Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Технология и стандартизация сухих экстрактов липы сердцевидной, березы повислой, смородины черной и лекарственных форм на их основе

На правах рукописи

МЕДВЕДЕВА ТАТЬЯНА МИХАИЛОВНА

ТЕХНОЛОГИЯ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ ЛИПЫ СЕРДЦЕВИДНОЙ, БЕРЁЗЫ ПОВИСЛОЙ, СМОРОДИНЫ ЧЁРНОЙ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ИХ ОСНОВЕ

14.04.01 — Технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

О 5 СЕН 2013

005532683

Санкт-Петербург - 2013

005532683

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации на кафедре промышленной технологии лекарственных препаратов.

Научный руководитель: Каухова Ирина Евгеньевна

доктор фармацевтических наук, профессор

Официальные оппоненты: Дёмина Наталья Борисовна

доктор фармацевтических наук, профессор,

ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России, профессор кафедры фармацевтической технологии

Пожарицкая Ольга Николаевна кандидат фармацевтических наук,

заместитель Генерального директора по новым технологиям ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации»

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится 24 сентября 2013 г. в 16.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.088.01 при ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 14, лит. А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 197227, Санкт-Петербург, пр. Испытателей, д. 14.

Автореферат разослан августа 2013 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета Д 208.088.01, кандидат фармацевтических наук, доцент

Марченко Наталья Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Острые респираторные инфекционные заболевания (ОРЗ, ОРВИ и грипп) являются одними из самых распространённых болезненных состояний человека. В связи с разнообразием возбудителей и вероятностью осложнения течения болезни рекомендуют использовать комплексную патогенетическую терапию, включающую жаропонижающие, противовоспалительные, обезболивающие, диуретические и другие средства. Данный подход в лечении острых респираторных инфекций (ОРИ) обеспечивает лучшее самочувствие у пациента и позволяет уменьшить вероятность осложнений.

Обзор российского рынка препаратов для лечения ОРИ и гриппа показал, что доля растительных препаратов в общей фармакологической группе относительно мала. Большинство предлагаемых лекарственных средств, в состав которых входят нестероидные противовоспалительные средства, имеет многочисленные противопоказания и побочные эффекты. Поэтому в настоящее время всё большую актуальность приобретают препараты на основе комплексов биологически активных веществ, извлекаемых из лекарственных растений. Однако широкое использование лекарственного растительного сырья (JIPC) часто сдерживается отсутствием удобной для его приёма лекарственной формы.

Цветки липы сердцевидной, листья берёзы повислой и листья смородины чёрной используются в народной медицине и рекомендуются официальной медициной для лечения и профилактики болезней органов дыхания. Результаты исследований свидетельствуют о наличии достаточно высокой фармакологической активности и у листьев липы. Основными биологически активными веществами (БАВ) в данных видах лекарственного растительного сырья являются флавоноиды, тритерпеноиды даммаранового ряда, проантоцианидины и аскорбиновая кислота

Учитывая вышеизложенное, актуальной является разработка технологии экстрагирования цветков и листьев липы, листьев берёзы и смородины с получением экстрактов с целью дальнейшего их введения в состав различных лекарственных форм для создания комплекса лечебно-профилактических средств. Для повышения удобства дозирования и применения, увеличения биодоступности действующих веществ, а также устойчивости экстрактов из лекарственного растительного сырья к воздействию внешних факторов, в качестве лекарственных форм сухих экстрактов были выбраны сироп и гранулы.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационной работы явилась разработка технологии и стандартизация сухих экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной, сиропа и гранул на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

1. Исследовать особенности и установить закономерности экстрагирования БАВ из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной различными экстрагентами. Определить влияние параметров экстрагирования на выход БАВ из лекарственного растительного сырья.

2. Разработать технологию сухих экстрактов из изучаемых видов лекарственного растительного

сырья и провести их стандартизацию.

3. Изучить качественный состав флавоноидов экстракта из цветков липы с определением характерного комплекса индивидуальных веществ.

4. Определить наличие характерных флавоноидов экстракта из цветков липы в сухих экстрактах из листьев липы, листьев берёзы и листьев смородины.

5. Изучить острую токсичность, жаропонижающую, анальгезирующую и антигипоксическую активности полученных сухих экстрактов.

6. Разработать состав и технологию сиропа на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной, определить основные показатели качества, составить проект нормативной документации.

7. Разработать состав и технологию гранул с сухими экстрактами из изучаемого растительного сырья. Определить основные показатели качества, составить проект нормативной документации.

Научная иовизиа

Разработаны новые способы раздельного и совместного экстрагирования БАВ из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и смородины чёрной, а также технологии сухих экстрактов из цветков липы, смеси цветков и листьев липы, смеси цветков и листьев липы и листьев берёзы. Впервые разработана технология сухого экстракта из листьев смородины чёрной, позволяющая сохранить содержащуюся в данном сырье аскорбиновую кислоту на 95%.

Из экстракта цветков липы сердцевидной выделены и идентифицированы 11 соединений флавоноидной природы. Среди них 7 впервые выделены из цветков липы сердцевидной: прунин, изокверцитрин, гвайяверин, эриодиктиол, кверцитрозид, винцетоксикозид В, госсипитрин.

Получен комплекс индивидуальных флавоноидов цветков липы сердцевидной. Разработана программа его анализа методом ВЭЖХ. Ряд флавоноидов из комплекса индивидуальных флавоноидов - астрагалин, гвайяверин, изокверцитрин, эриодиктиол - являются характерными и для сухих экстрактов из листьев липы, берёзы и смородины.

Для гранул с сухими экстрактами установлено влияние смеси 85% лактозы моногидрата и 15% белого кукурузного крахмала, декстрина и маннита кристаллического на влагопоглощение, сыпучесть и фармацевтические свойства. Практическая значимость

Усовершенствована технология получения сухих экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой, обеспечивающая повышение выхода флавоноидов до 74,5%. Разработана технология сухого экстракта из листьев смородины чёрной с сохранением аскорбиновой кислоты.

Определены основные показатели качества сухих экстрактов из цветков и листьев липы, листьев берёзы и смородины.

Разработаны состав и технология сиропа на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной; состав и технология гранул на основе смеси сухих экстрактов из изучаемых видов ЛРС. Составлены технологические схемы производства предлагаемых лекарственных средств. Составлены проекты фармакопейных статей на сироп «Липолицвет» на основе сухого экстракта из цветков и листьев липы сердцевидной и гранулы «ЛИБС» на основе

смеси сухого экстракта из цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой и сухого экстракта из листьев смородины чёрной.

Материалы по разработке процесса экстрагирования БАВ из лекарственного растительного сырья используются в учебном процессе ГБОУ ВПО СПХФА Минздрава России: в лекционном курсе дисциплины «Химия и технология фитопрепаратов» для студентов 4 курса факультета промышленной технологии лекарств (акт внедрения от 03.06.2013); в лекционном курсе для слушателей Центра повышения квалификации специалистов ГБОУ ВПО СПХФА Минздрава России (акт внедрения от 13.05.2013). Разработанные технологии сухих экстрактов и гранул на их основе апробированы на ЗАО «Вифитех» (акт апробации от 10.04.2013).

Разработанный комплекс индивидуальных флавоноидов цветков липы сердцевидной используется в научно-исследовательской работе, проводимой в Институте фармацевтической биологии и биотехнологии г. Дюссельдорф (Германия) и на кафедре промышленной технологии лекарственных препаратов ГБОУ ВПО СПХФА Минздрава России.

