Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Первая отечественная кандидатная анти- ВИЧ/СПИД- вакцина: иммунологический мониторинг и испытания

ДИССЕРТАЦИЯ
Первая отечественная кандидатная анти- ВИЧ/СПИД- вакцина: иммунологический мониторинг и испытания - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Первая отечественная кандидатная анти- ВИЧ/СПИД- вакцина: иммунологический мониторинг и испытания - тема автореферата по медицине
Гудима, Георгий Олегович Москва 2009 г.
Ученая степень
доктора биологических наук
ВАК РФ
14.00.36
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Первая отечественная кандидатная анти- ВИЧ/СПИД- вакцина: иммунологический мониторинг и испытания

На правах рукописи

Гудима Георгий Олегович

2 О АВГ 2009

Первая отечественная кандидатная анти-ВИЧУСПИД-вакцина: иммунологический мониторинг и испытания

«14.00.36 - аллергология и иммунология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва, 2009 г.

003475361

Диссертация выполнена в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России Научные консультанты:

академик РАН и РАМН, доктор медицинских наук, профессор Р.М.Хаитов;

доктор биологических наук, профессор Э.В.Карамов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.А.Ярилин; доктор медицинских наук, профессор З.Г.Кадагидзе; доктор медицинских наук, профессор Л.П.Сизякина.

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН.

Защита диссертации состоится « 23 » сентября 2009 г. в 14 часов на заседани Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.017.01 в ФГБ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24, корп.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ГНЦ Институ иммунологии» ФМБА России.

Автореферат разослан «¿Я^¥ » 2009 года

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций доктор медицинских наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Пандемия ВИЧ-инфекции/СПИДа представляет собой один из величайших глобальных кризисов нашего времени и важнейшей проблемой мирового здравоохранения. Со времени выделения СПИД как самостоятельного заболевания (1981 г.) [Gottlieb, et al., 1981; Mazur et al., 1981] в мире, по оценкам ВОЗ, официально зарегистрировано около 60 миллионов ВИЧ-инфицированных человек, из них около 30 миллионов умерло от СПИДа. Ежегодно около 2,7 миллиона человек становятся инфицированными и около 2,5 миллионов умирают от этого заболевания [WHO/UNAIDS Report on the global AIDS epidemic, 2008]. По скорости прироста новых случаев ВИЧ-инфекции Россия входит в тройку лидеров (вместе со странами Юго-Восточной Азии и Африки). В 2008 году число зарегистрированных ВИЧ-инфицированных лиц в нашей стране превысило 490 тысяч человек [Информационный бюллетень Федерального центра СПИД, 2008 г.]. По оценкам экспертов ВОЗ/UNAIDS, в России общее число людей, инфицированных ВИЧ, может составлять около 930 тысяч человек [WHO/UNAIDS Report on the global AIDS epidemic, 2008].

Несмотря на огромные усилия мирового сообщества, пандемию ВИЧ-инфекции остановить не удается. ВИЧ-инфицированным требуется антиретровирусная терапия (APT) в течение всей жизни пациента. Однако APT не является средством предупреждения ВИЧ-инфекции (но препятствует передаче ВИЧ от матери к плоду) и не блокирует распространение вируса в организме человека даже в случае начала APT на ранних этапах инфекции [Fauci et al., 1998]. При этом раннее начало APT не предотвращает формирование латентного резервуара ВИЧ-инфекции. Кроме того APT, помимо тяжелых побочных эффектов препаратов, сопровождается образованием устойчивых форм вируса.

Наиболее преспективной стратегией контроля пандемии ВИЧ-инфекции/СПИДа признается создание эффективной вакцины [Хаитов P.M., 1992; Esparza J, Osmanov S., 2003; Карамов Э.В., Сидорович И.Г., Хаитов P.M., 2008]. Вакцинация является наиболее эффективной технологией здравоохранения, которая существует для контроля эпидемических инфекционных заболеваний. Применение вакцин привело к уничтожению оспы и позволило значительно приблизиться к уничтожению полиомиелита и кори. Миллионы жизней были спасены благодаря вакцинации. В этой связи для мирового сообщества в целом и для российских ученых в частности очевидна актуальность скорейшей разработки безопасной, эффективной и доступной

анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. По оценкам экспертов International AIDS Vaccine Initiative (IAVI), создание вакцины, применение которой снизило бы число новых случаев инфицирования на 20-80%, позволило бы предотвратить около 30-70 миллионов случаев инфицирования в течение 15 лет [IAVI Policy Brief, IAVI, 2006].

Эта задача тем более важна, что достоверно не выявлено случаев выздоровления при ВИЧ-инфекции (как самопроизвольного выздоровления, так и выздоровления в результате применения APT). В случае ВИЧ-инфекции/СПИДа традиционные методы получения вакцин оказались неприменимы! Фактически создание эффективной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины представляет собой комплексную научную проблему, неотделимыми составляющими которой являются фундаментальные исследования, биотехнологические разработки, лабораторные исследования и клинические испытания. Понимание механизмов защитного ВИЧ-специфического иммунного ответа в сочетании с возможностью быстро, стандартизованно и точно тестировать кандидатные вакцины в клинических испытаниях с участием добровольцев позволит разработать рациональный и успешный подход к созданию профилактических и лечебных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин [Карамов Э.В., Сидорович И.Г., Хаитов P.M., 2008; AIDS Vaccine Blueprint, 2008].

Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин имеют двойственный характер: с одной стороны, это регламентированное испытание вакцинных препаратов с участием добровольцев, а с другой - научное исследование, которое позволяет получить информацию, необходимую для понимания механизмов протективного иммунного ответа против ВИЧ и выявления коррелятов иммунной защиты, а также дает возможность отработать схемы иммунизации и провести необходимую доработку препарата. При этом организация клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, в частности, формирование когорт добровольцев, имеет дополнительные особенности и трудности по сравнению с испытаниями других вакцин [Jefferys, Harrington, 2004; Newman et al., 2004].

Важность клинических исследований как неотъемлемого компонента работ по созданию вакцин была в очередной раз подтверждена на международной конференции «AIDS Vaccine 2008» [AIDS Vaccine Blueprint 2008. Global HIV Vaccine Enterprise - IAVI, 2008]. В итоговых документах конференции подчеркивалось, что проведение клинических исследований в различных эпидемиологических условиях, в различных популяциях и и регионах, в которых циркулирует широкий спектр изолятов ВИЧ, является жизненно необходимым. Также важно поддерживать и развивать

инфраструктуру клинических испытаний, что обеспечило бы надлежащее проведение клинических исследований.

Необходимость создания вакцины против ВИЧ/СПИДа ставит перед исследователями беспрецедентно сложную задачу - получить протективный иммунный ответ на высоковариабельный патоген с помощью вакцинации при заболевании, когда не обнаружен естественный механизм выздоровления за счет потенциала собственной иммунной системы, а клетки самой иммунной системы являются мишенью инфекционного агента. Иначе говоря, требуются принципиально новые подходы к созданию вакцин. Это не только обусловливает особые сложности на этапе синтеза кандидатных препаратов, проверки их иммуногенности, но и создает большие проблемы при испытаниях таких вакцин. Известно, что весьма авторитетные международные научные коллективы потерпели неудачу именно на этапе клинических испытаний.

Таким образом, для противодействия ВИЧ-инфекции должна быть создана принципиально новая вакцина. Научные усилия и материальные ресурсы, направленные на создание вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, можно без преувеличения назвать чрезвычайными. В настоящее время около 30 кандидатных вакцинных препаратов включены в клинические испытания, проходящие в различных странах мира. К их числу относится и конъюгированная полимер-белковая рекомбинантная вакцина ВИЧРЕПОЛ -единственная на настоящий момент российская кандидатная анти-ВИЧ/СПИД-вакцина, которая успешно прошла доклинические исследования и была включена в клинические испытания I фазы, которые и стали предметом настоящего исследования.

«ВИЧРЕПОЛ» представляет собой оригинальный вакцинный препарат нового поколения. Он испытан в лабораторных исследованиях на животных, но его действие у человека не изучено. Клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ» имеют важное значение для формирования методической базы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России, так как ранее в нашей стране испытаний вакцин этой группы не проводилось. Зарубежный опыт испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин может быть использован лишь частично, так как вакцина «ВИЧРЕПОЛ» и принцип ее конструирования не имеют аналогов в мире. Учитывая, что в России вслед за кандидатной вакциной «ВИЧРЕПОЛ» готовятся к включению в клинические испытания и другие кандидатные вакцины, необходимость формирования комплекса приемов и методов («инфраструктуры») для оценки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин приобретает особую актуальность и важность.

Настоящая работа посвящена важнейшей части исследований по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин - клиническим испытаниям.

Таким образом, актуальность настоящей работы определяется важностью разработки отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины, необходимостью исследования безопасности и иммуногенности оригинальной отечественной конъюгированной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в клинических испытаниях, необходимостью формирования в России системы испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Цели работы:

1. Обобщение и анализ международного опыта проведения клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и с учетом его - разработка рекомендаций по проведению клинических испытаний кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ», в том числе подготовка пакета нормативной документации для проведения I фазы клинических испытаний.

2. Организация и проведение I фазы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в соответствии с Российскими и международными стандартами надлежащей клинической практики (GCP) и на примере этого иследования - формулировка рекомендаций по формированию основы инфраструктуры испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

3. Исследование безопасности, переносимости и иммунологической активности кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» у человека.

Задачи работы:

1. Проанализировать международный опыт клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

2. На примере испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» разработать комплект типовой нормативной документации по испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в соответствии со стандартами GCP с учетом результатов лабораторных исследований и доклинических испытаний.

3. Сформировать когорту добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

4. Оценить безопасность и переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ», определить безопасную иммунизирующую дозу.

5. Исследовать уровень и продолжительность гуморального иммунног ответа на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

6. Исследовать уровень и продолжительность клеточноопосредованного иммунного ответ на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

7. По итогам испытаний подготовить отчет для представления в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора на экспертизу и согласование.

8. Подготовить рекомендации по организации II фазы клинических испытаний отечественных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые в России осуществлены клинические исследования оригинальной отечественной конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. Заложены основы инфраструктуры клинических испытаний новой группы вакцинных препаратов в нашей стране: кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа.

Впервые показана безопасность и переносимость конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека.

Впервые получены данные об иммуногенности конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека. Выявлен дозозависимый характер иммунного ответа - по мере повышения дозы вакцины возрастал титр антител и увеличивалось количество добровольцев со специфическим иммунным ответом.

Впервые показано, что конъюгированная полимер-белковая рекомбинантная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» не вызывает при иммунизации добровольцев увеличения количества СБ4+-Т-клеток, то есть обладает дополнительными характеристиками безопасности, связанными с отсутствием -повышения возможного риска ВИЧ-инфекции у вакцинированных добровольцев. Актуальность этого аспекта безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин стала очевидной после выявления повышенной восприимчивости к ВИЧ-инфекции добровольцев, иммунизированных кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины ММС-Ас15, активирующей пролиферацию СЭ4+-Т-лимфоцитов, в процессе клинических исследований, которые были остановлены по этой причине.

Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о перспективах применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве потенциального иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Впервые в России разработана методическая основа и подготовлен комплект нормативной документации по проведению клинических испытаний

анти-ВИЧ/СПИД-вакцин («Протокол клинических испытаний...», «Брошюра исследователя», «Информация для добровольца и Форма информированного согласия», «Индивидуальная карта добровольца» и др.), соответствующий стандартам вСР. Документация успешно прошла экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Федеральном комитете по МИБП, Федеральном Комитете по этике и утверждена Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Разработанные документы могут быть использованы в качестве типовых для организации последующих клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Впервые в России сформирована когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта включена в клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ», стабильна, имеет перспективы для расширения. Тем самым заложены основы для дальнейших клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в Российской Федерации.

Полученные данные о безопасности, переносимости и иммуногенности вакцины «ВИЧРЕПОЛ» дают основания для продолжения клинических исследований, что будет способствовать дальнейшему развитию и совершенствованию инфраструктуры клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Подготовлены методические рекомендации по организации II фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (в соответствии с планом работ по выполнению Постановления Правительства Российской Федерации от 25 декабря 2007 г. №1905-р и в рамках Государственного контракта с ФМБА России №22.050.08.0 от 20 марта 2008 г. по теме «Разработка экспериментальных технологий для создания кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД», шифр «КВ ВИЧ - 08»).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Впервые в отечественной практике сделано обобщение мирового опыта клинических испытаний кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, подготовлены рекомендации и пакет нормативных документов по проведению I фазы клинических испытаний первой отечественной кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (подготовлена и опубликована монография).

2. Впервые в России сформирована когорта ВИЧ-неинфицированных добровольцев, мотивированных на участие в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта стабильна, имеет перспективы для расширения и

включена в I фазу клинических испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

3. Показана безопасность и хорошая переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» во всех исследованных дозах (2,5 - 50,0 мкг по белку).

4. Кандидатная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» при иммунизации добровольцев индуцировала образование ВИЧ-специфических антител. Эффект зависел от дозы вакцины, максимальный титр антител наблюдался после 4-й иммунизации. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза не менее 50 мкг по белку.

5. При иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не наблюдалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунного ответа (абсолютное количество С04+-Т-клеток и СВ8+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови не отличались от нормы). Это может рассматриваться как дополнительная характеристика безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», связанная с отсутствием повышения риска ВИЧ-инфекции после иммунизации (повышенная восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции была обнаружена в клинических исследованиях кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины MRK-Ad5, активирующей пролиферацию CD4+-T-лимфоцитов).

6. Отчет о результатах I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» успешно прошел экспертизу и согласование в ГИСК им.Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора. Рекомендовано продолжать исследование и переходить ко II фазе клинических испытаний. Вакцина, «ВИЧРЕПОЛ» включена в международный рейтинг-лист перспективных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин Global HIV Vaccine Enterprise и IAVI.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на V, VI, VII, VIII, IX, X Конгрессах «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2002 г., 2004 г., 2005 г., 2007 г., 2008 г. - Москва; 2009 г., Казань); II и III Объединенных иммунологических форумах (2004 г., Екатеринбург; 2008 г., Санкт-Петербург), 2-й Всероссийской школе по иммунотерапии (2005 г., Анапа); XXII-XXVII Конгрессах Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (EAACI) (2003, Париж, Франция; 2004 г., Амстердам, Голландия; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2006 г., Вена, Австрия; 2007 г., Гетеборг, Швеция; 2008 г., Барселона, Испания); XVIII-XX Конгрессах

Всемирной аллергологической организации (IAACI/WAO) (2003 г., Ванкувер, Канада; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2007 г., Бангкок, Таиланд); XII и XIII Международных Конгрессах по иммунологии (ICI/IUIS) (2004 г., Монреаль, Канада; 2007 г., Рио-де-Жанейро, Бразилия); XV-XVII Конгрессах Европейской Федерации иммунологических обществ (EFIS/ECI) (2003 г., Родос, Греция; 2006 г., Париж, Франция; 2009 г., Берлин, Германия); XV, XVI, XVII, XVIII Международных конференциях по СПИДу (2004 г., Бангкок, Таиланд; 2006 г., Торонто, Канада; 2007, Сидней, Австралия; 2008 г., Мехико, Мексика); Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (2004 г., Суздаль); 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций» (2004 г., Москва); Симпозиуме «Современные иммунобиологические препараты» (2004 г., Москва); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни. От теории к терапии» (2005 г., Москва); IV международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (2005 г., Бенидорм, Испания); 4-м Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (2007, Москва); Международных конференциях «AIDS "Vaccine 2007» (Сиэттл, США) и «AIDS Vaccine 2008» (Кейптаун, ЮАР); Рабочем совещании по вакцинопрофилактике ВИЧ (20-21 февраля 2009 г., Новосибирск).

По материалам диссертации опубликовано 67 печатных работ, в том числе: 1 монография; 23 статьи в научной печати, из них 17 статей в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций; 43 публикации в материалах отечественных и международных конференций и конгрессов.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты работы использованы в «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, ГНЦ социальной и судебной психиатрии им.В.П.Сербского, ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, МСЧ №163 ФМБА России, Московского областного центра профилактики и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 537 страницах машинописного текста, содержит 73 таблицы, 21 рисунок. Диссертация включает главы: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты исследований», «Обсуждение», «Выводы», «Список литературы», а также три приложения. Библиография включает 684 источника, в том числе 60 отечественных и 624 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследуемый препарат. Вакцина ВИЧ/СПИД полимер-белковая рекомбинантная конъюгированная жидкая для внутримышечного введения "ВИЧРЕПОЛ" представляет собой стерильный очищенный с помощью аффинной и ионообменной хроматографии и гельфильтрации химерный белок гес(24-41), полученный рекомбинантным методом, копирующий аминокислотные последовательности фрагмента внутреннего белка р17, полноразмерного внутреннего белка р24 и иммунореактивного фрагмента трансмембранного белка gp41 ВИЧ 1 типа; конъюгированный с Полиоксидонием (И-оксидированное производное поли-1,4-этиленпиперазина) - водорастворимым высокомолекулярным иммуностимулятором. Антиген получен в системе Е.соН.

Отношение белок:полиоксидоний (по весу) в препарате составляет 1:10. Консервант - мертиолят 0,01 %.

В испытаниях использована серия вакцины, проконтролированная в, ГИСК им.Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора.

Дизайн исследования

В открытом несравнительном рандомизированном клиническом исследовании I фазы изучали безопасность, переносимость и иммуногенность возрастающих доз вакцины "ВИЧРЕПОЛ" (от 2,5 до 50 мкг по белку). Каждая доза была испытана с участием трех ВИЧ-серонегативных здоровых добровольцев (всего планировалось участие в исследовании 15 добровольцев) (табл.1). При отсутствии связанных с вакцинацией неблагоприятных явлений 3 степени и выше в течение 72 часов после 2-й иммунизации последовательно переходили к более высоким дозам (5, 10,25, 50 мкг по белку) (табл.2).

Табл.2. Клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (I фаза): критерии включения в исследование / исключения из исследования._

Критерии включения

Критерии исключения

1. Граждане (жители) Российской Федерации.

2. Возраст: от 20 до 50 лет.

3. Для женщин потребуется отрицательный результат теста на беременность по моче и письменное согласие на применение мер контрацепции.

4. Отсутствие выраженных соматических заболеваний или декомпенсированных хронических заболеваний.

5. Клинико-лабораторные показатели в следующих границах:

- Лейкоциты: от 4000 до 10800 кл/мм3

- Тромбоциты: от 150000 до 400000 на мм3

6. Результат анализ мочи на белок и кровь: отрицательный или следы. Если микроскопия мочи выявит гематурию или протеинурию, доброволец должен быть исключен из исследования.

7. Негативный результат серологического теста (иммуноферментного анализа) на ВИЧ-инфекцию.

8. Возможность участия в клинических испытаниях в течение 13 месяцев.

9. Успешное выполнение теста на понимание целей и задач исследования, желание участвовать в испытаниях, подписание участником формы «Информированного согласия», одобренной соответствующими инстанциями.

1. Позитивный результат серологического теста (иммуноферментного анализа) на ВИЧ-инфекцию.

2. Первичные иммунодефицита, хронические заболевания в стадии декомпенсации, аутоиммунные и атопические заболевания.

3. Применение иммуносупрессивной терапии или противораковой химиотерапии.

4. Данные о психиатрических и медицинских проблемах и/или злоупотреблении алкоголем, наркотиками и др., которые, по мнению исследователя, могут оказать нежелательное воздействие на возможность добровольца участвовать в клинических испытаниях.

5. Наличие связанных с родом деятельности или иных обязанностей, способных помешать завершению участия в клинических испытаниях.

6. Прививка любой живой аттенуированной вакциной в течение 60 дней до начала клинических испытаний.

7. Применение экспериментальных терапевтических препаратов не менее, чем за 30 дней до начала участия в клинических испытаниях.

8. Переливание крови, ее компонентов или иммуноглобулинов позднее, чем за последние 3 месяца до начала клинических испытаний.

9. Наличие в анамнезе анафилаксии или любых нежелательных реакций на вакцины, гиперчувствительности немедленного типа.

10. Физиологические состояния: беременность, лактация.

Примечание: женщины детородного возраста должны использовать эффективные противозачаточные средства до первой иммунизации и, по крайней мере, 3 месяца после последней иммунизации.

11. Сотрудники исследовательского учреждения, проводящего испытания, привлеченные к выполнению протокола клинических испытаний, которые могут иметь прямой доступ к результатам по иммуногенности.

Табл.2. Схема иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

Групп а Число добровольцев Месяцы

0 1 3 6

1 3 ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку

2 3 . ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку

3 3 ВИЧРЕПОЛ 10 мкг побелку ВИЧРЕПОЛ 10 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 10 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 10 мкг по белку

4 3 ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку

5 3 ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку

Оценка безопасности и переносимости

Оценка безопасности и переносимости вакцины «ВИЧРЕПОЛ» проводилась на основании регистрации побочных реакций, неблагоприятных явлений и отклонений от нормы результатов клинико-лабораторных анализов. Регистрировали наличие или отсутствие у добровольцев после введения вакцины субъективных жалоб и объективных проявлений (зуд, отек в месте введения вакцины, жар, повышение температуры тела, отек Квинке, анафилаксия и т.д.). Возможную связь побочных реакций и неблагоприятных явлений с применением вакцины «ВИЧРЕПОЛ» оценивали по следующим критериям:

• клинические проявления

• клинико-лабораторные показатели

• иммунологические показатели.

Оценка нммуногенности

Гуморальный иммунный ответ:

• Антитела, связывающиеся с белками гес(24-41), гес24 и гес41 в ИФА;

• Антитела, связывающиеся с твердой фазой (планшетом с сорбированными антигенами ВИЧ) лицензированного в России теста для определения антител к ВИЧ в ИФА;

• Антитела, связывающиеся с белками культурального ВИЧ-1 - р24 и р55 (предшественником р24) в иммуноблоте.

• Нейтрализующие антитела против ВИЧ-1, культивируемого в трансформированной клеточной линии.

Клеточный иммунный ответ:

• Лимфопролиферативный ответ на белки гес(24-41), гес24 и гес41;

• Определение абсолютного количества CD4+- и СВ8+-Т-лимфоцитов и соотношения CD4+/CD8+;

• Определение антиген-специфической продукции интерферона-у Т-клетками.

Формирование когорты добровольцев

Когорта добровольцев для участия в клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» формировалась в соответствии со стандартами GCP и соблюдением принципов биоэтики, на основе добровольности, информированности, конфиденциальности, анонимности. К участию в клинических испытаниях привлекались здоровые ВИЧ-неинфицированные добровольцы (мужчины и женщины) в возрасте 20-50 лет, которые могли участвовать в исследовании в течение 13 месяцев (12 визитов в центр клинических испытаний). Для добровольцев были обеспечены: страхование, бесплатное медицинское сопровождение, дифференциальная диагностика ложной ВИЧ-сероположительности с выдачей индивидуального документа с подтверждением участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцины и отсутствия ВИЧ-инфекции, консультирование о предотвращении ВИЧ-инфекции, вознаграждение. Добровольцы включались в клиническое исследование в соответствии с критериями включения/исключения (табл.1) после подписания формы информированного согласия.

Формирование когорты добровольцев являлось одной из задач клинического исследования и более подробно описано в разделе «Результаты и обсуждение».

Клинико-лабораторное обследование добровольцев

Клинико-лабораторное обследование добровольцев было проведено в лицензированной клинико-диагностической лаборатории. Клинические исследования крови и мочи были проведены на сертифицированных приборах «АВХ Micros-60», «Horiba АВХ Diagnostic» и «PocketChem UA PU-4210 Агкгау» (Франция). Биохимические исследования проводили на сертифицированном биохимическом анализаторе «Cormay Livia» («Согтау», Венгрия). В качестве биохимических показателей безопасности были использованы уровни АсАТ, АлАТ, креатинина. Эти параметры являются общепринятыми в мировой практике оценки безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин [Belshe et al, 1994]

Получение сывороток. Забор крови проводили в сроки, указанные в Протоколе испытаний. Кровь собирали в пробирки, выдерживали 1 час при 37°С, затем переносили в холодильник на 4°С на 30 мин, центрифугировали 10 мин (1000-1500 об/мин). Отбирали сыворотку в микропробирку и помещали в на хранение при -20°С до исследования.

Определение анти-ВИЧ-антител в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с использованием диагностической системы для определения антител к ВИЧ1/2 «ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» (кат. 1-150) (НПО «Диагностические тест-системы», Нижний Новгород). В основе определения антител лежит непрямой твердофазный иммуноферментный анализ. В качестве твердофазного иммуносорбента в тест-системе используется смесь рекомбинантных белков: gp 160, gp 120, gp41 (env ВИЧ-1); pl7, p24 и pl5 (gag ВИЧ-1), gpl20 и gp41 (env ВИЧ-1 группы 0), pl7 и p24 (gag ВИЧ-1 группы 0), gp40 и gp38 env ВИЧ2, сорбированных в лунках полистиролового планшета.

Реакцию ставили согласно инструкции предприятия-изготовителя.

Результат считали положительным, если его оптическая плотность (ОП) превышала ОП крит., рассчитанную по формуле:

ОП крит. = ср. знач. ОП К (-) + 0,2,

где 0,2 коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки ИФА на предприятии-изготовителе, величина которого указана в рабочей инструкции и паспорте на препарат; ОП К (-) - оптическая плотность негативного образца, входящего в состав набора.

В соответствии с международной практикой испытаний анти-ВИЧ/СПИД- . вакцин [Gilbert et al., 2005], для сравнения данных, полученных на различных этапах исследования, результаты были нормализованы и выражены в виде отношения

vy 11 иссл. /ОП крит»

Определение антител к вакцинному антигену препарата «ВИЧРЕПОЛ» в сыворотках крови иммунизированных добровольцев. Определение проводили с помощью твердофазного непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием сорбированных на твердой фазе рекомбинантных антигенов, входящих в состав активной субстанции вакцины «ВИЧРЕПОЛ». В качестве твердофазного иммуносорбента использовали антигены гес р24, гес gp41, гес (24-41), сорбированные на твердой фазе (в лунках полистиролового планшета). Антиген гес(24-41) представляет собой активную субстанцию вакцины «ВИЧРЕПОЛ». Антиген гес р24 копирует полноразмерный белок р24

ВИЧ1 и повторяет N-концевую часть вакцинного антигена гес(24-41). Антиген rec gp41 копирует N-концевой фрагмент gp41 ВИЧ1 и воспроизводит С-концевую часть вакцинного антигена гес(24-41). Антигены в концентрации 8 мкг/мл сорбировали по отдельности на полистироловых планшетах фирмы «Greiner» (Германия) в 0,05 М растворе карбонантно - бикарбонантного буфера pH 9,5, внося по 100 мюг раствора антигена в лунку. Выдерживали 48 часов при комнатной температуре во влажной камере. После окончания инкубации содержимое лунок стряхивали. Планшеты подсушивали, постукивая по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаги. Готовили ряд последовательных двоичных разведений сывороток на 0,01 М фосфатно-солевом буфере, содержащем 0,05% раствора Твин-20 (ФСБ-Т) и 0,02% бычьего сывороточного альбумина (ФСБ-AT). Образцы вносили по 100 мкл в лунку в трех параллелях для каждого разведения, и выдерживали 60 мин при 37° С. По окончании инкубации, лунки пятикратно отмывали ФСБ-Т для удаления несвязавшихся антител, внося в каждую лунку не менее 350 мкл отмывающего раствора. В качестве детектирующего реагента использовали конъюгат пероксидазы хрена с моноклональными антителами мыши против IgG человека. Конъюгат в рабочем разведении на ФСБ-АТ вносили по 100 мкл в лунку. Инкубировали 60 мин при 37° С. После этого лунки вновь промывали пятикратно ФСБ-Т. Реакцию проявляли внесением в каждую лунку 0,2 % раствора ортофенилендиамина в субстратном буфере. Развитие цветной ферментативной реакции останавливали после 15-минутной инкубации в темноте, внося в каждую лунку 50 мкл 10% раствора серной кислоты. Учет реакции производили с помощью спектрофотометра-ридера при длине волны 492 нм.

