Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Цитогенетическин статус лимфоцитов периферической крови у детей при инфекционном мононуклеозе

На правах рукописи

Литвинова Лариса Сергеевна

Цитогенетнческий статус лимфоцитов периферической крови у детей при инфекционном мононуклеозе

14.00.16 - патологическая физиология 14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томек-2002

Работа ныполнена в Сибирском государственном медицинском университете, и институтах медицинской генетики и фармакологии Томского научною центра Сибирского отделения Российской академии медннинских наук

Научные руководители' Заслуженный деятель науки РФ член-корреспондент РАМН, профессор

кандидат медицинских наук

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация:

Новосибирская государственная медицинская академия

Защита состоится "__"___ 2002 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 208.096.01 Сибирского государственного медицинского университета (634050, г. Томск, Московский тракт, 2).

Новицкий В.В Уразова О. И.

Дыгаи А.М. Карпова М.Р.

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (634050, г. Томск, пр. Ленина, 107).

Автореферат разослан "__" _ 2002 г.

Ученый секретарь / . / Бражникова H.A.

диссертационного совета, докггор медицинских наук, профессор

Актуальность проблемы: В связи с возросшей за последние годы частотой заболеваемости, вызываемые вирусами герпеса инфекции, в частности, инфекционный мононуклеоз (ИМ), привлекают повышенное внимание отечественных и зарубежных исследователей [Любезная Е.В., 1991; Исаков В.А., 1999].

ИМ представляет собой доброкачественное лимфопролиферативное заболевание, возбудителем которого в 90% случаев является онкогенный вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ). Кроме того, синдром мононуклеоза могут вызывать вирус простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирус (ЦМВ), Toxoplasma gondii и др. [Lewin N. et al., 1990; Derkay C.S., Bramhall T.C., 1995; Kanegane H. et al., 1995; Cozad D., 1996]. Мононуклеарная реакция крови может сопровождать течение ВИЧ-инфекции [Любезная Е.В., 1991; Баринский И.Ф. и соавт., 1994; Исаков В.А., 1999].

Установлено, что герпесвирусы могут оказывать выраженное цитоцидное воздействие на различные типы клеток системы крови, длительно персистировать в дифференцированных иммуноцитах, вызывая изменения их морфофункциональных свойств [Дранкин Д.И., Заяц Н.А., 1982; Moss D.J. et al., 1992; Anognostopoulos I. et. al., 1995; Жибурт Е.Б. и соавт., 1996; Учайкин В.Ф., 1999]. Несмотря на различия механизмов цитопатического действия отдельных вирусов, в общем оно сходно. Подавление синтеза клеточных макромолекул, истощение энергетических ресурсов инфицированных клеток, как правило, заканчивается их гибелью [Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Новиков B.C., 1996; Уманский С.Р., 1996].

Чрезвычайно важную роль в патогенезе вирусных инфекций играет апоптоз - запрограммированная «физиологическая» форма клеточной гибели. Установлено, что практически все вирусы могут индуцировать нарушения в хромосомном аппарате клеток-мишеней. Апоптоз - стандартная клеточная реакция на повреждение ДНК, направленная на элиминацию из организма генетически неполноценных клеток [Погорелов В.М., Козинец Г.И., 1995; Thompson C.B., 1995; Уманский С.Р., 1996; Ярилин А.А., 1996; 1998; Larochelle В. et al., 1998]. ВЭБ в этом отношении является уникальным вирусом, обладающим способностью инфицировать лимфоидные клетки, не разрушая их, а провоцируя к размножению на фоне угнетения процессов апоптотической гибели [Новиков B.C., 1996; Уманский С.Р., 1996; Серебряная Н.Б. и соавт., 1998; Белушкина Н.Н., 2000]. Наряду с этим, высокий уровень цитогенетических нарушений в клетках крови, их гибель при действии вирусов, в том числе ВЭБ, могут быть обусловлены отклонениями в функционировании ДНК-репаративных клеточных механизмов. Весьма важную роль играет также возраст инфицированного - определяющий фактор инфекционного мутагенеза.

Не вызывает сомнения тот факт, что наблюдающееся при ИМ подавление функциональной активности систем поддержания цитогенетической нормы, обусловленное воздействием возбудителя инфекции и наличием физиологических периодов повышенной чувствительности организма к мутагенным факторам, а также вирус-стимулированная пролиферация

лимфоцитов могут обусловливать высокий риск возникновения хромосомных аберрации и неопластической трансформации клеток [Schlossberg D., 1989; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Uehara Т. et al., 1992; Akbar A.N. et al„ 1993]. Однако несмотря на имеющиеся в литературе данные о мутагенном действии герпесвирусов, в том числе ВЭБ, сведения о частоте и характере цитогенетических нарушений при ИМ в зависимости от состояния процессов апоптоза и репарации ДНК у детей различного возраста практически отсутствуют.

Установление же механизмов нарушений цитогенетического равновесия при различных этиологических и возрастных вариантах ИМ несомненно, расширит представление о патогенезе герпесвирусных заболеваний и, вероятно, послужит основой для разработки более эффективных методов диагностики и корригирующей патогенетической терапии ИМ.

Цель исследования: Установить общие закономерности и возрастные особенности цитогенетических нарушений в лимфоцитах периферической крови (ЛПК) у детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать количественные показатели периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные фазы течения и в отдаленном периоде после заболевания;

2. Установить общие закономерности и особенности хромосомных нарушений у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызвашшм вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные периоды и в отдаленные сроки после заболевания;

3. Выявить особенности апоптоза лимфоцитов у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные фазы течения и в отдаленном периоде после заболевания;

4. Оценить особенности репаративного синтеза ДНК в лимфоцитах периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные периоды и в отдаленные сроки после заболевания;

5. Провести сравнительную оценку цитогенетических нарушений при инфекционном мононуклеозе различной этиологии у детей в зависимости от возраста и сроков обследования.