Апробация работы

Материалы диссертации прошли апробацию на межвузовской научной конференции студентов и молодых учёных «Фармация в XXI веке: эстафета поколений», Санкт-Петербург, 2009 г., на межрегиональной конференции Пятигорской фармацевтической академии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2010 г., 2011 г., на ежегодной конференции «Фармация и общественное здоровье», Екатеринбург, 2010 г., на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье -основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения», Санкт-Петербург, 2010 г., на научно-практической конференции, посвящённой 65-летию факультета промышленной технологии лекарств, Санкт-Петербург, 2010 г., на международной конференции с элементами научной школы молодёжи «Инновационные материалы и технологии в химической и фармацевтической отраслях промышленности», Москва, 2010 г., на XV Международном Конгрессе "ФИТОФАРМ 2011", Нюрнберг, Германия, 2011 г., на международной конференции «Возобновляемые лесные и растительные ресурсы: химия, технология, фармакология, медицина», Санкт-Петербург, 2011 г., на II научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фармацевтической технологии», Харьков, Украина, 2011 г, на Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», Санкт-Петербург, 2013 г, на Международной конференции «IALS/ВМЕР Students' Conference», Бостон, США, 2013 г.

Работа была поддержана грантом Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере при Министерстве образования и науки Российской Федерации как победитель программы «У.М.Н.И.К.» и грантом правительства Санкт-Петербурга как победитель конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых учёных, молодых кандидатов наук в 2011 г., стипендией Международной академии наук о жизни («IALS») в 2012 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 17 работ, из них 3 в журналах, входящих в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАК».

Связь задач исследования с планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО СПХФА Минздрава России «Разработка технологий производства, методов анализа, стандартизации и фармакологической оценки лекарственных растений, новых или модифицированных фармацевтических субстанций и препаратов» (№ государственной регистрации 01201252028).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты разработки процесса раздельного и совместного экстрагирования БАВ из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной, а также технология сухих экстрактов из изучаемого сырья.

2. Состав комплекса индивидуальных флавоноидов экстракта из цветков липы сердцевидной и методика его выделения и идентификации. Разработка программы его анализа методом ВЭЖХ. Изучение состава флавоноидов сухих экстрактов из листьев липы сердцевидной, берёзы повислой и смородины чёрной.

3. Обоснование, разработка составов и стандартизация готовых лекарственных средств с сухими экстрактами из цветков и листьев липы, листьев берёзы и смородины.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав экспериментальных исследований, выводов, списка сокращений и условных обозначений, списка литературы и приложений. Работа изложена на 169 страницах машинописного текста, содержит 52 таблицы и 36 рисунков. Список литературы включает 199 источников, в том числе 93 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Обзор литературы

В обзоре литературы представлены данные о химическом составе цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины черной. Описана фармакологическая активность и медицинское применение этих видов лекарственного растительного сырья и извлечений из них.

Рассмотрены современные методы выделения и идентификации флавоноидов из различного ЛРС.

Представлен обзор препаратов фармацевтического рынка России на основе сухих экстрактов из ЛРС. Проанализированы современные данные о лекарственных средствах в форме сиропов и гранул на основе ЛРС.

Глава 2. Материалы и методы исследования

В качестве объектов исследования использовали цветки липы сердцевидной производства ОАО «Красногорсклексредства», заготовленные в период с 2008 по 2010 гг.; листья смородины чёрной производства ОАО «Камелия-ЛТ», заготовленные в 2009 и 2010 гг., приобретённые в аптечной сети; листья липы сердцевидной и листья берёзы повислой, заготовленные в Ленинградской области в июне 2008-2011 гг. Изучаемое растительное сырьё, экстрагенты и вспомогательные вещества, использованные в технологии экстрактов, сиропа и гранул, по

показателям качества отвечали требованиям ГФ XI, ГФ XII, ФС или соответствующей НД.

В главе приведены методы и приборы, использованные для анализа растительного сырья, извлечений и лекарственных форм на их основе. Для выделения и идентификации основных БАВ - флавоноидов - использовали физико-химические, спектральные, хроматографические методы анализа, в том числе аналитическую и полупрепаративную хроматографию, ЯМР-спектрометрию.

Исследования, результаты которых приведены в главе 4, выполнены на оборудовании Института фармацевтической биологии и биотехнологии при Университете Генриха-Гейне г. Дюссельдорф Федеративной Республики Германия.

Экспериментальную оценку безопасности и эффективности разработанных сухих экстрактов и лекарственных форм на их основе проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2005.

Статистическую обработку результатов проводили с применением программ MS Office Excel 2010 и MathCAD 15.0 в соответствии с требованиями, обозначенными в ГФ XI вып. 1 с. 199.

Глава 3. Разработка технологии сухих экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной

3.1 Разработка технологии сухого экстракта из липы сердцевидной и берёзы повислой Изучение влияния природы экстрагента и условий экстрагирования на выход суммы флавоноидов из цветков липы сердцевидной

Основными действующими веществами цветков липы сердцевидной являются флавоноиды, которые обладают широким спектром биологической активности, поэтому сумма данных БАВ является перспективной субстанцией для использования в фармации.

В настоящее время цветки липы выпускаются фармацевтической промышленностью в виде измельчённого ЛРС в фильтр-пакетах. Однако вода очищенная, применяемая для получения извлечения, как показали проведённые нами исследования, позволяет лишь незначительно извлечь сумму флавоноидов.

При исследовании процесса экстрагирования цветков липы спирто-водными смесями различной полярности показано, что из всех исследуемых экстрагентов наилучшей экстрагирующей способностью по отношению к флавоноидам обладает спирт 70% (рисунок 1). Было установлено, что повышение температуры при экстракции способствует увеличению выхода суммы флавоноидов в спирто-водный экстрагент. Технологически оптимальной выбрана температура ведения процесса 75-80°С. Выход суммы флавоноидов повысился в 1,6 раза по сравнению с водой очищенной и составил 74,5%.

_ вао

Я* '

s a «0.0 Е 2-

о I 40.0 о S | § 20.0 3 я СО ~ -& 0,0

..................... ..........................65,9 ...................................... П20-2РС

ЫУЬе

Спирт 40<И» Слнрт 50М> Спирт 70<W Спирт 96УЬ

Рисунок 1 - Влияние концентрации спирта на выход флавоноидов из цветков липы сердцевидной при экстрагировании методом мацерации при перемешивании

Определены оптимальные параметры экстрагирования цветков липы сердцевидной с размером частиц 1-3 мм: метод экстрагирования - мацерация при перемешивании, 75-80°С, экстрагент - спирт 70%, время экстрагирования - 45 мин, модуль экстракции - 1:20.

Изучение влияния природы экстрагента и метода экстрагирования на выход суммы флавоноидов из листьев и смеси цветков и листьев липы сердцевидной

Листья липы сердцевидной являются перспективным растительным сырьем, содержащим широкий спектр БАВ, в частности, сумму флавоноидов, и могут наряду с цветками использоваться в качестве сырья для извлечения активного комплекса БАВ липы сердцевидной (Болотова, 2002).

При изучении влияния природы экстрагента и метода экстрагирования на выход флавоноидов из листьев липы были исследованы экстрагенты и методы, давшие лучшие результаты по выходу суммы флавоноидов при экстрагировании цветков липы.

