Автореферат и диссертация по медицине (14.03.01) на тему:СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ (экспериментально-морфологическое исследование)

ДИССЕРТАЦИЯ
СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ (экспериментально-морфологическое исследование) - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ (экспериментально-морфологическое исследование) - тема автореферата по медицине
Бреусенко, Дмиттрий Витальевич Санкт-Петербург 2012 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.03.01
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ (экспериментально-морфологическое исследование)

На правах рукописи

БРЕУСЕНКО Дмитрий Витальевич

СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ (экспериментально-морфологическое исследование)

14.03.01 - анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 .1 ОКТ 2012

Санкт-Петербург 2012

005053076

Работа выполнена на кафедре анатомии человека Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Карелина Наталья Рафаиловна Официальные оппоненты:

Гайворонский Иван Васильевич доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное военное казенное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская Академия имени С. М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, кафедра нормальной анатомии, заведующий

Молдавская Анна Аркадьевна доктор медицинских наук, профессор, Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, кафедра анатомии человека, профессор

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

, . .. 2 V

Защита состоится « » О }Х2012 г. в 7 У часов на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 208.087.01 при ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу: 194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу: 194100, Санкт-Петербург, Кантемировская ул., 16

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Карелина Наталья Рафаиловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Вопросы возрастной морфологии человека и экспериментальных животных, в частности органов лимфоидной [иммунной] системы, в норме и при воздействии различных неблагоприятных факторов, постоянно привлекают внимание исследователей (Долгова М.А. и соавт., 1982; Петрова Т.Б., 1982; Савицкая Т.Н., 1985; Пугач П.В., 1990; Бородин Ю.И. и соавт., 1992; Сапин М.Р., 1994,1996; Забродин В.А., 2004 и др.).

Тимус как первичпый орган иммунной системы во многом определяет не только состояние периферических органов иммуногенеза, но и выраженность защитных реакций всего организма (Вернет Ф., 1964; Кемилева 3., 1984; Сапин М.Р. и Этинген Л.Е., 1996; Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; Anderson G. etal., 1999; LioC.W. and HsiehC.S., 2011 и мн. др.).

Иммунодефицитные состояния у детей раннего возраста достаточно часто встречаются в клинической практике. Среди причин, приводящих к иммунодефицитам, главенствующими являются неблагоприятные экзогенные влияния различной этиологии в пренатальном периоде онтогенеза, а также наличие патологии материнского организма. Употребление женщинами этанолсодержащих напитков, особенно в период беременности, является тем фактором, который самым неблагоприятным образом интегрирует причины, которые могут приводить к иммунодефицитным состояниям у новорождённых детей. Исследования показывают, что иммунодефицит . можно отнести к постоянным проявлениям фетального алкогольного синдрома, часто возникающего у детей вследствие пренаталыюго воздействия этанола (Таболин В.А. и соавт., 1988; Оготоева С.Н. и соавт., 2009; Johnsons. etal., 1981; CalvaniM. etal., 1985; EwaldDJ. and FrostW.W., 1987; McGilLF. et. al., 2009).

В конце XX и начале ХХ1века появились работы, посвященные изучению иммунной системы, в которых показаны изменения, происходящие в тимусе и лимфатических узлах вследствие пренатального воздействия этанола (Надыров Э.А., 1991; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011;Круглов C.B. и соавт., 2012). Важной задачей является поиск средств для коррекции возникающих нарушений.

В последние десятилетия проводятся многочисленные исследования, посвященные применению иммуномодуляторов в комплексной терапии различных заболеваний, одним из патогенетических механизмов которых являются иммунодефицитные состояния (Морозов В.Г. и соавт., 2000; Абдулаев Х.Р., 2003; Парахонский А.П., 2007; Долина А.Б., 2010; Панкратов О.В., 2011 и мн. др.).

Одним из известных препаратов является пептидный препарат тималин, полученный из тимуса телят в 1974 году В.Г. Морозовым и В.Х Хавинсоном (Морозов В.Г. и соавт., 1977). В практической медицине тималин применяется в комплексном лечении многих заболеваний, начиная с конца 1970-х годов.

В экспериментальных исследованиях было показано, что введение тималина оказывает положительное влияние, как на ретикулярный эпителий, так и на лимфоидный компоненты тимуса. Описано усиление пролиферации,

дифференцировки лимфоидных клеток при введении тималина лабораторным животным (Кузник Б.И. и соавт., 1984; Хмелевская И.Г. и Ковальчук Л.В., 2000). Однако данных о влиянии тималина на тимус развивающегося организма при воздействии этанола в доступной литературе не обнаружено.

Таким образом, представляется актуальным провести экспериментальное исследование для определения особенностей строения тимуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза при воздействии этанола и на фоне иммунокоррекциитималином.

Цель исследования - изучить особенности строения тимуса крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола в пренатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза, а также при иммунокоррекциитималином.

Задачи исследования:

1. Определить морфометрические параметры и клеточный состав тимуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза у интактных крыс.

2. Выявить изменения морфометрических показателей и клеточного состава тимуса крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период) воздействия этанола.

3. Изучить влияние тималина на морфометрические показатели и клеточный состав тимуса крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период) воздействия этанола.

4. Определить на основе полученных данных корреляционные связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса в тимусе крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период).

Научная новизна исследования

Впервые установлено, что у крыс в подсосном периоде онтогенеза общей тенденцией динамики морфометрических показателей тимуса является то, что наибольшие значения темпов их прироста приходятся на первую неделю постнатальной жизни, а наименьшие - на вторую. Исключение составляют ТП линейных размеров правой доли, которые постепенно снижаются' на протяжении всего периода наблюдений. Рост в длину левой доли тимуса происходит преимущественно в краниальном направлении на первой неделе жизни, а правой доли - в каудальном - на второй неделе жизни

Впервые показана динамика изменений морфометрических параметров тимуса, а также темпов их прироста у крыс после пренатальной этаноловой интоксикации и в условиях перорального поступления этанола в подсосном периоде. В первые две недели темпы прироста линейных размеров тимуса крыс при воздействии этанола существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко понижаются.

Впервые показано, что у животных при воздействии этанола регистрируется выраженная сосудистая реакция в тимусе, проявляющаяся

расширением и полнокровием внутриорганных сосудов, кровоизлияниями как в корковое, так и мозговое вещество, а также появлением фокусов некроза.

Впервые описано иммуномодулирующее влияние тималина на тимус крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола в пренатальном и постнатальном (подсосный период) периодах онтогенеза. Показано, что после иммунокоррекции, в течение первой недели постнатальной жизни начинается стимуляция компенсаторных реакций, в большей степени в коре тимуса; в течение второй недели проявляется тенденция к нормализации линейных размеров тимуса; в течение третей недели начинает восстанавливаться клеточный состав мозгового вещества. Введение тималина постепенно уменьшает выраженность сосудистой реакции.

Впервые в динамике изучено распределение СБЗ+ клеток у крыс подсосного периода в норме, после пренаталыюй и постнатальной этаноловой интоксикации и при иммунокоррекциитималином.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Полученные данные существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о строении тимуса крыс, развивавшихся в условиях нормы и после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации, а также при иммунокоррекциитималином.

Сведения о влиянии этанола на тимус развивающегося организма, полученные в работе имеют важное теоретическое значение при исследовании становления других иммунных органов в онтогенезе.

Экспериментальные данные об особенностях строения тимуса организма, развивавшегося в норме, а также после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации и при иммунокоррекцитималином, представляют интерес для иммуноморфологов, педиатров и акушеров.

Внедрение результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ. Основные результаты диссертационного исследования включены в учебную программу кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО СПбГПМАМинздравсоцразвития России; кафедры анатомии человека и кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. В течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходят значительные изменения в строении тимуса, затрагивающие как его морфометрические параметры, так и клеточный состав. С возрастом появляется и усиливается взаимосвязь, между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом, отсутствующая у новорождённых животных.

2. Этанол вызывает существенные изменения динамики морфометрических параметров тимуса в подсосном периоде у крыс, подавляет его лимфопоэтическую функцию, пролиферацию и дифференцировку, усиливает разрушение клеток и изменяет темпы их миграции в органе.

3. Тималин оказывает иммуномодулирующее действие на тимус крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (в подсосный период) воздействия этанола. Степень выраженности этого эффекта и точки приложения зависят от длительности применения тималина.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009 г.); VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009 г.); 5 Всероссийском конгрессе «Человек и проблемы зависимостей: междисциплинарные аспекты» (Санкт-Петербург, 2011 г.).

Личный вклад соискателя в разработку проблемы. Работа выполнена в рамках комплексной темы НИР кафедры анатомии человека СПбГПМА (№ гос. регистрации 01200506433). Личный вклад соискателя в разработку проблемы оценивается в 80%. Автором лично произведены: эксперимент, анализ результатов морфометрического, гистологического и иммуногистохимического и статистического исследования, составление таблиц и построение диаграмм.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста и состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материал и методы исследования», «Результаты исследования», «Обсуждение результатов исследования», выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Список литературы содержит 174 источников, в том числе 116 отечественных и 57 иностранных. Работа иллюстрирована 20 микрофотографиями, 44 диаграммами и снабжена 21 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Исследование выполнено на 140 крысах в возрасте от периода новорождённости до 21 суток постнатальной жизни (табл. 1). Животные были разделены на четыре группы. I группу составили животные, родившиеся от самок, ежедневный рацион которых на всём протяжении эксперимента составляли сухой комбикорм и питьевая вода. Во П, П1 и IV группы вошло потомство самок, получавших во время беременности и после её окончания сухой комбикорм и 15% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости. Потомству самок Ш группы вводили тималин по следующей схеме: в первые пять суток постнатальной жизни ежедневно, а также на 7 и 14 сутки подкожно в дозе 40 мкг/м2 поверхности тела (Vidal, 2006). Потомству крыс IV группы в эти же сроки вводили дистиллированную воду в адекватном

объёме. Животные содержались в виварии СПбГПМА в пластмассовых клетках размером 50 смхЗО смхЗО см, в сухом, отапливаемом помещении с достаточным естественным и искусственным освещением, при температуре +20° - +22°С.

Таблица 1

Распределение материала по количеству и группам

Возраст животных Группа животных

I П III IV

Новорождённые 10 10 - -

7 суток 10 10 10 10

14 суток 10 10 10 10

21 сутки 10 10 10 10

Итого 40 40 30 30

ВСЕГО 140

Для получения достоверных результатов всех животных выводили из опыта в весенний период с марта по июнь. Исследования проводились с соблюдением приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 года и приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР от 13.11.1984 года "О правилах проведения работ с использованием экспериментальных животных". Животных забивали под наркозом (пары хлороформа) путём декапитации.

Масса тела крыс определялась взвешиванием на электронных весах "Acculab" (США). Под бинокулярной лупой МБС-2 выделяли и очищали тимус от окружающих тканей, затем определяли его абсолютную массу на этих же весах. Относительная масса тимуса рассчитывалась как отношение его абсолютной массы к массе тела.

Для оценки развития тимуса рассчитывали показатели возрастной морфологии: абсолютный прирост (АП), энергию роста (ЭР) и темп прироста (ТП) (Агеева В.А., 2007).

