Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ

ДИССЕРТАЦИЯ
ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ - тема автореферата по медицине
Артамонов, Сергей Александрович Челябинск 2009 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.36
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ

003473100

На правах рукописи

Артамонов Сергей Александрович

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ

14.00.36 - аллергология и иммунология 14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 о ш:-] 2353

003473100

На правах рукописи

Артамонов Сергей Александрович

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ

14.00.36 - аллергология и иммунология 14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в НИИ иммунологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию".

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Колесников Олег Леонидович доктор медицинских наук, профессор Симбирцев Андрей Семенович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Сибиряк Сергей Владимирович доктор медицинских наук, профессор Ларионов Леонид Петрович

Ведущая организация:

Институт физиологии и иммунологии УрО РАН, г. Екатеринбург

Защита состоится «_»_2009 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию", по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию".

Автореферат разослан «_»_2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Телешева Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время в клинической практике широко применяются различные иммуномодулирующие препараты, и их количество быстро растет. Ежегодно только в России успешно проходят государственные испытания 2030 новых иммунобиологических препаратов (Хаитов P.M., 2002). Влияние же на другие системы органов рассматривается, в первую очередь, только с точки зрения побочных эффектов.

Также известно то, что на рубеже двух столетий зародилась новая интегральная медико-биологическая дисциплина — нейроиммунология, которая объединяет и координирует исследования, направленные на изучение механизмов взаимодействия основных регулирующих систем: нервной, эндокринной и иммунной (Гриневич В.В., 2004).

Несмотря на то, что в онтогенезе клетки иммунной и нервной системы происходят из разных зародышевых листков (из эктодермы и мезодермы соответственно), функционально обе системы удивительно схожи.

При анализе сходства в организации нервной и иммунной систем привлекает внимание тот факт, что обе системы состоят из большого числа фено-типически различающихся клеток, организованных в сложные сети. В пределах такой сети клетки взаимосвязаны и функционируют по принципу обратной связи, когда пусковым сигналом служит адекватный раздражитель, а конечный ответ направлен на обеспечение полезного результата. Различие заключается в том, что в нервной системе клетки жестко фиксированы в пространстве, тогда как в иммунной они непрерывно перемещаются, и лишь кратковременно взаимодействуют друг с другом (Полетаев А.Б. и др., 2002; Корнева Е.А., 2003).

Феноменологически эти системы призваны обеспечивать безопасность контактов самого широкого плана между организмом и средой. Обе системы имеют диффузное строение, вследствие чего их элементы присутствуют практически во всех органах и тканях. И та и другая системы эволюционно адаптированы на способность оперативного восприятия поступающей из среды информации, ее переработку (интеграцию), хранение и воспроизведение (Danao Е.С., 1989). Обе системы обучаются и накапливают индивидуальный, не передающийся по наследству <окизненный опыт» с целью обеспечить более быструю и более адекватную адагггивно-гомеостатическую реакцию организма на повторение ранее встречавшейся ситуации (Ковалев И.Е., 1989, 1991). При этом между двумя системами прослеживается выраженная дифференцирован-ность по модальности воспринимаемых стимулов: нервная система специализируется на восприятии и обработке информации, поступающей в основном в виде стимулов физической природы, а иммунная система на восприятии и обработке информации, поступающей в виде химических стимулов (Ferenchk М„ 1997).

Учитывая тесную близость указанных систем, можно предположить, что иммунотропные препараты могут оказывать воздействие и на нервную систему.

Подобные эффекты могут быть важны при клиническом использовании веществ. Так Романенко Р.Н. и др. (2008), проводя анализ динамики психического состояния больных шизофренией с различными вариантами дефици-тарной симптоматики при назначении комбинаций иммунотропного средства с типичным и атипичным антипсихотиками, указывает, что циклоферон снижает астенизирующее действие антипсихотиков, что в конкретной клинической ситуации может играть как положительную, так и отрицательную роль, в зависимости от имеющегося варианта дефицитарных расстройств. André В. Reiriz (2006) выявил ухудшение памяти и когнитивных способностей у мышей при использовании циклофосфана.

Многие моменты остаются мало изучены. Это послужило одной из причин данного исследования.

Для оценки влияния иммунотропных препаратов на поведение и иммунную систему были использованы три препарата, различающиеся по механизмам действия: иммуномодулятор - бестим, иммуностимулятор - пиро-генал и иммунодепрессант - циклофосфан.

Цель работы

Изучить влияние иммунотропных препаратов бестима, пирогенала и циклофосфана на состояние органов иммунопоэза, периферическую кровь, а также поведенческую активность лабораторных животных.

Задачи исследования

1. Исследовать влияние бестима, пирогенала, циклофосфана на органы иммунопоэза и факторы неспецифической защиты мышей.

2. Изучить влияние иммунотропных препаратов на органы иммунопоэза и факторы неспецифической защиты и оценить клеточный иммунитет у мышей на фоне развития иммунного ответа на эритроциты барана.

3. Оценить влияние бестима, пирогенала, циклофосфана на поведение, тревожность и уровень депрессии мышей

4. Оценить влияние бестима, пирогенала, циклофосфана на поведение, тревожность и уровень депрессии мышей на фоне развития иммунного ответа на эритроциты барана.

Научная новизна

Впервые проведено исследование влияния бестима на поведение мышей. Выяснено, что бестим обладает способностью сохранять базовый уровень ориентировочно-исследовательской активности у мышей. Препарат снижает тревожность у животных, а на фоне введения в организм антигена он обладает кроме этого еще и антидепрессивным действием.

Проведено комплексное исследование влияния циклофосфана на иммунную и нервную систему здоровых мышей. Циклофосфан оказывает депрессивное действие на ориентировочно-исследовательское поведение мышей, не оказывая при этом влияния на уровень депрессии и тревожности.

Проведено комплексное исследование влияния пирогенала на иммунную систему и поведение мышей. Препарат не оказывает влияния на ориентировочно-исследовательское поведение животных, снижая их тревожность. На фоне иммунизации увеличивает исследовательскую активность животных без влияния на уровень тревожности. Пирогенал не оказывает антидепрессивного действия.

Практическая значимость исследования:

Хотя работа по своему существу носит фундаментальную направленность, проведенные исследования и полученные данные о влиянии препаратов на нервную систему, уточняют их эффекты и могут быть использованы при разработке практических рекомендаций по использованию препаратов в клинической практике.

Положения, выносимые на защиту

1. Бесгим оказывает стимулирующее действие не только на иммунную, но и на нервную систему. Препарат способствует сохранению базовой ориентировочно-исследовательской активности мышей при повторных исследованиях.

2. Бестим на фоне развития иммунного ответа оказывает антидепрессивное действие у мышей.

3. Циклофосфан оказывает угнетающее действие на нервную систему. Препарат снижает ориентировочно-исследовательскую активность мышей, как при однократном введении, так и на фоне антигенной стимуляции.

4. Циклофосфан не оказывает влияния на уровень депрессии и тревожности у мышей.

5. Пирогенал снижает горизонтальную активность у здоровых мышей, а также снижает уровень тревожности.

6. На фоне иммунизации, пирогенал увеличивает исследовательскую активность у животных, не оказывая влияния на тревожность и уровень депрессии.

Внедрение результатов в практику

Результаты исследований внедрены в работу НИИ иммунологии ГОУ ВПО ЧелГМА, учебный процесс кафедры фармакологии ГОУ ВПО ЧелГМА.

Апробация работы

Основные положения работы доложены: на 4-м съезде иммунологов Урала (Уфа, 2005), на 5-м съезде иммунологов Урала (Оренбург, 2006), на 3-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2005), на 10-м всероссийском научном форуме «Дни иммунологи в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на 4-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2006), на 5-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2007), на 8-м конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2007г.). Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ. Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы. Текст изложен на 143 страницах машинописного текста, работа иллюстрирована 23 таблицами, 15 рисунками. Указатель литературы содержит 213 источников, из них 85 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для экспериментов было использовано 412 беспородных мышей, выращенных в виварии ЧелГМА. Животные содержались в теплом, сухом помещении в клетках по 10-15 штук, температура воздуха была комфортной, смена освещенности — естественная, питание сбалансированное, питье обильное согласно приказу МЗ РФ от 13.11.1977 №742. Умерщвление животных и болезненные процедуры проводились под эфирным наркозом. (Международные рекомендации (этический кодекс) по проведению медико-биологических исследований с использованием животных, 1985).

В работе использовались следующие методики: Иммунологические методы

Оценка гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Для оценки гиперчувствительности замедленного типа проводили иммунизацию мышей эритроцитами барана, в дозе 108/20 г веса животного. В день иммунизации эритроцитарная взвесь трижды центрифугировалась на центрифуге ОПН-3 с 1500 оборотов в минуту, с целью удаления гемолизированных эритроцитов. Далее эритроцитарная взвесь разводилась в физиологическом растворе и вводилась животным внутрибрюшинно. Разрешающая доза эритроцитов барана вводилась под апоневроз задней лапы через 72 часа после иммунизации. В контрольную лапу вводился физиологический раствор в равном объеме. Стопы отделялись по голеностопному суставу и взвешивались на торсионных весах. Реакция оценивалась через 24 часа по коэффициенту интенсивности, рассчитанному по формуле:

,, Вес опытной лапы - Вес контрольной лапы

К=--- 100%.

Бесконтрольной

(Волчегорский И.А. и др., 2000, Хабриев Р.У., 2005) Определение веса селезенки и тимуса и количества ядросодержащих клеток в этих органах.

Выделенные тимус и селезенка взвешивались на торсионных весах. Тимус и селезенка размельчались в стеклянном гомогенизаторе, и далее полученную взвесь клеток разводили следующим образом: селезенка в 5 мл физиологического раствора, а тимус в 3 мл. Для подсчета общего количества ядросодержащих клеток (ЯСК) в этих органах в сухую пробирку наливали 0,4 мл 3-5% раствора уксусной кислоты, вносили 0,02 мл взвеси из пробирки,

содержащей размельченный орган, тщательно перемешивали и заполняли камеру Горяева. Подсчитывали ядросодержащие клетки в 100 больших квадратах, затем, учитывая разведение, проводили пересчет количества клеток (Волчегорский И.А. и др., 2000).

Определение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови.

