Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Разработка и применение иммуномодулирующих препаратов для профилактики и лечения заболеваний, обусловленных вирусно-бактериальной инфекцией

На правах рукописи

ТУЛЕВА Надежда Павловна

РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ОБУСЛОВЛЕННЫХ ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

Специальность: 14.00.25 -14.00.36 -

фармакология, клиническая фармакология аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте Эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, Научно-исследовательском институте Травматологии и ортопедии им. P.P. Вредена, ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины».

Научные консультанты: заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Николай Андреевич Лосев доктор биологических наук, профессор Надежда Лукьяновна Андреева

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Эдуард Павлович Зацепин доктор медицинских наук, профессор Петр Григорьевич Назаров доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН Василий Александрович Забродин

Ведущая организация: Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова

Защита состоится «_»_200_года в_часов на заседании диссертационного совета Д.208.030.01 в Институте токсикологии МЗ РФ (193019, г. Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института токсикологии МЗ РФ.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

2004 года.

Т.Н. Саватеева-Любимова

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Важной проблемой для медицины и ветеринарии являются респираторные болезни, в том числе бронхопневмонии, обусловленные ассоциацией вирусов, бактерий, простейших и грибов.

Во всём мире ежегодно заболевает огромное количество людей.

В США в течение года регистрируют до 4 млн. заболевших, из которых 1 млн. требует госпитализации (цит. по Новикову Ю.К., 2002).

В Российской Федерации ежегодно болеет около 1,5 млн. человек (Чучалин А.Г., 2001).

Особую тревогу вызывает перманентная тенденция к нарастанию смертности от респираторных заболеваний (Иллек Я.Ю., Зайцева ГА и др., 1996; Иллек Я.Ю., Зайцева ГА, Суетина И.Г. и др., 2000; Чучалин А.Г., Иллек Я.Ю. и др., 2003). По данным Американского торакального общества в США смертность от пневмонии достигает 18-20%; Европейское респираторное общество приводит данные в пределах 10%. В отчете Британского торакального общества врачей смертность от пневмонии с тяжелым течением превышает 30% (цит. по Чу-чалинуА.Г.,2001).

Сложная ситуация наблюдается и в ветеринарии. Бронхопневмония, совпадающая с возрастным иммунодефицитом телят, является широко распространенным заболеванием на европейском и американском континентах (Уса-ченко А.А. и др., 1991; Карпуть И.М., 1993; Подкопаев В.М. и др., 1995; Кудесов ЛА, 2001; Kovacs F., 1969; Muylle E., Picavet Т., 1989; Losinger W.C., Heinrichs

A.I., 1995 и др.). Энзоотии бронхопневмонии поражают до 50% нарождающихся животных и являются причиной потери до 40% от числа заболевших с учетом гибели и вынужденного убоя (Высокопоясный А.И. и др., 2000).

Многообразие различных респираторных вирусов и их многочисленных серотипов создаёт условия для возникновения спонтанных инфекций (Сюрин

B.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В., 1991; Сюрин В.Н., Фомина Н.В., 1997; и др.).

В племенных хозяйствах переболевшие телята в дальнейшем не пригодны

для воспроизводства стада. У взрослых особей скрытое вирусоносительство возбудителей инфекционного ринотрахеита и аденовирусной инфекции порождает целый ряд проблем. Одновременно с поражением эпителиальных клеток верхних дыхательных путей они вызывают патологию половых органов. В таких хозяйствах наблюдаются массовые аборты, эндометриты и маститы. Пораженный эпителий верхних дыхательных путей дает возможность активации сапрофитной и условно-патогенной микрофлоры респираторного тракта и проникновению в легкие микроорганизмов, находящихся в воздухе. Таким образом, вирусы, нарушая защитный барьер слизистых, способствуют их колонизации бактериальными патогенами, поэтому любая инфекция в организме человека или животного развивается чаще всего не в моно-, а в ассоциированном варианте с другими (Лященко Ю.И., Иванов А.И., 1989; Смирнов П.Н., 1998; Домникова Н.П., Сидорова Л.Д., 2001; Борхсениус С.Н., Чернова ОА. и др., 2002; Новиков Ю.К., 2002; Дворецкий Л.И., 2002; Таточенко В.К., 2002 и др.).

Опасным является крити-

ческий период, когда коллостральный иммунитет находится на стадии затухания. У данных животных выделение вирусов происходит без проявления клинических признаков болезни, что способствует широкому распространению возбудителей и массовому перезаражению.

Для лечения больных бронхопневмонией в настоящее время используются многочисленные антибиотики. Создано уже более 30 тысяч наименований и постоянно создаются их новые модификации. Но несмотря на это количество болезней не уменьшается. Падёж телят остается очень высоким и по Российской Федерации составляет свыше 2 млн. голов в год (Волков, 1998), что наносит колоссальный экономический ущерб.

В медицине и ветеринарии в подавляющем большинстве случаев антибио-тикотерапия назначается на эмпирической основе, которая не всегда приносит должный терапевтический эффект (Чучалин А.Г., Новиков Ю.К. и др., 1997; Си-нопальников А.И., 1998; Яковлев СВ. и др., 1998; Домникова Н.П., Сидорова Л.Д. и др., 1998; Навашин СМ., Чучалин А.Г. и др., 1999; Домникова Н.П., Сидорова Л.Д., 1998; 2001 и др.; Allegra L., Crass С, Grossi E. и др., 1991; Ма-cFarlane J.T. и др., 1993; Koller M.H., Silver P., 1995; Vincent J.L., Bihaii D.J., Suter P.M. и др., 1995; Fagon J.Y., Vuagnant A., Truillet J.L. и др., 1996; Dewan NA., Rafigue S. et al., 2000).

Это становится вполне объяснимым, если учесть, что на вирусы антибиотики вообще не оказывают губительного действия. Микроорганизмы же быстро адаптируются и в дальнейшем беспрепятственно вызывают бактериальные осложнения. Кроме того, при длительном применении антибиотиков происходит их кумуляция в организме животных и человека, что способствует возникновению вторичного иммунодефицитного состояния.

Беспокоит и факт наличия антибиотиков в мясе и молоке, выпускаемых в Российской Федерации (до 40%). Поэтому учёные как ветеринарии, так и медицины всё чаще стали говорить об экологичности препаратов.

Поиск средств защиты от ассоциированного комплекса вирусно-бактериальных возбудителей, вызывающих бронхопневмонию, ведётся в трех направлениях:

1) пассивной иммунизации специфическими гипериммунными сыворотками;

2) активной иммунизации живыми ослабленными или инактивированными вакцинами;

3) повышения неспецифической резистентности организма введением им-мунотропных препаратов.

Иммунизация телят специфическими гипериммунными сыворотками требует значительных затрат и времени. Кроме того, они могут быть контамини-рованы многочисленными возбудителями, в частности, вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Пассивная иммунизация может быть преодолена высоко вирулентными вирусами инфекционного ринотрахеита в ассоциации с аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекциями.

Применение живых или инактивированных вакцин не предотвращает ла-тенции вирулентных вирусов в организме животных (Сюрин В.Н., Белоусова

Р.В., Фомина Н.В., 1991).

Использование многочисленных иммунотропных препаратов также представляет серьезную проблему для животноводства. Так, длительное применение иммуностимуляторов, иммуномодуляторов или иммунокорректоров вызывает активацию Т- и В-клеточного иммунитета. Это может приводить в дальнейшем к запуску опухолевой трансформации клеток, механизм которой тот же, что и активация клеток иммунной системы (Агеенко А.И., 1992).

Поэтому, на современном этапе науки для профилактики и лечения респираторных болезней, необходимы иммунотропные препараты с направленным действием: противовирусным, антимикробным, противовоспалительным и не вызывающих запуска опухолевой трансформации клеток даже при их длительном парэнтеральном введении.

Цель и задачи исследований.

Целью диссертационной работы является разработка комплекса иммуномо-дулирующих препаратов направленного действия: противовирусного, антибактериального, противовоспалительного, антипролиферативного, а также способных индуцировать в организме образование эндогенного гамма-интерферона.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать иммуномодулирующие препараты, используя физические, химические, биологические методы очистки и концентрации активных веществ, обладающие свойствами повышать естественную резистентность организма.

2. Получить иммуномодулирующие препараты с использованием естественных компонентов, индуцирующих эндогенный гамма-интерферон и оказывающих бактериостатическое действие в отношении Гр+, Гр- микроорганизмов.

3. Провести исследование полученных иммуномодулирующих препаратов и растворителей № 1 и № 2 на лабораторных животных с целью определения острой и хронической токсичности, мутагенного, тератогенного, эмбриотоксическо-го, пирогенного и аллергизирующего действия.

4. Изучить влияние созданных иммуномодулирующих препаратов на активацию иммунного ответа с использованием лабораторных животных.

5. Изучить на домашних животных профилактическое и терапевтическое действие препаратов серии Витулин и Тулимкар при инфекционно-воспалительных вирусно-бактериальных болезнях.

6. Изучить влияние разработанных иммуномодулирующих препаратов на естественную резистенстность организма телят при активной неспецифической профилактике и монотерапии бронхопневмонии в период энзоотии респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

7. Разработать промышленную технологию выпуска иммуномодулирующих препаратов и растворителей для них.

8. Внедрить разработанный комплекс иммуномодулирующих препаратов в ветеринарную практику для иммунопрофилактики и монотерапии инфекционно-воспалительных болезней сельскохозяйственных и домашних животных.

Научная новизна работы:

1. Разработана серия иммуномодулирующих препаратов Витулин: Витулин,

Витулин-А, Витулин-В, Витулин-С, Витулин-Б, Витулин-Е и Тулимкар, имеющих патентную чистоту в отношении развитых стран: США, Великобритании, Франции, Германии, Японии.

2. Изучено влияние разработанных препаратов на организм лабораторных животных (мыши, крысы, кролики, морские свинки, собаки, дрозофилы). Показана безвредность препаратов и их влияние на формирование в организме животных иммунного ответа по гуморальному типу.

3. Впервые созданы иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар, обладающие при инфекционно-воспалительных процессах направленным действием: противовирусным, антибактериальным, противовоспалительным, анти-пролиферативным.

4. Впервые с применением иммуномодулирующего препарата Витулин в условиях России появилась возможность коррекции неспецифических факторов защиты организма животных в период энзоотии респираторных вирусно-бактериальных болезней.

5. Разработаны методологические основы активной неспецифической иммунопрофилактики для сохранения племенного молодняка при энзоотиях респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

6. Впервые с использованием иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар появилась возможность проводить активную неспецифическую иммунопрофилактику животных в период энзоотии респираторных вирусно-бактериальных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

7. Впервые разработаны эффективные и экономичные схемы и дозы применения препаратов Витулин и Тулимкар для массового проведения монотерапии ассоциированных вирусно-бактериальных болезней телят. При этом полностью исключается использование отечественных и зарубежных антибактериальных препаратов, экзогенного интерферона, гамма-глобулинов, сывороток крови ре-конвалесцентов.

8. Разработана эффективная и экономичная схема иммунопрофилактики и монотерапии широко распространённых болезней собак: папилломатоза и ста-филокаккоза.

Теоретическая и практическая значимость работы:

— На основании проведённых исследований на домашних животных дано научное обоснование эффективного сочетанного применения иммуномодулирую-щих препаратов Витулина с растворителем № 1 и Тулимкара для профилактики респираторных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни при энзоотии бронхопневмонии, обусловленной ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей, в животноводческих хозяйствах России.

— Впервые дано научное обоснование эффективного применения иммуномоду-лирующих препаратов Витулина с растворителем № 2 и Тулимкара для лечения телят, больных респираторными болезнями, вызванными ассоциацией вирусов и бактерий, в животноводческих хозяйствах России.

— В результате проведённых экспериментальных исследований дано научное

обоснование эффективного применения иммуномодулирующих препаратов Витулина и Тулимкара для профилактики и лечения папилломатоза и стафи-лококкоза у собак.

— Разработана нормативно-техническая документация для промышленного выпуска иммуномодулирующих препаратов серии Витулин для профилактики и лечения домашних животных.

Практическая ценность:

— Разработаны методы применения иммукомодулирующих препаратов серии Витулин и Тулимкар в ветеринарной практике.

— Показана высокая эффективность препаратов для профилактики бронхопневмонии телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни при энзоотиях респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

— Установлена высокая эффективность монотерапии телят при начальной и се-розно-катаральной формах бронхопневмонии, вызванных вирусно-бактериальными возбудителями.

— Установлена также высокая эффективность сочетанного применения иммуно-модулирующих препаратов и при лечении стафилококкоза и диссеминирован-ного папилломатоза ротовой полости собак.

— Доказана возможность ограниченного применения антибиотиков в медицине и ветеринарии при использовании иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар, обладающих противовирусным, антибактериальным, противовоспалительным, антипролиферативным действием, и корректирующим Т- и В-клеточный иммунотет.

Реализация результатов исследования.

Основные научные положения диссертационной работы и предложения

производству вошли в:

1. «Наставление по применению Тулимкара в качестве иммуностимулирующего средства при бактериальных и вирусных болезнях телят, поросят и собак.» (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000).

2. Тулимкар. Технические условия (ТУ 9325-009-00493362-00). (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000).

3. «Временное наставление по применению иммуномодулирующего препарата Витулин с растворителями № 1 и № 2 для иммунопрофилактики и монотерапии животных.» (Утверждены Учёным советом ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины», 2002).

4. Пять методических рекомендаций (Утвержденны на научно-координационном совете по животноводству и ветеринарии СевероЗападного НЦ Россельхозакадемии, 2004): 1) «Фармакологическая коррекция вторичных иммунодефицитных состояний коров во второй половине стельности и у новорождённых телят». 2) «Применение иммуномодули-рующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики респираторных вирусных болезней телят». 3) «Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для лечения респираторных вирусных болезней

телят». 4) «Применение иммуномодулирующих препаратов: Витулин, Ту-лимкар, Тулим и Апитулим для профилактики и лечения болезней мелких домашних животных». 5) «Роль биохимических методов исследований для контроля естественной резистентности телят при использовании иммуномо-дулирующих препаратов».

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований

доложены и обсуждены:

— на ежегодных научных конференциях Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1985 - 2004);

— на Юбилейной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов, посвященной 70-летию Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1990);

— на VIII Межгосударственной научно-практической конференции: "Новые фармакологические средства в ветеринарии", посвященной 75-летнему юбилею кафедры фармакологии Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1996);

— на научно-производственной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки (Санкт-Петербург, 1998);

— на XIII Международной научно-практической конференции: "Новые фармакологические средства в ветеринарии (Санкт-Петербург, 2001);

— на Международной научно-производственной конференции по акушерству, гинекологии и биотехнологии репродукции животных, посвященной 100-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РСФСР доктора ветеринарных наук, профессора И.А. Бочарова (Санкт-Петербург, 2001);

— на XIV Международной межвузовской научно-практической конференции: "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, 2002);

— на Международной межвузовской научно-методической конференции "Повышение качества учебного процесса в вузе" (Санкт-Петербург, 2002);

— на XIV Международной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, 2002

г.);

— на Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии; ст. «Влияние иммуномодуляторов серии Витулин при раке пищевода» (Сингапур, 2002 г., с. 284).;

— на Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии; ст. «Имму-номодуляторы серии Витулин» (Сингапур, 2002 г., с. 250).;

— на Межвузовской конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, 2003 г.);

— на XV Международной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические препараты" (Санкт-Петербург, 2003 г.);

— на II Межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей (Санкт-Петербург, 2004 г.);

— на XVI Международной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические препараты" (Санкт-Петербург, 2004 г.).