Из данных, представленных на рисунке 2, видно, что при экстракции суммы флавоноидов из листьев липы спиртом 70% методом мацерации с перемешиванием без нагревания извлекается незначительное количество флавоноидов. В то же время интенсификация процесса нагреванием при использовании того же экстрагента, не дала ожидаемых результатов по увеличению количества выделяемых из сырья флавоноидов.

а

£ а

3 Я

80

60

£40 о

3 30

□20-25°С ^-всч:

15,4

-27,5-

38,2

Листья липы» спирт 50®/» Листья дниы, спирт 70%

68,2 71,9

П

Смесь цветков » листьев липы, спнрт ТО'Уо

Рисунок 2 - Влияние экстрагента и метода экстрагирования на выход БАВ из листьев и смеси цветков и листьев липы сердцевидной при экстрагировании методом мацерации при

перемешивании

При экстракции суммы флавоноидов из смеси цветков и листьев липы в соотношении 1:1 по массе спиртом 70% методом мацерации с перемешиванием без нагревания извлекается большее количество флавоноидов, равное 68%. При интенсификации экстракции нагреванием при использовании того же экстрагента, количество выделяемых из сырья флавоноидов увеличилось всего на 3,7%. Таким образом, наибольший выход флавоноидов из смеси липы сердцевидной цветков и листьев, так же как и при экстракции цветков в отдельности, достигается при использовании в качестве экстрагента спирта 70% при 75-80°С и составляет -72%.

Изучение процесса экстрагирования суммы флавоноидов из цветков и листьев липы сердцевидной методом двухфазной экстракции

В работе также исследовали экстрагирование с применением двухфазной системы экстрагентов (ДСЭ) хлористый метилен - этиловый спирт - вода очищенная в объёмном соотношении 25:45:30.

Суммарный выход флавоноидов из цветков липы при использовании «двухфазной экстракции» аналогичен таковому при экстрагировании спиртом 70% методом мацерации при нагревании и составил 73 %. В то же время выход суммы флавоноидов из листьев липы

существенно превысил результат, полученный при использовании спирта 70% даже при проведении процесса при 75-80°С, и составил 90%. Полученный результат, по-видимому, можно объяснить различием в морфологии цветков и листьев и в составе БАВ.

Использование ДСЭ при экстрагировании смеси цветков и листьев липы, так же как и при экстракции цветков в отдельности, обеспечивало наибольший выход флавоноидов из сырья - 73%. Значительно меньший выход суммы флавоноидов из смеси цветков и листьев липы по сравнению с их выходом из листьев в отдельности связан с тем, что абсолютное содержание флавоноидов в листьях меньше, чем в цветках липы.

Проведено сравнение качественного состава извлечений, полученных с применением в качестве экстрагента спирта 70% при нагревании и ДСЭ. Для тонкослойной хроматографии использовали систему зтилацетат - метиловый спирт - вода очищенная (30:5:6), хроматограмму обрабатывали селективным к флавоноидам реактивом Naturstoffreagenz А (1% раствор 2-аминоэтилового эфира дифенилборной кислоты в метиловом спирте; 2% раствор полиэтиленоксида-400 в спирте 96%), просматривали при 360 нм. Показано, что при использовании ДСЭ в спирто-хлористометиленовую фазу переходят в основном производные гидроксикоричной кислоты, а состав спирто-водной фазы отличается от состава спиртового извлечения отсутствием некоторых флавоноидов-производных пента- и тетрагидроксифлавонола.

Разработка технологии совместного экстрагирования суммы флавоноидов из изучаемых видов растительного сырья

Целесообразность проведения экстрагирования суммы флавоноидов из смеси цветков и листьев липы определяли путем сравнения содержания суммы флавоноидов в извлечениях при экстрагировании каждого сырья в отдельности и при совместном экстрагировании (таблица 1).

Таблица 1 - Сравнение содержания суммы флавоноидов в извлечении из смеси ЛРС и из отдельных видов ЛРС (цветков и листьев липы сердцевидной)_

ЛРС Содержание флавоноидов в извлечении в пересчете на 1 г сырья, %

Спирт 70%, (=80°С Хлористый метилен - этиловый спирт-вода в объёмном соотношении 25:45:30

Сумма ЛРС 1,83±0,02 2,60±0,02

Смесь ЛРС 2,30±0,02 2,32±0,01

Как видно из данных, приведённых в таблице 1, экстрагирование смеси цветков и листьев липы позволяет повысить содержание в извлечении флавоноидов по сравнению с экстрагированием каждого сырья по отдельности. В то же время при использовании ДСЭ выход суммы флавоноидов несколько больше при раздельном экстрагировании цветков и листьев, однако в данном случае, как показали опыты, это приводит к увеличению расхода экстрагентов и энергетических затрат. Поэтому оптимальным в дальнейшем было использовано совместное экстрагирование цветков и листьев.

Оптимальными условиями экстрагирования суммы флавоноидов из смеси цветков и листьев липы сердцевидной (1:1 по массе) являются следующие: метод - мацерация спиртом 70% при 75-80°С в течение 45 мин, модуль экстракции - 1:20.

Аналогичным образом была доказана целесообразность проведения совместного экстрагирования цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой.

Установлено, что для получения высокого выхода суммы флавоноидов совместное

экстрагирование смеси цветков и листьев липы и листьев березы (1:1:1 по массе) необходимо проводить методом мацерации спиртом 70% при перемешивании, при 75-80°С в течение 45 мин, модуль экстракции -1:25.

Технология сухих экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной и листьев березы повислой

Сухие экстракты получали по типовой схеме. Сушку проводили в вакуум-сушильном шкафу при 40°С и разряжении до остаточного влагосодержания в экстракте не более 5%. Сухой экстракт измельчали до размера частиц 0,5-1,0 мм.

3.2 Разработка технологии сухого экстракта из листьев смородины черной

Определение оптимальных параметров экстрагирования листьев смородины

Несмотря на то что листья смородины чёрной являются перспективным лекарственным растительным сырьём, номенклатура лекарственных препаратов на их основе чрезвычайно мала. Для разработки сухого экстракта из листьев смородины с целью его дальнейшего введения в состав лекарственного средства нами проведены исследования по определению оптимальных параметров экстрагирования.

Помимо флавоноидов основными действующими веществами листьев смородины являются аскорбиновая кислота, дубильные вещества, кумарины, эфирные масла. Все вышеперечисленные соединения проявляют антиоксидантные свойства, поэтому целесообразным представляется использование показателя антиоксидантной активности (АОА) для оценки суммарного содержания БАВ в лекарственном растительном сырье и извлечениях из него. Оценку АОА извлечений проводили методом кулонометрического титрования электрогенерированным бромом.

Установлено, что уровень АОА и содержание суммы флавоноидов в извлечениях из листьев смородины зависят от природы экстрагента, температурного режима процесса экстрагирования (рисунок 3). Так, АОА максимальна, а выход флавоноидов из листьев смородины наибольший в извлечении, полученном при экстрагировании водой очищенной при 75-80°С.

70

60

50

и

< 40

И

3 30

А

Л 20

и

10

0

6¥мо

25,8 ' 1157

□ Флавоноиды □ АОА

48^5

44,8

42,8

314

й

32,3

-гЬ-1

6 7 61

600 500 400 ;

зоо; 200

о 100 <

о

Вода Вода Сппрт20И, СгшрМОТ,, спирт ЗОН, Спирт 70%. спирт969».