Научная новизна работы. Впервые было проведено комплексное изучение особенностей цитогенетического статуса лимфоцитов при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии с привлечением современных культуральных, гематологических и генетических методов исследования. Было

показано, что при инфекционном мононуклеозе, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии существенно увеличен уровень лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями, в основном за счет повышения количества лимфоцитов с нарушениями структуры хромосом. Кроме того, обнаруживаются лимфоциты с изменением числа хромосом, в основном гиперплоидные клетки. Установлено, что у детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии значительно повышено содержание ФГА- и ЛПС-стимулированных микроядросодержащих лимфоцитов. Показано, что у детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии наблюдается угнетение апоптоза лимфоцитов, выражающееся в снижении содержания фрагментированной ДНК и числа клеток с признаками апоптоза. Вместе с этим установлено, что у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, в возрасте 3-6 лет повышена активность эксцизионной ДНК-репарации в лимфоцитах. Полученные данные позволяют утверждать, что нарушения цитогенетического статуса, выявленные при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии, носят однонаправленный характер, а степень их выраженности не зависит от этиологического варианта инфекции и возрастных особенностей организма.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания структурно-организационные изменения хромосомного аппарата лимфоцитов носят однонаправленный, равно-выраженный характер и определяются увеличением общего количества клеток с хромосомными нарушениями, числа хромосомных нарушений на клетку, повышением содержания лимфоцитов с нарушениями структуры и числа хромосом, ФГА-и ЛПС-стимулированных клеток с микроядрами. Данные изменения сохраняются в период реконвалесценции и в отдаленные сроки после заболевания, однако у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, исчезновение из популяции лимфоцитов с измененным числом хромосом и восстановление до уровня нормы количества ФГА-активированных микроядросодержащих клеток фиксируется на более позднем этапе наблюдения, чем при инфекционном мононуклеозе другой этиологии.

2. При индукции апоптоза лимфоцитов in vitro у детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, в острый период болезни содержание фрагментированной ДНК в ядрах клеток снижается по сравнению с нормой и не восстанавливается в период реконвалесценции. В фазу клинического выздоровления у 7-14-летних детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным

мононуклеозом другой этиологии количество лимфоцитов с морфологическими признаками аиоптоза остается ниже нормы. Через 16-18 месяцев после перенесенного заболевания способность лимфоцитов к апоптозу нормализуется; 3. У детей 3-6-летнего возраста, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, регистрируется увеличение активности ДНК-репарационной системы лимфоидных клеток;

Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на Втором конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" (Томск, 2000 г.); на Всероссийской и Всеармейской научной конференции «Санкт-Петербург - Гастро-2000» (Санкт-Петербург, 2000 г.); на Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Научная молодежь на пороге XXI века» (Томск, 2000 г.); на I Всероссийской научной конференции с участием зарубежных специалистов «Актуальные проблемы эволюционной и популяционной физиологии человека» (Тюмень, 2001 г.); на научных семинарах кафедр микробиологии и патофизиологии Сибирского Государственного медицинского университета (1999-2002 гг.).

Публикации: по результатам диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 статьи - в центральной печати.

Структура: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов, обсуждения собственных результатов, выводов и списка литературы из 359 наименований, в том числе на иностранном языке - 203, а также включает в себя 17 рисунков и 9 таблиц.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под наблюдением находилось 119 детей в возрасте от 3 до 14 лет, больных инфекционным мононуклеозом (ИМ) средней степени тяжести, с острым начатом развития инфекционного процесса и гладким (неосложненным) течением. Больные были госпитализированы в инфекционное отделение 3-й городской больницы и детскую инфекционную больницу им. Г.Е. Сибирцева г. Томска. Диагноз ИМ устанавливали по клинико-гематологической картине заболевания в соответствии с классификацией A.A. Колтыпина.

Идентификацию возбудителя ИМ проводили серологическими методами: реакцией непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), методом иммуноферментного анализа (ИФА), а также методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Дети, больные ИМ, в крови которых были обнаружены маркеры ВЭБ-инфекции, были включены в группу больных ИМ, вызванным ВЭБ (ИМ-ВЭБ) -(п=55) (код В27.0 Международная классификация болезней-10 пересмотра), больные ИМ, вызванным ЦМВ (п=3), ВПГ (п=4), и ИМ неуточненной этиологии (п=57) - в группу больных ИМ другой этиологии (ДИМ) - (п=64).

Контрольную группу составили 56 условно здоровых детей (группа здоровья IIA): 19 детей в возрасте 3-6 лет и 37 детей в возрасте 7-14 лет.

Больные были обследованы в острый период болезни, в период зеконвалесценции и в отдаленный период после перенесенного заболевания через 16-18 месяцев после болезни). Распределение больных в зависимости от зозраста, сроков и методов исследования приводится в табл.1.

.Определение общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного числа их отдельных морфологических форм проводили общепринятыми гематологическими методами. Мазки для подсчета гемограмм ■отовили из лейкоконцентрата венозной крови (метод с трилоном Б) Меньшиков В.В., 1987].

Посев клеточных культур проводили по методу Е.Д. Гольдберга и соавт. 1992], обработку культур и приготовление препаратов для хромосомного шализа лимфоцитов - по методу P.S. Moorhead et al [1960]. У каждого )бследуемого анализировали 100 метафазных пластинок. Учитывали соличество клеток с нарушениями структуры (с хромосомными, хроматидными )азрывами и обменами) и изменением числа хромосом (гипер- и полиплоидные летки) (%).«Пробелы» в структуре хромосом и гипоплоидные клетки не 'читывали.

Для проведения микроядерного анализа лимфоцитов периферической :рови (ЛПК) в культуру клеток вносили ФГА ("Difco", Германия) в :онцентрации 0,01 мг/мл культуры или ЛПС Escherichia coli в той же юнцентрации с последующей инкубацией при 37°С в течение 72 ч. Результаты нализа выражали количеством клеток, содержащих микроядра (%) Ильинских H.H. и соавт., 1992].