АП определяли как разность между абсолютными значениями показателя в данный и предыдущий периоды:

АП = N2- Ni,

где N2 - абсолютное значение показателя в данный период; Nt - абсолютное значение показателя предыдущего периода.

ЭР рассчитывали как отношение АП к истекшему промежутку времени:

ЭР = АП Иг-ti,

где ЭР - энергия роста; АП - абсолютный прирост; t2 и t] — время (сут) истекшее между данным и предыдущим уровнем сравниваемых величин (7 суток).

ТП вычисляли как отношение между АП данного периода и абсолютным уровнем показателя предыдущего периода:

ТП = АП2/^х100%,

где ТП - темп прироста'; АП2 - абсолютный прирост в данный период; Ni -абсолютный показатель предшествующего периода.

Тимус фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина на фосфатном буфере в течение 24 часов. После этого обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. На микротоме «Accu-Cut» изготавливали серийные гистологические срезы толщиной 2-3 мкм.

Обзорная окраска парафиновых срезов гематоксилином и эозином использовалась для определения количества долей в тимусе и его морфометрии; для подсчёта клеточных элементов применялась окраска азуром-П и эозином; маркеры зрелых тимоцитов выявлялись иммуногистохимическим окрашиванием срезов мышиными анти-крысиными антителами к CD3 с последущей доокраской гематоксилином.

На серийных срезах органа при помощи светового микроскопа «МИКРОМЕД-3» (КНР) со съёмной камерой с использованием программы «ScopePhoto» определяли строение тимуса, измеряли максимальные линейные размеры (длина и ширина) органа и его долей. Для определения площади органа и его структурно-функциональных зон использовали программу «ImageJ».

Корково-мозговой индекс вычисляли как отношение площади коркового вещества к площади мозгового. Размеры структур органа определяли в 10 полях зрения у 10 животных. Каждый параметр измерялся 50 раз. Клеточный состав тимуса определялся при окуляре 10 и объективе 100 на единице площади 15000 мкм . Необходимость подсчёта клеток на заведомо определённой площади обусловлена изменением насыщенности полей зрения клетками при одинаковой толщине срезов. Подсчёт же заранее определённого числа клеток, привёл бы к ошибкам при анализе содержания различных популяций клеток в тимусе.

Полученные цифровые показатели обрабатывались с использованием статистического пакета Microsoft Excel.

Значение t оценивали по таблице Стьюдента. Различия двух сравниваемых величин считали достоверными при Р<0,05. Полученные результаты представлены в таблицах и диаграммах.

Факторный анализ полученных данных произведён при использовании прикладной программы SPSS 16,0 for Windows. Математико-статистическое описание объектов исследования осуществлялось с помощью традиционных и давно утвердившихся в медицинских исследованиях методов (Лакин Г.Ф., 1990; Воронов И.А., 2008).

У шести крыс I группы, что составило 15% мы обнаружили тимус, состоящий из 3 долей. В связи с тем, что двудолевой тимус встречался значительно чаще, мы в последующем исследовании учитывали только этот вариант его строения.

После проведения исследования выяснилось, что достоверных отличий между всеми морфометрическими показателями тимуса и его клеточным составом у животных II и IV групп не было, вследствие чего, эти 2 группы былй объединены.

Заключение этического комитета: диссертационное исследование прошло экспертизу этического комитета ГОУ ВПО СПбГПМА (протокол №1 от 24 сентября 2007 г.).

Результаты исследования и их обсуждение

Вопросы возрастной морфологии человека и экспериментальных животных, в частности органов иммунной системы, постоянно привлекают внимание исследователей (Долгова М.А. и соавт., 1982; Петрова Т.Б., 1982; Савицкая Т.Н., 1985; Пугач П.В., 1990; Сапин М.Р., 1994, 1996; Забродин В.А., 2004; Тухтаев K.P. и соавт., 2012, и др.). Как известно, лимфоидная [иммунная] система является ведущей в обеспечении защиты организма от постоянного экзо- и эндоантигенного воздействия. Тимусу, в свою очередь, принадлежит главная роль в становлении других иммунных органов и формировании иммунитета (Бернет Ф., 1964; Сапин, М.Р. и Этинген JI.E., 1996; Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; LioC.W. and HsiehC.S., 2011).

В результате проведённого исследования установлено, что в течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходят значительные изменения в строении тимуса, затрагивающие как его морфометрические параметры, так и клеточный состав. При этом по результатам факторного анализа, выявлено, что с возрастом появляется и усиливается взаимосвязь, отсутствующая у новорождённых животных, между морфомегрическими параметрами тимуса и его клеточным составом, за исключением дегенерирующих клеток.

В течение первых трёх недель постнатальной жизни увеличиваются показатели абсолютной и относительной масс тимуса, причём наиболее интенсивно в первые семь дней, когда их ТП достигают 266% и 42% соответственно. В течение второй недели они снижаются, а в последующем вновь увеличиваются, оставаясь, тем не менее, на более низком уровне по сравнению с первой неделей (табл. 2, 3). При этом Э.А. Надыров (1991) и A.A. Пасюк (2006), рассматривая вопросы возрастной морфологии тимуса крыс, приводят сходные данные относительно динамики абсолютной и относительной масс тимуса.

Динамика изменений линейных размеров тимуса и его долей, также характеризуется их неравномерным ростом в разные возрастные периоды. Наибольшие темпы прироста длины тимуса отмечаются в первую неделю жизни крыс (28%), а в последующем снижаются, и сохраняются примерно на одном уровне (19-20%). Ширина тимуса, по показателю ТП, наиболее значительно увеличивается в течение первой и третьей недель постнатальной жизни. Такая же закономерность характерна для изменений линейных размеров левой доли. Показатели ТП длины и ширины правой доли тимуса, начиная со второй недели жизни уменьшаются (табл. 2, 3). К особенностям становления дефинитивной топографии долей тимуса следует отнести и их асинхронный и разнонаправленный рост. Так, длина левой доли в первые 7 суток жизни увеличивается преимущественно за счёт роста её краниального полюса. Рост в длийу правой доли происходит преимущественно за счёт роста в каудальном

направлении. Что наиболее выражено на 14 сутки жизни. Вероятно, это связано с особенностями развития топографически близких к тимусу органов.

Таблица 2

Динамика темпов прироста морфометрических показателей тимуса крыс (%%)

Морфометрические параметры тимуса Группа животных Возраст животных

7 суток 14 суток 21 сутки

Абсолютная масса К 266 10 119

Э 223 77 89

Э+Т 222 93 85

Относительная масса К 42 3 17

Э 67 20 22

Э+Т 128 17 0

Длина тимуса к 28 19 20

э 42 41 6

Э+Т 43 38 18

Ширина тимуса к 36 19 29

Э 68 52 0

Э+Т 72 38 3

Длина левой доли к 52 27 32

э 137 36 9

Э+Т 136 31 19

Ширина левой доли к 35 18 23

э 61 25 30

э+т 54 32 24

Длина правой доли к 65 33 27

э 252 28 11

Э+Т 244 34 3

Ширина правой доли к 73 13 0,5

э 94 69 5

э+т 107 45 0,8

К - контрольные животные; Э - крысы после воздействия этанола; Э+Т - крысы после иммунокоррекции

Таким образом, общая тенденция динамики морфометрических показателей заключается в том, что наибольшие значения их темпов прироста приходятся на первую неделю постнатальной жизни, а наименьшие - на вторую. Исключение составляют ТП линейных размеров правой доли, которые постепенно снижаются на протяжении всего периода наблюдений.

Количество долек в долях тимуса в течение первых трёх недель жизни прогрессивно возрастает: с 15,8±2,4 до 21,0+1,3 в левой доле и с 11,7±1,9 до 19,5±1,1 в правой доле. При этом наиболее активно происходит разделение на вторичные дольки в период с 7 по 21 сутки постнатальной жизни. В эти же сроки постепенно нивелируется и разница их количества в правой и левой долях. Следует отметить и постепенное увеличение площади долек, а также относительно равные их размеры по этому показателю на 21 сутки. Разделение тимуса на вторичные дольки в постнатальном онтогенезе крысы описывали Т.Б. Петрова (1984) и Э.А. Надыров (1991).

Таблица 3

Дипамика морфометрических параметров тимуса_

Морфометричес-кие показатели тимуса Группа животных Возраст животных

Новорождённые 7 суток 14 суток 21 сутки

Абсолютная масса, г К 0,0125±0,0007 0,0457±0,0013" 0,0763±0,0021" ОД 671 ±0,0096"

Э 0,0112*0,0011" 0,0362±0,0001гм"' 0,0640±0,0030гм") 0Д209±0,0019"1"'

Э+Т - 0,0361±0,0013" 0,0697±0,0009("м")'(*") 0,1289+0,00181*м**и^

Относительная масса к 0,0024±0,0001 0,0034±0,0002** 0,0035±0,0001** 0,0041±0,0001**

э 0,0018±0,0002" 0,0030+0,0001г,'(") 0,0036±0,0001(,,) 0,0053±0,0001гм")

Э+Т - 0,0041±0,00011*' 0,0м8±0,0002^™"'> 0,0048±0,00021"м"ч

Длина, мм к 4,25±0,07 б^г^дб'"-1 7,12±0,2б(") 8,53±0,141"'

э 3,74±0,29"' 5,32±0,201") 7,48±0,31(-*м") 7,89±0Д9"Л

Э+Т - 5,34±0,36 7,38±0,29(") 8,б8±0,29г^

Ширина, мм к 2,83±0,03 3,86±0,121"' 4,61±0ДЗГ*; 5,94±0^01"'

э 2,02±0,21" 3,37±0,11(*м") 5Д2±0,23™"> 5,11±0,01"

Э+Т - З/кМ.«™"'- 4,73±ОД8(")'("'' 4,87±0Д1т

Длина левой доли, мм к 3,24±0,04 4,93±0Д1Г") бЗвзЮД»1"' 8,31±0,071"'

э 2,24±0,14" 5,31±0Д9("«"> 7,24+0,22" 7,68±0,22"

Э+Т - 5,28±0,08" б,93±0,07™**и*"> 8,2б±0,30гм*"'

Ширина левой доли, мм к 1,67±0,03 2,2б±0,04г*' 2,6б±0,11г"' 3,28±0,09г*'

э 1,27±0,09" гдаивдв™"' 2,56±0Д0(") 3,32±0,091"'

Э+Т - 1,95±0Д(Я 3,20±0Д7Г*)Л*"'

Длина правой доли, мм к 2,71 ±0,03 4,48±0,23(") 5,97±0,22(") 7,56±0,1бг*;

э 1,27+0,08" 4,47±0,21г"> 5,71±0,311"' 6,33±0,34

Э+Т - 4,37±0Д8 5,84±0,241"-1 б,02±0,24"

Ширина правой доли, мм к 1,12±0,01 1,94±0,031"' 2,20±0,011") . 2,21±0,12

э 0,84±0,09" 1,63±0,0б"'^ глб+лдз"'1"1 2,89±0,01"'

Э+Т - 1,74±0,07" 2,53±0,04ги"м""; 2,55±0Д8(*и"*)

К - контрольные животные; Э - крысы после воздействия этанола; Э+Т - крысы после иммунокоррекции

* - различия с контролем статистически достоверны (0,0005<р<0,05); ** - различия с предыдущей возрастной группой животных статистически достоверны (0,0005<р<0,05); *** - различия между экспериментальными группами животных статистически достоверны (0,0005<р<0,05)

Корково-мозговой индекс в течение первой недели жизни увеличивается с 3,77±0,14 до 4,17±0,23, а в последующем ширина коркового вещества уменьшается и уже у трёхнедельных крысят КМИ составляет 2,95±0,17. Такая динамика, возможно, связана с волнообразным характером заселения тимуса претимоцитами и их эмиграцией во вторичные лимфоидные opraHbi(Fontaine-PerasJ.C. etal., 1981). В литературе нет единого мнения об изменении КМИ долек тимуса после рождения. Так, Т.Б. Петрова (1984) и Е.В. Морозова (1990) отмечают снижение этого показателя, а Э.А. Надыров (1991) - увеличение.