очищенная, очищенная, 20°С 20вС 20°С 20°С 20-С

20°С 7?-80°С

Рисунок 3 - Влияние природы экстрагента и температуры на выход суммы флавоноидов и показатели АОА извлечений из листьев смородины чёрной при экстрагировании методом мацерации при перемешивании Установлено, что с увеличением модуля экстракции от 1:25 до 1:30 полнота извлечения БАВ остаётся практически неизменной, однако при этом концентрация флавоноидов снижается вследствие получения более разбавленных извлечений и, как следствие, падает АОА, В качестве оптимального было выбрано соотношение 1:25. Показано, что при продолжительности экстракции

более 45 мин выход суммы флавоноидов из сырья и АОА извлечений остаются неизменными.

Однако при экстрагировании листьев смородины водой очищенной при 75-80°С концентрация аскорбиновой кислоты в извлечении в пересчёте на сухое сырье составляет всего 5,6±0,3 мг% (выход 6,6%), так как повышение температурного воздействия способствует ей разрушению. Поэтому для оптимизации выхода всех целевых БАВ и обеспечения максимальной АОА готового продукта использовали бисмацерацию при различных режимах: сырье экстрагировали водой очищенной при 20°С в соотношении 1:10 (извлечение (1)), шрот повторно заливали водой очищенной в соотношении 1:15, экстрагировали при 75-80°С (рисунок 4) (извлечение (2)).

9Sj ■ 95т

Выход флавоноидов, % Выход аскорбиновой кислоты, %

□ Показателя извлечения 1 нПоказагсш швлелеяпл 2 ^Суммарное значение для двух из&лелсннй

Рисунок 4 - Выходы БАВ в извлечения из листьев смородины черной, полученные дробной

мацерацией

Концентрация аскорбиновой кислоты в извлечении (1) в пересчете на сухое сырье составляет 85±4 мг%. Значение АОА извлечения (1) составило 144 Кл/100 мл, а извлечения (2) -107 Кл/100 мл, составляя в сумме 251 Кл/100 мл, что превышает уровень АОА извлечения, полученного при моноэкстракции (210 Кл/100 мл). Таким образом, получая дробные извлечения, обеспечивали максимальные выходы БАВ и показатели АОА, а также оптимальный модуль экстракции (1:25).

Разработка технологии сухого экстракта из листьев смородины

При получении сухих экстрактов было установлено, что наибольшей АОА обладает сухой экстракт, полученный из извлечения 2, за счет более высоких показателей содержания флавоноидов. Однако аскорбиновая кислота в полученных по стандартной схеме сухих экстрактах не была обнаружена.

С целью сохранения аскорбиновой кислоты в сухом экстракте на стадии получения извлечения 3 в качестве экстрагента вместо воды очищенной использовали 0,008 н водный раствор ЭДТА. ЭДТА был выбран в качестве стабилизатора, так как, являясь косвенным антиоксидантом, он способствует сохранению аскорбиновой кислоты в извлечении и экстракте. Содержание аскорбиновой кислоты в сухом экстракте (3) составило 169±9 мг% с выходом 95%.

3.3 Изучение фармакологической активности сухих экстрактов из липы сердцевидной, березы повислой и смородины чёрной

При пероральном введении сухих экстрактов ЛД50 определить не удалось, так как даже в дозе 10 г/кг они не вызывали гибели животных, симптомов отравления также не отмечали. Используя градацию степеней токсичности по Hodge и Sterner, данные сухие экстракты можно отнести к практически нетоксичным веществам.

Анальгезирующее действие сухих экстрактов из цветков и листьев липы, листьев березы и их смеси оценивали по изменению болевой чувствительности у животных при химическом раздражении (уксуснокислые «корчи»). Введение экстрактов уже с дозы 50 мг/кг массы тела животного сопровождалось увеличением латентного периода появления «корчей» и снижением на 50% и более количества «корчей». По силе действия исследуемые экстракты были сопоставимы, либо превосходили по эффективности препарат сравнения метамизол натрия.

На модели гистотоксической гипоксии и модели острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме установлено наличие антигипоксической активности у изучаемых сухих экстрактов в дозе от 100 мг/кг, сопоставимого с действием препаратов сравнения гутимина и антистена.

Сухой экстракт из смеси цветков и листьев липы и листьев березы обладает диуретическим действием в дозе от 50 мг/кг. По силе оно сопоставимо с действием препарата сравнения гипотиазидом. При этом токсического действия на почки не наблюдалось.

Глава 4. Стандартизация сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья

4,1 Изучение качественного состава сухого экстракта из цветков липы сердцевидной

Для изучения качественного состава и проведения стандартизации полученных сухих экстрактов по флавоноидам, как основным действующим веществам, была поставлена задача выделить комплекс характерных флавоноидов из цветков липы как наиболее богатого флавоноидами сырья из изучаемых видов.

В результате изучения ВЭЖХ-хроматограммы экстракта цветков липы и УФ-спектров содержащихся в нём веществ, определено, что интервал времени удерживания, при котором элюируются в основном вещества флавоноидной природы, составляет от 17 до 25 мин. Экстракт растворили в воде очищенной и подвергли последовательной экстракции в системе «жидкость-жидкость» с помощью следующих растворителей: гексан, этилацетат, бутанол. Для дальнейшей работы были выбраны фракции, полученные при экстракции этилацетатом и бутанолом, так как анализ методом ТСХ и ВЭЖХ, а также УФ-спектров содержащихся в них веществ показал относительное сходство их составов, наличие искомых веществ. Данные фракции объединили и подвергли жидкостной колоночной хроматографии на неионообменной адсорбирующей смоле 01аюп НР-20 с применением вакуума. Элюирование проводили последовательно следующими растворителями с уменьшением полярности элюента: водой очищенной, смесью воды очищенной и метилового спирта в объёмных соотношениях 8:2, 6:4, 4:6 и 2:8, метиловым спиртом 96,8%, смесью метилового спирта и ацетона в объёмном соотношении 1:1, ацетоном 100%. В результате анализа методом ТСХ после обработки реактивом На1иге1оГ{геа£епг А установлено, что фракция, полученная при элюировании метиловым спиртом 80%, содержит больше веществ флавоноидной природы. Кроме того, данная часть экстракта не содержит хлорофиллов, а количество Сахаров минимально. С целью дальнейшего разделения и выделения БАВ флавоноидной природы данную фракцию подвергли колоночной хроматографии на сорбенте 8ерНа(1ех ЬН-20. Исходя из результатов ВЭЖХ некоторые объединённые фракции были повторно направлены в колонку с сорбентом 5ерНа(1ех ЬН-20, остальные фракции, а также некоторые после второй колоночной хроматографии подвергли полупрепаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии. После выделения БАВ после хроматографии на 5ер11а(1ех ЬН-20 и полупрепаративной ВЭЖХ

сравнили УФ-спектры и время удерживания всех выделенных веществ. Во избежание анализа идентичных субстанций по результатам сравнения была составлена таблица корреляций и все аналогичные вещества исключены из рассмотрения.

Выделенные вещества анализировали методом ядерного магнитного резонанса (ЯМР) на ЯМР-спектрометре DRX500 (Bruker, Германия) при 500 Гц. Для каждого из веществ получали одномерный протонный ЯМР (ПМР) и двумерный протонный H/H-COSY спектры.