Изучение способности нейтрофилов к захвату частиц проводили на модели поглощения частиц латекса. Для оценки фагоцитарной функции 50 мкл периферической крови смешивали с 50 мкл взвеси частиц полистирольного латекса в концентрации частиц 108/мл. После 30 минут инкубации при температуре 37°С готовили мазок, который высушивали, фиксировали этанолом и окрашивали по Романовскому-Гимза. С помощью иммерсионной микроскопии оценивали активность фагоцитоза - процент нейтрофилов, захвативших хотя бы одну частицу латекса и интенсивность фагоцитоза - число поглощенных микросфер латекса в 100 подсчитанных нейтрофилах. Определяли также фагоцитарное число-количество частиц латекса поглощенных одним фагоцитом (Методы изучения фагоцитирующих клеток..., 1986).

Также определяли активность и интенсивность фагоцитоза в расчете на литр крови (Волчегорский И.А. и др., 2000).

Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови с помощью НСТ-теста.

Постановку метода осуществляли следующим образом: в пробирки с 0,05 мл взвеси клеток добавляли 0,05 мл 0,2% раствора НСТ и 0,05 мл физиологического раствора. После 30-минутной инкубации при температуре 37°С делали мазки. После сушки препараты фиксировали и окрашивали 0,1% водным раствором сафранина. Учет реакции производили с помощью иммерсионной микроскопии при увеличении 90x10x1,5 (Маянский А.Н., 1979). Параллельно с помощью НСТ - теста определяли способность нейтрофилов крови отвечать повышением метаболической активности на стимуляцию частицами латекса. Для этого в пробирку с исследуемым материалом (50 мкл) и НСТ (50 мкл) добавляли 50 мкл монодисперсного полистирольного латекса с диаметром частиц 1,7 мкм в концентрации 1х108 частиц/мл. Для индуцированного теста также определяли активность и интенсивность по вышеуказанным формулам.

Кроме того, рассчитывали функциональный резерв нейтрофилов (ФРН), который определялся как соотношение между коэффициентами активности и интенсивности реакции НСТ - индуцированного и НСТ - спонтанного тестов.

Подсчет количества лейкоцитов периферической крови и лейкоцитарной формулы.

Для подсчета общего количества лейкоцитов крови в сухую пробирку наливали 0,4 мл 3-5% раствора уксусной кислоты, вносили 0,02 мл крови, тщательно перемешивали и заполняли камеру Горяева. Подсчитывали лейкоциты в 100 больших квадратах, затем, учитывая разведение, проводили пересчет количества клеток на литр (Медицинские и лабораторные ..., 1998).

Для подсчета процентного соотношения различных видов лейкоцитов микроскопировали сухие фиксированные и окрашенные по Романовскому-Гимза мазки с выделением следующих форм лейкоцитов: нейтрофилы, лимфоциты и прочие клетки. Просчитывали 100 лейкоцитов, затем определяли процентное соотношение дифференцированных клеток (Медицинские и лабораторные ..., 1998). Этологические методы Тест «Открытое поле»

Для исследования ориентировочно-исследовательского поведения применялся актограф, конструкция которого описана в работе Weischer M.L. (1976). Опыты проводились в отдельной комнате с хорошей звукоизоляцией, при постоянном уровне освещения "открытого поля" и комфортной температуре воздуха (порядка 20° С). Время работы с 10-00 до 15-00. Мыши помещались в "открытое поле" и извлекались из него только руками.

Животное помещалось в актограф, после этого начинали регистрировать число выглядываний через отверстия, горизонтальную и вертикальную активность. Горизонтальная активность фиксировалась путем подсчета количества пересечения границ секторов. Вертикальная активность включала в себя подсчет количества стоек животных с упором, когда мышь опиралась на стенку, и количества стоек без упора, когда мышь не опиралась на стенку. Подсчитывали также количество актов груминга (т.е. самовылизывания и почёсывания), направленных на поддержание поверхности тела в чистом и не повреждённом состоянии. Наблюдение за животными в "открытом поле" велось в течение 5 минут, после этого подсчитывалось количество фекальных болюсов. По завершении исследования каждой мыши, стенки и дно акгогра-фа протирались влажной ветошью.

Горизонтальная и вертикальная активность свидетельствуют об ориентировочной активности, груминг о тревожности животного (Celis Е.М., 1993), а выглядывания в отверстия об исследовательской активности (Калуев A.B., 1998,ШовенР., 1982). Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт»

Для изучения тревожности животного использовался тест «Приподнятый крестообразный лабиринт». Данный тест является одним из наиболее общепринятых тестов для оценки тревожного состояния особей (Pellow S., File S. Е., 1986; Lister R.G., 1987). За 5 мин до тестирования клетку с мышью приносили в затемненную комнату и тестировали поведение особи в течение 5 минут в лабиринте. Для этого животное помещали в центр лабиринта носом в закрытый рукав и регистрировали параметры: время нахождения в открытых рукавах, в центре и закрытых рукавах лабиринта (данные представлены в процентном соотношении времени нахождения в каждой части лабиринта к общему времени тестирования). Число выходов в открытые рукава, в центр и закрытые рукава выражалось, как и время, в процентном соотношении. Также учитывали число заглядываний под лабиринт. После тестирования каждой особи лабиринт тщательно промывали и высушивали.

Интерпретация методики следующая: время нахождения в закрытых частях лабиринта отражает уровень тревожности; увеличение количества выходов в открытые рукава лабиринта и центр, а также время нахождения в открытых частях лабиринта, свидетельствует о снижении тревожности животного. Заглядывание под лабиринт отражает степень исследовательской реакции животного (Калуев А.В., 1998; Van Erp А.М.М., 1994). Тест «подвешивания за хвост»

Тест «подвешивание за хвост» (tail suspension test) является популярной экспериментальной моделью депрессии. Он основан на наблюдении, что мыши, при их подвешивании за хвост, будут демонстрировать определенный период иммобильности, по латентности которого можно судить об уровне их депрессивности. Различные препараты приводят к изменениям длительности иммобильности животных (Stem L., 1985). Мышь подвешивалась за хвост. Тестирование проходило в течение 6 минут. В течение этого времени фиксировалось общее время неподвижности животного. Чем это время выше, тем выше считалась депрессия животного (Калуев А.В., 2002). Используемые препараты, дозы и схемы введения.

Во всех сериях экспериментов контрольные группы животных получали физиологический раствор в эквиобъемном количестве.

Пирогенал. Для опытов использовался пирогенал производства НИИ-ЭМ им.Н.Ф.Гамалеи/Медгамал, Россия. Препарат вводился в дозе 13,5 мкг/кг веса внутримышечно с интервалом 24 часа, трехкратно. Доза препарата рассчитана согласно методике перерасчета равноэффективных доз с дозировки препарата, используемой для крыс (Волчегорский И.А. и др., 2000). Перед введением препарат разводился в стерильном физиологическом растворе.

Циклофосфан (Cyclophosphamide). Для опытов использовался цикло-фосфан производства «Биохимик» (г. Саранск, Россия). Использовалась следующая доза и схема введения препарата: 250 мг/кг веса животного, внутри-брюшинно, однократно (Мясная Н.В. и др., 2003). Перед введением препарат разводился в стерильном физиологическом растворе.

Бестим. Для опытов использовался бестим, полученный из ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург. Препарат вводился в дозе 1 мкг/кг веса животного внутрибрюшинно, через 24 часа, пятикратно (Петров А.В., 2004). Перед введением препарат разводился в стерильном физиологическом растворе.

1 2 3 4

1 I И

N

0 1 2 3 4 5 6 7 S Время, дни

Рисунок 1. Общая схема экспериментов

1 - первое изучение поведения в «открытом поле» или тревожности в «приподнятом крестообразном лабиринте» и начало введения препарата;

2 - второе изучение поведения или тревожности и иммунизация животных через 72 часа после окончания введения препарата (96 часов для циклофос-фана). Вывод из эксперимента части мышей и оценка у них функционального состояния нейтрофилов и органов иммунопоэза.

3 - введение разрешающей дозы эритроцитов барана

4 - третье изучение поведения или тревожности, проведение теста «подвешивания за хвост», оценка ГЗТ, функционального состояния нейтрофилов и органов иммунопоэза.

Статистические методы. Результаты исследований обрабатывались с использованием пакета прикладных статистических программ '^аЙБЙса 6.0" (Боровиков В., 2001). Статистическая обработка результатов исследований проводилась с определением средней арифметической вариационного ряда (М), среднеквадратичного отклонения (о). Достоверность отличия показателей между контрольной и опытной группами оценивалась по критерию Ман-на-Уитни (Ми) и критерию серий Вальда-Вольфовица (\У\У). Для связанных переменных применяли парный критерий Вилкоксона (УК). Оценка связи между изучаемыми показателями проводилась с использованием непараметрической методики оценки корреляции Кандела (Кк) и Спирмена (К5). Для разделения животных на группы по уровням ориентировочно-исследовательского поведения использовался кластерный анализ. Различия считали значимыми при р<0,05. Представленные цифровые данные в подавляющем большинстве были округлены до второго десятичного знака (Гланц С., 1998).

Результаты исследования

Пятикратная инъекция бестима не изменяла вес селезенки у животных. При этом наблюдалось увеличение количества ЯСК селезенки в расчете на массу тела животного на 14% по сравнению с контрольной группой животных. Вес тимуса, а также количество клеток в нем и не изменялись. В периферической крови было отмечено ярко выраженное увеличение количества моноцитов (в 2,2 раза), а также палочкоядерных нейтрофилов на 15% (таблица 1).

Влияние бестима на функциональное состояние нейтрофилов периферической крови здоровых мышей было не ярко выражено. Отмечалась тенденция к росту активности и интенсивности спонтанного НСТ теста у опытных мышей. Известно, что нейтрофилы животных, получавших бестим, активируются (Зурочка В.А., 2006). Вероятно в связи с частичной активацией нейтрофилов у мышей, получавших препарат, несколько снижен функциональный резерв.

Бестим - иммуномодулятор и наибольший эффект проявляет при измененном состоянии иммунной системы. Таким образом, небольшое количество изменений в параметрах иммунной системы, скорее всего, связано с тем, что препарат применялся на здоровых животных.

Таблица 1

Влияние бестима на органы иммунопоэза, периферическую кровь и функциональное состояние нейтрофилов здоровых мышей. (М±ст) _

Контроль (N=28) Бестим (N=29) Р(2-3)

1 2 3 4

Вес селезенки (мг) 113,24±38,66 107,83±36,22 Н.д.