Спектр изменений в клеточном составе коркового и мозгового вещества тимуса так же отличается разнообразием. В KB существенно увеличивается абсолютное и относительное содержание малых лимфоцитов, причём особенно интенсивно в течение первой недели внеутробной жизни (в 1,8 и 1,4 раза соответственно). Количество средних и больших лимфоцитов, напротив, снижается, но более равномерно (с 25,89+1,07 до 19,70±1,04 и с 10,96±0,36 до 8,03+0,61 соответственно). Уменьшение числа ретикулярных эпителиоцитов наиболее выражено в течение второй и третьей недель постнатальной жизни. Содержание митотически делящихся клеток на протяжении первой недели увеличивается в 1,4 раза, а затем снижается и к 21 суткам жизни становится меньше, чем у новорождённых животных.

В мозговом веществе количество малых лимфоцитов наиболее резко (в 1,8 раза) увеличивается на первой неделе постнатального развитая; в течение второй недели достоверно не изменяется, а на третьей вновь возрастает в 1,3 раза. Статистически значимое снижение содержания средних лимфоцитов регистрируется только к концу третьей недели жизни. В изменении количества больших лимфоцитов и ретикулярных эпителиоцитов отмечается сходная динамика. В первые 7 суток их количество достоверно не изменяется, а в течение последующих двух недель снижается. Митотическая активность на протяжении первых 7 суток жизни несколько увеличивается, а затем снижается. Сходная тенденция в динамике изменения клеточного состава в KB и MB тимуса в раннем постнатальном онтогенезе крыс описана ранее (Петрова Т.Б., 1984; Морозова Е.В., 1990; Надыров Э.А., 1991; Чурилова Н.И., 1999). .

В распределении CD 3+ клеток в структурно-функциональных зонах тимуса выявлены следующие особенности. Для новорождённых животных характерно их равномерное распределение, к концу первой недели они концентрируются в наружных отделах коры и мозговом веществе, а к 21 суткам их наибольшее количество отмечается только в MB. Таким образом распределение этих клеток соответствует таковому взрослых особей (Федорова О.В., 2005)к концу третьей недели жизни.

В структуре проявлений алкогольного синдрома плода человека и экспериментальных животных, одно из ведущих мест занимает снижение массы тела (Надыров Э.А., 1991; Пугач П.В., 2012; Jones K.L. and Smith D.W., 1973). Дефицит массы тела по данным некоторых исследователей может достигать 25% и сохраняться до 5 месяцев постнатальной жизни (Abel E.L., 1984; Pullen G.L. etal., 1988).

Пренатальное воздействие этанола приводит к существенным структурным, а, следовательно, и функциональным перестройкам тимуса и лимфатических узлов (Надыров Э.А., 1991; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011; Круглов C.B. и соавт., 2012).

Известно, что этанол легко проникает в материнское молоко, в котором его концентрация такая же, как в крови (Зупанец И.А. и соавт., 2003). В литературе существует мнение, что периодическое употребление 11% алкоголя в количестве около 280 г не вызывает значимых изменений в организме ребёнка, находящегося на грудном вскармливании. В то же время установлено, что приём спиртосодержащих напитков во время лактации приводит к снижению у ребёнка сосательного рефлекса, угнетению центральной нервной системы, задержке моторного развития, нарушению динамики прибавления массы тела, а также утяжеляет течение заболеваний (Little R.E. etal., 2002; Hale T., 2006).

По нашим данным, тимус крыс, подвергшихся пренатальному и постнатальному пероральному (с молоком матери) воздействию этанола характеризуются следующими особенностями. Как показал факторный анализ, сильные корреляционные связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса наблюдается во всех изученных возрастных группах. В то же время, наблюдается их некоторое ослабление, а иногда и исчезновение в отношении дегенерирующих и митотически делящихся клеток.

Абсолютная масса тимуса во всех изученных возрастных периодах снижена по сравнению с контрольными животными. Это является результатом пренатальной этаноловой интоксикации, вследствие снижения общей клеточной массы зародыша (Надыров Э.А., 1991; Пугач П.В., 2012; Sreenathan R.N. etal., 1983). Наиболее высокий темп прироста абсолютной массы тимуса отмечается в первые семь суток внеутробной жизни, когда он составляет 223%, что ниже по сравнению с контрольными животными. В дальнейшем, на второй неделе жизни, ТП снижается до 77%, однако этот показатель значительно выше контрольных значений. В течение третьей недели ТП несколько увеличивается (до 89%), но снижен, относительно контроля (табл. 2,3).

Сниженный показатель относительной массы тимуса наблюдается у алкоголизированных животных только в течение первой недели жизни. На 14 сутки этот показатель достоверно не отличается от контрольных значений, а на 21 сутки даже превышает его (в 1,3 раза). Это обусловлено тем, что темп прироста относительной массы тимуса более высокий, чем у контрольных крыс (табл. 2, 3). В тоже время у пренатальноалкоголизированных крыс, не получавших этанол перорально (Надыров Э.А., 1991), относительная масса тимуса остаётся сниженной.

Длина и ширина тимуса у животных при воздействии этанола изменяются однонаправленно, У новорождённых крыс и на 21 сутки эти параметры снижены, на 14 сутки жизни они превышают контрольные значения. На 7 сутки ширина тимуса меньше, а длина достоверно не отличается от контрольных показателей (табл. 2, 3).

Изменения длины правой и левой долей тимуса алкоголизированных крыс носят принципиально сходный характер. У новорождённых животных длина обеих долей уменьшена по сравнению с контролем. На протяжении первой и второй недель жизни наблюдается их активный рост, наиболее интенсивный в правой доле. Подобная динамика характерна и для показателей ширины долей. У новорождённых крыс этот параметр снижен. Интенсивный рост начинается после 7 суток, особенно выраженный в правой доле, где значения ширины выше, чем в контроле (прил. 12; 13).

Таким образом, в первые две недели жизни темпы прироста линейных размеров тимуса существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко снижаются. Описанная динамика морфометрических параметров тимуса обусловлена уменьшением концентрации этанола и его метаболитов в организме. Известно, что этанол может накапливаться в тканях эмбриона и плода, так как система алкогольдегидрогеназы не функционирует в полном объёме. В результате уровень этанола в тканях зародыша может даже превышать его уровень в крови матери (Blakley P.M. and Scott W.J.Jr., 1984; Brien J.F. etal., 1985). В начале внеутробной жизни усиливается выделение этанола и его метаболитов в связи с изменением и усилением активного функционирования пищеварительной дыхательной и мочевой систем. Помимо этого, важную роль играет уменьшение концентрации этанола, начинающего поступать только с материнским молоком.

Количество долек в долях тимуса при воздействии этанола уменьшено на протяжении всего периода наблюдений. Их число увеличивается только в течение первой недели внеутробной жизни (с 10,7+ 0,24 до 14,7+0,7 в левой доле и с 10,0±0,35 до 13,7±0,5 - в правой). В последующие две недели количество долек в тимусе достоверно не изменяется. Количество тимусных телец прогрессивно увеличивается и к концу третьей недели, их число становится больше, чем у животных контрольной группы.

Корково-мозговой индекс у новорождённых животных при воздействии этанола составляет 9,58±0,61 и в течение первых семи суток постнатального развития он резко снижается до 3,36+0,46 (2,85 в 2,85 раза). В течение 2 недели он продолжает снижаться (до 1,73±0,08), а к концу 21 суток увеличивается и составляет 2,65±0,07. Значительное увеличение по сравнению с контролем КМИ у новорождённых животных (в 2,5 раза) обусловлено накоплением во внутренней кортикальной зоне тимоцитов. В последующих изученных возрастных периодах этот показатель ниже, чем у животных контрольной группы, что в свою очередь также является отражением нарушений функционирования этой структурно-функциональной зоны. Одной из функций этой зоны является антигеннезависимая дифференцировка и приобретение Т-лимфоцитами аутотолерантности. Эти процессы происходят в результате сложного взаимодействия тимоцитов с РЭ и при участии тимических гормонов (Гриневич Ю.А. и Чеботарев В.Ф., 1989; Ивановская Т.Е. и соавт., 1996; JanossyG. etal., 1986). Кроме этого, именно из этой зоны, через внутридольковые периваскулярные пространства, расположенные на границе

КВ и МВ, происходит эмиграция части созревших тимоцитов из тимуса (Ивановская Т.Е. и соавт., 1996; Агуа Б. «а!., 1982; ТаповБу в. егаЬ, 1986).

Как известно, отражением их функционального состояния органов иммунной системы является их клеточный состав (Сапин М.Р. и

Этинген Л.Е., 1996).

Клеточный состав коркового и мозгового вещества тимуса алкоголизированных животных характеризуется изменениями количества и динамики содержания различных видов клеток на разных этапах онтогенеза.

В КВ отмечается стабильное уменьшение количества клеток лимфоидного ряда, по сравнению с контрольными животными. Однако, при воздействии этанола, достоверное увеличение числа малых лимфоцитов в тимусе крыс (в 1,5 раза) отмечается только со второй недели внеутробной жизни (в норме - на первой). Число средних лимфоцитов снижается в первые 2 недели, а затем не изменяется. Содержание больших лимфоцитов наиболее резко (в 1,8 раза) падает в течение первых 7 суток жизни и продолжает снижаться на протяжении 2 недели, после чего их количество несколько возрастает. По сравнению с тимусом контрольных животных при воздействии этанола число ретикулярных эпителиоцитов в органе увеличено у новорождённых крыс, а также на 7 и 21 сутки, а в 14 суток достоверных отличий этого показателя нет. Количество дегенерирующих клеток увеличено, причём особенно значительно - в 4,3 раза - на первой неделе жизни. Такая реакция со стороны тимуса не является специфичной и может наблюдаться при токсических воздействиях на материнский организм в период беременности, при врожденных пороках сердца, хроническом стрессе (Азизова Ф.Х. и соавт., 2012; Логинова Н.П. и Четвертных В.А., 2012; Улла М. и соавт., 2012). Снижается митотическая активность в тимусе новорождённых животных по сравнению с контролем. В течение следующей недели жизни наблюдается увеличение числа митотически делящихся клеток, а в последующем - вновь уменьшение.