Результат считали положительным, если ОП в анализируемой лунке превышала ОП крит., рассчитанную по формуле:

ОП крит. = ср. знач. ОП К(-) + 0,2,

где 0,2 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки ИФА, ОП К(-) - оптическая плотность ВИЧ-негативного образца из коммерческого набора New LAV Blot I фирмы «BioRad» (США) в разведении 1:10.

Определение антител против антигенов ВИЧ-1 в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с помощью иммуноблота. Исследование проводили с применением коммерческой тест-системы New LAV Blot I Assay (HIV-1 Ab confirmation, Western Blot) («Bio-Rad», США, кат. №72251) согласно инструкции предприятия-изготовителя, приложенной к набору. Антигенной

основой тест-системы являются белки культурального вируса ВИЧ-1, сорбированные на нитроцеллюлозе.

Реакцию учитывали, сравнивая расположение полосок на стрипе с образцом, приложенным к тест-системе.

Выявление вирусного белка р24 в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с помощью ИФА. Определение проводили с применением коммерческих тест-систем «ВектоВИЧ-1 р24-антиген-подтверждающий тест (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Принцип метода заключается во взаимодействии антигена р24 ВИЧ-1 из исследуемых образцов с моноклональными антителами, иммобилизованными в лунках полистиролового планшета. Связавшийся антиген выявляют с помощью биотинилированных анти-ВИЧ-1 кроличьих антител и конъюгата стрептавидина с пероксидазой хрена. Реакцию ставили согласно инструкции предприятия-изготовителя, приложенной к тест-системе.

Результат анализ считали положительным, если значение ОП в соответствующей лунке было равно или превышало критическое значение (ОПкрит), которое вычислялось по формуле: ОПкрит = ОПср К (-) + 0,07,

где ОПср К (-) - среднее значение оптической плотности негативного образца

Определение генома ВИЧ. Определение генома ВИЧ в плазме крови добровольцев проводили с помощью обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией (ПЦР) в режиме реального времени. Определение генома ВИЧ было проведено в лицензированной лаборатории с применением набора, соответствующего по характеристикам набору «Roche Amplicor».

Выделение лимфоцитов. Цельную кровь собирали в пробирки с К2 ЭДТА (VACUTEST® с К2 ЭДТА, BD). Разбавляли средой RPMI 1640 в соотношении 1:1 и наслаивали на фиколл-урографин. Центрифугировали 20 мин (2000 об/мин) при комнатной температуре. По окончании центрифугирования собирали лимфоциты и переносили в среду RPMI 1640 для удаления примеси фиколла-урографина и тромбоцитов. Центрифугировали 15 мин (1000 об/мин), удаляли надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали в среде RPMI 1640. Повторяли отмывку. Осадок ресуспендировали в полной питательной среде (ППС) (10% FCS, 2 мМ L-глютамина, 0,5 М HEPES, RPMI 1640).

Криохранение лимфоцитов. Лимфоциты в ППС центрифугировали 20 мин при 1000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали в среде для замораживания (10% DMSO в FCS), переносили в криопробирки. Помещали криопробирки в контейнер для замораживания Mr.Frosty (С 1562, «Sigma», США), контейнер помещали в морозильную камеру при - 80 "С.

Постановка реакции лимфопролиферации. Для работы были использованы свежевыделенные клетки. Клетки подсчитывали в гемацитометре. В лунку 96-луночного плоскодонного планшета вносили лимфоциты (200000/лунку) и антигены или гес (24-41), или гес р24, или гес gp41 (рабочая концентрация 10 мкг/мл) в ППС. Положительным контролем реакции служила стимуляция лимфоцитов ФГА (рабочая концентрация 20 мкг/мл). Реакцию ставили в 3-х параллелях. Инкубировали планшеты в 5% атмосфере С02 при 37 °С. Через 48 часов в лунки вносили Н-тимидин, оставляли еще на 24 часа, после чего переносили содержимое лунок на нитроцеллюлозные фильтры. Включение 3Н-тимидина определяли на Р-счетчике в толуоловом сцинтшшяторе. Индекс пролиферации (ИП) определяли по формуле:

ИП—СРМантиген/СРМспонханная пролиферация у

где СРМантш-ен - сигнал клеток, стимулированных антигеном,

СРМспонтанная пролиферация - СИГНЭЛ КЛеТОК, ИНКубирОВаННЫХ В ППС

(спонтанная пролиферация).

Определение CD4+- н СБ8+-Т-лимфоцитов и соотношения CD4+/CD8+.

Кровь для определения CD4+- и СБ8+-лимфоцитов забирали из кубитальной вены пациента в 9-10 ч утра, натощак, в гепаринизированную пробирку из расчёта 20 ME гепарина на 1 мл крови. Кровь разводили средой 199 в соотношении 1:3 и наслаивали на фиколл-пак (р= 1,077 г/мл). Центрифугировали пробирки 40 мин при 400g. Собирали интерфазное кольцо, содержащее мононуклеарные клетки (МНК). Дважды отмывали МНК средой 199 при 200g 10 мин и доводили до концентрации 5 х106/мл. МНК вносили в лунки круглодонного планшета в количестве 50 мкл на лунку, по 3 лунки на каждого пациента (№1 - контроль, №2 - CD4, №3 - CD8). В лунки №2 и №3 вносили по 5 мкл мышиных моноклональных антител против CD4 и CD8 человека, соответственно («Сорбент», Москва). Пробы инкубировали 30 мин при +4°С. Для отмывки в лунки вносили по 150 мкл среды 199 и осаждали

клетки центрифугированием в течение 5 мин при 200g. Отмывку повторяли. Во все лунки (№№1-3) вносили вторичные антитела (овечьи антитела против иммуноглобулинов мыши), меченые ФИТЦ, по 0,5 мкл на лунку (50 мкл раствора антител, разведённых в 100 раз). Инкубировали 30 мин при +4°С. Пробы двукратно отмывали, фиксировали 1% р-ром параформальдегида в ФСБ и хранили до исследования при +4°С не более 72 ч. Анализ образцов проводили на проточном цитометре FACSCalibur («Becton Dickinson», США), оснащённым аргоновым лазером с длиной волны излучения 488 нм, с использованием программного обеспечения CellQUEST. Определяли количество CD4+- и С08+-Т-клеток, а также соотношение CD4+/CD8+.

В настоящем исследовании в качестве диапазона нормальных значений были приняты: абсолютное количество CD4+-лимфоцитов - 600-1600; абсолютное количество СБ8+-лимфоцитов - 300-800; соотношение CD4+/CD8+ - 1,0-2,5 [Пинегин Б.В. и соавт., 2001].

Следует учитывать, что результаты количественной оценки субпопуляций лимфоцитов, не соответствующие нормативным показателям, еще не свидетельствуют о наличии патологии, и наоборот, нормальные показатели субпопуляций лимфоцитов могут наблюдаться у пациентов с отклонениями в функционировании иммунной системы. Поэтому в первую очередь следует обращать внимание не на отклонение показателей относительно нормальных значений, а на соответствие характера отклонения показателя клинической картине заболевания [Пинегин Б.В. и соавт., 2001].

Исследование антиген-специфической продукции интерферона-у лимфоцитами периферической крови (ELISPOT-анализ с применением набора BD № 551849, «Becton Dickinson», США). Для исследования использовали замороженные лимфоциты. Накануне проведения реакции лимфоциты, находящиеся в среде для замораживания, размораживали в водяной бане при 37 °С. Быстро переносили в ППС и ценрифугировали 20 мин при 1000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали в ППС, центрифугировали 20 мин при 1000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, лимфоциты разводили ППС до концентрации 1 млн/мл. Оставляли на ночь в 5% атмосфере С02при 37°С. Выживаемость лимфоцитов определяли по включению красителя трипанового синего. Содержание живых клеток определяли в гемацитометре. Реакцию проводили с применением коммерческих тест-систем BD № 551849 («Becton Dickinson», США) согласно инструкции предприятия-изготовителя, приложенной к набору. Результаты учитывали на анализаторе ELISPOT («AELVIS», ЕС).

Постановка реакции нейтрализации. В исследованиях нейтрализационных свойств образцов сывороток иммунизированных добровольцев в качестве методической основы использовали стандартные протоколы, утвержденные ВОЗ [End Point Neutralization Assay. WHO Guidelines for Standart HIV Isolation Procedures 1994, 1998 update] с небольшими модификациями. Испытания проводили в вирус-клеточной системе МТ4 - Н1У-1Шв.

Сыворотки, полученные в стерильных условиях стандартным методом, подвергали тепловой обработке при +56 °С в течение 30 мин для инактивации вирионов ВИЧ-1 и белков системы комплемента. Условия хранения сывороток: -80°С при однократном размораживании.

Перевиваемая клеточная линия МТ4 является клонированным вариантом, широко используемым для моделирования ВИЧ-инфекции. Линия была получена из коллекции NIH (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland) и культивировалась согласно рекомендациям в пластиковых флаконах 25 см3 («Costar», США) при 37°С и 5% СОг, в ростовой среде следующего состава: RPMI-1640 с 10% FCS («Bioclot», Германия), 2мМ L-глютамина («Sigma», США).

Вирусы. В работе использовали ВИЧ-1шв - референс-штамм, активно реплицирующийся в лимфобластоидных Т-клеточных линиях.

Вирусные стоки получали в результате острой инфекции клеток МТ4 вирус-содержащими супернатантами. Полученную вирус-содержащую культуральную жидкость освобождали от клеток низкоскоростным центрифугированием, аликвотировали и хранили при температуре -70°С. Биологическую активность вирусных стоков оценивали путем титрования ТСШ50. По результатам титрования активность использованного вирус-содержащего материала составляла 5,5 х 105 TCID50.

Тест нейтрализации. Использовали модифицированную методику, позволяющую проводить более масштабный поиск ВИЧ-позитивных сывороток с подходящими нейтрализующими свойствами. При этом использовали 2 дозы заражения вирусом - 10 и 50 TCID50 и 2 разведения сывороток - 1:10 и 1:50.

После 1 часа инкубации при 37°С 75 мкл предварительно прогретой и разведенной сыворотки с 75 мкл вируса в 96-луночный планшет добавляли 75 мкл суспензии клеток МТ4 в концентрации 1,5х 10б кл/мл.

На 2-й, 3-й и 4-й дни проводили отмывание несвязавшегося вируса, удаляя 175 мкл среды и добавляя 175 мкл свежей.

Результаты учитывали на 7 сутки инфекции путем определения содержания р24-антигена ВИЧ в кулыуральной жидкости с помощью ИФА. Использовали коммерческую тест-систему «ВектоВИЧ-1 р24-антиген-подтверждающий тест» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Нейтрализующую активность сывороток оценивали по снижению значения оптической плотности, определяемой с помощью ИФА, в пробах культурального супернатанта, отобранного из лунок с тестируемой иммунной сывороткой по сравнению с контрольными пробами, содержащими неиммунную сыворотку.

Индекс нейтрализации (N1) рассчитывали по формуле:

NI=(ODNcgser - ODTes,edSer)/(ODNegSer- ODcellControl) X 100%

где ODnegser - средняя (из трех повторов) оптическая плотность контроля инфекции с негативной сывороткой в ИФА; ODTestSer - средняя (из трех

ПОВТОрОВ) ОПТИЧеСКаЯ ПЛОТНОСТЬ Проб С ИССЛеДуеМОЙ СЫВОрОТКОЙ; ODcellComrol -

средняя оптическая плотность контроля клеток [Burton et al., 2004].

Статистическая обработка данных. При статистическом анализе полученных результатов определяли среднее арифметическое и стандартную ошибку среднего арифметического. Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента [Гланц С. Медико-биологическая статистика. 1998 г.].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Клинические испытания вакцины "ВИЧРЕПОЛ» представляют собой очередной этап исследований по разработке анти-ВИЧ/СПИД, начатых в нашей стране в рамках МНТП «Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего». Научный план программы предусматривал формирование единой системы, включающей разработку, доклинические испытания и клинические испытания кандидатных вакцинных препаратов против ВИЧ-инфекции/СПИДа. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» стала первой российской кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакциной, которая была включена в клинические испытания, а сами эти испытания стали первым в нашей стране клиническим исследованием вакцин этой группы. Фактически они стали основой формирования инфраструктуры клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России. Эта инфраструктура включает научные институты - разработчики вакцинных препаратов; когорты добровольцев, привлекаемых к участию в клинических испытаниях; центры клинических

испытаний, которые имеют соответствующее оснащение и квалифицированный персонал, осуществляют набор и медицинское сопровождение добровольцев, их иммунизацию, проведение необходимых анализов и обработку полученных образцов. Принципиальной частью инфраструктуры клинических испытаний являются контролирующие и экспертные органы, которые осуществляют экспертизу всех этапов клинического исследования - от создания протокола клинических испытаний до приема заключительного отчета о проведенном клиническом исследовании.

В России накоплен большой опыт испытаний вакцинных препаратов, существуют соответствующие учреждения и службы, имеется нормативно-правовая база. Однако клинических испытаний вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа в нашей стране ранее не проводилось. В связи с этим, важной задачей организации клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» стала разработка программы испытаний, необходимой документации и методических приемов, адаптированных именно для анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

Это было тем более важно потому, что вакцина «ВИЧРЕПОЛ» относится к конъюгированным полимер-белковым вакцинам - новому оригинальному классу вакцинных препаратов, не имеющих аналогов в мировой практике. В процессе решения этой задачи была проведена отработка методических приемов информативного контроля экспериментальных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, пригодных как для клинических испытаний соответствующих кандидатных препаратов, так и для их лабораторных исследований (доклинических испытаний).

Был подготовлен комплект документации, полностью соответствующий нормативным требованиям «Надлежащей клинической практики (вСР)», которая принята в Российской Федерации в качестве государственного стандарта. В комплект вошли: «Протокол клинических испытаний», «Брошюра исследователя», «Информация для добровольца», «Форма информированного согласия», «Индивидуальная карта добровольца», «СУ главного исследователя», страховой полис. Документы успешно прошли экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Комитете по медицинским иммунобиологическим препаратам, Комитете по этике при Федеральном органе контроля качества лекарственных средств и были утверждены. На основании положительных решений перечисленных инстанций Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития было выдано разрешение на проведение I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

В соответствии с Российскими и международными нормативными требованиями к проведению клинических исследований с участием человека в качестве субъекта исследования, в протоколе клинических испытаний был предусмотрен полный комплекс мероприятий по защите прав добровольцев, в том числе вопросы конфиденциальности участия в клинических испытаниях и медицинское страхование исследования. Особое внимание было уделено вопросу защиты добровольцев от возможных неблагоприятных последствий, связанных с временной ложной ВИЧ-положительностью (наличие антител против ВИЧ), обусловленной действием исследуемой вакцины. С этой целью в протокол клинических испытаний был включен алгоритм дифференциальной диагностики, позволяющий отличить иммунный ответ, вызываемый вакцинацией, от иммунного ответа, вызываемого ВИЧ-инфекцией. Добровольцу выдавалась справка, в которой подтверждалось его участие в клинических испытаниях, проводимых в соответствии с официальным разрешением Росздравнадзора, а также подтверждалось отсутствие у него ВИЧ-инфекции, несмотря на наличие анти-ВИЧ-антител.

Формирование когорты добровольцев

Формирование когорт добровольцев является одним из наиболее трудных и ответственных аспектов организации клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. На этапе I фазы клинических испытаний задача привлечения добровольцев осложняется низкой мотивацией здоровых ВИЧ-неинфицированных людей для участия в испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, а также бытующим среди подавляющего большинства населения, настороженного или отрицательного отношением ко всему, что связано с ВИЧ-инфекцией, в том числе и к участию в клинических испытаниях. В связи с этим приобретала особую важность объективная информация об исследуемом препарате, положении дел в области исследования анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, отсутствии опасности инфицирования через вакцину, а также о важности разработки вакцин для борьбы с эпидемией ВИЧ-инфекции/СПИДа. Кроме того, одним из необходимых условий включения добровольца в клинические испытания является возможность выполнения им протокола исследования, то есть регулярного посещения центра клинических испытаний в течение длительного времени (13 месяцев, 12 визитов в соответствии с «Протоколом клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ»).

В Российской Федерации уже была попытка формирования когорты добровольцев в связи с исследованиями в области ВИЧ-инфекции. Такая когорта была собрана в Санкт-Петербурге для эпидемиологических

исследований. Однако важно отметить, что при организации клинических исследований анти-ВИЧ/СПИД-вакцин характерной и принципиально важной особенностью формирования когорт является мотивация добровольцев к участию в клинических испытаниях. Как показали зарубежные исследования и наш опыт, этот фактор существенно затрудняет привлечение добровольцев.

Рис. 1. Формирование когорты добровольцев для участия в клинических испытаниях вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (I фаза).

При формировании когорты добровольцев для клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (рис.1) только около 20% (65 человек) от общего числа обратившихся лиц (298 человек) были приглашены на собеседование. Остальные либо отказались, либо не подходили по критериям включения/исключения (например, были ВИЧ-инфицированными или по каким-либо причинам не могли выполнять протокол исследования). После личного собеседования были отобраны 17 добровольцев, которые после соответствующего медицинского обследования и подписания информированного согласия были включены в клиническое исследование.

Двое участников впоследствии (после 3-го визита) вышли из исследования по собственному желанию без объяснения причин. Остальные 15 добровольцев полностью завершили протокол клинических испытаний. Таким образом, стабильность когорты составила 87%, что является высоким показателем.

30 человек, которые принципиально были готовы к участию в I фазе клинических испытаниях вакцины «ВИЧРЕПОЛ», отложили свое участие в них по объективным причинам и выразили желение принять участие в последующих клинических испытаниях. Тем самым были заложены основы формирования когорты добровольцев на перспективу - для проведения II фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (разумеется, следует понимать, что к моменту набора добровольцев в клиническое исследование желание участвовать может и измениться). Наиболее эффективным оказалось привлечение добровольцев из дискордантных пар (один партнер инфицирован ВИЧ, другой - нет).

Важным аспектом формирования когорты стало исследование мотивов участия и отказа от участия в клинических испытаниях. Основной причиной (мотивом) для участия добровольцев в клинических испытаниях было стремление помочь ВИЧ-инфицированным людям (65%), в том числе из близкого окружения (41%). Далее следовало желание внести вклад в научные исследования по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (35%). Возможность получить иммунную защиту против ВИЧ-инфекции была отмечена как основной мотив в 18% случаев. Бесплатная страховка и медицинское обследование, а также получение вознаграждения не были определяющим причинами для участия в клинических испытаниях (4%) (табл. 3).

20% (13 из 65) отказались от участия в клинических испытаниях на этапе отбора. В качестве причин отказа названы (в порядке убывания): сомнение в безопасности вакцины и опасение получить ВИЧ-инфекцию (61%), боязнь побочных эффектов (30%), опасение ложной ВИЧ-позитивности в результате вакцинации (15%), невозможность выполнять протокол испытаний (7%), низкое вознаграждение (2%). В 15% случаев причины отказа не объяснялись. 30 человек не отказались от участия в клинических испытаниях, но приняли решение включиться в них в будущем (II фаза клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» или I фаза испытаний других кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа). Преимущественными причинами такого решения были планируемая беременность или временная невозможность выполнять протокол испытаний.

Табл.3. Мотивы участия и отказа от участия в клинических испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

Мотивы участия: Мотивы отказа:

• Помощь ВИЧ-инфицированным людям (65%), включая лиц из ближайшего окружения (муж, жена, дети, знакомые) (41%) • Вклад в научные исследования по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (35%) • Возможность получить иммунную защиту против ВИЧ-инфекции (18%) • Бесплатная страховка и медицинское обследование, получение вознаграждения (4%) • Сомнения в безопасности вакцины и боязнь получить ВИЧ-инфекцию (61%) • Боязнь побочных эффектов (30%) • Боязнь ложной ВИЧ-серопозитивности (15%) • Невозможность выполнять протокол испытаний (7%) • Низкое вознаграждение (2%) • Необъясненные причины (15%)

Некоторые ВИЧ-инфицированные добровольцы, которые не могли быть включены в клинические испытания I фазы, высказали желание принять участие в испытаниях терапевтических свойств вакцины «ВИЧРЕПОЛ». Таким образом, создается основа когорты для клинических исследований в области терапевтической вакцинации. Однако необходимо отметить, что для подобных исследований потребуется тщательная проработка критериев включения/исключения, связанная, в частности, с такими параметрами, как динамика вирусной нагрузки, состояние иммунной системы, прием антиретровирусных препаратов.

Таким образом, в процессе проведения I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» была создана первая в России стабильная когорта добровольцев для клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, а также заложены основы формирования когорт добровольцев для участия в дальнейших клинических исследованиях как вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так и других кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и микробицидов.

Безопасность и переносимость вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Основным результатом I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» следует считать достижение первичной конечной точки исследования: была продемонстрирована безопасность и хорошая переносимость исследуемого препарата для человека.

В процессе проведения испытаний ни у одного добровольца не было зарегистрировано кратковременных и отсроченных неблагоприятных явлений,

которые могли бы быть связаны с иммунизацией и послужить причиной вывода добровольца из клинического исследования.

Все добровольцы отмечали хорошую переносимость вакцины. Неприятных субъективных ощущений в результате вакцинации не отмечалось, за исключением небольшой болезненности в момент инъекции. Также не были отмечены такие неблагоприятные явления, как боль в месте введения вакцины, покраснение в месте введения вакцины; затвердение в месте введения вакцины, повышение температуры, озноб, тошнота, недомогание, миалгия, артралгия, головная боль, сыпь, лихорадка и др. (перечень включен в Протокол клинических испытаний).

На протяжении всего срока исследования отклонения клинических лабораторных показателей от нормы обнаруживались достаточно редко (табл.4). При клиническом анализе мочи отмечено 4 случая появления оксалатов (у 2 добровольцев) и фосфатов (у 4 добровольцев). При биохимическом анализе крови у некоторых добровольцев были зафиксированы случаи транзиторного повышения уровня трансаминаз (повышение уровня АлАТ - 16 случаев у 7 добровольцев; повышение уровня АсАТ - 16 случаев у 4 добровольцев).

Выявленные отклонения не имели связи с вакцинацией, не нарастали прогрессивно в течение вакцинации и не потребовали исключения добровольцев из исследования. Важно отметить, что средние значения основных биохимических показателей безопасности (уровни креатинина в сыворотке крови, уровни трансаминаз) в каждой группе во время каждого визита соответствовали диапазону нормальных величин или же были близки к ним (рис. 2).

Табл.4. Частота зафиксированных отклонений общеклшшческих показателей от нормы при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ»._

Выявленные отклонения в общеклинических анализах Количество отклонений от нормы / количество визитов Процент от общего количества визитов Число добровольцев Процент от общего числа добровольцев

Повышение уровня АлАТ 16/188 8,51% 7 41,1%

Повышение уровня АсАТ 16/188 8,51% 4 23,5%

Оксалатурия 4/188 2,13% 2 11,7%

Фосфатурия 4/188 2,13% 4 23,5%

(а) Средние уровни креатинина

140 -, 120 -100 -80 -60 -40 -20 -0

Ммоль/л

а в

ж

о 1-я группа

о 2-я группа

д 3-я группа

о 4-я группа

■ 5-я группа

1 !ШП

■ тах

-1-1-1-1-1-1-1-1 визиты / недели /

2(1 3(4,2 4(6) 5(12,3 7(24,4 8(25) 10(36) 11 (48) иммунизация

имм) имм)

имм) имм)

(б) Средние уровни АлАТ

80 Е/Л 70 -60 -50 -40 30 20 10 -0

6

8 6 в

о

-Од ■

О

А

О

ш

о

2(1 имм)

3(4,2 имм)

4(6)

5 (12, 3 имм)

7(24,4 имм)

8 (25) 10 (36) 11 (48)

О 1-я группа

□ 2-я группа

Л 3-я группа

О 4-я группа

■ 5-я группа

щщ глах

1 визиты / недели / иммунизация

(в) Средние уровни АсАТ

1-я группа

2-я группа

3-я группа

4-я группа

5-я группа

11 (48)

визиты / недели / иммунизация

Рис. 2. Средние значения основных биохимических показателей безопасности при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

Таким образом, вакцина «ВИЧРЕПОЛ», вводимая в дозах 2,5,5,10, 25 и 50 мкг по белку, обладает высоким профилем безопасности, хорошо переносится добровольцами, и ее можно характеризовать как безопасную н переносимую.

Вопросы безопасности являются первостепенно важными для вакцинных препаратов. Требования безопасности находятся в числе приоритетных и применительно к кандидатным анти-ВИЧ/СПИД-вакцинам. В этом случае подтверждение безопасности важно не только как необходимый этап клинических испытаний кандидатного препарата, но также имеет особое значение для организации клинических исследований анти-ВИЧ/СПИД-вакцин как таковых. Это связано с существующим стойким массовым представлением о том, что в состав вакцин входит ВИЧ или его компоненты, и, следовательно, существует опасность заражения добровольца через вакцину. Международные исследования показали, что причиной около 60% случаев отказа от участия в клинических испытаниях является боязнь получить ВИЧ-инфекцию через вакцинацию. В настоящем клиническом исследовании при формировании когорты добровольцев 61% случаев отказа были обусловлены этой причиной.

Демонстрация безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ» была вполне ожидаемым результатом. Безопасность полиоксидония в качестве иммуностимулятора-носителя вакцинных антигенов была ранее подтверждена как в клинических исследованиях, так и многолетней практикой его медицинского применения. Безопасность этого соединения в составе вакцины была подтверждена клиническими испытаниями и практикой применения вакцины «Гриппол», которой вакцинировано уже более 80 миллионов человек. Безопасность рекомбинантных белков ВИЧ как вида антигенов, которые используются при конструировании субъединичных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, также была продемонстрирована в многочисленных клинических исследованиях. Безопасность и ареактогенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ» была показана в доклинических испытаниях и подтвердилась в клинических исследованиях.

Наблюдаемая в клинических испытаниях безопасность и хорошая переносимость вакцины «ВИЧРЕПОЛ» является основой для планирования дальнейших клинических исследований этого препарата.

Иммуногенность (антигенная активность) вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Также важным итогом I фазы клинических испытаний является достижение вторичной конечной точки исследования: получены данные, указывающие на иммуногенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ» у человека.

Гуморальный иммунный ответ

Образование антител в ответ на иммунизацию вакциной «ВИЧРЕПОЛ» в различной степени было отмечено во всех исследуемых группах (рис.3). По мере повышения дозы вакцины возрастал титр антител и увеличивалось количество добровольцев со специфическим иммунным ответом. Наиболее выраженный гуморальный иммунный ответ наблюдался после иммунизации высокими дозами вакцины (25 и 50 мкг по белку). При этом важно отметить, что значимые уровни антител были выявлены после иммунизации даже низкими дозами вакцины (2,5 и 5 мкг по белку). В ряде случаев иммунореактивность в иммуноблоте регистрировалась даже тогда, когда антитела не выявлялись в ИФА.

Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» приводила к индукции антител, которые были специфичны к рекомбинантным антигенам (гес(24-41), гес р24, rec gp41). Кроме того, индуцированные вакциной антитела специфически взаимодействовали с соответствующими антигенами ВИЧ (р24, р55, gp41). Максимальный уровень образования антител наблюдался после 4-й иммунизации. Антительный ответ был достаточно продолжительным и наблюдался в течение б месяцев после последней иммунизации.

При создании протокола иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» был использован накопленный опыт международных клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. В частности, как было показано ранее [Belshe et al., 1994; Gorse et, al., 1995; Graham et al., 1996, 2001], увеличивающиеся промежутки между иммунизациями приводят к более выраженному эффекту, чем частые (ежемесячные) иммунизации. При этом, если 4 последовательные иммунизации приводили к усилению иммунного ответа, 5-я иммунизация иммунный ответ не усиливала. В схеме иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» промежуток между 1-й и 2-й иммунизациями составлял 4 недели, между 2-й и 3-й иммунизациями - 8 недель, между 3-й и 4-й иммунизациями - 12 недель.

Рис. 3. Динамика образования антител при иммунизации добровольцев различными дозами вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

а). Группа 1 (2,5 мкг)

2.1.1

3.1.1

cut-off

5.1.1

f г ; ? е

Ж

U М tt t t tt t t

Иммунизация Иммунизация Иммунизация

cut-off

П,П|п,П,П

б). Группа 2 (5,0 мкг)

9.1.2

14.1.2

.1,1.1.1,1,1,1,I.I,rt.«,

tt t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация

cut-off

в). Группа 3(10 мкг)

15.1.3

21.2.3

■-■.И,I,■,■,■.I.I,1.1

b

tt t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация 31

tt t t

Иммунизация

Рис. 3 (продолжение). Динамика образования антител при иммунизации добровольцев различными дозами вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

18.1.4

cut-off

.п.Я.

г). Группа 4 (25 мкг)

20.1.4

30.1.4

■Д,м.и.И,И

it

|,и,■.■,■.■.■,■,■,■,Ж,h

tt t t

Иммунизация

ft t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация

14

24.1.5

cut-off

-В-ЛВ-Я-Д-Д,

д). Группа 5 (50 мкг)

26.1.5

29.1.5

.■■■.■■Д.и.

Jul

v> <• г- м * о -> m г- •• о — . »j * г» • ® —

tt t t "" tt t t "" tt t t ""

Иммунизация Иммунизация Иммунизация

Титры антител, индуцированных при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» (среднее геометрическое титра антител, GMT, составляло 10 - 100,8) (табл.5), превышали таковые, обнаруженные в зарубежных клинических исследованиях кандидатных субъединичных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин на основе рекомбинантных антигенов ВИЧ-1 (значение GMT составляло 11-32) [Keefer et al., 1996; Graham et al., 1996, 2001], или соответствовали им. Важно отметить, что наличие в составе вакцины

«ВИЧРЕПОЛ» иммуностимулятора полиоксидония, химически связанного с белком-антигеном, позволяет использовать для иммунизации низкие дозы вакцины. Максимальная доза вакцины, используемая в настоящем клиническом исследовании, составляла 50 мкг по белку. Эта доза в 5-10 раз ниже тех, которые применялись в зарубежных исследованиях при иммунизации субъединичными анти-ВИЧ/СПИД-вакцинами. В частности, в III фазе клинических испытаний кандидатной вакцины AIDSVAX доза препарата составила 600 мкг (по 300 мкг каждого рекомбинантного белка), а в ряде других клинических исследований были применены дозы 500 и даже 1000 мкг [Graham, 2000]. При этом в состав кандидатных вакцин входили различные адъюванты (гидроокись алюминия, MF59 - сквален в виде водной эмульсии, QS21 - соединение из группы сапонинов, интерлейкины, факторы роста), но ни в одном препарате адъювант не был химически соединен с антигеном.

Табл. 5. Минимальный и максимальный титры антител, индуцированных при иммунизации добровольцев вакциной "ВИЧРЕПОЛ» в ИФА для антигенов гес(24-41), гес р24 и гес ар41.__

Антиген Титры антител (min - max) Среднее геометрическое титра антител (GMT) (min - max)

гес(24-41) 1:10-1:320 10-100,8

гес р24 1:10-1:160 10-80

гес gp41 1:10 10

Таким образом, вакцина «ВИЧРЕПОЛ» индуцировала образование специфических антител, взаимодействующих как с антигенами вакцины, так и с антигенами ВИЧ. Так как при этом практически не наблюдалось образования антител против антигенов ВИЧ, не входящих в состав вакцины, спектр индуцируемых антител легко позволял отдифференцировать эффект вакцинации от антителообразования, индуцируемого ВИЧ-инфекцией.

В процессе исследования образцов сывороток иммунизированных добровольцев были выявлены в основном антитела, которые связывали рекомбинантные белки гес(24-41), гес р24 (в ИФА), а также белки культурального вируса - р24 и его предшественник р55 (в иммуноблоте). Одной из задач последующих клинических исследований будет совершенствование протокола иммунизации с целью усиления образования антител против £р41.

Индукция образования антител против р24 при иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» заслуживает специального внимания. р24-специфическому иммунному ответу придается особое значение при разработке терапевтических вакцин против ВИЧ-инфекции. Терапевтическая вакцинация представляет

собой важное направление в исследованиях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Основной целью терапевтической вакцинации является элиминация ВИЧ-инфицированных клеток, что приводит к уничтожению вируса в резервуарах, которые недоступны для действия антиретровирусных препаратов. Несмотря на ряд первоначальных неудач, исследования в этой области значительно расширились. В качестве терапевтических вакцинных препаратов исследуются кандидатные вакцины на основе рекомбинантных белков и пептидов, вирусные векторы и ДНК-вакцины, вакцины на основе дендритных клеток, а также препараты, содержащие инактивированный ВИЧ (например, Remune). В частности, было обнаружено, что индукция р24-специфических CDS+-T-клеток при терапевтической иммунизации ВИЧ-инфицированных пациентов рекомбинантной анти-ВИЧ-вакциной на основе вируса оспы канареек (vCP1433) могла приводить к продолжительному сохранению низкой вирусной нагрузки после планового прерывания APT и существенному увеличению периода времени между курсами APT [Tubian et al., 2005]. Важность и перспективность исследований терапевтической вакцинации против ВИЧ-инфекции/СПИДа подчеркнул лауреат Нобелевской премии Л.Монтанье [MontagnierL., 2008].

Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о потенциальной возможности применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов. В пользу этого говорит также успешное использование полиоксидония для превенции ВИЧ-инфекции в дискордантных парах [Кузина Т.Н. и соавт., 2002, 2008; Сизякина Л.П. и соавт., 2004].

Исследование нейтрализующей активности антител, индуцированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ»

Нейтрализующая активность образцов сывороток добровольцев, иммунизированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ», была проверена выборочно - в 4-й и 5-й группах. В образцах сывороток добровольцев 20.1.4, 24.1.5, 26.1.5, 29.1.5 была выявлена нейтрализующая активность, которая составляла соответственно 44,4%, 26,4%, 26,0%, 29,7% при разведении сыворотки 1:10. Ранее, в доклинических исследованиях вакцины «ВИЧРЕПОЛ» было обнаружено, что сыворотки иммунизированных животных были способны нейтрализовать ВИЧ в культуре in vitro (индекс нейтрализации составил 54,9%). Одной из задач последующих клинических исследований будет совершенствование протокола иммунизации с целью усиления образования антител против gp41.

Клеточный иммунный ответ

Иммунизация всеми исследованными дозами вакцины «ВИЧРЕПОЛ» не сопровождалась достоверным изменением индекса антиген-специфической пролиферации лимфоцитов периферической крови у вакцинированных добровольцев. Хотя в отдельных случаях и были выявлены относительно высокие значения индекса лимфопролиферации (3,2-3,5), в целом его значения до и после иммунизации не отличались достоверно (рис.4). Это наблюдение является важным свидетельством в пользу безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так как чрезмерная активация пролиферации существенно увеличивает вероятность инфицирования лимфоцитов ВИЧ.

а). Группа 1 (2,5 мкг)

3« +

511,5 4.

5 i

3,5 т

б). Группа 2 (5 мкг)

5" 2,5 ■ •

Визиты

§. 1,5 с

о 1

а

Ч 0.5

"В 5 I i i

Визиты

Н-1-1-1

2 3 4 6 9 11

§ 1.5

с.

§ 0,5 S

о

в). Группа 3 (10 мкг)

1-. о

f!{

Визиты

Ч

г). Группа 4 (25 мкг)

§1.5"

1-. П

5 5

Визиты -»-1-1

д). Группа 5 (50 мкг)

§2,5 п.

4 1,5

о

& 1

а 0,5 ■ ■

■ ■ в 1

Визиты

Ч

Рис.4. Антиген-специфический лимфопролиферативный ответ при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» (индекс пролиферации, М±т).

а). Группа 1 (2,5 мкг).

< 11 Визиты

в). Группа 2 (5,0 мкг).

О 6,1.2 (С 04+)

А 1.1.2 (С 04+)

С 14.1.2 {С04+)

♦ Средне«

■шах

Визиты

б). Группа 1 (2,5 мкг).

2000 15001 1000

О -

□ и

О

О 2.1.1 {СОВ*)

А 3.1 Л (С08+)

□ 5.1.1 (С08+}

♦ Среднее

-тах

г 5 « в • 11 Визиты

г). Группа 2 (5,0 мкг).

1500 1000

■—в 1 п Д~

гпт

О «.1.2 (СРВ*)

А 9.1.2 {С09+)

□ 14.1.2 (СОВ»)

♦ Среднее

*т1п

■та*

Визиты

д). Группа 3 (10,0 мкг).

Д А

2 8.5 8 В В д

О 13.1.3 (С04+)

А 15.1.3 (С 04+)

□ 21.2.3 (СМ*)

• Среднее

тех

Визиты

е). Группа 3 (10,0 мкг).

ж). Группа 4 (25 мкг).

20001

1500< 10001 £ □ $ ° 5 2 ^

5001 и д

о 18.1.4 (СП4+)

А 20.1.4 (С04+)

□ 30.1Д (С04+)

♦ Среднее

■%п(п "тех

з). Группа 4 (25 мкг).

0-2-0-0-л

ГмТТв

_п_

О 18.1.4 (С08+)

А 20.1.4 (СОВ*)

□ 30.14 (С08+)

Среднее

■тМ

■тех

Визиты

и Визиты

и). Группа 5 (50 мкг).

О 24.1Л (С04+)

А 25.1.6 (С04+)

□ 29.1.5 (С 04+)

♦ Среднее

■т!п

■тех

'Визиты

к). Группа 5 (50 мкг).

8

О 24.1.6 (С 08+)

А 26.1.5 (С08+)

□ 29.1.8 (С08+)

♦ Среднее

Визиты

Рис. 5. Динамика абсолютного количества СВ4+-Т-клеток- и С1)8+-Т-клеток при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

а) Группа 1 (2,5 мкг)

б) Группа 2 (5,0 мкг)

з

2,5 2 1.5 1

0,5 0

О 2.1.1 Q (CD4/CD8)

о ^CD4/CD8)

а □ □ (CD4/CD8) ♦ Среднее

* А * i ; * ■^■"min

о » ° п ° Z v max

■ I I 2 3

4 6

I I

9 11

2,52> 1.5« 1 ■ 0,5-О-

О 6.1.2

JCD4/CD8)

О 14.1.2

(CD4/CD8) ♦ Среднее

й * ft * а —I

о о 0 а д

Среднее ■тт

"max ! Визиты-

в) Группа 3 (10 мкг) Зч

г) Группа 4 (25 мкг)

О 13.1.3

^CD4/CD8) 3-

(CD4/CD8) 2,5-

а >12.3 '

О (CD4/CD8) ♦ Среднее 1,5-

-ft min

Д

0,5-

11 Визиты

$ " ♦ * ♦

ill

2 3 4 1

О 18.1.4

Д (CD4/CD8)

□ |CD4/CD8)

♦ (CD4/CD8) Среднее

•min

■max

Визиты

д) Группа 5 (50 мкг)

О 24.1.5

Д (CD4/CD8) 26.1.5

□ (CD4/CD8) 29.1.5

♦ (CD4/CD8) Среднее

"тт

тах

Визиты

Рис.б. Соотношение С04*/С08+ при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не приводила в значимым изменениям показателей Т-клеточного иммунного ответа.

Несмотря на то, что в отдельных случаях у индивидуальных добровольцев обнаруживались отклонения абсолютного количества С04+-Т-клеток и С08+-Т-клеток от нормальных значений, средние уровни С04+-Т-клеток и С08+-Т-клеток в каждой группе соответствовали норме (рис.5).

Среднее значение иммунорегуляторного индекса (соотношение CD4+/CD8+) также соответствовало диапазону нормальных значений во всех группах добровольцев (рис.6).

В периферической крови иммунизированных добровольцев не было выявлено антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток.

Оценка количества С04+-Т-клеток является стандартным тестом для прогнозирования прогрессии ВИЧ-инфекции в СПИД, для формулировки дифференциального диагноза у симптоматического пациента, а также для принятия решения о применении антиретровирусной терапии и профилактике оппортунистических инфекций (патогенов). Этот параметр считается наиболее надежным индикатором для прогноза развития заболевания. Определение количества С04+-Т-клеток и С08+-Т-клеток также важно для оценки иммунного ответа, индуцируемого кандидатными вакцинами.

Опыт клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, стимулирующих Т-клеточный иммунный ответ, показал, что индуцированное вакциной возрастание количества Т-клеток, в том числе и С04+-Т-клеток, может являться серьезным фактором риска ВИЧ-инфекции у вакцинированных добровольцев, так как создается потенциальный резервуар для вируса. Как было обнаружено в клиническом исследовании HVTN 502/Merck 023 («STEP»), количество ВИЧ-инфицированных в группе реципиентов кандидатной вакцины MRK-Ad5 было выше, чем в группе реципиентов плацебо. В качестве одной из причин такого результата эксперты рассматривают повышение уровня CD4+-T-клеток у иммунизированных добровольцев, которые имели предсуществующий иммунитет против аденовируса (рекомбинантный аденовирус серотипа 5 является вектором в кандидатной вакцине MRK-Ad5). По мере анализа материалов, собранных в процессе клинического исследования «STEP», накапливаются все новые данные в пользу этого предположения.

Вслед за остановкой клинических испытаний кандидатной вакцины MRK-Ad5 было остановлено еще несколько действующих и запланированных испытаний кандидатных вакцин, предназначенных для индукции клеточноопосредованного иммунного ответа, в том числе клиническое исследование PAVE 100 (фаза II Ь), к участию в котором предполагалось привлечь 8500 добровольцев.

На международной конференции «AIDS Vaccine 2008» (13-17 октября 2008 г., Кейптаун, ЮАР), которая была организована под эгидой Global HIV Vaccine Enterprise, активно обсуждался вопрос о необходимости с особой осторожностью подходить к клиническим испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-

вакцин, ожидаемым эффектом которых является системная индукция ВИЧ-специфических Т-клеток. Некоторые исследователи даже ставили под сомнение целесообразность дальнейшей разработки таких кандидатных вакцин. В этой связи данные о том, что вакцина «ВИЧРЕПОЛ» не вызывала существенных изменений показателей клеточного иммунитета, могут являться важной дополнительной характеристикой безопасности этого препарата с точки зрения отсутствия риска повышения восприимчивости иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции.

Выбор безопасной вакцинирующей дозы

Как показали результаты проведенного клинического исследования, все пять исследованных доз вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (2,5 - 50,0 мкг по белку) были безопасны и хорошо переносились добровольцами. Ни одна из дозировок вакцины не вызывала неблагоприятных побочных эффектов. Иммунный ответ, зарегистрированный при иммунизации добровольцев, зависел от дозы вакцины. В 1-й и 2-й группах (иммунизирующие дозы 2,5 и 5,0 мкг по белку соответственно) образование антител в ответ на вакцину наблюдалось у одного добровольца из каждой группы, в 3-й группе (иммунизирующая доза 10,0 мкг по белку) значимые уровни образования антител были обнаружены у двух добровольцев, а в 4-й и 5-й группах (иммунизирующие дозы 25,0 и 50,0 мкг по белку соответственно) индуцированное вакциной образование антител наблюдалось у всех добровольцев. Наиболее выраженный иммунный ответ наблюдался в 5-й группе. При этом у двух добровольцев в этой группе (24.1.5 и 29.1.5) обнаруживались наиболее высокие в настоящем исследовании титры антител против вакцинных антигенов, а также против антигенов ВИЧ. Таким образом, в качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза 50 мкг по белку.

Достижение первичной и вторичной конечных точек клинических испытаний I фазы - демонстрации безопасности вакцины и получения данных о ее иммуногенности - дает основание для планирования последующих клинических исследований II фазы. Отчет о результатах I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» успешно прошел экспертизу и согласован в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора. Рекомендовано продолжить исследования и переходить ко II фазе клинических испытаний, предметом которых и станет иммуногенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

Клиническое исследование вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в 2005 году было зарегистрировано в международном Реестре клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин International AIDS Vaccine Initiative (индекс регистрации -HVRF-380-131004), а вакцина «ВИЧРЕПОЛ» была включена в международный рейтинг-лист перспективных кандидатных вакцинных препаратов Global HIV Vaccine Enterprise - основной международной организации, координирующей исследования в области разработки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

На международной конференции «AIDS Vaccine 2008» (13-17 октября 2008 г., Кейптаун, ЮАР), был опубликован обновленный рейтинг-лист Global HIV Vaccine Enterprise, куда вакцина «ВИЧРЕПОЛ» была включена в числе 22 перспективных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, отобранных из 150 препаратов-претендентов. Также вакцина «ВИЧРЕПОЛ» вошла в обновленный международный Реестр клинических испытаний IAVI.

ВЫВОДЫ

1. Сформирована первая в Российской Федерации стабильная когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Часть когорты в соответствии с «Протоколом исследования» была включена в I фазу клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ», другая часть является основой для проведения последующих клинических испытаний II фазы. Когорта имеет перспективы для расширения.

2. Превалирующие мотивы участия добровольцев в клинических испытаниях имели альтруистический характер: помощь ВИЧ-инфицированным людям и вклад в научные исследования. Прагматические мотивы (бесплатное медицинское обследование и получение вознаграждения) не имели определяющего значения. Наиболее эффективным привлечение добровольцев было среди дискордантных пар (один из партнеров ВИЧ-инфицирован, другой - нет).

3. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» является безопасной, хорошо переносится при введении, не вызывает неблагоприятных побочных эффектов.

4. Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» вызывала образование ВИЧ-специфических антител, которые взаимодействовали как с рекомбинантными белками (гес(24-41), гес р24), так и с белками культурального ВИЧ-1. При этом в основном выявлялись антитела, связывающиеся с белком р24 и его предшественником р55. Антительный ответ был достаточно продолжительным и наблюдался в течение 6 месяцев после последней иммунизации.

5. Иммунный ответ, вызываемый вакциной «ВИЧРЕПОЛ», носит дозозависимый характер. С повышением дозы вакцины возрастает как

величина индивидуального иммунного ответа (уровень антител к ВИЧ в крови добровольцев), так и число добровольцев со специфическим иммунным ответом.

6. Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о потенциальной возможности применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве иммунотералевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

7. Сыворотки добровольцев, иммунизированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ», обладали нейтрализующей активностью. Задачей дальнейших исследований станет разработка протокола иммунизации, приводящей к индукции максимально значимых титров антител против gp41.

8. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не выявлено антиген-специфической пролиферации лимфоцитов в периферической крови. Это является важным свидетельством в пользу безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так как чрезмерная активация пролиферации существенно увеличивает вероятность инфицирования лимфоцитов ВИЧ.

9. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не обнаруживалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунитета: абсолютное количество С04+-Т-клеток и СВ8+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови оставались в пределах нормы. Отсутствие активации CD4+-T-mieTOK под влиянием вакцины «ВИЧРЕПОЛ», может рассматриваться как дополнительный фактор безопасности вакцины (активация С04+-Т-клеток под влиянием вакцинирующего препарата рассматривается как фактор, потенциально повышающий восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции и выделяется в руководящих документах B03/UNIAIDS как самостоятельный аспект безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин).

10. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза 50 мкг по белку.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хаитов P.M., Решетников A.B., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Клинические испытания первой отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. 2009, М., «ГЭОТАР-Медиа», 671 с.

2. Гудима Г.О., Игнатьева Г.И., Николаева И.А., Сидорович И.Г., Хаитов P.M. Пандемия ВИЧ/СПИД: контроль, анти-ВИЧ-вакцины, современное состояние проблемы и перспективы в России. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №1, с.30-35.

3. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Апрятин С.А., Гудима Г.О., Воробьева М.С., Хаитов P.M. Перспективы контроля пандемии ВИЧ/СПИДа: вакцины и микробициды. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №2, с.62-73.

4. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Апрятин С.А., Некрасов A.B., Пучкова Н.Г., Савинова ИВ., Иванова A.C., Гудима Т.О., Воробьева М.С. Перспективы контроля эпидемии ВИЧ/СПИДа в России: первая отечественная вакцина против ВИЧ/СПИД ВИЧРЕПОЛ готова для проведения I фазы клинических испытаний. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №2, с.74-84.

5. Nikolaeva I., Korobova S., Chevalier A., Ignatjeva G., Karamov E., Kornilaeva G., Pavlova T., Vorobjova M., Savinova I., Nekrasov A., Ivanova A., Gudima G.O., Khaitov R., Sidorovich I. HIV Epidemie Profile in Russia and Preparing for Clinical Trials of the First Russian HIV Vaccine "VICHREPOL". XV International AIDS Conference, (July 11-16, 2004, Bangkok, Thailand). Medimond International Proceedings, 2004, v.3, p.157-160.

6. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин: современное состояние проблемы. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, 63-69.

7. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Шевалье А.Ф., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Перспективы иммунотерапии ВИЧ-инфекции и СПИДа, анти-ВИЧ/СПИД-вакцины и микробициды. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, с.82-88.

8. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Шевалье А.Ф., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Иммунотерапия ВИЧ-инфекции и СПИДа. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.80-89.

9. Гудима Т.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Первая отечественная анти-ВИЧ-вакцина на стадии клинических испытаний. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.107-116.

10. Гудима Г.О., Николаева И.А., Сидорович И.Г., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Ольховик Е.И., Воробьева М.С., Чеканова Т.А., Хаитов P.M. Формирование единой системы испытаний иммуногенов и вакцинирующих препаратов против ВИЧ/СПИД и разработка программы I фазы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины ВИЧРЕПОЛ. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.117-121.

11. Сидорович И.Г., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Гудима Г.О., Николаева И.А., Гасанов В.А., Киселев A.B., Игнатьева Г.А., Скляров Л.Ю., Истамов Х.И., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Хаитов P.M. Пути повышения иммуногенности вакцин против ВИЧ/СПИДа. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №9, с.17-23.

12. Николаева И.А., Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Шевалье А.Ф.,Игнатьева Г.А. Коробова C.B., Гасанов В.А., Киселев A.B., Истамов Х.И., Ефремов Е.Е., Карамо

Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Воробьева М.С., Чеканова Т.А., Петрова Т.В., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П., Хаитов P.M. Разработка тест-систем для диагностики и мониторинга результатов иммунизации и лечения больных СПИДом. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №12, с.3-11.

13. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Хаитов P.M. Перспективы контроля пандемии ВИЧ-инфекции/СПИДа - гуманитарной катастрофы современности. Медицина экстремальных ситуаций,2006,№2,с.5-11.

14. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Николаева И.А., Гудима Г.О., Карпенко Л.И., Расщепкина М.Н., Волкова P.A., Коробова C.B., Некрасова H.A., Бажан С.И., Сидорович И.Г., Ильичев A.A., Бектимиров Т.А. Разработка информативных методов контроля на доклиническом уровне первых отечественных вакцин-кандидатов против ВИЧ/СПИД. Физиология и патология иммунной системы, 2006, №3, с.21-28.

15. Чеканова Т.А., Карпенко Л.И., Плясунова O.A., Воробьева М.С., Некрасова H.A., Бажан С.И., Расщепкина М.Н., Гудима Г.О., Николаева И.А., Коробова C.B., Бектимиров Т.А., Ильичев A.A., Карамов Э.В., Сидорович ИГ. Изучение специфических показателей иммунного ответа у мышей при введении первых отечественных экспериментальных вакцин против ВИЧ/СПИД. Физиология и патология иммунной системы, 2006, №4, с. 15-19.

16. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Бектимиров Т.А., Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Коробова C.B. Кандидат-вакцина против ВИЧ/СПИД «ВИЧРЕПОЛ». Адаптация различных модификаций ИФА и иммунного блоттинга для отработки и стандартизации тестов подлинности и специфической активности препарата. Вопросы вирусологии, 2006, т.51, №4, с.42-45.

17. Петров Р.В., Хаитов P.M., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Николаева И.А., Гудима Г.О. Приматы как модель для создания и оценки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Использование других экспериментальных моделей. Перспективные1 направления использования лабораторных приматов в медико-биологических исследованиях. Материалы Всероссийской научной конференции (8-10 августа 2006 г., Сочи-Адлер). Краснодар, «Наука Кубани», 2006, с.27-32.

18. Хаитов P.M., Гудима Г.О. Основные тенденции современной иммунологии и новые подходы к созданию вакцин против опасных и широко распространенных заболеваний (ВИЧ-инфекция, малярия, туберкулез). Российский Аллергологический Журнал, 2007, №6, с.49-56.

19. Хаитов P.M., Решетников A.B., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Подготовка когорт добровольцев для клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин: настоящее и будущее. Физиология и патология иммунной системы, 2007, №11, с. 3-16.

20. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Решетников A.B., Хаитов P.M. Клинические испытания и их вклад в совершенствование анти-ВЙЧ/СПИД-вакцин. Физиология и патология иммунной системы, 2007, №12, с. 3-19.

21. Хаитов P.M., Гудима Г.О. Перспективные подходы к разработке вакцин против опасных и широко распространенных заболеваний (ВИЧ-инфекция,

малярия, туберкулез) и основные направления современной иммунологии. Физиология и патология иммунной системы, 2007, №12, с.20-27.

22. Хаитов P.M., Решетников А.В., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Подходы к формированию когорт добровольцев для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Иммунология, 2008, т.29, №2, с.68-79.

23. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Решетников А.В., Хаитов P.M. Опыт клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Иммунология, 2008, т.29, №5, с.252-263.

24. Хаитов P.M., Решетников А.В., Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В. Анализ проведения клинических испытаний вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа в зарубежных странах и в России. Социология медицины, 2008, №1 (12), с.32-44.

25. Апрятин С.А., Рубан С.В., Николаева И.А., Вазыхова Ф.Г., Запорожко JI.B., Мамчик Т.А., Гудима Г.О., Сидорович И.Г. Влияние генетических факторов ВИЧ1 и человека на течение ВИЧ-инфекции. Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии. М., ВИНИТИ, 2002, т.П, с.565

26. Nikolaeva I.A., Apiyatin S.A., Ruban S.V., Vazykhova F.G., Gudima G.O. Sidorovich I.G. Association between CCR5 genotype (heterozygous 32-bp deletion an m303 mutation) and the course of HIV disease. Allergy, 2003, v.58,, suppl.74, p.320.

27. Sidorovich I., Apryatin S., Nikolaeva I., Ruban S., Vazykhova F., Zaporozhko L., Gudima G.O. Molecular and immunological profile of current HIV1 epidemic in Russia. Immunology Letters, 2003, v.87, no.1-3, p.194.

