Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Состояние функционально-метаболической активностинейтрофильных лейкоцитов у больных пищевымитоксикоинфекциями различной этиологии



í 99

- - ПОП (^ггл-ч?;гдя

w 1. i wV.— i C/* ff

Ka правах рукописи

Афашагова Марина Муштафаровиа

Состояние функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов у больных пищевыми токснкоинфскциямн различной этиологии

14.00.10 - Инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Нальчик 1999

Работа выполнена в Кабардино-Балкарском государственном университете им. Х.М.Бербехова Министерства общего и профессионального образования Российской Федерации.

Научный руководитель: действительный член РАЕН.

доктор медицинских наук, профессор Нагоеп Б.С.

Официальные оппоненты: член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Малеев В.В.

Ведущая организация: Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Защита состоится " 999 г. в часов на заседании

диссертационного совета К-063.88.03. при Кабардино-Балкарском государственном университете (360004, г.Нальчик, ул.Чернышевского, 173)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке медицинского факультета Кабардино-Балкарского государственного университета (360000, г.Нальчик, ул. И.Арманд, 1).

доктор медицинских наук, профессор Мельник Г.В.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совет; К - 063.88.03, доцент

Фокичсва Н.Х.

/

Актуальность темы. Проблема пищевых токсикоинфекций остается одной из актуальных тем инфекционной патологии, что обусловлено увеличением частоты пищевых токсикоинфекций условно-патогенной этиологии (В.А Постовт, 1997; В И Покровский, В.В Малеев,!996,1599). Годовой урозень заболеваемости пищевыми токсикоинфекциями и сальмонеллсзом за последние 5-10 колебался от 50 до 100 случаев заболевания на 100 тысяч взрослого населения (И.Л.Щаханина, 1996; Г.Г.Онищенко, 1997). Заболеваемость ботулизмом относительно невысока, но тяжесть болезни и высокая летальность объясняют повышенный интерес к этой инфекции (В А.Постовит, 1984, 1997; Б.С.Нагоев, 1997; Бети,1993).

Рост числа заболеваний, вызываемых условно-патогенными возбудителями, в значительной мере связан с изменении.«! реактивности организма и в особенности иммунного ответа, который, как правило, медленно формируется и является непостоянным, что приобретает часто ведущее значение в патогенезе и клинических проявлениях. Поэтому многие инфекции, вызываемые условно-патогенными микроорганизмами, характеризуются внутриклеточной локализацией возбудителя, неполноценным иммунным ответом и снижением 'неспецифической реактивности организма (В.И.Покровский, В.В Малееэ, 1999). В связи с этими данными весьма актуальны поиски новых методов исследования по оценке специфичности, чувствительности и установления их сравнительной диагностической значимости при пищевых ток-сикоикфекциях различной этиологии.

Известно, что важнейшим звеном неспецифической резистентности организма является функциональное состояние нейтрофильных. лейкоцитов, участвующих в процессе фагоцитоза и внутриклеточного перезаривания бактериальных и других агентов (В.Е.Пигаревский, 1978;

A.Н Маянский, Д.Н.Маякский, 1983, 1989; Б.С.Нагоев, 1986, 1991;

B.И.Покровский с соавт., 1987; Babior, 1984, Houde, Grey, 1986; Klebanoff, 1992, Pauksen с соавт, 1994). В лейкоцитах обнаружено около 60 биологически активных соединений Так, активность микробицидной системы обеспечивается содержимым лизосомальных структур нейтрофильных гранулошттов, в частности, кислой и щелочной фосфатазой, миелоперок-сидазой, уровнем катионных белков, гликогеном, липидами и др. (Б.С.Нагоев, 1986, 1991, Cochrane, Aikin, 1986; ,Kohn с соавт., 1993; Klebanoff. 1992; Gray, Haseman, 1994). Поэтому, представляется актуальным изучение состояния бактерицидной системы нейтрофилоз при пищевых токсикоинфекциях различной этиологии.

Наиболее изученным является сальмонеллез, тогда как систематического изучения внутрилейкоцитарных компонентов нейтрофилов в динамике пищевых токсикоинфекций условно-патогенной этиологии и ботулизма не проводилось Нет данных о функционировании микробицидной системы лейкоцитов у больных пищевыми токсикоинфекциями

цитробактериозной, клебсиеллезной, энтеробактериозкой. протейной и стафилококковой этиологии, ботулизма; состояния этой системы при развитии токсико-инфекционного и гиповолемического шоков. Между тем. исследование активности лейкоцитов с изучением содержания миелопе-роксидазы, кислой фосфатазы, катионного белка, гликогена; уточнение роли и значения показателей спонтанного НСТ-теста в динамике пищевых токсикоинфекций различной этиологии могло бы раскрыть неизвестные механизмы реактивности организма при этой патологии, что и побудило к выбору темы данной диссертационной работы.

Цель работы. Провести клинико-цитохимическую оценку неспецифической реактивности организма путем изучения состояния важнейших компонентов микробицидной системы и показателей функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных пищевыми токси-коинфекциями различной этиологии в зависимости от стадии и степени тяжести процесса, клинической форма заболевания, наличия сопутствующих заболевания и развившихся осложнений. Задачи исследования:

1. У больных пишевыми токсикоинфекциями условно-патогенной этиологии, сальмонеляезом и ботулизмом изучить в нейтрофиль-ных гранулоцитах динамику активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, содержания катионного белка, гликогена для выяснения их роли в патогенезе заболевания.

2. Изучить состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов при помощи изучения показателей спонтанного НСТ-теста у больных пищевыми токсикоинфекциями .