Публикации результатов проведённых исследований. Основные научные результаты, включенные в материалы диссертации, опубликованы в 59 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 276 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц, 74 рисунка, 1 фотографию. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и рекомендаций. Список литературы включает 272 работы отечественных и 201 зарубежных авторов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

— Разработаны иммуномодулирующие препараты из природных компонентов, содержащие биологически активные вещества и не обладающие острой и хронической токсичностью, мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим, пирогенным и аллергизирующим действием.

— Получены иммуномодулирующие препараты, способствующие активации естественной резистентности организма и обладающие направленным противо-микробным, антивирусным, противовоспалительным и антипролифератив-ным действием.

— Препараты Витулин и Тулимкар используются с выраженным положительным эффектом для активной неспецифической профилактики энзоотии респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий, на телятах в критические периоды жизни, когда иммунная система ещё не сформирована.

— Иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар использованы с выраженным положительным эффектом для монотерапии сельскохозяйственных и домашних животных, при различных инфекционно-воспалительных процессах, обусловленных вирусно-бактериальными возбудителями с полным исключением антибиотиков и сульфаниламидов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальную часть работы выполняли в период с 1987 по 2004 год в лаборатории кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (СПГАВМ). Кровь от подопытных и контрольных животных исследовали на кафедрах клинической диагностики и биохимии СПГАВМ. Исследование экспрессных и натуральных сортов мёда проводили на кафедре ветсанэкспертизы СПГАВМ. Отдельные микробиологические анализы были выполнены в бактериологическом отделе Ленинградской областной ветбаклаборатории.

Количественный анализ эндогенного гамма-интерферона определяли в лаборатории цеха диагностических препаратов Научно-исследовательского инсти-

тута Эпидемиологии и микробиологии им. Л. Пастера.

Доклиническое изучение Витулина и растворителей № 1 и № 2, выпущенных Щелковским биокомбинатом, проводили на базе Научно-исследовательского института Травматологии и ортопедии имени P.P. Вредена.

Для проведения экспериментов были использованы 450 белых мышей, 220 крыс, 11 морских свинок, 36 кроликов), полученных из питомника «Рапполово» и прошедших необходимый контроль.

В опытах принимали участие 12 беспородных половозрелых собак - кобелей, весом 25-32 кг, прошедших необходимый карантин, и больных 59 собак и 15 кошек различных пород и веса, а также 1402 теленка черно-пестрой породы.

Монофлерные сорта меда получали с использованием пчел средне-русской породы.

Мутагенную активность препаратов определяли на дрозофилах.

Д ля изучения специфического действия Витулина с растворителями № 1 и № 2, а также Тулимкара использовали более двух тысяч телят черно-пестрой породы в возрасте от 3 дней жизни до 3 месяцев из племенных хозяйств в период энзоотии респираторных болезней, обусловленных вирусно-бактериальными возбудителями, а также более тысячи голов больных домашних животных (собаки, кошки) из ветеринарных клиник Санкт-Петербурга.

Математическая обработка данных производилась с помощью программных пакетов StatSoft Statistica 6.0, SPSS 12 и NCSS Statistical and Data Analysis Software 2004, а также с использованием критериев Стьюдента и К. Пирсона (Лакин Г.Ф., 1990).

РЕЗУЛЬ ТА ТЫ ПРОВЕДЁННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Разработка иммуномодулирующих препаратов серии Витулин и Тулимкар

Нами разработаны иммуномодулирующие препараты серии Витулин (Витулин, Витулин-А, Витулин-В, Витулин-С, Витулин-Б, Витулин-Е) и Тулимкар, содержащие биологические активные вещества (БАВ), производные флавона, флавонола, флавонона.

Данные БАВ были получены нами из цветов и вегетативной части растений нескольких семейств: Сложноцветные (Compositae), Астровые (Asteroceae) и Барбарисовые (Berberidaceae).

Одним из важных моментов создания препаратов является их тщательная очистка от токсических веществ, входящих в состав ценных лекарственных растений. Другая особенность - процесс концентрации и сохранения активности основных компонентов.

С учётом вышеназванных особенностей технологический процесс приготовления препаратов включает девять этапов.

Первый этап. Получение натурального монофлёрного пчелиного мёда из нектара растений семейства Сложноцветные (Compositae).

Второй этап. Получение экспрессных сортов пчелиного мёда первого вида.

Третий этап. Получение экспрессных сортов пчелиного мёда второго вида.

Четвёртый этап. Получение экспрессных сортов пчелиного мёда третьего

вида.

Пятый этап. Дополнительная биологическая очистка экспрессных сортов пчелиного мёда третьего вида.

Шестой этап. Получение безбелковых фракций экспрессных сортов пчелиного мёда третьего вида.

Седьмой этап. Стандартизация и предварительный контроль иммуномоду-лирующих препаратов Витулин и Тулимкар перед промышленным выпуском.

Восьмой этап. Стерильная разливка на биокомбинате.

Девятый этап. Контроль изготовленных препаратов Витулин и Тулимкар.

Из представленных иммуномодулирующих препаратов серии Витулин мы в данной работе приводим экспериментальные и клинические материалы исследований лишь по Витулину, так как объем диссертационной работы не позволяет вместить данные по всем препаратам этой серии.

Иммуномодулирующий препарат Тулимкар был разработан нами ранее (Патент № 223-62-43). Он прошел исследования на острую, хроническую токсичность, апирогенность, сенсибилизирующее, резорбтивное, местнораздражающее действие на слизистую оболочку глаза, аллергизирующее, мутагенное действие, тератогенность и эмбриотоксичность, на базе Научно-исследовательского института Травматологии и ортопедии имени P.P. Вредена. Тулимкар утвержден Департаментом ветеринарии в 2000 году, аттестовано производство, налажен его промышленный выпуск на Щелковском биокомбинате в Московской области (Наставление по применению Тулимкара и ТУ9325-00900493362-00).

В связи с широким использованием Тулимкара в ветеринарии и большим объемом диссертационной работы мы не останавливаемся на детальном описании этого препарата. Отметим лишь то, что он корректирует Т- и В-клеточный иммунитет и предотвращает лектинининдуцированный митогенез.

Доклиническое изучение Витулина и растворителей № 1 и № 2

Определение острой токсичности Витулина и растворителей № 1 и №2. Острую токсичность Витулина и его растворителей № 1 и № 2 определяли на 80 белых мышах. Животных распределяли на 5 групп по 10 особей в каждой,

5 групп по 5 особей и 5 мышей были оставлены интактными.

1-ой группе вводили внутрибрюшинно препарат Витулин в дозе 10 мг/на мышь, который разводили растворителем № 1 (10 мышей); 2-ой группе вводили Витулин в дозе 10 мг/на мышь. Его разводили растворителем № 2 (10 мышей); 3-ей группе - по 1,0 мл растворителя № 1 (10 мышей); 4-ой группе вводили по 1,0 мл растворителя № 2 (10 мышей); 5-ой группе, контрольной, - по 1,0 мл стерильного физиологического раствора (10 мышей); 6-ой - 10-ой группам вводили аналогичные растворы не внутрибрюшинно, а подкожно, в тех же дозах для изучения местной реакции организма на данную инъекцию (по 5 мышей в группе).

Наблюдение составляло 14 суток после однократного введения препарата. В результате исследования ни в одной из групп не было отмечено гибели мышей. В течение всего срока наблюдения они были активны, физиологические отправления не нарушены, поведенческие реакции не отличались от таковых у интактных животных. При подкожном введении макроскопически местной реакции мягких тканей не отмечалось.

Животных забивали на 14 сутки после введения препарата. В месте инъекции визуально уплотнений, изменения цвета и структуры тканей не было обнаружено. Микроскопических признаков некроза, дистрофических изменений, воспалительной, лейкоцитарной и лимфо-плазмоцитарной инфильтрации мягких тканей не выявлено. При патоморфологическом исследовании внутренних органов животных макро- и микроскопических изменений как в опытной, так и в контрольной группах не было отмечено.

Определение хронической токсичности Витулина и растворителей №1 и № 2. Испытания хронической токсичности Витулина и его растворителей проводили на трех видах животных. В опыте были использованы 55 белых имбред-ных крыс (самцов), разделенных на пять групп по 10 животных и 5 интактных крыс, 22 кролика (по 4 животных в опытных группах и по 3 в контрольной и ин-тактной группах) и 12 собак, кобелей (по 2 животных в опытных группах, 2 в контроле и 2 интактных).

Лабораторным животным всех первых групп вводили Витулин в дозе: 30 мг/на крысу, 5 мг/кг кролику, 5 мг/кг собаке. Препарат разводили растворителем № 1. Во всех вторых группах доза Витулина была аналогичной, но препарат разводили растворителем № 2. Животным всех третьих групп вводили растворитель № 1, четвертых - растворитель № 2, пятых - физиологический раствор. Шестые группы была интактными. Доза введения растворителей и физиологического раствора составляла: для крыс - 0,5 мл, кроликов - 1 мл, собак - 7 мл. Инъекции проводили с кратностью один раз в пять дней, всего пять инъекций. Период наблюдения составил 21 день после последнего введения. Результаты оценивали клинически и патоморфологически.

На крысах. Наблюдение за животными на протяжении 21 дня после эксперимента не выявило каких либо внешних признаков токсического действия препарата. Поведение, внешний вид животных не отличались от контрольных и ин-тактных крыс.

На вскрытии через 1 и 21 сутки после последней инъекции проводилось патоморфологическое исследование места введения препаратов и внутренних

органов животных. Макроскопически в месте инъекции изменений структуры мягких тканей не было обнаружено. При визуальном исследовании внутренних органов во все сроки наблюдения изменений не отмечено. Микроскопически воспалительной инфильтрации кожи, подкожной клетчатки и мышц не выявлено.

У животных 1 и 2 групп (опыт), которым вводили Витулин с растворителями № 1 и № 2, соответственно, в ткани селезёнки и кортикальной зоне коркового вещества лимфоузлов на первые сутки после последней инъекции препарата были обнаружены увеличенные лимфоидные фолликулы с крупными светлыми центрами размножения (рис. 1).

Рис. 1. Опыт, первые сутки после пятикратного применения Витулина. Фолликулы селезенки крысы увеличены, с хорошо выраженными светлыми центрами. Окраска гематоксилином и эозином, ув. х 56.

В маргинальной зоне фолликулов селезёнки и мозговом веществе лимфоузлов при окраске по Браше были выявлены значительные скопления плазмоци-тов. Рисунок лимфоузла сохранялся. Эти признаки свидетельствуют об иммунном ответе по гуморальному типу (рис. 2).

Рис. 2. Опыт, 1-е сутки после пятикратного введения Витулина. Увеличенное количество плазмоцитов (темные клетки) в мозговой зоне лимфоузла крысы. Окраска по Браше, ув. X 140.

Через 21 день после последней инъекции структура лимфоидных фолликулов селезёнки и лимфоузлов соответствовала норме: соотношение центра размножения и лимфоидного пояска не превышало 1:3. Сохранялась умеренная плазмоцитарная инфильтрация маргинальной зоны фолликулов селезёнки и мозгового вещества лимфоузлов.

У животных контрольной группы лимфоидные фолликулы селезёнки и лимфоузлов во все сроки наблюдения были мелкими, со слабо различимыми светлыми центрами.

На кроликах. Наблюдение за животными на протяжении 21 дня после эксперимента не выявило каких-либо внешних признаков токсического действия препаратов. Поведение, внешний вид, двигательная активность, количество съеденной пищи и выпитой воды, физиологические отправления опытных кроликов не отличались от контрольных животных.

Динамика показателей массы тела животных обеих групп практически была одинаковой (р>0,05).

На вскрытии через 1 и 21 сутки после последней инъекции проводилось патоморфологическое исследовачие места введения препаратов и внутренних органов животных. В месте инъекции утолщения, уплотнения, изменения цвета, дистрофических изменений и воспалительной инфильтрации мягких тканей не выявлено. При исследовании внутренних органов во все сроки наблюдения визуальных изменений не отмечено.

Микроскопически воспалительных и реактивных изменений в ткани миокарда, легких, печени, почек, поджелудочной железы, желудка, кишечника как в контрольной, так и в опытной группах не обнаружено, структура органов была сохранена. У животных 1 и 2 групп (опыт), которым вводили Витулин с растворителями № 1 и № 2, соответственно, наблюдалась гиперплазия лимфоидных фолликулов селезёнки и кортикальной зоны лимфоузлов с увеличением светлых центров размножения и плазмоцитарной инфильтрацией маргинальной зоны фолликулов селезёнки и мозговой зоны лимфоузлов (рис. 3).

Рис. 3. Опыт, 1-е сутки после пятикратного введения Витулина. В мозговой зоне лимфоузла увеличено количество плазмоцитов. Окраска гематоксилином и эозином, ув. х 280.

В контрольной группе животных на этом сроке исследования в селезёнке и лимфоузлах лимфоидные фолликулы были мелкие, с едва различимым светлым центром. Эти признаки свидетельствуют об иммунном ответе по гуморальному типу. Через 21 день после последней инъекции микроструктура большинства лимфоидных фолликулов селезёнки и лимфоузлов возвращалась к норме: соотношение светлого центра и лимфоидного пояска не превышало 1:3 (рис. 4).

Рис. 4. Опыт, 21-е сутки после пятикратного применения Витулина. Сохраняется умеренно выраженная плазмоцитарная инфильтрация маргинальной зоны фолликулов селезенки кролика. Окраска по Браше, ув. х 140.

Наблюдалась умеренная плазмоцитарная инфильтрация мозгового вещества лимфоузлов и маргинальной зоны фолликулов селезенки, что дает основание предполагать о сохранении иммунного ответа по гуморальному типу через 21 день после прекращения введения животному препарата Витулин.

На собаках. С целью наибольшей убедительности в закономерности данных, полученных при экспериментальном исследовании возможного хронического токсического действия Витулина и растворителей № 1 и № 2, была проведена серия опытов на третьем виде животных - собаках.

На протяжении 21 дня наблюдения после эксперимента собаки оставались активными, поведение, внешний вид, количество съеденной пищи и выпитой воды, физиологические отправления опытных животных не отличались от контрольных. Динамика показателей массы тела подопытных животных, контрольной и интактной групп практически была одинаковой.