28. Бектемиров T.A., Воробьева M.C., Расщепкина M.H., Чеканова Т.А., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Коробова С.В., Игнатьева Г.А. Доклиническое изучение кандидат-вакцины против ВИЧ/СПИД «ВИЧРЕПОЛ». Аллергия, астма и клин, иммунол., 2003, №9, с.136-140.

29. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Николаева И.А., Коробова С.В., Сидорович И.Г., Карпенко Л.И., Ильичев А.А., Гудима Г.О., Бектимиров Т.А. Адаптация комплекса лабораторных методов для контроля кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД. Russian J. of Immunol., 2004, v.9, suppl.I, p.191.

30. Гудима Г.О., Богова A.B., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Эпидемия ВИЧ-инфекции/СПИД и начало клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины ВИЧРЕПОЛ в России. Russian J. of Immunol., 2004, v.9, suppl.I, p. 192.

31. Gudima G.O., Bogova A.V., Nikolaeva I.A., Sidorovich I.G. Recent HIV/AIDS epidemic profile and the start of clinical trials of anti-HIVl/AIDS vaccine VICHREPOL in Russia. Allergy, 2004, vol.59, no.6, suppl., p.247.

32. Chekanova T.A., Nikolaeva I.A., Karpenko L.I., Korobova S.V., Sidorovich I.G., Gudima G.O., Ilichev A.A., Vorobieva M.S., Raschepkina M.N., Bektimirov T.A. Comparative studies of the specific activity of Russian candidate vaccines against HIV/AIDS. Clinical and Investigative Medicine, 2004, v.27, no.4, p. 193A.

33. Трубченинова Л.П., Ильина Н.И., Гудима Г.О., Трефильева Н.Ф., Баранова И.В., Ищенко М.Е., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области в 1999-2003 годах. Материалы

Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр.8-9.

34. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Игнатьева Г.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Карамов Э.В., Хаитов P.M. Оценка кандидатных анти-ВИЧ-вакцин методом ELISPOT. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 10-11.

35. Трубченинова Л.П., Ильина Н.И., Гудима Т.О., Трефильева Н.Ф., Баранова И.В., Ищенко М.Е., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области в 1999-2003 годах. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 18-19.

36. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Игнатьева Г.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Карамов Э.В., Киселев A.B., Гасанов В.А., Хаитов P.M. Анти-ВИЧ/СПИД-вакцины и микробициды: создание и клинические испытания. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября -1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 177-179.

37. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Игнатьева Г.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Карамов Э.В., Киселев A.B., Гасанов В.А., Хаитов P.M. Микробициды - новое направление в борьбе с ВИЧ-инфекцией. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 180-181.

38. Чеканова Т.А., Николаева И.А., Карпенко Л.И., Коробова C.B., Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Ильичев A.A., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., 4 Бектимиров Т.А. Сравнительное изучение специфической активности российских кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 181-182.

39. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Коробова C.B., Шевалье А.Ф., Грачев С.А., Гудима Г.О., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Воробьева М.С., Хаитов P.M. Анти-ВИЧ/СПИД-вакцина «ВИЧРЕПОЛ» готова к проведению клинических испытаний. Материалы 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций. 2004, М., МЗ РФ, с.63.

40. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Бектимиров Т.А., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Коробова C.B., Карпенко Л.И., Ильичев A.A., Некрасова H.A. Разработка и стандартизация лабораторных тестов оценки подлинности и специфической активности вакцин-кандидатов против ВИЧ/СПИД. Материалы 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии

«Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций. 2004, М., МЗ РФ, с.75-76.

41. Trubcheninova L.P., Ilina N.I., Gudima G.O., Trefilieva N.I., Baranova I.V., Gorbunova Z.A., Ischenko M.E., Nikolaeva I.A., Sidorovich I.G. Analysis of epidemic profile of HIV infection in Moscow and Moscow region during 1999-2004. Allergy and Clinical Immunology International, 2005, suppl.l, p. 130.

42. Gudima G.O., Nikolaeva I.A., Sidorovich I.G., Korobova S.V., Chekanova T.A., Vorobieva M.S., Raschepkina M., Bektimirov T.A. Clinical trials of HIV/AIDS vaccine started in Russian Federation. Allergy and Clinical Immunology International, 2005, suppl. 1, p. 131.

43. Трубченинова Л.П., Гудима Г.О., Трефильева Н.Ф., Баранова И.В., Горбунова З.А., Ищенко М.Е., Милочкина Ю.Н., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Особенности распространения ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области в 1999-2004 годах. Цитокины.и воспаление, 2005, т.4, №3, с. 146.

44. Чеканова Т.А., Карпенко Л.И., Некрасова H.A., Плясунова O.A., Николаева И.А., Коробова С.В., Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Юдина О.С., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Ильичев A.A. Анализ специфических показателей иммуногенности отечественных кандидат-вакцин против ВИЧ/СПИД. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, с. 148.

45. Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Гудима Г.О. Стабилизация выявления положительных и сомнительных образцов в процессе мониторинга ВИЧ-инфекции. Аллергология и иммунология в педиатрии, 2005, т.6, пр.1, с. 189-190.

46. Sidorovich I.G., Nikolaeva I.A., Gudima G.O., Korobova S.V., Gornostaeva Yu.A., Trubcheninova L.P., Klimenko T.V., Pinegin B.V., Chernousov A.D., Chevalier A.F., Gasanov V.A., Kiselev A.V., Karamov E.V., Kornilaeva G.V., Pavlova T.V. Ongoing clinical trials of HIV vaccine VICHREPOL. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, p.437 (al602).

47. Kiselev AV., Gasanov V.A., Toporova V.A., Shevalier A.F., Gudima G.O., Nikolaeva I.A., Korobova S.V., Sidorovich I.G. HIV/AIDS clade A DNA vaccine creation. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, al600.

48. Trubcheninova L.P., Trefilieva N.F., Baranova I.V., Ishchenko M.E., Gorbounova Z.A., Gudima G.O., Ilina N.I., Sidorovich I.G. Absence of HIV-infected persons among blood donors during mass screening. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, al601.

49. Chekanova T.A., Vorobieva M.S., Karpenko L.I., Ilichev A.A., Nikolaeva I.A., Gudima G.O., Korobova S.V., Chevalier A.F., Sidorovich I.G., Karamov E.V. Properties of immune response induced in mice by different HIV/AIDS Russian candidate vaccines. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, p.437 (al603).

50. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Коробова С.В., Хаитов P.M. Формирование когорт добровольцев для проведения клинических испытаний как ключевой вопрос создания вакцин против СПИДа. Материалы IV международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (30 октября - 5 ноября 2005 г., Бенидорм, Испания), с.49-50.

51. Trubcheninova L.P., Trefiliyeva N.F., Gudima G.O. Stabilization of positive and questionable samples detection in HIV monitoring. Материалы конгресса «Иммунитет и болезни. От теории к терапии» (3-7 октября 2005 г., Москва). М.,

2005, с.53-54.

52. Kofiadi I., Trofimov D., Gudima G., Alexeev L. Genetic succeptibility to HIV-1 infection in 4 populations from Russia. Proc. XVI Eur. Congr. Immunol. (Sep. 6-9,

2006, Paris). ECI, Paris, France, 2006, p. 129.

53. Troubchaninova L.P., Trefilieva N.F., Baranova I.V., Ishchenko M.E., Gorbounova Z.A., Gudima G.O., Nikolaeva I.A., Korobova S.V., Gomostaeva Yu.A., Latysheva T.V., Ilina N.I., Sidorovich I.G. Undetermined data of sera immunoblot testing for HIV-1 concerned to mass screening and HIV vaccine clinical trials. Proc. XVI Eur. Congr. Immunol. (Sep. 6-9, 2006, Paris). ECI, Paris, France, 2006, p. 173.

54. Nikolaeva I., Korobova S., Chevalier A., Gudima G., Gomostaeva J., Trubcheninova L., Klimenko Т., Pinegin В., Chernousov A., Gasanov V., Kiselev A., Karamov E., Komilaeva G., Pavlova Т., Khaitov R., Sidorovich I. Clinical trials of the first Russian HIV vaccine Vichrepol are in progress. Proc. of XVI International AIDS Conference (August 13-18,2006, Toronto, Canada), B35, p. 190.

55. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Коробова C.B., Шевалье А.Ф., Гудима Г.О., Горностаева Ю.А., Трубченинова Л.П., Клименко Т.В., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Гасанов В.А., Киселев А.В., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Хаитов P.M. Биотехнологические подходы в борьбе с ВИЧ/СПИД. Четвертый московский международный конгресс «Биотехнология; состояние и перспективы развития», Москва, 12-16 марта 2007 г.

56. Trubcheninova L., Gudima G., Baranova I., Trefilieva N., Gorbunova Z., Ischenko M., Fedenko E., Korobova S., Nikolaeva I., Ilina N., Sidorovich I. False-positivity in human sera testing on HIV 1 and 2 antibodies. Allergy, 2007, v.62, s.83, p.492.

57. Korobova S., Nikolaeva I., Chevalier A., Gomostaeva Yu., Trubcheniniva L., Gorbunova Z., Goudima G., Pinegin В., Chernousov A., Petrova Т., Trofimov D., Sidorovich I. Analysis of the safety and the immunogenicity of the gag-env HIV1 recombinant protein-based vaccine "VICHREPOL" in healthy adults. Allergy, 2007, v.62, s.83, p.493.

58. Гудима Г.О., Николаева И.А., Коробова C.B., Горностаева Ю.А., Клименко Т.В., Шевалье А.Ф., Сеславина Л.С., Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.А, Ищенко М.Е., Петрова Т.В., Трофимов Д.Ю., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Ильина Н.И., Латышева Т.В., Алексеев Л.П., Карамов Э.В., Сидорович И.Г. Первые клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в Российской Федерации: формирование когорт добровольцев. Российский Аллергологический Журнал, 2007, №3, пр.1, с.320-321.

59. Трубченинова Л.П., Гудима Г.О., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.А., Ищенко М.Е., Коробова С.В., Николаева И.А., Ильина Н. И., Сидорович И.Г. Актуальность проблемы ВИЧ-инфекции у беременных женщин. Российский Аллергологический Журнал, 2007, №3, пр.1, с.325.

60. Трубченинова Л.П., Гудима Г.О., Баранова И.В., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.А., Ищенко М.Е., Феденко Е.С., Ильина Н.И., Сидорович И.Г. Ложноположительность при тестировании сывороток на антитела к вирусам иммунодефицита человека 1-2 типов. Российский Аллергологический Журнал, 2007, №3, пр.1, с.325-326.

61. Korobova S., Nikolaeva I., Chevalier A., Gomostaeva Y., Trubcheninova L., Gorbunova Z., Gudima G., Pinegin В., Petrova Т., Trofimov D., Sidorovich I. Clinical trial of recombinant gag-env HIV1 protein based vaccine VICHREPOL in healthy adults. Conference IAS 2007 - 3rd IAS Conference on HIV Pathogenesis and Treatment, July 24-27,2007, Abstract A-042-0045-04695.

62. Сидорович И.Г., Коробова C.B., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Горностаева Ю.А., Гудима Г.О., Гасанов В.А., Киселев А.В., Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Петрова Т.В, Трофимов Д.Ю. Клинические испытания первой Российской кандидатной вакцины против ВИЧ/СПИД «ВИЧРЕПОЛ». Медицина-2007.

63. Gudima G., Nikolaeva I., Korobova S., Gomostaeva J., Klimenko Т., Chevalier A., Trubcheninova L., Trefilieva N., Gorbunova Z., Ischenko M., Petrova Т., Trofimov D, Alexeev L., Pinegin В., Chernousov A., Latysheva Т., Ilina N., Karamov E., Sidorovich I. Cohort formation for first clinical trials of HIV/AIDS vaccine in Russian Federation. Antiviral therapy, 2007, v. 12, s.4, p. 131.

64. Trubcheninova L., Gudima G., Gorbunova Z., Trefilieva N., Ishchenko M., Korobova S., Nikolaeva I., Ilina N., Sidorovich I. False-positive and indeterminate Human Immunodeficiency Virus test results among blood donors during mass screening. Allergy, 2008, v.63, s.88, p.564-565.

65. Пронин А.Ю.,Каминский Г.Д., Моисеева А.В., Гудима Г.О., Коробова С.В., Николаева И.А., Карамов Э.В., Сидорович И.Г. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Московской области. Рос. иммунол. журнал, 2008, т.2, №11, с.268.

66. Korobova S., A. Chevalier, I. Nikolaeva, G. Gudima, Y.Gornostaeva, L. Trubcheninova, A.Chemousov, B.Pinegin, E.Karamov, T.Pavlova, G.Kornilaeva, T.Petrova, D.Trofimov, I.Sidorovich. Phase I Clinical Trials of a Candidate Vaccine Based on Fusion Recombinant Gag-gp41 Protein in Healthy HIV Negative Volunteers. AIDS Research and Human Retroviruses, 2008, v.24, s.l, p.237.

67. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Коробова C.B., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Гасанов В.А., Горностаева Ю.А., Клименко Т.В., Игнатьева Г.А., Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.П., Ищенко М.Е., Петрова Т.В., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Латышева Т.В., Ильина Н.И., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Хаитов P.M. Результаты первых в России клинических испытаний первой отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ». Рабочее совещание по вакцинопрофилактике ВИЧ (20-21 февраля 2009 г., Новосибирск). Сборник докладов и материалов. Новосибирск, изд-во «ЦЭРИС», 2009, с.64-70.

Подписано в печать 0 7. О ?. О 9 г- ф°РМат 60x84/16. Тираж 100 экз. Заказ Ч 2 С Отпечатано в службе множительной техники РОНЦ РАМН им. Н.Н. Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

 
 

Оглавление диссертации Гудима, Георгий Олегович :: 2009 :: Москва

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Виды и особенности вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа

1. Живые аттенуированные вакцины

2. Инактивированные вакцины

3. Вирусоподобные частицы (ВПЧ)

4. Субъединичные вакцины

Субъединичные вакцины на основе компонентов оболочки вируса

Субъединичные вакцины на основе неструктурных белков

Конъюгированные субъединичные вакцины

5. ДНК-вакцины и рекомбинантные векторные вакцины

6. Белки и пептиды слияния

7. Разработка сочетаний иммуногенов для «прайм-буст»-иммунизации

Противовирусный иммунный ответ, индуцированный вакциной

Принципы организации клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИДвакцин

Основные принципы надлежащих клинических исследований

GCP), международные и российские нормативные документы

Типы (виды) клинических испытаний

Протокол исследования

Что происходит во время клинических испытаний?

Добровольцы - участники клинических испытаний

Информированное согласие

Польза и риски участия в клинических испытаниях

Польза

Риски

Группа сравнения (контрольная группа)

Защита безопасности участников клинических испытаний

Этические аспекты

Правовые аспекты

Фазы клинических испытаний и задачи каждой фазы

Подходы к формированию когорт добровольцев

Методы исследований

Важность стандартизации методов лабораторной оценки в испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин

Подготовка персонала

Реагенты и хранение образцов

Системный подход к проведению клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, единый план разработки и испытаний вакцинных препаратов, организация стандартизованных международных мультицентровых исследований

Клинические испытания кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин

Обзор оцененных вариантов

Клинические испытания кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, предназначенных для индукции антител

Клинические испытания кандидатных анти-ВИЧ-вакцин, предназначенных для индукции клеточноопосредованного иммунного ответа

Безопасность исследованных кандидатных анти-ВИЧ/СПИДвакцин

Терапевтическая иммунизация против ВИЧ-инфекции/СПИДа

Анти-ВИЧ/СПИД-вакцины, содержащие инактивированные клетки

Вакцины против СПИДа на основе вирионов

Субъединичные кандидатные терапевтические анти-ВИЧ/СПИД-вакцины, содержащие рекомбинантные белки ВИЧ

Кандидатные терапевтические анти-ВИЧ/СПИД-вакцины на основе синтетических пептидов

ДНК-вакцины

Рекомбинантные вирусные векторы,, кодирующие белки ВИЧ-1,, < V 165 i

Липопептиды . д ! 166;

• Кандидатные терапевтические анти-ВИЧ/СПИД-пакцины на основе v дендритных клеток ' 167"

Адъюванты для иммунотерапии , :

Направления будущих исследований

Важность клинических испытаний эффективности . 173' ' !

Проблемы, связанные с проведением клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин

МАЖРИАЛЬГ И МЕТОДЫ

Исследуемый препарат ' ' ;

Дизайн исследования

Оценка безопасности и переносимости

Оценкаиммуногенности; ,

Формирование когорты добровольцев , . , 179 . /

Клинико-лабораторное обследование добровольцев Л

Получение сывороток

Определение анти-ВИЧ-антител в сыворотках крови иммунизированных добровольцев, с использованием' . диагностической системы для определенияантителгк ВИЧ1/2 <<Д(2-ИФАтАНТИУВИЧ^УНИФ>> (кат. tl50)i(HnO «Диагностические тест-системы», Нижний;Новгород)?

Определение антител к вакцинному антигену препарата «ВИЧРЕПОЛ» в сыворотках крови добровольцев

Определение антител против антигенов ВИЧ-1 в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с помощью иммуноблота

Выявление вирусного белка р24 в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с помощью ИФА

Определение генома ВИЧ Выделение лимфоцитов Криохранение лимфоцитов Постановка реакции лимфопролиферации

Определение CD4+- и СВ8+-Т-лимфоцитов и соотношения

CD4+/CD8+

Исследование антиген-специфической продукции интерферона-у лимфоцитами периферической крови (ELISPOT-анализ с применением набора BD № 551849, «Becton Dickinson», США)

Постановка реакции нейтрализации

Статистическая обработка данных

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Формирование когорты добровольцев

2. Оценка безопасности и переносимости вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Группа 1 (доза вакцины 2,5 мкг по белку)

Группа 2 (доза вакцины 5 мкг по белку)

Группа 3 (доза вакцины 10 мкг по белку)

Группа 4 (доза вакцины 25 мкг по белку)

Группа 5 (доза вакцины 50 мкг по белку)

3. Оценка иммуногенности (антигенной активности) вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Группа 1 (доза вакцины 2,5 мкг по белку)

Исследование гуморального иммунного ответа

Оценка клеточного иммунного ответа

Дифференциальная диагностика поствакцинального и инфекционного иммунного ответа

Группа 2 (доза вакцины 5,0 мкг по белку)

Исследование гуморального иммунного ответа

Оценка клеточного иммунного ответа

Дифференциальная диагностика поствакцинального и инфекционного иммунного ответа

Группа 3 (доза вакцины 10,0 мкг по белку)

Исследование гуморального иммунного ответа

Оценка клеточного иммунного ответа

Дифференциальная диагностика поствакцинального и инфекционного иммунного ответа

Группа 4 (доза вакцины 25,0 мкг по белку)

Исследование гуморального иммунного ответа

Оценка клеточного иммунного ответа

Дифференциальная диагностика поствакцинального и инфекционного иммунного ответа

Группа 5 (доза вакцины 50 мкг по белку)

Исследование гуморального иммунного ответа

Оценка клеточного иммунного ответа

Дифференциальная диагностика поствакцинального и инфекционного иммунного ответа

Определение среднего геометрического титра антител, максимального и минимального титра антител, индуцированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ»

Исследование нейтрализующей активности антител, 282 индуцированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ»

Сводные результаты I фазы клинических испытаний вакцины 283 «ВИЧРЕПОЛ»

Формирование когорты добровольцев

Безопасность и переносимость вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Иммуногенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Гуморальный иммунный ответ

Клеточный иммунный ответ

Выбор безопасной вакцинирующей дозы

 
 

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Гудима, Георгий Олегович, автореферат

Пандемия ВИЧ-инфекции/СПИДа является одним из величайших глобальных кризисов нашего времени, и важность этой проблемы для мирового сообщества не нуждается в доказательствах. Со времени выделения СПИДа как самостоятельного заболевания (1981 г.) [154, 278, 438] в мире, по оценкам ВОЗ, официально зарегистрировано около 60 млн ВИЧ-инфицированных человек, из них около 30 млн умерло от СПИДа. По данным ВОЗ/UNAIDS за 2008 г. [664], в мире насчитывается около 33 млн человек, живущих с ВИЧ/СПИДом, в 2007 г. число новых случаев инфекции составило около 2,7 млн, а 2 млн человек умерли от СПИДа [664]. Ежегодно около 2,7 млн человек становятся инфицированными и около 2,5 млн умирают от этого заболевания. Несмотря на активную образовательную профилактическую работу, разработку антиретровирусных лекарственных препаратов, расширению доступа к лечению в развивающихся странах, пандемия продолжает опережать глобальные усилия по профилактике и контролю ВИЧ-инфекции. 1

По скорости прироста новых случаев ВИЧ-инфекции Россия входит в тройку лидеров (вместе со странами Юго-Восточной Азии и Африки) [24, 25, 521, 663, 664]. В конце 2008 г. число зарегистрированных ВИЧ-инфицированных лиц в нашей стране превысило 490 тыс. человек [12, 28]. По оценкам экспертов ВОЗ/UNAIDS, в России общее число людей, инфицированных ВИЧ, может составлять около 930 тыс. человек [664]. В возрастной группе от 15 до 49 лет доля людей, инфицированных ВИЧ, составляет в России около 1,1% (0,7-1,8%), т.е. ВИЧ-инфекция в основном поражает молодое трудоспособное население и реально угрожает безопасности страны [24, 26, 27].

Еще в 1985 г. Р.М.Хаитов выступил на I Международной конференции по СПИДу и в своем докладе обратил внимание на то, что проблема СПИДа для нашей страны — далеко не научная абстракция, и что необходимо не откладывая активизировать интеллектуальный и материальный потенциал медицинской науки [350]. С 1983г. в Институте иммунологии в Москве были начаты работы по проблеме СПИДа, а с 1985г. - интенсивные исследования по созданию диагностической тест-системы * для определения специфических антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в крови людей: Эта тест-система была основана на синтетических пептидах (то есть тест-система третьего поколения) [29-32, 351, 352, 354]. К 1987-88 гг. тест-система «Пептоскрин-2» была разработана и внедрена для использования в практическом здравоохранении. К концу 1991 г. сотрудниками Института иммунологии обследовано около 300 тысяч человек на наличие анти-ВИЧ-антител с использованием тест-системы «Пептоскрин-2» в сравнении с коммерческими зарубежными иммуноферментными диагностикумами и 'двумя другими отечественными* диагностикумами («Антиген» и «Рекомбинантный ВИЧ»),

Влияние пандемии СПИДа очень велико. Это потеря человеческих жизней, страдание больных, изматывающая нагрузка на семьи и сообщества, существенное снижение продуктивности экономики, значительное возрастание стоимости медицинской помощи.

Несмотря на огромные усилия» мирового сообщества, пандемию ВИЧ-инфекции остановить не удается. ВИЧ-инфицированным требуется антиретровирусная терапия (APT) в течение всей жизни пациента. Хотя применение APT и стало важнейшим шагом на пути противодействия развитию СПИДа, тем не менее 80% пациентов, нуждающихся в APT по клиническим показаниям, не получают ее вследствие высокой стоимости лечения.

Кроме того, APT не является средством предупреждения ВИЧ-инфекции (за исключением препятствия передачи ВИЧ от матери к плоду) и не препятствует распространению вируса в организме человека даже в случае начала APT на ранних этапах инфекции. Как показали исследования, начало применения APT у инфицированных лиц в короткие сроки (до 10 дней) после появления симптомов первичной ВИЧ-инфекции не предотвращает образования латентно инфицированных покоящихся (ЕЮ4+-Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ или инфекционный вирус, несмотря на успешный контроль вирусной нагрузки [162]. Более того, не было выявлено корреляции между количеством инфицированных СБ4+-Т-клеток и продолжительностью APT или временем ее начала после проявления симптомов первичной ВИЧ-инфекции. Таким образом, даже раннее начало APT не предотвращает формирование резервуара ВИЧ-инфекции. Кроме того, не следует забывать, что APT, помимо тяжелых побочных эффектов препаратов, сопровождается^ образованием устойчивых форм вируса.

Несмотря на то, что в последние годы, был достигнут значительный прогресс в обеспечении доступа населения- к терапии и превентивным программам, распространение ВИЧ-инфекции по-прежнему опережает имеющиеся возможности профилактической медицины. Хотя в ряде стран, в том числе в некоторых странах Африки, наблюдается снижение темпов роста заболеваемости, эта тенденция слаба и не оказывает существенного влияния на эпидемическую ситуацию в целом [306, 362, 663].

Наиболее перспективной стратегией контроля пандемии ВИЧ-инфекции/СПИДа представляется создание эффективной профилактической вакцины [13, 50, 73, 227, 443]. Вакцинация-является наиболее эффективной технологией здравоохранения, которая существует для контроля эпидемических инфекционных заболеваний. Применение вакцин привело к уничтожению оспы и позволило значительно приблизиться к уничтожению полиомиелита и кори. Миллионы жизней были спасены благодаря вакцинации. В связи с этим для мирового сообщества в целом и для российских ученых в частности очевидна актуальность скорейшей разработки безопасной, эффективной и доступной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. По оценкам экспертов, создание вакцины, применение которой снизило бы число новых случаев инфицирования на 20-80%, позволило бы предотвратить около 30-70 миллионов случаев инфицирования в течение 15 лет [320].Это оказало бы глобальное положительное воздействие на здоровье населения, экономику и помогло бы радикальным образом остановить наиболее опасную в истории пандемию, которая угрожает всему человечеству. Эта задача тем более важна, что достоверно не выявлено случаев выздоровления при ВИЧ-инфекции (как самопроизвольного выздоровления, так и выздоровления в результате применения APT). В случае ВИЧ-инфекции/СПИДа традиционные методы получения вакцин оказались неприменимы. Фактически создание эффективной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины представляет собой фундаментальную научную проблему, решение которой можно считать наиболее важной задачей в истории биологической науки [13, 50, 611].

2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007

Рис.1. Ежегодные объемы инвестиций в исследования по разработке анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (млн. долл. США) [73].

Научные усилия и материальные ресурсы, направленные на создание вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, можно без преувеличения назвать чрезвычайными (рис.1). В настоящее время около 30 кандидатных вакцинных препаратов включены в клинические испытания, проходящие в различных странах мира [495]. К их числу относится и вакцина «ВИЧРЕПОЛ» - первая и

Млн долл. США АЛЛ 0

Годы единственная на настоящий момент- Российская кандидатная анти-ВИЧ/СПИД-вакцина, которая успешно прошла доклинические исследования, и включена в клинические испытания. Ежедневно 12-16 тыс. человек в мире становятся ВИЧ-инфицированными, и это является, еще одним свидетельством того, что скорейшее создание вакцины должно быть приоритетом высшего порядка для международного здравоохранения. ;

После того как был идентифицирован возбудитель СПИДа - ретровирус [99, 131, 255- 256], названный впоследствии вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), начались интенсивные исследования по разработке вакцины. При этом исследователи столкнулись с целым рядом существенных проблем научного и организационного характера:

1. Стало понятно, что традиционные «пастеровские» методы получения вакцин неприменимы для создания вакцины против ВИЧ. Использовать в , качестве компонента вакцины живой, аттенуированный или убитый вирус либо его фрагменты не представляется возможным из-за опасности ВИЧинфекции для вакцинированного. В связи с этим важнейшей научной задачей *1' 1 . ' ' ' i1 стало создание принципиально новых подходов и технологий для конструирования анти-ВИЧ-иммуногенов, не содержащих компонентов вируса. Создание перспективных вакцинных иммуногенов возможно только на основе фундаментальных молекулярно-биологических, вирусологических и иммунологических исследований ВИЧ-инфекции и. патогенеза СПИДа.