Было получено доминирующее соединение экстракта из цветков липы, спектр которого совпадает с таковым для кемпферол-3-р-0-(6-0-транс-пара-кумароил)глюкопиранозида (тилирозида), выделенного из земляники садовой (Fragaria ananassa Duch.). Спектр ЯМР 'н (метанол-<4 500 МГц) вещества «105-124 semi 3»: 8,02 (2Н, d, J=9,0, Н-3', Н-5'), 7,42 (1Н, d, J=15,9, Н-7"'), 7,34 (2Н, d, J=8,6, Н-2", Н-6"), 6,83 (2Н, dd, J=8,8, 11,9, Н-2', Н-6', Н-3", Н-5"), 6,34 (1Н, á, 1=2,1, Н-8), 6,16 (1Н, d, J=2,l, Н-6), 6,10 (1Н, d, J=15,9, Н-8"), 5,27 (1Н, d, 1=7,5, Н-1"), 4,32 (1Н, dd, J=ll,8, 2,2, H-6"b), 4,21 (1Н, dd, J=ll,8, 2,2, H-6"a), 3,55-3,45 (3H, m, Н-2", Н-3", H-5"), 3,31-3,28 (1H, m, H-4"). Ha H/H-COSY спектре вещества наблюдаются кросс-пики протонов бензольных колец: Н-3' / Н-5' и Н-2' / Н-6', Н-8" и Н-7", Н-2" / Н-6" и Н-3" / Н-5", а также картина расщепления, характерная для остатка глюкозы.

Из экстракта цветков липы помимо тилирозида были выделены и идентифицированы 10 соединений флавоноидной природы: кверцетин, астрагалин (кемпферол-3-O-p-D-глюкопиранозид), афзелин (кемпферол-З-О-а-Ь-рамнопиранозид), винсетоксикозид В (кверцетин-7-0-а-Ь-рамнопиранозид), госсипитрин (госсипетин-7-0-Р-0-глюкопиранозид), гуаяверин (кверцетин-З-О-а-Ь-арабииопиранозид), изокверцитрин (кверцетин-З-О-р-О-глюкопиранозид), кверцитрозид (кверцетин-З-О-а-Ь-рамнопиранозид), прунин (нарингенин-7-O-p-D-глюкопиранозид), эриодикгиол. Семь последних впервые обнаружены в цветках липы сердцевидной.

4.2 Разработка состава и метода анализа комплекса характерных флавоноидов цветков липы сердцевидной

Был разработан состав комплекса индивидуальных флавоноидов, который включает 9 флавоноидов: прунин, изокверцитрин, эриодиктиол, гвайяверин, кверцитрозид, астрагалин, афзелин, кверцетин и тилирозид. Составлена программа анализа комплекса методом ВЭЖХ с применением изократического элюирования вместо градиентного (таблица 2). В качестве подвижной фазы использовали смесь метиловый спирт - натрия трифторацетата раствор 0,01%, подаваемую со скоростью 1,0 мл/мин.

Таблица 2 - Параметры подвижной фазы при анализе методом ВЭЖХ комплекса индивидуальных флавоноидов____

Время, мин. Концентрация метилового спирта, %

0 10

5 10

15 36

60 36

80 100

90 100

95 10

105 10

4.3 Изучение качественного состава экстрактов из листьев липы сердцевидной, берёзы повислой и смородины чёрной сопоставлением их с комплексом индивидуальных флавоноидов Сухие экстракты проанализировали в одной последовательности с комплексом индивидуальных флавоноидов цветков липы по разработанной ранее программе. Результаты анализа полученных данных путем сопоставления хроматограмм экстрактов и комплекса индивидуальных флавоноидов, а также УФ-спектров содержащихся в них БАВ (таблица 3).

Таблица 3 - Сравнение качественного состава экстрактов из ЛРС и комплекса индивидуальных флавоноидов

Вещество Экстракт из цветков липы сердцевидной Экстракт из листьев липы сердцевидной Экстракт из листьев берёзы повислой Экстракт из листьев смородины чёрной (20°С) Экстракт из листьев смородины чёрной (80°С)

Прунин + - - - -

Изокверцитрин + + + + +

Эриодиктиол + + + - +

Гуаяверин + + - + +

Кверцитрозид + + + - -

Астрагалин + + - + +

Афзелин + - - - -

Кверцетин + - + - -

Гилирозид + + - - -

Из данных таблицы 4 видно, что все флавоноиды активного комплекса содержатся только в экстракте из цветков липы. Экстракты из остальных видов исследуемого сырья различаются отсутствием определенных флавоноидов: прунина и афзелина - во всех экстрактах, астрагапина и гвайяверина - в экстракте из березы, эриодиктиола - в экстракте из смородины (20°С), кверцитрозида - во всех экстрактах из смородины, кверцетина - в экстрактах из листьев липы и смородины. Изокверцитрин характерен для всех изучаемых экстрактов.

Однако в листьях смородины содержится значительное количество аскорбиновой кислоты и проантоциандинов, а в берёзе - проантоциандинов и даммарановых тритерпеноидов, которые отчасти обусловливают высокую биологическую активность извлечений из данных видов сырья (Гл. 1). Поэтому создание экстракта на основе всех четырёх видов изучаемого ЛРС представляет большую ценность в качестве фитопрепарата с широким спектром биологической активности.

4.4 Изучение качественного состава и стандартизация сухих экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной

Изучение качественного состава биологически активных веществ сухих экстрактов из цветков и листьев липы и листьев берёзы

Качественный анализ сухих экстрактов из цветков липы сердцевидной (1), смеси цветков и листьев липы сердцевидной (2) и смеси цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой (3) проводили с помощью качественных реакций и методом тонкослойной хроматографии. Для качественного анализа сухих экстрактов методом ТСХ также использовали систему этилацетат - метиловый спирт - вода очищенная (30:5:6), детектировали после обработки реактивом NaturstofГreagen2 А при Х=360 им.

В сухом экстракте из смеси цветков и листьев липы и листьев берёзы обнаружены тритерпеновые сапонины. В исследуемых сухих экстрактах найдены флавоноиды, производные

3,5,7,3',4'-пента- и 3,5,7,3'(4')-тетрагидрокси флавонола, производные гидроксикоричной кислоты и хлорофиллы. На хроматограмме всех рассматриваемых экстрактов найдены 9 флавоноидов, входящих в состав комплекса индивидуальных флавоноидов.

1М Вещество 11Г Вещество КГ Вещество

0,39±0,01 астрагалин 0,53±0,01 изокверцитрин 0,59±0,01 тилирозид

0,42±0,01 гвайяверин 0,57±0,01 прунин 0,65±0,01 кверцетин

0,50±0,01 кверцитрозид 0,58±0,01 афзелин 0,88±0,01 эриодиктиол

Изучение качественного состава биологически активных веществ сухого экстракта из листьев смородины

Идентификацию флавоноидов и аскорбиновой кислоты в сухих экстрактах из листьев смородины черной проводили с помощью качественных реакций и методом тонкослойной хроматографии. Для качественного анализа сухих экстрактов методом ТСХ использовали следующие системы:

- для разделения флавоноидов: этилацетат — метиловый спирт - вода очищенная (30:5:6), хроматограмму обрабатывали реактивом №Шг51о1Ггеа£епг А, Х=360 нм;

- для идентификации аскорбиновой кислоты: уксусная кислота ледяная - ацетон - метиловый спирт - бензол (5:5:20:70), хроматограмму обрабатывали раствором фосфорно-молибденовой кислоты с последующим нагреванием в сушильном шкафу.

В сухих экстрактах из листьев смородины обнаружены флавоноиды, производные пента- и тетрагидрокси флавонола, производные гидроксикоричной кислоты. На хроматограмме экстрактов найдены 4 флавоноида, входящих в состав комплекса индивидуальных флавоноидов: астрагалин, гуаяверин, изокверцитрин и эриодиктиол. Таким образом, полученный комплекс может быть использован для стандартизации изучаемых сухих экстрактов.