ЯСК селезенки/массу тела (млн./г) 6,34±2,54 7,20±2,30 Р=0,021 (MU)

Вес тимуса (мг) 17,31± 14,03 15,45±8,55 Н.д.

ЯСК тимуса/массу тела (млн./г) 0,93±0,53 1,00±0,59 Н.д.

Лейкоциты крови (10у/л) 5,96±1,85 6,01±2,52 Н.д.

Палочкоядерные нейтрофилы (%) 5,46±2,56 5,71±2,97 Н.д.

Палочкоядерные нейтрофилы (10у/л) 0,33±0,21 0,38±0,31 P=0,015(WW)

Моноциты (%) 1,39±1,47 2,96±2,82 P=0,028(MU)

Моноциты (10у/л) 0,075±0,078 0,19*0,26 P=0,049(MU)

Активность HCT спонтанного (%) 32,81±7,17 35,39±7,06 Н.д.

Интенсивность HCT спонтанного (у.е.) 0,37±0,09 0,43±0,11 Н.д.

Функциональный резерв нейтрофилов (акг),(%) 138,73±50,22 132,18±32,21 Р=0,041 (WW)

Н.д. - недостоверно (Р > 0,05) для таблиц 1-5

На фоне иммунизации под действием бестима масса тимуса и селезенки, а также абсолютное количество клеток в этих органах не претерпели существенных изменений. В тоже время возросло на 20% количество ЯСК клеток в тимусе в расчете на мг веса органа, что позволяет говорить об увеличении плотности клеток в тимусе. Известно, что предшественники Т-лимфоцитов имеют размеры больше чем зрелые клетки (Абрамов М.Г., 1979). Следовательно, повышение плотности клеток косвенно свидетельствует об увеличении доли зрелых Т-лимфоцитов среди ЯСК тимуса. В периферической крови только увеличивалось процентное содержание палочкоядер-ных нейтрофилов на 30%. Интенсивность реакции ГЗТ у мышей получавших бестим не изменялся.

Активность и интенсивность фагоцитоза, а также фагоцитарное число при использовании бестима на фоне иммунизации не изменилась. Активность и интенсивность спонтанного НСТ теста и в опытной и в контрольной группе была одинаковой, с небольшой тенденцией к увеличению активности НСТ теста у животных, получавших препарат (таблица 2).

В целом можно сказать, что препарат не оказывает значительного влияние на параметры иммунной системы здоровых животных. Это подтвер-вдает иммуномодулирующий характер действия бестима.

Таблица 2

Влияние бестима на состояние органов иммунопоэза и функциональное состояние нейтрофилов на фоне иммунного ответа на эритроциты барана у здоровых мышей.

Контроль (N=29) Бестим (N=28) Р(2-3)

1 3 4

Вес тимуса (мг) 17,71±8,39 17,97±8,48 Н.д.

ЯСК тимуса (млн.) 20,65±9,09 23,17±8,59 Н.д.

ЯСК тимуса/массу тимуса (млн./мг) 1,2б±0,44 1,52±0,69 P=0,023(WW)

Активность HCT спонтанного (%) 34,21±5,60 34,86±4,37 Н.д.

Интенсивность HCT спонтанного (у.е.) 0,37±0,08 0,39±0,06 Н.д.

Активность HCT индуцирозанного (%) 40,24±4,01 40,07±4,42 P=0,045(WW)

Интенсивность HCT индуцированного (У-е.) 0,48±0,08 0,46±0,05 Н.д.

При приеме бестима и в опытной и в контрольной группе при повторном исследовании обнаружилось снижение горизонтальной активности на 26 и на 40 % соответственно. При этом в опытной группе уровень горизонтальной активности был достоверно выше чем в контрольной группе на 40%. Это говорит о то, что беетим способствует сохранению ориентировочной активности мышей при повторном исследовании. Вертикальная активность в опытной группе также была выше: у животных, принимавших бестим, в 1,5 раза выше количество стоек с упором. Кроме того, в контрольной группе наблюдалось снижение количества выглядываний в два раза. В группе, получавших бестим, количество выглядываний сохранялось на прежнем уровне и было достоверно выше, чем в контрольной группе в 3 раза (рисунок 2). Препарат, таким образом, способствует сохранению исследовательской активности у мышей.

В опытной группе наблюдалось снижение количества актов груминга на 32%, а так как увеличение актов груминга трактуется как повышение тревожности (Калуев A.B., 1998, Буреш Я, 1983), то препарат снижает тревожность.

Таким образом, препарат способствует сохранению ориентировочно-исследовательской активности, а также снижает уровень тревожности мышей.

Гор. Актив.

Стойки

В,пкщьвания

□ Котрогь(1) В Бестим (1)

■ Контрап>(2)

а Бестим (2)

О-Достоверная разница между 1 и 2 исследованием, -к - достоверная разница между контролем и опытом.

Рисунок 2. Влияние бестима на поведение мышей в тесте «Открытое поле». (Контроль (1) и Бестим (1) -первоначальное исследование поведения, Контроль (2) и бестим (2) -повторное, через 72 часа после окончания введения препарата).

Исследование влияние бестима на «поведения отчаяния» в тесте «подвешивания за хвост» не выявило достоверных отличий между опытной и контрольной группами. Это свидетельствует о том, что препарат не оказывает антидепрессивного действия.

В «приподнятом крестообразном лабиринте» в контрольной группе наблюдалось уменьшение количества входов в закрытые рукава и центр лабиринта в 2 раза. Бестим же, оказывая сохраняющее действие на ориентировочную активность, сохранял эти показатели на прежнем уровне. Принято считать, что увеличение времени нахождения в открытых рукавах лабиринта и центре лабиринта, а также увеличение количества выходов в центр и открытые рукава указывают на снижение тревожности (Van Erp А.М.М., 1994). Количество выходов в центр в опытной группе по сравнению с контрольной больше в 1,58 раза, в открытый рукав в 2 раза, время нахождения в центре в 1,5 раза, в открытом рукаве в 2 раза. Это указывает на снижение уровня тревожности. Кроме того, в группе животных, получавших бестим, количество заглядываний под лабиринт на 12% больше, чем в контрольной группе, что свидетельствует об увеличении исследовательской активности (Lister R.G., 1987). Таким образом, бестим снижает тревожность у животных.

Иммунизация наложила отпечаток на эффекты бестима в отношении поведения животных. В параметрах поведения в тесте «Открытое поле» исчезли различия. В опытной группе на фоне иммунного ответа в тесте «подвешивания за хвост» обнаружено снижение на 53 секунды время неподвижности животных. Таким образом, бестим обладает антддепрессивным действием. В «приподнятом крестообразном лабиринте» на фоне развития иммунного ответа животные контрольной группы не выходили в открытый рукав лабиринта, в отличие от животных, принимавших бестим. Процент выходов в центр был в контрольной группе в два раза меньше, чем в опытной группе. Таким образом, хотя на фоне иммунного ответа влияние бестима на тревожность не такое сильное, но эффект препарата сохраняется.

Стимулирующее действие бестима на поведение может быть связано как с его способностью стимулировать синтез ИЛ-2 (Пигарева Н.В., 2000) и выработку ИЛ-10 (Зурочка В.А., 2006), которые оказывают активирующее воздействие на нервную систему. По данным Зурочки В.А., (2006) бестим стимулирует фагоцитарные клетки, в том числе и нейтрофилы. Мы полагаем что, эффект действия препарата может быть также опосредован через продукты секреции нейтрофилов. Так А5 фракция, выделенная из секреторных продуктов активированных нейтрофилов, оказывает пролонгированное (до

10 суток) стимулирующее действие на психомоторную активность мышей (Зурочка А.В. и др., 1991).

Циклофосфан оказывал выраженное депрессивное действие на селезенку, тимус и периферическую кровь. Препарат снижал вес тимуса в 2,2 раза, вес селезенки в 2,5 раза. Количество ЯСК в тимусе уменьшилось в 5 раз, в селезенке же количество ЯСК уменьшилось также в 5 раз по сравнению с контрольной группой (таблица 3).

В периферической крови произошло достоверное снижение абсолютного содержания всех типов лейкоцитов. При этом относительное содержание нейтрофилов и лимфоцитов не претерпело значительных изменений. Количество моноцитов же снизилось в 2 раза.

Таблица 3

Влияние циклофосфана на органы иммунопоэза и периферическую кровь здоровых мышей (М±ст).___i__

Контроль (N=30) Циклофосфан (N=29) Р(2-3)

1 2 3 4

Вес селезенки (мг) 87,43±25,38 28,03±7,79 P=0,001(MU)

ЯСК селезенки (млн.) 202,13±56,80 41,38±1б,62 P=0,001(MU)

ЯСК селезенки/массу тела (млн./г) 8Д4±2,42 1,82±0,68 P=0,001(MU)

Вес тимуса (мг) 27,40±10,42 12,05±3,86 P=0,001(MU)

ЯСК тимуса (млн.) 48,05±24,62 9,84±3,13 P=0,001(MU)

ЯСК тимуса/массу тела (млн./г) 1,96±1,0б 0,44±0,16 P=0,001(MU)

Лейкоциты крови (10ч/л) 4,33±1,90 1,47±0,82 P=0,001(MU)

Палочкоядерные нейтрофилы (%) 3,П±1,64 3,25±1,58 Н.д.

Палочкоядерные нейтрофилы (Ю^/л) 0,13±0,01 0,05±0,047 P=0,001(MU)

Сегментоядершле нейтрофилы (%) 17,04±4,99 19,96±6,66 Н.Д.

Сегментоядерные нейтрофилы (Ю^/л) 0,74±0,44 0,29±0,17 P=0,001(MU)

Лимфоциты (%) 77,61±5,45 76,11±б,28 Н.Д.

Лимфоциты (10у/л) 3,34±1,57 1,15±0,б4 P=0,001(MU)

Моноциты (%) 2,25±1,65 1,04±1,55 P=0,011(MU)

Моноциты (10у/л) 0,10±0,09 0,01±0,02 P=0,001(MU)

Таким образом, однократное введение циклофосфана оказало на организм мышей иммунодепрессирующий эффект.

Циклофосфан на фоне развития иммунного ответа на эритроциты барана влиял на органы иммунопоэза и периферическую кровь иначе, чем без антигенной стимуляции. Так, при иммунизации не было отличий от контрольной группы в весе селезенки и количестве ЯСК в ней. Вес тимуса был ниже в опытной группе в среднем на 7 мг, а количество ЯСК было в 3 раза меньше, чем в контроле. Вероятно, при антигенной стимуляции в организме активизировались компенсаторные механизмы и поэтому вес этих органов, а также количество клеток в них стали восполняться (таблица 4).