3. Установить с помощью цитохимических методов исследования диапазон колебания основных внутриклеточных компонентов микробицидной системы лейкоцитов, показателей спонтанного НСТ-теста у здоровых людей (контрольная группа).

4. Исследовать сопряженность между изменениями интралейкони-тарных компонентов микробицидной системы и основными показателями лабораторного исследования крови (лейкоцитозом, па-лочкоядерным сдвигом, СОЭ).

5. Установить возможную клинико-диагностическую ценность определения цитохимических показателей в динамике заболевания пищевыми токсикоинфекциями различной этиологии

Работа проводилась в соответствии с комплексным планом НИР Кабардино-Балкарского государственного университета Минобразования РФ по программе «Университеты России», раздел II «Медицина». Тема: «Изучение показателей микробицидной системы лейкоцитов и сыворотки крови организма в норме и при инфекционных заболеваниях различной этиологии», зарегистрирована в ВНТИ-Центре, государственная регистрация № 01.9.50003849.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование основных компонентов микробкцидной системы лейкоцитов у больных пищевыми токсикоинфекциями условно-патогенной этиологии в сравнении с данными при сальмонеллёзе и ботулизме, которое показало, что изменения функционально-метаболической активности лейкоцитов носят однокока-прааленный и неспецифический характер. В основе изменений лежит угнетение активности миелопероксидазы и уменьшение содержания катионного белка, возрастание активности кислой фосфатазы, накопление гликогена и повышение НСТ-теста. У больных пищевой токсикоинфекцией различной этиологии установлена зависимость изменения интралейкоцитарных компонентов и показателей активности спонтанного НСТ-теста от вида возбудителя, стадии и степени тяжести болезни, характера сопутствующих заболеваний и осложнений, а также от полноты выздоровления.

Практическая значимость работы. Практическое значенне диссертационной работы состоит в том, что показана возможность использования результатов данных цитохимических исследований внутриклеточных компонентов нейтрофильных гранулоцитоз, показателей спонтанного НСТ-теста лейкоцитов в качестве критерия для оценки степени тяжести патологического процесса, развития осложнений, прогнозирования исходов болезни, а также полноты выздоровления.

Определены нормальные показатели активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, содержания гликогена и катионного белка в лейкоцитах у здоровых людей по использованным методикам и модификациям. Установлены активность и процент НСТ-положителшых клеток, которые могут быть использованы в качестве исходных критериев при оценке результатов цитохимических и цитоиммунологических исследований с помощью использованных методик.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При пищевых токсикоинфекциях условно-патогенной этиологии, ботулизме и сальмонеллёзе изменение состояния важнейших компонентов микробкцидной системы нейтрофилов и показателей НСТ-теста лейкоцитов носит общий и неспецифический характер, являясь объективным критерием состояния резистентности организма.

2 В основе функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов у больных пищевыми токсикоинфекциями различной этнологии лежит угнетение активности миелопероксидазы, снижение содержания катионного белка, повышение активности кислой фосфатазы, гликогена и показателей спонтанного НСТ-теста.

3. Степень и длительность изменения функционально-метаболической активности лейкоцитов при пищевых токсикоинфекциях зависят

от этнологического фактора, стадии и степени тяжести заболевания Они более выражены при тяжелых и осложненных формах 'заболевания и при неблагоприятном исходе.

Внедрение в практику. Результаты диссертационной работы доложены на многих научно-практических конференциях, симпозиумах и широко опубликованы в печати. Результаты исследований внедрены в кли-нико-лабораторную практику Республиканского центра инфекционных болезней МЗ КБР и используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии медицинского факультета Кабардино-Балкарского государственного университета при прохождении тем «Пищевые токсикоинфекции». "«Сапьмонеллез», «Ботулизм», «Инфекция и инфекционный процесс», «Неспешфичесхая реактивность и иммунитет»

Публикации: по материалам диссертационной работы опубликовано 21 научная работа.

Апробация диссертационного материала. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных итоговых конференциях сотрудников Кабардино-Балкарского государственного университета (Нальчик, 1991-1998), конференциях молодых ученых «Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению» (Нальчик, 1995,1998), на Всероссийской конференции «Цитохимия лейкоцитов в эксперименте и клинике» (Нальчик, 1991), на XII -- XIII Поссийскон конференциях (Челябинск. 1995, 1997), на 2-ой Всероссийской конференции «Гомеостаз п инфекционный процесс» (Саратов, 1998).

Диссертационная работа апробирована на научной конференции кафедры инфекционных болезней и Республиканского центра инфекционных болезней (Нальчик, июнь1999 г.).

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 193 страницах машинописного текста и содержит: введение, 7 глав, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 215 отечественных и 105 иностранных авторов. Иллюстрации представлены 75 таблицами, 28 рисунками и 13 выписками из клинических наблюдений

Материал и методы исследовании

Клинпко-лабороторная характеристика обследованных больных. В настоящей работе представлены результаты обследования 267 больных пищевыми токсикоинфекниями различной этиологии. В том числе' 135 больных пищевыми токсикоинфекциями условно-пато: еннон этиологии, 70 больных сальмонеллезом, 62 больных ботулизмом Распределение больных с учетом возраста представлено и таблице 1.