Апоптоз лимфоцитов индуцировали in vitro с использованием солевого lacTBopa Дульбекко, не содержащего Ca+ и Mg2+ ("Sigma", США) Jiang С., 1993]. Выделение ДНК из лимфоцитов проводили стандартным 1етодом [White T.J. et al., 1990]. Электрофорез ДНК с целью идентификации (ежнуклеосомной ДНК-фрагментации выполняли в 1,5% агарозном геле с убавлением 1 мкг/мл бромистого этидия при напряжении 20 В/см в течение 30 1ин [Marmur J., 1961]. Содержание ДНК оценивали дифениламиновым !стодом. Для оценки морфологии апоптотических изменений лимфоцитов спользовали цитопатологические критерии, предложенные S. G. Martin et al. УГаянский А. H., 1997].

Исследование активности эксцизионной ДНК-репарации лимфоидных леток проводили методом сцинтилляционной радиометрии с использованием в ачестве мутагена 4-нитрохинолиноксида [Засухина Г.Д., 1975]. Для выражения езультатов рассчитывали индекс стимуляции (ИС) репарационной системы

;нк.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с сиользованием пакета программ «STATISTICA» (версия 5,0). Полученные в оде исследования данные обрабатывали методом вариационной статистики, ля каждой выборки вычисляли среднее арифметическое (X), ошибку среднего эифметического (m). Для оценки нормальности распределения вариант в лборках применяли критерий Колмогорова-Смирнова. При соответствии 1рактера распределения вариант в выборках нормальному достоверность

Таблица 1

Распределение здоровых детей и детей, больных инфекционным мононуклеозом, в зависимости от возраста, сроков и

методов исследования

Методы исследования Количество исследований

Здоровые дети Больные инфекц} мононуклеозом, вызванн Эпштейна-Бар генным ым вирусом р Больные инфекционным мононуклеозом другой этиологии

Острый период Период реконвалесцем-щш Через 16-18 месяцев после болезни Острый период Период рекоивалесцен- 11П11 Через 16-18 месяцев после болезни

3-6 лет 7-14 лет 3-6 лет 7-14 лет 3-6 лет 7-14 лет 3-6 лет 7-14 лет 3-6 лет 7-14 лет 3-6 лет 7-14 лет 3-6 лет 7-14 лет

1. Определение общего количества лейкоцитов и их отдельных морфологических форм 19 37 27 15 24 8 10 17 40 24 12 12 9 10

2. Цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови 9 13 12 8 18 6 6 17 7 13 11 10 8 8

.4. Исследование апоптоза лимфоцитов 11 23 12 13 19 7 8 7 19 15 7 8 8 9

4. Проведение микроядерного теста лимфоцитов 17 27 15 7 21 7 8 14 20 16 7 8 6 9

5. Исследование активности системы репарации ДНК в лимфоцитах 14 16 9 10 22 6 10 10 14 8 11 10 8 8

различий определяли с использованием м<ритерия Стыодента, в противном случае применяли непараметрические критерии Манна-Уитни или Вилкоксона [Лакин Г.Ф., 1980].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Во всех случаях заболевания инфекционным мононуклеозом регистрировалось увеличение лимфатических узлов, поражение носо- и ротоглотки, гепато- и спленомегапия.

Кроме того, у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания регистрировались однонаправленные изменения количественных показателей гемограммы: на фоне повышения общего количества лейкоцитов, обусловленного увеличением содержания палочкоядерных нейтрофилов, моноцитов, атипичных мононуклеаров и абсолютного количества лимфоцитов, наблюдалось снижение содержания сегментоядерных нейтрофилов.

В период клинического выздоровления у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии содержание лимфоцитов и атипичных мононуклеаров оставалось повышенным по сравнению с нормой. Данные изменения сохранялись и через 16-18 месяцев после болезни.

У больных ИМ-ВЭБ обеих возрастных групп нами было зарегистрировано достоверное увеличение (по сравнению с нормой) числа клеток с хромосомными аберрациями, в основном за счет возрастания доли лимфоцитов с нарушениями структуры хромосом (на 178% у детей в возрасте 3-6 лет и на 341% у детей в возрасте 7-14 лет) (рис.1). Кроме того, отмечалось повышение числа хромосомных нарушений на клетку. В числе структурных аберраций хромосом учитывались хромосомные разрывы (парные фрагменты, разрывы хромосом по центромере), хроматидные разрывы (одиночные фрагменты), а также обмены (кольцевые и дицентрические хромосомы, «кресты»). При этом у детей в возрасте 3-6 лет, страдающих ВЭБ-мононуклеозом, отмечалось повышение количества преимущественно хроматидных разрывов, в то время как у пациентов в возрасте 7-14 лет увеличивалось число хромосомных обменов, хромосомных и хроматидных разрывов (рис.1).

Кроме того, проведение микроядерного теста, показало, что у больных ИМ-ВЭБ обеих возрастных групп в период развернутой клинико-гематологической картины болезни содержание ФГА- и ЛПС-стимулированных лимфоцитов с микроядрами было значительно выше, чем у здоровых детей (рис.1). Микроядра - ядерный материал; они образуются в поздней телофазе из ацентических фрагментов и целых, отставших при расхождении, оставшихся хромосом. Микроядра могут быть результатом как структурных, так и

1400 , 1200 ! 1000 Н 800 '

600 !

I

400 1 200 0

Инфекционный мононунлеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Нз рр

лЭЁЙг

Й

Ч4

I

1 ¡Й

А'

Содержание клеток с Число хромосомных Доля клеток с Хромосомные обмены Хромосомные хромосомными нарушений на клетку нарушениями разрывы

нарушениями структуры хромосом

и здоровые дети 3-6 лет О здоровые дети 7-14 лет О больные ИМ 3-6 лет (острый период)

□ больмие ИМ Э-в лет (период рехонеал®ецен(|иц|

□ больные ИМ 3-6 лет (через 16-18 месяцев после болезни)

□ больные ИМ 7-М лет (острый период)

□ больные ИМ 7-14 лет (период реконеалесценции)

В больные ИМ 7-14 лет (через 15-18 месяце• после болезни)

«Ёш

Хроизтидные обмены

Хроштидные разрывы

1200 1000 800 600 400 200 0

Инфекционный мононуклеоз другой этиологии

ггПтЬ г^^ „ЙАА А

¡ЦЭЁ

Содержание клеток с Число хромосомных Доля клеток с Хромосомные обмены Хромосомные Хроматидные Хроматидные

хромосомными нарушений на клетку нарушениями разрывы обмены разрывы

нарушениями структуры хромосом

Рис.