В мозговом веществе тимуса крыс при воздействии этанола количество клеток лимфоидного пула уменьшено во всех возрастных периодах, а ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток - увеличено.

Таким образом, общими закономерностями изменения клеточного состава тимуса при воздействии этанола по сравнению с контрольными животными, является снижение общего числа клеток, абсолютного и относительного количества лимфоцитов, митотически делящихся клеток во всех возрастных группах крыс. При этом число ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток повышено. Указанная тенденция изменения клеточного состава тимуса крыс при воздействии этанола, более выражена в

мозговом веществе.

СБЗ иммуннореактивные клетки у новорождённых крыс и на 7 сутки жизни при воздействии этанола, регистрируются во всех структурно-функциональных зонах тимуса, но главным образом, в коре. У животных следующих возрастных групп преимущественная локализация этих клеток

наблюдается в мозговом, веществе. Однако их плотность во всех возрастных группа меньше, чем у контрольных животных. При этом необходимо отметить, что у интактных крыс преимущественная локализация CD3+ клеток в мозговом веществе отмечается только на 21 сутки. Это подтверждает нарушения процессов созревания и эмиграции тимоцитов.

Как было показано в работе ЭЛ. Надырова (1991) по изучению тимуса только пренатально алкоголизированных крыс, у таких животных в постнатальном онтогенезе происходит стимуляция компенсаторно-приспособительных процессов в органе. Это проявляется сохранением до 14 суток жизни субкапсулярной зоны и увеличением количества ТТ. В нашем исследовании субкапсулярная зона у крыс на 7 сутки практически полностью исчезает, при том, что число тимусных телец также увеличивается. Объяснением этому факту, вероятно, является наличие перорального поступления этанола в организм экспериментальных животных. В субкапсулярной зоне тимуса происходит пролиферация и начальные этапы созревания претимоцитов, мигрировавших сюда из костного мозга. Это происходит в условиях специфического микроокружения, которое создается посредством тимических гормонов, интерлейкинов, особых факторов роста, выделяемых самими лимфоцитами, и прямых мембранных контактов, осуществляемых в «клетках-няньках» (Janossy G. etal., 1986; Villa-Verde D.M. etal., 1995; Anderson G. and Jenkinson E.J., 2001; Hendrix T.M. etal., 2010). По этой же причине, видимо, нами не было обнаружено описанного Э.А. Надыровым (1991) увеличения количества больших и средних лимфоцитов в КВ.

Таким образом, пероральное поступление этанола подавляет лимфопоэтическую функцию тимуса на протяжении первых трёх недель постнатального развития и снижает его компенсаторные возможности в отношении нарушений, вызванных этанолом и его метаболитов в пренатальном периоде. С этим же связано более значительное уменьшение числа малых лимфоцитов при одновременном усилении интенсивности процессов распада клеток и угнетении митотической активности. Кроме этого, сравнивая результаты нашего исследования и данные Э.А. Надырова (1991), мы пришли к заключению, что пероральное поступление этанола, в большей степени влияет на мозговое вещество тимуса.

Выявленные нами особенности соотношения клеток в различных зонах тимуса при воздействии этанола являются проявлением нарушения процессов пролиферации и миграции тимоцитов, а также гормональной активности тимуса (Ярилин A.A. и соавт., 1991; Ивановская Т.Е. и соавт, 1996; Kendall M.D., 1981; Janossy G. etal., 1986). Сходные тенденции изменения клеточного состава структурно-функциональных зон тимуса крыс в постнатальном периоде онтогенеза описаны как при пренатальной алкогольной интоксикации (Надыров Э.А., 1991; Пугач П.В., 2012), так и после внутриутробного воздействия лекарственных препаратов (Петрова Т.Б., 1984; Моррзова Е.В., 1990).

В оценке изменений со стороны клеточного состава тимуса необходимо учитывать и стрессовый компонент, приводящий к описанным нарушениям. Впервые Н. Selye (1936) обнаружил связь между воздействием стрессорных факторов и структурными изменениями в тимусе. Позднее эти связи были неоднократно подтверждены многочисленными исследованиями не только в отношении тимуса, но и других иммунных органов (Кульбах О.С., 2006, Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; Морозова З.Ч. и соавт,, 2012; Смирнова О.Ю. и Денисова Г.Н., 2012; Улла М. и соавт., 2012).

У животных при воздействии этанола также регистрируется выраженная сосудистая реакция в тимусе, проявляющаяся расширением и полнокровием внутриорганных сосудов, а также кровоизлияниями, как в корковое, так и

мозговое вещество.

Положительные эффекты от введения тималина алкоголизированным животным сводятся к следующему.

На 7 сутки жизни относительная масса органа выше (в 1,4 раза) даже по сравнению с контрольными значениями (в 1,2 раза). Темп прироста относительной массы тимуса увеличен в 1,9 раза по сравнению с крысами, не получавшими тималин (табл. 2, 3).Число долек в долях тимуса крыс после введения тималина соответствует контрольным показателям. Однако корково-мозговой индекс и количество тимусных телец увеличиваются. Увеличивается количество малых лимфоцитов, причём наиболее значительно в корковом веществе; уменьшается содержание ретикулярных эпителиоцитов в коре в 2,1 раза, в мозговом веществе - в 1,4 раза. Снижается число дегенерирующих клеток, особенно в коре (в 1,8 раза); также в коре усиливается митотическая активность. Распределение CD3 иммунореактивных клеток в тимусе у животных на фоне иммунокоррекции практически такое же, как и у

контрольных крыс.

Таким образом, на фоне иммунокоррекции на 7 сутки жизни в тимусе крыс наблюдается тенденция к нормализации клеточного состава, особенно значительная - в корковом веществе. Усиление пролиферации, дифференцировки лимфоидных клеток при введении тималина лабораторным животным описано ранее (Кузник Б.И. и соавт., 1984; Хмелевская И.Г. и

Ковальчук JI.B., 2000).

Помимо активации компенсаторных реакций в тимусе, необходимо отметить уменьшение выраженности сосудистой реакции в тимусе, что является одним из значимых эффектов воздействия тималина (Абдулаев Х.Р., 2003).

У крыс на 14 сутки жизни при воздействии этанола и на фоне иммунокоррекции абсолютная масса тимуса увеличивается, не достигая, однако, контрольных значений. Темп прироста этого показателя выше, чем у животных контрольной группы и крыс, которым тималин не вводился. Относительная масса и темп её прироста превышает контрольные показатели. Линейные размеры тимуса крыс, получавших этанол и тималин, не имеют статистически значимых различий по сравнению с животными развивавшимися

в условиях нормы, однако темпы прироста этих параметров в 2 раз выше (табл. 2, 3). Введение тималина приводит к увеличению количества долек в тимусе, а также корково-мозгового индекса. Изменения в клеточном составе тимуса таких животных заключаются в увеличении количества клеток лимфоидного пула и клеток с фигурами митоза, за исключением больших лимфоцитов, содержание которых снижено в мозговом веществе в 1,3 раза. Воздействие тималина приводит к уменьшению количества ретикулярных эпителиоцитов; число дегенерирующих клеток в корковом веществе уменьшается, в мозговом - повышается.

У животных при воздействии этанола и тималина на 21 сутки абсолютная масса тимуса увеличивается, по сравнению с крысами, не получавшими иммуномодулятор. Относительная масса органа больше, чем в контроле, но уменьшена по сравнению с животными, которым тималин не вводился. При этом темп прироста показателя абсолютной массы наименьший (85%), а относительной - равен нулю. После проведённой иммунокоррекции, по сравнению с контрольными животными, у крыс на 21 сутки жизни в тимусе статистически достоверных различий в отношении его длины нами не выявлено. Показатель ширины меньше контрольных значений в 1,2 раза, а его темп прироста - в 10 раз. Снижены темпы прироста всех линейных размеров долей тимуса, при этом в правой доле достоверно уменьшаются как длина, так и ширина. В отличие от крыс, не получавших тималин, при иммунокоррекции длина тимуса больше, а ширина - наоборот меньше. При этом характерно снижение всех показателей возрастной морфологии линейных размеров, как тимуса, так и его долей. Длина левой доли тимуса при этом больше, а ширина правой доли меньше (табл. 2, 3).

У животных после воздействия этанола и тималина на 21 сутки увеличено количество долек в тимусе и корково-мозговой индекс в отличие от крыс, не получавших иммуномодулятор.

На фоне иммунокоррекциина 21 сутки жизни характерны более выраженные положительные изменения со стороны мозгового вещества. Они, в свою очередь, заключаются в увеличении числа малых лимфоцитов, снижении количества больших лимфоцитов, ретикулярных эпителиоцитов, дегенерирующих и делящихся клеток. В корковом же веществе уменьшается число малых лимфоцитов и возрастает количество ретикулярных эпителиоцитов.

Помимо мозгового вещества СРЗ+ клетки концентрируются и в корковом веществе тимуса крыс на 21 сутки, получавших иммунокоррекцию.

ВЫВОДЫ

1. В течете первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходит увеличение абсолютной и относительной масс тимуса, линейных размеров органа и его долей, изменяется клеточный состав. Появляются и усиливаются корреляционные связи между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом.

2. Наибольшие значения темпов прироста морфометрических показателей наблюдаются на первой неделе постнатальной жизни, а наименьшие - на второй. Рост в длину левой доли тимуса происходит преимущественно в краниальном направлении на первой неделе жизни, а правой доли - в каудальном - на второй. В клеточном составе происходит увеличение числа малых лимфоцитов и снижение числа остальных клеточных элементов.

3. При воздействии этанола темпы прироста линейных размеров тимуса крыс в течение первых двух недель жизни существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко понижаются. Наиболее интенсивно растут в длину доли тимуса на первой неделе жизни; темпы прироста левой доли увеличиваются в 2,6 раза, а правой - в 3,9 раза по сравнению с контролем.

4. Для клеточного состава тимуса крыс при воздействии этанола характерно снижение общего числа клеток, абсолютного и относительного количества лимфоцитов, в том числе и СОЗ+ клеток, а также митотически делящихся клеток. Происходит увеличение содержания ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток во всех возрастных группах, более выраженное в мозговом веществе.

5. Этанол вызывает сосудистые нарушения в виде расширения и полнокровия сосудов, а также кровоизлияний, выраженность которых нарастает в зависимости от длительности этаноловой интоксикации.

6. Введение иммуномодулятора крысам в подсосном периоде в течение двух недель приводит к нормализации линейных размеров тимуса, однако нЬ отражается на динамике изменений темпов прироста его морфометрических показателей.

7. Под влиянием иммуномодулятора (тималина) у крыс, подвергшихся этаноловой интоксикации, в тимусе компенсаторные процессы заключаются в увеличении числа малых лимфоцитов и снижении количества дегенерирующих клеток, стимуляции лимфопоэтической функции в корковом веществе на первой неделе постнатальной жизни, в мозговом веществе - на третьей. Тималин уменьшает выраженность сосудистых реакций, которые на 3 неделе иммунокоррекции исчезают.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о строении тимуса крыс в подсосном периоде в норме и при воздействии этанола необходимо использовать для изучения лимфоидных органов и других систем организма.