Таблица 1

Состав обследованных больных

Группа обследованных Число больных Возрастные группы

До 20 лет От 21 до 40 От 41 до 60 От 61 и старше

Пищевые токсикоинфекции условно-патогенной этиологии 135 38 46 38 32

Сальмонеллёз 70 И 23 25 20

Ботулизм 62 4 19 Г ю 1

Всего больных 267 53 88 73 53

%% 100 18 36 28 18

Пищевая токсикоинфекция условно-патогенной этиологии. Под наблюдением находилось 135 больных. В группе пищевых токсикоинфекций, обусловленных условно-патогенной флорой, Klebsiella pneumonia обнаружена у 21 больного, Escherihia coli у 18 больных, Staphylococcus aureus - у 16 больных, Citrobacter freundii - у 14, Proteus vulgaris et mirabilis -- у 14 больных. Pseudornonas - у 11 и Enterobacter cloacae ^ у 10 человек

В наблюдаемой группе гастритический вариант течения пищевой токсикоинфекции зарегистрирован у 27 больных, гастроэнтеритический -у 66 больных, гастроэнтероколитический - у 42. Легкую форму заболевания перенесли 49 больных, среднетяжелую - 48 и тяжелую - 38 больных Сопутствующая патология выявлена у 55 больных. У 15 больных развились осложнения. В одном случае наблюдался летальный исход.

Сальмонеллез. Под наблюдением находилось 70 больных. Все наблюдаемые нами больные перенесли гастроинтестикальную форму заболевания. Гастритический вариант наблюдался у 3 больных, гастроэнтеритический - у 38 , гастроэнтероколитический - у 29 больных. Легкую форму болезни перенесли 10 больных, среднетяжелую - 45, тяжелую - 15. У 19 больных развились осложнения сальмонеллеза. Более половины (44) больных имели сопутствующую патологию.

Ботулизм. Под нашим наблюдением находилось 62 больных ботулизмом. Легкую форму заболевания перенесли 18 пациентов, среднетяжелую - 34 пациента, тяжелую - 10 больных. Осложнения ботулизма зарегистрированы у 9 больных В одном случае наблюдался летальный исход. Сопутствующая патология выявлена у 26 больных.

Цитохимические и иммунологические методы исследования. Для решения поставленных задач нами использован комплекс цитохимических и иммунологических методов исследования нейтрофильных гра-нулоцитов. Для изучения миелопероксидазы использован метод Sato (1928), кислой фосфатазы - Goldberg и Barka (1962) в модификации В И.Дудецкого (1970), цитохимическое определение катионного белка в

7

лейкоцитах осуществляли по методу М.Г.Шубина (1974) в прописи Б.С.Нагоева (1983) с использованием красителя бромфенолового синего при pH 8,2. Выявление гликогена в лейкоцитах проводили по А.Л.Шабадашу (1947) с применением Шифф-реактива.

Для изучения функционально-метаболической активности был использован тест спонтанного восстановления нитросипего тетразолия (НСТ-тест) нейтрофильными лейкоцитами периферической крови Спонтанный HCT-тест определяли по методике Stuart с соавт.(1975) в модификации Б.С.Нагоева (1983). Для количественного определения содержания цитохимических компонентов и активности ферментов, показателей НСТ-теста в лейкоцитах крови использован метод Kaplow (1955), позволяющий сравнить полученные результаты в условных единицах. Для анализа и оценки полученных данных применялись стандартные методы описательной статистики: вычисление средних значений и их стандартных ошибок (Х±т). Достоверность количественных различий определялась с помощью критерия Стыодента для независимых выборок с использованием основных законов и положений статистики (Д.А.Сепетлиев. 1968; П.Ф.Рокицкий, 1973; Б.Ю.Урбах, 1975).

Цитохимические показатели и функциональная активность лейкоцитов у здоровых людей

Для оценки изменений ферментативной активности лейкоцитов и содержания в них катионного белка, гликогена, а также показателей активности спонтанного НСТ-теста при различных патологических состояниях необходима стандартизация физиологических компонентов в лейкоцитах у здоровых людей. Она предполагает нахождение при помощи используемых методик пределов колебаний указанных показателей, т.е. к установлению «собственной нормы», как это принято в цитохимии (М.Г.Шубич, Б.С.Нагоев, 1980). Под наблюдением находилось 52 практически здоровых людей в возрасте от 17 до 43 лет, являвшихся донорами республиканской станции переливания крови, предварительно прошедших клинико-лабораторное обследование.

При изучении содержания цитохимических компонентов в лейкоцитах у здоровых людей и больных пищевыми токсикоинфекцпями различной этиологии нами соблюдались стандартные условия обработки препаратов и единые критерии визуальной оценки для выведения качественных и количественных показателей учета, что в целом могло отражаться на результатах исследования.

Полученные результаты позволили подойти к решению вопроса о границе нормы в цитохимических показателях содержания катионного белка, гликогена, активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы, а также показателей спонтанного НСТ-теста, выраженные в условных единицах (табл.2)

Таблица 2

Цитохимические показатели и функциональная активность лейкоцитов у здоровых людей (усл. ед.)

Исследуемые показатели п Хтт - Хтах Х±т ±5 Х±2 5

Мпелопероксидаза 52 182-230 204 ±1,6 10,8 183 -225

Кислая фосфатаза 40 48-71 62 ± 1,2 5,4 51-73

Катионный белок 50 88-154 124 ±2,1 14,7 95-153

Гликоген 50 162-194 179 ± 1,1 7,7 165-193

НСТ-тест 33 3-21 13 ±0,7 4,1 5-21

Исследования в лейкоцитах активности кислой фосфатазы, миелопероксидазы, содержания катионного белка, гликогена, показателей спонтанного НСТ-теста у лиц контрольной группы выявило, что у здоровых людей результаты проведенных цитохимических исследований не отличаются от нормальных величин, полученных другими авторами (Б С.Нагоев, 1986, 1991; М.Ю. Канукоева, 1994; М.Р. Иванова, 1996; А А.Каноков, 1997; И.М. Жигунова, 1998 и др.).

Большой объем цитохимических исследований, апробирован-ность, специфичность, воспроизводимость использованных методов позволили считать полученные результаты как критерии нормы при проведении юшнико-лаборагорных исследований и сопоставлений.