На вскрытии через 1 и 21 сутки после последней инъекции патологических изменений со стороны внутренних органов не обнаружено. В месте инъекции препаратов дистрофических изменений мягких тканей и признаков воспалительной инфильтрации не выявлено.

В первой и второй группах животных, которым вводили Витулин, наблюдали увеличение лимфоидных фолликулов с крупными светлыми центрами в корковой зоне лимфоузлов и белой пульпе селезенки (рис. 5), а также плазмоци-тарную инфильтрацию мозгового вещества лимфоузлов и маргинальной зоны фолликулов селезенки (рис. 6). Эти признаки свидетельствуют о формировании

иммунного ответа по гуморальному типу.

Рисунок 5. Опыт, 1-е сутки после пятикратного применения Витулина. Лимфоидные фолликулы селезенки собаки увеличены, с крупными светлыми центрами. Окраска гематоксилином и эозином, ув. х 140.

Рисунок 6 . Опыт, 1-е сутки после пятикратного применения Витулина. Плазмотизация мозгового вещества лимфоузла собаки. Окраска по Браше, ув. х 280.

Через 21 день после последней инъекции микроструктура большинства лимфоидных фолликулов селезенки и лимфоузлов возвращалась к норме. Как и в предыдущих сериях исследований наблюдалась умеренная плазмоцитарная инфильтрация мозгового вещества лимфоузлов и маргинальной зоны фолликулов селезенки, что дает основание предполагать о сохранении иммунного ответа по гуморальному типу через 21 день после прекращения введения животному препарата Витулин.

У контрольных животных лимфоидные фолликулы селезенки и лимфоузлов во все сроки наблюдения были мелкими со слабо различимыми светлыми центрами.

Сенсибилизирующее, и местно-раздражающее действие Витулина и растворителей № 1 и №2 на слизистую оболочку глаза. Испытания проводили на кроликах в соответствии МУ МЗ СССР 05 РЦ/3140 от 30.11.91 г. по определению токсикологических исследований ингредиентов лекарственных средств в эксперименте на животных (ГОСТ 12.1.007.76).

Проведенные исследования показали, что Витулин и растворители № 1 и № 2 не оказывают сенсибилизирующего, и местно-раздражающего действия на слизистую оболочку глаз кроликов.

Аллергизирующее действие Витулина и растворителей № 1 и № 2. Исследования проводили на здоровых половозрелых морских свинках, самцах, весом 280-300 г. в соответствии с «Методическими указаниями по оценке аллергенных свойств фармакологических средств», М., 1998.

В течение эксперимента не отмечено каких-либо изменений. Видимой реакции на введение испытуемых препаратов не наблюдали. Эритемы, уплотнения и утолщения кожи опытных свинок по сравнению с контрольным животным не было отмечено. Испытание показало, что препарат Витулин и растворители № 1 и № 2 не обладают аллергизирующим действием.

Испытание на пирогенность Витулина и растворителей № 1 и № 2. Исследования проводили в соответствии с методикой ГФ XI вып.2, М., 1990 на половозрелых кроликах, самцах, весом 2,5 - 3,0 кг. Полученные данные показали, что препарат Витулин и растворители № 1 и № 2 являются апирогенными.

Определение тератогенности и эмбриотоксичности Витулина и растворителей № 1и№2.В опыте использовали имбредных белых крыс, самцов и самок, весом 180-220 г. Для получения самок с диагностированным сроком беременности их вечером подсаживали к самцам, а на утро следующего дня исследовали влагалищные мазки. День обнаружения сперматозоидов в мазке из влагалища крысы считали первым днем беременности. Таких животных отбирали для опыта. Всего было отобрано 60 беременных крыс - 6 групп по 10 голов.

Инъекции проводили пятикратно, внутримышечно в объеме по 1 мл, начиная с первого дня беременности, с интервалом в 3 суток. Первой группе вводили Витулин в дозе 30 мг/на крысу, разведенный растворителем № 1; второй группе - Витулин в дозе 30 мг/на крысу, разведенный растворителем № 2; третьей группе - растворитель № 1; четвертой группе - растворитель № 2; пятой группе, контрольной, стерильный физиологический раствор; шестая группа была интактной.

Крыс выводили из эксперимента на 20-й день беременности методом передозировки гексенала. При вскрытии проводили визуальный осмотр внутренних органов, подсчитывали количество жизнеспособных плодов. Яичники и матку извлекали, матку вскрывали и определяли количество мест резорбции плодов, эмбрионы вместе с плацентами выделяли. При помощи бинокулярной лупы МБС-2 подсчитывали количество желтых тел в яичниках. Измеряли массу плацент и эмбрионов при помощи весов «Сарториус» и кранио-каудальный размер плодов. Подсчитывали соотношение массы плода и плаценты. Плоды фиксировали в жидкости Буэна и в 96% этиловом спирте для соответствующих исследований по методу Вилсона и методу Дауссона. Все плоды во всех группах были определены как жизнеспособные. При их макроскопическом исследовании пато-

логии не было обнаружено.

Как следует из представленных данных, предимплантационная стадия эмбриогенеза является устойчивой к воздействию испытуемого препарата. При макроскопическом исследовании живых эмбрионов ни в одной из групп патологии не обнаружили.

Часть беременных самок (по 5 животных в каждой группе) оставляли до естественных родов. Подсчитывали количество родившихся крысят. Следили за ходом их постнатального развития и через месяц после рождения тестировали их с целью выяснения возможных поражений центральной нервной системы (ЦНС). Для этого исследовали поведенческие реакции в тестах: «открытое поле», «рефлекс норки» и «удержание на сетке».

В помете 1 группы насчитывалось 59 крысят, по 11,8 на одну самку; в помете 2 группы - 61 крысенок, по 12,2 на 1 самку; 3 группы - 56 крысят, по 11,2 на одну самку; 4 1руппы - 58 крысят, в среднем по 11,6 на 1 самку; в помете 5 группы - 55 крысят, по 11,0 на 1 самку; в интактной группе - 53 крысенка, среднее количество на 1 самку - 10,6. Таким образом, введение испытываемых препаратов не повлияло на плодовитость самок. Крысята развивались нормально, хорошо прибавляли в массе тела. Тестирование в «открытом поле» и по «удержанию на сетке» показало, что препараты не вызывают изменений со стороны ЦНС у родившихся крысят.

Мутагенное действие Витулина и растворителей № 1 и № 2. С целью изучения мутагенной активности препарата Витулин и растворителей были проведены исследования способности этих препаратов индуцировать рецессивные, сцепленные с полом, летальные мутации у дрозофил.

Самцов дрозофилы линии Д-32 4-5-дневного возраста обрабатывали пищевым способом, для чего использовали стеклянные стаканчики, дном которых служили стеклянные фильтры. Раствор Витулина в терапевтической дозе 25 мкг/кг содержался на внешнем, нссколько большем по диаметру сосуде и через стеклянный фильтр поступал к обрабатываемым самцам. Растворителем служил 5% водный раствор сахара. Так же проверяли растворитель №1 и растворитель №2. Обработку проводили в течение 72 часов. По окончании опыта самцов подсаживали к интактным виргинным самкам линии ВАС для скрещивания в соотношении 1 самец : 2 самки. Через 5-6 суток после начала скрещивания родителей удаляли. После вылета первого поколения (10 - 12 суток с момента начала скрещивания) проводили братско-сестринские скрещивания (1 самец и 1 самка в каждой культуральной пробирке). Просмотр культур второго поколения осуществлялся визуально, обращали внимание на наличие в культурах двух классов самок. В случае отсутствия в культуре одного класса самцов, фенотип которых аналогичен фенотипу самцов линии Д-32 (родители), делали заключение о возникновении в данной культуре рецессивной, сцепленной с полом, летальной мутации (табл.1).

Достоверных различий по сравнению с контролем по Х2-критерию не было выявлено.

Изучение мутагенной активности препаратов

Группа Общее количество культур в F2 Из них с рецессивными деталями %±ш

Контроль 1035 6 0,58 ± 0,17

Опыт «Витулин» 1107 9 0,81 ±0,21

Растворитель №1 1211 11 0,98 ±0,28

Растворитель №2 1081 7 0,65 ±0,19

Можно сделать вывод об отсутствии у Витулина и растворителей № 1 и № 2 мутагенной активности в отношении данного типа наследственных нарушений.

Таким образом, комплексное изучение Витулина и растворителей № 1 и № 2 показало, что и препарат и растворители не проявили острой и хронической токсичности, сенсибилизирующего, и местно-раздражающего действия на слизистую оболочку глаза, мутагенного, тератогенного и эмбриотоксического действия. Препарат апирогенен, как и его растворители.

Определение противовоспалительного свойства Витулина, разведенного растворителем № 2

С целью определения противовоспалительного действия препарата Витулин были проведены экспериментальные исследования на трех группах лабораторных животных (белых беспородных мышах весом 18-20 г.).

Для исследования была использована модель ожога III степени основания хвоста мыши с помощью аппарата «анальгезиметр опто-электронный ТФ-003». После проведения обезболивания внутрибрюшинным введением 0,3 мл 1% раствора тиопентала натрия, животных фиксировали в аппарате и наносили стандартный по площади и глубине ожог III степени.

На вторые сутки после образования на месте ожога сухого струпа красно-коричневого цвета, определяли величину отека, площадь гиперемии, наличие отделяемого из-под струпа и приступали к введению препарата.

Животные были разделены на три группы (по 10 в каждой).

I группе (опыт) вводили ежедневно внутримышечно Витулин в дозе 10 мг/на мышь, разведенного растворителем № 2.

II группе (контроль) вводили ежедневно внутримышечно 0,1 мл 30% раствора реопирина (нестероидного противовоспалительного препарата)

III группе (контроль) вводили внутримышечно по 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия.

Исследование проводили в течение 14 дней.

Результаты исследования.

В первые трое суток визуального наблюдения в области ожога во всех группах животных не определялось различий внешнего вида струпа, площади гиперемии, области отека. Начиная с четвертых суток исследования, у трех жи-

вотных III группы (контроль) из-под струпа наблюдали сукровичное отделяемое без запаха, однако в более поздние сроки наблюдения у этих животных после отпадения струпа возникали гнойно-воспалительные очажки. При бактериологическом исследовании отделяемого из этих очажков, высевали золотистый стафилококк, стрептококк, синегнойную палочку. То есть определялась типичная картина инфицированного воспалительного процесса после ожога.

У всех животных I группы (опыт), начиная с четвертых суток, наблюдалось интенсивное спадение отека, уменьшение гиперемии. В одном случае на пятые сутки отпадал струп, под которым находились яркие сочные грануляции с минимальным отделяемым. При посеве в нем определяли только сапрофитную флору - эпидермальный стафилококк. У остальных животных струп самостоятельно отпадал на 8-10 сутки, под ним определялись грануляции без отделяемого, покрытые нежным эпителием.

У животных II группы (контроль) спадение отека и уменьшение гиперемии наблюдалось с 6-7 суток. Струп отпадал на 10-12 сутки. Под ним находились сочные ярко-красные грануляции со скудным прозрачным отделяемым без запаха. При посеве в отделяемом определяли эпидермальный стафилококк, и в двух случаях - золотистый стафилококк.

В течение двух недель наблюдения у всех животных 4 раза брали кровь для исследования (табл. 2).

Таблица 2

Динамика изменений показателей клеток крови у экспериментальных животных

показатели

группы сроки лейкоциты (общее количество) нейтрофилы палочко- ядерные лимфоциты

I до операции 9,2 2,8 65

3 дня 11,2 4,9 74

6 дней 11,0 3,8 74

9 дней 10,8 3,6 73

II до операции 9,3 2,9 69

3 дня 11,8 5,1 75

6 дней 11,1 4,1 74

9 дней 10,9 3,9 74

III до операции 9,4 3 71

3 дня 16,2 5,8 77

6 дней 14,8 5,6 76

9 дней 10,3 4,2 75

Из таблицы видно, что при применении Витулина (I группа) показатели белой крови к 9-м суткам приближаются к норме, что свидетельствует о противо-

воспалительном эффекте препарата. В то же время, у животных III (контрольной) группы наблюдалась яркая картина воспаления. На 6-е сутки количество нейтрофилов в 1,5-2 раза превышало норму. Таким образом, иммуномодули-рующий препарат Витулин обладает противовоспалительным действием, о чем свидетельствует отсутствие в первой группе во все сроки наблюдения нагноения, быстрая нормализация показателей белой крови, быстрое заживление ран под струпом с формированием грануляций, покрытых эпидермисом.

Действие препарата Витулин на организм облученных животных

Для проведения испытания были использованы белые крысы, самцы, линии Wistar весом 160 -180 г. Их содержали на стандартном пищевом рационе в виварии кафедры радиологии СПбГАВМ.

До облучения, животные были разделены на 4 подопытные и 3 контрольные группы.

Крысам подопытных групп вводили подкожно в область кожной складки на холке Витулин в дозе 30 мг/на крысу, разведенный растворителем №2.

Крыс облучали дозами в 7,2 Гр. Рентгеновское облучение проводили на аппарате РУМ-17 (напряжение 200 кВ, сила тока - 15 мА; фильтры: Си - 0,05 мм, А1 - 1,0 мм; мощность дозы - 0,17 Гр/мин, время облучения - 42 мин.). Во время облучения животные находились в плексигласовых коробках, окружённых снизу и по бокам парафиновыми рассеивателями.

Период наблюдения составил 30 дней.

Результаты оценивали клинически, по изучению показателей сыворотки крови (лизоцим, лизиновая и бактерицидная активность) и гистологически.

Забор крови для анализа проводили методом декапитации животных через 3 - 24,48 часов, 10,14 суток, а также через 30 дней после радиационного воздействия.

Результаты проведённых исследований по использованию Витулина до облучения крыс линии Wistar в дозе 7,2 Гр выявило его радиопротективное свойство. Так, выживаемость подопытных животных к 30 суткам составила 60-65%. Факторы естественной резистентности организма: лизоцим крови в момент кризиса на 10-14 сутки (пик острой формы лучевой болезни) был выше, чем у контрольно облучённых животных от 2 до 5%, р-лизиновая и бактерицидная активность сыворотки крови - от 3 до 13% и 25-30%, соответственно. К 30-ым суткам наблюдений иммунобиологические показатели сыворотки крови восстановились.

На основании вышеизложенного, можно утверждать, что Витулин обладает радиопротективным действием и его можно рекомендовать в качестве профилактического и лечебного средства при лучевой болезни.

Влияние Витулина, разведенного растворителями № 1 и № 2, на жизнеспособность различных видов микроорганизмов in vitro

Антимикробные свойства Витулина с растворителями № 1 и № 2 изучали на 27 штаммах различных микроорганизмов, выделенных из бронхиального секрета больных телят.

В опыт были включены представители нескольких родов: Streptococcus - 3;

Pasteurella - 3; Staphylococcus - 6; Salmonella - 3; Escheiichia - 3; Pseudomonas - 3 и Proteus - 6.