1. Хромосомные нарушения лимфоцитов периферической крови (% от нормы) у больных инфекционным мононуклеозом

%

400 -350 -300 : 25 О 2CW -

750 -

i

100 -1 50 -О

Инфекционный мононуклеоз, вызвпный вирусом Эпштейна-Барр

til

ill

ФГА

il

гЬ

гЬ

М

ii

il

Л ПС

О здоровью дети 3-6 лет

□ здоровые дети 7-14 лет

О больные ИМ 3-6 лет (острый периоду

□ больные ИМ 3-6 лет (период ренонвалесценции)

□ больные ИМ 3-6 лет (через 16-18 месяцев после болезни)

□ больные ИМ 7-14 лет (острый период)

□ больные ИМ 7-14 лет (период ренонвалесценции)

□ больные ИМ 7-14 лет (через 16-18 месяцев после болезни)

%

; Инфекионный мононуклеоз другой этиологии

Рис.2. Содержание стимулированных ФГА и ЛПС Escherichia coli лимфоцитов периферической крови с микроядрами (% от нормы) у больных инфекционным мононуклеозом

численных хромосомных аберраций [Schmid W., 1975; Krepinski А.В., Headle J.A., 1983; Ильинских Н.Н. и соавт., 1991; Дышева Н.М., 1992].

В литературе встречаются многочисленные данные, свидетельствующие о мутагенном воздействии ВЭБ на хромосомный аппарат лимфоидных клеток. Известно, что ВЭБ способен стимулировать развитие перестроек хромосом, вызывая разнообразные нарушения в цитогенетическом аппарате лимфоцитов, в связи с чем его относят к реальным кандидатам в агенты, индуцирующие развитие опухолевых процессов в макроорганизме, принимая участие либо как промотор экспрессии клеточных проонкогенов, либо как инициатор мутагенеза, или же как «коканцероген», действующий синергично с другими вирусами [Lam К.М., Crawford D.H., 1991; Tahara Н. et al, 1997; Chou W.S et al, 1998; Hui A.B. et al., 1998; Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999].

Известно, что среди хромосомных аберраций, индуцированных вирусами, в основном преобладают хроматидные разрывы [Блюмкин В.Н., Жданов В.М., 1973; Анджапаридзе О.Г. и соавт., 1981; Бужиевская Т.И., 1984; Авакова А.К. и соавт., 1989]. Возникновение разрывов хроматид может быть обусловлено непосредственным внедрением ВЭБ в хромосомы клеток хозяина, так как известно, что одним из механизмов персистенции вирусов, в частности герпесвирусов, является интеграция вирусного генома с геномом клетки хозяина [Антоненко С.В. и соавт., 1981; Засухина Г.Д., 1983; Львова Т.Н., 1983; Колонина И.В., 1983; Бужиевская Т.И., 1984].

Вероятно, что помимо прямого мутагенного воздействия ВЭБ на цитогенетический аппарат лимфоцитов, увеличение в крови больных ИМ-ВЭБ числа лимфоцитов с хромосомными нарушениями может быть обусловлено способностью вируса угнетать апоптоз инфицированных лимфоидных клеток за счет стимуляции протоонкогенов типа bcl-2 и экспрессии собственных ядерных антигенов [Агеенко А.И. и соавт., 1982; Косяков П.Н., Косякова Н.П., 1985]. Кроме того, рядом авторов было установлено, что трансформированные ВЭБ лимфоциты могут спонтанно продуцировать в среду ИЛ-1-подобный фактор, который по биологическому действию сходен с ИЛ-1 из макрофагов и обладает комитогенным действием, проявляя в данном случае свойства аутокринного ростового фактора, стимулируя пролиферацию В-лимфоцитов [Kaminska I.O. et al., 1996; Prabhu A et al., 1996; McColl S.R. et al., 1997; Wright-Browne V. et al., 1998].

Обращало на себя внимание появление в крови детей, больных ИМ-ВЭБ, обеих возрастных групп лимфоцитов с изменением числа хромосом, в основном гиперплоидных клеток (рис.1).

В период реконвалесценции у больных ИМ-ВЭБ обеих возрастных групп нами было зарегистрировано уменьшение количества клеток с хромосомными аберрациями за счет снижения содержания клеток с нарушением структуры хромосом по сравнению с их числом в острый период болезни. Однако данный показатель по-прежнему превышал соответствующие значения нормы (табл.2). При этом у детей с ИМ-ВЭБ обеих возрастных групп регистрировалось снижение количества хроматидных разрывов по сравнению с соответствующими показателями в острый период заболевания. Содержание же

хроматидных обменов все еще превышало контрольный уровень, что, вероятно, было обусловлено проводимой детям лекарственной терапией (рис.1).

Кроме того, в фазу клинического выздоровления у пациентов с ИМ-ВЭБ регистрировалось снижение количества ФГА- и ЛПС-стимулированных микроядросодержащих клеток по сравнению с соответствующими показателями в острый период болезни. При этом их содержание по-прежнему превышало таковое в норме (рис.2).

Возможно, что в период реконвалесценции при ИМ-ВЭБ, в результате снижения активной репродукции ВЭБ и формирования латентной инфекции, снижается модифицирующее активное воздействие вируса на хромосомный аппарат лимфоцитов, что и обусловливает достоверное уменьшение числа хромосомных аберраций в лимфоидных клетках, и, соответственно количества ФГА- и ЛПС-стимулированных лимфоцитов с микроядрами.