Таким образом, создание вакцины против ВИЧ-инфекции/СПИДа является фундаментальной научной проблемой. Разработка ее привела фактически: к созданию новой области вакцинологии.

2. Серьезным препятствием на пути , создания анти-ВИЧ-вакцины является высокая вариабельность ВИЧ.

3. До настоящего времени не определены корреляты иммунной защиты против ВИЧ, и это также составляет предмет фундаментальных научных исследований.

4. Для ВИЧ-инфекции нет адекватной модели на животных, что в значительной мере затрудняет как исследование механизмов протективного иммунного ответа, так и создает дополнительные трудности для испытания кандидатных вакцинных препаратов.

5. Каким бы перспективным ни был кандидатный вакцинный препарат в лабораторных исследованиях, определить его безопасность, иммуногенность и эффективность для человека можно только с помощью клинических исследований [137]. Клинические испытания с участием добровольцев являются важнейшей неотъемлемой частью научных исследований, направленных на разработку анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. В связи с тем, что отсутствует адекватная модель ВИЧ-инфекции на животных, клинические исследования представляют собой неоценимый источник научной информации, необходимой для понимания механизмов протективного иммунного ответа против ВИЧ и выявления коррелятов иммунной защиты. В клинических исследованиях изучаются не только свойства (безопасность, переносимость, иммуногенность) , и дозировка кандидатных вакцинных препаратов, но также оценивается результативность различных протоколов и методов иммунизации.

Важность клинических исследований как неотъемлемого компонента работ по созданию вакцин была еще раз подтверждена на международной конференции «AIDS Vaccine 2008» (Кейптаун, 2008 г.) [73]. В итоговых документах конференции подчеркивалось, что проведение клинических исследований в различных эпидемиологических условиях, в различных популяциях и регионах, в которых циркулирует широкий спектр изолятов ВИЧ, является жизненно необходимым. В клинических исследованиях предстоит выяснить ряд важных вопросов, к числу которых относятся: природа трансмиссионного вируса; вариант иммунного ответа, обеспечивающий контроль ВИЧ у «долговременных непрогрессоров»; роль генетических особенностей хозяина в контроле ВИЧ-инфекции. Необходимо наилучшим образом использовать полученную информацию для создания вакцины. Более тесная интеграция клинических исследований и фундаментальной науки должна привести к выработке усовершенствованных протоколов клинических испытаний, направленных на решение специфических вопросов, связанных с созданием анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Также необходимо поддерживать и развивать инфраструктуру клинических испытаний, в том числе потребуется приложить усилия для обучения квалифицированного персонала, который смог бы обеспечить надлежащее проведение клинических исследований.

Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин имеют двойственный характер: с одной стороны, это регламентированное испытание вакцинных препаратов с участием добровольцев, а с другой — научное исследование, которое позволяет получить новые данные о биологии и иммунологии ВИЧ, патогенезе ВИЧ-инфекции/СПИДа, а также дает возможность отработать схемы иммунизации и провести необходимую корректировку препарата. При этом организация клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, в частности, формирование когорт добровольцев, имеет дополнительные особенности и трудности по сравнению с испытаниями других типов препаратов [327, 480]. Эти трудности в основном обусловлены слабой информированностью населения о работах по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, боязнью всего, что связано с ВИЧ-инфекцией и СПИДом, негативными социальными последствиями, связанными с ВИЧ-инфекцией. Формирование когорт добровольцев является наиболее важной, трудоемкой и дорогостоящей частью клинических испытаний вакцин против ВИЧ/СПИДа [5, 6, 40, 100, 456].

В мировой практике клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин отработаны методы привлечения добровольцев к клиническим испытаниям, выработана система их социальной и этической защиты, определены нормы медицинского обеспечения [309, 310, 632, 633], на проведение клинических испытаний выделяются финансовые средства из государственного бюджета и из неправительственных фондов [61, 625]. В России, однако, такие клинические испытания раньше не проводились, поэтому необходимо создавать весь комплекс мероприятий по их проведению. Очевидной является необходимость государственной поддержки разработки и испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.К клиническим испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-вакцин приступает все большее число стран. В 2004 г., наряду с Германией [242] и Канадой [595], они начались и в России. Клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ» имеют важное значение для формирования методической базы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России. Зарубежный опыт испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин может быть использован лишь частично, так как вакцина «ВИЧРЕПОЛ» и принцип ее конструирования не имеют аналогов в мире. Учитывая, что в России вслед за кандидатной вакциной «ВИЧРЕПОЛ» готовятся к включению в клинические испытания и другие кандидатные вакцины, необходимость формирования комплекса приемов и методов («инфраструктуры») для оценки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин приобретает особую актуальность и важность.

Создание анти-ВИЧ/СПИД-вакцины представляет собой комплексную научную задачу, неотделимыми компонентами решения которой являются научные исследования, биотехнологические разработки, лабораторные исследования и клинические испытания. Понимание специфических особенностей иммунного ответа против ВИЧ в сочетании со способностью быстро, стандартизованно и точно тестировать кандидатные вакцины в клинических испытаниях с участием добровольцев даст возможность разработать рациональный и успешный подход к созданию профилактических и лечебных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин [599].

Исследования иммунобиологии и патогенеза ВИЧ-инфекции, в том числе направленные на разработку анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, привели к ряду фундаментальных научных открытий в области иммунологии и в значительной мере способствовали выходу современной вакцинологии на принципиально новый уровень. Эти аспекты подробно рассмотрены в книге «Новая вакцинология. Вакцины против ВИЧ/СПИДа» [13].

Настоящая работа посвящена важнейшей части исследований по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин - клиническим испытаниям.

Актуальность настоящей работы определяется важностью разработки отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины, необходимостью исследования безопасности и иммуногенности оригинальной отечественной конъюгированной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в клинических испытаниях, необходимостью формирования в России системы испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Цели работы:

1. Обобщение и анализ международного опыта проведения клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и с учетом его - разработка рекомендаций по проведению клинических испытаний кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ», в том числе подготовка пакета нормативной документации для проведения I фазы клинических испытаний.

2. Организация и проведение I фазы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в соответствии с Российскими и международными стандартами надлежащей клинической практики (GCP) и на примере этого иследования — формулировка рекомендаций по формированию основы инфраструктуры испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

3. Исследование безопасности, переносимости и иммунологической активности кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» у человека.

Задачи работы:

1. Проанализировать международный опыт клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

2. На примере испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» разработать комплект типовой нормативной документации по испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, в соответствии со стандартами GCP с учетом результатов лабораторных исследований и доклинических испытаний.

3. Сформировать когорту добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

4. Оценить безопасность и переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ», определить безопасную иммунизирующую дозу.

5. Исследовать уровень и продолжительность гуморального иммунного ответа на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

6. Исследовать уровень и продолжительность клеточноопосредованного иммунного ответ на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

7. По итогам испытаний подготовить отчет для представления в ГИСК им. Л.А.Тарасевича на экспертизу и согласование.

8. Подготовить рекомендации по организации II фазы клинических испытаний отечественных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые в России осуществлены клинические исследования оригинальной отечественной конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. Заложены основы инфраструктуры клинических испытаний новой группы вакцинных препаратов в нашей стране: кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа.

Впервые показана безопасность и переносимость конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека.

Впервые получены данные об иммуногенности конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека. Выявлен дозозависимый характер иммунного ответа - по мере повышения дозы вакцины возрастал титр антител и увеличивалось количество добровольцев со специфическим иммунным ответом.

Впервые показано, что конъюгированная полимер-белковая рекомбинантная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» не вызывает при иммунизации добровольцев увеличения количества С04+-Т-клеток, то есть обладает дополнительными характеристиками безопасности, связанными с отсутствием повышения возможного риска ВИЧ-инфекции у вакцинированных добровольцев. Актуальность этого аспекта безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин стала очевидной после выявления повышенной восприимчивости к ВИЧ-инфекции добровольцев, иммунизированных кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины MRK-Ad5, активирующей пролиферацию СБ4+-Т-лимфоцитов, в процессе клинических исследований, которые были остановлены по этой причине.

Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о перспективах применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве потенциального иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Впервые в России разработана методическая основа и подготовлен комплект нормативной документации по проведению клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин («Протокол клинических испытаний.», «Брошюра исследователя», «Информация для добровольца и Форма информированного согласия», «Индивидуальная карта добровольца» и др.), соответствующий стандартам GCP. Документация успешно прошла экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Федеральном комитете по МИБП, Федеральном Комитете по этике и утверждена Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Разработанные документы могут быть использованы в качестве типовых для организации последующих клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Впервые в России сформирована когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта включена в клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ», стабильна, имеет перспективы для расширения. Тем самым заложены основы для дальнейших клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в Российской Федерации.

Полученные данные о безопасности, переносимости и иммуногенности вакцины «ВИЧРЕПОЛ» дают основания для продолжения клинических исследований, что будет способствовать дальнейшему развитию и совершенствованию инфраструктуры клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Подготовлены методические рекомендации по организации II фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (в соответствии с планом работ по выполнению Постановления Правительства Российской Федерации от 25 декабря 2007 г. №1905-р и в рамках Государственного контракта с ФМБА России №22.050.08.0 от 20 марта 2008 г. по теме «Разработка экспериментальных технологий для создания кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД», шифр «КВ ВИЧ - 08»).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Впервые в отечественной практике сделано обобщение мирового опыта клинических испытаний кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, подготовлены рекомендации и пакет нормативных документов по проведению I фазы клинических испытаний первой отечественной кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (подготовлена и опубликована монография).

2. Впервые в России сформирована когорта ВИЧ-неинфицированных добровольцев, мотивированных на участие в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта стабильна, имеет перспективы для расширения и включена в I фазу клинических испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

3. Показана безопасность и хорошая переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» во всех исследованных дозах (2,5 - 50,0 мкг по белку).

4. Кандидатная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» при иммунизации добровольцев индуцировала образование ВИЧ-специфических антител. Эффект зависел от дозы вакцины, максимальный титр антител наблюдался после 4-й иммунизации. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза не менее 50 мкг по белку.

5. При иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не наблюдалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунного ответа (абсолютное количество С04+-Т-клеток и СБ8+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови не отличались от нормы). Это может рассматриваться как дополнительная характеристика безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», связанная с отсутствием повышения риска ВИЧ-инфекции после иммунизации (повышенная- восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции была обнаружена в клинических исследованиях кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины MRK-Ad5, активирующей пролиферацию С04+-Т-лимфоцитов).

6. Отчет о результатах I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» успешно прошел экспертизу и согласование в ГИСК им.Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора. Рекомендовано продолжать исследование и переходить ко II фазе клинических испытаний. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» включена в международный рейтинг-лист перспективных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин Global HIV Vaccine Enterprise и IAVI.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на V, VI, VII, VIII, IX, X Конгрессах «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2002 г., 2004 г., 2005 г., 2007 г., 2008 г. - Москва; 2009 г., Казань); II и III Объединенных иммунологических форумах (2004 г.,

Екатеринбург; 2008 г., Санкт-Петербург), 2-й Всероссийской школе по иммунотерапии (2005 г., Анапа); XXII-XXVII Конгрессах Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (EAACI) (2003, Париж, Франция; 2004 г., Амстердам, Голландия; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2006 г., Вена, Австрия; 2007 г., Гетеборг, Швеция; 2008 г., Барселона, Испания); XVIII-XX Конгрессах Всемирной аллергологической организации (IAACI/WAO) (2003 г., Ванкувер, Канада; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2007 г., Бангкок, Таиланд); XII и XIII Международных Конгрессах по иммунологии (ICI/IUIS) (2004 г., Монреаль, Канада; 2007 г., Рио-де-Жанейро, Бразилия); XV-XVII Конгрессах Европейской Федерации иммунологических обществ (EFIS/ECI) (2003 г., Родос, Греция; 2006 г., Париж, Франция; 2009 г., Берлин, Германия); XV, XVI, XVII, XVIII Международных конференциях по СПИДу (2004 г., Бангкок, Таиланд; 2006 г., Торонто, Канада; 2007, Сидней, Австралия; 2008 г., Мехико, Мексика); Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (2004 г., Суздаль); 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций» (2004 г., Москва); Симпозиуме «Современные иммунобиологические препараты» (2004 г., Москва); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни. От теории к терапии» (2005 г., Москва); IV международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (2005 г., Бенидорм, Испания); 4-м Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (2007, Москва); Международных конференциях «AIDS Vaccine 2007» (Сиэггл, США) и «AIDS Vaccine 2008» (Кейптаун, ЮАР); Рабочем совещании по вакцинопрофилактике ВИЧ (20-21 февраля 2009 г., Новосибирск).

По материалам диссертации опубликовано 67 печатных работ, в том числе: 1 монография; 23 статьи в научной печати, из них 17 статей в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций; 43 публикации в материалах отечественных и международных конференций и конгрессов.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты работы использованы в «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, ГНЦ социальной и судебной психиатрии им.В.П.Сербского, ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, МСЧ №163 ФМБА России, Московского областного центра профилактики и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВИДЫ И ОСОБЕННОСТИ ВАКЦИН ПРОТИВ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ/СПИДа

Исследования по разработке анти-ВИЧ/СПИД-вакцин начались после открытия в 1983 г. ВИЧ и доказательства его связи с развитием СПИДа. Кандидатные вакцины 1-го поколения (1983-1990 гг.) в основном были предназначены для индукции образования нейтрализующих антител. 2-е поколение кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (1990-2000 гг.) в основном представлена препаратами, предназначенными для индукции ВИЧ-специфических ЦТЛ. 3-е поколение кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа (2000 г. - настоящее время) включает комплексные иммуногены, направленные на индукцию и гуморального, и клеточного иммунного ответа (рис.2).

Кандидатные вакцины, предназначенные для индукции ВИЧ-специфического нейтрализующего гуморального иммунного ответа (основное количество исследований - 1983-1990 гг.). Поиск иммуногенов, индукцирующнх нейтрал и руюшие антитела, продолжается (Neutralizing Antibody Consortium).

Кандидатные вакцины, предназначенные для индукции ВИЧ специфических ЦТЛ (ДНК-вакцины, вирусные векторы) (основное количество исследований - 1990-2000 гг.)

Комплексные иммуногены, направленные на индукцию и гуморального, и клеточного ВИЧ-специфического иммунного ответа (<шрайм-буст»-иммунизация) (основное количество исследований - 2000 - настоящее время).

Рис.2. Основные этапы разработки различных видов кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

Рассмотрим различные виды кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (рис.З), их специфические особенности, а также результаты их лабораторных исследований.

Из соображений безопасности не разрабатываются для введения нейнфнцнроваиным людям

Вакцины на основе iNi^S^j

ЖИВОГО аттенуированного вич-t

Вакцины на основе инактивированного

ВИЧ-1

Комбинированные вакцины

ВИЧ-1

Реплицирующиеся вирусные и бактериальные векторы

Нереплицирую щ неся вирусные векторы

ДНК-вакцины («голая ДНК»)

ТТ

Петидные вакцины

Субъединичные вакцины

Вирусоподобные частицы

Рис. 3. Варианты кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Первая отечественная кандидатная анти- ВИЧ/СПИД- вакцина: иммунологический мониторинг и испытания"

выводы

1. Сформирована первая в Российской Федерации стабильная когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Часть когорты в соответствии с «Протоколом исследования» была включена в I фазу клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ», другая часть является основой для проведения последующих клинических испытаний II фазы. Когорта имеет перспективы для расширения.

2. Превалирующие мотивы участия добровольцев в клинических испытаниях имели альтруистический характер: помощь ВИЧ-инфицированным людям и вклад в научные исследования. Прагматические мотивы (бесплатное медицинское обследование и получение вознаграждения) не имели определяющего значения. Наиболее эффективным'привлечение добровольцев было среди дискордантных пар (один из партнеров ВИЧ-инфицирован, другой - нет).

3. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» является безопасной, хорошо переносится при введении, не вызывает неблагоприятных побочных эффектов.

4. Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» вызывала образование ВИЧ-специфических антител, которые взаимодействовали как с рекомбинантными белками (гес(24-41), тес р24), так и с белками культурального ВИЧ-1. При этом в основном выявлялись антитела, связывающиеся с белком р24 и его предшественником р55. Антительный ответ был достаточно продолжительным и наблюдался в течение 6 месяцев после последней иммунизации.

5. Иммунный ответ, вызываемый вакциной «ВИЧРЕПОЛ», носит дозозависимый характер. С повышением дозы вакцины возрастает как величина индивидуального иммунного ответа (уровень антител к ВИЧ в крови добровольцев), так и число добровольцев со специфическим иммунным ответом.

6. Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о - потенциальной возможности применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

7. Сыворотки добровольцев, иммунизированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ», обладали нейтрализующей активностью. Задачей дальнейших исследований станет разработка протокола иммунизации, приводящей к индукции максимально значимых титров антител против gp41.

8. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не выявлено антиген-специфической пролиферации лимфоцитов в периферической крови. Это является важным свидетельством в пользу безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так как чрезмерная активация пролиферации существенно увеличивает вероятность инфицирования' лимфоцитов ВИЧ:

9. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не обнаруживалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунитета: абсолютное количество CD4+-T-mieTOK и С08+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови оставались в пределах нормы. Отсутствие активации С04+-Т-клеток под влиянием вакцины «ВИЧРЕПОЛ», может рассматриваться как дополнительный фактор безопасности вакцины (активация СБ4+-Т-клеток под влиянием вакцинирующего препарата рассматривается как фактор, потенциально повышающий восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции и выделяется в руководящих документах ВОЗ/UNIAIDS как самостоятельный аспект безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин).

10. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза 50 мкг по белку.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Гудима, Георгий Олегович

1. Белоусов Ю.Б., Белоусов Д.Ю. Методика планирования и проведения клинических испытаний. М., 2000.

2. Белоусов Ю.Б., ред. Планирование и проведение клинических исследований лекарственных средств. М., 2000.

3. Бурцева Е.И., Слепушкин А.Н., Ельшина Г.А. др. Гриппол эффективный препарат для иммунизации лиц пожилого возраста против гриппа. Иммунология, 2000, № 2, с.39-42.

4. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Карамов Э.В., Коробова С.В., Хаитов P.M. Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин: современное состояние проблемы. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, 6369.

5. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Карамов Э.В., Коробова С.В., Хаитов P.M. Первая отечественная анти-ВИЧ-вакцина на стадии клинических испытаний. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.107-116.

6. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Решетников А.В., Хаитов P.M. Опыт клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Иммунология, 2008, т.29, №5, с.252-263.

7. Елыпина Г.А., Горбунов М.А., Шеварли В.И. и др. Оценка эффективности гриппозной тривалентной полимер-субъединичной вакцины "Гриппол". Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунол., 1998, №3, с.40-43.

8. Информационный бюллетень Федерального центра СПИД, 2008 г.

9. Карамов Э.В., Сидорович И.Г., Хаитов P.M. Новая вакцинология. Вакцины против ВИЧ/СПИДа. М.: Медицинское информационное агентство, 2008, 367 с.

10. Караулов А.В., ред. Полиоксидоний в клинической практике. 2008, М., «ГЭОТАР-Медиа», 136 с.

11. Коненков В.И., Смольникова М.В. Полиморфизм промоторного сайта интерлейкина 4, интерлейкина 10 и фактора некроза опухолей альфа у ВИЧ-инфицированных пациентов. Бюлл. эксп. биол. мед., 2002, т. 133, с.З89-391.

12. Кофиади И.А., Ребриков Д.В., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П., Хаитов P.M. Распределение аллелей генов CCR5, CCR2, и SDF1, ассоциированных сустойчивостью к ВИЧ-инфекции, в российских популяциях. Докл. Акад. наук, 2007, т.415, № 6, с.320-323.

13. Кузина Т.Н., Сизякина Л.П., Андреева И.И., Терновой М.В., Руденко И.Е. Иммуномодулирующие и микробицидные эффекты полиоксидония в терапии ВИЧ-инфекции. Иммунология, 2002, №6, с.346-349.

14. Кузина Т.Н., Сизякина Л.П. Динамика некоторых показателей мукозального иммунитета в профилактике ВИЧ-инфекции у женщин из дискордантных супружеских пар. Аллергология и иммунология, 2008, т.9, №1, с.73.

15. Кузина Т.Н., Сизякина Л.П., Алубаева Н.Г. Возможности превенции трансмиссии ВИЧ-инфекции у дискордантных супружеских пар. Российский аллергологический журнал, 2008, №1, с. 144-146.

16. Механизм действия и клиническое применение отечественного иммуномодулятора полиоксидония» (в помощь практическому врачу). Государственный научный центр Институт иммунологии МЗ РФ, ООО «Иммафарма», М., 2001, с. 17-18.

17. Онищенко Г.Г. Эпидемиологическая ситуация, основные приоритеты и задачи по противодействию эпидемии ВИЧ/СПИДа в Российской Федерации. Здравоохранение Российской Федерации, 2005, №2, с.11-18.

18. Онищенко Г.Г. О неотложных мерах по противодействию распространения ВИЧ- инфекции в Российской Федерации. Здравоохранение Российской Федерации, 2006, № 2, с.4-17.

19. Онищенко Г.Г. Профилактика инфекционных заболеваний — важная повестка дня «Большой восьмерки». Иммунология, 2006, т.27, № 5, с.260-266.

20. Онищенко Г.Г. Проблемы, связанные с ВИЧ/СПИДом в странах Восточной Европы и Центральной Азии // Вестн. Росс. Акад. Мед. наук, 2007, т. 9, с. 20-26.

21. Онищенко Г.Г. Глобальная профилактика ВИЧ/СПИДа в свете решений «Большой Восьмерки». Вестн. росс. акад. мед. наук, 2008, т.4, с. 39-43.

22. Петров Р.В., Хаитов P.M.,'Фонина. Л.А., Андреев С.М. Синтетические пептиды Env и Gag распознаются антителами к LAV/HTLV-III. Иммунология, 1986, т.5, с.80-81.

23. Петров Р.В., Хаитов P.M., Фонина JI.A. и др. Синтетические пептидные антигены HIV при изучении СПИД! Иммунология, 1988, т.З, с.21-25.

24. Петров Р.В., Хаитов P.M., Сидорович И.Г. и др. Пути расширения диагностических возможностёй синтетических детерминант белков HIV. Иммунология, 1988, т.4, с.20-23. ' : :

25. Петров Р.В., Хаитов P.M., : Иванов В .Т. и др. Выявление антител против IiIV-1 и HIV-2 с помощью синтетических антигенных детерминант. Иммунология, 1990, т.2, с.21-25. ■ •

26. Пинегин Б.В., Ярилин А.А., Симонова А.В., Климова С.В., Мазуров Д.В., Дамбаева С.В., Бахус Г.О. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека. М., 2001, 53 с.

27. Полиоксидоний в клинической практике: Под ред. А.В:Караулрва. 2008, М., «ГЭОТАР-Медиа». 1

28. Приказ МЗ МП № 309/123/96 от 31.07.96 г.

29. Приказ МЗМП №302 от 29.07.1996 г.

30. Протокол I фазы ограниченных клинических испытаний препарата "ВИЧРЕПОЛ", вакцины ВИЧ/СПИД полимер-белковой рекомбинантной конъюгированной жидкой (Г фаза). М., Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития, 2004.

31. Сидорович И.Г. и соавт. Создание комплексной системы мероприятий по проведению доклинических и клинических испытаний иммуногенов и вакцинирующих препаратов против ВИЧ/СПИД. Аллергия, астма и клин, иммунол., 2003, №9, с. 128-129.

32. Сизякина Л.П., Кузина Т.Н., Соколова Ю.В. Перспективы применения топических микробицидов в лечении ВИЧ-инфицированных пациентов. Современные представления о механизме действия иммуномодулятора полиоксидония. М., 2004, с.66-69.

33. Слепушкин А.Н., Бурцева Е.И., Шамшева О.В., Беляев А.Л. и др. Реактогенность и иммуногенность вакцины Гриппол у детей младшего школьного возраста. Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1999, № 5, с.3-7.

34. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А. СПИД. М.: Народная академия культуры и общечеловеческих ценностей, 1992, 352 с.

35. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунная система желудочно-кишечного тракта: особенности строения и функционирования в норме и патологии. Иммунология, 1997, №5, с.3-10.

36. Хаитов P.M., Решетников А.В., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Подготовка когорт добровольцев для клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин: настоящее и будущее., Физиология и патология иммунной ♦системы, 2007, №11, с. 3-16.

37. Хаитов P.M., Решетников А.В., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Подходы к формированию когорт добровольцев для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Иммунология,"2008, т.29, №2, с.68-79.

38. Этические аспекты научных исследований по разработке вакцин для профилактики ВИЧ. Руководящий документ ЮНЭЙДС. UNAIDS, 2000.

39. Этические аспекты научных исследований по разработке вакцин для профилактики ВИЧ. Руководящий! документ ЮНЭЙДС. UNAIDS, 2001.

40. Ярилин А.А. Клеточные основы мукозального иммунитета. Росс, иммунол. журнал, 2008, т.2 (11), №1, с.3-19.

41. A Review of European Commission Funding for HIV/AIDS, Tuberculosis and Malaria Health Technology R&D. Policy Research Working Paper №9. IAVI, 2006.

42. Abalaka J.O.A. Attempts to cure and prevent, HIV/AIDS in central Nigeria between 1997 and 2002: opening a way to a vaccine-based solution to the problem. Vaccine, 2004, v.22, p.3819-3828.

43. Abdool Karim S.S. Globalization, Ethics and AIDS Vaccines. Science, 2000, v.288, p.2129.

44. Abulafia-Lapid R., Bentwich Z., Keren-Zur Y., Cohen I.R., Atlan H. T-cell vaccination against anti-CD4 autoimmunity m HIV-1 infected patients. J. Clin. Virol., 2004, v.31, p.S48-54.

45. Ackers M.-L., Parekh В., Evans T.G., Berman P., Phillips S., Allen M., McDougal J.S. Human immunodeficiency virus (HIV) seropositivity among uninfected HIV vaccine recipients. J. Infect. Dis., 2003, v. 187, p.879-886.

46. Ada G., Leung K.N., Erti H. An analysis of effector T cell generation and function in mice exposed to influenza A or Sendai viruses. Immunol. Rev., 1981, v.58, p.5-24.

47. Ada G.L. Modern vaccines: the immunological principles of vaccination. Lancet, 1990, v.335, p.523-526

48. Addo M.M., Yu X.G., Rosenberg E.S., Walker B.D., Altfeld M. Cytotoxic T-lymphocyte (CTL) responses directed against regulatory and accessory proteins in HIV-1 infection. DNA Cell Biol., 2002, v.21, p.671-678.

49. Adnan S., Balamurugan A., Trocha A., Bennett M.S., Ng H.L., Ali A., Brander C., Yang O.O. Nef interference with HIV-1-specific CTL antiviral activity is epitope specific. Blood, 2006, v. 108, no.10, p.3414-3419.

50. AIDS Vaccine Blueprint 2006. Global HIV Vaccine Enterprize-IAVI, 2006.

51. AIDS Vaccine Blueprint 2008. Global HIV Vaccine Enterprize IAVI, 2008.

52. Allen M., Israel H., Rybczyk K., Pugliese MA, Loughran K, Wagner L, et al. Trial-related discrimination in HIV vaccine clinical trials. AIDS Res. Hum. Retrovir., 2001, v.17, p.667-674.