При изучении клеточного состава лейкоцитов произошло перераспределение фракций лейкоцитов в сторону увеличения нейтрофилов и снижения лимфоцитов. Это, скорее всего, связано с тем, что циклофосфан обладает

лимфотоксическим эффектом (Машковский М.Д., 1998, Мясная Н.В. и др., 2003). На интенсивность реакции ГЗТ циклофосфан не оказал влияния.

Таблица 4

Влияние циклофосфана на органы иммунопоэза, периферическую кровь и функциональное состояние нейтрофилов здоровых мышей на фоне развития иммунного ответа (М±о).____

Контроль (N=30) Циклофосфан (N=26) Р(2-3)

1 2 3 4

Вес селезенки (мг) 134,73± 166,93 157,96±129,35 Н.д.

ЯСК селезенки (млн.) 216,25±65,63 273,65±195,66 Н.д.

Вес тимуса (мг) 24,30±10,64 17,37±2,62 P=0,001(MU)

ЯСК тимуса (млн.) 36,85± 15,62 12,93±3,63 P=0,001(MU)

Лейкоциты крови (10у/л) 4.49±1.65 4,86±2,46 Н.д.

Палочкоядерные нейгрофилы (%) 3,60±1,61 6,73±4,50 P=0,001(MU)

Палочкоядерные нейгрофилы (10*/л) 0,15±0,075 0,33±0,28 P=0,002(MU)

Сегментоядерные нейтрофилы (%) 20,60±7,42 33,50±13,87 P=0,001(MU)

Сегментоядерные нейгрофилы (107п) 0,94±0,58 1,65±1,07 P=0,002(MU)

Лимфоциты (%) 74,63±8,36 58,65±16,17 P=0,001(MU)

Лимфоциты (10у/л) 3,35±1,15 2,81±1,59 P=0,030(MU)

Моноциты (%) 1,30±1,64 1,88±1,97 Н.д.

Моноциты (10*/л) 0,065±0,098 0,091±011 Н.д.

Активность фагоцитоза (%) 26,10±6,83 31,27±9,87 P=0,011(MU)

Интенсивность фагоцитоза (ла-текс/ЮОкл) 0,33±0,11 0,42±0,16 P=0,015(MU)

Активность HCT спонтанного (%) 31,17±5,26 32,96±5,24 Н.Д.

Интенсивность HCT спонтанного (у.е.) 0,33±0,06 0,38±0,08 P=0,022(MU)

Активность HCT индуцированного (%) 36,15±4,27 42,88±5,17 P=0,001(MU)

Интенсивность HCT индуцированного (У.е.) 0,41±0,06 0,51±0,11 P=0,001(MU)

Функциональный резерв нейтрофилов (акт) (%) 119,77±23,70 133,14±26,02 P=0,040(MU)

Циклофосфан при антигенной стимуляции не только увеличивал количество нейтрофилов, но при этом стимулировал их функции. Так в опытной группе активность фагоцитоза возросла на 20%, интенсивность фагоцитоза на 25%. Интенсивность спонтанного НСТ - теста в опытной группе увеличилась на 15%, активность индуцированного НСТ - теста возросла на 16%, а интенсивность на 24% по сравнению с контролем. Соответственно возрос и функциональный резерв нейтрофилов (таблица 4). Некоторые авторы указывают, что при введении циклофосфана происходит элиминация субпопуляций лимфоцитов, которые отвечают за подавление иммунного ответа. Соответственно препарат может оказывать иммуномодулирующее действие. (Мясная Н.В., 2002). Этим можно объяснить такую реакцию иммунной системы животных.

Таким образом, циклофосфан при однократном приеме оказывает ярко выраженное иммунодепрессивное действие, а при антигенной стимуляции

оказывает иммуномодулирующее действие на фоне работы в организме компенсаторных механизмов по восстановлению погибших клеток иммунной системы.

После введения циклофосфана снижены по сравнению с первоначальным исследованием показатели ориентировочно-исследовательского поведения. Так горизонтальная активность уменьшилась в 2 раза, количество стоек снизилось на треть, количество выглядываний в отверстия уменьшилось в 2 раза. В контрольной группе подобные эффекты не отмечались. При этом данные показатели ориентировочно-исследовательского поведения были достоверно ниже, чем у контрольной группы животных. Количество пересечений квадратов в опытной группе ниже в 1,86 раза, количество стоек в 1,64 раза, выглядываний в отверстия в 3,9 раза (рисунок 3). То есть применение препарата вызывало снижение двигательной и исследовательской активности мышей.

-

——-— 1 кто 1 —|ж

Гор.актиаиостъ Стойка с упором Вьгподьеанкя

Рисунок 3. Поведение мышей при применении циклофосфана. Тест «Открытое поле»

Поведение мышей в тесте «подвешивания за хвост» не выявило отличий между контрольной и опытной группами. Препарат, таким образом, не оказывал антидепрессивного действия. Циклофосфан не влиял на уровень тревожности животных по данным, полученным в «приподнятом крестообразном лабиринте»

На фоне иммунизации препарат еще в 2 раза снизил горизонтальную активность мышей. Уровень горизонтальной активности в опытной группе был в 2, 5 раза меньше, чем у контрольной группы животных. Вертикальная активность была снижена в 2,5 раза за счет стоек с упором. Количество выглядываний в отверстия, говорящие об исследовательской активности животных в опытной группе было в 3,2 раза меньше, чем в контрольной группе (рисунок 4). Таким образом, циклофосфан на фоне иммунного ответа продолжал оказывать угнетающее действие на ориентировочно-исследовательское поведение мышей.

На фоне антигенной стимуляции на 8 день после введения циклофосфана достоверных отличий в поведении мышей в тесте «подвешивания за хвост» и «приподнятом крестообразном лабиринте» не было. Соответственно при использовании на фоне иммунного ответа, препарат не оказывает ни ан-

тидепрессивного, ни депрессивного действия, а также не влияет на тревожность.

★ □ Контроль □ Ииктфтп^чн

-к* 1

1 1-1*

Горлктивность

Стойка с угором

Выгледьвания

Рисунок 4. Влияние циклофосфана на поведение мышей в тесте «Открытое поле, на фоне иммунизации эритроцитами барана

Однократное введение циклофосфана вызывает сильные изменения в параметрах иммунной системы, в организме происходит включение компенсаторных механизмов. Циклофосфан, являясь алкилирующем веществом, синтезирован с таким расчетом, чтобы препарат обладал избирательной противоопухолевой активностью. Но в тоже время он оказывает воздействие и на иные клетки, в том числе и на нервные. Согласно Вгасс1 Ь., (2007) циклофосфан при терапии опухолей вызывает пролиферацию Т и В-лимфоцитов, мигрирующих в опухоль, а также вызывают «цитокиновый шторм», т. е. выброс ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-7, ИЛ-15, ИЛ-21 и ИФН-у. Эти же ци-токины обладают нейротропными эффектами. Подобные эффекты могут лежать в основе действия циклофосфана на поведение.

При трехкратном приеме пирогенала вес селезенки и тимуса, а также количество ЯСК в них достоверно не отличалось от контроля. Количество лейкоцитов периферической крови было одинаковым в контрольной и опытной группе. В формуле периферической крови также не наблюдалось сдвигов (таблица 5).

Способность к поглощению чужеродных частиц была практически одинаковой в опытной и контрольной группах. Выработка активных форм кислорода неактивными нейтрофилами также не изменялась (по данным спонтанного НСТ - теста). Обращает на себя внимание тот факт, что введение пирогенала изменяло реакцию нейтрофилов на частицы латекса: активность индуцированного НСТ - теста увеличилась на 8 процентов, а интенсивность на 7,5%. Эти сдвиги были статистически достоверны, но незначительны. Поэтому функциональный резерв нейтрофилов не претерпел изменений. Таким образом, можно говорить о кондиционировании нейтрофилов при действии пирогенала и увеличении выраженности реакции на чужеродные частицы.

В условиях иммунизации пирогенал вызывал снижение веса тимуса на 28% по сравнению с контрольной группой. Но при этом количество ЯСК в органе не изменилось. По данным некоторых авторов (Буркова Н.П., 1976) пирогенал вызывает дегенерацию и гибель тимоцитов, характерную для вве-

дения гидрокортизона. Вероятно, и в нашем случае были схожие процессы. Вес селезенки и количество ЯСК в ней достоверно не изменились в опытной группе по сравнению с контрольной. В периферической крови количество лейкоцитов не изменилось. Но при этом в опытной группе наблюдалось снижение как палочкоядерных нейтрофилов на 0,09*109/л, так и сегментоядер-ных нейтрофилов на 0,24*10% (таблица 5).

При оценке влияния пирогенала на фоне иммунизации на функциональные способности нейтрофилов обнаружено что активность и интенсивность фагоцитоза не изменилась. Также не претерпела изменений активность и интенсивность НСТтеста спонтанного и индуцированного

Таблица 5

Влияние пирогенала на состояние органов иммунопоэза и функциональное состояние нейтрофилов на фоне иммунного ответа на эритроциты барана у мышей (М±ст).____

Контроль (N=31) Пирогенал (N=29) Р(2-3)

1 2 3 4

Вес селезенки, мг 109,32±25,83 109,46±42,60 Н.д.

ЯСК селезенки, млн. 201,П±65,79 212,01±73,95 Н.д.

Вес тимуса, мг 21,13±10,78 15,26±7,42 Р=0,033(Ми)

ЯСК тимуса 33,27±20,60 27,78±12,70 Н.д.

Лейкоциты крови (10у/л) 5,36*1,90 4,94±1,81 Н.д.

Палочкоядерные нейтрофилы, (107л) 0,23±0,16 0,14±0,09 Р=0,016(Ми)

Сегментоядерные нейтрофилы, (10у/л) 1,07±0,50 0,83±0,39 Р=0,029(Ми)

Лимфоцигы, (10 /л) 4,16±1,30 4,07±1,32 Н.д.

Моноциты, (10у/л) 0,08±0,09 0,09±0,08 Н.д.

В группе животных, получающих пирогенал, наблюдается достоверное снижение уровня горизонтальной активности на 30 единиц пересечений квадратов по сравнению с первоначальным исследованием. На время неподвижности животных пирогенал не оказывал воздействия. Таким образом, пирогенал не оказывает антидепрессивного действия.