Состояние компонентов микробицидной системы лейкоцитов у больных пищевыми токснкоинфекциями различной этиологии

Цитохимическое изучение содержания важнейших компонентов микробицидной системы нейтрофильных лейкоцитов в динамике заболевания пищевыми токснкоинфекциями различной этиологии выявило важные закономерности изменения интралейкоцитарных компонентов. Так, в периоде разгара заболевания отмечено значительное угнетение активности миелопероксидазы и содержания катионного белка нейтрофилов. В тоже время, обнаружено существенное возрастание активности кислой фосфатазы и содержания гликогена в клетке.

При улучшении общего состояния, в периоде угасания клинических симптомов, происходят закономерные сдвиги в сторону восстановления уровня основных компонентов микробицидной системы клеток. Так, заметно повышаются активность миелопероксидазы и содержание катионного белка в лейкоцитах, в тоже время, уровни гликогена и активность кислой фосфатазы достоверно снижаются.

В периоде ранней реконвалесценции, т.е. перед выпиской из стационара, активность ферментов и содержания внутриклеточного протеина и гликогена приближаются к норме. У больных пищевыми токснкоинфекциями условно-патогенной этиологии в этом периоде происходит нормализация показателей, тогда как у больных сальмонеллезом и ботулизмом

сдвиги цитохимических показателей глубже и продолжительнее Нормализация показателей в этик группах больных происходит в периоде поздней реконвалесценции, через месяц после выписки из стационара [табл 3)

Следует отметить, что у больных пищевыми гоксикоинфекцкями различной этиологии изменения активности миелонероксидазы, кислой фос-фагазы и уровни содержания катионного белка и гликогена зависели от тяжести патологического процесса. Чем тяжелее протекало заболевание, тем сильнее и выраженнее была степень угнетения или возрастания исследуемых внутриклеточных компонентов в динамике пищевой токсикоинфекции. Так, при тяжелом течении заболевания, угнетение активности миелонероксидазы и содержания катионного белка было на 10-25% более сниженным, чем при среднегяжелой и легкой формах заболевания В противоположность этим данным при тяжелом течении болезни активность кислой фосфатазь: и гликогена оказались существенно повышенной, чем при'остальных формах течения заболевания, и превысили норму в 2,5 - 3,5 раза.

Полученные результаты дают возможность прогнозирования течения заболевания. Так, по данным цитохимических исследований лейкоцитов у больных с осложнениями основного заболевания были обнаружены достоверно более значительные и продолжительные шменения (угнетение или возрастание) в этой группе больных. При развитии грошых для жизни осложнений, таких как инфекционно-токсический шок, обнаруживалось резкое угнетение активности миелопероксидазы и содержания катионного белка при повышении активности кислой фосфатазы и накоплении гликогена. В случае неблагоприятного исхода заболевания, за несколько часов до смерти больного происходит резкое угнетение изучаемых показателей. Эти изменения свидетельствуют о возможности развития при крайне тяжелых формах пищевых токсикоинфекций «вторичной гранулоцитопатии», впло!ь до «паралича мик-робицидной системы лейкоцитов», что свидетельствует о развитии «вторичного иммунодефицитного состояния)).

Такие же закономерности обнаружены при ботулизме, однако, осложнения аллергического характера, связанные с применением противоботу-линической сыворотки, и другие не воспалительные осложнения, не оказывали достоверного влияния на цитохимический профиль лейкоцитов При развитии пневмонии у больных ботулизмом наблюдалось дальнейшее усугубление циюхимических сдвигов, происходившее на фоне регрессии симптомов ботулизма Причем, указанные изменения обнаруживались до появления клинических симптомов и аускультативных данных. Таким образом, полученные данные дают возможность прогнозирования течения и исходов заболевания. В ходе цитохимических исследований выяснилось, чго не только осложнения оказывают влияние на цитохимический профиль лейкоцитов V больных пищевыми токсикоинфекциями исследований выяснилось, что не только осложнения оказывают влияние на цитохимический профиль лейкоцитов. У больных различной этиологии под,влиянием сопутствующих заболеваний бактериальной и вирусной этиологии также происходит углубление сдвигов цитохимических показателей.

Таблица 3

Состояние внутриклеточных компонентов лейкоцитов у больных пищевыми токсикоинфекциями, сальмонеллезом и ботулизмом (усл. ед.)