2. Данные об особенностях распределения СО 3+ клеток в тимусе крыс в подсосном периоде необходимо учитывать при проведении исследований с использованием иммуногистохимических методов на этих экспериментальных

животных в возрастном аспекте.

3. Экспериментальные данные об особенностях влияния тималина на тимус алкоголизированных крыс необходимо учитывать в клинической практике.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изменения структурной организации центральных и периферических органов иммуногенеза как результат пренатального воздействия этанола /Пугач П.В., Свирин C.B., Бреусенко Д.В., Смирнова О.Ю., Торопкова Е.В., Карелина Н.Р. //Аллергология и иммунология. 2009. Т. 10. № 2. С. 296.

2. Особенности строения иммунных органов новорожденных крыс после пренатального воздействия алкоголя / Пугач П.В., Карелина Н.Р., Круглов C.B., Свирин C.B., Бреусенко Д.В. //Ретиноиды. 2009. Вып. 29. С. 147-150.

3. Особенности строения центральных и периферических органов иммунной системы новорождённых крыс после пренатального воздействия алкоголя / Пугач П.В., Карелина Н.Р., Круглов C.B., Свирин C.B., Бреусенко Д.В. //Однораловские морфологические чтения. Воронеж, 2009. Вып. 8. С. 239242.

4. Строение иммунных органов новорождённых крыс после пренатального воздействия алкоголя. / Пугач П.В., Карелина К.И., Круглов C.B., Свирин C.B., Бреусенко Д.В. //Современные проблемы науки и образования. 2009. №6 (приложение "Медицинские науки"). С. 16.

5. Иммуноморфологические аспекты выживаемости крыс в течение первой недели постнатальной жизни после пренатальной алкоголизации /Пугач П.В., Круглов C.B., Свирин C.B., Бреусенко Д.В., Карелина К.И. //Современные проблемы науки и образования. 2009. №6 (приложение "Медицинские науки"). С. 17.

6. Особенности строения брыжеечных лимфатических узлов и лимфоидной ткани, ассоциированной с носоглоткой у крыс, развивавшихся в условиях пренатального воздействия этанола / Пугач П.В., Карелина Н.Р., Круглов C.B., Свирин C.B., Бреусенко Д.В. // Наследие Н.И. Пирогова: прошлое и настоящее. СПб., 2010. С. 129-131.

7. Структурные изменения брыжеечных лимфатических узлов и лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми оболочками, как результат пренатального воздействия этанола / Пугач П.В., Бреусенко Д.В., Свирин C.B., Надьярная Т.Н. // Морфология. 2010. Т. 137. № 4. С. 159.

Лицензия N 020383 от 14 апреля 1998 г.

Подписано в печать 21.09.2012. Ф-т 60х84'/16. Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. _Объем 1.0 п. л. Тираж 100 экз. Зак. N 66_

Отпечатано в ЦМТ СПбГЛМА. 194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., д. 2.

 
 

Оглавление диссертации Бреусенко, Дмиттрий Витальевич :: 2012 :: Санкт-Петербург

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления о строении, функциях и развитии тимуса.

1.2. Современные представления о влияние этанола на иммунную систему.

1.3. Современные представления о влиянии тималина на иммунную систему.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Строение тимуса крыс в раннем постнатальном периоде онтогенеза.

3.2. Многомерные методы статистического анализа для исследования структуры и силы связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса у крыс в норме.

3.3. Строение тимуса крыс в раннем постнатальном периоде онтогенеза при воздействии этанола.

3.4. Многомерные методы статистического анализа для исследования структуры и силы связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса у крыс при воздействии этанола.

3.5. Строение тимуса крыс в раннем постнатальном периоде онтогенеза при воздействии этанола и коррекции тималином.

3.6. Многомерные методы статистического анализа для исследования структуры и силы связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса у крыс при воздействии этанола и коррекции тималином.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ.

 
 

Введение диссертации по теме "Анатомия человека", Бреусенко, Дмиттрий Витальевич, автореферат

Актуальность проблемы. Вопросы возрастной морфологии человека и экспериментальных животных, в частности органов лимфоидной [иммунной] системы, в норме и при воздействии различных неблагоприятных факторов, постоянно привлекают внимание исследователей (Долгова М.А. и соавт., 1982; Петрова Т.Б., 1982; Савицкая Т.Н., 1985; Пугач П.В., 1990; Бородин Ю.И. и соавт., 1992; Сапин М.Р., 1994, 1996; Забродин В.А., 2004 и др.).

Тимус, являясь первичным органом иммунной системы, во многом определяет не только состояние периферических органов иммуногенеза, но и выраженность защитных реакций всего организма (Бернет Ф., 1964; Кемилева 3., 1984; Сапин М.Р. и Этинген JI.E., 1996; Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; AndersonG. Et al., 1999; Lio C.W. and Hsieh C.S., 2011 и мн. др.).

Иммунодефицитные состояния у детей раннего возраста достаточно часто встречаются в клинической практике. Среди причин, приводящих к иммунодефицитам, главенствующими являются неблагоприятные экзогенные влияния различной этиологии в пренатальном периоде онтогенеза, а также наличие патологии материнского организма. Употребление женщинами этанолсодержащих напитков, особенно в период беременности, является тем фактором, который самым неблагоприятным образом интегрирует причины, которые могут приводить к иммунодефицитным состояниям у новорождённых детей. Исследования показывают, что иммунодефицит можно отнести к постоянным проявлениям фетального алкогольного синдрома, часто возникающего у детей вследствие пренатального воздействия этанола (Таболин В.А. и соавт., 1988; Оготоева С.Н. и соавт., 2009; Johnsons, et al., 1981; Calvani M. Et al., 1985; Ewald D.J. and Frost W.W., 1987; McGill J. et. al., 2009).

В конце XX и начале ХХГвека появились работы, посвященные изучению иммунной системы, в которых показаны изменения, происходящие в тимусе и лимфатических узлах, вследствие пренатального воздействия этанола (Надыров Э.А., 1991; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011; Круглов СБ. и соавт., 2012). Важной задачей является поиск средств для коррекции возникающих нарушений.

В последние десятилетия проводятся многочисленные исследования, посвященные применению иммуномодуляторов в комплексной терапии различных заболеваний, одним из патогенетических механизмов которых являются иммунодефицитные состояния (Морозов В.Г. и соавт., 2000; Абдулаев Х.Р., 2003; Парахонский А.П., 2007; Долина А.Б., 2010; Панкратов О.В., 2011 и мн. др.).

Одним из известных препаратов является пептидный препарат тималин, полученный из тимуса телят в 1974 году В.Г. Морозовым и В.Х Хавинсоном (Морозов В.Г. и соавт., 1977). В практической медицине тималин применяется в комплексном лечении многих заболеваний, начиная с конца 70-х годов прошлого века.

В экспериментальных исследованиях было показано, что введение тималина оказывает положительное влияние как на ретикулярный эпителий, так и на лимфоидный компонент тимуса. Описано усиление пролиферации, дифференцировки лимфоидных клеток при введении тималина лабораторным животным (Кузник Б.И. и соавт., 1984; Хмелевская И.Г. и Ковальчук JI.B., 2000). Однако данных о влиянии тималина на тимус развивающегося организма при воздействии этанола в доступной литературе не обнаружено.

Таким образом, представляется актуальным провести экспериментальное исследование посвящённое выяснению особенностей строения тимуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза при воздействии этанола и на фоне иммунокоррекции тималином.

Цель исследования — изучить особенности строения тимуса крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола в пренатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза, а также при иммунокоррекции тималином.

Задачи исследования:

1. Определить морфометрические параметры и клеточный состав тимуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза у интактных крыс.

2. Выявить изменения морфометрических показателей и клеточного состава тимуса крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период) воздействия этанола.

3. Изучить влияние тималина на морфометрические показатели и клеточный состав тимуса крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период) воздействия этанола.

4. Определить на основе полученных данных корреляционные связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса в тимусе крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период).

Научная новизна исследования

Впервые установлено, что у крыс в подсосном периоде онтогенеза общей тенденцией динамики морфометрических показателей тимуса является то, что наибольшие значения темпов их прироста приходятся на первую неделю постнатальной жизни, а наименьшие - на вторую. Исключение составляют ТП линейных размеров правой доли, которые постепенно снижаются на протяжении всего периода наблюдений. Рост в длину левой доли тимуса происходит преимущественно в краниальном направлении на первой неделе жизни, а правой доли - в каудальном - на второй неделе жизни

Впервые показана динамика изменений морфометрических параметров тимуса, а также темпов их прироста у крыс после пренатальной этаноловой интоксикации и в условиях перорального поступления этанола в подсосном периоде. В первые две недели темпы прироста линейных размеров тимуса крыс при воздействии этанола существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели - резко понижаются.

Впервые показано, что у животных при воздействии этанола регистрируется выраженная сосудистая реакция в тимусе, проявляющаяся расширением и полнокровием внутриорганных сосудов, кровоизлияниями как в корковое, так и мозговое вещество, а также появлением фокусов некроза.

Впервые описано иммуномодулирующее влияние тималина на тимус крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола в пренатальном и постнатальном (подсосный период) периодах онтогенеза. Показано, что после иммунокоррекции в течение первой недели постнатальной жизни начинается стимуляция компенсаторных реакций, в большей степени в коре тимуса; в течение второй недели проявляется тенденция к нормализации линейных размеров тимуса; в течение третей недели начинает восстанавливаться клеточный состав мозгового вещества. Введение тималина постепенно уменьшает выраженность сосудистой реакции.

Впервые в динамике изучено распределение СЭЗ+ клеток у крыс подсосного периода в норме, после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации и при иммунокоррекциитималином.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Полученные данные существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о строении тимуса крыс, развивавшихся в условиях нормы и после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации, а также при иммунокоррекциитималином.

Сведения о влиянии этанола на тимус развивающегося организма, полученные в работе имеют важное теоретическое значение при исследовании становления других иммунных органов в онтогенезе.

Экспериментальные данные об особенностях строения тимуса организма, развивавшегося в норме, а также после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации и при иммунокоррекции тималином, представляют интерес для иммуноморфологов, педиатров и акушеров.

Внедрение результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ. Основные результаты диссертационного исследования включены в учебную программу кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО СПбГПМАМинздравсоцразвития России; кафедры анатомии человека и кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО «СевероЗападный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. В течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходят значительные изменения в строении тимуса, затрагивающие как его морфометрические параметры, так и клеточный состав. С возрастом появляется и усиливается взаимосвязь, отсутствующая у новорождённых животных, между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом.

2. Этанол вызывает существенные изменения динамики морфометрических параметров тимуса в подсосном периоде у крыс, подавляет его лимфопоэтическую функцию, пролиферацию и дифференцировку, усиливает разрушение клеток и изменяет темпы их миграции в органе.

3. Тималин оказывает иммуномодулирующее действие на тимус крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (в подсосный период) воздействия этанола. Степень выраженности этого эффекта и точки приложения зависят от длительности применения тималина.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009 г.); VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009 г.); 5 Всероссийском конгрессе «Человек и проблемы зависимостей: междисциплинарные аспекты» (Санкт-Петербург, 2011 г.).