Через 16-18 месяцев у детей обеих возрастных групп, переболевших ИМ-ВЭБ, содержание клеток с хромосомными нарушениями продолжало снижаться по сравнению с их уровнем в период реконвалесценции, но, по-прежнему, оставалось значительно выше соответствующих значений в контроле. Количество же хроматидных обменов нормализовалось. В отдаленном периоде после ИМ-ВЭБ у детей обеих возрастных групп, содержание ФГА- и ЛПС-стимулированных лимфоцитов с микроядрами соответствовало норме (рис.1, 2)-

Сохранявшееся высоким содержание цитогенетических нарушений в лимфоцитах в отдаленный период после перенесенного ИМ-ВЭБ, по видимому, объясняется тем, что проникший в организм ВЭБ вызывает латентную инфекцию, при которой в лимфоидных клетках пожизненно персистирует его геном, что обусловливает действие ВЭБ на хромосомный аппарат лимфоцитов и приводит в период репродукции вируса к возникновению в этих клетках хромосомных нарушений и в отдаленный период после болезни.

У больных ДИМ обеих возрастных групп регистрировались хромосомные нарушения в лимфоцитах периферической крови, аналогичные таковым у детей, больных ИМ-ВЭБ (табл.2). Так, нами было выявлено повышение (по сравнению с нормой) содержания клеток с нарушениями структуры хромосом, а также увеличение числа хромосомных нарушений на клетку по сравнению с аналогичными показателями у здоровых детей. При этом анализ типов нарушений структуры хромосом у больных ДИМ показал преимущественное увеличение количества хроматидных разрывов, что, по-видимому, является неспецифическим следствием действия подавляющего большинства вирусов. Кроме того, у детей с ДИМ обеих возрастных групп, также как и у больных с ИМ-ВЭБ, в фазу развернутых клинико-гематологических проявлений заболевания отмечалось увеличение числа ФГА- и ЛПС-стимулированных лимфоцитов, содержащих микроядра (рис.2). Согласно данным литературы, представители семейства Негреэутске, в том числе вирусы простого герпеса и цитомегалии, способны вызывать в культурах клеток хромосомные нарушения, в частности, хроматидные и хромосомные разрывы, пробелы и диффузные поражения хромосом, в том числе их частичную деспирализацию [Демидова

С.Л., Стонова Н.С., Селезнева Т.Г., Гаврилов В.И., 1968; Блюмкин В.Н., Жданов В.М., 1973; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991].

В фазу клинического выздоровления у больных ДИМ обеих возрастных групп отмечалось достоверное уменьшение количества клеток с хромосомными нарушениями за счет снижения доли клеток с нарушением структуры хромосом по сравнению с таковым в острый период заболевания, но оно по-прежнему превышало нормальные значения (табл.2).

Вместе с этим, в период реконвалесценции отмечалось снижение числа стимулированных ФГА и ЛПС микроядросодержащих клеток по сравнению с их уровнем в острый период болезни. Однако значения данных показателей у ДИМ-реконвапесцентов старшего возраста по-прежнему превышали соответствующие показатели у здоровых детей. Количество же ЛПС-активированых лимфоцитов у детей в возрасте 3-6 лет на данной стадии ДИМ нормализовалось (рис.2).

Через 16-18 месяцев после болезни у больных ДИМ младшего и старшего возраста содержание микроядросодержащих ФГА-стимулированных лимфоцитов восстанавливалось до уровня нормы. В то же время, количество ЛПС-стимулированных клеток с микроядрами у детей в возрасте 7-14 лет в отдаленном периоде после ДИМ все еще превышало норму (в 2,4 раза) (рис.2).

Сохраняющееся высоким содержание цитогенетических нарушений в лимфоцитах в период реконвалесценции и в отдаленный период после перенесенного ДИМ можно объяснить, на наш взгляд, способностью ДНК-содержащих вирусов, в частности вирусов герпеса, интегрировать геном или отдельные его фрагменты в клеточную ДНК и длительно персистировать в ядрах поражаемых клеток [Букринская А.Г., Жданов В.М. 1991].

Таким образом, как показывают результаты проведенного нами исследования, у больных ДИМ обеих возрастных групп отмечался аналогичный спектр нарушений хромосом, как и у больных ИМ-ВЭБ, что, по-видимому, свидетельствует о неспецифичности некоторых цитогенетических эффектов, обусловленных воздействием различных инфекционных агентов.

Известно, что в патогенезе вирусных инфекций чрезвычайно важную роль играет гибель клеток, реализующаяся в форме некроза или апоптоза. Апоптоз, запрограммированная или "физиологическая" форма клеточной гибели, реализуется посредством заложенных в генотипе клетки механизмов самоуничтожения и морфологически характеризуется уменьшением размеров клетки, уплотнением и фрагментацией хроматина [Погорелов В.М., Козинец Г.И., 1995; Ярилин A.A., 1996; Маянский А.Н. и соавт., 1997; Утешев Д.Б. и соавт., 1998; Новицкий В.В., Гольдберг Е.Д., 2001].

В острый период болезни у обследованных нами детей с ИМ-ВЭБ обеих возрастных групп при индукции апоптоза было зарегистрировано снижение количества фрагментированной ДИК (фДНК) в лимфоцитах (на 65% у детей в возрасте 3-6 лет и на 46% у пациентов в возрасте 7-14 лет) по сравнению с аналогичными показателями у здоровых детей. В период реконвалесценции уровень ДНК-фрагментации сохранялся сниженным и возвращался к норме лишь в отдаленном периоде после болезни (рис.3). Кроме того, у детей в

140 12 О 100 80 60 40 20 О

Инфекционный мононукпеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр

I

ДНК-фрагментация

□ здоровые дети 3-6 лет О здоровые дети 7-14 лет

□ больные ИМ 3-6 лет (острый период)

□ больные ИМ 3-6 лет (период реконвллесценции)

□ больные ИМ 3-6 лет (через 16-1В месяцев после болезни)

□ больные ИМ 7-14 лет (острый период)

□ больные ИМ 7*14 лет {период реконвалесценциц!

□ больные ИМ 7-14 лет (через 16-18 месяцев после болезни)

Апоптозные клетки

Апоптозные тела

140 120 100 80 60 40 20 О

■ь

Инфекционный мононукпеоз другой этиологии

пЬ

х 1 ("Ь

1

ДНК-фрагментация

£

А

1|

Апоптозные клетки

15

Й ш

-ь

Апоптозные тела

ш

Рис.3. Апоптотическая реакция лимфоцитов периферической крови (% от нормы) у больных инфекционным

мононукпеозом

возрасте 7-14 лет с ИМ-ВЭБ в фазу клинического выздоровления отмечалось снижение числа апоптотически измененных клеток (до 69% от нормы) которое нормализовалось лишь через 16-18 месяцев после болезни (рис.3).