Период •

Исследуемый показатель болезни X ±п Р Р1

Пищевые токсикоинфекции 1 135 142 ± 1,5 <0.001

Миелопероксидаза 11 103 163 ± 1,7 <0.001 <0,001

Ш 91 201 ± 1.3 >0,05 <0,001

I ¡35 130 ± 1.9 <0,001

Кислая фссфатаза 11 103 110 ±2,5 <0,001 <0,001

III 91 64 ± 1,5 >0,05 <0,001

I 135 86± 1,4 <0,001

Катионный белок II 102 98 ± 1,8 <0.001 <0,001

III 85 124 ± 1,4 >0,05 <0,001

I 135 220 ± 0,9 <0,001

Гликоген 11 103 198 ±0,7 <0.001 <0,001

III 91 182 ± 1,1 >0,05 <0,001

Саль?.'снеллез 1 70 104 ± 1,0 <0,001

И 68 152 ± 1,5 <0,001 <0,001

Миелсперсксидаза ш 56 136 ± 1,6 <0,001 <0,001

IV 48 202 ± 0,9 >0,05 <0,001

1 70 144 1,4 <0,001

Кислая фосфатаза II 66 132 х 1,3 <0,001 <0,001

111 58 98 ± 1,0 <0,001 <0,001

IV 46 70± 1,1 >0,05 <0,001

1 70 86 ± 1,9 <0.001

Катионный белок 11 65 95 ± 2,0 <0,001 <0,001

III 56 106 ± 1,8 <0,001 <0,001

IV 44 128 ± 1,8 >0,05 <0,001

I 64 244 ± 1,2 <0,001

Гликоген и 58 212 ± 0,7 <0,001 <0,001

III 52 195 ±0,8 <0,001 <0,001

IV 44 181 ±0,3 >0.05 <0,001

Ботулизм. I 62 128 ± 1,5 <■0,001

11 62 140± 1,3 <0.001 <0,001

Миелопероксидаза [II 56 164* 2.2 <0,001 <0.001

IV 48 ^ 202 ± 1,1 >0,05 <0,001

I 62 126 1,0 <0,001

Кислая фосфатаза II 62 118 ± 0,8 <0.001 <0,001

ш 56 94 ± 1,1 <0,001 <0,001

IV 48 _] _64 ± 1,1 >0,05 <0,001

I 62 62 ± 1,6 <0,001

Катионный белок 11 58 78 ± 1,6 <0,00! <0,001

III 56 94 ± 1,4 <0,001 <0,001

IV 44 122 ± 1,4 >0,05 <0,001

I 62 2.42 ± 1,1 <0,001

Гликоген 11 58 2С8± 1.0 <0,001 <0,00)

III 56 154 ± 1,3 <0,001 <0,001

IV 44 182 ± 1,2 >0,05 <0,001

Примечание Здесь и а таблица 4 керисдыболезни соответствуют I — разгару, //- угасанию клинических симптомов, 111 — ранней реконвалесценции, IV- поздней реконвалесценции Р - достоверность различия к здоровым лицам, Р1 - достоверность различия к предыдущему периоду.

Показатели спонтанного НСТ-теста лейкоцитов

Изучение функционально-метаболической активности лейкоцитов с помощью спонтанного НСТ-теста у больных пищевыми токсикоин-фекциями условно-патогенной этиологии, сальмонеллёзом и ботулизмом показали закономерные однонаправленные сдвиги НСТ-теста, зависящие от стадии и степени тяжести заболевания (табл.4).

Таблица 4

Показатели спонтанного НСТ-теста у больных пищевыми токсикоинфекцшши различной этиологии (уел ед )

НСТ-тест Период болезни п Xmln -Xmax Х± m * PI

1 92 20- 94 41 j 1.5 <0.001

П иилевые токер. 11 88 14- -92 36 jr 1,7 <0,001 <0.001

конкфекции Ш 74 6- 52 24 ± 1,1 <0,001 <0.001

[V 37 4- 26 14 ±0.8 ->0,05 <0,001

I 64 18- -80 48 г 1,6 <0,001

Сальмонеллез V 58 16- -74 34 ± 1.6 <0,001 <0,001

ш 56 12- -72 31 ± 1,9 <0,001 <0.001

IV 44 9- 30 17d 1,0 <0,05 <0,001

I 54 20- -98 52 ±2,3 <0,001

Ботулизм 11 54 16 -92 41 ±2,3 <0,001 <0.001

ш 50 12- -76 36 ± 2,0 <0,001 <0,001

IV 35 3- 44 21 ± ),6 >0,05 <0,001

Показатели НСТ-теста не зависели от клинической формы заболевания при пищевых токсикоинфекциях и от вида возбудителя, вызвавшего заболевание. При сальмонеллёзе и ботулизме изменения показателей НСТ-теста были.более выраженными и продолжительными, чем при пищевых токсикоинфекциях условно-патогенной этиологии При указанных заболеваниях с затяжным течением или с присоединением других инфекционных заболеваний бактериальной этиологии приводило к более выраженному подъему показателей НСТ-теста, опережающему рутинные изменения, что делает этот показатель прогностическим признаком. Низкие уровни спонтанного НС'Г-геста в комбинации с угнетением внутриклеточных компонентов, наблюдаемые при крайне тяжелых случаях пищевых токсикоинфекций, сальмонеллёза и ботулизма с развитием инфекци-онно-токсического шока, свидетельствуют о наличии приобретенного дефекта микробицидной системы лейкоцитов

Сопряженность цитохимических и гематологических показателен

при пищевых токсшсоинфекцнях различной этиологии

Для выяснения значения и информативности исследуемых внутриклеточных компонентов микробицидной системы при пищевых токсшсоинфекциях по сравнению с общепринятыми гематологическими показателями (лейкоцитозом, палочкоядерным сдвигом, повышением СОЭ) нами с помощью метода определения сопряженности с использованием критерия (Д А Сешялиев, 1968; П.Ф.Рокицкий, 1973; ЮЛО Урбах, 1975; Ю.Ф.Кабатов, М Б.Славин. 1976) было установлено отсутствие сопряженности между изменением активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, уровня содержания катконного белка и гликогена, НСТ-теста нгйтрофилов с одной стороны и между гематологическими сдвигами - с другой, за исключением па-лочкоядеркого сдвига и изменением цитохимических показателей у больных сальмонеллезом и ботулизмом. При этих заболеваниях выявлена прямая и существенная коррелятивная связь между снижением активности миелопероксидазы и катионного белка и наличия палочкоядерного сдвига И, наоборот, обнаружена обратная коррелятивная связь между повышением активности кислой фосфатазы, НСТ-теста и содержанием гликогена в клетке и наличием палочкоядерного сдвига. Отсутствие закономерной сопряженности между активностью и содержанием микробицидных компонентов нейтрофиль-ных лейкоцитов и гематологическими показателями позволяет утверждать, что сравниваемые показатели не дублируют друг друга. Следовательно, цитохимические исследования внутриклеточных компонентов нейтрофильных лейкоцитов дают обширную дополнительную информацию о развитии патологического процесса в динамике заболевания пищевыми токсикоинфекция-ми различной этиологии (табл.5).

Угнетение активности миелопероксидазы при пищевых токсико-инфекциях различной этиологии, возможно, связано с ее освобождением и участием в реализации микробицидной функции лейкоцитов. Не последнюю роль в снижении активности миелопероксидазы, по-видимому, играют бактериальные токсины, особенно, при пищевых токсикоинфек-циях стафилококковой этиологии и ботулизме. Однозначного представления о механизме бактерицидного действия миелопероксидазной системы (МП LI Н202 ПСЦ), продуцируемой нейтрофиламн, не существует. Практически все клеточные компоненты - белки, липиды, нуклеиновые кислоты разрушаются при взаимодействии с этой системой (Bos с соавт., 1982, De'batin. Menzel. 1982; Klebanoff, 1985, 1992). Поэтому, выделить субклеточные и надмолекулярные структуры, повреждения которых наиболее губительны для микроорганизмов, весьма сложно. Полагают, что наиболее чувствительны к действию миелопероксидазной системы компоненты клеточной мембраны: белки дыхательной цепи, белки мембранного транспорта (Clark, Szot, 1982; Klebanoff, 1985: Albrich с соавт , 1986; Б С.Нагоез, 1986, 1992; Н Ю. Говорова с соавт , 1989).

- Таблица 5 Сопряженность цитохимических и гематологических показателей у больных пищевыми токсикоинфекциями различной этиологии_

Цитохимические показа- и Лейкоцитоз Палочкоядерный сдвиг соэ . - _ J

тели Х2 Р Х2 Р х2 I'

Пищев ые токсикоинф екции

Миелолерок-сидаза 135 0,095 >0,05 0,810 >0,05 0 0

Кислая фос-фатаза 135 0,225 >0,05 -1,48 >0,05 0.296 >0,05

Катионный белок 135 0 0 1,004 >0,05 0.098 >0.05

Гликоген 135 3,86 <0,001 -0,835 >0,05 2.52 <0.001

НСТ-тест 92 1.143 >0,05 -2,9 <0,001 1.720 >0,05

Сальмонелл ёз

Миелоперок-свдаза 70 0,469 >0,05 4,662 <0,001 0.023 >0,05

Кислая фос-фатаза 70 0,015 >0,05 -3,857 <0.001 0.558 >0,05

Катионный белок 70 0,015 >0,05 3,857 <0.001 0,558 >0.05

Гликоген 64 0,167 >0,05 -5,936 <0,001 3,265 <0,001

НСТ-тест 64 0,368 >0,05 -5,936 <0,001 0,003 I >0.05

Ботулизм

Миелоперок-сидаза 62 0,015 >0,05 3,255 <0,001 0,312 <0.001

Кислая фос-фатаза 56 0,197 >0,05 -1.532. >0,05 0.001 >0 05

Катионный белок 62 0,473 >0,05 5,325 <0,001 1,213 >0.05

Гликоген 62 0,015 >0.05 -3,255 <0,001 0.306 >0,05

НСТ-тест 54 1,716 >0,05 -6,527 <0,001 2,604 <0.001

Выявлено, что у больных пищевой токсикоинфекцией условно-патогенной этиологии, сальмонеллёзом и ботулизмом имеет место значительной угнетение содержания катионного белка лейкоцитов, максимально выраженное з период разгара заболевания, особенно при тяжелой форме болезни и при осложненных формах, что находит отражение в работах В.И.Покровского с соавт.(1987), Б.С.Нагоева (1988), М.Т.Абидова с со-авт.(1993, 1994) и И.М.Жигуновой (1998), изучавших состояние катионного белка в лейкоцитах при сальмонеллёзе.

По данным В.Е.Пигаревского (1978), Б.СНагоеза (1982, 1986), Н.Кокрякова (1990), катионные белки обладают достаточно широким спектром антимикробного действия, свойствами фактора проницаемости.

медиатора воспаления и стимулятора метаболических процессов лейкоцитов Микробицидное действие катионных белков связано с их способностью адсорбироваться за счет электростатических сил притяжения на отрицательно заряженных структурах поверхности бактерий. Контакт антимикробного катионного белка с поверхностью микробов создает необходимые условия для его последующего проникновения во внутренние структуры микроорганизмов (В Н.Кокряков, 1990; Ginsburg с соавт., 1982; Tedesko с соавт., 1986).

Полученные в работе данные о повышении уровня гликогена на высоте болезни при пищевых токсикоинфекций условно-патогенной природы, с.альмоенеллёзе и ботулизме, и дальнейшие закономерные сдвиги внутриклеточного полисахарида в сторону его снижения, по-видимому, можно связать с расходованием гликогена в процессе выполнения лейкоцитами фагоцитарной функции. Повышение уровня гликогена у наблюдаемых больных, возможно, связано с физиологической активностью ли-зосомальных мембран лейкоцитов в процессе фаготнлирозания, в результате чо1 о, гликолипид, содержащийся в гранулах иейтрофила, становится боаее доступным для связывания с ШИК-реактпзом (Hearicks с соавт., 1986). Robinson с соавт. (1982) и Breedveld с соавт (1986) установили, что при воспалении происходит накопление гликогена и липидов в лейкоцитах, причем, увеличение их более выражено в нейгрофилах, сосредоточенных з воспалительном участке, чем в циркулирующих лейкоцитах (Jssekutz, 1984) Необходимо отметить, что у больных ботулизмом с крайне тяжелым течением, закончившимся летальным исходом, в первые дни заболевания выявлено значительное возрастание внутриклеточного гликогена, однако, при отсутствии положительного эффекта от проводимой терапии, активность гликогена в лейкоцитах и процент ШИК-положительных клеток резко снижается, что свидетельствует о прогностическом неблагополучии.