Проверку антибактериальных свойств проводили методом серийных разведений (Поляк М.С., 2000). При этом определяли минимальную подавляющую концентрацию (МПК), которая обеспечивала прекращение репродукции возбудителя.

Проведённые исследования показали, что МПК для Str.pneumoniae, Staph. aureus, Staph. epidermidis, Salm. ententidis является разведение Витулина с растворителем № 1 - 1:4, а Витулина с растворителем № 2 - 1:16; для Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aerugenosa - Витулина с растворителем № 1 - 1:4, а с растворителем № 2 - 1:8; для Past, multocida, E. coli - Витулина с растворителем № 1 - 1:8, а с растворителем № 2 - 1:16.

Таким образом, Витулин с растворителем № 2 обладает наиболее выраженным антибактериальным действием и может использоваться для лечения инфек-ционно-воспалительных процессов, обусловленных ассоциацией различной патогенной микрофлоры.

Учитывая, что препараты содержат компоненты, к которым у микроорганизмов не происходит адаптации, их можно использовать до полного клинического выздоровления организма при инфекционно- воспалительных процессах, а также для коррекции кишечного биоценоза.

Монотерапия собак при дисссминированном папилломатозе ротовой полости

Активации развития дессиминированного папилломатоза ротовой полости у собак способствует наличие вторичных иммунодефицитных состояний организма, а также трудно диагностируемые аутоиммунные расстройства, обуславливающие быстрый опухолевый poCT клеток.

Для иммунотерапии животных, больных диссеминированным папилломато-зом ротовой полости, мы использовали иммуномодулирующие препараты Виту-лин и Тулимкар в дозах каждого по 0,25 мг/кг массы, предварительно разведенных растворителем № 2. Процесс полной регрессии опухолей наблюдали уже в течение первых 3±1 суток. С целью нормализации аутоиммунных процессов и восстановления нарушенных звеньев иммунной системы организма больных животных курс активной монотерапии продолжали еще в течение 10 дней.

В опыте было использовано 25 собак. Получен 100 процентный положительный эффект без оперативного вмешательства.

Применение препарата Витулин при стафилококкозе у собак

Различные виды микроорганизмов, контаминируя кожу собак, вызывают стафилококккозы и пиодермии. Нередко наблюдаются отиты, вагиниты и другие воспалительные процессы. Заболевание часто протекает в ассоциации стафилококков со стрептококками, синегнойной палочкой, вульгарным протеем и др., что осложняет течение болезни. При всех формах стафилокаккозов происходит угнетение фагоцитоза и Т-клеточного иммунитета. Для лечения больных животных использовали иммуномодулирующий препарат Витулин в дозе 0,5 мг/кг

массы, предварительно разведенного растворителем № 2. Инъекции проводили внутримышечно, ежедневно, в течение 20±5 дней. В опыте было использовано 20 собак с различными поражениями кожи. Эффективность проведенного лечения составила 95 % после первого курса применения Витулина, тогда как в контрольной группе, где использовали антибиотики и аутовакцины, она не превысила 53% (Р<0,01)

Коррекция показателей естественной резистентности у телят, больных респираторными болезнями

Для проведения исследований использовали телят чёрно-пёстрой породы в возрасте от полутора до двух месяцев из племенного хозяйства Ленинградской области. В опыт было взято две группы животных по 6 голов в каждой.

Телят подбирали по принципу аналогов с патологией респираторной системы, клиникой - бронхопневмония. Диагноз ставили с учётом клинических и эпи-зоотологических данных. Вирусоносительство подтверждали экспресс-методами, используя наборы стандартных диагностикумов.

Животных контрольной группы лечили по схеме, традиционно применяемой в хозяйстве. В качестве этиотропного средства использовали антибиотик широкого спектра действия (5%-й раствор энроксила) в соответствии с наставлением по его применению, а также симптоматические средства и тривитамин.

Телятам подопытной группы назначали Витулин в дозе 0,5 мг/кг массы, разведённого растворителем № 2. Инъекции проводили в течение первой недели ежедневно 2 раза в день, второй недели - 1 раз в сутки и третьей - через день. Антибиотики, а также какие-либо другие средства антимикробной направленности не применяли.

Эффективность проведённого лечения оценивали по клиническим, гематологическим, иммунологическим и биохимическим показателям сыворотки крови животных до лечения, через 10 и 30 дней после ее начала. Уровень эндогенного гамма-интерферона определяли через каждые трое суток.

Полученные результаты показали, что у животных, получавших Витулин, рецидив болезни не наблюдался, хотя некоторые клинические показатели (пульс, дыхание, температура тела) возвращались в нормальное состояние несколько медленнее, чем у телят контрольной группы, получавших антибиотики, но болезнь у последних достаточно часто вновь проявлялась (до 33%).

Исследование сыворотки крови на уровень эндогенного гамма-интерферона показало существенное различие у животных контрольной и подопытной групп. До проведения лечения он был в пределах 50 + 5 Международных единиц (МЕ). В последующие дни в контрольной группе уровень эндогенного гамма-интерферона оставался неизменным до 9 суток, а затем наблюдалось его незначительное повышение до 60 ± 10 МЕ, тогда как в подопытной было установлено его увеличение до 130 + 10 МЕ. В дальнейшем он практически не изменялся (рис. 7).

Уровень интерферона в сыворотке крови телят больных бронхопневмонией

Об эффективности действия Витулина с растворителем № 2 на естественную резистснтность организма животных говорят биохимические и иммунологические показатели сыворотки крови (табл. 3).

Из таблицы видно, что до проведения терапии концентрация общего белка в сыворотке крови животных контрольной группы была выше, чем в опыте. Все / остальные показатели были приблизительно на одинаковом уровне, что и в подопытной группе.

После проведённого лечения наблюдались изменения в показателях по отношению к исходным. Общий белок в сыворотке крови подопытной группы увеличился на 96,0%, резервная щелочность - на 18,2%, витамин А - 48,0%, кальций - 3,6%, фосфор - 23,5%, тогда как снизились показатели билирубина на 12,0%, холестерина - 26,0%, креатинина на 19,0%. Из белковых фракций повысилось содержание альбуминов и гамма-глобулинов на 22,0% и 4,2%, а альфа- и бета-глобулины понизились на 7,3% и 32,0%, соответственно. При изучении данных Т- и В-лимфоцитов было установлено их повышение с 25,8 ± 5,8 до 52,0 ± 7,0 и с 2,0 + 0,3 до 4,5 ± 0,9, соответственно (табл. 3).

Все эти данные говорят об иммуномодулирующем действии препарата и, как следствие, положительном течении болезни в сторону выздоровления.

Показатели сыворотки крови телят,

№ Показатели До лечения На 10-е сут(М±т, П=6) сутки

п/п Биохимические показатели

1. Общий белок 40.1±5.4 41.5±5.8 45.2±6.9

г/л 38,9±4,6 62,4±9,7 76,1±10,5**

2. Резервная щелочность 35,4±0,6 33,3±0,7 34,2±0,4

06% СО 35,2±0,9 37,5±2,9 41,б±2,0*

3. Витамин А, 0,78±0.12 0.73±0,10 0,80±0.10

ммоль/л 0,75±0,11 0,87±0,09 1,11±0,16

4. Кальций 2,9±0,4 2.2±0.3 2.3±0.3

ммоль/л 2,8±0,4 2,5±0,3 2,9±0,4

5. Фосфор, 1,8±0,3 1.4±0.1 1.4±0.2

ммоль/л 1,7±0,7 1,8±0,2 2,1±0,3

6. Билирубин 8,5±1,0 8.2±0,9 9.6±1,3

мкмоль/л 9,2±1,2 8,4±0,8 8,1±0,8

7. Холестерчн 4.7±0.6 4,4±0,3 4,8±0,6

ммоль/л 5,8±0,8 4,7±0,5 4,3±0,3

8. Креатинин 65,0±9,6 68,1 ±11.2 73.0±11,0

мкмоль/л 67,0±10,5 70,1±11,5 54,3±8,8

9. Мочевина 4,0±0.6 4.5±0.7 6.7±1.1

ммоль/л 4,8±0,7 3,7±0,5 3,2±0,4*

Белковые фракции %

10. Альбумины 37.3±3.4 36.1±3.4 34,5±4,1

35,5±3,5 41,8±3,9 43,3±3,8

11. Альфа глобулины 14,9±2.4 27,8±2.7 27,9±2.5

20,5 ±2,2 25,7±2,5 19,0±2,6"

12. Бета глобулины 20,5±3,1 23.4±2.9 23,7±3,4

22,7±2,6 18,5±3,6 15,5±3,1*

13. Гамма глобулины 27,3±5.1 12.7±4.9 13.9±3.8

21,3±4,9 14,0±3,3 22,2±4,5*

Данные исследования Т- и В- лимфоцитов

14. Т-лимфоциты, % 26.1 ±4,3 31.0±5.0 31,6±5,1

25,8±4,1 49,0±6,1 52,0±6,0**

15. В-лимфоциты, % 2,2±0.2 3,1±0,3 3,4±0,4

2,0±0,3 4,0±0,6 4,5±0,7

Примечание: числитель - показатель в контрольной группе;

знаменатель - показатель в подопытной группе.

В заключении следует отметить, что иммуномодулирующий препарат Ви-тулин с растворителями № 1 и № 2 обладает способностью повышать естественную резистентность организма. Он индуцирует эндогенный гамма-интерферон, корректирует Т- и В-клеточный иммунитет, повышает бактерицидную и лизо-цимную активность сыворотки крови, обладает гепатотропным свойством и антибактериальным действием в отношении грамположительных и грамотрица-тельных микроорганизмов.

В связи с представившейся возможностью нами проведены широкие клинические испытания Витулина и Тулимкара на телятах первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни для изучения профилактического и лечебного действия припаратов при респираторных вирусно-бактериальных болезнях.

Активная неспецифическая иммунопрофилактика респираторных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни

Для сохранения племенного молодняка при энзоотиях респираторных вирусных болезней нами разработаны методологические основы активной неспецифической иммунопрофилактики телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни.

Так как в этих возрастных периодах иммунная система еще недостаточно сформирована, мы в своих исследованиях основное внимание обращали на неспецифические факторы защиты организма.

Для проведения иммунопрофилактики телята черно-пестрой породы, были произвольно разделены на опытные и контрольные. От них, с целью определения естественной резистентности, по принципу аналогов, отбирали по пять -шесть голов и объединяли в группы. От этих животных брали кровь до проведения иммунопрофилактики, через две недели и после ее окончания для изучения иммунологических и биохимических показателей, общего белка, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови. Уровень эндогенного гамма-интерферона определяли через каждые трое суток в период эксперимента.

При начавшейся энзоотии в первом и во втором критических периодах жизни назначали активную неспецифическую иммунопрофилактику с использованием иммуномодулирующего препарата Витулин в дозе 0,5 мг/кг массы, разведенного растворителем № 1.

Частоту инъекций рассчитывали в зависимости от эпизоотической ситуации. В хозяйствах, где регистрировали заболевание, инъекции проводили через каждые двое суток, а в угрожаемых - через четверо. В контрольной группе применяли гамма-глобулины, сыворотки крови реконвалесцентов, гипериммунные сыворотки, традиционно используемые в племенных хозяйствах для профилактики респираторных вирусных болезней телят. В отличие от метода пассивной иммунизации выявлена высокая биорегулирующая эффективность иммуномоду-лирующего препарата Витулин с растворителем № 1.

Так, при изучении интерферонограмм наблюдали увеличение уровня эндогенного гамма-интерферона в сыворотке крови телят первого возрастного критического периода жизни от 50 ± 10 МЕ до 100 ± 10 МЕ (рис. 8), а во втором - от 50 + 10 МЕ до 120 ± 10 МЕ (рис. 9). В дальнейшем его уровень сохранялся на повышенных показателях (Р< 0,001). У животных контрольных групп уровень эндогенного гамма-интерферона оставался неизменным до девяти суток, а затем наблюдали его незначительное повышение (рис. 8,9).

Рис.8

Рис.9

Такие особенности были отмечены и при изучении других показателей. Применение Витулина с растворителем № 1 способствовало значительному уве-

личению общего белка, бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови телят на 19,5 %; 96,4% и 88,4% соответственно (Р< 0,001). При использовании традиционных методов профилактики эти изменения были не существенны -3,9%; 36,9% и 7,6 % соответственно.

Повышение естественной резистентности организма отразилось и на снижении количества заболевших животных при начавшейся энзоотии респираторных вирусных болезней.

Эффективность применения Витулина с растворителем № 1 в сравнении с традиционно используемыми методами профилактики представлена в табл. 4.

Таблица 4

Эффективность применения Витулина с растворителем № 1 при профилактике респираторных болезней телят

первого и вто (>ого возрастных критических периодов жизни

Группы животных Кол-во животных Возраст в днях Больные

Кол-во животных %

Контрольная 290 1-31 122 42,1 **

Подопытная 330 1-31 16 4,8**

Из таблицы видно, что при массовом профилактическом использовании препарата выявлено незначительное количество больных, около 5 % от общего числа (330 голов). При традиционно используемых методах процент больных был высоким (42,1 % от 290 голов), причем заболевание протекало тяжело, с осложнениями, рецидивами и выбраковкой ценных племенных животных.

Третья возрастная группа имеет свои характерные особенности. У животных наблюдается стабилизация фагоцитарной активности лейкоцитов и появляются гуморальные факторы защиты организма. Однако в этом возрасте происходит перегруппировка телят и изменение режима кормления в связи с их переводом на грубый корм. Поэтому возможен пассаж многочисленных патогенных возбудителей вирусной и бактериальной природы, что в свою очередь способствует манифестированному проявлению респираторных вирусных болезней и наносит огромный экономический ущерб хозяйствам.

Кроме того, переболевшие остаются вирусоносителями пожизненно и являются источниками заражения здоровых животных.

Для сохранения ценного племенного молодняка, при появлении в хозяйстве больных респираторными вирусными болезнями, всем телятам подопытной группы назначали активную неспецифическую иммунопрофилактику с использованием двух иммуномодулирующих препаратов - Витулин с растворителем № 1 и Тулимкар.

Их вводили внутримышечно сочегано (из одного шприца) в дозе каждого по 0,25 мг/кг массы в течение всего критического периода жизни через двое суток

(в угрожаемых хозяйствах - через четверо суток). В контрольной группе, как в первом и во втором возрастных периодах, использовали гамма-глобулины, сыворотки крови реконвалесцентов и гипериммунные сыворотки по схеме, применяемой в хозяйстве.

Результаты проведенных исследований показали, что до иммунопрофилактики естественная резистентность организма животных была снижена: бактерицидная активность сыворотки крови в подопытной и контрольной группах составляла соответственно - 32,2 и 34,3 %; лизоцимная - 13,1 и 14,2 %; уровень гамма-интерферона - 55±10 ME, количество общего белка - 53,0 и 54,0 г/л, соответственно, в обеих группах.

Через две недели от начала профилактики у животных повторно исследовали сыворотку крови. При этом наблюдали увеличение показателей естественной резистентности в обеих группах, однако, в подопытной они были выше по сравнению с контролем.