Гибель инфицированных вирусами клеток можно рассматривать, как защитный механизм, предотвращающий распространение вирусов [Araki S. et al„ 1990; Zychlinsky A., 1993; Stewart B.W., 1994; Ohta K. et al., 1995; Утешев Д.Б. и соавт., 1998; .Ярилин A.A., 1998]. Вместе с тем, попадание некоторых вирусов в клетку приводит к нарушению механизмов нормальной регуляции апоптоза. Так, по данным литературы, вирусы способны блокировать апоптозный ответ на собственную инфекцию. Иными словами, вирусы должны обладать альтернативным механизмом, который, продлевая жизнь клеток, создавал бы условия для воссоздания многочисленного вирусного потомства в литическом цикле или обеспечивал переход вируса в латентное состояние (персистенцию). В частности, для ВЭБ установлен эффект стимуляции апоптозингибирующих протоонкогенов типа bcl-2 [Ohta К. et al., 1995; Новиков B.C., 1996; Маянский А.Н. и соавт., 1997]. Кроме того, по мнению отечественных авторов, экспрессия ядерных антигенов ВЭБ представляет собой приобретение трансформированного или иммортализированного фенотипа [Агеенко А.И. и соавт., 1982; Косяков П.Н., Косякова Н.П., 1985].

У больных ДИМ обеих возрастных групп в фазу развернутой клинико-гематологической картины заболевания наблюдалось значительное снижение содержания фДНК в лимфоцитах (на 48,83% у детей 3-6 лет и на 46% у детей 714 лет) по сравнению с аналогичными показателями в норме (рис.3). При этом у детей в возрасте 7-14 лет, страдающих ДИМ, регистрировалось достоверное уменьшение числа апоптотических тел (в 1,3 раза) по сравнению с контролем. В период клинического выздоровления у детей с ДИМ обеих возрастных групп содержание фДНК по-прежнему оставалось сниженным. Кроме того, у больных ДИМ старшей возрастной группы выявлялось снижение содержания апоптотически измененных клеток (на 27%) по сравнению с таковым в острый период заболевания, в то время как содержание апоптотических тел нормализовалось (рис. 3). Однако у больных в возрасте 7-14 лет содержание апоптотически измененных клеток превышало аналогичный показатель у детей 3-6 лет (рис.3).

Через 16-18 месяцев после болезни у детей с ДИМ в возрасте 3-6 лет количество фДНК в лимфоидных клетках не нормализовалось. При этом у детей в возрасте 7-14 лет, переболевших ДИМ, отмечалось увеличение данного показателя и количества апоптотически измененных клеток по сравнению с таковым в период реконвалесценции (рис.3).

Не исключено, что при персистенции герпесвирусов, обладающих сходной морфологией и аналогичным механизмом действия на лимфоидные клетки, имеется общий путь реализации апоптоза инфицированных клеток. Предполагаемым механизмом ингибиции апоптоза в лимфоцитах у больных ДИМ может служить то, что вирусы простого герпеса и цитомегалии, вероятно, способствуют инактивации эффекторных молекул апоптоза - Р53, продукта

антиапоптозпого гена р53, в то время как для ВЭБ установлен эффект стимуляции апоптозингибирующих протоонкогенов типа bcl-2 [Новиков B.C., 1996; Маянский А.Н. и соавт., 1997]. Кроме того, по данным литературы, известно, что вирусы семейства герпеса способны к взаимной реактивации. Возможно, что при ДИМ вирусами семейства герпеса запускается индукция литической репродукции ВЭБ в лимфоцитах [Asano Y. et al., 1994; Eds B.N. et al., 1996; Львов Н.Д., Мельниченко А.В., 1999], латентно инфицированных этим вирусом, и, тем самым, подключаются дополнительные механизмы подавления апоптотической активности клеток, выражающиеся в снижении количества фДНК в ядрах лимфоцитов и числа апоптотически измененных клеток.

В литературе имеются весьма ограниченные сведения о влиянии вирусов на ДНК-репаративные системы клеток. Не исключено, что вирусы могут служить своеобразными регуляторами клеточной репаративной активности [Waters R. et al., 1977; Altmann H. et al., 1977; Засухина Г.Д. и соавт., 1979].

У больных ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет в фазу развернутой клинико-гематологической картины заболевания регистрировалось повышение индекса стимуляции репарационной системы ДНК лимфоцитов, вызванной воздействием на культуру химического канцерогена 4-НХО (в 1,6 раза по сравнению с соответствующими показателями у здоровых детей). Данные изменения сохранялись в период реконвалесценции и через 16-18 месяцев после болезни. У пациентов с ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет и у больных ДИМ обеих возрастных групп во все периоды обследования значимых изменений активности ДНК-репарационной системы лимфоцитов выявлено не было (рис.4).

Повышение активности ДНК-репарационной системы у больных вышеуказанной группы, вероятно, могло быть обусловлено выделением

О здоровые дети 3-6 лет

250

225

200

□ больные ИМ-ВЭБ 3-6 лет (острый период)

15 О

100

12 5

175

75

25

50

0

□ больные ИМ-ВЭБ 7-14 лет (через 16-18 месяцев после болезни)

□ больных ИМ-ВЭБ 7-14 лет (острый период)

□ больные ИМ-ВЭБ 7-14 лет (период реконвалесценции)

□ больные ИМ-ВЭБ 3-6 лет (через 16-18 месяцев после болезни)

□ больные ИМ-ВЭБ 3-6 лет (период реконвалесценции)

Индекс стимуляции

Рис. 4. Активность системы репарации ДНК лимфоцитов (е % от нормы) у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-

Барр.