Личный вклад соискателя в разработку проблемы. Работа выполнена в рамках комплексной темы НИР кафедры анатомии человека СПбГПМА (№ гос. регистрации 01200506433). Личный вклад соискателя в разработку проблемы оценивается в 80%. Автором лично произведены: эксперимент, анализ результатов морфометрического, гистологического и иммуногистохимического и статистического исследования, составление таблиц и построение диаграмм.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ (экспериментально-морфологическое исследование)"

выводы

1. В течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходит увеличение абсолютной и относительной масс тимуса, линейных размеров органа и его долей, изменяется клеточный состав. Появляются и усиливаются корреляционные связи между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом.

2. Наибольшие значения темпов прироста морфометрических показателей наблюдаются на первой неделе постнатальной жизни, а наименьшие - на второй. Рост в длину левой доли тимуса происходит преимущественно в краниальном направлении на первой неделе жизни, а правой доли - в каудальном - на второй. В клеточном составе происходит увеличение числа малых лимфоцитов и снижение числа остальных клеточных элементов.

3. При воздействии этанола темпы прироста линейных размеров тимуса крыс в течение первых двух недель жизни существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко понижаются. Наиболее интенсивно растут в длину доли тимуса на первой неделе жизни; темпы прироста левой доли увеличиваются в 2,6 раза, а правой - в 3,9 раза по сравнению с контролем.

4. Для клеточного состава тимуса крыс при воздействии этанола характерно снижение общего числа клеток, абсолютного и относительного количества лимфоцитов, в том числе и СОЗ+ клеток, а также митотически делящихся клеток. Происходит увеличение содержания ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток во всех возрастных группах, более выраженное в мозговом веществе.

5. Этанол вызывает сосудистые нарушения в виде расширения и полнокровия сосудов, а также кровоизлияний, выраженность которых нарастает в зависимости от длительности этаноловой интоксикации.

6. Введение иммуномодулятора крысам в подсосном периоде в течение двух недель приводит к нормализации линейных размеров тимуса, однако не

114 отражается на динамике изменений темпов прироста его морфометрических показателей.

7. Под влиянием иммуномодулятора (тималина) у крыс, подвергшихся этаноловой интоксикации, в тимусе компенсаторные процессы заключаются в увеличении числа малых лимфоцитов и снижении количества дегенерирующих клеток, стимуляции лимфопоэтической функции в корковом веществе на первой неделе постнатальной жизни, в мозговом веществе - на третьей. Тималин уменьшает выраженность сосудистых реакций, которые на 3 неделе иммунокоррекции исчезают.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о строении тимуса крыс в подсосном периоде в норме и при воздействии этанола необходимо использовать для изучения лимфоидных органов и всех систем организма.

2. Данные об особенностях распределения СБ 3+ клеток в тимусе крыс в подсосном периоде необходимо учитывать при проведении иммуногистохимических исследований методов на этих экспериментальных животных в возрастном аспекте.

3. Полученные экспериментальные данные об особенностях влияния тималина на тимус алкоголизированных животных возможно экстраполировать в клиническу практику.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Бреусенко, Дмиттрий Витальевич

1. Абдулаев Х.Р. Роль пептидных биорегуляторов в профилактике и лечении местных гнойных послеоперационных осложнений острого аппендицита: Автореф. дис. канд. мед.наук. М., 2003. 21 с.

2. Агеева В.А. Морфология тимуса растущего организма при воздействиидозированнной гиподинамии и гипокинезии. Дисс.канд. мед.наук.1. Волгоград, 2007. 147с.

3. Азизова Ф.Х. и др. Постнатальный онтогенез тимуса потомства в условиях хронического токсического воздействия на материнский организм / Ф.Х. Азизова, Н.К. Тухтаев, К.К. Расулов, О.О. Яриева // Морфология. 2012. Т. 141. №3. С. 9.

4. Аллаев М. Анатомия и топография вилочковой железы у человека в анте- и постнатальном онтогенезе: Автореф. дис. канд. мед.наук. Ташкент. 1990. 19 с.

5. Альтшулер В.Б. Алкоголизм. М., 2010. 264 с.

6. Балика Ю.Д., Карташова В.Е., Скосырева A.M. Воздействие алкогольной интоксикации беременных крыс на систему кроветворения их потомства //Акушерство и гинекология. 1982. № 9. С. 56-57.

7. Бернет Ф. Целостность организма и иммунитет. М.: Мир, 1964. 184 с.

8. БудажабонГ.Б. Взаимосвязи иммунитета и гемостаза в клинике: Автореф. дисс. докт. мед.наук. СПб., 1988. 32 с.

9. Вербицкая А.И. и др. Особенности эхографии вилочковой железы у детей в различные возрастные периоды / А.И. Вербицкая, Ю.А. Солохин, Н.Ф. Назарова и др. // Ультразвуковая и функциональная диагностика. 2001. № 3. С. 34-39.

10. Ю.Вершигора А.Е. Основы иммунологии. Киев: Вища школа, 1990. 735с.

11. П.Вишнякова Т.М. Роль иммунных нарушений в патогенезедиабетическойполинейропатии у детей с сахарным диабетом I типа и их коррекция: Автореф. дисс. канд. мед.наук. Чита, 2006. 18 с.

12. Воронов И.А. Эксперимент и методы обработки многомерных данных висследовании человека с применением SPSS: медико-биологическиеисследования, психология, физическая культура и спорт. СПб: ГОУВПО1. СПбГУТ, 2008. 100 с.

13. Галустян Ш.Д. Строение зобной железы в свете экспериментального анализа. М.: Изд-во АМН СССР, 1949. 184 с.

14. Гриневич Ю.А., Чеботарев В.Ф. Иммунобиология гормонов тимуса. Киев: Здоров'я, 1989. 143 с.

15. Гусман Б.С. Иммуноморфология детских инфекций. М, 1975. 245 с.

16. ДаренскаяС.Д. Острый абсцесс легкого: этиология, патогенез, лечение: Автореф. дисс. докт. мед.наук. М., 1993. 24 с.

17. Даренская С.Д., Будажабон Г.Б. Коррекция иммунитета и гемостаза у больных с абсцессами легких // Актуальные вопросы восстановительной и реконструктивной хирургии. Иркутск, 1989. С. 63-64.

18. Долгова М.А. и др. Антенатальное и раннее постнатальное развитее органов иммуногенеза / М.А. Долгова, Л.Д. Марцинкевич, Т.Д. Батюто и др. // Арх. анат., гистол. и эмбриол. 1982. № 2. С. 73-83.

19. Долина А.Б. Особенности иммунитета, перекисного окислениялипидов, лейкоцитарно-тромбоцитарно-эритроцитарных взаимоотношений при вторичном инфекционном эндокардите у детей: Автореф. дисс.канд. мед.наук. Чита, 2010. 19 с.

20. Дробленков A.B. Морфологические изменения нейронов и макроглиоцитовосновынх отделов мезокортиколимбическойдофаминергической системы при воздействии этанола. Автореф. дисс.докт. мед.наук. СПб, 2010. 43 с.

21. Ершова Г.И., Степанов С.А.Новые подходы к лечению аутоиммунного тиреоидита // Тихоокеанский медицинский журнал. 2005. № 5. С. 50-52.

22. Провизор. 2003. № 4. С. 12-17.29.3уфаров К.А., Тухтаев K.P. Органы иммунной системы (структурные и функциональные аспекты). Ташкент: Фан, 1987. 184с.

23. Ивановская Т.Е. и др. Патология тимуса у детей. / Т.Е. Ивановская, О.В. Зайратьянц, JI.B. Леонова и др. СПб: Сотис, 1996. 271 с.

24. Калинина И.И. Структурный и иммуноморфологический показатели дифференцировки тимоцитов в эмбриогенезе млекопитающих // Тр. Крымск.мед. ин-т. 1983. Т. 101. С. 122-123.

25. Каменев В.Ф.Журавлёв Ю.И.Оценка эффективности лечения больных ишемической болезнью сердца высокими дозами тималина // Современные наукоемкие технологии. 2007. № 4. С. 20-23.

26. Казарновская M.JL, Василос А.Ф., Дмитриенко В.Д. Мутагенное действие этилового спирта на культуру клеток человека // 1-й Всесоюзн. съезд судебных медиков. Тез.докл. Киев, 1976. С. 594-595.

27. Карелина Н.Р., Пугач П.В., Круглов C.B. Особенности строения тимуса новорожденных крыс, развивавшихся в условиях пренатальной этаноловой интоксикации//Морфология. 2012. Т. 141. № 3. С. 72.

28. Кемилева З.Вилочковая железа (перевод с болгарского). М.: Медицина, 1984. 256 с.

29. Кожемякин A.JL, Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Участие циклазной системы в молекулярных механизмах регуляции дифференцировки иммунокомпетентных клеток // Биохимия. 1984. - Т. 49., Вып. 4. С. 658-666.

30. Краюшкин А.И. Возрастные преобразования трехмерной формы тимуса // Новые технологии в медицине: Тр. ВолГМУ. 2004. Т. 60. Вып. 3. С. 65-68.

31. Круглов C.B. и др. Особенности строения брыжеечных лимфатических узлов новорожденных крыс, развивавшихся в условиях пренатальной этаноловой интоксикации / С.В.Круглов, Н.Р. Карелина, П.В. Пугач и др. // Морфология. 2012. Т. 141. № 3. С. 86.

32. КузникБ.И. и др Применение пептидных биорегуляторов в стоматологии / Б.И. Кузник, И.С. Пинелис, В.Х. Хавинсон. СПб.: Эскулап, 1999. 142 с.

33. Кузник Б.И., и др. Эффективность применения тималина при разлитых перитонитах в акушерской практике / Б.И. Кузник, В.Х.Хавинсон, В.Г.Морозов и др. // Акушерство и гинекология. 1984. № 9. С. 50-52.

34. Кузник Б.И., Будажабон Г.Б., Сытников И.А. Тималин как иммуномодулятор иммуногенеза и гемостаза // Фармакол. токсикол. 1984. № 1.С. 67-71.

35. Кузник Б.И. Применение пептидных биорегуляторов в хирургии и онкологии / Б.И.Кузник, В.Х.Хавинсон, Ю.А. Витковский. Чита, 2001. 352 с.

36. Кульбах О.С. Строение органов иммунной системы в условияхнарушения репродуктивной функции при радиационном воздействии.

37. Дисс.докт. мед. наук. СПб, 1996. 407 с.

38. Лакин Г.Ф. Биометрия: учебное пособие. М.: Высшая школа, 1980. 293 с.

39. Липченко В.Я., Александрова Л.И., Стаценко Г.В. Дольки вилочковой железы в онтогенезе и в эксперименте // Актуальные вопросы морфологии. Черновцы. 1990. С. 186.

40. Лиханов И.Д. Патогенетическое обоснование иммуномодулирующей терапии при остром абсцессе легких: Автореф.дис. канд. мед.наук. Чита, 2002. 19 с.

41. Логинова Н.П., Четвертных В.А. Апоптоз клеток тимуса при порокахсердца у новорождённых // Морфология. 2012. Т. 141. № 3. С. 93.