Установлено, что в состав флавоноидов сухого экстракта, полученного экстракцией при 75-80°С, входит больше флавоноидов по сравнению с сухим экстрактом, полученном при 20°С. При этом аскорбиновая кислота обнаружена только в последнем (ЯГ=0,30±0,01).

Стандартизация сухих экстрактов из цветков и листьев липы, листьев берёзы и листьев смородины

На основании данных о качественном и количественном составе экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев березы повислой и листьев смородины черной были определены основные показатели их качества, в которые вошли описание, подлинность, количественное содержание флавоноидов, остаточное влагосодержание, тяжелые металлы, остаточные органические растворители, упаковка, условия хранения и срок годности.

Глава 5. Разработка состава и технологии лекарственных форм на основе сухих экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной

5.1 Разработка состава и технологии сиропа на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной

На основании предварительных исследований, а также с целью повышения удобства дозирования и применения, увеличения биодоступности действующих веществ и устойчивости экстрактов к воздействию внешних факторов, в качестве лекарственных форм нами были выбраны сироп и гранулы. Был разработан состав и технология сиропа на основе сухого экстракта из смеси

цветков и листьев липы (СЭЛСЦЛ) состава, представленного в таблице 4.

Таблица 4 - Состав сиропа на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной __

Компонент Содержание компонента, % масс.

СЭЛСЦЛ 2,0

Камедь ксантана(Е415) 0,2

Сорбиновая кислота(Е200) 0,2

Сахар-рафинад 64,0

Сорбит(Е420) 20,0

Вода очищенная до 100

В ходе получения сиропа на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы готовили сахарный сироп по стандартной методике. На поверхность охлаждённого до 50-60°С сахарного сиропа тонким слоем рассыпали сухой экстракт. Было замечено, что при превышении данной температуры, частицы экстракта начинают слипаться и образуют крупные клейкие комки, не поддающиеся разделению. Поэтому нами было предложено проводить смешение при температуре, позволяющей сохранить дисперсность экстракта. Загуститель (камедь ксантана) для предотвращения комкования вводили в виде предварительно подготовленной смеси со всеми сухими компонентами. Полученную массу тщательно перемешивали при 50-55°С, фильтровали в горячем виде. Сироп помещали в стеклянные флаконы, этикетировали, хранили при температуре не выше 25°С. Разработана технологическая схема производства сиропа (Приложение А).

Разработан проект ФС на сироп «Липолицвет» на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной. Показатели качества сиропа приведены в таблице 5. Таблица 5 -11оказатели качества сиропа «Липолицвет»_

Наименование показателя Метод определения Значение параметра

1 2 3

Описание Органолептический Суспензия светло-желтого цвета, со специфическим приятным сладким запахом и нейтральным сладким вкусом

Подлинность тех В УФ свете на хроматограмме испытуемого раствора должны присутствовать девять основных пятен с характерным положением и цветом флуоресценции

Плотность ГФ XI, вып. 1, с. 24 От 1,30 до 1,32 г/см3

Динамическая вязкость ГФХН, вып. I.e. 47 От 142,6 до 157,6 мПа«с

рН ГФХ1, вып. 1,с. 113, потенциометрический Величина рН среды 10% водного раствора должна составлять от 6,65 до 7,35

Объём содержимого упаковки ОСТ 64-492-85 От 95 до 105 мл

Микробиологическая чистота ГФ XI, вып 2, с. 193 Изменение №3 Категория ЗБ

Количественное определение Спектрофотометрический Содержание суммы флавоноидов в 10 мл сиропа должно быть не менее 10,0 мг

Упаковка По 100 мл в наполненных доверху стеклянных флаконах оранжевого стекла, укупоренных пробками полиэтиленовыми и крышками пластмассовыми навинчиваемыми. Каждый флакон вместе с инструкцией по применению помещают в пачку картонную.

Маркировка В соответствии с разделом «Маркировка» ФС

Хранение В защищенном от света месте при температуре не выше 25 град. С

Срок годности 2 года 6 мес.

Изучение жаропонижающего действия сиропа на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной

Исследование проведено на экспериментальной модели - пирогенаповой лихорадке. Изучаемый сироп в дозе от 1,0 мг/кг массы тела животного максимально способствовал снижению температуры, по силе действия превосходил препарат сравнения сироп «Калпол» как при профилактическом, так и лечебном введении.

5.2 Разработка состава и технологии гранул на основе смеси сухого экстракта из цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой и сухого экстракта из листьев смородины чёрной

При разработке состава гранул были оценены основные технологические характеристики сухого экстракта из цветков липы сердцевидной (СЭЛСЦ), сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной (СЭЛСЦЛ), сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой (СЭСЛРС) и сухого экстракта из листьев смородины черной (СЭСЧЛ) и смеси СЭСЛРС и СЭСЧЛ (СЭСм) приведены в таблице 6.

Таблица 6 - Основные технологические характеристики экстрактов из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев березы повислой, листьев смородины чёрной и их смесей_

Показатель СЭЛСЦ СЭЛСЦЛ СЭСЛРС СЭСЧЛ СЭСм

2 3 4 5 6

Форма и размер частиц Коричневые с красноватым и желтоватым оттенком пластинчатые частицы и их фрагменты размером от 0,1 до 0,5 мм Коричнево-зелёные с желтоватым оттенком пластинчатые частицы и их фрагменты размером от 0,1 до 0,5 мм Коричневые пластинчатые частицы и их фрагменты размером от 0,1 до 0,5 мм Коричневые с зеленоватым оттенком пластинчатые частицы и их фрагменты размером от 0,1 до 0,5 мм Коричневые с красноватым, желтоватым и зеленоватым оттенком пластинчатые частицы и их фрагменты размером от 0,1 до 0,5 мм

Насыпная плотность, г/см3 0,666±0,032 0,707±0,035 0,671±0,032 0,732±0,031 0,702±0,025

Угол естественного откоса, град 45±1,3 40±1,7 35±1,б 60±2,5 53±2,0

Сыпучесть, г/с 5,0±0,1 6,2±0,2 7,5±0,2 1,4±0,1 3,1±0,1

Остаточное влаго-содержание, % 0,90±0,13 0,33±0,07 0,28±0,07 1,23±0,12 0,35±0,04

Растворимость в воде очищенной, % 78,0±3,9 72,1±2,7 66,0±2,8 81,0±4,0 75,4±3,1

Умеренно растворим

Влагопогло-щение, % (равновесн.) при 75,5% 24,0±1,2 20,1±0,8 16,6±0,3 22,5±0,7 23,5±0,6

при 100% 58,8±1,5 48,2±1,4 25,6±0,4 69±1,3 77,7±2,8

Для улучшения технологических и физико-химических показателей суммарного сухого экстракта был выбран метод влажного гранулирования продавливанием. Разовую дозу сухих экстрактов для введения в состав гранул рассчитывали, исходя из результатов изучения их фармакологической активности и литературных данных.

В качестве наполнителей исследовали смесь 85% лактозы моногидрата и 15% белого кукурузного крахмала («Starlac», Roquette, Франция); крахмал растворимый (декстрин); сахарозу; маннит кристаллический («Pearlitol 160 С», Roquette, Франция). Критерием выбора вспомогательных веществ была их растворимость в воде очищенной. В качестве увлажняющего раствора использовали водный метилцеллюлозы 5% раствор как наиболее часто применяемое, хорошо изученное вспомогательное вещество.