Полученные данные о закономерном повышении активности кислой фосфатазы в динамике заболевания пищевыми токсикоинфекциями, сальмонеллезом и ботулизмом, возможно связаны с фагоцитарно-мегаболической функцией лейкоцитов Кислая фосфатаза, как известно, является цитохимическим маркером лизосом нейтрофильных гранулоци-тоз, которые принимают участие в расшеплении обработанных катион-ными белками и миелопероксидазой бактериальных структур,клеток, т.е. она является показателем катаболических процессов в организме (МГШубич, Б.С.Нагоев, 1980; Baggiolini, Dewald, 1984; Cantinilaax-Magtez с соавт., 1984). Так, кислая и щелочная фосфатазы подвергают кислотному гидролизу микроорганизмы, умерщвленные бактерицидными компонентами миелопероксидазы и катионными белками. О роли кислой фосфатазы в осуществлении фазы переваризания реакции фагоцитоза свидетельствуют данные о высокой корреляции между активностью фермента и завершенностью фагоцитоза, выявленные при других бактериальных инфекциях (Б.С.Нагоев, 1986; У.Д.Асадов, Л С.Нумероза, 1992; А.А.Каноков. 1997; И.Н.Жигунова, 1998).

Таким образом, проведенные клинико-цитохимические исследования и сопоставления у больных пищевыми токсикопнфекциями условно-патогенной этиологии, сальмонеллёзом и ботулизмом, показали закономерные сдвиги состояния нейтрофилов и показателей функционально-метаболической активности лейкоцитов, зависящие от возбудителя, стадии, клинических форм, степени тяжести заболевания и осложнений, а также полноты лечения. Результаты цитохимических исследований внутриклеточных компонентов и показателей спонтанного НСТ-теста у больных пищевыми токсикоинфек'циями различной этиологии на различных стадиях заболевания дали обширную информацию о развитии патологического процесса, что свидетельствует о целесообразности использования в клинической практике клинико-цитохимических исследований для оценки неспецифической резистентности организма при острых кишечных инфекциях.

Выводы:

1. У больных пищевыми токсикоинфекцкями условно-патогенной этиологии, сальмонеллёзом и ботулизмом исследования важнейших компонентов микробицидной системы нейтрофилов и показателей ИСТ-тесгг гранулоцитов носят однонаправленный и неспецифический характер

2. При пищевых токсикоинфекциях различной этиологии выявлено угнетение активности миеяопероксидазы и снижение содержания катион-ного белка, происходящие на фоне повышенных значений активности кислой фосфатазы, содержания гликогена и показателей спонтанного НСТ-теста.

3. По мере клинического выздоровления больных пищевыми токси-коинфекциями, обусловленными условно-патогенными возбудителями, происходит восстановление компонентов микробицидной системы нейтрофилов. При сальмонеллёзе и ботулизме восстановление показателей функционально-метаболической активности лейкоцитов происходило в периоде поздней реконвалесценции.

4. Степень и длительность изменения внутриклеточных компонентов микробицидной системы и фагоцитарной способности лейкоцитов зависели от стадии и тяжести патологического процесса Резко выраженные и длительные изменения свидетельствовали о возможности развития осложнений и наличии сопутствующих заболеваний.

5. Сопоставление цитохимических показателей нейтрофильных лейкоцитов (миелопероксидазы, кислой фосфатазы, катиониого белка, гликогена, показателя спонтанного НСТ-теста) с гематологическими данными выявили отсутствие сопряженности между сравниваемыми показателями. Следовательно, исследования микробицидной системы и функционально-метаболической активности лейкоцитов дают дополнительную информацию о развитии патологического процесса при пищевых токсикоинфекциях различной этиологии.

6 Изменения спонтанного НСТ-теста нейтрофилов у больных пищевыми гокслкоинфекциями различной этиологии характеризуют состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов и позволяют диагностировать дефекты системы фагоцитоза Резкое угнетение показателей НСТ-теста при крайне тяжелых формах пищевых токсикоинфекций условно-патогенной природы, сальмонеллёза и ботулизма, свидетельствуют о наличии приобретенного дефекта функционально-метаболической активности лейкоцитов, и указывает на прогностическое неблагополучие.

Практические рекомендации:

1 Цитохимические исследования внутриклеточных компонентов лейкоцитов (активность миелопероксидазы, кислой фосфатазы, содержание ка-гионного белка и гликогена) являются информативными показателями функционального состояния клеток у больных пищевыми токсихоинфекциями различной этиологии и могут быть использованы для оценки степени тяжести заболевания, развития осложнений, прогнозирования исходов болезни и полноты выздоровления.

2. Исследование спонтанного ИСТ-теста у больных пищевыми токси-коинфекциями условно-патогенной этиологии, сальмонеллёзом и ботулизмом характеризует состояние неспецифической резистентности организма и может быть ислолыовано в качестве критерия излеченное™, прогностического и вспомогательного диагност:«еского теста.

3. Полученные нормальные показатели активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, содержания катионного белка, гликогена в нейтрофияах, показатели спонтанного НСТ-теста лейкоцитов могут быть использованы з качестве исходных критериев при проведении и оценке результатов цитохимических и цигоиммунологических исследований в клинической практике с помощью использованных методик.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

Работы 1 и 2-х авторов:

1 Афашагова ММ. Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитоз у больных пищевыми токсикоинфекциями условно-патогенной этиологии - Вестник Кабардино-Балкарского государственного университета, Сер. Медицинские науки, Вып.1 - Нальчик, 1994, с.53-55.