Пирогенал увеличивал на 23% число выходов в открытый рукав лабиринта по сравнению с контрольной группой, что говорит о том, что пирогенал снижает уровень тревожности животного. И в контрольной и опытной группе при этом увеличилось время нахождения в открытом рукаве. Так как согласно методике исследования увеличение количества выходов в открытые рукава и центра и время нахождения в там свидетельствует о снижение тревожности животных то, применение пирогенала снижает уровень тревожности чуть больше, чем в контрольной группе (за счет увеличения количества выходов в открытый рукав).

На фоне иммунного ответа на эритроциты барана пирогенал не оказывал влияния на ориентировочную активность. Были обнаружены различия в количества выглядываний в отверстия. В опытной группе их количество было достоверно выше на 5%. То есть пирогенал при иммунном ответе повы-

шает исследовательскую активность мышей, без изменения двигательной активности животных. Не наблюдается достоверных отличий в поведении мышей в тест «подвешивания за хвост», что указывает на отсутствие антидепрессивного действия.

В «приподнятом крестоборазном лабиринте» пирогенал не оказывает влияния на уровень тревожности животных.

Изменения в поведении при применении пирогенала, вероятно, можно объяснить тем, что пирогенал при своем введении повышает температуру тела и стимулирует продукцию ряда цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2), которые могут вызвать «sickness behavior», означающий поведение при болезни, включающий в себя нарушения сна, депрессию, отсутствие аппетита, нарушение полового поведения, снижение двигательной активности (DantzerR., 2001).

Суммируя все вышесказанное можно отметить, что бестим обладает сохраняющим действием на параметры ориентировочно-исследовательского поведения, а также снижает тревожность и обладает антидепрессивным эффектом. Пирогенал снижает тревожность, а на фоне иммунного ответа в дополнение к этому увеличивает исследовательскую активность. Циклофосфан оказывает депрессивное действие на ориентировочно-исследовательское поведение без влияния на тревожность мышей.

Учитывая тесную близость иммунной и нервной систем, мы оценили связи между теми параметрами иммунитета, которые достоверно отличаются в опытной и контрольной группах, и параметрами поведения животных.

Так в группе животных, получавших бестим, имелась прямая корреляционная связь между временем неподвижности в тесте «подвешивания за хвост» и функциональным резервом нейтрофилов (Ks=0.57, n=14, р=0.02), а количество заглядываний под лабиринт коррелировало с число моноцитов в крови (Ks=-0.55, п=14, р=0.03). В контрольной группе наблюдалась отрицательная корреляция между функциональным резервом нейтрофилов и количеством пересечений квадратов (Ks=-0.65, п=14, р=0.01), а также количеством стоек с упором (Ks=-0.55, п=14, р=0.04) и числом выглядываний в отверстия (К,—0.57, п=14, р=0.03).

На фоне иммунного ответа на 11 день после введения препарата обнаружено, что в опытной группе количество ЯСК тимуса на массу органа прямо коррелировало с количеством пересечений квадратов (Ks=0.74, п=15, р=0.01), атакже с количеством стоек супором (Ks=0.75, п=15, р=0.01). В контрольной группе таких взаимосвязей не было. Наши факты соответствуют литературным данным. Известно, что у пациентов с депрессией обнаруживается снижение общего количества Т-лимфоцитов и клеток, несущих антигены гистосовместимости класса II, у пациентов, страдающих паническими атаками, обнаружено снижение некоторых субпопуляции Т-клеток как по сравнению со здоровыми людьми, так и с депрессивными пациентами (Marazitti et al., 1992). У пациентов с синдромом хронической депрессии снижается продукция тиреоид-стимулирующего гормона моноцитами. Такие факторы как пассивный стоицизм, апатия и отсутствие социальной поддерж-

ки примерно на 50% определяют снижение ЕКК у больных с неопластическими заболеваниями (Page G.G., Ben-Eliyahu S., 1997).

В опытной группе, получавшей циклофосфан, обнаружена прямая корреляционная связь между весом селезенки и числом стоек без упора (Ks= 0.58, п=14, р=0.03), в контрольной же группе эта связь была отрицательной направленности (Ks=-0.61, п=15, р=0.01).

На фоне иммунизации функциональный резерв нейтрофилов коррелировал со временем неподвижности как в опытной группе (Ks=0.67, п=15, р=0.01), так и в контрольной группе (Ks=-0.62, п=14, р=0.01).

Таким образом, характер взаимосвязей между иммунной системой и поведением изменился при введении препарата. Изменения, вероятно, связаны с тем, что циклофосфан оказывает сильное депрессивное воздействие и в организме начинают работать различные компенсаторные механизмы, с целью нормализации гомеостаза.

В серии экспериментов с применением пирогенала при оценке связи параметров иммунной и нервной систем выявлено, в контрольной группе мышей есть обратная связь между уровнем горизонтальной активности и активностью индуцированного HCT - теста (Ks=-0.57, п=15, р=0.03). В опытной группе такой связи нет.

На 7 день после окончания введения препарата на фоне развития иммунного ответа в группе животных принимавших пирогенал найдены корреляционные связи между количеством актов груминга и числом палочкоядер-ных нейтрофилов (Ks=0.57, п=14, р=0.02), и между количеством актов груминга и активность HCT индуцированного на литр крови (Ks=0.64, п=14, р=0.01). В контрольной группе имелась связь между временем неподвижности и процентом палочкоядерных нейтрофилов (Ks=0.54, п=15, р=0.04).

Некоторые авторы (Труфакин В.А., 2001) указывают, что при хронических стрессах и повышение тревожности у мышей повышается количество нейтрофилов. Это хорошо сочетается с нашими данными.

Согласно литературным данным, мыши отличаются по уровню ориентировочно-исследовательской активности на три группы: с низкой активностью, со средней и высокой (Маркова Е.В., 2004). В связи с этим контрольные животные были разбиты нами на 3 группы с разным уровнем активности с помощью кластерного анализа. Иммунизация по-разному действовала на мышей, отличающихся разными исходными характеристиками, но относящихся к одной группе. При сравнении параметров иммунной системы, было обнаружено следующее: количество ЯСК селезенки на массу тела различалось между группами со средней и низкой степенью активности. В группе с низкой степенью активности этот показатель был на 9,4% ниже (Р=0,014 (MU)). Также в этих группах обнаружена разница в процентном содержании моноцитов, в группе с низким уровнем активности данный показатель был ниже на 8,3% (Р=0,014 (MU)).

Было выявлено, что иммунизация животных привела к нивелированию различий в поведении между этими группами при повторных исследованиях поведения.

Учитывая, что иммунизация привела к различному эффекту у групп с разной активностью, то есть нивелировала отличие в поведении животных, а также и в иммунной системе, можно предположить, что и препараты по-разному будут действовать на мышей с разным базовым уровнем поведения, но в наших экспериментах их было мало и разбить их на группы не представляется возможным.

Действием иммунотропных препаратов на параметры поведения на наш взгляд связаны с понятием единой регуляторной метасистемы, в которую невычленимыми компонентами входят нервная, иммунная и эндокринная системы. Конкретные механизмы влияния препаратов на параметры поведения, скорее всего непрямые. Это может быть влияние через цитокины, такие как ИЛ-1 (Fleshner M., 1995, Сибиряк C.B., 2003), ИЛ-2 (Sumizura А., 1989), ИЛ-6 (Hesse D.G., 1988) и другие. Возможен и иной путь влияния препаратов. Активация нейтрофилов, приводящая к увеличению секреции продуктов, и уже они влияют на поведение (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001, Зурочка A.B., 1991, Чукичев A.B., 1996). Третий путь воздействия возможен через изменение метаболизма нейромедиаторов. Так гуморальный ответ к ЭБ у крыс ингибирует выработку ацетилхолина в ЦНС (Назаров П.Г., 2006). Четвертый путь возможен при прямом действии препаратов. Например, циклофосфан, обладая алкилирующим действием, может влиять не только на опухолевые клетки, но и на другие клетки организма.

Изученные нами препараты обладали влиянием на параметры поведения животных. Это еще раз демонстрирует наличие нейро - иммунных связей. Полученные результаты указывают на целесообразность изучения характера влияния на функциональное состояние нервной системы и других им-муномодуляторов.

Выводы

1. Бестим у мышей увеличивает абсолютное и относительное количество моноцитов периферической крови и палочкоядерных нейтрофилов. На фоне развития иммунного ответа бестим увеличивает уровень палочкоядерных нейтрофилов периферической крови, а также относительное количество ядросодержащих клеток тимуса. Препарат незначительно снижает активность индуцированного HCT - теста.

2. Бестим сохраняет ориентировочно-исследовательскую активность и снижает уровень тревожности животных. При введении иммуномодулятора перед иммунизацией животных эритроцитами препарат снижает тревожность мышей, а также оказывает выраженное антидепрессивное действие.

3. При однократном применении циклофосфана снижается вес селезенки, тимуса, уменьшается количество ядросодержащих клеток в этих органах, и уровень лейкоцитов периферической крови у мышей.

4. При антигенной стимуляции эритроцитами барана циклофосфан восстанавливает вес селезенки и количество ядросодержащих клеток в ней у лабораторных животных. В периферической крови происходит восстановле-

ние количества лейкоцитов, снижается количество лимфоцитов и увеличивается уровень нейтрофилов. У нейтрофилов увеличивается активность и интенсивность фагоцитоза, активность и интенсивность спонтанного и индуцированного НСТ - теста.

5. Однократный прием циклофосфана приводит к снижению ориентировочной и исследовательской активности животных. На фоне иммунизации эритроцитами барана циклофосфан еще больше снижает двигательную и исследовательскую активность мышей. На уровень тревожности на фоне иммунизации и без нее препарат не оказывает влияния.

6. Пирогенал оказывает воздействие на функциональное состояние нейтрофилов у мышей - увеличивает активность и интенсивность индуцированного НСТ - теста. На фоне иммунного ответа препарат снижает вес тимуса при сохранении количества ядросодержащих клеток в нем. Кроме того, снижается содержание нейтрофилов, как относительное, так и абсолютное.

7. Пирогенал снижает ориентировочную активность мышей, а также препарат вызывает снижение тревожности. На фоне антигенной стимуляции, пирогенал увеличивает исследовательскую активность и не оказывает влияние на уровень тревожности и уровень депрессии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Артамонов, С.А. Поведение животных при экспериментальной стафилококковой инфекции / С.А. Артамонов, В.А. Зурочка, Ю.О. Колесникова // Сборник работ юбилейной научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: взгляд в будущее» посвященный 70-летию КГМУ. - Курск: издательство КГМУ. -

2005. -т 1.-е. 11-12.

2. Артамонов, С.А. Влияние пирогенала на уровень тревожности у мышей / С.А. Артамонов // Материалы 3-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА. - Челябинск: издательство «ЧелГМА». 2005. -с. 8-10.

3. Артамонов, С.А. Влияние пирогенала на уровень тревожности мышей и поведение в тесте «Открытое поле» / С.А. Артамонов // Иммунология Урала. - 2005. - №1(4). - с. 115.

4. Артамонов, С.А. Оценка функций иммунной и нервной систем при ведении циклофосфана / С.А. Артамонов, О.Л. Колесников // Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека. Материалы конференции, посвященной 25-тилетию ЦНИЛ ЧелГМА. Челябинск: Изд-во «ЧелГМА», - 2006. - с. 184-187.

5. Артамонов, С.А. Влияние пирогенала на состояние нервной и иммунной систем с разным исходным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения / С.А. Артамонов, О.Л. Колесников // Медицинская иммунология-

2006. - том №8, №2-3. - с. 117-118.

6. Артамонов, С.А. Влияние циклофосфана на тревожность мышей с различным исходным состоянием нервной системы / С.А. Артамонов, О.Л. Колес-

ников // 1-ый Российско-Чешский медицинский форум. - Челябинск. - 2006. -с. 182-183.

7. Артамонов, С.А. Комплексная оценка влияния препарата бестим на иммунную и нервную системы / С.А. Артамонов, O.JI. Колесников, A.C. Сим-бирцев // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2006. - № 3-1 (14).-с. 95-97.

8. Артамонов, С.А. Оценка влияния препарата бестим на иммунную и нервную системы / С.А. Артамонов, O.J1. Колесников // Иммунология Урала . -

2006.-№1(5).- с. 102-103.

9. Артамонов, С.А. Влияние пирогенала на тревожность мышей с различным исходным уровнем тревожности/ С.А. Артамонов, Ю.О. Колесникова // 4 итоговая научно-практическая конференция молодых ученых, г. Челябинск: издательство «ЧелГМА». - 2006. - С. 7-8.

10. Артамонов, С.А. Изучение влияние бестима на уровень тревожности мышей / С.А. Артамонов, Ю.О. Колесникова // 5 итоговая научно-практическая конференция молодых ученых, г. Челябинск: издательство «ЧелГМА». -

2007. - с. 5-6-

П.Артамонов, С.А. Влияние иммунизацией эритроцитами барана (ЭБ) на нервную и иммунную системы мышей с различным исходным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения / С.А. Артамонов, O.JI. Колесников, JI.C. Борисова // Медицинская иммунология. - 2007. - том № 8, № 2-3. -с. 114-115.

12.Артамонов, С.А. Оценка характера воздействия бестима на нервную и иммунную системы здоровых мышей / С.А. Артамонов, O.JI. Колесников // Российский аллергологический журнал. - 2007. - № 3. - приложение 1.-е. 404.

На правах рукописи

Артамонов Сергей Александрович

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ

14.00.36 - аллергология и иммунология 14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 20.05.2009 Формат 60x84/16. Бумага Гознак 80г/м2. Печать офсетная. Усл.печл. 1,16 Тираж 120 экз. Заказ № 56

Отпечатано с готовых оригинал-макетов в ООО ПКФ «Тираж-Сервис» 454080, г. Челябинск, ул. Энтузиастов, 19

 
 

Оглавление диссертации Артамонов, Сергей Александрович :: 2009 :: Челябинск

Введение

Глава 1. Обзор литературы.

1. Взаимодействие иммунной и нервной систем.

2. Характеристика применяемых иммунотропных препаратов

2.1.Бестим

2.2. Пирогенал

2.3. Циклофосфан

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Иммунологические методы

2.1.1. Оценка гиперчувствительности замедленного типа

2.1.2. Определение веса селезенки и тимуса и количества ядросодержа-щих клеток в этих органах

2.1.3. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови.

2.1.4. Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови с помощью НСТ-теста.

2.2. Подсчет количества лейкоцитов периферической крови и лейкоцитарной формулы.

2.3 Этологические методы

2.3.1. Тест «Открытое поле»

2.3.2. Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт»

2.3.3. Тест «подвешивания за хвост»

2.4. Используемые препараты, дозы и схемы введения.

2.4.1. Пирогенал

2.4.2 Циклофосфан

2.4.3. Бестим

2.5. Статистические методы

Глава 3. Изучение влияния бестима на иммунную систему, поведение и уровень тревожности

3.1. Схемы экспериментов

3.2. Оценка состояния иммунной системы мышей на фоне использования бестима

3.3. Состояние иммунной системы мышей при использовании бестима на фоне иммунного ответа на эритроциты барана.

3.4. Поведение мышей при приеме бестима.

3.5. Поведение здоровых мышей при применении бестима на фоне иммунизации эритроцитами барана.

Глава 4. Изучение влияния циклофосфана на иммунную систему, поведение, и уровень тревожности.

4.1. Схемы экспериментов

4.2.Состояние иммунной системы мышей на фоне приема циклофосфана

4.3. Влияние циклофосфана на иммунную систему мышей на фоне развития иммунного ответа.

4.4. Поведение мышей при применении циклофосфана.

4.5. Поведение мышей при применении циклофосфана на фоне иммунизации эритроцитами барана.

Глава 5. Изучение влияния пирогенала на иммунную систему, поведение и уровень тревожности

5.1. Схемы экспериментов

5.2 Состояние иммунной системы мышей при действии пирогенала.

5.3 Состояние иммунной системы мышей при действии пирогенала и формировании иммунного ответа на эритроциты барана.

5.4 Поведение мышей при действии пирогенала.

5.5 Поведение мышей при применении пирогенала на фоне иммунизации эритроцитами барана.

 
 

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Артамонов, Сергей Александрович, автореферат

Актуальность проблемы.

В настоящее время в клинической практике широко применяются различные иммуномодулирующие препараты, и их количество быстро растет. Ежегодно только в России успешно проходят государственные испытания 20-30 новых иммунобиологических препаратов (Хаитов P.M., 2002). Влияние же на другие системы органов рассматривается, в первую очередь, только с точки зрения побочных эффектов.

Также известно то, что на рубеже двух столетий зародилась новая интегральная медико-биологическая дисциплина — нейроиммунология, которая объединяет и координирует исследования, направленные на изучение механизмов взаимодействия основных регулирующих систем: нервной, эндокринной и иммунной (Гриневич В.В., 2004).

Несмотря на то, что в онтогенезе клетки иммунной и нервной системы происходят из разных зародышевых листков (из эктодермы и мезодермы соответственно), функционально обе системы удивительно схожи.

При анализе сходства в организации нервной и иммунной систем привлекает внимание тот факт, что обе системы состоят из большого числа фенотипи-чески различающихся клеток, организованных в сложные сети. В пределах такой сети клетки взаимосвязаны и функционируют по принципу обратной связи, когда пусковым сигналом служит адекватный раздражитель, а конечный ответ направлен на обеспечение полезного результата. Различие заключается в том, что в нервной системе клетки жестко фиксированы в пространстве, тогда как в иммунной они непрерывно перемещаются, и лишь кратковременно взаимодействуют друг с другом (Полетаев А.Б. и др., 2002; Корнева Е.А., 2003).

Феноменологически эти системы призваны обеспечивать безопасность контактов самого широкого плана между организмом и средой. Обе системы имеют диффузное строение, вследствие чего их элементы присутствуют практически во всех органах и тканях. И та и другая системы эволюционно адаптированы на способность оперативного восприятия поступающей из среды информации, ее переработку (интеграцию), хранение и воспроизведение (Danao Е.С., 1989). Обе системы обучаются и накапливают индивидуальный, не передающийся по наследству «жизненный опыт» с целью обеспечить более быструю и более адекватную адаптивно-гомеостатическую реакцию организма на повторение ранее встречавшейся ситуации (Ковалев И.Е., 1989, 1991). При этом между двумя системами прослеживается выраженная дифференцированность по модальности воспринимаемых стимулов: нервная система специализируется на восприятии и обработке информации, поступающей в основном в виде стимулов физической природы, а иммунная система на восприятии и обработке информации, поступающей в виде химических стимулов (Ferenchk М., 1997).

Учитывая тесную близость указанных систем, можно предположить, что иммунотропные препараты могут оказывать воздействие и на нервную систему. Подобные эффекты могут быть важны при клиническом использовании веществ. Так, Романенко Р.Н. и соавт., (2008), проводя анализ динамики психического состояния больных шизофренией с различными вариантами дефицитарной симптоматики при назначении комбинаций иммунотропного средства с типичным и атипичным антипсихотиками указывает, что циклоферон снижает астени-зирующее действие антипсихотиков, что в конкретной клинической ситуации может играть как положительную, так и отрицательную роль, в зависимости от имеющегося варианта дефицитарных расстройств. Andre В. Reiriz (2006) выявил ухудшение памяти и когнитивных способностей у мышей при использовании циклофосфана.

Многие моменты взаимодействия систем остаются мало изучены. Это послужило одной из причин данного исследования.

Для оценки влияния иммунотропных препаратов на поведение и иммунную систему были использованы три препарата, различающиеся по механизмам действия: иммуномодулятор - бестим, иммуностимулятор - пирогенал и иммунодепрессант - циклофосфан.

Цель исследования:

Изучить влияние иммунотропных препаратов бестима, пирогенала и цик-лофосфана на состояние органов иммунопоэза, периферическую кровь, а также поведенческую активность лабораторных животных.

Для решения поставленной цели исследования были сформированы следующие

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние бестима, пирогенала, циклофосфана на органы иммунопоэза и факторы неспецифической защиты мышей.

2. Изучить влияние иммунотропных препаратов на органы иммунопоэза и факторы неспецифической защиты и оценить клеточный иммунитет у мышей на фоне развития иммунного ответа на эритроциты барана.

3. Оценить влияние бестима, пирогенала, циклофосфана на поведение, тревожность и уровень депрессии мышей

4. Оценить влияние бестима, пирогенала, циклофосфана на поведение, тревожность и уровень депрессии мышей на фоне развития иммунного ответа на эритроциты барана.

Научная новизна результатов исследования.

Впервые проведено исследование влияния бестима на поведение мышей. Выяснено, что бестим обладает способностью сохранять базовый уровень ориентировочно-исследовательской активности у мышей. Препарат снижает тревожность у животных, а на фоне введения в организм антигена он обладает кроме этого еще и антидепрессивным действием.

Проведено комплексное исследование влияния циклофосфана на иммунную и нервную систему здоровых мышей. Циклофосфан оказывает депрессивное действие на ориентировочно-исследовательское поведение мышей, не оказывая при этом влияния на уровень депрессии и тревожности.

Проведено комплексное исследование влияния пирогенала на иммунную систему и поведение мышей. Препарат не оказывает влияния на ориентировочно-исследовательское поведение животных, снижая их тревожность. На фоне иммунизации увеличивает исследовательскую активность животных без влияния на уровень тревожности. Пирогенал не оказывает антидепрессивного действия.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Бестим оказывает стимулирующее действие не только на иммунную, но и на нервную систему. Препарат способствует сохранению базовой ориентировочно-исследовательской активности мышей при повторных исследованиях.

2. Бестим на фоне развития иммунного ответа оказывает антидепрессивное действие у мышей.

3. Циклофосфан оказывает угнетающее действие на нервную систему. Препарат снижает ориентировочно-исследовательскую активность мышей, как при однократном введении, так и на фоне антигенной стимуляции.

4. Циклофосфан не оказывает влияния на уровень депрессии и тревожности у мышей.

5. Пирогенал снижает горизонтальную активность у здоровых мышей, а также снижает уровень тревожности.

6. На фоне иммунизации, пирогенал увеличивает исследовательскую активность у животных, не оказывая влияния на тревожность и уровень депрессии.

Практическая значимость исследования: Хотя работа по своему существу носит фундаментальную направленность, проведенные исследования и полученные данные о влиянии препаратов на нервную систему уточняют их эффекты и могут быть использованы при разработке практических рекомендаций по использованию препаратов в клинической практике.

Апробация работы.

Основные положения работы доложены: на 4-м съезде иммунологов Урала (Уфа, 2005), на 5-м съезде иммунологов Урала (Оренбург, 2006), на 3-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2005), на 10-м всероссийском научном форуме «Дни иммунологи в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на 4-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2006), на 5-й итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2007), на 8-м конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и им-мунофармакологии» (Москва, 2007г.).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 12 работ. Из них одна статья в журнале, рекомендованном ВАК и двое тезисов в журналах, рекомендованных ВАК для публикации результатов диссертационных исследований.

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы. Текст изложен на 143 страницах машинописного текста, работа иллюстрирована 23 таблицами, 15 рисунками. Указатель литературы содержит 213 источников, из них 85 зарубежных.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС И ПОВЕДЕНЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МЫШЕЙ"

ВЫВОДЫ

1. Бестим у мышей увеличивает абсолютное и относительное количество моноцитов периферической крови и палочкоядерных нейтрофилов. На фоне развития иммунного ответа бестим увеличивает уровень палочкоядерных нейтрофилов периферической крови, а также относительное количество ядросо-держащих клеток тимуса. Препарат незначительно снижает активность индуцированного НСТ-теста.

2. Бестим сохраняет ориентировочно-исследовательскую активность и снижает уровень тревожности животных. При введении иммуномодулятора перед иммунизацией животных эритроцитами препарат снижает тревожность мышей, а также оказывает выраженное антидепрессивное действие.

3. При однократном применении циклофосфана снижается вес селезенки, тимуса, уменьшается количество ядросодержащих клеток в этих органах, и уровень лейкоцитов периферической крови у мышей.

4. При антигенной стимуляции эритроцитами барана циклофосфан восстанавливает вес селезенки и количество ядросодержащих клеток в ней у лабораторных животных. В периферической крови происходит восстановление количества лейкоцитов, снижается количество лимфоцитов и увеличивается уровень нейтрофилов. У нейтрофилов увеличивается активность и интенсивность фагоцитоза, активность и интенсивность спонтанного и индуцированного НСТ теста.

5. Однократный прием циклофосфана приводит к снижению ориентировочной и исследовательской активности животных. На фоне иммунизации эритроцитами барана циклофосфан еще больше снижает двигательную и исследовательскую активность мышей. На уровень тревожности на фоне иммунизации и без нее препарат не оказывает влияния.

6. Пирогенал оказывает воздействие на функциональное состояние нейтрофилов у мышей - увеличивает активность и интенсивность индуцированного НСТ - теста. На фоне иммунного ответа препарат снижает вес тимуса при сохранении количества ядросодержащих клеток в нем. Кроме того снижается содержание нейтрофилов, как относительное, так и абсолютное.

7. Пирогенал снижает ориентировочную активность мышей, а также препарат вызывает снижение тревожности. На фоне антигенной стимуляции, пирогенал увеличивает исследовательскую активность и не оказывает влияние на уровень тревожности и уровень депрессии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование воздействия иммунотропных препаратов на иммунную и нервную системы имеет как фундаментальное, так и прикладное значение. Это связано с тем, что полученные данные расширяют представление как о свойствах препаратов, так и о взаимодействии иммунной и нервной систем в целом.

Существующий перечень практических рекомендаций по исследованию иммунотропных средств не включает в себя изучение воздействия препарата на нервную систему (Хаитов P.M., 2002). В связи с развитием медицины и появлением новой области знания - нейроиммунологии, появившейся в ходе интеграции накопленных знаний о нервной и иммунной системах, рассматривать эти системы в отдельности друг от друга нельзя. Системы представляют собой единую регуляторную метасистему, в которую не вычленяемыми компонентами входят как иммунная, так и нервная системы. Потому исследование воздействия препарата на какую-то отдельно одну систему в какой-то мере ущербно. Для того чтоб выяснить как действуют иммунотропные препараты на эти две системы было решено взять три препарата, по одному на каждый тип воздействия (иммуномодулирующее, иммуностимулирующее и иммунодепрессирую-щее), а также различающие по химической природе и происхождению. Бестим - иммуномодулятор, имеющий пептидную природу, пирогенал — иммуностимулятор липополисахарид бактериального происхождения и циклофосфан — иммунодепрессант эфир диамида фосфорной кислоты.

Препараты использовались в дозировках, при которых их эффект согласно литературным данным наиболее выражен.

Воздействие на иммунную систем оценивалась по влиянию на лейкоцитарную формулу периферической крови; по влиянию на органы иммунопоэза, оценивался вес селезенки тимуса и количество ЯСК в этих органах; оценивалось влияние на функциональную способность нейтрофилов периферической крови. (НСТ - тест и фагоцитоз). В другой серии экспериментов эти параметры оценивались на фоне антигенной стимуляции организма эритроцитами барана, при этом также у животных определялся уровень реакции ГЗТ на введенный антиген.

Из параметров нервной системы оценивалось ориентировочно-исследовательское поведение животных в «открытом поле», а также оценивалось поведение животных в «приподнятом крестообразном лабиринте» (тест оценки тревожности) и в тесте «подвешивания за хвост» (оценка уровня депрессии).

Первый препарат - бестим. Пятикратный введение бестима не изменял вес селезенки у животных. При этом наблюдалось увеличение количества ЯСК селезенки на массу тела животного на 14% по сравнению с контрольной группой животных (таблица 3.1). Вес тимуса, а также количество клеток в нем и их плотность не изменилась по сравнению с контрольной группой (таблица 3.1). В периферической крови было ярко выраженное увеличение количества моноцитов (в 2,2 раза), а также палочкоядерных нейтрофилов на 15%. (таблица 3.1)

Влияние бестима на функциональное состояние нейтрофилов периферической крови здоровых мышей было не ярко выражено. Наблюдалось снижение на 4% функционального резерва нейтрофилов (таблица 3.2). Известно, что нейтрофилы животных, получавших бестим, активируются (Зурочка В.А., 2006). Вероятно в связи с частичной активацией нейтрофилов у мышей, получавших препарат, несколько снижен функциональный резерв.

Таким образом, небольшое количество изменений в параметрах иммунной системы связано с тем, что препарат применялся на здоровых животных.

На фоне иммунизации под действием бестима масса тимуса и селезенки, а также абсолютное количество клеток в этих органах не претерпели существенных изменений. В тоже время возросло на 20% количество ЯСК клеток в тимусе в расчете на мг веса органа (таблица 3.3), что позволяет говорить об увеличении плотности клеток в тимусе. Известно, что предшественники Тлимфоцитов имеют размеры больше чем зрелые клетки (Абрамов М.Г., 1979). Следовательно, повышение плотности клеток косвенно свидетельствует об увеличении доли зрелых Т-лимфоцитов среди ЯСК тимуса. В периферической крови только увеличивалось процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов на 30%. Согласно коэффициенту интенсивности уровень реакции ГЗТ у мышей получавших бестим не изменялся (рисунок 3.3).

Активность и интенсивность фагоцитоза, а также фагоцитарное число при использовании бестима на фоне иммунизации не изменилась (таблица 3.4). Активность и интенсивность спонтанного НСТ теста и в опытной и в контрольной группе была одинаковой, с небольшой тенденции к увеличению активности НСТ теста у животных, получавших препарат. Обнаружено небольшое снижение активности индуцированного НСТ - теста (таблица 3.4.). Данный факт можно объяснить тем, что при использовании бестима нейтрофилы активируются, что видно в тенденции к повышению активности спонтанного НСТ теста. Соответственно при активации они будут меньше активироваться.

В целом можно сказать, что препарат не оказывает значительного влияние на параметры иммунной системы здоровых животных. Это подтверждает иммуномодулирующий характер действия бестима.