В дальнейшем наблюдали тенденцию к повышению естественной резистентности организма телят в опыте и контроле. Через месяц бактерицидная активность сыворотки крови в подопытной группе по сравнению с исходными данными повысилась на 99,0%, в контрольной - на 14,6%, лизоцимная активность - на 86,2 и 13,4%, общий белок - на 43,0 и 6,0%, соответственно.

При изучении показателей интерферонограмм было установлено увеличение уровня эндогенного гамма-интерферона в подопытной группе с 55±10 ME до 120+10 ME, в контрольной его увеличение было незначительным (рис. 10).

Повышние естественной резистентности организма животных с использованием двух иммуномодулирующих препаратов Витулина и Тулимкара способствовало высокой (почти 100%) сохранности молодняка (табл. 5).

Рис. 10

В контрольной группе был отмечен значительный процент больных - 35,3%.

Наблюдали рецидивы и выбраковку ценных племенных животных (табл. 5).

Таблица № 5

Эффективность применения Витулина с растворителем № 1 и Тулимкара при профилактике респираторных болезней телят

третьего возрастного критического периода жизни

№ Кол-во Возраст Больные

п/п Группа животных в днях Кол-во животных %

1 Контрольная 380 35-85 134 35,26

2 Подопытная 382 ч а 6 1,57

Таким образом, разработанные схемы и дозы применения Витулина с растворителем № 1 и Тулимкара являются эффективными и экономичными для массового проведения активной неспецифической иммунопрофилактики ассоциированных вирусно-бактериальных болезней телят во всех трех критических периодах жизни. При этом полностью исключается использование отечественных и зарубежных антибактериальных препаратов, экзогенного интерферона, гамма-глобулинов, сывороток крови реконвалесцентов, гипериммунных сывороток.

Нормализуя факторы естественной резистентности организма, Витулин с растворителем № 1 и Тулимкар способствуют сохранению ценного племенного молодняка крупного рогатого скота свыше 98 % (табл. 5).

Активная неспецифическая иммунопрофилактика обеспечивает надёжную защиту телят не только от инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, но и от возможной ассоциации других патогенных вирусов, циркулирующих в животноводческих хозяйствах, включая герпесвирусы, энтеровирусы и многочисленные неклассифицированные вирусы, поражающие клетки желудочно-кишечного тракта, а бактериостатическая активность препарата - от возбудителей бактериального происхождения.

Применение Витулина с растворителем № 2 для активной монотсрапии больных телят, с начальной стадией бронхопневмонии

Перед массовым применением препаратов, по принципу аналогов отбирали небольшие группы телят в количестве 5-6 голов опыт и контроль с характерными клиническими признаками, свойственными первой стадии бронхопневмонии. От животных брали кровь с соблюдением стерильности и проводили изучение динамики гемотологических и биохимических показателей, общего анализа крови и уровня эндогенного гамма-интерферона.

Для лечения телятам контрольной группы назначали энроксил, антибиотик широкого спектра действия, миксоферон, противовирусный препарат, и симптоматические средства (по схеме, применяемой в хозяйстве).

В подопытной группе использовали Витулин в дозе 0,5 мг/кг массы тела, разведенного растворителем № 2. Препарат вводили внутримышечно в течение десяти дней ежедневно, два раза в сутки, с интервалом 10-12 часов, в последующие двадцать дней - однократно через день.

Эффективность проведённого лечения оценивали по завершенности воспалительного процесса в верхнем отделе дыхательных путей: отсутствии клинических признаков болезни, нормализации гематологических и биохимических показателей крови, повышению уровня эндогенного гамма-интерферона.

Результаты, полученные после 1,2 и 3-х недельного лечения свидетельствовали о тенденции к улучшению гемотологических показателей крови животных обеих групп, однако в подопытной они наступали быстрее, хотя некоторые клинические показатели (температура, пульс, дыхание) возвращались к норме медленнее (2±1 сутки, при Р>0,05 ).

При анализе уровня эндогенного гамма-интерферона было отмечено его незначительное повышение в контрольной группе, тогда как в подопытной он достиг на 17 сутки - 120±10 МЕ и на таком повышенном уровне оставался до конца проведения исследований (рис. 11).

При изучении белковых фракций сыворотки крови животных, по сравнению с исходными данными, в контрольной группе была установлена тенденция к снижению общего белка, альбуминов и гамма-глобулинов на 4,6%; 1,3%; 13,0%, соответственно, и повышение уровня альфа- и бета-глобулинов на 1,5% и 17,1%, соответственно, тогда как в подопытной группе наблюдали достоверное повышение концентрации общего белка, гамма-глобулинов и альбуминов на 21,3%; 11,0%; 5,3%, соответственно, и понижение концентрации альфа- и бета-глобулинов на 11,7% и 13,0 % соответственно (табл. 7).

Рис.11

Уровень интерферона в сыворотке крови больных телят с начальной стадией бронхопневмонии

150

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Время, дни

Биохимические показатели сыворотки крови больных телят, с начальной стадией бронхопневмонии (ринит) ___(М±т, п=6)_

а В е л и ч и на показ а т е л е й

№ Наименование а

п/п показателей ч

•л С Контрольная Контрольная Подопытная

(здоровые) (больные) (больные)

1. АлАт 1 135±16 168±14 170±16

н/моль/с-л 2 169±18 271±15 158±25

3 180±15 405±18 166±10**

2. АсАт 1 410±12 390±15 418±29

н/моль/с'л 2 374±25 401±38 387±30

3 450±31 745±25 АЮ±П**

3. Мочевина 1 4.1±0.6 4,2±0.6 4.5±0.5

ммоль/л 2 3.6±0,4 4,8±0.8 4.6±0.7

3 4,0±0,3 6,9±1,0 3,8±0,3*

4. Креатинин 1 48,6+3,1 62.0±5.8 63,0±6,0

мкмоль/л 2 50.2-Ы.6 69.0±6.1 67.0±4.3

3 49,4±0,2 71,3±7,4 56,7±5,0

5. Билирубин 1 7.8±1,0 8,7±1.1 9.4±1.2

мкмоль/л 2 6.5±0,8 8,5±1.0 8.3±0.8

3 7,1 ±0,8 9,2±1,2 6,5±0,7*

6. Холестерин 1 3.0±0.4 2.9±0.1 3.1 ±0.4

ммоль/л 2 4,1 ±0,3 4,3±0.6 4,4±0,7

3 4,1 ±0,4 4,5±0,7 3,9±0,4

7. Витамин А 1 0.25±0,02 0,23±0.03 0.21 ±0,03

ммоль/л 2 0.39±0,03 0,24±0.02 0.34±0,03

3 0,62±0,09 0,51 ±0,07 0,86±0,08*

8. Кальций 1 2.8±0,4 2,4±0.3 2.3±0,4

ммоль/л 2 3,0±0,3 2,5±0.3 2.6±0.3

3 3,1±0,3 2,6±0,4 3,1±0,3

9. Фосфор 1 1.5±0.2 1,2±0,1 1.2±0.1

ммоль/л 2 1.4±0.2 1,2±0.1 1.4±0.1

3 1,6±0,3 1,4±0,1 1,5±0,2

Примечание: 1 -до лечения, 2-через 7 дней посленачалалечения, 3 - через 30дней послена-

чалалечения.

Белковые фракции сыворотки крови больных телят,

с начальной стадией бронхопневмонии(ринит) __(М±ш, п—6)___

V Концен грация белковых фракций

Наименование V ч К сыворотки крови

п/п показателей в в X X Контрольная Контрольная Подопытная

а. о (здоровые) (больные) (больные)

1. Общий белок 1 67,9±0.5 56,8±0,3 55,7±0,6

г/л 2 67.2±1.2 53,4±0.4 61,2±0,7

3 66,1 ±0,1 54,2±0,8 67,6±0,6**

2. Альбумины, % 1 40.0±3.0 46,1 ±0.8 43,0±0.7

2 44,8±0,5 45,3±0,4 45,6±1,0

3 40,5±1,6 45,5±0,7 45,3±0,8

3. Альфа- 1 19,4:Ю,3 20,3±0,3 20,4±0,5

глобулины, 2 20,8±0,5 19,9±0,5 19,5±0,9

% 3 \9,тл 20,6±0,6 18,0±0,3*

4. Бета-глобулины, 1 20.5+0.5 15.2±1.3 18,4±1.1

% 2 14,7±0,5 18.1 ±0.9 17,5±0,3

3 19,5±0,4 17,8±0,4 16,0±0,2*

5. Гамма- 1 20,0±0,7 18,4±0,3 18,1±0,4

глобулины, 2 19,6±0,6 16,5±0,4 17,3±0,7

% 3 20,1 ±0,7 16,0±0,2 20, Ы 0,3*

Примечание- 1 -до лечения, 2 - через 7 дней после начала лечения, 3 - через 30 дней по-

сле начала лечения.

Что касается уровней мочевины, билирубина, креатинина в контрольной группе они повысились на 64,3%; 5,7%; 15,0%, соответственно. В подопытной же группе процент содержания мочевины, билирубина, креатинина достоверно понизились на 15,6%, 30,9% и 10,0%, соответственно (табл. 6).

Эффективность применения Витулина с растворителем № 2, в сравнении с традиционно используемыми в животноводческих хозяйствах методами терапии, представлена в таблице 8.

Как видно из таблицы, в группе телят, где применяли Витулин с растворителем № 2, из 690 больных выздоровело 671 животное (97%). Рецидив наблюдали лишь у 2,7 % (18 животных) от числа выздоровевших. Выбраковано было два животных из восемнадцати, давших рецидив. Процент выбраковки телят от всего поголовья составил 3,0% (21 голова).

Эффективность применения Витулина с растворителем № 2 при начальной стадии бронхопневмонии

№ п/п Группа животных Количество больных Выздоровело Рецидив болезни Выбраковано

Кол-во животных % Кол-во животных % От числа животных, давших рецидив От общего количества больных

Кол-во животных % Кол-во животных %

1 Контрольная (с применением антибиотиков) 654 512 78,3 71 13,9 52 73,2 194 29,7

2 Подопытная (с применением Вигулина-В) 690 671 97,2 18 2,7 2 11,1 21 3,0

В группе телят с использованием современных антибиотиков широкого спектра действия из 654 голов выздоровело 512 (78%). Рецидив наблюдали у семидесяти одного животного (13,9%). Из них было выбраковано пятьдесят две головы, а от всего поголовья больных животных (654 гол.) - сто девяносто четыре телёнка (29,7%).

Таким образом, активную монотерапию Витулином следует проводить в течение месяца. Это необходимо для полного восстановления естественной резистентности организма больных животных и завершения воспалительного процесса без применения дорогостоящих отечественных и зарубежных антибиотиков и других лекарственных препаратов, а, кроме того, для предотвращения возможного перехода ринита в серозно-катаральную форму.

Применение Витулина и Тулимкара для лечения больных телят, с серозно-катаральной бронхопневмонией

В племенных животноводческих хозяйствах России при энзоотии респираторных вирусных болезней серозно-катаральная форма бронхопневмонии регистрируется наиболее часто. Причиной её широкого распространения являются следующие факторы:

а) высокая вирулентность ассоциированных вирусно-бактериальных возбудителей;

б) наличие выраженных вторичных иммунодефицитных состояний у телят, особенно второго и третьего возрастных критических периодов жизни;

в) частые случаи рецидивов и осложнений при лечении начальной стадии бронхопневмонии;

г) слабая эффективность используемых антибактериальных препаратов.

Перед лечением животных проводили их комплексное обследование. При клиническом осмотре выявляли характерные признаки, свойственные респираторным вирусным болезням, особенно для широко распространённого инфекционного ринотрахеита - угнетённое состояние, повышение температуры тела до 41,5°С, гиперемия слизистых оболочек носа и носоглотки, обильные серозно-слизистые выделения из носовой полости, пенистое слюноотделение и сухой болезненный кашель.

Наличие воспалительного процесса подтверждалось ускорением СОЭ, понижением гемоглобина, снижением количества эритроцитов и лейкоцитозом. Важным дигностическим тестом было определение качественного состава микрофлоры бронхиального секрета. При обнаружении патогенных возбудителей (Staph. aureus, Str. pneumoniae, Past, multocida и др.) диагноз подтверждался.

Больным телятам подопытной группы назначали Витулин и Тулимкар в дозе каждого по 0,25 мг/кг массы. Перед применением их разводили растворителем №2 и вводили внутримышечно сочетанно (из одного шприца) в течение четырнадцати дней ежедневно, двукратно, а в последующие 16 суток - однократно через день. Курс лечения составлял 30 дней.

Цель - не допустить дальнейшего развития болезни, образования в дыхательных путях слизистых пробок и перехода серозно-катаральной бронхопневмонии в гнойно-катаральную форму течения болезни.

В контрольной группе использовали антибиотик широкого спектра действия энроксил и противовирусный препарат миксоферон (согласно наставлениям). В обеих группах дополнительно применяли симптоматические средства.

Эффективность проведённого лечения оценивали по нормализации основных клинических показателей, общего анализа крови, отсутствию патогенной микрофлоры при бактериологическом исследовании бронхиального экссудата, повышению уровня эндогенного гамма-интерферона, отсутствию рецидивов болезни и осложнений.

Через неделю от начала лечения наблюдали положительные изменения в клинических показателях (температура, пульс, дыхание) у животных обеих групп, хотя в контрольной группе, под действием современных антибиотиков широкого спектра действия, они наступали несколько раньше, по сравнению с подопытной (2±1 сутки, но различия в показателях были недоставерны, Р>0,05).

При изучении общего анализа крови животных подопытной и контрольной групп после недельного лечения было установлено: снижение СОЭ на 20,0% и 7,1%; увеличение гемоглобина на 9,3% и 3,5 %; увеличение количества эритроцитов на 17,5% и 1,3% и снижение количества лейкоцитов на 29,5% и 10,1%, соответственно, по сравнению с исходными данными.

В это время из бронхиального секрета больных телят подопытной группы был выделен Str. pneumoniae, в контроле - Str. pneumoniae и Past. Multocida.

Через две недели после начала лечения в подопытной группе отмечали тенденцию к нормализации основных показателей крови: снижение СОЭ до 0,80 ± 0,20 мм/час, уменьшение лейкоцитов до 6,68 ± 0,45 тыс/ мкл; увеличение количества гемоглобина до 8,34 ± 0,42 г/л млн/мкл, в кон-

БИБЛКОТЕКА ; СЛстербург J ОЭ И» ИТ ]

троле они изменялись незначительно.

При бактериологическом изучении бронхиального секрета телят в подопытной группе микрофлора обнаружена не была, тогда как в контрольной был выделен Str. pneumoniae, что свидетельствовало о незавершённости воспалительного процесса в верхнем отделе дыхательных путей у животных контрольной группы.

Через три недели результаты проведённых исследований показали нормализацию основных клинических показателей телят подопытной группы, тогда как в контрольной наблюдали рецидив болезни у двух животных. В течение недели они были выбракованы.