53. Allen T.M., Mortara L., Mothe B.R., Liebl M., Jing P., Calore B. et al. Tat-vaccinated macaques do not control simian immunodeficiency virus SIVmac239 replication. J. Virol., 2002, v.76, no.8, p.4108-4112.

54. Alving C.R. Design and selection of vaccine adjuvants: animal models and human trials. Vaccine, 2002, v.20, suppl.3, p.S56-64.

55. Amara R.R., Villinger F., Altman J.D., Lydy S.L., O'Neil S.P., Staprans S.I., Montefiori D.C., Xu Y., Herndon J.G., Wyatt L.S. et al. Control of a mucosal challenge and prevention of AIDS by a multiprotein DNA/MVA vaccine. Science,2001, v.292, p.69-74.

56. Andrieu J.M., Lu W. A dendritic cell-based vaccine for treating HIV infection: background and preliminary results. J. Int. Med., 2007, v.261, no.2, p.123-131.

57. Andrieu M., Desoutter J.F., Loing E., Gaston J., Hanau D., Guillet J.G, Hosmalin A. Two human immunodeficiency virus vaccinal lipopeptides follow different cross-presentation pathways in human dendritic cells. J. Virol., 2003, v.77, no.2, p,1564-1570.

58. Arnold G., Velasco P., Wrin Т., Hughes S., Elsasser D., Ma X. et al. Recombinant human rhino virus displaying the HIV-1 gp41 ELDKWA epitope can elicit broad neutralization of HIV-1 primary isolates. AIDS Vaccine 2005, Montreal, Canada, 2005, a500.

59. Atlan H., Gersten M.J., Salk P.L., Salk J. Mechanisms of autoimmunity and AIDS: prospects for therapeutic intervention. Res. Immunol., 1994, v.145, p.165-183.

60. Autran B, Carcelain G, Combadiere B, Debre P. Therapeutic vaccines for chronic infections. Science, 2004, v.305, p.205-208

61. Autran В., Garcelain G. AIDS. Boosting immunity to HIV can the virus help? Science, 2000, v.290, no.5493, p.946-949

62. Autran В., Hadida F., Haas G. Evolution and plasticity of GTE responses against HIV. Curr.'Opin. Immunol., 1996, v.8; no.4, p.546-553'

63. Baba T.W., Liska V., Khimani A.H., Ray N.B., Dailey P.J., Penninck D: et al. Live attenuated, multiply deleted simian immunodeficiency virus causes AIDS in infant and adult macaques. Nat. Med., 1999, v.5, no.2, p. 194-203.

64. Baker BM, Block BL, Rothchild AC, Walker BD. Elite control of HIV infection: implications for vaccine design. Expert Opin Biol Ther. 2009 Jan;9(l):55-69.

65. Barnett A.L., Cunningham J.M'. Receptor binding transforms the surface subunit of the mammalian C-type retrovirus envelope protein from an inhibitor to an activator of fusion. J. Virol., 2001, v.75, no 19, p.9096-9105.

66. Barouch D.H., Craiu A., Kuroda M.J., Schmitz J.E., Zheng X.X., Santra S. et al. Augmentation of immune responses to HIV-1 and simian immunodeficiency virus

67. DNA vaccines by IL-2/Ig plas-mid administration in rhesus monkeys. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, v.97, no.8, p.4192-4197.

68. Barouch D.H., Pau M.G., Custers J.H., Koudstaal W., Kostense S., Havenga M.J. et al. Immunogenicity of recombinant adenovirus serotype 35 vaccine in the presence of pre-existing anti-Ad5 immunity. J. Immunol., 2004, v. 172, no. 10, p.6290-6297.

69. Bass E. Ethics, antiretrovirals and prevention trials. IAVI REPORT, 2004, v. 7, no.3, p.3-8.

70. Bass E. lib or not lib? IAVI Report, 2004, v.8, no.l, p. 1-5.

71. Belshe R.B., Clements M.L., Dolin R. et al. Safety and immunogenicity of a fully glycosylated recombinant gpl60 human immunodeficiency virus type 1 vaccine in subjects at low risk of infection. J. Infect. Dis., 1993, v.168, p.1387-1395.

72. Belyakov Г.М; Berzofsky J.A. Immunobiology of mucosal HIV infection and the basis for development of a new generation of mucosal AIDS vaccines. Immunity, 2004, v.20, no.3, p.247-253.

73. Belyakov 1.М., Ahlers J.D;, Berzofsky J.A. Mucosal AIDS vaccines: current status and;future directions. Expert Rev. Vaccines, 2004,.v.3 j,no.4j S65-73'.

74. Berman P:W., Gregory TJ., Riddle L., Nakamura G.R., Champe M.A., Porter J.P. et al. Protection of chimpanzees from infection by IIIVt 1 after vaccination with recombinant glycoprotein gp 120 but not gpl60. Nature, 1990, v.345, no.6276, p.622-625.

75. Binley J.M., Wrin Т., Korber B. et al. Comprehensive cross-clade neutralization analysis of a panel of anti-human immunodeficiency virus type 1 monoclonal antibodies. J. Virol., 2004, v. 78, p.l3232-13252.

76. Boasso A, Shearer GM, Chougnet C. Immune dysregulation in human immunodeficiency virus infection: know it, fix it, prevent it? J Intern Med. 2009 Jan;265(l):78-96

77. Borrow P., Lewicki H., Hahn B.H., Shaw G.M., Oldstone M.B. Virus-specific CD8+ cytotoxic T-lymphocyte activity associated with control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 infection. J. Virol., 1994, v.68, p.6103-6110.

78. Bourinbaiar A.S., Jirathitikal V., Metadilogkul O., Sooksathan P., Aemsri S., Promdevich P. et al. Phase II placebo-controlled study of V-l Immunitor as a therapeutic modality for treatment of HIV. J. Clin. Virol., 2004, v.31, p.S55-62

79. Boussif O., Lezoualc'h F., Zanta M.A. et al. A versatile vector for gene and oligonucleotide transfer into cells in culture and in vivo: polyethylenimine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v.92, no.16, p.7297-7301.

80. Boyer J.D., Ugen K.E., Wang В., Agadjanyan M., Gilbert L., Bagarazzi M.L. et al. Protection of chimpanzees from high-dose heterologous HIV-1 challenge by DNA vaccination. Nat. Med., 1997, v.3, no.5, p.526-532.

81. Boyer J.D., Chattergoon M.A., Ugen K.E. etal. Enhancement of cellular immune response in HIV-1 seropositive individuals: a DNA-based trial. Clin. Immunol., 1999, v.90, no.l, p.100-107

82. Broder S., Gallo R.C. A pathogenic retrovirus (HTLV-III) linked to AIDS. N. Engl. J. Med., 1984, v.311, no.20, p.1292-1297.

83. Broliden К, Haase AT, Ahuja SK, Shearer GM, Andersson J. Introduction: Back to basics: mucosal immunity and novel HIV vaccine concepts. J Intern Med. 2009 Jan;265(l):5-17.

84. Bruyn G., Rossini A.J., Chiu Y.L., Holman D., Elizaga M.L., Frey S.E., Burke D., Evans T.G., Corey L., Keefer M.C. Safety profile of recombinant canarypox HIV vaccines. Vaccine, 2004, v.22, no.5-6, p.705-714.

85. Buller R.M., Holmes K.L., Hugin A., Frederickson T.N., Morse H.C. 3rd. Induction of cytotoxic T-cell responses in vivo in the absence of CD4 helper cells. Nature, 1987, v.328, p.77-79.

86. Burgers W.A., Williamson C. The challenges of HIV vaccine development and testing. Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol., 2005, v. 19, no.2, p.277-291.

87. Burton D.R., Williamson R.A., Parren P.W. Antibody and virus: binding and neutralization. Virology, 2000, v.270, p. 1-3.

88. Burton D.R., Desrosiers R.C., Doms R.W. et al. HIV vaccine design and the neutralizing antibody problem. Nat. Immunol., 2004, v.5, p.233-236.

89. Cafaro A., Caputo A., Fracasso C., Maggiorella M.T., Goletti D., Baroncelli S. et al. Control of SHIV-89.6P-infection of cynomol-gus monkeys by HIV-1 Tat protein vaccine. Nat. Med., 1999, v.5, no.6, p.643-650.

90. Calarota S., Bratt G., Nordlund S. et al. Cellular cytotoxic response induced by DNA vaccination in HIV-1-infected patients. Lancet, 1998. v.351, no.9112, p.1320-1325.

91. Calarota S.A., Leandersson A.C., Bratt G. et al. Immune responses" in asymptomatic HIV-1-infected patients after HIV-DNA immunization followed by highly active antiretroviral treatment. J. Immunol., 1999, v. 163, no.4, p.2330-2338.

92. Calarota S.A., Weiner D.B. Approaches for the design and evaluation of HIV-1 DNA vaccines. Expert Rev. Vaccines, 2004, v.3, Suppl. 4, S 135-49.

93. Caputo A., Gavioli R., Ensoli B. Recent advances in the development of HIV-1 Tat-based vaccines. Curr. HIV Res., 2004, v.2, no.4, p.357-376.

94. Carcelain G., Debre P., Autran B. Reconstitution of CD4+ T lymphocytes in HIV-infected individuals following antiretroviral therapy. Curr. Opin. Immunol., 2001, v.13, no.4, p.483-488

95. Carrington M., O'Brien S.J. The influence of HLA genotype on AIDS. Annu. Rev. Med., 2003, v.54, p.535-551.

96. Casimiro D.R., Bett A.J., Fu T.M., Davies M.E., Tang A., Wilson K.A. et al.

97. Heterologous human immunodeficiency virus type 1 priming-boosting immunizationi.strategies involving replication-defective adenovirus and poxvirus vaccine vectors. J. Virol., 2004, v.78, no.20, p. 11434-11438.

98. Castillo R.C, Arango-Jaramillo S., John R., Weinhold K., Kanki P., Carruth L., Schwartz D.H. Resistance to human immunodeficiency vims type 1 in vitro as a surrogate of vaccine-induced protective immunity. J. Infect. Dis., 2000, v. 181, p.897-903.

99. Catanzaro A.T., Roederer M., Koup R.A., Bailer R.T., Enama M.E., Nason M.C., Martin J.E., Rucker S., Andrews C.A., Gomez P.L., Mascola J.R., Nabel G.J., Graham B.S. Vaccine, 2007, v.25, no.20, p.4085-4092.

100. CDC. MMWR, 1981, v.30, no.250-252, p.305-308.

101. Cebere I., Dorrell L., McShane H., Simmons A., McCormack S., Schmidt C., Smith C., Brooks M., Roberts J.E., Darwin S.C., Fast P.E., Conlon C., Rowland

102. Celentano D.D., Beyrer C., Natpratan C., Eiumtrakul S., Sussman L., Renzullo P.O., Khamboonruang C., Nelson K.E. Willingness to participate in AIDS vaccine trials among high-risk populations in northern Thailand. AIDS, 1995, v.9, no.9, p. 1079-1783.

103. Challacombe S.J., Sweet S.P. Salivary and mucosal immune responses to HIV and its co-pathogens. Oral Dis., 1997, v.3, Suppl 1, p.S79-84.

104. Chun T.W., Engel D., Berrey M.M., Shea Т., Corey L., Fauci A.S. Early establishment of a pool of latently infected, resting CD4+ T cells during primary HIV-1 infection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, v.95, no.15, p. 8869-8873.

105. Churdboonchart V. Therapeutic vaccine trails in Thailand. J. HIV Ther., 2004, v.9, no.3, p.57-59.

106. Churdboonchart V., Moss R.B., Sirawarapom W. et al. Effect of HIV-specific immune-based therapy in subjects infected with HIV-1 subtype E in Thailand. AIDS,1998, v.12, no.12, p.1521-1527.

107. Clarke D., Johnson E., Nasar F., Coleman J., Coorer D., Calderon P. et al. Assessment of rVSV/HIV vaccine vector neurovirulence in murine, ferret and non-human primate models. AIDS Vaccine 2005, Montreal, Canada, 2005, al3.

108. Cocchi F., DeVico A.L., Garzino-Demo A., Arya S.K., Gallo R.C., Lusso P. Identification of RANTES, MIP-1 alpha, and MIP-1 beta as the major HIV-suppressive factors produced by CD8+T cells. Science, 1995, v.270, p.1811-1815.

109. Cohen J. Public health. AIDS vaccine trial produces disappointment and confusion. Science, 2003, v.299, no.5611, p. 1290-1291.

110. Cohen J. Immunology. New virtual center aims to speed AIDS vaccine progress. Science, 2005, v.309, no.5734, p.541.

111. Cohen J. AIDS research. Promising AIDS vaccine's failure leaves field reeling. Science, 2007, v.318, p.28-29

112. Cohen J. AIDS research. Did Merck ' s failed HIV vaccine cause harm? Science, 2007, v.318, p. 1048-1049.

113. Colfax G., Buchbinder S, Vamshidar G, Celum C, McKirnan D., Neidig J., Koblin В., Gurwith M, Bartholow B. Motivations for participating in an HIV vaccine efficacy trial. J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 2005, v.39, no.3, p.359-364.

114. Colfax G., Buchbinder S., Vamshidar G., Celum C., McKirnan D., Neidig J., Koblin В., Gurwith M., Bartholow B. Motivations for participating in an HIV vaccine efficacy trial. J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 2005, v.39, no.3, p.359-364.

115. Collins K.L., Chen B.K., Kalams S.A., Walker B.D., Baltimore D. HIV-1 Nef protein protects infected primary cells against killing by cytotoxic T lymphocytes. Nature, 1998, v.391, p.397-401

116. Corey L., McElrath M.J., Weinhold K. et al. Cytotoxic T cell and neutralizing antibody responses to HIV-1 envelope with a combination vaccine regimen. J. Infect. Dis., 1998, v.177, p.301-309.

117. Cox J.H., Garner R.P., Redfield R.R. et al. Antibody-dependent cellular cytotoxicity in HIV type 1-infected patients receiving VaxSyn: a recombinant gpl60 envelope vaccine. AIDS Res. Hum. Retrovir., 1999, v. 15, no.9, p.847-854

118. Cromwell MA., Veazey R.S., Altman J.D. et al. Induction of mucosal homing virus-specific CD8+ T lymphocytes by attenuated simian immunodeficiency virus. J. Virol, 2000, v.74, p.8762-8766.

119. Crotty S, Miller S.J, Lohman B.L. et al. Protection against simian immunodeficiency virus vaginal chellenge by using sabin poliovirus vectors. J. Virol, 2001, v.75, p.7435-7452

120. Crotty S., Miller S.J., Lohman B.L., Neagu M.R., Compton L., Lu D. et al. Protection against simian immunodeficiency virus vaginal chellenge by using sabin poliovirus vectors. J. Virol., 2001, v.75, p.7435-7452.

121. D'Souza M.P., Kent K.A., Thiriart C. et al. International collaboration comparing neutralization and binding assays for monoclonal antibodies to simian immunodeficiency virus. AIDS Res. Hum. Retrovir., 1993, v. 9, p. 415-422.

122. Dalton P. Anthony Fauci lends support to focus on cure. Proj Inf Perspect. 2008 Sep;(46):l-4.

123. Daniel M.D., Kirchhoff F., Czajak S.C., Sehgal P.K., Desrosiers R.C. Protective effects of a live attenuated SIV vaccine with a deletion in the nef gene. Science, 1992, v.258, no.5090, p.1938-1941.

124. De Roda Husman A.M., Koot M., Cornelissen M. et al. Association between CCR5 genotype and the clinical course of HIV-1 infection. Ann. Intern. Med., 1997, vol. 127, no. 10, p. 882-890.

125. Demberg T, Robert-Guroff M. Mucosal immunity and protection against HIV/SIV infection: strategies and challenges for vaccine design. Int Rev Immunol. 2009;28(l):20-48.

126. Denton PW, Garcia JV. Novel humanized murine models for HIV research. Curr HIV/AIDS Rep». 2009 Feb;6(l): 13-9.

127. Desrosiers R.C. Prospects for an AIDS vaccine. Nat. Med., 2004, v.10, no.3, p.221-223.

128. Devico A.L., Fouts T.R., Shata M.T., Kamin-Lewis R., Lewis G.K., Hone D.M. Development of an oral prime-boost strategy to elicit broadly neutralizing antibodies against HIV-1. Vaccine, 2002, v.20, no. 15, p. 1968-1974.

129. Thompson C.B. et al. Autoreactive cytotoxic T lymphocytes in humanimmunodeficiency virus type 1-infected subjects. J. Exp. Med., 1996, v. 183, p.2509-2516

130. Doan L.X., Li M., Chen C., Yao Q. Virus-like particles as HIV-1 vaccines. Rev. Med. Virol., 2005, v.15, no.2, p.75-88.

131. Dorsky D.I., Wells M., Harrington R.D. Detection of HIV-1 infection with a green fluorescent protein reporter system. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retroviral. 1996, v. 13, p.308-313.

132. Douek D.C. Brenchley J.M, Betts M.R et al. HIV preferentially infects H1V-specific CD4+ T-cells. Nature, 2002, v.417, p. 95-98.

133. D'Souza M.P., Kent K.A., Thiriart C., Collignon C., Milman G. International collaboration comparing neutralization and binding assays for monoclonal antibodies to simian immunodeficiency virus. AIDS Res. Hum. Retrovir., 1993, v.9, p.415-422.

134. Durier C., Launay O., Meiffredy V., Saidi Y., Salmon D., Levy Y., Guillet J.G., Pialoux G., Aboulker J.P. Clinical safety of HIV lipopeptides used as vaccines in healthy volunteers and HIV-infected adults. AIDS, 2006, v.20, no.7, p. 1039-1049.

135. Egan M.A. Current prospects for the development of a therapeutic vaccine for the treatment of HIV type 1 infection. AIDS Res. Hum. Retrovir., 2004, v.20, no.8, p.794-806.

136. Egger M., May M., Chene G., Phillips A.N, Ledergerber В., Dabis F. et al. Prognosis of HIV-1-infected patients starting highly active antiretroviral therapy: a collaborative analysis of prospective studies. Lancet, 2002, v.360, p.l 19-129.

137. El Amari EB, Hirschel B. HIV-AIDS 2008: the year in review. Rev Med Suisse. 2009 Jan 7;5(185):69-71.

138. End Point Neutralization Assay. WHO Guidelines for Standart HIV Isolation Procedures 1994, 1998 update.

139. Ensoli B. Rational vaccine strategies against AIDS: background and rationale. Microbes Infect., 2005, v.7, no. 14, p.1445-1452.

140. Ensoli В., Cafaro A. HIV-1 Tat vaccines. Virus Res., 2002, v.82, p.91-101.

141. Erbacher P, Bettinger T, Belguise-Valladier P. et al. Transfection and physical properties of various saccharide, poly(ethylene glycol), and antibody-derivatized polyethylenimines (PEI). J. Gene Med, 1999, v.l, no.3, p.210-222.

142. Eriksson.K, Quiding-Jarbrink M, Osek J. et al. Specific-antibodysecreting cells in the rectums and genital tracts of nonhuman primates following vaccination. Infect. Immun, 1999, v.66, p.5889-5896.

143. Esparza J, Osmanov S. HIV vaccines: a global perspective. Curr. Mol. Med, 2003, v.3, p.183-193.

144. Ethical considerations in HIV preventive vaccine research, UNAIDS, 2000.

145. Excler J.L. AIDS vaccine development: Perspectives, challenges & hopes. Indian J. Med. Res, 2005, v. 121, no.4, p.568-581.

146. Fackler OiT, Baur A.S: Live and let die: Nef functions beyond HIV replication. Immunity, 2002, v. 16, p.493-497.

147. Fauci A, Johnston M.I, Dieffenbach C.W, Burton D.R, Hammer S.M, Hoxie J.A, Martin M, Overbaugh J, Watkins D.I, Mahmoud A, Greene- W.C. HIV Vaccine research: The Way Forward. Science, 2008, v.321, no.5888, p.530-532.

148. Fauci A.S. Host factors and the pathogenesis of HIV-induced disease.Nature, 1996, v.3 84, no.6609, p.529-534.

149. Fauci A.S. Resistance to HIV-1 infection: it's in the genes. Nat. Med, 1996, v.2, no.9, p.966-967.

150. B.F., Telenti A., Goldstein D.B. A Whole-Genome Association Study of Major Determinants for Host Control of HIV-1. Science, 2007, v.317, no.5840, p.944-947.

151. Ferrari G., Humphrey W., McElrath M.J. et al. Clade B-based HIV-1 vaccines elicit cross-clade cytotoxic T lymphocyte reactivities in uninfected volunteers. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, v.94, p.l396-1401.

152. Fitzgerald D:W., Pape J.W., Wasserheit J.N., Counts G.W., Corey L. Provision of treatment in HIV-1 vaccine trials in developing countries. Lancet, 2003, v.362, p.993-994.

153. Fleming T.R. One sample multiple testing for phase II clinical trials. Biometrics, 1982, v.38; p. 143-151

154. Franchini G., Gurunathan S., Baglyos L., Plotkin S., Tartaglia J. Poxvirus-based vaccine candidates for HIV: two decades of experience with special emphasis on canarypox vectors. Expert Rev. Vaccines, 2004, v.3, suppl.l, S75-88.

155. Frey S.E. Unique risks to volunteers in HIV vaccine trials, J. Investig. Med.,2003, v.51, Suppl. l,p.S 18-20.

156. G8 endorses plan to accelerate AIDS vaccine development. IAVI Report, May-August 2004, v.8, no.2, p.l9.

157. Gahery-Segard H., Pialoux G., Charmeteau В., Sermet S., Poncelet H., Raux M. et al. Multiepitopic B- and T-cell responses induced in humans by a human immunodeficiency virus type 1 lipopeptide vaccine. J. Virol., 2000, v.74, no.4, p.1694-1703.

158. Gallo R.C. Tat as one key to HIV-induced immune pathogenesis and Tat toxoid as an important component of a vaccine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, v.96, p.8324-8326.

159. Gallo R.C. The end or the beginning of the drive to an HIV-preventive vaccine: a view from over 20 years. Lancet, 2005, v.366, no.9500, p.l 894-1898.

160. Gao F., Weaver E.A, Lu Z., Li Y., Liao H.X., Ma B. et al. Antigenic-ity and immunogenicity of a synthetic human immunodeficiency virus type 1 group m consensus envelope glycoprotein. J. Virol., 2005, v.79, no.2, p.l 154-1163.

161. Garcia F., Plana M., Ortiz G.M., Bonhoeffer S., Soriano A., Vidal C. et al. The virological and immunological consequences of structured treatment interruptions in chronic HIV-1 infection. AIDS, 2001, v. 15, no.9, p.29-40

162. Girard M., Meignier В., Barre-Sinoussi F., Kieny M.P., Matthews Т., Muchmore E. et al. Vaccine-induced protection of chimpanzees against infection by a heterologous human immunodeficiency virus type 1. J. Virol., 1995, v.69, no.10, p.6239-6248.

163. Girard M.P., Osmanov S.K., Kieny M.P. A review of vaccine research and development: the human immunodeficiency virus (HIV). Vaccine, 2006, v.24, no. 19, p.4062-4081.

164. Girard MP, Bansal GP. HIV/AIDS vaccines: a need for new concepts? Int Rev Immunol. 2008;27(6):447-71.

165. Giri M., Ugen K.E., Weiner D.B. DNA vaccines against human immunodeficiency vims type 1 in the past decade. Clin. Microbiol. Rev., 2004, v. 17, no.2, p.370-389.

166. Goebel F.D., Mannhalter J.W., Belshe R.B. et al. Recombinant gpl60 as a therapeutic vaccine for HIV-infection: results of a large randomized. AIDS, 1999, v.13, no.12, p.1461-1468

167. Gorse G.J., Rogers J.H., Perry J.E. et al. HIV-1 recombinant gpl60 vaccine induced antibodies in serum and saliva. Vaccine, 1995, v. 13, p.209-214.

168. Gorse G.J., Keefer M.C., Belshe R.B., Matthews T.J., Forrest B.D., Hsieh R.H. et al. A dose-ranging study of a prototype synthetic HIV-1MN V3 branched peptide vaccine. J. Infect. Dis., 1996, v.l73, p.330-339.

169. Gorse G.J., Patel G.B., Newman F.K. et al. Antibody to native human immunodeficiency vims type 1 envelope glycoproteins induced by IIIB and MN recombinant gpl20 vaccines. Clin. Diag. Lab. Immunol., 1996, v.3, p.378-386.

170. Gotch F., Holmes H, Imamia N. The importance of standardisation of laboratory evaluations in HIV vaccine trials. Microbes and Infection, 2005, v.7, no.14, p.1424-1432.

171. Gottlieb M.S., Schroff R., Schanker H. et al. Pneumocystis carinii pneumonia and mucosal candidiasis in previously healthy homosexual men. New Engl. J. Med, 1981, v.305, p.1425-1430.

172. Goudsmit J, Boucher C.A, Meloen R.H, Epstein L.G, Smit L, van der Hoek L, Bakker M. Human antibody response to a strain-specific HIV-1 gpl20 epitope associated with cell fusion inhibition. AIDS, 1988, v.2, p. 157-164.

173. Goulder P.J, Bunce M, Luzzi G, Phillips R.E, McMichael A.J. Potential underestimation of HLA-C-restricted cytotoxic T-lymphocyte responses. AIDS, 1997, v.l 1, no. 15, p. 1884-1886.

174. Graham B.S, Bunton L.A, Wright P.F, Karzon D.T. The role of T cell subsets in the pathogenesis of primary infection and reinfection with respiratory syncytial virus in mice. J. Clin. Invest, 1991, v.88, p.1026-1033.

175. Graham B.S, Gorse G.J, Schwartz D.H. et al. Determinants of antibody response after recombinant gpl60 boosting in vaccinia-naive volunteers primed with gp 160-recombinant vaccinia virus. J. Infect. Dis, 1994, v. 170, p.782-786.

176. Graham B.S, Wright P.F. Candidate AIDS vaccines. N. Engl. J. Med, 1995, v.333, no.20, p.1331-1339.

177. Graham B.S, Keefer M.C, McElrath M.J. et al. Safety and immunogenicity of a candidate HIV-1 vaccine in healthy adults: Recombinant glycoprotein (rgp) 120 -A randomized, double-blind trial. Ann. Intern. Med, 1996, v. 125, p.270-279.

178. Graham B.S, Karzon D.T. AIDS Vaccine Development in Textbook of AIDS Medicine, Second Edition. Merigan T.C, Bartlett J.G, Bolognesi D, editors. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1998, Chapter 42, p.689-724.

179. Graham B.S. Clinical trials of HIV vaccines. HIV vaccine trials, 2000, v.l, p.20-38.

180. Graham B.S., Mascola J.R. Lessons from failure preparing for future HIV-1 vaccine efficacy trials. J Infect Dis. 2005 Mar l;191(5):647-649.

181. Gringeri A., Santagostino E., Muca-Perja M. et al. Safety and immunogenicity of HIV-1 Tat toxoid in immunocompromised HIV-1-infected patients. J. Hum.

182. Virol., 1998, v. 1, no.4, p.293-298

183. Hammonds J., Chen X., Fouts Т., DeVico A., Montefiori D., Spearman P. Induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus type 1 primary isolates by Gag-Env pseudovirion immunization. J. Virol., 2005, v.79, no.23, p.14804-14814.

184. Напке Т., McMichael A.J., Mwau M., Wee E.G., Ceberej I., Patel S., Sutton J., Tomlinson M., Samuel R.V. Vaccine, 2002, v.20, no.2, p. 1995-1998.

185. Harvey T.J., Anraku I., Linedale R., Harrich D., Mackenzie J., Suhrbier A. et al. Kunjin vims replicon vectors for human immunodeficiency vims vaccine development. J. Virol., 2003, v.77, no. 14, p.7796-7803.

186. Неепеу J.L. Requirement of diverse T-helper responses elicited by HIV vaccines: induction of highly targeted humoral and CTL responses. Expert Rev. Vaccines, 2004, v.3, Suppl 1, no.4, p.S53-S64.

187. Hejdeman В., Bostrom A.C., Matsuda R., Calarota S., Lenkei R., Fredriksson E.L. et al. DNA immunization with HIV early genes in HIV type 1-infected patients on highly active antiretroviral therapy. AIDS Res. Hum. Retrovir., 2004, v.20, no.8, p.860-870

188. Helseth E., Kowalski M., Gabuzda D., Olshevsky U., Haseltine W., Sodroski J. Rapid complementation • assays measuring replicative potential of human immunodeficiency vims type 1 envelope glycoprotein mutants. J. Virol. 1990, v.64, p.2416-2420.

189. Henderson J. Eradication: Lessons From the Past. Morbidity and Mortality Weekly Report (MMRW online), 1999.

190. Heyward W.L., MacQueen K.M., Goldenthal K.L. HIV vaccine development and evaluation: realistic expectations. AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1998, v. 14, no. 18, (Suppl 3), S205-S210.

191. Hinkula J. Clarification of how HIV-1 DNA and protein immunizations may be better used to obtain HIV-1-specific mucosal and systemic immunity. Expert Rev, Vaccines, 2007, v.6, no.2, p.203-212.

192. HIV Vaccine Handbook. Community Perspectives on Participating in Research, Advocacy, and Progress. W. Snow, ed. AIDS Vaccine Advocacy Coalition (AVAC), 1999.

193. HIV Vaccine Handbook. Global Perspectives. P.Kahn, ed., AVAC, 2005.

194. Hofmann-Lehmann R., Vlasak J., Williams A.L., Chenine A.L., McClure H.M., Anderson D.C. et al. Live attenuated, nef-deleted SIV is pathogenic in most adult macaques after prolonged observation. AIDS, 2003, v.17, no.2, p.157-166.

195. Hudgens M.G., Hoering A., Self S.G. On the analysis of viral load endpoints in HIV vaccine trials. Stat Med. 2003 Jul 30;22(14):2281-2298.

196. Hudgens M.G., Self S.G., Chiu Y.L., Russell N.D., Horton H., McElrath M.J. Statistical considerations for the design and analysis of the ELISpot assay in HIV-1 vaccine trials. J. Immunol. Methods, 2004, v.288, no.l-2, p.l9-34.

197. Hurwitz J.L., Slobod K.S., Lockey T.D., Wang S., Chou Т.Н., Lu S. Application of the polyvalent approach to HIV-1 vaccine development. Curr. Drug. Targets Infect. Disord., 2005, v.5, no.2, p. 143-156.

198. HVTN 502 and HVTN 503 HIV Vaccine Clinical Trials. Questions and answers. National Institute of Allergy and Infectious Diseases/ NIH. October 23, 2007.

199. IAVI List of Ongoing Preventive AIDS vaccine trials, 2008.

200. IAVI Policy Brief, IAVI, 2006

201. Transplantation, 1998, v.65, p.979-988.

202. Jameson S.C. Maintaining the norm: T-cell homeostasis. Nature Rev. Immunol.,2002, v.2, p.547-556

203. Jefferys R., Harrington M. Outstanding questions on HIV vaccine trial. Science, 2004, v.305, no.5681, p.180.

204. Jeffs S.A., Goriup S., Kebble В., Crane D., Bolgiano В., Sattentau Q. et al. Expression and characterisation of recombinant oligomeric envelope glycoproteins' derived from primary isolates of HIV-1. Vaccine, 2004, v.22, no. 8, p. 1032-1046.

205. Jenkins RA, Temoshok LR, Virochsiri K. Incentives and disincentives to participate in prophylactic HIV vaccine research. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retroviral, 1995, v.9, no.l, p.36-42.

206. John R, Arango-Jaramillo S, Self S, Schwartz D.H. Modeling partially effective HIV vaccines in vitro. J. Infect. Dis, 2004, v.189, no.4, p.616-623.

207. Johnson P.R, Schnepp B.C., Connell M.J, Rohne D, Robinson S, Krivulka G.R. et al. Novel adeno-associated virus vector vaccine restricts replication of simian immunodeficiency virus in macaques. J. Virol, 2005, v.79, no.2, p.955-965.

208. Kang S.M, Compans R.W. Enhancement of mucosal immunization with viruslike particles of simian immunodeficiency virus. J. Virol, 2003, v.77, no.6, p.3615-3623.

209. Kang et al, 2003. Mucosal immunization with virus-like particles of simiantimmunodeficiency virus conjugated with cholera toxin subunit B. J Virol 2003;77(18):9823-30.

210. Kang S.M, Yao Q, Guo L, Compans R.W. Mucosal immunization with viruslike particles of simian immunodeficiency virus conjugated with cholera toxin subunit B. J. Virol, 2003, v.77, no. 18, p. 9823-9830.

211. Katzenstein D.A., Kundu S., Spritzler J. et al. Delayed-type hypersensitivity to recombinant HIV envelope glycoprotein (rgp 160) after immunization with homologous antigen. J. Acquired Immune Defic. Syndr., 1999, v.22, no.4, p.341-347

212. Kaufmann S.H., McMichael A,J. Annulling a dangerous liaison: vaccination strategies against AIDS and tuberculosis. Nat. Med., 2005, v.l 1, (Suppl.4), p.S33-44.

213. Keefer M.C., Graham B.S., McElrath M.J. et al. Safety and immunogenicity of Env 2-3, a human immunodeficiency virus type 1 candidate vaccine, in combination with a novel adjuvant, MTP-PE/MF59. AIDS Res. Hum. Retrovir., 1996, v. 12, p.683-693.

214. Kestler H.W. Ill, Ringler D.J., Mori K., Panicali D.L., Sehgal P.K., Daniel M.D., Desrosiers R.C: Importance of the nef gene for maintenance of high virus loads and for development of AIDS. Cell, 1991, v.65, p.651-662.

215. Khaitov R.M. Search of AIDS in immunodeficiency patients in the USSR. I Int. Conf.' on AIDS, Atlanta, 1985, p.36.

216. Khaitov R.M., Sidorovitch I.G., Fonina L. A., Liozner A.L. Env and gag peptides interacting with HIV antibodies. Immune deficiencies and Allergies, Moscow, 1986, p.212.

217. Khaitov R.M., Liozner A.L. Antipeptide antibodies recognized HIV-1 core antigens. IV Int. Conf. on AIDS, Stockholm, 1988, p.l 197.

218. Khaitov R.M. Creation of artificial antigens and vaccines on the basis of synthetic polyelectrolytes. In: Laurence Lasky (ed.), Technological advances in vaccine development. New York, Alan R. Liss, 1988, p. 411-428.

219. Khaitov R.M. Acquired immunodeficiency syndrome. Harwood Acad. Publishers, London, 1989, 93 p.

220. Khaitov R.M. Vaccines based on synthetic polyions and peptides. Ann NY Acad Sci. 1993, 685:788-802.

221. Khaitov R.M. Molecular bases for the construction of artificial immunogens and vaccines based on synthetic polyions. Allergy Proc. 1995, 16:255-260.

222. Kilby J.M., Hopkins S., Venetta T.M. et al. Potent suppression of HIV-1 replication in humans by T-201: a peptide inhibitor of gp41-mediated virus entry. Nat. Med., 1998, v.4, no. 11, p. 1302-1307

223. Kimpton J., Emerman M. Detection of replication-competent and pseudotyped human immunodeficiency virus with a sensitive cell line on the basis of activation of an integrated beta-galactosidase gene. J. Virol., 1992, v.66, p.2232-2239.

224. Kinlock-de Loes S., Hoen В., Smith D.E. et al. Impact of therapeutic immunization on HIV-1 viremia after discontinuation of antiretroviral therapy initiated during acute infection. J. Infect. Dis., 2005, v., 192, p.607-617.

225. Kiwanuka-Tondo J., Snyder L.B. The influence of organizational characteristics and campaign design elements on communication campaign quality: evidence from 91 Ugandan AIDS campaigns. J. Health Commun., 2002, v.7, p.59-77.

226. Kjeken R., Tjelle Т., Kvale D., Mathiesen I. Clinical evaluation of pain and muscle damage induced by electroporation of skeletal muscle in humans. Mol. Ther., 2004, v.9, (Suppl. 157), S60

227. Klausner R.D., Fauci A.S., Corey L.N., Nabel G.J., Gayle H., Berkley S. et al. Medicine. The need for a global HIV vaccine enterprise, Science,• 2003, v.300, no.5628, p. 2036-2039.

228. Klein M. Prospects and challenges for prophylactic and therapeutic HIV vaccines. Vaccine, 2003, v.21, no.7-8; p.616-619.

229. Koff W.C.,' Johnson P.R., Watkins D.I., Burton D.R., Lifson J.D., Hasenkrug K.J. et al. HIV vaccine design: insights from live attenuated SIV vaccines. Nat. Immunol., 2006, v.7, no.l, p. 19-23.

230. Kostense S., Koudstaal W., Sprangers M., Weverling G.J., Penders G., Helmus N. et al. Adenovirus types 5 and 35 seroprevalence in AIDS risk groups supports type 35 as a vaccine vector. AIDS, 2004. v. 18, no.8, p.1213-1216.

231. Kuiken C.L., Foley В., Freed E., Hahn B.H., McCutchan F.E., Mellors J.W. et al. HIV Sequence Compendium 2002, Theoretical Biology and Biophysics Group. Los Alamos, NM: Los Alamos Laboratory; 2002.

232. Kuroda M.J., Schmitz J.E., Charini W.A. et al. Emergence of CTL coincides with clearance of virus during primary simian immunodeficiency virus infection in rhesus monkeys. J. Immunol., 1999, v.162, no.9, p.5127-5133.

233. Langlois A.J., Weinhold K.J., Matthews T.J., Bolognesi D.P. In vitro assays for detecting neutralizing and fusion-inhibiting antibodies to SIVMAC251. AIDS Res. Hum Retroviruses 1991, v.7, p.713-720.

234. Lanzavecchia A., Sallusto F. Dynamics of T lymphocyte responses: intermediates, effectors, and memory cells. Science, 2000, v.290, no.5489, p.92-97.

235. Lau CY, Stansbury JP, Gust DA, Kafaar Z. Social and behavioral science in HIV vaccine trials: a gap assessment of the literature. Expert Rev Vaccines. 2009 Feb;8(2): 179-90.'

236. Laurence J. T-Cell Subsets in Health, Infectious Disease, and Idiopathic CD4+T Lymphocytopenia. Ann. Intern. Med, 1993, v.l 19, p.55-62.

237. Ledford H. HIV vaccine may raise risk. Nature, 2007, v.450, p.325

238. Lehner T. Innate and adaptive mucosal immunity in protection against HIV infection. Vaccine, 2003, v.21, Suppl 2, p.S68-76.

239. Lehner T, Bergmeier L, Wang Y, Mitchell E. A rational basis for mucosal vaccination against HIV infection. Immunol. Rev, 1999, v.l70, p. 183-196.

240. Lehner T, Bergmeier L.A, Panagiotidi C. et al. Induction of mucosal and systemic immunity to a recombinant simian immunodeficiency viral protein. Science, 1992, v.258, p.1365-1369.

241. Lehner T, Brookes R, Panagiotidi C. et al. T and В cell functions and epitope expression in non-human primates immunized with SIV by the rectal as compared with the systemic route. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v.90, p.8638-8642.

242. Lemckert A.A, Goudsmit J, Barouch D.H. Challenges in the search for an HIV vaccine. Eur J Epidemiol, 2004, v. 19, no.6, p.513-516.

243. Lenz O, Dittmar M.T, Wagner A, Ferko B, Vorauer-Uhl K, Stiegler G. et al. Trimeric membrane-anchored gp41 inhibits HIV membrane fusion. J. Biol. Chem, 2005, v.280, no.6, p.4095-4101.

244. Leone A, Picker LJ, Sodora DL. IL-2, IL-7 and IL-15 as immuno-modulators during SIV/HIV vaccination and treatment. Curr HIV Res. 2009 Jan;7(l):83-90.

245. Letvin N.L, Montefiori D.C, Yasutomi Y, Perry H.C, Davies M.E, Lekutis C. et al. Potent, protective anti-HIV immune responses generated by bimodal HIV envelope DNA plus protein vaccination. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, v.94, nol7, p.9378-9383.

246. Letvin N.L. Progress toward an HIV vaccine. Annu. Rev. Med., 2005, v.56, p.213-223.

247. Letvin N.L. Progress and obstacles in the development of an AIDS vaccine. Nat. Rev. Immunol., 2006, v.6, p. 930-939.

248. Lian Y., Srivastava I., Gomez-Roman V.R., Zur Megede J., Sun Y., Kan E. et al. Evaluation of envelope vaccines derived from the South African subtype С human immunodeficiency vims type 1 TV1 strain. J. Virol., 2005, v.79, no.21, p.13338-13349.

249. Liang X. , Casimiro D.R., Schleif W.A., Wang F., Davies M.E., Zhang Z.Q., Fu T.M., Finnefrock A.C., Handt L., Citron M.P. et al. Vectored Gag and Env but not

250. Tat show efficacy against simian-human immunodeficiency vims 89.6P challenge in Mamu-A*01 -negative rhesus monkeys. J. Virol., 2005, v.79, no.19, p. 12321-12331.

251. Lindenburg C.E., Stolte I., Langendam M.W. et al. Long-term followup: no effect of therapeutic vaccination with HIV-1 pl7/p24:Ty vims-like particles on HIV-1 disease progression. Vaccine, 2002, v.20, no. 17-18, p.2343-2347

252. Lisziewicz J., Bakare N., Lori F. Therapeutic vaccination for future management of HIV/AIDS. Vaccine, 2003, v.21, p.620-623

253. Lisziewicz J., Gabrilovich D:I., Varga G. et al. Induction of potent human immunodeficiency vims type 1-specific T cell-restricted immunity by genetically modified dendritic cells. J. Virol., 2001, v.75, no. 16, p.7621-7628

254. Liu X.L., Clark K.R., Johnson P.R. Production of recombinant adeno-associated vims vectors using a packaging cell line and a hybrid recombinant adenovims. Gene Ther., 1999, v.6, no.2, p.293-299.

255. Loff B. Africans Discuss Ethics of Biomedical Research. The Lancet, 2000, v.359, p.956.

256. Longo O, Tripiciano A, Fiorelli V, Bellino S, Scoglio A, Collacchi B, Alvarez MJ, Francavilla V, Arancio A, Paniccia G, Lazzarin A, Tambussi G, Din CT,

257. Visintini R, Narciso P, Antinori A, D'Offizi G, Giulianelli M, Carta M, Di Carlo A, Palamara G, Giuliani M, Laguardia ME, Monini P, Magnani M, Ensoli F, Ensoli B. Phase I therapeutic trial of the HIV-1 Tat protein and long term follow-up. Vaccine. 2009

258. Lori F., Lewis M.G., Xu J., Varga G., Zinn D. E., Jr, Crabbs C. et al. Control of SIV rebound through structured treatment interruptions during early infection. Science, 2000, v.290, no.5496, p.1591-1593.

259. Lu L.Y., Askonas B.A. Cross-reactivity for different type A influenza viruses of a cloned T-killer cell line. Nature, 1980, v.288, p.164-165.

260. Lu W., Arraes L.C., Ferreira W.T., Andrieu J.-M. Therapeutic dendritic-cell vaccine for chronic HIV-1 infection. Nat. Med.; 2004, v.10, no. 12, p.1359-1365.

261. Luckay A., Sidhu M.K., Kjeken R. et al. Effect of plasmid DNA vaccine design and in vivo electroporation on the resulting vaccine-specific immune responses in rhesus macaques. J. Virol., 2007, v.81, no. 10, p.5257-5269

262. Lundholm P, Leandersson A-C, Christensson B, et al. DNA mucosal HIV vaccine in humans. Virus Res, 2002, 82:141-145.

263. Lundholm P., Asakura Y., Hinkula J. et al. Induction of mucosal IgA by a novel jet delivery technique for HIV-1 DNA. Vaccine, 1999, v.17, p.2036-2042.

264. Lyerly H.K., Reed D.L., Matthews T.J., Langlois A.J., Ahearne P.A., Petteway S.R. Jr, Weinhold K.J. Anti-GP 120 antibodies from HIV seropositive individuals mediate broadly reactive anti-HIV ADCC. AIDS Res, Hum Retrovir., 1987, v.3, no.4, p.409-422.

265. MacGregor R.R., Boyer J.D., Ugen K.E. et al. First human trial of a DNA-based vaccine for treatment of human immunodeficiency virus type 1 infection: safety and host response. J. Infect. Dis., 1998, v. 178, no.l, p.92-100

266. Mackewicz C.E., Blackbourn D.J., Levy J.A. CD8+ T cells suppress human immunodeficiency virus replication by inhibiting viral transcription. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v.92, p.2308-2312.

267. Mackewicz C.E., Levy J.A., Cruikshank W.W., Kornfeld Hi, Center D.M. Role of IL-16 in HIV replication. Nature, 1996, v.383, p.488-489.

268. Maddren C.A. AIDS Vaccines: Balancing Human Plights with Public Health Temp. Int. Сотр. L.J., 2003, v. 17, no.l, p.277-302.

269. Maggiorella M.T., Baroncelli S., Michelini Z., Fanales-Belasio E., Moretti S., Sernicola L. et al. Long-term protection against SHIV89.6P replication in HIV-1 Tat vaccinated cynomolgus monkeys. Vaccine, 2004, v.22, no.25-26, p.3258-3269.

270. Makgoba M.W., Solomon N., Tucker T.J1. The search for an HIV vaccine. BMJ, 2002, v.324:211-213.

271. Martin S.J'., Vyakarnam A., Cheingsong-Popov Rl et al. Immunization of human HIV-seronegative volunteers with recombinant pl7/p24:Ty virus-like particles elicits HIV-1 p24-specific cellular and humoral immune responses. AIDS, 1993, v.7, p.1315-1323.

272. Mascola J.R., Nabel G.J. Vaccines for the prevention of HIV-1 disease. Curr. Opin. Immunol., 2001, vol. 13, p. 489-495.

273. Mashishi Т., Gray C.M. The ELISPOT assay: an easily transferable method for measuring cellular responses and identifying T cell epitopes. Clin. Chem. Lab. Med., 2002, v.40, no.9, p.903-910.

274. Mayer K, Pizer HF, Venkatesh KK. The social ecology of HIV/AIDS. Med Clin North Am. 2008 Nov;92(6): 1363-75.

275. Mazur H., Michelis M.A., Greene J.B. et al. An outbreak of community-acquired pneumocytosis carinii pneumonia. New Engl. J. Med., 1981, v.305, p.1431-1438.

276. McClure C.A., Gray G., Rybczyk G.K., Wright P.F. Challenges to conducting HIV preventative vaccine trials with adolescents. J. Acquir. Immune Defic. Syndr., v.36, no.2, p.726-733.

277. McDermott M.R., Bienenstock J. Evidence for a common mucosal system. I. Migration of В immunoblasts into intestinal, respiratory and genital tissues. J. Immunol., 1979, v.122, p.1892.

278. McDonnell W.M., Askari F.K. DNA vaccines. N. Engl. J. Med., 1996, v.334, no.l, p.42-45.

279. McEvers K, Elrefaei M, Norris P, Deeks S, Martin J, Lu Y, et al. Modified anthrax fusion proteins deliver HIV antigens through MHC Class I and II pathways. Vaccine, 2005, v.23, no.32, p.4128-4135.

280. McGaughey G.B, Barbato G, Bianchi E, Freidinger R.M, Garsky V.M, Hurni W.M. et al. Progress towards the development of a HIV-1 gp41-directed vaccine. Curr. HIV Res, 2004, v.2, no.2, p.l93-204.

281. McMichael A, Hanke T. The quest for an AIDS vaccine: is the CD8+ T-cell approach feasible? Nat. Rev. Immunol, 2002, v.2, p. 283-291.

282. McNeil J.G, Johnston M.I, Birx D.L, Tramont E.C. Policy rebuttal. HIV vaccine trial justified. Science, 2004, v.303, no.5660, p.961.

283. Means R.E, Greenough T, R. Desrosiers C. Neutralization sensitivity of cell culture-passaged simian immunodeficiency virus. J. Virol, 1997, v.71, p.7895-7902.

284. Mellors J.W, Rinaldo C.R. Jr, Gupta P, White R.M, Todd J.A, Kingsley E.A. Prognosis in HIV-1 infection predicted by the quantity of virus in plasma. Science, 1996, v.272, no.5265, p.l 167-1170

285. Mestecky J, Kutteh W.H, Jackson S. Mucosal immunity in the female genital tract: relevance to vaccination efforts against the human immunodeficiency virus. AIDS Res. Hum. Retrovir, 1994, v. 10, Suppl 2, p.Sl 1-20.

286. Metadilogkul O, Jirathitikal V, Bourinbaiar A.S. Survival of end-stage AIDS patients receiving V-l Immunitor. HIV Clin. Trials, 2002, v.3, p.258-259

287. Migueles S.A, Laborico A.C, Shupert W.L. et al, HIV-specific CD8+ T cell proliferation is coupled to perforin expression and is maintained in nonprogressors. Nat. Immunol, 2002, v.3, p. 1061-1068

288. Miller C.J, Lti F.X. Anti-HIV and -SIV immunity in the vagina. Int. Rev. Immunol, 2003, v.22, no.l, p.65-76.

289. Mills E., Cooper С., Guyatt G., Gilchrist A., Rachlis В., Sulway C., Wilson K. Barriers to participating in an HIV vaccine trial: a systematic review. AIDS, 2004, vol.18, no. 17, p.2235-2242.

290. Mitchison N.A., Sattentau Q. Fundamental Immunology and What it Can Teach us About HIV Vaccine Development. Curr Drug Targets Infect Disord. 2005 Jul;5(2): 87-93.

291. Montagnier L. There could be an AIDS vaccine in four years.Daily Mail Reporter, 2008, 06th Oct.

292. Montefiori D.C., Robinson W.E., Schuffman S.S., Mitchell W. M. Evaluation of antiviral drugs and neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus by a rapid and sensitive microtiter infection assay. J. Clin. Microbiol., 1988, 26:231-235.

293. Montefiori D.C., Metch В., McElrath M.J., Self S., Weinhold K.J., Corey L. Demographic factors that influence the neutralizing antibody response in recipients of recombinant HIV-1 gpl20 vaccines. J. Infect. Dis., 2004, v. 190, p. 1962-1969.

294. Moodley K. HIV Vaccine Trial Participation in South Africa: An Ethical Assessment. J Med. & Philos. 2002, 27, p. 197-215.

295. Moodley K., Barnes J, van Rensburg EJ, Myer L. Willingness to participate in South African HIV vaccine trials concerns of medical professionals in the Western Cape. S. Afr. Med. J., 2002, v.92, no.l 1, p.904-906.

296. Moore J.P., Burton D. R. Urgently needed: a filter for the HIV-1 vaccine pipeline. Nat. Med., 2004, v. 10, p.769-771.

297. Moore J.P., Kitchen S.G., Pugach P., Zack J.A. The CCR5 and CXCR4 coreceptors-central to understanding the transmission and pathogenesis of human immunodeficiency virus type 1 infection. AIDS Res. Hum. Retrovir., 2004, vol.20, no.l, p.l 11-126.

298. Mthunzi P., Meyer D. Limited cross-reactivity between different HIV-1 clades. J. Clin. Virol., 2004, v.31, Suppl 1, p.S88-91.

299. Mugyenyi PN. HIV vaccines: the Uganda experience. Vaccine, 2002, v.20, no.15, p.1905-1908.

300. Murakoshi H, Kitano M, Akahoshi T, Kawashima Y, Dohki S, Oka S, Takiguchi M. Identification and characterization of 2 HIV-1 Gag immunodominant epitopes restricted by Asian HLA allele HLA-B*4801. Hum Immunol. 2009 Mar;70(3): 170-4.

301. Muster Т., Steindl F., Purtscher M., Trkola A., Klima A., Himmler G., Ruker F., Katinger H. A conserved neutralizing epitope on gp41 of human immunodeficiency virus type 1. J. Virol., 1993, v.61, p.6642-6647.

302. Mwau M., McMichael A.J., Напке T. Design and validation of an enzyme-linked immunospot assay for use in clinical trials of candidate HIV vaccines. AIDS Res. Hum. Retrovir., 2002, v. 18, no.9, p.611-618.

303. HIV-specific T-cell responses by DNA and recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) vaccines in humans. J. Gen. Virol., 2004., v.85, Pt 4, p.911-919.

304. Nabel G.J. HIV vaccine strategies. Vaccine, 2002, v.20, no.15, p. 1945-1947.

305. Nabel G.J. Immunology. Close to the edge: neutralizing the HIV-1 envelope. Science, 2005, v.308, v.5730, p.1878-1879.

306. Nanda A., Lynch D.M., Goudsmit J., Lemckert A.A., Ewald B.A., Sumtda S.M. et al. Immunogenicity of recombinant fiber-chimeric adenovirus serotype 35 vector-based vaccines in mice and rhesus monkeys. J. Virol., 2005, v.79, no.22, p.l 416114168.

307. Nathanson N. Towards an AIDS vaccine: the role of primate models. Int. J. STD AIDS, 1998, v.9, Suppl 1, p.3-7.

308. Nelson G.W., O'Brien S.J. Using mutual information to measure the impact of multiple genetic factors on AIDS. J. Acquired Immune. Defic. Syndr., 2006, v.42, no.3, p.347-354.

309. Newman P.A., Duan N., Rudy E.T., Anton P.A. Challenges for HIV vaccine dissemination and clinical trial recruitment: if we build it, will they come? AIDS Patient Care STDS, 2004, v. 18, no. 12, p.691-701.

310. Newman P.A., Duan N., Lee S.J., Rudy E., Seiden D., Kakinami L., Cunningham W. Willingness to participate in HIV vaccine trials: the impact of trial attributes. Prev. Med., 2007, v.44, no.6, p.554-557.

311. Ngu V.A., Ambe F. Effective vaccines against and immunotherapy of the HIV: a preliminary report (1). J. Cameroon Acad. Sci., 2001, v.'l, p.2-8

312. Nkolola J.P., Wee E.G., Im E.J., Jewell C.P., Chen N., Xu X.N., McMichael A.J., Hanke T. Engineering RENTA, a DNA prime-MVA boost HIV vaccine tailored for Eastern and Central Africa. Gene Ther., 2004, v. 11, no. 13, p. 1068-1080.

313. Noble S. Therapeutic AIDS vaccines. IAVI Report, 2004, v.7, no.3, p. 1-4.

314. Novak E.J., Liu A.W., Nepom G.T., Kwok W.W. MHC class II tetramers identify peptide-specific human CD4(+) T cells proliferating in response to influenza A antigen. J. Clin. Invest., 1999, v. 104, p.R63-R67.

315. Nyamathi A.M., Suhadev M., Swaminathan S., Fahey J.L. Perceptions of a community sample about participation in future HIV vaccine trials in south India. AIDS Behav, 2007, v.l 1, p.4, p.619-627.

316. Ongoing trials of Preventive AIDS Vaccines, 2005. IAVI Report, 2005, v.3, no.l.

317. Ongoing trials of Preventive AIDS Vaccines, 2006. IAVI Report, 2006.

318. Ongoing trials of Preventive AIDS Vaccines, 2008. IAVI Report, 2008

319. Osterhaus A.D., van Baalen C.A., Gruters R.A., Schutten M., Siebelink C.H., Hulskotte E.G. et al. Vaccination with Rev and Tat against AIDS. Vaccine, 1999, v.l7, p.2713-2714.

320. Pantaleo G, Demarest JF, Soudeyns H et al. Major expansion of CD8+ T cells with a predominant V beta usage during the primary immune response to HIV. Nature, 1994, v. 370, pp. 463-467.

321. Pantaleo G., Koup R.A. Correlates of immune protection in HIV-1 infection: what we know, what we don't know, what we should know. Nat. Med., 2004, v.10, p. 806-810

322. Pantaleo G. HIV-1 T-cell vaccines: evaluating the next step. The Lancet Inf. Dis., 2008, v.8, i.2, p.82-83

323. Pantophlet R., Wilson I.A., Burton D.R. Hyperglycosylated mutants of human immunodeficiency virus (HIV) type I monomeric gpl20 as novel antigens for HIV vaccine design. J. Virol., 2003, v.77, no.10, p.5889-5901.

324. Pantophlet R, Burton DR. GP120: target for neutralizing HIV-1 antibodies. Annu. Rev. Immunol., 2006, v.24, p.739-769.

325. Patterson B.K., Landay A., Andersson J. et al. Repertoire of chemokine receptor expression in the female genital tract: implications for human immunodeficiency virus transmission. Am. J. Pathol., 1998, v.153, p.481-490.

326. Pauza C.D., Trivedi P., Wallace M., Ruckwardt T.J., Le Buanec H., Lu W. et al. Vaccination with tat toxoid attenuates disease in simian/HIV-challenged macaques. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, v.97, no.7, p.3515-3519.

327. Peters B.S., Cheingsong-Popov R., Callow D. et al. A pilot phase II study of the safety and immunogenicity of HIV pl7/p24:VLP (p24-VLP) in asymptomatic HIV seropositive subjects. J. Infect. Dis., 1997, v.35, no.3, p.231-235.

328. Petrov R.V., Khaitov R.M., Kabanov V.A. Artificial antigens and vaccines based on non-natural polyelectrolytes. Sov. Sci. Rev. J. Physicochem. Biol. 1984, 5:277322.

329. Petrov R.V., Khaitov R.M. Highly immunogenic artificial complexes based on synthetic immunopotentiating polyions (artificial antigens and vaccines). Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol. 1986, 10:105-110.

330. Petrov R.V., Khaitov R.M., Norimov A.Sh. et al. Phenotype correction of Ir-genetic control of immune response to (T,G)-A-L conjugated to synthetic polyelectrolytes. Immunol. Lett. 1986, 12:237-242.

331. Piacentini L, Biasin M, Fenizia C, Clerici M. Genetic correlates of protection against HIV infection: the ally within. J Intern Med. 2009 Jan;265(l):l 10-24.

332. Pialoux G., Gahery-Segard H., Sermet S., Poncelet H., Fournier S., Gerard L. et al. Lipopeptides induce cell-mediated anti-HIV immune responses in seronegative volunteers. AIDS, 2001, v.15, no.10, p.1239-1249.

333. Pialoux G., Slama L. HIV vaccines. Presse Med., 2005, v.34, no.20, pt.2, p.1592-1596.

334. Piazza P., Fan Z., Rinaldo C.R. Jr. CD8+ T-cell immunity to HIV infection. Clin. Lab. Med., 2002, v.22, no.3, p.773-797.

335. Piguet V., Blauvelt A. Essential roles for dendritic cells in the pathogenesis and potential treatment of HIV disease. J. Invest. Dermatol., 2002, v. 119, no.2, p.365-369.

336. Pilcher H. Snapshot of a pandemic. Nature, 2004, v.430, no.6996, p.134-135.

337. Pincus S.H., Messer K.G., Cole R. et al. Vaccine-specific antibody responses induced by HIV-1 envelope subunit vaccines. J. Immunol., 1997, v.158, p.3511-3520.

338. Pinto L.A., Berzofsky J.A., Fowke K.R. et al. HIV-specific immunity following immunization with HIV synthetic envelope peptides in asymptomatic HIV-infected patients. AIDS, 1999, v.13, no.15, p.2003-2012

339. Pitcher C.J, Quittner C, Peterson D.M. et al. HIV-1-specific CD4+ T cells are detectable in most individuals with active HIV-1 infection, but decline with prolonged viral suppression. Nat. Med, 1999, v.5, no.5, p.518-525

340. Pitisuttithum P. HIV-1 prophylactic vaccine trials in Thailand. Curr. HIV Res, 2005, v.l, p. 17-30.

341. Plata F, Autran B, Martins L.P, Wain-Hobson S, Raphael M, Mayaud C, Denis M, Guillon J.M, Debre P. AIDS virus-specific cytotoxic T lymphocytes in lung disorders. Nature, 1987, v.328, no.6128, p.348-351

342. Plata F„ Langlade-Demoyen P, Abastado J.P, Berbar T, Kourilsky P. Retrovirus antigens recognized by cytolytic T lymphocytes activate tumor rejection in vivo. Cell, 1987, v.48, no.2, p.231 -240

343. Piatt E.J, Wehrly K, Kuhmann S.E, Chesebro B, Kabat D. Effects of CCR5 and CD4 cell surface concentrations on infections by macrophagetropic isolates of human immunodeficiency virus type 1. J.Virol, 1998, v,72, p.2855-2864.

344. Plotkin S.A, Cadoz M, Meignier B, Meric C, Leroy O, Excler J.L. et al. The safety and use of canarypox vectored vaccines. Dev. Biol. Stand, 1995, v.84, p. 165170.

345. Pope M. Dendritic cells as a conduit to improve HIV vaccines. Curr. Mol. Med, 2003, v.3, no.3, p.229-242.

346. Priddy F, Rida W, Excler J, Fast P, Koff W. Reassessing the Screening Test of Concept (STOC) Trial Design for AIDS Vaccines. AIDS Vaccine 2008, AIDS Res. Human Retrovir, 2008, SP01-03

347. Promadej-Lanier N, Thielen C, Hu DJ, Chaowanachan T, Gvetadze R, Choopanya K, Vanichseni S, McNicholl JM. Cross-reactive T cell responses in HIV

348. CRF01AE and B'-infected intravenous drug users: implications for superinfection and vaccines. AIDS Res Hum Retroviruses. 2009 Jan;25(l):73-81.

349. Publicover J., Ramsburg E., Rose J.K. A single-cycle vaccine vector based on vesicular stomatitis virus can induce immune responses comparable to those generated by a replication-competent vector. J. Virol., 2005, v.79, no.21, p. 1323113238.

350. Redfield R.R., Birx D.L., Ketter N. et al. A phase 1 evaluation of the immunogenicity of vaccination with recombinant gpl60 in patients with early human immunodeficiency vims infection. N. Engl. J. Med., 1991, v.324, p. 1677-1684.

351. Rerks-Ngarm S., Brown A.E., Khamboonruang C., Thongcharoen P., Kunasol P. HIV/AIDS preventive vaccine 'prime-boost' phase III trial: foundations and initial lessons learned from Thailand. AIDS. 2006, v.20, no.l 1, p.1471-1479.

352. Richman D.D., Wrin Т., Little S.J., Petropoulos C.J. Rapid evolution of the neutralizing antibody response to HIV type 1 infection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, v.100, p.4144-4149.

353. Rinaldo CR. Dendritic cell-based human immunodeficiency vims vaccine. J Intern Med. 2009 Jan;265(l): 138-58.

354. Robbins G.K., Addo M.M., Troung H., Rathod A., Habeeb K., Davis B. et al. Augmentation of HIV-1-specific T helper cell responses in chronic HIV-1 infection by therapeutic immunization. AIDS, 2003, v.17, no.8, p.l 121-1126

355. Robert-Guroff M., Brown M., Gallo R.C. HTLV-III-neutralizing antibodies in patients with AIDS and AIDS-related complex. Nature, 1985, v.316, no.6023, p.72-74.

356. Robert-Guroff M., Shepard E. A monoclonal antibody specific for a 52,000-molecular-weight human T-cell leukemia virus-associated glycoprotein expressed by infected cells. J. Virol., 1985, v.53, no.l, p.214-220

357. Robert-Guroff M., Reitz M.S. Jr., Robey W.G., Gallo R.C. In vitro generation of an HTLV-III variant by neutralizing antibody. J. Immunol., 1986, v. 137 , p. 10, p.3306-3309

358. Robert-Guroff M, Kaur H, Patterson LJ, Leno M, Conley AJ, McKenna PM, et al. Vaccine protection against a heterologous, non-syncytium-inducing, primary human immunodeficiency vims. J. Virol., 1998, v.72, v. 12, p. 10275-10280.

359. Robinson H.L. New hope for an AIDS vaccine. Nat. Rev. Immunol., 2002, v.2, no.4, p.239-250.

360. Rocha В., Tanchot C. Towards a cellular definition of CD8+ T-cell memory: the role of CD4+ T-cell help in CD8+ T-cell responses. Curr. Opin. Immunol., 2004, v.16, no.3, p.259-263

361. Roman J. US medical research in the developing world: ignoring Nuremberg. Cornell J. Law Public Policy, 2002, v.ll, p.441-460.

362. Roos J.W., Maughan M.F., Liao Z., Hildreth J.E., Clements J.E. LuSIV cells: a reporter cell line for the detection and quantitation of a single cycle of HIV and SIV replication. Virology, 2000, v.273, p.307-315.

363. Rose N.F., Marx P.A., Luckay A., Nixon D:F., Moretto W.J., Donahoe S.M. et al. An effective AIDS vaccine based on live attenuated vesicular stomatitis virus recombinants. Cell, 2001, v.l06, no.5, p.539-549.

364. Rosenberg E.S., Billingsley J.M., Caliendo A.M., Boswell S.L., Sax P.E., Kalams S.A., Walker B.D. Vigorous HIV-1-specific CD4+ T cell responses associated with control of viremia. Science, 1997, v.278, no.5342, p. 1447-1450

365. Rosenberg E.S., Altfeld M., Poon-S.H., Phillips M.N., Wilkes B.M., Eldridge R.L., Robbins G.K., D'Aquila R.T., Goulder P.J., Walker B.D: Immune control of HIV-1 after early treatment of acute infection. Nature, 2000, v.407, no.6803, p.523-526.

366. Ruiz L., Garcelain G., Martinez-Picado J., Frost S., Marfil S., Paredes R. et al. HIV dynamics and T-cell immunity after three structured treatment interruptions in chronic HIV-1 infection. AIDS, 2001, v. 15, no.9, p.F 19-27

367. Ruzagira E, Wandiembe 'S, Bufumbo L, Levin J, Price MA, Grosskurth H, Kamali A. Willingness to participate in preventive HIV vaccine trials in a community-based cohort in south western Uganda. Trop Med Int Health. 2009 Feb; 14(2): 196-203.

368. Newell M.L. Immunoprophylaxis to prevent mother-to-child transmission of HIV-1. J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 2004, v.35, no.2, p.169-177.

369. Salk J. Prospects for the control of AIDS by immunizing seropositive individuals. Nature, 1987, v.327, no.6122, p.473-476'

370. Sandstrom E., Wahren B. Therapeutic immunisation with recombinant gpl60 in HIV-1 infection: a randomised double-blind placebo-controlled trial. Nordic VAC-04 Study Group. Lancet, 1999, v.353, no.9166, p. 1735-1742

371. Santra S., Seaman-M.S., Xu L., Barouch D.H., Lord C.I., LiftomM.A. et al. Replication-defective adenovirus serotype 5 vectors elicit durable cellular and humoral immune responses in nonhuman primates. J. Virol., 2005, v.79, no. 10, p.6516-6522.

372. Sauter S.L., Rahman A., Muralidhar G. Non-replicating viral vector-based AIDS vaccines: interplay between viral vectors and the immune system. Curr. HIV Res., 2005, v.3, no.2, p.157-181.

373. Schmitz J.E., Kuroda M1J., Santra S. et al. Control of viremia in simian immunodeficiency vims infection by CD8+ lymphocytes. Science, 1999, v.283, p.857.860

374. Schtiklenk U. An uncomfortable truth: AIDS vaccine trials must continue. Dev World Bioeth. 2008 Aug;8(2):ii-iii.

375. Scientific considerations for the regulation and clinical evaluation of HIV/AIDS preventive vaccines: report from a WHO-UNAIDS Consultation 13-15 March 2001, Geneva, Switzerland. AIDS, 2002, v.l6, no. 10, p.W 15-25.

376. Seaman M.S., Xu L, Beaudry K, Martin K.L, Beddall M.H, Miura A. et al. Multiclade human immunodeficiency virus type 1 envelope immunogens elicit broad cellular and humoral immunity in rhesus monkeys. J. Virol, 2005, v.79, no.5, p.2956-63.

377. Sedgwick J.D, Holt P:G. A solid-phase immunoenzymatic technique for the enumeration of specific antibody-secreting cells. J. Immunol. Methods, 1983, v.57,pi301—309.i

378. Sekaly R.-Pi The failed HIV Merck vaccine study: a step back or a launching point for future vaccine development? J.E.M, 2008, v.205, no. 1, p.7-12

379. Self S. Vaccine Efficacy Trial Design Considerations in a Post-STEP Era. AIDS Vaccine 2008. AIDS Res. Human Retrovir, 2008, SP01-04

380. Seth A, Yasutomi Y, Jacoby H, Callery J.C, Kaminsky S.M, Koff W.C, Nixon D.F, Letvin N.L. Evaluation of a lipopeptide immunogen as a therapeutic in HIV type 1-seropositive individuals. AIDS Res. Hum. Retroviruses, 2000, v. 16, no.4, p.337-343.

381. Sethi K.K, Omata Y, Schneweis K.E. Protection of mice from fatal herpes simplex virus type 1 infection by adoptive transfer of cloned virus-specific and H-2-restricted cytotoxic T lymphocytes. J. Gen. Virol, 1983, v.64, p.443-447.

382. Shapiro R.S, Stein R.E. Ethical and Legal Issues in AIDS Vaccine Trials. Human Rights, Fall» Human Rights Magazine, 2004, Vol. 31, No. 4, p.20- 22.

383. Shepp D.H, Chakrabarti S, Moss B, Quinnan G.V. Jr. Antibody-dependent cellular cytotoxicity specific for the envelope antigens of human immunodeficiency virus. J Infect Dis, 1988, v.157, no.6, p.1260-1264

384. Shiver J. A non-replicating adenoviral vector as a potential HIV vaccine. Res. Initiat. Treat. Action, 2003, v.8, no.2, p.14-16.

385. Shiver J.W., Emini E.A. Recent advances in the development of HIV-1 vaccines using replication-incompetent adenovirus vectors. Annu. Rev. Med., 2004, v.55, p.355-372.

386. Siliciano R.F., Lawton Т., Knall C. et al. Analysis of host-virus interactions in AIDS with anti-gpl20 T cell clones: effect of HIV sequence variation and a mechanism for CD4+ cell depletion. Cell, 1988, v.54, p.561-575.

387. Silversides A. Canada finally begins long journey to an HIV vaccine. CM A J, 2004, v.170, no. 12, p. 1777.

388. Sizyakina L., Kuzina Т., Andreeva I., Sokolova J., Kharitonova M., Chumakova E. Microbicidal activity of polyoxidonium in HIV infection prophylactics with discordant partners. XV International AIDS Congress, Bangkok, Thailand, 2004, a.l 193.

389. Slade H, Turner J., Abrams C., Carlo D., Salk J. Immunotherapy of HIV-1 seropositive patients: preliminary report on a dose ranging study. AIDS Res. Hum. Retrovir., 1992, v.8, p.1329-1331.

390. Slobod K.S., Coleclough C., Bonsignori M., Brown S.A., Zhan X., Surman S., Zirkel A., Jones B.G., Sealy R.E., Stambas J., Brown В., Lockey T.D., Freiden P.J.,

391. Doherty P.C., Blanchard J.L., Martin L.N., Hurwitz J.L. HIV Vaccine Rationale, Design and Testing. Curr HIV Res., 2005, v.3, no., p.107-112.

392. Smith K.A. The HIV vaccine saga. Med. Immunol., 2003, v.2, no.l., p. 1-6.

393. Stanhope P.E., Clements M.L., Siliciano R.F. Human CD4+ cytolytic T lymphocyte responses to a human immunodeficiency virus type 1 gpl60 subunit vaccine. J. Infect. Dis., 1993, v.168, p.92-100.

394. Stanley S.K., Ostrowski MA and Justement J.S. et al., Effect of immunization with a common recall antigen on viral expression in patients infected with human immunodeficiency vims type 1. N. Engl. J. Med., 1996, v.334, p.1222-1230.

395. Starace F., Wagner T.M., Luzi A.M., Cafaro L., Gallo P., Rezza G. Knowledge and attitudes regarding preventative HIV vaccine clinical trials in Italy: results of a national survey. AIDS Care, 2006, v.18, no.l, p.66-72.

396. Steinman R.M. The dendritic cell system and its role in immunogenicity. Annu Rev. Immunol., 1991, v.9, p.271-296.

397. Stevceva L., Strober W. Mucosal HIV vaccines: where are we now? Curr. HIV Res., 2004, v.2, no.l,p.l-10.

398. Strauss R.P., Sengupta S., Kegeles S., McLellan E., Metzger D., Eyre S. et al. Willingness to volunteer in future preventive HIV vaccine trials: issues and perspectives from three U.S. communities. J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 2001, v.26, p.63-71.

399. Telenti A., Bleiber G. Host genetics of HIV-1 susceptibility. Future Virol., 2006, v.l, p.55-70.

400. Telenti A., Goldstein D.B. Genomics meets HIV-1. Nat. Rev. Microbiol., 2006, v.4, no.l 1, p.865-873.

401. Tenner-Racz et al., 2004. Early protection against pathogenic virus infection at a mucosal challenge site after vaccination with attenuated simian immunodeficiency virus. Proc Natl Acad Sci USA 2004;101(9):3017-3022.

402. Thali M., Moore J.P., Furman C., Charles M., Ho D.D., Robinson J., Sodroski J. Characterization of conserved human immunodeficiency virus type 1 gpl20 neutralization epitopes exposed upon gpl20-CD4 binding. J. Virol., 1993, v.67, p.3978-3988.

403. Thapinta D., Jenkins R.A. Starting from scratch: program development and lessons learned from HIV vaccine trial counseling in Thailand. Contemp. Clin. Trials, 2007, v.28, no.4, p.409-422.

404. The Antiretroviral Therapy (ART) Cohort Collaboration. Prognostic importance of initial response in HIV-1 infected patients starting potent antiretroviral therapy: analysis of prospective studies. Lancet, 2003, v.362, p.679-686.

405. Thomson S.A., Jaramillo A.B., Shoobridge M., Dunstan K.J., Everett В., Ranasinghe C. et al. Development of a synthetic consensus sequence scrambled antigen HIV-1 vaccine designed for global use. Vaccine, 2005, v.23, no.38, p.4647-4657.

406. Tracking of Funding in AIDS vaccine Research and Development. HIV Vaccines & Microbicides Resource Tracking Working Group (2006).

407. Triebel F. LAG-3: a regulator of T-cell and DC responses and its use in therapeutic vaccination. Trends Immunol., 2003, v.24, no. 12, p.619-674.

408. Trumpfheller С., Finke J.S., Lopez C.B., Moran T.M., Moltedo В., Soares H., Huang Y., Schlesinger S.J., Park C.G., Nussenzweig M.C., Granelli-Piperno A.,

409. Steinman R.M. Intensified and protective CD4+ T cell immunity in mice with anti> %dendritic cell HIV gag fusion antibody vaccine. J. Exp. Med., 2006, v.203, no.3, p.607-617.

410. Tubian R., Carcelain G., Vray M., Gourlain K., Dalban C., Chermak A., Rabian

411. UK vaccine test cautiously welcomed. HIV vaccine. AIDS Wkly Plus, 1999, p.9-10.

412. UNAIDS/WHO Ethical Guidance. UNAIDS, 2001.

413. UNAIDS/WHO Ethical Guidance. UNAIDS, 2007.

414. Vajdy M., Singh M. Intranasal delivery of vaccines against HIV. Expert Opin. Drug Deliv., 2006, v.3, no.2, p.247-259.

415. Valdez H,. Mitsuyasu R., Landay A., Sevin A.D., Chan E.S., Spritzler J.,

416. Kalams S.A., Pollard R.B., Fahey J., Fox L., Namkung A., Estep S., Moss R., Sahneri

417. D., Lederman M.M. Interleukin-2 Increases CD4+ lymphocyte numbers but does not enhance responses to immunization: results of A5046s. J. Infect. Dis., 2003, v. 187, no.2, p.320-325.

418. Van De Ven P.,' Bartholow B, Rawstome P, Crawford J, Kippax S, Grulich A, Prestage G, Woodhouse M, Murphy D. Scaling HIV vaccine attitudes among gay men in Sydney, Australia. AIDS Res. Hum. Retrovir., 2002, v. 18, no. 18, p. 13331337.

419. Veazey R.S., DeMaria M., Chalifoux L. et al. Gastrointestinal tract as a major site of CD4+ T cell depletion and viral replication in SIV infection. Science, 1998, v.280, p.427-431.

420. Velin D., Kraehenbuhl J.P. Delivery systems and adjuvants for vaccination against HIV. EXS^ 2000, v.89, p.227-237.

421. Veljkovic V., Veljkovic N., Glisica S., Hob M.-W. AIDS vaccine: Efficacy, safety and ethics. Vaccine, 2008, v.26, no,24, p.3072-3077

422. Vogel F.R., Powell M.F., Alving C.R. A Compendium of Vaccine Adjuvants and Excipients (2nd Edition), 2004, National Institutes of Health, Bethesda, MD.

423. Vujcic L., Katzenstein D., Martin M., Quinnan G. International collaborative study to. compare assays- for antibodies that neutralize human; immunodeficiency virus. AIDS. Res. Hum. Retrovir., 1990, v.6, p.847-853. ' j

424. Walker В.D., Chakrabarti S.y Moss В., Paradis T.J., Flynn Т., Durno A.G., Blumberg :R.S.;, .Kaplan* J.G., Hirsch M.S., Schooley R.T. HIV-specific cytotoxic Tlyniphocytes in seropositive individuals. Nature, 1987, v.3-28, nd:6128, p.345-348;

425. Walker C.M!, Moody D.J., Stites D:P., Levy J.A.' CD8;f- lymphocytes can control HIV infection in vitro by suppressing virus replication: Science, 1986. v.234^p 1563-1566. V ■''.■.•:.•. Д •'. ' '

426. Wei X, Decker J.M, Wang S, Hui H., Kappes J.C, Wu X, Salazar-Gonzalez J.F., Salazar M.G., Kilby J.M, Saag M.S., Komarova N.L, Nowak M.A, Hahn B.H, Kwong P.D, Shaw G.M. Antibody neutralization and escape by HIV-1. Nature, 2003, v.422, p.307-312.

427. Weidle P.J, Mastro T.D, Grant A.D, Nkengasong J, Macharia D. HIV/AIDS treatment and HIV vaccines for Africa. Lancet, 2002, v.359, no.9325, p.2261-2267.

428. Weiss R.A, Clapham P.R, Cheingsong-Popov R, Dalgleish A.G, Carne C.A, Weller I.V, Tedder R.S. Neutralization of human T-lymphotropic virus type III by sera of AIDS and AIDS-risk patients. Nature, 1985, v.316, p.69-72.

429. Weiss L. Immune-based therapies and HIV infection. Ann. Med. Intern. 2002, v.153, no.4, p.227-236. ,

430. Weiss RA, Clapham PR, Weber JN, Dalgleish AG, Lasky LA, Berman PW. Variable and conserved neutralization antigens of human immunodeficiency virus. Nature, 1986, v.324, no.6097, p.572-575.

431. Welsh R.M, Fujinami R.S. Pathogenic epitopes, heterologous immunity and vaccine design . Nat. Rev. Microbiol. 2007, v.5, p.555 563.

432. Whalley A.S, Nguyen M.L, Morrow W.J. Design, development, and interpretation of HIV neutralization assays. Viral Immunol. 1991, v.4, p.201-213.

433. Whatmore A.M., Cook N, Hall G.A, Sharpe S, Rud E.W, Cranage M.R. Repair and evolution of nef in vivo modulates simian immunodeficiency vims virulence. J. Virol, 1995, v.69, no.8, p.5117-5123.

434. Whitney J.B, Ruprecht R.M. Live attenuated HIV vaccines: pitfalls and prospects. Cuit. Opin. Infect. Dis, 2004, v. 17, no.l, p. 17-26.

435. WHO GCP Guideline, 1995 r.

436. WHO/UN AIDS Report on the global AIDS epidemic, 2006.

437. WHO/UNAIDS Report on the global AIDS epidemic, 2008.

438. Winchell J.M., Routray S., Betts P.W., Van Kruiningen H.J., Silbart L.K. Mucosal and systemic antibody responses to a C4/V3 construct following DNA vaccination of rabbits via the Peyer's patch. J. Infect. Dis., 1998, v. 178, no.3, p.850-853.

439. Wools-Kaloustian K., Kimaiyo S. Extending HIV care in resource-limited settings. Curr. HIV/AIDS Rep., 2006, v.3, no4, p.182-186

440. Wright P.F., Lambert J.S., Gorse G.J. et al. Immunization with envelope MN rgp 120 vaccine in human immunodeficiency virus-infected pregnant women. J. Infect. Dis., 1999, v.180, no.4, p.1080-1088

441. Wu L, Kong WP, Nabel GJ. Enhanced breadth of CD4 T-cell immunity by DNA prime and adenovirus boost immunization to human immunodeficiency virus Env and Gag immunogens. J. Virol., 2005,v.79, no. 13, p.8024-8031.672. www.hvtn.org

442. Wyand M.S., Manson K., Montefiori D.C, Lifson J.D., Johnson R.P., Desrosiers R.C. Protection by live, attenuated simian immunodeficiency virus against heterologous challenge. J. Virol., 1999, v.73, no. 10, p.8356-8363.

443. Xia J. et al. Safety and immunogenicity of ALVAC vCP1452 and recombinant gpl60 in newly human immunodeficiency virus type 1-infected patients treated with prolonged highly active antiretroviral therapy. J. Virol., 2002, v.76, p.2206-2216

444. Yeni P.G, Hammer S.M., Carpenter C.C. et al. Antiretroviral treatment for adult HIV infection in 2002: updated recommendations of the International AIDS Society, USA Panel. JAMA, 2002, v.288, no.2, p.222-235

445. Yewdell J.W., Bennink J.R. Immunodominance in major histocom-patibility complex class I-restricted T lymphocyte responses. Annu. Rev., Immunol., 1999, v.17, p.51-88.

446. Young K.R., Ross T.M. Particle-based vaccines for HIV-1 infection. Curr. Drug Targets Infect. Disord., 2003, v.3, no.2, p. 151-169.

447. Zagury D., Leonard R., Fouchard M., Reveil В., Bernard J., Ittele D. et al. Immunization against AIDS in humans. Nature, 1987, v.326, p.249-250

448. Zinkemagel R.M., Rosenthal K.L. Experiments and speculation on antiviral specificity of T and В cells. Immunol. Rev., 1981, v.58, p. 131-155.