больные ИМ-83б в возрасте 7-14 лет (через 18-18 месяцев) больные ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет (период реконеалесценции) больные ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет (острый период) здоровые дети в возрасте 7-14 лет больные ИМ-ВЭБ в возрасте 3-в лет (через 18-18 месяцев) больные ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет (период реконеалесценции) больные ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет (острый период) здоровыв дети в возрасте 3-6 лет

больные ДИМ в возрасте 7-14 лет (через 16-18 месяцев) больные ДИМ в возрасте 7-14 лет (период реконеалесценции) больные ДИМ в возрасте 7-14 лет (острый период) здоровые дети в возрасте 7-14 лет больные ДИМ в возрасте 3-6 лет (через 16-18 месяцев) больные ДИМ в возрасте 3-в лет (период реконеалесценции) больные ДИМ в возрасте 3-6 лет (острый период)

ЗЕ

-78-

НЕ

□ О

Индекс стимуляции:

□ О

Пот 1 до 2 □ > 2

□ о

62.Ь

I -ШЬ I 18.75 1

1!Г

ж:

п:

~зг

□

I 131 I

69 55

Ш

21.42

□

10 20

--зге"

30 40 50 60 70

80 90 100 %

- •-1

"3(Г

□ 0

ЗС

□ о

Индекс стимуляции: 0<1

О от 1 до 2

а >2

62.5

I 18.75 I 16.75 I

~575~

□ о

здоровые дети в возрасте 3-6 лет Г

4Ь 45 I 45.45 • 1 9.1 1

42.В5 I 4265 1 14,3 1

ш

НЕ

ТГ4Г

10 20

30

50 6О

90 100

Рис.5. Распределение здоровых детей (%) и бальных инфекционным мононуклеозом по величине индекса стимуляции системы

репарации ДНК

лимфоидными клетками под влиянием ВЭБ интерферона (ИНФ), являющегося мощным стимулятором внепланового синтеза ДНК [Ильинских Н.Н. и соавт., 1992]. В связи с тем, что первичное заражение ВЭБ происходит, как правило, в возрасте 2-5 лет и большинство детей старшего возраста заболевают ИМ на фоне имевшего место ранее ВЭБ-инфицирования [Schlossberg D., 1989; Любезная Е.В., 1991; Поляков В.Е. и соавт., 1998; Учайкин В.Ф. М., 1999], очевидно, что дефект системы ИНФ у больных ИМ 7-14 лет является более выраженным, чем у больных 3-6-летнего возраста, и обусловливает недостаточный уровень продукции цитокина для стимуляции процессов репарации повреждений клеточного генома в условиях манифестации инфекции.

По-видимому, возрастной фактор, а именно вероятность вырабатывания специфического противовирусного иммунитета у детей старшего возраста, которые, как было указано выше, в большинстве случаев являются ВЭБ-носителями, обусловливает также и то, что, уровень цитогенетических нарушений в лимфоидных клетках у детей 7-14 лет, больных ИМ, вызванным ВЭБ, существенно не отличался от такового у пациентов младшего возраста, несмотря на активацию у последних системы репарации ДНК.

Анализ распределения детей, больных ИМ-ВЭБ, по величине индекса стимуляции системы репарации ДНК лимфоцитов показал, что число детей с ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет в острый период болезни с индексом репарации (ИС) менее 1 уменьшалось по сравнению с нормой, и, напротив, увеличивалась численность детей с ИС от 1 до 2 (рис.5). Известно, что при достижении порогового уровня хромосомных аберраций активируются системы репарации ДНК и иммунитета, стимулируется выработка интерферона в организме. [Lam К.М., Crawford D.H., 1991; B.G. Durie B.G., 1992; Gutierres M.I. et al., 1992; Tahara H. et al, 1997; Chou W.S et al., 1998; Hui A.B. et al., 1998; Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999]. При этом выработка интерферона клетками иммунной системы играет важную роль в обеспечении инициации вирусной персистенции, защищая клетку от цитодеструктивного действия. Вместе с тем, как показали результаты нашего исследования, у больных ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет наблюдалась ингибиция апоптотической гибели лимфоцитов, что могло способствовать накоплению хромосомных нарушений в лимфоцитах. Таким образом, вышеуказанные механизмы и, в частности, репаративный синтез ДНК являются компенсаторными реакциями организма, направленными на исправление возникающих нарушений структуры или числа хромосом, либо на элиминацию клеток с поврежденным геномом.

В период реконвалесценции распределение И С системы репарации ДНК лимфоцитов у детей с ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет практически не изменялось. В отдаленном периоде после болезни наиболее высоким было количество детей с ИС от 1 до 2 (рис.5). Это, вероятно, обусловливалось длительной персистенцией ВЭБ в организме, и, по-видимому, накопление определенного числа хромосомных аберраций способствовало поддержанию репаративного синтеза ДНК на высоком уровне у подавляющего большинства детей данной группы.

Аналогичному распределению по величине индекса стимуляции репаративного синтеза ДНК подвергались дети, больные ДИМ, в возрасте 3-6 лет (рис.5). Однако, в отдаленный период после болезни наиболее высоким оказалось число детей с ИС<1, что, вероятно, свидетельствует либо об ингибиции процессов репаративного синтеза, либо о более благоприятном состоянии репаративной системы ДНК в исходе заболевания, так как, возможно, что у большего количества детей данной группы осуществлялась продуктивная репарация хромосомных нарушений или элиминация клеток с повреждениями, в результате чего уровень хромосомных аберраций не достигал порогового значения, необходимого для запуска системы репарации ДНК.

Количество детей с ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет, имеющих ИС от 1 до 2 в острый период болезни достигало 90%, что, свидетельствовало о высоком уровне хромосомных нарушений, в то время как всего 10% детей имели низкий индекс репарации (до 1). При этом, как упоминалось выше, у детей 7-14 лет может иметь место дефект в системе выработки интерферона. В период реконвалесценции увеличивалась численность детей данной возрастной группы с ИС<1, за счет уменьшения числа детей с ИС от 1 до 2. Вероятно, снижение количества детей с высоким индексом стимуляции ДНК-репарации в период выздоровления обусловливалось уменьшением содержания клеток с хромосомными аберрациями. Через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ-ВЭБ число 7-14-летних детей имеющих ИС<1 и от 1 до 2 было одинаковым. Возможно, длительная персистенция ВЭБ в лимфоцитах за счет высокого онкогенного потенциала вируса приводила в данном случае к напряжению механизмов системы репарации ДНК.