При анализе интерферонограмм следует отметить статистически достоверное увеличение гамма-интерферона у животных подопытной группы (Р < 0,001) (рис. 12).

_____Рис. 12

Уровень интерферона в сыворотке крови телят больных серозно-катаральной бронхопневмонией

Средние величины биохимических показателей, имеющих важное значение при оценке эффективности проведённого лечения, представлены в таблицах 9, 10.

Из таблиц видно, что в контрольной группе, где животные получали антибиотики, наблюдали понижение общего белка, гамма-глобулинов на 3,8% и 14,0%, соответственно, и повышение альфа-глобулинов на 6,0%, а бета-глобулинов - на 5,0% (табл. 10). Повысилась концентрация мочевины на 43,7%, холестерина на 48,3%, крсагинина на 29,9% (табл. 9).

В то же время в подопытной группе наблюдали достоверное повышение концентрации общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов на 25,3%; 7,8%; 13,4%, соответственно (табл. 10). Понизились показатели мочевины, билирубина, креатинина на 26,5%; 65,0%; 11,1%, соответственно, то есть отмечали тенденцию к нормализации функции печени и обменных процессов в организме животных (табл. 9).

Таблица 9

Биохимические показатели сыворотки крови больных телят, с серозно-катаральной бронхопневмонией

(М±т, п=6)

т Величина показ а т е л е й

№ Наименование г

п/п показателей *

'й я, Контрольная Контрольная Подопытная

о (здоровые) (больные) (больные)

1. АлАт 1 140±18 182±16 190±19

н/моль/с-л 2 171±16 249±18 189±18

3 179±14 528±20 171±25**

2. АсАт 1 42Ш5 458±19 465±28

н/моль/с-л 2 400±20 501±25 493±21

3 481±22 898±10 502±26**

3. Мочевина 1 4,0±0,6 4,8±0.7 4,9±0,7

ммоль/л 2 3,5±0,4 6,2±0,9 6,3±0,7

3 3,9±0,5 6,9±0,8 3,6±0,3**

4. Билирубин 1 7,811,3 9.9±1.2 ЮДЫ.З

мкмоль/л 2 6.5±0.9 8,9±0,7 8.7±0.6

3 7,2±0,6 9,8±1Д 6,5±0,5**

5. Холестерин 1 3,1 ±0,5 3,1 ±0,5 3,2±0,4

ммоль/л 2 4.2±0.6 4.7±0.7 4,5±0,6

3 4,2±0,5 4,6±0,6 3,9±0,3

6. Креатинин 1 48.6:14.0 66.4±2,4 67,5±3,6

мкмоль/л 2 56,2±1,6 72,8±1,9 78,5±1,8

3 53,4±0,1 86,3±1,7 60,0±1,4**

7. Витамин А 1 0,')5±0,03 0,24±0,02 0,23±0,03

ммоль/л 2 0,39±0,02 0,25±0,03 0,35±0,03

3 0,65±0,03 0,50±0,08 0,78*0,05**

8. Кальций 1 2,8±0,4 2,6±0,4 2,4±0,3

ммоль/л 2 2,5±0,3 1,9±0,3 2,2±0,2

3 2,9±0,3 2,0±0,3 2,7±0,3

9. Фосфор 1 1,5±0,2 1,0±0,1 0,8±0,1

ммоль/л 2 1.4±0.2 0.8±0.1 0,9±0,1

3 1,5±0,3 0,9±0,1 1,3±0,2

Примечание 1 - до лечения, 2 - через 7 дней после начала лечения, 3 - через 30 дней после на-

чала лечения.

Белковые фракции сыворотки крови больных телят, с серозно-катаральной бронхопневмонией. (М±т, 11=6)_

Концентрация белковых фракций

№ Наименование « Ч в сыворотки крови

п/п показателей о Контрольная Контрольная Подопытная

и (здоровые) (больные) (больные)

1. Общий белок 1 67,9±0,5 54.9±1,4 53.3±1.3

г/л 2 67.2±1.2 51.2±1.2 64.1±1.3

3 66,1±0,1 52,8±1,2 66,8±0,9*

2. Альбумины, % 1 40,0±3,0 44,9±0,8 44,7±0.6

2 44,8±0,5 44,8±1,0 45,4±0,4

3 40,5±1,6 45,2±0,3 48,2±0,4*

3. Альфа- 1 19,4±0,3 19,9±1,0 20,0±1.0

глобулины, % 2 20,7±0,5 20.3±0.6 19.9±0.7

3 19,7±0,2 21,1±0,4 16,9±0,8**

4. Бета-глобулины, 1 20,6±0,5 18,0±0,7 18,2±0,5

% 2 14,7±0,5 18,5±0,7 18,6±0,4

3 19,5±0,4 18,9±0,8 15,4±0,3*

5. Гамма- 1 20,0±0,7 17.1 ±0.7 17.1±0.6

глобулины, % 2 19,6±0,6 16,3±0,6 16.0±0.3

3 20,1 ±0,7 14,7±0,8 19,4±0,6*

Примечание: 1 -до проведения лечения, 2 - через 7 дней после начала лечения, 3 - через 30 дней после начала лечения.

При анализе полученных данных было выявлено преимущество сочетанного применения Витулина и Тулимкара перед традиционно используемыми в хозяйствах методами терапии (антибиотики, противовирусные препараты, симптоматические средства). Иммуномодулирующие препараты обеспечивали более высокий процент сохранности животных подопытной группы (95%) по сравнению с конгролем (88%) и значительное снижение рецидивов болезни - 2% и 13%, соответственно (Р< 0,01) (табл. 11).

Эффективность применения Витулина-В и Тулимкара при лечении больных телят, с серозно-катаральной бронхопневмонией

№ п/п Группа животных Количество больных Выздоровело Рецидив болезни Выбраковано

Кол-во животных % Кол-во животных % От числа животных, давших рецидив От общего количества больных

Кол-во животных % Коч-во животных %

1 Контрольная (с применением антибиотиков) 95 84 88,4 12 14,3 12 100 23 24,2

2 Подопытная (с применением Витулина) 94 91 96,8 2 2,2 2 100 5 5,3

Таким образом, при использовании иммуномодулирующих препаратов Ви-тулина с растворителем № 2 и Тулимкара были отмечены положительные процессы нормализации обмена веществ, антитоксической функции печени, увеличение концентрации витамина А, что способствовало повышению естественной резистенции организма животных, и их полному клиническому выздоровлению при респираторных вирусно-бактериальных болезнях.

Важным направлением полученных результатов исследований является то, что при иммунотерапии больных животных подопытной группы полностью исключалось использование антибактериальных препаратов отечественного и зарубежного производства, что является мощным средством профилактики появления антибиотикорезистентных штаммов патогенных микроорганизмов, циркулирующих в хозяйстве, а также возможности получения высококачественной продукции - молока и мяса.

РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Иммуномодулирующий препарат Витулин используется для профилактики и монотерапии респираторных вирусных болезней телят в животноводческих хозяйствах.

2. Иммуномодулирующий препарат Тулимкар используется для коррекции вторичных иммунодефицитных состояний организма и для профилактики возможного запуска опухолевой трансформации клеток после проведения сложных полостных операций, связанных с удалением доброкачественных и злокачественных опухолей.

3. Разработаны схемы и дозы применения иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики респираторных вирусных болезней телят. Оптимальная доза каждого составляет 0,5 мг/кг массы. Перед использованием они разбавляюгся растворителем № 1. При сочетанном применении их вводят через двое - четверо суток в течении 20-40 дней в зависимости от эпизоотической ситуации в хозяйстве.

4. Разработаны схемы и дозы применения иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для лечения больных телят с респираторными вирусными болезнями.

5. Разработаны схемы и дозы применения Витулина и Тулимкара для профилактики и лечения собак при стафилококкозе и папилломатозе. Оптимальная доза Витулина составляет 0,5 мг/кг массы тела, а сочетанное применение Виту-лина и Тулимкара - по 0,25 мг/кг массы тела каждого препарата. Перед применением их необходимо разводить растворителем № 2.

6. Иммуномодулирующий препарат Витулин, обладает целым рядом уникальных свойств, по фармакологической активности и механизмам действия значительно отличается от имеющихся иммунологически активных средств и может быть рекомендован к широкому использованию в ветеринарной практике.

7. Иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар используются для предотвращения постоперационных осложнений, снижения уровня интоксикации и купирования воспалительных процессов в организме и при инфекцион-но-деструктивных процессов в костной ткани.

8. Материалы предклинических испытаний препарата Витулин с растворителями № 1 и № 2 подготовлены для представления в Фармкомитет МЗРФ на предмет разрешения их клинических испытаний в качестве иммуномодулирую-щих средств.

ВЫВОДЫ

1. На основе продуктов пчеловодства и экстрактов из растений семейства сложноцветных (Оэшрсвкае), астровых (^егасеае) и барбарисовых (ВегЬеп(Засеае) разработана технология получения иммуномодулирующих препаратов серии Витулин (Витулин, Витулин -А, Витулин -В, Витулин -С, Виту-лин -Б, Витулин -Е) и Тулимкар, обладающих выраженным иммуномодули-рующим действием и предназначенных для профилактики и лечения патологии имунной системы при инфекционно-воспалительных процессах.

Для парэнтерального введения Витулина и Тулимкара созданы два растворителя (№ 1 и № 2), содержащие производные циклопентаноидных монотерпенов, усиливающие иммуномодулирующее действие препаратов, их антимикробную и антигрибковую активность. Получено 7 патентов на изобретение.

2. Иммуномодуляторы серии Витулин индуцируют при парэнтеральном введении эндогенный гамма-интерферон, титр которого не выходит за пределы эволюционно закреплённого оптимума.

3. В процессе приготовления препаратов серии Витулин флавоноидные фракции растений, находящиеся в гликозидированном виде, ферментируются до агликонов. Образующиеся при этом радикалы обладают бактериостатическим действием в отношении грамотрицательных и грамположигельных микроорганизмов, что позволяет ограничить использование в ветеринарии антибиотиков, а следовательно и появление антибиотикорезистентных штаммов патогенных микроорганизмов.

4. Проведено комплексное изучение препаратов и их растворителей на лабораторных животных (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, дрозофилы). Показано отсутствие острой и хронической токсичности, сенсибилизирующего, резорбтивного, местно-раздражающего, мутагенного, тератогенного, эмбриотоксического, пирогенного и аллергизирующего действия. Выявлено наличие у них противовирусных, антибактериальных, противовоспалительных и антипролиферативных свойств.

5. Гистологические исследования фрагментов тканей лабораторных животных, получавших Витулин, при изучении острой и хронической токсичности свидетельствуют о формировании в организме подопытных животных иммунного ответа по гуморальному типу.

6. Изучено влияние иммуномодулятора Витулин на организм облучённых животных. Установлено радиопротективное действие препарата, что является основанием для его применения в качестве профилактического и лечебного средства при лучевой болезни.

7. Тулимкар, содержащий триоксифлавон-силибин в концентрации свыше 35 масс%, тормозит лектинининдуцированный митогенез.

8. Проведены широкомасштабные испытания иммуномодулирующих препаратов Витулина и Витулина в сочетании с Тулимкаром на домашних животных. Установлены оптимальные дозы и схемы применения препаратов для активной неспецифической иммунопрофилактики респираторных вирусных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни,

когда формирование иммунной системы ещё не завершено. Сохранность животных при их применении во время энзоотии респираторных вирусных болезней составила до 98,4%, в то время как при традиционно используемых методах профилактики - до 57,9%.

9. Препараты Витулин и Тулимкар, введённые в схему лечения телят, больных начальной и серозно-катаральной формами бронхопневмонии при респира-торно-вирусной инфекции, способствуют клиническому выздоровлению животных без рецидивов и возможных осложнений при полном исключении антибиотиков и других антибактериальных препаратов.

10. Монотерапия животных, больных респираторными вирусными болезнями, с использованием иммуномодулирующих препаратов Витулина в сочетании с Тулимкаром, нормализует основные биохимические показатели, отражающие естественную резистентность организма. При биохимических исследованиях сыворотки крови у всех животных достоверно выявлено повышение бактерицидной и лизоцимной активности, увеличение концентрации общего белка, витамина А, установлена нормализация показателей глобулиновых фракций и уменьшение количества билирубина, холестерина, креатинина, мочевины. Полученные данные свидетельствуют о восстановлении обмена веществ, повышении гепато-тропных свойств функции печени и иммунной защиты слизистых оболочек эпителия верхних дыхательных путей.

11. Наставление по применению Тулимкара и его Технические условия по производству утверждены Департаментом Ветеринарии. Аттестовано производство и налажен промышленный выпуск препарата на Щелковском биокомбинате Московской области. Тулимкар поступил в широкую продажу в ветаптеки города для лечения животных.

12. Иммуномодулирующие препараты серии Витулин обладают рядом уникальных свойств, по фармакологической активности и механизмам действия значительно отличаются от имеющихся иммунологически активных средств и являются высокоэффективными не только при профилактике и монотерапии респираторных болезней телят, обусловленных ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей, но и при инфекционно-вирусных и бактериальных болезнях собак - папилломатозе и стафилококкозе.

СПИСОК ОСНОВНЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тулев Ю.В., Дмитриев А.И., Тулева Н.П. Принцип получения экспрессных сортов пчелиного мёда и его качественные показатели//Актуальн. пробл. ве-терин. медицины: Сб. н. тр., № 127, СПб., 1997. С. 65-66.

2. Тулев Ю.В., Дмитриев А.И., Тулева Н.П. Принцип получения монофлёрного мёда из нектара растений семейства Сложноцветных и его качественные показатели// Актуальн. пробл. ветерин. медицины: Сб. н. тр., № 127, СПб.,

1997. С. 67-68.

3. Тулев Ю.В., Ковалёв С.П., Тулева Н.П. Профилактика и лечение желудочно-кишечных расстройств и заболеваний органов дыхания у новорождённых телят//Актуальн. пробл. ветерин. медицины: Сб. н. тр., № 127, СПб., 1997. С. 68-69.

4. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Фармакологическая коррекция иммунодефи-цитных состояний у коров во второй период стельности//Актуальн. пробл. ветерин. медицины: Сб. н. тр., № 127, СПб., 1997. С. 71-73.

5. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Бактериостатические свойства иммунотропных препаратов//Матер. 9 Межгос. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 1997. С. 25.

6. Тулев Ю.В., Конопатов Ю.В., Тулева Н.П. Сочетанное применение имму-нотропных препаратов при болезнях родовых путей у коров//Актуальн. пробл. ветерин. медицины: Сб. н. тр., № 127, СПб., 1997. С. 73-76.

7. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. и др. Наставление по применению препарата Ту-лим М., 2000.2 с.

8. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Наставление по применению препарата Тулимкар М., 2000. 2 с.

9. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. и др. Наставление по применению иммунотропно-го препарата Апитулим М., 2000.2 с.