2 Афашагова М М Состояние неспецифической резистентности организма у больных пищевыми токсикоинфекциями различной этиологии. В кн. Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Тезисы докладов XII Поссийской научной конференции.- Челябинск, 1995, с 9.

3. Афашагова М М. Цитохимия гликогена в нейтрофильных лейкоцитах крови у больных пищевыми токсикоинфекциями различной этиологии. Достижения медицинской науки -' практическому здравоохранению. Нальчик, 1995, стр.12.

4. Афашагова М.М. Показатели спонтанного НСТ-тесга у больных пищевыми токсикоинфекциями различной этиологии. - Вестник Кабардино-Балкарского государственного университета. Сер Медицинские науки, Вып.2 - Нальчик, 1996, с.47-48.

5. Афашагова М.М. Катионный белок нейтрофильных лейкоцитоз у ' больных пищевой токсикоинфекцией различной этиологии. Вестник КБГУ, 1997, №3, с.33-34.

6. Афашагова М.М. Показатели НСТ-теста лейкоцитов у больных цит-робактериозом и клебсиеллёзом. - Актуальные вопросы педиатрии. -Нальчик, 1997, с.18-20.

7. Афашагова М.М. Показатели спонтанного НСТ-теста у больных ботулизмом. - В кн.: Гомеостаз и инфекционный процесс. Материалы второй Всероссийской конференции - Саратов, 1998, с.7.

8. Афашагова М.М. Функциональная активность нептрофилон у больных ботулизмом. - Вестник КБГУ, серия медицинские науки, вып. 4, 1998, с. 36-38.

9. Нагоев Б.С., Афашагова М.М. Состояние внутриклеточной микроби-цидной системы лейкоцитов у больных пищевыми токсикоинфекциями - Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1993, №6, с.28-30.

10. Афашагова М.М., Жигунова И.М. Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов у больных пищевыми токсикоинфекциями стафилококковой этиологии. Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению. Материалы конференции молодых ученых, посвященной 30-летию медицинского факультета, Нальчик, 1995, стр 13-14.

1!. Афашагова М.М., Жигунова И.М. Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов у больных пищевой токсикоинфекцией клебсиеллёзной этиологии. - Там же. стр. 15-16.

Работы 3-х и более авторов:

12. Нагоев Б.С., Абидов М.Т., Афашагова М.М. Состояние неспецифической резистентности организма у больных пищевыми токсикоинфекциями различной этиологии. В кн.: «Актуальные вопросы инфекционной патологии». Сб. научных трудов. Нальчик, 1993, с.53-61.

13. Нагоев Б.С., Афашагова М.М., Кожаева И М. Состояние микробкцидной системы лейкоцитов в оценке иммунореабилктации инфекционных больных. International Journal oflmmunorehabilitaion, 1997. №4, р 43

14. Афашагова М.М., Аушева А.К., Шанава Э.А. Цитохимия лейкоцитов у больных пищевой токсикоинфекцией цитробактериозной этиологии. В кн.: Вопросы теоретической и клинической медицины Нальчик, 1998, с. 11-13.

Работы 4-х и более авторов:

15- Афашагова М.М., Дербитова Л.В., Керимова Б В. Функциональная активность нейтрофилов у больных пищевыми токсикоинфекциями протейной этиологии. В кн.: Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению Нальчик, 199S, с 12-14.

16. Нагоев Б С., Абидов М.Т., Афашагова М.М , Габрилович И.M , Кано-ков А А. Влияние индометацпна ка функционально-метаболическую активность нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте. В кн «Интенсивная терапия и поликлиническое обслуживание инфекционных больных». Благовещенск, 1991, с.64-66.

17 Канокоз A.A., Канукоева М.Ю.. Афашагова М.М, Хакунова Ж.Д. Содержание катионного белка и активность миеяопероксидазы нейтрофильных лейкоцитов у здоровых людей. В кн.: «Актуальные вопросы инфекционной патологии». Нальчик, 1993, с.229.

18. Nagoev В.S., Abidov М.Т., Afashagova М.М., Kozhaeva ¡.M. Importance of functional activity of macrophages in pathogenesis of experimental Salmonella endotoxinemia. // Medical Microbiology Letters, 1996, V.5, Siipp. 1. p 8-9.

19 Абкдоз MT, Афашагова M.M., Кимова НА., Кожаева И.M Влияние аминофталгидрозида на микробициднуто систему лейкоцитов при саль-монеллёзном и шигеллезном эндотоксиновом шока в эксперименте. В кн.: Факторы клеточного и гуморального иммунитета. Тезисы докладов XIII Поссийской научной конференции, г. Челябинск, 1997, с.4.

20. Абидов М.Т., Хохлов А.П., Рябчиков Р.П., Афашагова М.М., Гржи-бовская Л.Н. Зависимость микробицидной системы гранулоцитов от дозы и способа введения. В кн.: Цитохимга лейкоцитов в эксперименте и клинике. Нальчик, 1991, с.3-7.

21. Подлевский A.M., Абидов М.Т., Габрилович И.М., Марщанов Г.М., Афашагоза М.М. Метаболическая активность гранулоцитов при экспериментальной эндотоксемии и сальмонеллёзкой инфекции. В кн • Актуальные вопросы этиологии, эпидемиологии, патогенеза, клиники и лечения заразных болезней человека. Владикавказ, 1991, с.65-69.

В печать 20 07 99 Тираж 1 СО экэ Заказ № Jj^LL Типография КБГУ 360004, г Нальчик, ул Чернышевского, 173 Кабардино-Балкарский государственный университет им X M Бербекова