42. ЛозовойВ.П., Шергин С.М. Структурно-функциональная организация иммунной системы. Новосибирск. Наука. 1981. 224 с.

43. Машков А.Е. и др. Современные аспекты лечения осложненных форм острой деструктивной пневмонии у детей / А.Е.Машков, В.И. Щербина, В.Г Цумани др. // Альманах клинической медицины. 2005. № 8-1. С. 240249.

44. Морозова Е.В. Морфологические особенности вилочковой железы илимфатических узлов крыс в условиях пренатального воздействияиндометацина. Дисс.канд. мед.наук. J1. 1990. 313 с.

45. Морозова З.Ч. и др. Постстрессовая структура органов иммуногенеза укрыс / З.Ч. Морозова, А.И. Краюшкин, E.H. Фокина и др. // Морфология.2012. Т. 141. №3. С. 108-109.

46. Морозов В.Г. Влияние полипептидного фактора тимуса на систему циклических нуклеотидов иммунокомпетентных клеток // Вопросы мед.химии. 1982. № 4. С. 114-118.

47. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Иммуномодулирующее действие фактора тимуса в патологии // Иммунология. 1981. №5. С.28-31.

48. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения). СПб.: Наука, 1996.74 с.

49. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Ильин Н.В. Влияние низкомолекулярного фактора тимуса на Т-клетки крови человека // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1978. № 7. С. 61-65.

50. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Пептидныетимомиметики. СПб., 2000. 158 с.

51. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Писарев O.A. Выделение из тимуса и изучение природы фактора, стимулирующего иммуногенез // Докл. АН СССР. 1977. Т. 233. № 3. С. 491-494.

52. Мочалова Т.А. Влияние алкогольной интоксикации самок белых крыс на систему эритрона у потомства в раннем постнатальном онтогенезе. Дисс.канд. биол. наук. Иваново, 2003. 107 с.

53. Надыров Э.А. Постнатальное развитие и реактивность тимуса у потомства крыс алкоголизированных во время беременности. Дисс.канд. мед.наук. Караганда 1991, 137 с.

54. Никогосова О.В., Зотова В.В.Абилитация детей с перинатальными инфекциями // Медицинский вестник Северного Кавказа. 2010. Т. 19. № 3. С. 42-43.

55. Новиков В.Д., Труфакин В.А. Органы тимо-лимфатической системы. Новосибирск. 1980. 29 с.

56. Новиков B.C. и др. Биорегуляция в медицине катастроф / В.С.Новиков, Г.М.Яковлев, B.C. Смирнов и др. СПб.: Наука, 1992. 48 с.

57. Панкратов О.В. Иммуномодуляторы в лечении герпетической инфекции // Охрана материнства и детства. 2011. № 1-17. С. 80-84.

58. Парахонский А.П. Применение иммунотропных препаратов в профилактике и терапии // Успехи современного естествознания. 2007. № 6. С. 83-84.

59. Пасюк A.A. Вилочковая железа белой крысы в постнатальном онтогенезе // Медицинский журнал: рецензируемый научно-практический журнал. 2006. № 1.С. 71-73.

60. Патеюк В.Г. и др. Тималин в лечении больных рожей / В.Г. Патеюк, Г.Б. Будажабон, Б.И. Кузник // Клин.мед. 1987. № 7. С. 110-113

61. Петрова Т.Б. Развитие тимуса крыс в норме и при воздействии антибиотика//Тр. Крымск.мед. ин-та. 1983. Т. 101. с. 218.

62. Петрова Т.Б. Морфологические особенности вилочковой железы крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза привоздействии тетрациклина.Автореф. дисс. .канд. мед.наук. Симферополь. 1984.

63. Попова Э.Н. Ультраструктура мозга, алкоголь и потомство. М.: Научный мир, 2010. 158 с

64. Прокопьева В.Д. Молекулярные механизмы влияния этанола и егометаболитов на клеточные мембраны in vitro и invivo. Дисс.докт. биол.наук. Томск, 2003. 226 с.

65. Пугач П.В. Строение лимфоидных бляшек тонкой кишки белых крыс вразличных условиях развития организма // Архив анат., гистол. и эмбриол.1990. Т.98. № 2. С. 68-74.

66. Пугач П.В. и др. Особенности строения тимуса и лимфатических узлов новорожденных крыс после пренатального воздействия алкоголя /П.В.Пугач, Н.Р.Карелина, С.В.Круглов и др. //Современные проблемы морфологии. СПб, 2008. С. 125-128.

67. Пугач П.В. и др. Особенности строения иммунных органов новорожденных крыс после пренатального воздействия алкоголя /П.В.Пугач, Н.Р.Карелина, С.В.Круглов и др. //Ретиноиды. 2009. Вып. 29. С. 147-150.

68. Пугач П.В. и др. Иммуноморфологические аспекты выживаемости крыс в течение первой недели постнатальной жизни после пренатальной алкоголизации / П.В. Пугач, Д.В. Бреусенко, C.B. Свиринв и др. // Морфология. 2010. Т.137. № 4. С. 159.

69. Пугач П.В. и др. Влияние длительности этаноловой интоксикации самок до и во время беременности на количество и массу тела новорожденных крыс/ П.В. Пугач, C.B. Круглов, С.Ю. Бажин и др. // Морфология. 2012. Т. 141. №3. С. 130.

70. Пугач П.В. Влияние длительности этаноловой интоксикации на крыс и иммунные органы их потомства (экспериментально-морфологическое исследование). Автореф. дисс. . докт. мед.наук. СПб., 2012. 44 с.

71. Румянцева JI.C. Морфологические изменения тимуса при стрессовомвоздействии и антигенной стимуляции. Автореф. дисс.канд. биол. наук.1. М., 1977. 24 с.

72. Савицкая Т.Н. Строение трахеобронхиальных и брыжеечных лимфатических узлов в антенатальном и постнатальном периодахонтогенеза (анатомо-экспериментальное исследование). Дисс.канд.мед.наук. JL, 1985. 251 с.

73. Сапин М.Р. Детский возраст и органы иммуногенеза // Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицинской морфологии. Смоленск, 1994. С. 118.

74. Сапин М.Р., ЭтингенЛ.Е. Иммунная система человека. М.: Медицина, 1996. 304с.

75. Сапин М.Р., Никитюк Д.Б. Иммунная система, стресс и иммунодефицит. М.: Джангар, 2000. 184с.

76. Свирин C.B. Строение брыжеечных лимфатических узлов у новорождённых крыс при воздействии алкоголя на систему «мать-плод» (экспериментально-морфологическое исследование). Автореф. дисс. канд. мед.наук. СПб., 2010. 22 с.

77. Сенцова Т.Б., Ворожко И.В. Иммуномодуляторы в педиатрической практике // Вопросы практической педиатрии. 2009. Т. 4. № 1. С. 72-76.

78. Сизоненко В.А., Варфоломеев А.Р. Биорегулирующая терапия при термической травме. Чита, 1999. 156 с.

79. Сизоненко В.А., Цепелев B.JL, Цыбиков H.H. Применение эпиталамина для лечения больных с тяжелыми ожогами // Интенсивное лечение тяжелобольных. М., 1992. С. 147-149.

80. Скосырева A.M. Влияние этилового спирта на развитие эмбрионов стадии органогенеза//Акуш. игинекол. 1973. № 4. С.15-18.

81. Скосырева A.M. Сравнительное изучение прямого эмбриотоксического действия алкоголя и его метаболита ацетальальдегида в период органогенеза//Акуш. игинекол. 1982. № 1. С.49-50.

82. СкосыреваА.М. и др. Экспериментально-клиническое изучение влияния алкоголя на генеративную функцию и развитие потомства / A.M. Скосырева, Л.Ф. Курило, A.B. Скальный // Алкоголизм и наследственность. Мат-лымеждунар. симп. М., 1987. С.134-138.

83. СкосыреваА.М. и др. Влияние злоупотребления алкоголем на состояние здоровья женщин и их потомства / A.M. Скосырева, Ю.Д .Балика, С.К. Кочиева // Акушерство и гинекол. 1993. № 2. С. 48-51.

84. Смирнова О.Ю., Денисова Г.Н. Структура зачатка лимфатического узла плодов крыс после пренатального воздействия стрессорных факторов нерадиационной природы // Морфология. 2012. Т. 141. № 3. С. 144-145.

85. Таболин В.А. и др. Алкоголь и потомство / В.А. Таболин, С.А. Жданова, И.Н. Пятницкая и др. М.: Высшая школа, 1988. 110 с.

86. Таболин В.А., Урывчиков Г.А. Алкогольный синдром плода: (Обзор литературы) // Вопр. охраны материнства и детства. 1986. № 5. С. 48-54.

87. ТимошенкоЛ.В., Скакун Н.П., Скакун Г.К. Алкогольный синдром плода. Киев: Здоров'я, 1987. 112 с.

88. Торбек В.Э. Морфогенез тимуса. М.: РУДН. 1995. 116 с.

89. Торбек В.Э. Микро- и ультраструктура тимуса потомства крыс после их алкоголизации // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1999. Т. 100. № 6. С. 6165.

90. Торбек В.Э. Морфофункциональное состояние ретикулоэпителиальных клеток тимуса у потомства алкоголизированных крыс // Морфология. 2010. Т. 137. № 4. С.91.

91. Улла М. и др. Иммуномодуляционный эффект гомо- и гетеротиптческих стрессоров в растущем организме // М. Улла, М.Ю. Капитонова, M.H.K. Нор Анишкин и др. // Морфология. 2012. Т. 141. № 3. С. 160.

92. Успенский А.Е. Токсикологическая характеристика этанола // Теоретические основы поиска средств для лечения алкоголизма: Итоги науки и техники. Сер. Токсикология. 1984. Т. 13. С. 6-56.

93. Фёдорова О.В. Морфологическая и иммуногистохимическая характеристика тимуса при различных видах хронического стресса наранних этапах постнатального онтогенеза. Дисс.канд. мед.наук.1. Волгоград, 2005. 148с.

94. Хлыстова З.С. Становление системы иммуногенеза плода человека. М.: Медицина. 1987. 256 с.

95. Хмелевская И.Г. Ковальчук J1.B. Анализ иммунотропной активности антибиотиков и протеолитических ферментов на различных экспериментальных моделях индукции иммунодефицитного состояния. // Иммунология. 2000. № 4. С. 42-45.

96. Цыбенова Б.Ц. Патогенетическое обоснование иммуномодулирующей терапии хронических воспалительных заболеваний легких у детей: Автореф. дисс. канд. мед.наук. Чита, 2003. 20 с.

97. Чеботарь H.A., Конописцева JI.A. Механизмы тератогенного действия алкоголя//Морфология. 1993. Т.105. № 9-10. С. 19-26.

98. Чурилова Н.И. Влияние пргестерона на антенатальное развитиевилочковой железы белых крыс. Автореф. дисс.канд. мед.наук. СПб.1999. 24 с.

99. Юрина H.A., Румянцева JI.C. Особенности микро- и ультраструктры тимуса и его реактивности в постнатальном онтогенезе // Физиология и патология тимуса. М.: РУДН, 1986. С. 4-7.