10. Тулев Ю.В., Тулева Н.П., Булыгина М.В. Применение иммунотропного препарата Витулин с целью активной иммунопрофилактики при ассцииро-ванных вирусно-бактериальных болезнях телят первого возрастного перио-да//Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XIII Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2001, С. 99-100.

11. Тулев Ю.В., Тулева Н.П., Булыгина М.В. Применение иммунотропного препарата Витулин с целью активной иммунотерапии при ассциированных вирусно-бактериальных болезнях телят первого возрастного периода//Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XXIII Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2001. С. 100.

12. Тулев Ю.В., Тулева Н.П., Булыгина М.В. Применение иммунотропного препарата Витулин с целью активной иммунопрофилактики при ассцииро-ванных вирусно-бактериальных болезнях телят второго возрастного перио-да//Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XXIII Междунар. межвуз. н.- практ. конф., СПб., 2001, С. 101.

13. Тулев Ю.В., Тулева Н.П., Булыгина М.В. Применение иммунотропного препарата Витулин с целью активной иммунотерапии при ассциированных вирусно-бактериальных болезнях телят первого возрастного периода//Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XXIII Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2001. С. 102.

14. Тулева Н.П. Характеристика иммунотропных препаратов серии «Витулин». Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки. Экспресс информация - дополнение к XIV международной межвузовской конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». СПб., 2002, № 12. С. 8-9.

15. Тулева Н.П. Методические основы использования иммунотропных препаратов серии Витулин//Повышение качества учебного процесса в вузе: Ма-

тер. междунар. межвуз. н.- практ. конф., СПб, 2002. С. 27.

16. Тулева Н.П. Применение иммунотропного препарата Витулин при демоде-козе у собак//Новые вет. препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. Матер. XIV Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2002, №12. С. 34.

17. Тулева Н.П. Применение иммунотропного препарата Витулин у плохо развивающихся щенков с пониженной иммунологической реактивностью. //Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XIV Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2002. С. 112-113.

18. Тулева Н.П. Применение иммунотропного препарата Тулимкар при папил-ломатозе собак//Новые вет. препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. СПб., 2002, № 12. С. 33.

19. Тулева Н.П. Применение иммунотропных препаратов Тулим, Витулин и Ту-лимкар при аденовирусном ларинготрахеите у собак//Новые вет. препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. СПб., 2002, № 12. С. 33.

20. Тулева Н.П. Сочетанное применение иммунотропных препаратов Апитулим и Витулин при чуме шютоядных//Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XIV Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2002. С. 111-112.

21. Тулева Н.П. Сочетанное применение иммунотропных препаратов Витулин-А и Апитулим и при инфекционном гепатите у собак//Новые фармакол. средства в вегеринарии: Матер. XIV Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2002. С. 113-114.

22. Тулева Н.П. Сочетанное применение иммунотропных препаратов Тулим, Апитулим при парвовирусном энтерите у собак//Новые вет. препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. Матер. Междунар. межвуз. н.-практ. конф.,СПб., 2002, № 12. С. 35-36.

23. Тулева Н.П. Сочетанное применение иммунотропных препаратов Тулим и Витулин при стафило-коккозе у собак//Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XIV Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2002. С. 110111.

24. Тулева Н.П., Конопатов Ю.В., Пилаева Н.В. и др. Влияние Витулина на некоторые биохимические показатели крови телят//Новые вет. препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. СПб., 2002, № 12. С. 17-18.

25. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Наставление по применению Тулимкара в качестве иммуностимулирующего средства при бактериальных и вирусных болезнях телят, поросят и собак. (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000). 3 с.

26. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Тулимкар. Технические условия (ТУ 9325-00900493362-00)." (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000). 25 с.

27. Тулева Н.П. Влияние иммуномодуляторов серии Витулин при раке пищево-да/ЛгЛетаНопа! Journal on Immunorehabilitation. M., 2002. Т. 4, № 2. С. 284.

28. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Иммуномодуляторы серии Витулин//Intеrnаtiоnа1 Journal on Immunorehabilitation. M., 2002. Т. 4, № 2. С. 250.

29. Кудесов ЛА, Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Применение иммунотропного пре-

30.

31.

32.

33.

34.

35.

36.

37.

38.

39.

40.

41

42.

43

44.

45.

46.

парата Витулин при лечении телят, больных бронхопневмонией //Матер, на-учн. междунар. межвуз.конф. проф.-препод. состава, научн. сотр. и аспир. СПГАВМ. 2003. с. 25.

Тулева Н.П., Граубергер НА. Применение иммунотропного препарата Витулин при лечении хронических иммунодепрессивных состоя-ний//Предпосылки и эксперимент в науке: Матер. II Межвуз. н,- пр. конф. аспирантов и соискат. СПб., 2004, С. 46-47.

Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Опыт применения препаратов Тулим, Тулимкар и Витулин в терминальных состояниях онкологически больных собак и ко-шек//Предпосылки и эксперимент в науке: Матер. II Межвуз. н.- пр. конф. аспир. и соискат. СПб., 2004. С. 47-48.

Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Активная иммунотерапия при диссеминированном папилломатозе ротовой полости собак//Предпосылки и эксперимент в науке: Матер. II Межвуз. н.- пр. конф. аспир. и соискателей. СПб., 2004. С. 96-97. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин. Патент № 223-62-48.2004. Бюлл. №26. Юс.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин-А. Патент № 223-62-47. 2004. Бюлл. №26. 12 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин-В. Патент № 223-62-44.2004. Бюлл. № 26. 12 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин-С. Патент № 223-62-46. 2004. Бюлл. № 26. 12 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин-Е. Патент № 223-62-45.2004. Бюлл. № 26. 12 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Тулимкар. Патент № 223-62-43.2004. Бюлл. № 26. 12 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин-Б. Патент № 223-62-59. 2004. Бюлл.№ 34. Юс.

Свидетельство (на товарный знак, знак обслуживания) № 267876.Витулин. 2004. Бюлл. № 26.2 с.

Свидетельство (на товарный знак, знак обслуживания) № 267877.2004. Бюлл. № 26. 2 с.

Свидетельство (на товарный знак, знак обслуживания) № 267878.Тулим. 2004. Бюлл. № 26.2 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Профилактика субклинической формы мастита у коров в послеродовой период. Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XVI Междунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2004. С. 31. Тулева Н.П., Конопатов Ю.В., Тулев Ю.В. Роль биохимических методов исследований с целью контроля естественной резистентности крупного рогатого скота при использовании иммуномодулирующих препаратов. Методические рекомендации, СПб., 2004.16 с.

Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Применение иммуномодулирующего препарата Тулим для лечения маститов у коров. Методические рекомендации, СПб., 2004.16 с.

Тулева Н.П., Тулев Ю.В., Андреева Н.Л. Фармакологическая коррекция вто-

ричных иммунодефицигных состояний у коров во второй половине стельности и у новорождённых телят. Методические рекомендации, СПб., 2004.15с.

47. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Применение иммуномодулирующих препаратов Апитулим и Тулим для профилактики и лечения эндометритов у коров. Методические рекомендации, СПб., 2004.16 с.

48. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин, Тулим, Тулимкар и Апитулим для профилактики и лечения мелких домашних животных.Методические рекомендации, СПб., 2004.16 с.

49. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики респираторных вирусных болезней телят. Методические рекомендации, СПб., 2004. 16 с.

50. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин, Тулимкар и Тулим для лечения телят при энзоотиях респираторных вирусных болезней. Методические рекомендации, СПб., 2004.16 с.

51. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Бактериологический метод оценки эффективности применения иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар при серозно-катаральной бронхопневмонии у телят. //XVI Международная межвузовская научно-практическая конференция «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - СПб, 2004. С. 23-24.

52. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Комплекс биохимических исследований при ассоциированных вирусно-бактериальных болезнях. Международная научно-производственная конференция «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе». - СПб, 2004. С. 119-120.

53. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Профилактика пневмогастроэнтеритов у новорождённых телят. Новые фармакол. средства в ветеринарии: Матер. XVI Меж-дунар. межвуз. н.-практ. конф., СПб., 2004. С. 31-32.

54. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Иммунопрофилактика субклинических форм мастита у коров. /Молочное и мясное скотоводство, 2004. № 6. С. 39-41.

55. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Активная иммунотерапия телят, больных гнойно-катаральной бронхопневмонией. //Международный вестник ветеринарии. 2004. № 1.С. 50-58.

56. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Активная неспецифическая иммунопрофилактика респираторных вирусных болезней телят первого и второго критических периодов жизни//Ветеринария. 2004. № 8. С. 18-20.

57. Тулева Н.П., Тулев Ю.В. Экономическая эффективность проведения активной неспецифической иммунопрофилактики респираторно-вирусных болезней телят в племенных хозяйствах Центральной России. //Материалы Международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе». - СПб., 2004. С. 136-137.

58. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Профилактика субклинической формы мастита у коров в послеродовой период. // Материалы XVI международной межвузовской научно-производственной конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - СПб., 2004. С. 31.

59. Курило А.И., Тулева Н.П., Тулев Ю.В., Дегтярев М.В. Действие препарата Виту-лин на организм облученных животных. /Вестник РАСХН. 2004. №5. С. 49-50.

Подписано в печать 16.11.2004 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Усл. печ. л. 2,56. Тираж 100. Заказ № 3409.

Отпечатано в отделе оперативной полиграфии НИИХ СПбГУ с оригинал-макета заказчика. 198504, Санкт-Петербург, Старый Петергоф, Университетский пр., 26.

»24992

Актуальность темы

Важной проблемой для медицины и ветеринарии являются респираторные болезни, в том числе бронхопневмонии, обусловленные ассоциацией вирусов, бактерий, простейших и грибов.

Во всём мире ежегодно заболевает огромное количество людей.

В США в течение года регистрируют до 4 млн. заболевших, из которых 1 млн. требует госпитализации (цит. по Новикову Ю.К., 2002).

В Российской Федерации ежегодно болеет около 1,5 млн. человек (Чуча-лин А.Г.,2001).

Особую тревогу вызывает перманентная тенденция к нарастанию смертности от респираторных болезней (Иллек Я.Ю и др., 1996; 2000; Воробьев К.В. и др., 2000; Гранитов В.М., 2001; Камышенцев М.В. и др., 2002). По данным Американского торакального общества в США смертность от пневмонии достигает 18-20%; Европейское респираторное общество приводит данные в пределах 10%. В отчете Британского торакального общества врачей смертность от пневмонии с тяжелым течением превышает 30% (цит. по Чучалину А.Г., 2001).

Сложная ситуация наблюдается и в ветеринарии. Бронхопневмония, совпадающая с возрастным иммунодефицитом телят, является широко распространенным заболеванием на европейском и американском континентах (Уса-ченко А.А. и др., 1991; Карпуть И.М., 1993; Подкопаев В.М. и др., 1985; Куде-сов JI.A., 2001; Мс Geech D.J. et al., 1986; Rotermund H., 1988; Kob E., 1989; Proud D. et al., 1990; Todor 1. et al., 1993; Losinger W.C.,1996). Энзоотии бронхопневмонии поражают до 50% нарождающихся животных и являются причиной потери до 40% от числа заболевших с учетом гибели и вынужденного убоя

Высокопоясный А.И. и др., 2000).

Многообразие различных респираторных вирусов и их многочисленных серотипов создаёт условия для возникновения спонтанных инфекций (Сю-рин В.Н. и др., 1991).

В племенных хозяйствах переболевшие телята в дальнейшем не пригодны для воспроизводства стада. У взрослых особей скрытое вирусоносительство возбудителей инфекционного ринотрахеита и аденовирусной инфекции порождает целый ряд проблем. Одновременно с поражением эпителиальных клеток верхних дыхательных путей они вызывают патологию половых органов. В таких хозяйствах наблюдаются массовые аборты, эндометриты и маститы. Пораженный эпителий верхних дыхательных путей дает возможность активации сапрофитной и условно-патогенной микрофлоры респираторного тракта и проникновению в легкие микроорганизмов, находящихся в воздухе. Таким образом, вирусы, нарушая защитный барьер слизистых, способствуют их колонизации бактериальными патогенами, поэтому любая инфекция в организме человека или животного развивается чаще всего не в моно-, а в ассоциированном t варианте с другими (Домникова Н.П. и др., 2001; Новиков Ю.К., 2002; Таточен-ко В.К.1994; 2002).

Опасным является вирусоносительство у телят в первый возрастной критический период, когда колостральный иммунитет находится на стадии затухания. У данных животных выделение вирусов происходит без проявления клинических признаков болезни, что способствует широкому распространению возбудителей и массовому перезаражению.

Для лечения больных бронхопневмонией в настоящее время используются многочисленные антибиотики. Создано уже более 30 тысяч наименований и постоянно создаются их новые модификации. Но, несмотря на это, количество болезней не уменьшается. Падёж телят остается очень высоким и по Российской Федерации составляет свыше 2 млн. голов в год, что наносит колоссальный экономический ущерб.

В медицине и ветеринарии в подавляющем большинстве случаев анти-биотикотерапия назначается на эмпирической основе, которая не всегда приносит должный терапевтический эффект (Конопелько П.Я. и др., 1990; Синопальников А.И. и др., 1999; Навашин С.М., 1999; Домникова Н.П. и др., 2001; Алек-санян JI.A,2001; Koller M.N. et al, 1995; Vincent J.L., et al., 1995; Fagon J.Y., et al., 1996; Dewan N.A., et al., 2000).

Это становится вполне объяснимым, если учесть, что на вирусы антибиотики вообще не оказывают губительного действия. Микроорганизмы же быстро адаптируются и в дальнейшем беспрепятственно вызывают бактериальные осложнения. Кроме того, при длительном применении антибиотиков происходит их кумуляция в организме животных и человека, что способствует возникновению вторичного иммунодефицитного состояния.

Беспокоит и факт наличия антибиотиков в мясе и молоке, выпускаемых в Российской Федерации (до 40%). Поэтому учёные, как ветеринарии, так и медицины всё чаще стали говорить об экологичности препаратов (Аликин Ю.С. и ДР., 1996).

Поиск средств защиты от ассоциированного комплекса вирусно-бактериальных возбудителей, вызывающих бронхопневмонию, ведётся в трех направлениях:

1) пассивной иммунизации специфическими гипериммунными сыворотками;

2) активной иммунизации живыми ослабленными или инактивированны-ми вакцинами;

3) повышении неспецифической резистентности организма введением иммунотропных препаратов.

Иммунизация телят специфическими гипериммунными сыворотками требует значительных затрат и времени. Кроме того, они могут быть контамини-рованы многочисленными возбудителями, в частности, вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Пассивная иммунизация может быть преодолена высоко вирулентными вирусами инфекционного ринотрахеита в ассоциации с аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекциями.

Применение живых или инактивированных вакцин не предотвращает ла-тенции вирулентных вирусов в организме животных (Сюрин В.Н. и др., 1991).