С целью выбора наполнителя были получены гранулы следующих составов: СЭСм - 51аг1ас и СЭСм - маннит 1:2 по массе; СЭСм - крахмал растворимый - сахароза 1:1:1 по массе. На основании изучения физико-химических и технологических свойств полученных гранул для дальнейшей работы в качестве наполнителя был выбран маннит.

При определении распадаемости гранул было отмечено, что большая часть липофильной составляющей сухого экстракта сосредоточена на поверхности среды. Для равномерного распределения гидрофобной части гранул в растворе нами предложено вводить в состав гранул твин-80 в количестве 1%.

Для уточнения состава разрабатываемой лекарственной формы исследовали физико-химические и технологические свойства гранул при следующих соотношениях СЭСм : маннит: 1:0,5; 1:1; 1:2; 1:3 и 1:4. Установлено, что при увеличении доли сухого экстракта более 65% или доли наполнителя от 70% технологические свойства массы были неудовлетворительными. В связи с этим, на основании проведенного комплекса исследований разработан оптимальный состав гранул, представленный в таблице 7. Процессуальная схема получения гранул приведена в Приложении Б.

Таблица 7 - Состав гранул на основе смеси сухих экстрактов из липы сердцевидной, березы

Компонент Содержание

% В пересчёте на 1 дозу, г

СЭСм 33,2 0,9300

Маннит кристаллич. 66,4 1,8600

Метилцеллюлоза 0,3% в пересчете на сухую МЦ 0,0084

Твин-80 1,0% 0,0028

Итого: 100 2,8012

Разработаны технологическая схема производства и проект ФС на гранулы «ЛИБС» на основе смеси сухого экстракта из цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой и сухого экстракта из листьев смородины чёрной. Показатели качества гранул

приведены в таблице 8.

Таблица 8 - Показатели качества гранул <сЛИБС»

Наименование показателя Метод определения Значение параметра

1 2 3

Описание Органолептический Гранулы неправильной формы размером 0,5-2,0 мм коричневого цвета

Подлинность тех Качественные реакции Девять пятен по расположению и окраске должны соответствовать пятнам флавоноидов характерного комплекса. Одно пятно по расположению и окраске должно соответствовать аскорбиновой кислоте И в щелочной, и в кислой среде должна образовываться стойкая пена. Красно-фиолетовое окрашивание при добавлении серной кислоты концентрированной

Распадаемость ГФХ1, вып. 2, стр. 158159 Должны распадаться в не более чем за 15 мин

Потери в массе при высушивании, % ГФ XI, вып. 2, стр. 161 Не более 3%

Микробиологическая чистота ГФХ1, вып 2, с. 193 Изменение №3 Категория ЗБ

Количественное определение Спектрофотометричес-кий Содержание флавоноидов в 1 упаковке должно быть не менее 155,0 мг

Продолжение таблицы 8

1 2 1 3

Упаковка Гранулы упаковывают в ламинированные бумажные пакеты саше. По 10 контурных упаковок вместе с инструкцией по применению помещают в картонную пачку

Маркировка В соответствии с разделом «Маркировка» ФС

Хранение В защищенном от света месте при температуре не выше 25 град. С

Срок годности 2 года

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведённые исследования позволили получить следующие результаты:

1. Изучен процесс экстрагирования суммы флавоноидов, как основных активных веществ, из цветков и листьев липы сердцевидной, листьев берёзы повислой и листьев смородины чёрной различными экстрагентами с применением мацерации, мацерации с перемешиванием, двухфазной экстракции при разных модулях экстракции, температуре, времени. Показано, что наилучшей экстрагирующей способностью по отношению к флавоноидам липы и берёзы обладает спирт 70% при проведении процесса экстрагирования при температуре 80°С. При этом выход флавоноидов из липы сердцевидной цветков составляет 74,5%.

2. Получены сухие экстракты из цветков и листьев липы и листьев берёзы. Разработана технология сухого экстракта из листьев смородины с использованием на стадии экстрагирования 0,008 н водного раствора ЭДТА как стабилизатора с целью сохранения в сухом экстракте аскорбиновой кислоты. Содержание аскорбиновой кислоты в сухом экстракте составляет 169±9 мг%. Предложены показатели качества сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной и листьев берёзы повислой и сухого экстракта из листьев смородины чёрной.

3. Из экстракта цветков липы с применением физико-химических, спектральных и хроматографических методов выделены и идентифицированы одиннадцать соединений флавоноидной природы. Семь флавоноидов впервые обнаружены в цветках липы сердцевидной. Разработан комплекс индивидуальных флавоноидов, который включает девять флавоноидов: прунин, изокверцитрин, гуаяверин, афзелин, эриодиктиол, кверцитрозид, астрагалин, кверцетин и тилирозид.

4. С помощью комплекса индивидуальных флавоноидов изучены составы сухих экстрактов из листьев липы, листьев берёзы и листьев смородины. В исследуемых сухих экстрактах обнаружен ряд флавоноидов, входящих в состав выделенного характерного комплекса - астрагалин, гвайяверин, изокверцитрин, эриодиктиол.

5. Показано, что разработанные сухие экстракты из цветков и листьев липы, листьев берёзы и листьев смородины относятся к практически не токсичным препаратам. Установлено наличие выраженной антигипоксической, анальгезирующей, диуретической активности сухих экстрактов.

6. Разработаны состав и технология сиропа с сухим экстрактом из цветков и листьев липы с дозировкой 2,0 г (100 мг флавоноидов) на 100 мл. Предложены и обоснованы основные показатели качества. Разработан проект ФС на сироп «Липолицвет». Определён срок годности препарата - 2 года 6 мес. Установлено, что сироп с сухим экстрактом цветков и листьев липы сердцевидной обладает жаропонижающим действием.

7. Разработаны состав и технология гранул смеси сухого экстракта из цветков и листьев липы и

листьев берёзы и сухого экстракта из листьев смородины с дозировкой 0,93 г смеси сухих экстрактов (43,7 мг флавоноидов). Установлен оптимальный компонентный состав гранулируемой массы, определены технологические режимы гранулирования. Предложены и обоснованы их основные показатели качества. Разработан проект ФС на гранулы «ЛИБС». Определён срок годности препарата - 2 года.

Результаты данного диссертационного исследования по разработке лекарственных форм на основе сухих экстрактов из ЛРС могут быть рекомендованы для расширения ассортимента лекарственных препаратов для лечения и профилактики ОРИ.

Перспективы дальнейшей разработки темы диссертационного исследования заключаются в разработке опытно-промышленного регламента, проведении доклинических и клинических исследований и продолжении внедрения предложенных гранул и сиропа в производство.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Медведева, Т. М. Разработка технологии сухого экстракта липы сердцевидной цветков / Т. М. Медведева // Тезисы докладов межвузовской научной конференции студентов и молодых учёных «Фармация в XXI веке: эстафета поколений» посвящённой 90-летию СПХФА 23-24 апреля 2009 г.

- СПб.: Изд-во СПХФА, 2009. - С. 167-168.

2. Медведева, Т. М. Разработка технологии сухого экстракта из цветков липы сердцевидной, обогащенного комплексом БАВ, и суппозиториев на его основе/ Т. М. Медведева, В. В. Сорокин, И. Е. Каухова и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010. - Вып. 65. - С. 211213.

3. Болотова, В. Ц. Влияние экстракта из цветков липы на устойчивость животных к гистотоксической гипоксии / В. Ц. Болотова, Т. М. Медведева, И. Е. Каухова // УГМА. Материалы ежегодной конференции «Фармация и общественное здоровье». Сборник статей. 25 февраля 2010 г. / УГМА. - Екатеринбург, 2010. - С. 223-225.

4. Медведева, Т. М. Разработка технологии и изучение анальгезирующей активности сухого экстракта липы сердцевидной цветков / Т. М. Медведева // УГМА. Материалы ежегодной конференции «Фармация и общественное здоровье». Сборник статей. 25 февраля 2010 г. / УГМА.

- Екатеринбург, 2010. - С. 251-253.

5. Медведева, Т. М. Разработка технологии и изучение фармакологической активности гранул сухого экстракта листьев липы сердцевидной / Т. М. Медведева, И. Е. Каухова, В. Ц. Болотова // Здоровье - основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения : труды пятой Всерос. науч-практ. конф. с междунар. участием. - СПб. : Изд-во Политехи, ун-та, 2010. - С. 365.

6. Медведева, Т. М. Изучение фармакологической активности сиропа липы сердцевидной / Т. М. Медведева// Медицинский академический журнал. -2010. - Т. 10. -№5. — С. 168-169.

7. Медведева, Т. М. К вопросу о разработке технологии берёзы повислой листьев экстракта сухого / Т. М. Медведева // Научно-практическая конференция, посвящённая 65-летию факультета промышленной технологии лекарств : сборник научных трудов. - Часть 1. - СПб. : Изд-во СПХФА, 2010.-С. 116-119.

8. Каухова, И. Е. Инновационные технологии экстрагирования лекарственного растительного сырья в производстве фитопрепаратов / И. Е. Каухова, В. В. Сорокин, Т. М. Медведева // Инновационные материалы и технологии в химической и фармацевтической отраслях промышленности: Сборник докладов международной конференции с элементами научной школы молодежи / под ред. Проф. Меньшутиной Н. В. - М.: Международный учебно-научный центр трансфера фармацевтических и биотехнологий, 2010. - С. 37-38.

9. Medvedeva, Т. М. Development of an Extraction Procedure of Betula Pendula and Tilia Cordata Dry Extract / Т. M. Medvedeva // Abstracts Book of the 15th International Congress "PHYTOPHARM 2011", Nuremberg, Germany, 25-27 July 2011. - St. Petersburg, 2011. - P. 74.

10. Medvedeva, Т. M. Development of Technology and Standardization Methods of Folia Betula Pendula Dry Extract / Т. M. Medvedeva // Abstracts Book of the International Conference "Renewable Wood and Plant Resources: Chemistry, Technology, Pharmacology, Medicine", St. Petersburg, 21-24 June 2011. - St. Petersburg, 2011. -P. 134-135.

11. Медведева, Т. M. Изучение нейротропной активности гранул на основе сухого экстракта липы сердцевидной листьев / Т. М. Медведева, В. Ц. Болотова, И. Е. Каухова и др. // Сибирский медицинский журнал. -2011. - Т. 26. -№2. - С. 78-81.

12. Медведева, Т. М. Препараты на основе экстрактов липы: получение и фармакологическая активность / Т. М. Медведева, В. В. Сорокин, В. Ц. Болотова, И. Е. Каухова// Фармация. -2011. -№7.-С. 34-36.

13. Медведева, Т. М. Анализ и изучение антиоксидантной активности извлечений из смородины черной листьев / Т. М. Медведева, Е. А. Ломкова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2011. - Вып. 66. - С. 289-291.

14. Медведева, Т. М. К вопросу о разработке технологии сухого экстракта смородины чёрной листьев / Т. М. Медведева, Е. А. Ломкова // Материалы II научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фармацевтической технологии», 20-21 ноября 2011 г. - Харьков, 2011. - С. 51.

15. Медведева, Т. М. Разработка технологии смородины чёрной листьев экстракта сухого / Т.М. Медведева, И.Е. Каухова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия Медицина. Фармация. - 2012. -№ 10 (129).-Вып. 18/2. - С. 118-122.

16. Медведева, Т. М. Идентификация фенольных соединений в сухом экстракте липы сердцевидной цветков / Т. М. Медведева // Сборник материалов III Всероссийской научной конференции студентов и аснирантов с международным участием «Молодая фармация -потенциал будущего», Санкт-Петербург, 25-26 апреля 2013 г. - СПб. : Изд-во СПХФА, 2013. - С. 182.

17. Medvedeva, Т. М. Composition investigation of the extracts from medicinal plant raw material with the aim to create new anti-inflammatory drugs / Т. M. Medvedeva // Abstracts Book of IALS/BMEP STUDENTS' CONFERENCE, University of Massachusetts, 26-28 April 2013. - Boston, USA, 2013. -P. 34-35.

Приложение А

Технологическая схема производства сиропа «Липолицвет» на основе сухого экстракта из смеси цветков и листьев липы сердцевидной

ВР.1.1 Получение воды очищенной

ВР.2.1 Подготовка воздугя

ВР.2.2 Приготовление моющих и дез. растворов

ВР.2.3 Подготовка помещений и оборудования

ВР.2.4 Подготовка персонала

ВР.2.5 Подготовка технологической одежды

ВР.3.1 Приготовление экстрагента

ВР.З.2 Измельчение растительного сырья

ВР.3.3 Взвешивание компонентов

ТП.5.1 Вакуум-выпаривание извлечения

ТП.5.2 Сушка

ТП.6.1 Приготовление сагарного сиропа

ТП.6.2 Смешение компонентов

ТП.6.3 Фильтрация сиропа

УМО.7.1 Фасовка

УМО.7.2 Упаковка и маркировка

ВР.1 Кх, К. Подготовка воды

1

ВР.2 Санитарная подготовка производства

ВР.З К„ к,, к.

Ьс

Стоки 1

сВР.1

Подготовка сырья

Потери

наТП.5

ТП.4.1 Экстрагирование ТП.4 Экстракция растительного сырья

К.К,

ТП.4.2 Фильтрование —► Шрот |

Потери

ТП.5 Получение сухого экстракта

с ВР.З 1 1—4

ТП.6 к,. К, Приготовление сиропа

Н Потери |

УМО.7

Потери I

Фасовка и упаковка

~Н Потери

На склад ГП

Кт, К%. Км - технологический, химический, микробиологический контроль

Приложение Б

Процессуальная схема производства гранул «ЛИБС» на основе смеси сухих экстрактов из липы сердцевидной, берёзы повислой и смородины чёрной

Смешение и увлажнение

• Г

^^""гранулируемая масса

1

Влажная грануляция

^^^Влажные гранулы^^^

Сушка гранул, сухая грануляция

С

Гранулы смеси сухих экстрактов

Фасовка, упаковка

с

Готовый продукт

3

На правах рукописи

Медведева Татьяна Михайловна

ТЕХНОЛОГИЯ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ ЛИПЫ СЕРДЦЕВИДНОЙ, БЕРЁЗЫ ПОВИСЛОЙ, СМОРОДИНЫ ЧЁРНОЙ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ИХ ОСНОВЕ

14.04.01 —технология получения лекарств

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Печать Н. В. Андриановой

Подписано к печати 28.06.2013. Формат 60 х 90/16. Бумага тип. Печать ризограф. Гарнитура «Тайме». Печ. л.3,0. Тираж 100 экз. Заказ 1117

Санкт-Петербург 2013