В острый период болезни 50% детей, больных ДИМ в возрасте 7-14 лет имели ИС<1 и 50% детей - от 1 до 2. По-видимому, этиологические факторы, обусловливающие развитие ДИМ, действуют более мягко, вызывая образование меньшего количества хромосомных аберраций в клетке, что, соответственно, требует меньшей мобилизации репаративных механизмов, чем у детей, больных ИМ-ВЭБ. Вместе с этим, число больных ДИМ в возрасте 7-14 лет в период выздоровления с ИС<1 незначительно снижалось, в то время как увеличивалось количество детей с ИС>1 по сравнению с таковыми в острый период заболевания (рис.5). Через 16-18 месяцев после болезни у 12,5% детей определялся ИС>2. Можно предположить, что прогноз ИМ-ВЭБ у детей, в возрасте 7-14 лет более благоприятен, нежели у детей, аналогичного возраста, перенесших ДИМ, так как в отдаленные сроки после заболевания большее число детей последней группы наблюдения имело тенденцию к повышению индекса репарации, соответственно, у них по-видимому, дольше сохранялся повышенным пороговый уровень хромосомных аберраций.

Таким образом, у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ наблюдалось увеличение содержания лимфоцитов с хромосомными аберрациями, сохраняющееся в период реконвалесценции и в отдаленные сроки после болезни. Регистрируемое угнетение апоптоза лимфоцитов в острый период ИМ нормализовалось лишь в отдаленном периоде после болезни. Характер и степень выраженности данных

изменений не зависели от этиологического варианта инфекции и возрастных особенностей организма. Вместе с этим, у больных ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет выявлялось увеличение активности системы эксцизионной ДНК-репарации лимфоцитов периферической крови. В связи с вышеизложенным, можно сделать предположение о том, что влияние вирусов, в частности ВЭБ, на цитогенетический аппарат иммунокомпетентных клеток при ИМ приводит не только к снижению функциональной активности лимфоидных клеток, но возможно, и к прямой активации уже присутствующих в ДНК вирусных последовательностей [Klein G., 1972; Palmer А.Е. et al., 1976; Баринский И.Ф. и соавт., 1994; Львов М.Д., Мельниченко А.Д., 1999].

ВЫВОДЫ

1. У детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, в острый период заболевания увеличивается (по сравнению с нормой) общее количество лейкоцитов, абсолютное и относительное число палочкоядерных нейтрофилов, моноцитов, «атипичных мононуклеаров» и абсолютное количество лимфоцитов, на фоне снижения содержания сегментоядерных нейтрофилов.

2. В фазу клинического выздоровления у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии содержание лимфоцитов и «атипичных мононуклеаров» остается повышенным по сравнению с нормой. Данные изменения сохраняются и через 16-18 месяцев после болезни.

3. Структурно-организационные изменения хромосомного аппарата лимфоцитарных клеток у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, в острый период заболевания носят однонаправленный равно-выраженный характер и определяются увеличением (по сравнению с нормой) общего количества клеток с хромосомными аберрациями и числа хромосомных нарушений на клетку, повышением содержания лимфоцитов с нарушениями структуры и числа хромосом, ФГА- и ЛПС-стимулированных клеток с микроядрами.

4. Хромосомные нарушения в лимфоцитах периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии сохраняются как в фазу реконвалесценции, так и в отдаленном периоде после болезни.

5. При инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, исчезновение из популяции лимфоцитов с измененным числом хромосом и восстановление до уровня нормы количества ФГА-активированных микроядросодержащих клеток фиксируется на более позднем этапе наблюдения, чем при инфекционном мононуклеозе другой этиологии.

6. У детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом

другой этиологии, в период разгара болезни при индукции апоптоза лимфоцитов in vitro содержание фрагментированной ДНК в ядрах клеток снижается по сравнению с нормой и не восстанавливается в период

7. На стадии клинического выздоровления у 7-14-летних детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии количество лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза остается ниже нормы.

8. Через 16-18 месяцев после перенесенного инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр и инфекционного мононуклеоза другой этиологии у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет способность лимфоцитов к апоптозу нормализуется.

9. У детей 3-6 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, регистрируется повышение активности системы репарации ДНК в лимфоидных клетках.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Реакции системы крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом // Приложение № 1 к журналу «Гастробюллетень»: Материалы 2-ой Объединенной Всероссийской и Всеармейской научной конференции «Санкт-Петербург - Гастро-2000» (Санкт-Петербург, 20-22 сентября 2000 г.). - 2000. - № 1-2. - С. 94. (совместно с О.И. Уразовой, А.П. Помогаевой, И.О. Наследниковой).

2. Сухая масса лимфоцитов у больных инфекционным мононуклеозом // Материалы международного конгресса молодых ученых и специалистов «Научная молодежь на пороге XXI века» - Томск, 2000. - С. 27-28. (совместно с О.И. Уразовой).

3. Цитогенетические нарушения в лимфоцитах периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом II Материалы I Всероссийской научной конференции с участием зарубежных специалистов «Актуальные проблемы эволюционной и популяционной физиологии человека». -Тюмень, 2001. - С. 91-92. (совместно с О.И. Уразовой).

4. Морфология апоптоза лимфоидных клеток при инфекционном мононуклеозе // Приложение 1 к журналу «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины». - 2001 - С. 69-71. (совместно с О.И. Уразовой, В.В. Новицким,

A.П. Помогаевой, М.Р. Карповой, И.О. Наследниковой, А.Н. Андреевым).

5. Цитогенетические нарушения в лимфоцитах периферической крови при инфекционном мононуклеозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - Т. 131, № 4. - С. 464-465. (совместно с О.И. Уразовой,

B.В. Новицким, А.П. Помогаевой).

6. Особенности течения у детей инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2001. - № 4. - С. 57-58. (совместно с О.И. Уразовой, А.П. Помогаевой, В.В. Новицким, Л.Л. Катанаховой, И.О. Н

реконвалесценции.