Использование многочисленных иммунотропных препаратов также представляет серьезную проблему. Так, длительное применение иммуностимуляторов, иммуномодуляторов или иммунокорректоров вызывает активацию Т- и В-клеточного иммунитета. Это может привести в дальнейшем к запуску опухолевой трансформации клеток, механизм которой тот же, что и активация клеток иммунной системы (Агеенко А.И., 1994).

Поэтому, на современном этапе науки для профилактики и лечения респираторных болезней, необходимы иммунотропные препараты с направленным действием: противовирусным, антимикробным, противовоспалительным и не вызывающих запуска опухолевой трансформации клеток даже при их длительном парэнтеральном введении.

Цель и задачи исследований

Целью диссертационной работы является разработка комплекса иммуно-модулирующих препаратов направленного действия: противовирусного, антибактериального, противовоспалительного, антипролиферативного, а также способных индуцировать в организме образование эндогенного гамма-интерферона.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать иммуномодулирующие препараты, используя физические, химические, биологические методы очистки и концентрации активных веществ, обладающие свойствами повышать естественную резистентность организма.

2. Получить иммуномодулирующие препараты с использованием естественных компонентов, индуцирующих эндогенный гамма-интерферон и оказывающих бактериостатическое действие в отношении Гр+, Гр- микроорганизмов.

3. Провести исследование полученных иммуномодулирующих препаратов и растворителей № 1 и № 2 на лабораторных животных с целью определения острой и хронической токсичности, мутагенного, тератогенного, эмбрио-токсического, пирогенного и аллергизирующего действия.

4. Изучить влияние созданных иммуномодулирующих препаратов на активацию иммунного ответа с использованием лабораторных животных.

5. Изучить на домашних животных профилактическое и терапевтическое действие препаратов серии Витулин и Тулимкар при инфекционно-воспалительных и вирусно-бактериальных болезнях.

6. Изучить влияние разработанных иммуномодулирующих препаратов на естественную резистенстность организма телят при активной неспецифической профилактике и монотерапии бронхопневмонии в период энзоотии респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

7. Разработать промышленную технологию выпуска иммуномодулирующих препаратов и растворителей для них.

8. Внедрить разработанный комплекс иммуномодулирующих препаратов в ветеринарную практику для иммунопрофилактики и монотерапии инфекци-онно-воспалительных болезней сельскохозяйственных и домашних животных.

Научная новизна работы:

1. Разработана серия иммуномодулирующих препаратов Витулин: Витулин, Витулин-А, Витулин-В, Витулин-С, Витулин-D, Витулин-Е и Тулимкар, имеющих патентную чистоту в отношении развитых стран: США, Великобритании, Франции, Германии, Японии.

2. Изучено влияние разработанных препаратов на организм лабораторных животных (мыши, крысы, кролики, морские свинки, собаки, дрозофилы). Показана безвредность препаратов и их влияние на формирование в организме животных иммунного ответа по гуморальному типу.

3. Впервые созданы иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар, обладающие при инфекционно-воспалительных процессах направленным действием: противовирусным, антибактериальным, противовоспалительным, антипролиферативным.

4. Впервые с применением иммуномодулирующего препарата Витулин в условиях России появилась возможность коррекции неспецифических факторов защиты организма животных в период энзоотии респираторных вируснобактериальных болезней.

5. Разработаны методологические основы активной неспецифической иммунопрофилактики для сохранения племенного молодняка при энзоотиях респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

6. Впервые с использованием иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар появилась возможность проводить активную неспецифическую иммунопрофилактику животных в период энзоотии респираторных вирусно-бактериальных болезней.

7. Впервые разработаны эффективные и экономичные схемы и дозы применения препаратов Витулин и Тулимкар для массового проведения монотерапии ассоциированных вирусно-бактериальных болезней телят. При этом полностью исключается использование отечественных и зарубежных антибактериальных препаратов, экзогенного интерферона, гамма-глобулинов, сывороток крови реконвалесцентов.

8. Разработана эффективная и экономичная схема иммунопрофилактики и монотерапии широко распространённых болезней собак - папилломатоза и стафилококкоза.

Теоретическая и практическая значимость работы:

На основании проведённых исследований на домашних животных дано научное обоснование эффективного сочетанного применения иммуномодулирующих препаратов - Витулина с растворителем № 1 и Тулимкара для профилактики респираторных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни при энзоотии бронхопневмонии, обусловленной ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей, в животноводческих хозяйствах России.

Впервые дано научное обоснование эффективного применения иммуномодулирующих препаратов Витулина с растворителем № 2 и Тулимкара для лечения телят, больных респираторными болезнями, вызванными ассоциацией вирусов и бактерий, в животноводческих хозяйствах России.

В результате проведённых экспериментальных исследований дано научное обоснование эффективного применения иммуномодулирующих препаратов - Витулина и Тулимкара для профилактики и лечения па-пилломатоза и стафилококкоза у собак.

Разработана нормативно-техническая документация для промышленного выпуска иммуномодулирующих препаратов серии Витулин для профилактики и лечения домашних животных.

Практическая ценность:

Разработаны методы применения иммуномодулирующих препаратов серии Витулин и Тулимкар в ветеринарной практике.

Показана высокая эффективность препаратов для профилактики бронхопневмонии телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни при энзоотиях респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

Установлена высокая эффективность монотерапии телят при начальной и серозно-катаральной формах бронхопневмонии, вызванных ви-русно-бактериальными возбудителями.

Установлена высокая эффективность сочетанного применения иммуномодулирующих препаратов при лечении стафилококкоза и диссе-минированного папилломатоза ротовой полости собак.

Доказана возможность ограниченного применения антибиотиков в медицине и ветеринарии при использовании иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар, обладающих противовирусным, антибактериальным, противовоспалительным, антипролиферативным действием и корректирующим Т- и В-клеточный иммунитет.

Реализация результатов исследования.

Основные научные положения диссертационной работы и предложения производству вошли в:

1. «Наставление по применению Тулимкара в качестве иммуностимулирующего средства при бактериальных и вирусных болезнях телят, поросят и собак». (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000).

2. Тулимкар. Технические условия (ТУ 9325-009-00493362-00). (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000).

3. «Временное наставление по применению иммуномодулирующего препарата Витулин с растворителями № 1 и № 2 для иммунопрофилактики и монотерапии животных». (Утверждены Управлением ветеринарии Ленинградской области и Учёным советом ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины», 2002).

4. Пять методических рекомендаций. (Утверждены на Научно-координационном совете по животноводству и ветеринарии Северо-Западного НЦ Рос-сельхозакадемии, 2004): 1) «Фармакологическая коррекция вторичных имму-нодефицитных состояний коров во второй половине стельности и у новорождённых телят». 2) «Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики респираторных вирусных болезней телят». 3) «Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для лечения респираторных вирусных болезней телят». 4) «Применение иммуномодулирующих препаратов: Витулин, Тулимкар, Тулим и Апитулим для профилактики и лечения болезней мелких домашних животных». 5) «Роль биохимических методов исследований для контроля естественной резистентности телят при использовании иммуномодулирующих препаратов».

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований доложены и обсуждены: на ежегодных научных конференциях Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1985 -2004); на Юбилейной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов, посвященной 70-летию Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1990); на VIII Межгосударственной научно-практической конференции: «Новые фармакологические средства в ветеринарии», посвященной 75-летнему юбилею кафедры фармакологии Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1996); на научно-производственной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки (Санкт-Петербург, 1998); на XIII Международной научно-практической конференции: «Новые фармакологические средства в ветеринарии (Санкт-Петербург, 2001); на Международной научно-производственной конференции по акушерству, гинекологии и биотехнологии репродукции животных, посвященной 100-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РСФСР, доктора ветеринарных наук, профессора И.А. Бочарова (Санкт-Петербург, 2001); на XIV Международной межвузовской научно-практической конференции: «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2002); на Международной межвузовской научно-методической конференции «Повышение качества учебного процесса в вузе» (Санкт-Петербург, 2002); на XIV Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2002 г.); на Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии; ст. «Влияние иммуномодуляторов серии Витулин при раке пищевода» (Сингапур, 2002 г., с. 284).; на Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии; ст. «Иммуномодуляторы серии Витулин» (Сингапур, 2002 г., с. 250).; на Межвузовской конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, 2003 г.); на XV Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические препараты» (Санкт-Петербург, 2003 г.); на II Межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей (Санкт-Петербург, 2004 г.); на XVI Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические препараты» (Санкт-Петербург, 2004 г.).

Личный вклад диссертанта. Все исследования по разработке препаратов, схемам и дозам их применения, интерпретация результатов и публикации выполнены соискателем самостоятельно.

Публикации результатов проведённых исследований. Основные научные результаты, включенные в материалы диссертации, опубликованы в 59 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 272 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц, 74 рисунка, 1 фотографию. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов и рекомендаций. Список литературы включает 301 работу отечественных и 191 зарубежных авторов.

выводы

1. На основе продуктов пчеловодства и экстрактов из растений семейства сложноцветных (Compositae), астровых (Asteraceae) и барбарисовых (Berberidaceae) разработана технология получения иммуномодулирующих препаратов серии Витулин (Витулин, Витулин-А, Витулин-В, Витулин-С, Виту-лин-D, Витулин-Е) и Тулимкар, обладающих выраженным иммуномодули-рующим действием и предназначенных для профилактики и лечения патологии иммунной системы при инфекционно-воспалительных процессах. Получено 7 патентов на изобретение.

Для парэнтерального введения Витулина и Тулимкара созданы два растворителя (№ 1 и № 2), содержащие производные циклопентаноидных монотерпенов, усиливающие иммуномодулирующее действие препаратов, их антимикробную и антигрибковую активность.

2. Иммуномодуляторы серии Витулин индуцируют при парэнтеральном введении эндогенный гамма-интерферон, титр которого не выходит за пределы эволюционно закреплённого оптимума.

3. В процессе приготовления препаратов серии Витулин флавоноидные фракции растений, находящиеся в гликозидированном виде, ферментируются до агликонов. Образующиеся при этом радикалы обладают бактериостатиче-ским действием в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, что позволяет ограничить использование в ветеринарии антибиотиков, а следовательно и появление антибиотикорезистентных штаммов патогенных микроорганизмов.

4. Проведено комплексное изучение препаратов и их растворителей на лабораторных животных (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, дрозофилы). Показано отсутствие острой и хронической токсичности, сенсибилизирующего, местно-раздражающего, мутагенного, тератогенного, эмбриотокси-ческого, пнрогенного и аллергнзнрующего действия. Выявлено наличие у них противовирусных, антибактериальных, противовоспалительных и антипроли-феративных свойств.

5. Гистологические исследования фрагментов тканей лабораторных животных, получавших Витулин, при изучении хронической токсичности свидетельствуют о формировании в организме подопытных животных иммунного ответа по гуморальному типу.

6. Изучено влияние иммуномодулятора Витулин на организм облучённых животных. Установлено радиопротективное действие препарата, что является основанием для его применения в качестве профилактического и лечебного средства при лучевой болезни.

7. Тулимкар, содержащий 3-окси-флавон-силибин в концентрации свыше 35 масс%, тормозит лектинининдуцированный митогенез.

8. Проведены широкомасштабные испытания иммуномодулирующих препаратов Витулина и Витулина в сочетании с Тулимкаром на домашних животных. Установлены оптимальные дозы и схемы применения препаратов для активной неспецифической иммунопрофилактики респираторных вирусных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни, когда формирование иммунной системы ещё не завершено. Сохранность животных при их применении во время энзоотии респираторных вирусных болезней составила до 98,4%, в то время как при традиционно используемых методах профилактики - до 57,9%.

9. Препараты Витулин и Тулимкар, введённые в схему лечения телят, больных начальной и серозно-катаральной формами бронхопневмонии при респираторно-вирусной инфекции, способствуют клиническому выздоровлению животных без рецидивов и возможных осложнений при полном исключении антибиотиков и других антибактериальных препаратов.

10. Монотерапия животных, больных респираторными вирусными болезнями, с использованием иммуномодулирующих препаратов Витулина в сочетании с Тулимкаром, нормализует основные биохимические показатели, отражающие естественную резистентность организма. При биохимических исследованиях сыворотки крови у всех животных достоверно выявлено повышение бактерицидной и лизоцимной активности, увеличение концентрации общего белка, IgA, витамина А, установлена нормализация показателей глобулиновых фракций и уменьшение количества билирубина, холестерина, креатинина, мочевины. Полученные данные свидетельствуют о восстановлении обмена веществ, повышении гепатотропных свойств функции печени и иммунной защиты слизистых оболочек эпителия верхних дыхательных путей.

11. Иммуномодулирующие препараты серии Витулин обладают рядом уникальных свойств, по фармакологической активности и механизмам действия значительно отличаются от имеющихся иммунологически активных средств и являются высокоэффективными не только при профилактике и монотерапии респираторных болезней телят, обусловленных ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей, но и при инфекционно-вирусных и бактериальных болезнях собак - папилломатозе и стафилококкозе.

АКТ - ЗАКЛЮЧЕНИЕ о внедрении в производство иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики и лечения инфекционно-воспалительных процессов у мелких домашних животных.

Иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар разработаны на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО "Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины" (разработчики -доценты кафедры Тулева Н.П. и Тулев Ю.В.).

Препараты представляют собой безбелковые фракции специальных и экспрессных сортов пчелиного меда, полученного из нектара растений нескольких семейств: "Сложноцветные", "Астровые", "Барбарисовые".

Испытания препаратов проводили на базе городской ветеринарной клиники "Ветпрофи" с 2000 по 2004 г.г.

Витулин и Тулимкар использовали для лечения больных животных (собаки, кошки - в количестве 475 голов) с различными инфекционно-воспалительными процессами, доброкачественными и злокачественными опухолями. Обладая бактериостатическими и противовоспалительными свойствами, они с высоким положительным эффектом применялись для лечения больных животных с постоперационными осложнениями после проведения тяжёлых полостных операций, при инфекционнодеструктивных процессах в костной ткани, а также инфекционных болезнях.

При стафилококкозе собак, после двух курсов проведения монотерапии Витулином, положительный эффект наблюдался у 95% животных. В контрольной группе, где использовали антибиотики, он не превысил 53%.

Широко испытаны препараты при диссеминированном папилломатозе ротовой полости собак. Под действием Витулина и Тулимкара эти опухоли прекращали рост и процесс регрессии начинался в первые 3 ± 1 сутки. Под наблюдением находилось 25 собак, получен 100% положительный эффект

Мы считаем, что препараты Витулин и Тулимкар обладают выраженными противовоспалительными, антипролиферативными свойствами и являются высокоэффективными при инфекционно-воспалительных процессах, бактериальных болезнях собак и кошек, при хирургических операциях для предотвращения постоперационных осложнений, для быстрого восстановления организма при проведении тяжёлых полостных операций, при хирургическом вмешательстве по поводу удаления доброкачественных и злокачественных опухолей, инфекционно-деструктивных процессах в костной ткани и других.

Ветврач клиники

Д.К.Тошина

Ветврач клиники

Н.Ю.Клименко

Ветврач клиники

Л.В.Есина

ФГОУВПО «САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ»