилизацией протромбиназы, торможением освобождения фосфолипидных компонентов из мембран тромбоцитов, а также активацией системы фибринолиза.

Изменение функции тромбоцитов при патологическом стрессе

Исследования проводились на богатой тромбоцитами плазме крови 20 самцов белых крыс. В опытах с использованием лазерного агрегометра при изучении АДФ-индуцированной агрегации установлено, что при 2 часовом патологическом стрессе на 217% возрастает максимальная амплитуда агрегации тромбоцитов (р<0,001) и максимальная скорость агрегации кровяных пластинок возрастает в среднем на 258% (р<0,001). Максимальный размер агрегатов тромбоцитов увеличивается па 102% (р<0,001) и на 159% возрастает максимальная скорость увеличения размеров агрегатов тромбоцитов (р<0,001). Для исследования на ЭКМ была использована кровь 20 самцов беспородных белых крыс. После патологического стресса количество объектов, адгезированных на экстраклеточном матриксе, увеличивается по сравнению с контролем на 793% (р<0,001), за счет увеличения количества как одиночных тромбоцитов на 759% (р<0,01), так и их агрегатов на 913% (р<0,01). Увеличение количества объектов при стрессе сопровождается увеличением занимаемой ими площади на 846% (р<0,001), за счет увеличения как площади, 12

занимаемой тромбоцитами - на 545% (р<0,001), так и их агрегатами - на 1093% (р<0,02). Процентное соотношение кровяных пластинок и тромбоцитарных агрегатов не отличается от контроля. Количество одиночных тромбоцитов увеличивается во всех трех группах (р<0,01). Процентное распределение одиночных тромбоцитов по размеру в 3-х группах не отличается от контроля. Заметно увеличивается количество тромбоцитарных агрегатов в первой (р<0,01), второй (р<0,01), и несколько возрастает в третьей группе (р>0,05). Процентное соотношение между тромбоцитарными агрегатами различных размеров не отличается от контроля. Не претерпевает изменений и средний размер образующихся тромбоцитарных агрегатов при патологическом стрессе.

Таким образом, при патологическом стрессе повышается адгезивная и агрегационная активность тромбоцитов.

Влияние гелий-неонового лазерного излучения на функцию тромбоцитов при патологическом стрессе

Предварительное 15-минутное транскутанное воздействие светом гелий-неонового лазера вызывает снижение максимальной амплитуды АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов на 44% (р<0,01), а также скорости максимальной агрегации на 35% (р<0,01), по сравнению с группой стрессированных, но необлученных животных. При этом не изменяются максимальный размер агрегатов и максимальная скорость их образования.

В экспериментах на 10 беспородных белых крысах установлено, что проводимое непосредственно перед стрессом транскутанное облучение гелий-неоновым лазером не оказывает заметного влияния на агрегационную и адгезивную активность тромбоцитов. Так, количество объектов, адгезированных на ЭКМ, не отличается от серии опытов со стрессом без облучения (р>0,2). Остается повышенным по сравнению с интактными животными как число одиночных тромбоцитов (на 1120%, р<0,01), так и количество агрегатов (на 870%, р<0,001). Площадь, занимаемая фиксированными на ЭКМ объектами, не отличается от площади, занимаемой объектами в образцах плазмы стрессированных животных и остается больше контроля на 941% (р<0,001), за счет увеличения площади тромбоцитов - на 1016% (р<0,001) и их агрегатов - на 870% (р<0,02). Процентное соотношение между площадью, занимаемой пластинками (56%) и их агрегатами (44%) не отличается от контроля и стресса без облучения. При этом процентное соотношение тромбоцитов и агрегатов сохраняется таким же, как у животных со стрессом и в контрольной группе, и равно соответственно 82% и 18%. Количество одиночных пластинок различного размера после лазерного облучения экспериментальных животных не претерпевает существенных изменений и достоверно отличается от контроля (р<0,05). При этом не изменяется процентное распределение одиночных тромбоцитов по размеру в трех группах. Количество агрегатов различных групп (по размеру) не отличается от стресса без облучения. При этом процентное соотношение между группами тромбоцитарных агрегатов различного размера и средний размер тромбоцитарных агрегатов не отличаются от аналогичных параметров в группе стрессированных.

Следовательно, проводимое непосредственно перед стрессорным воздействием транскутанное лазерное облучение не оказывает заметного влияния на свойства тромбоцитов при их взаимодействии с ЭКМ.

Представляет интерес кажущееся несоответствие результатов, полученных при изучении агрегации тромбоцитов на ЭКМ и с помощью лазерного агрегометра. Оценивая эти результаты следует иметь в виду, что в данном случае речь идет о действии различных индукторов агрегации, реагирующих с различными рецепторными системами тромбоцитов и

включающими различные внутриклеточные механизмы сопряжения, приводящие в конечном итоге к агрегации пластинок. Действительно, в опытах на агрегометре в качестве агреганта используется классический индуктор - АДФ. В составе ЭКМ наряду с данным индуктором, освобождаемым из пластинок, процесс инициируется целым комплексом биологически активных продуктов, вырабатываемых сосудистым эндотелием - коллаген (разные типы), фактор Виллебранда, фибронектин, фибриноген и др. Поскольку под влиянием гелий-неонового лазерного излучения изменяется только реакция на АДФ (стимулированная стрессом), можно полагать, что изменение специфически затрагивает только рецепторные зоны мембраны тромбоцита, обеспечивающие ответ на данный индуктор.

Подводя итог проведенной работе в целом можно отметить, что как на ранних этапах стресса (в период запуска стресс-реализующих механизмов), так и при более длительном патологическом стрессе, сопровождающемся грубыми структурными изменениями в сердце и мозге, наблюдается отчетливое усиление процессов гемокоагуляции, имеющее, однако, свои специфические особенности при каждой модели стресса. Гелий-неоновое лазерное облучение, проводимое одновременно с действием стрессорного фактора (2-минутный стресс), препятствует развитию ранних изменений в системе гемостаза. Предварительное транскутанное лазерное облучение при патологическом стрессе оказывает протективное действие, препятствуя формированию гиперкоагуляционного сдвига.

ВЫВОДЫ

1. Облучение обогащенной тромбоцитами плазмы крови гелий-неоновым лазером в условиях in vitro сопровождается повышением коагуляционного потенциала, увеличением активности тромбина, стимуляцией образования фибриногена В, снижением активности антитромбина-III и активацией системы фибринолиза.

2. Облучение обогащенной тромбоцитами плазмы крови in vitro гелий-неоновым лазером приводит к стимуляции адгезии и агрегации тромбоцитов на экстраклеточном матриксе и увеличению размера одиночных пластинок. Эти эффекты зависят от дозы лазерного облучения.

3. При кратковременном иммобилизационном и иммобилизационно-звуковом стрессе в период запуска стресс-реализующих систем происходит активация гемокоагуляции по внутреннему механизму и стимуляция фибринолитической системы. При комбинированном стрессе повышается содержание плазменного гепарина, возрастают индексы тромбоцитарной активности, увеличивается амплитуда и скорость АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов, а также стимулируется адгезия пластинок на экстраклеточном матриксе.

4. Транскутанное облучение гелий-неоновым лазером на фоне кратковременного комбинированного стресса препятствует формированию ранних стрессорных изменений гемокоагуляции и фибринолиза, угнетает АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов и уменьшает адгезию кровяных пластинок на экстраклеточном матриксе.

5. При патологическом иммобилизационно-звуковом стрессе повышается коагуляционный потенциал крови за счет активации протромбиназы по внешнему механизму. В плазме крови снижается содержание фибриногена и увеличивается уровень фибриногена В, повышается содержание гепарина и снижается активность антиплазмина. Возрастает максимальная амплитуда и скорость АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. Стимулируется адгезия кровяных пластинок на экстраклеточном матриксе.

14

6. Предварительное транскутанное облучение гелий-неоновым лазером препятствует формированию гиперкоагуляционного сдвига при патологическом стрессе, нормализуя потребление плазменного фибриногена. В плазме крови снижается активность антитромбина-III и возрастает содержание гепарина, повышается суммарная фибринолитическая и плазминовая активность. После лазерного облучения тормозится стимулированная при стрессе АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов.

Работы, опубликованные по теме диссертации

1. Влияние чрезкожного лазерного воздействия на гемокоагуляцию // Новое в лазерной медицине. Тез. докл. международн. конф. - Москва, 1991. - С.82 (Соавт. Брилль Г.Е., Исакова P.M., Шведова Р.Ф.).

2. Модификация стрессорных изменений гемостаза низкоинтенсивным лазерным излучением // Низкоинтенсивные лазеры в эксперименте и клинике. -Саратов, 1992. - С. 23-26. (Соавт. Брилль Г.Е., Мартынов JI.A., Шведова Р.Ф.).

3. Влияние излучения гелий-неонового лазера на стрессорные изменения гемостаза // Лазерная и магнитная терапия в экспериментальных и клинических исследованиях. Тез. докл. - Обнинск, 1993. - С. 12 - 13 (Соавт. Брилль Г.Е., Мартынов Л.А., Шведова Р.Ф.).

4. Влияние излучения гелий-неонового лазера на стрессорные изменения гемокоагуляции // Новые достижения лазерной медицины. Тез. докл. международн. конф. - Москва-С.-Петербург, 1993. - С. 248 - 249 (Соавт. Брилль Г.Е., Мартынов Л.А., Шведова Р.Ф.).

5. Возможность предотвращения стрессорных нарушений гемостаза низкоинтенсивным лазерным излучением // Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза. - Полтава, 1993. - С. 19. (Соавт. Брилль Г.Е., Мартынов Л.А., Шведова Р.Ф.).

6. Предупреждение гиперкоагуляционного эффекта комбинированного стресса гелий-неоновым лазерным облучением // Применение лазеров в медицине и биологии. Тез. докл. 3-й научно-практич. конф. - Ялта, 1994. - С. 11 - 13. (Соавт. Брилль Г.Е., Мартынов Л.А.).

7. Изучение влияния гелий-неонового лазера на систему гемокоагуляции при комбинированном стрессе // Актуальные вопросы лазерной медицины и операционной эндоскопии. Тез. докл. 3-й междунар. конф. - Москва - Видное, 1994. -С. 408 - 409 (Соавт. Брилль Г.Е., Киричук В.Ф., Мартынов Л.А., Шведова Р.Ф.).

8. Влияние чрескожного лазерного облучения крови на состояние системы гемостаза при экспериментальном нефрите у крыс // Применение лазеров в медицине и биологии. Тез. докл. 3-й научно-практич. конф. - Ялта, 1994. - С. 17 - 18. (Соавт. Утц И.А., Григорьев С.Н., Шведова Р.Ф.).

9. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на изменения гемокоагуляции при комбинированном остром стрессе // Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике. - Саратов, 1994. - С. 37-43. (Соавт. Брилль Г.Е., Киричук В.Ф., Мартынов Л.А., Брилль А.Г.).

10. Влияние низкоэнергетического лазерного излучения на фибринолитическую активность при стрессе // Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий. Тез. докл. Междунар. конф. - Москва-Казань, 1995. - С. 273 - 274 (Соавт. Брилль Г.Е., Киричук В.Ф.).

11. The influence of low power laser irradiation on haemocoagulation system in different of stress // 17 Междунар. Регион, симпоз. по реологии. Тез. докл. - Саратов, 1994. - С. 141. (Brill G.E., Kiritchuk V.F., Martinov L.A.).

12. Preventive action of low power laser irradiation on hemocoagulation disturbances in pathological stress II Laser in Medicine and Surgery, 1995. - Vol. 11, № 2. -P. 108. (G.E.Brill, V.F. Kiritchuk, L.A. Martinov).

| 13. Changes of coagulation and fibrinolysis parameters of blood plasma

irradiated by helium-neon laser in vitro // Thrombosis and Haemostasis. XVth Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis, Jerusalem, Israel, 1995. - P. 2147. (G.E.Brill, V.F. Kiritchuk, A. G. Brill).

14. The influence of He-Ne laser irradiation on hemocoagulation and fibrinolytic activity in stress // Light and Biological Systems. International conf., Wroclaw, Poland, 1995. - P. 65. (G.E.Brill, V.F. Kiritchuk).

15. Laser modification of stress-induced changes of haemostasis // Ege University Faculty of Medicine 1st International Student Congress of Medical Sciences, Izmir, Turkey, 1994. - P. 22. (A. G. Brill).

16. Modification of early changes in hemocoagulation by low power laser radiation in short-term stress // 5th Congress of the Asian-Pacific Association for Laser Medicine and Surgery, Tel Aviv, 1994. - P.19.(G.E. Brill, V.F. Kiritchuk, L.A. Martinov, A.G. Brill).

17. Change of platelet adhesion and aggregation in pathological stress and after preliminary laser irradiation // Sixth World Congress for Microcirculation, Munich, Germany, 1996. - P. 181 (G.E. Brill, V.F. Kiritchuk, T.V. Stepanova).

18. Biological active substances of neutrophils as possible inductors of platelet aggregation in pathological stress // 4th European Symposium on Platelet and Granulocyte Immunobiology, Hameenlina, Finland, 1996. (G.E. Brill, T.V. Stepanova, G.A. Dobrovolsky, T.P. Romanova, S.G. Porozova).

19. Influence of He-Ne laser irradiation on platelet deposition on extracellular matrix // 1st Congress of the World Association for Laser Therapy, Jerusalem, Israel, 1996. - P. 64. (G.E. Brill, V.F. Kiritchuk, T.V. Stepanova, B. Shenkman, D. Varon).

20. Influence of low power laser irradiation on platelet aggregation in pathological stress // 1st Congress of the World Association for Laser Therapy, Jerusalem, Israel, 1996. - P. 63. (G.E. Brill, V.F. Kiritchuk, T.V. Stepanova).