100. Ярилин A.A., Пинчук В.Г., Гринёва Ю.А. Структура тимуса идифференцировка Т-лимфоцитов. Киев. 1991. 244 с.

101. Abel E.L. Prenatal effects of alcohol // Drug. Alcohol. Depend. 1984. Vol. 14. № l.P. 1-10.

102. Anderson G., Hare K.J., Jenkinson E.J. Positive selection of thymocytes: the long and winding road // Immunol Today. 1999. Vol. 20. №10. P.463-468.

103. Anderson G., Jenkinson E.J.Lymphostromal interactions in thymic development and function // Nat. Rev. Immunol. 2001. № 1. 31-40.

104. Anderson M.S., Su M.A. Aire and T cell development // Curr. Opin. Immunol. 2011. Vol. 23. № 2. P. 198-206.

105. Arya S. et al. The Thymus / Arya S., Gilbert E., Hong R. et al. // Endocrine pathology, general and surgical. 1982. P. 767-833.

106. Bacon F.S. Counseling aspects of alcohol use in pregnancy: Beyond primary prevention // Alcoholism Treatment Quarterly. 1988. Vol. 5. № 3-4. P. 257-267.

107. Bains I. et al. Quantifying the development of the peripheral naive CD4+ T-cell pool in humans / I. Bains, R. Antia, R. Callard et al. // Blood. 2009. Vol. 113. №22. P. 5480-5487.

108. Bellamy D., Mohamed K. A comparative study of age involution of the bursa of Fabriciusan thymus in birds //Thymus. 1982. Vol. 4. № 2. P. 107-114.

109. Blakley P.M., Scott W.J. Jr. Determination of the proximate teratogen of the mouse fetal alcohol syndrome. 2. Pharmacokinetics of the placental transfer of ethanol and acetaldehyde //Toxicol. Appl. Pharmacol. 1984. Vol. 72. № 2. P.364-371.

110. BrienJ.F. et al. Disposition of ethanol in maternal blood, fetal blood, and amniotic fluid of third-trimester pregnant ewes / J.F. Brien, D.W. Clarke, B. Richardson B et al. //Am. J. Obstet. Gynecol. 1985. Vol. 152. № 5. P. 583-590

111. Burd L., Hofer R. Biomarkers for detection of prenatal alcohol exposure: a critical review of fatty acid ethyl esters in meconium // Birth. Defects. Res. A Clin. Mol. Teratol. 2008. Vol. 82. № 7. P. 487-493.

112. Calvani M. et al. Fetal alcohol syndrome: clinical, metabolic and immunologic follow-up in 14 cases / M.Calvani, D.Ghirelli, M.Calvani et al. // Minerva Pediatr. 1985. Vol. 37. № 3. P. 77-88.

113. Clarke A.G., Kendall M.D. Histological changes in the thymus during mouse pregnancy // Thymus. 1989. Vol. 14. № 1-3. P. 65-78.

114. ClarkS.L.The thymus in mice of strain 129/J, studied with the electron microscope // Am. J. Anat. 1963. Vol. 112. P. 1-33.

115. ClarrenS.K. et al. Brain malformations related to prenatal exposure to ethanol / S.K. Clarren, E.C. Alvord Jr., S.M. Sumi et al. // J. Pediatr. 1978. Vol. 92. № 1. P. 64-67.

116. Csaba G., Kovacs P., Pallinger E. Changes in the endorphin and serotonin content of rat immune cells during adulthood following maternal exposure to ethanol during pregnancy and lactation // Alcohol. 2006. Vol. 38. № 2. P.lll-116.

117. Duijvestijn A.M., Hoefsmit E.C. Ultrastructure of the rat thymus: the microenvironment of N-lymphocyte maturation // Cell. Tissue. Res. 1981. № 2. P. 279-292.

118. Edelmann S.L, Marconi P., Brocker T. Peripheral T cells re-enter the thymus and interfere with central tolerance induction // J. Immunol. 2011. Vol. 186. № 10. P. 5612-5619.

119. Ewald S.J., Frost W.W. Effect of prenatal exposure to ethanol on development of the thymus //Thymus. 1987. Vol. 9. № 4. P. 211-215.

120. Fontaine-PerusJ.C. Seeding of the 10-day mouse embryo thymic rudiment by lymphocyte precursors in vitro //, F.M. Caiman, C.Kaplan et al. // J. Immunol. 1981. Vol. 126. № 6. P. 2310-2316.

121. Goldstein D.B. Effect of alcohol on cellular membranes // Ann. Emerg. Med. 1986. Vol. 15. №9. P. 1013-1018.

122. Hale T. Medications and Mother's Milk. Pharmasoft Medical Publishing,2006.

123. Harris R.A., Trudell J.R., Mihic S.J. Ethanol's molecular targets // Sci Signal. 2008. I(28):re7.

124. Hendrix T.M. et al. Thymic nurse cells exhibit epithelial progenitor phenotype and create unique extra-cytoplasmic membrane space for thymocyte selection / T.M.Hendrix, R.V. Chilukuri, M. Martinez, et al. // Cell. Immunol. 2010. Vol. 261. №2. P.81-92.

125. Higley H.R., Rowden G. Thymicinterdigitating reticulum cells demonstrated by immunocytochemistry // Thymus. 1984. Vol. 6. № 4. P. 243-253.

126. A practical clinical approach to diagnosis of fetal alcohol spectrum disorders: clarification of the 1996 institute of medicine criteria / H.E. Hoyme, P. A. May, W.O. Kalberg et al. // Pediatrics. 2005. Vol. 115. № 1. P, 39-47.

127. Janossy G. et al. Cellular differentiation of lymphoid subpopulations and their microenvironments in the human thymus / G. Janossy, M. Bofill, L.K. Trejdosiewicz et al. // Curr. Top. Pathol. 1986. Vol. 75. P.89-125.

128. Johnson S. et al. Immune deficiency in fetal alcohol syndrome / S. Johnson, R.Knight, D.J. Manner et al. // Pediatr. Res. 1981. Vol. 15. № 6. P. 908-911.

129. Jones K.L. et al. Fetal alcohol spectrum disorders: Extending the range of structural defects / K.L. Jones, H.E. Hoyme, L.K. Robinson et al. // Am. J. Med. Genet. 2010. Vol. 152A. № 11. P. 2731-2735.

130. Jones K.L., Smith D.W. Recognition of the fetal alcohol syndrome in early infancy // Lancet. 1973. № 302. P. 999-1001.

131. Kendall M.D. The thymus and haemopoiesis // ProgClinBiol Res. 1981. Vol. 59B. P. 221-30.

132. King J.C., Fabro S. Alcohol consumption and cigarette smoking: effect on pregnancy // Clin Obstet. Gynecol. 1983. Vol. 26. №2. P. 437-448

133. Little R.E., Northstone K., Golding J. Alcohol, breastfeeding, and development at 18 months // Pediatrics. 2002. Vol. 109. № 5. P. E72.

134. Love P.E., Bhandoola A. Signal integration and crosstalk during thymocytemigration and emigration // Nat. Rev.Immunol. 2011. Vol.11 № 7. P.469-477.

135. May P.A. et al. Epidemiology of FASD in a province in Italy: Prevalence and characteristics of children in a random sample of schools / P.A. May, D. Fiorentino, PJ Gossage et al. // Alcohol ClinExp Res. 2006. Vol. 30 № 9. P. 1562-1575.

136. McGillJ. et al. Fetal exposure to ethanol has long-term effects on the severity of influenza virus infections /J. McGill, D.K.Meyerholz, M. Edsen-Moore et al. //J. Immunol. 2009. Vol. 182. № 12. P. 7803-7808.

137. Miller M. Prenatal alcohol exposure studies // Genet. Eng. News. 1986. №10. 49 p.

138. Molteno C.D. et al. Infant Symbolic Play as an Early Indicator of Fetal Alcohol-Related Deficit / C.D. Molteno, J.L. Jacobson, R.C. Carter et al. // Infancy. 2010. Vol. 15. № 6. P. 586-607.

139. Miller J.F.A.P. The discovery of thymus function and of thymus-derived lymphocetes // Immunol. Rev. 2002. Vol. 185. №1. P.7-14.

140. Mori K. et al. The perivascular space as a path of hematopoetic progenitor cell and mature T-cells between the blood circulation and the thymic parenchyma /, M. Ito, N. Tsukamoto et al. // Int. Immunol. 2007. Vol. 19. № 6. P. 745-753.

141. Osmond D.G. The ontogeny and organization of the lymphoid system // J. Invest. Dermatol. 1985. Vol. 85. № 1 (suppl.). P. 2s-9s.

142. Padmanabhan R., Hameed M.S. Effects of acute doses of ethanol administered at pre-implantation stages on fetal development in the mouse // Drug. Alcohol. Depend. 1988. Vol. 22. № 1-2. P. 91-100.

143. Ponnappa B.C., Rubin E. Modeling alcohol's effects on organs in animal models // Alcohol. Res. Health. 2000. Vol. 24. № 2. № 93-104.

144. Pullen G.L., Singh S.P., Snyder A.K. Growth patterns of the offspring of alcohol-fed rats//Growth. Dev. Aging. 1988. Vol. 52№ 2. P.85-89.

145. Quellette E.M. et al. Adverse effects on offspring of maternal alcohol abuse during pregnancy / E.M. Quellette, H.L. Rosett, N.D. Rosman et al. // Year Book Obstet.Gynecol. Chicago, London, 1979. P. 170-171.

146. Raica M. et al. Increased mast cell density and microvessel density in the thymus of patients with myasthenia gravis / M. Raica, A.M. Cîmpean, S. Encicäet al. // Rom. J. Morphol. Embryol. 2007. Vol. 48 № 1. P. 11-16.

147. Selye H.A. Syndrome prodused by noxiousagents // Nature. 1936. Vol. 138. P. 32-33.

148. Sreenathan RN, Padmanabhan R, Singh S. Effect of low doses of ethanol on fetus & fetal milieu in rat// Indian. J. Exp. Biol. 1983. Vol. 21. № 3. P. 108-112.

149. Sun G.Y., Sun A.Y. Chronic ethanol administration induced an increase in phosphatidylserine in guinea pig synaptic plasma membranes // BiochemBiophys Res Commun. 1983. Vol. 113. № 1. P. 262-268/

150. Sun G.Y., Sun A.Y. Ethanol and membrane lipids // Alcohol. Clin. Exp. Res. 1985. Vol. 9. №2. P. 164-180.

151. Tanaka H. et al. Fetal alcohol syndrome in rats: conditions for improvement of ethanol effects on fetal cerebral development with supplementary agents / Tanaka H., Iwasaki S., Nakazawa K. et al. // Biol. Neonate. 1988. Vol. 54. № 6. P. 320-329.

152. Van WieringenH. et al. Diagnosis of fetal alcohol spectrum disorders / H. Van Wieringen, T.G. Letteboer, R.R. Pereira et al. // Ned. Tijdschr. Geneeskd. 2010. Vol. 154. №34. P. A331.

153. Yang Q., Jeremiah Bell J., Bhandoola A. T-cell lineage determination. Immunol. Rev. 2010 Vol.238. №1. P. 12-22.