На поведение мышей препарат оказывал следующее воздействие. При приеме бестима и в опытной и в контрольной группе при повторном исследовании обнаружилось снижение горизонтальной активности на 26 и на 40 % соответственно (таблица 3.5.). При этом в опытной группе уровень горизонтальной активности был достоверно выше чем в контрольной группе на 40%. Это говорит о то, что бестим способствует сохранению ориентировочной активности мышей при повторном исследовании. Вертикальная активность в опытной группе также была выше: у животных, принимавших бестим, в 1,5 раза выше количество стоек с упором. Кроме того, в контрольной группе наблюдалось снижение количества выглядываний в два раза (таблица 3.5). В группе, получавших бестим, количество выглядываний сохранялось на прежнем уровне и было достоверно выше, чем в контрольной группе в 3 раза. Препарат, таким образом, способствует сохранению исследовательской активности мышей. В опытной группе наблюдалось снижение количества актов груминга на 32%, а так как увеличение актов груминга трактуется как повышение тревожности (Калуев А.В., 1998, Буреш Я, 1983), то препарат снижает тревожность. Таким образом, препарат способствует сохранению ориентировочно-исследовательской активности, а также снижает уровень тревожности мышей. Исследование влияние бестима на «поведения отчаяния» в тесте «подвешивания за хвост» не выявило достоверных отличий между опытной и контрольной группами. Это свидетельствует о том, что препарат не оказывает антидепрессивного действия.

В «приподнятом крестообразном лабиринте» в контрольной группе наблюдается уменьшение количества входов в закрытые рукава и центр лабиринта в 2 раза. Бестим же, оказывая сохраняющее действие на ориентировочную активность сохраняет эти показатели на прежнем уровне (таблица 3.6.). Принято считать, что увеличение времени нахождения в открытых рукавах лабиринта и центре лабиринта, а также увеличение количества выходов в центр и открытые рукава указывают на снижение тревожности (Van Erp А.М.М, 1994). Как видно из таблицы 3.6, количество выходов в центр в опытной группе по сравнению с контрольной больше в 1,58 раза, в открытый рукав в 2 раза, время нахождения в центре в 1,5 раза, в открытом рукаве в 2 раза. Это указывает на снижение уровня тревожности. Кроме того в группе животных, принимавших бестим, количество заглядываний под лабиринт на 12% больше, чем в. контрольной группе, что свидетельствует об увеличении исследовательской активности (Lister R.G., 1987). Таким образом, бестим снижает тревожность у животных.

Иммунизация наложила отпечаток на эффекты бестима на поведение животных. В параметры поведения в тесте «Открытое поле» исчезли различия

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Артамонов, Сергей Александрович

1. Амосова, Е.Н. Иммунномодулятор тималин в экспериментальной химиотерапии опухолей / Е.Н.Амосова, К.В.Яременко, Н.В. Чердынцева и др. // Вопросы онкологии. 1987. - т.23, №10. - С. 68-71

2. Абрамов, В.В. Взаимодействие нервной и иммунной систем / В.В. Абрамов — Новосибирск: Наука, 1988, С. 180

3. Абрамов, М.Г. Гематологический атлас. / М.Г. Абрамов Москва: Издательство: Медицина, 1979, С. 280

4. Абрамова, Т.Я. Зависимость иммунологических параметров от неврологической памяти у здоровых людей / Т.Я. Абрамова, В.В. Абрамов, B.C. Кожевников и др. // Иммунология. 2000. - №2. - С. 50-52

5. Акмаев, И.Г. От нейроэдокринологии к нейроиммуноэндокринологии / И.Г.Акмаев, В.В.Гриневич // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2001. - Т. 131, № 1. - С. 22-31.

6. Акмаев, И.Г. Нейроиммуноэндокринология жировой ткани / И.Г. Акмаев, В.Г. Сергеев // Успехи физиологических наук. 2002. — Т. 33, №2. - С. 3-12

7. Алексеева, Т.М. Влияние иммуномодулятора бестим на клиническое состояние и иммунную реактивность больных идиопатическими воспалительными миопатиям / Т.М. Алексеева, Н.В. Шабашова, Е.В. Фролова, и др. / Цитокины и воспаление. 2007. - № 1. - С. 20-23

8. Альперина, E.JI. Роль гипофиза в модулирующем влиянии на иммунный ответ дофаминергической и серотонинергической систем / E.JI. Альперина, Г.В. Идова, JI.B. Девойно // Физиологический журнал СССР. 1985. - № 11. -С. 1428-1432.

9. Анохин, П.К. Избранные труды. Системные механизмы высшей нервной деятельности / П.К. Анохин. Москва: Медицина, 1979. - 340 с.

10. Арчакова, Л.И. Ультраструктурная организация медиальной преоптической области гипоталамуса и ее изменения при действии пирогенов / Л.И. Арчакова, Е.М. Белявский, В.Н. Турин // Архив анатомической гистологии и эмбриологии. 1989. - Т. 96, № 1. - С. 44-50

11. Арчакова, Л.И. Морфофункциональные механизмы реакций симпатических ганглиев на действие температурного фактора и пирогенов / Л.И. Арчакова, И.В. Екимова, В.Н. Турин // Морфология. 1998. - Т.114, №6. - С. 31-38.

12. Болдырев, А.А. Экспериментальные аспекты ишемии мозга и окислительного стресса / А.А. Болдырев, С.Л. Стволинский, Т.Н. Федорова // Очерки ангионеврологии. М.: Наука. - 2005. - с. 41- 49.

13. Боровиков, В. STATISTICA: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов / В. Боровиков. — СПб.: Питер, 2001. — 656 с.

14. Буреш, Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я. Буреш, О. Бурешова, Д.П. Хьюстон М.: Высш. школа, 1991. -399с.

15. Виноградова, О.С. Нейронаука конца второго тысячелетия: смена парадигм / О.С. Виноградова // Журнал высшей нервной деятельности. 2000. - Т.50, Вып. 5.-С. 743-769

16. Веселкин, П. Н., Лихорадка. / П.Н. Веселкин. М.: Москва, 1963. - 120 с.

17. Волчегорский, И.А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников и др. // Челябинск: ЧелГМА, 2000. - 167 с.

18. Ветрилэ, Л.А. Антитела к глутамату — нейромодуляторы поведенческих реакций мышей разных генотипов / Л.А.Ветрилэ, Л.А.Башарова, О.И. Миков-ская и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2002.-Т.133, №3.- С. 274-277

19. Ввозный, Э.К. Рак молочной железы / Э.К. Возный // Фармацевтический вестник. 1998. - № 19. - С. 10-11.

20. Галактионов, В. Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М.: Изд-во МГУ, 1998.-479 с.

21. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М.: Практика, 1998.-459 с.

22. Гонтова, И.А. Особенности сочетанного влияния ассиметрии тимуса и головного мозга на гуморальный иммунный ответ / И.А. Гонтова, В.В. Абрамов, В.А. Козлов // Иммунология. 2002. - №1. - С. 22-25

23. Громыхина, Н.К. Роль макрофагов в процессе формирования регуляторных связей между иммунной, нервной и эндокринной системами в ходе иммунного ответа / Н.К. Громыхина, Л.Г. Крымская, В.А. Козлов // Успехи физиологических наук. 1993. - №1.- С. 3-21.

24. Гурин, В.Н. Действие пирогенала и эндогенного пирогена на висцеральные афферентные системы / В.Н. Гурин, В.М. Репринцева // Физиологический журнал имени Сеченова. 1992. -т.78, №5. - с.81-85

25. Гурин, В.Н. Механизмы лихорадки / В.Н. Гурин. Минск: Наука и техника, 1993.- 165с

26. Долгушин, И. И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. -УрО РАН. Екатеринбург, 2001. - 279с.

27. Евсеев, В.А. Нейроиммунопатология: иммуноагрессия, дизрегуляция, перспективы адаптивной иммунотерапии / В.А. Евсеев, О.И. Миковская // Журнал неврологии и психиатрии. -2002. №5. - С.60-64.

28. Ершов, Ф.И. Иммуномодулирующие свойства индукторов интерферона / Ф.И. Ершов, Э.Б. Тазулахова // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - т.34, №4. - с. 270-276

29. Жанаева, С.Я. Изучение связи между эффективностью противоопухолевой терапии и активностью цистеиновых протеаз в ткани лимфосаркомы LS мышей / С.Я. Жанаева, Т.А. Алексеенко, Г.А. Шкурат и др. // БЮЛЛЕТЕНЬ СО РАМН. 2007. - №1(123). - с. 84-87

30. Забродский, П.Ф. Взаимосвязь типов акцентуации характера и показателей системы гуморального иммунитета / П.Ф.Забродский, Д.А.Тимофеев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. - т. 124, №1. - с. 70-72

31. Заболотных, Н.В. Иммунокоррекция Бестимом при экспериментальном туберкулезе / Н.В. Заболотных, Т.И. Виноградова, Н.В. Пигарева и др. // СПб.: Медицинская иммунология. 2001. — 317с.

32. Зейгермахер, Г.А. Применение пирогенала в комплексном лечении инфекционных заболеваний / Г.А. Зейгермахер // Врачебное дело. 1980. - №2. -С. 105-107.

33. Зубарева, О.Е. Влияние провоспалительных цитокинов на становление поведения в раннем постнатальном онтогенезе / О.Е. Зубарева, А.С. Симбир-цев, В.М. Клименко // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2005. - №4. - с. 374-377

34. Зурочка, А.В. Иммунобиологические свойства секреторных продуктов нейтрофилов (нейтрофилокинов). Дисс. . д-ра мед. наук./ Зурочка А.В. Челябинск. - 1991. - 231 с.

35. Зурочка, В.А. Оценка действия иммуномодулятора "Бестим" на активность иммунекомпетентных клеток крови и секрецию цитокинов у условно-здоровых доноров in vitro / В.А.Зурочка // СПб.: Медицинская иммунология. -2004.-449с.

36. Зурочка, В.А. Изучение влияния иммуномодулятора Бестим на активность иммунокомпетентных клеток in vitro и течение экспериментальной стафилококковой инфекции. Автореф. дисс.к.м.н. / В.А. Зурочка. Челябинск.2006. 22 с.

37. Идова, Г.В. Изменение числа CD4+ Т-лимфоцитов в костном мозге агрессивных мышей линии СВА / Г.В. Идова, Т.А. Павина, Е.П. Альперина и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. Т. 124, №11.-С. 544-540

38. Калуев, А.В. Стресс. Тревожность. Поведение / А.В Калуев. — Киев: Энигма, 1998.-98 с.

39. Клименко, В.М. Нейробиология цитокинов: поведение и адаптивные реакции / В.М. Клименко, О.Е. Зубарева // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 1999. - Т. 85, № 9. - С. 1244-1254.

40. Ковалев, И.Е. Механизм адаптации организма к окружающей среде / И.Е.Ковалев// Природа. 1991. - №2. - С. 65-74.

41. Колосов, А.И. Влияние сочетанного применения пирогенала и циклофосфана на экспериментальные опухоли / А.И.Колосов, Р.Г.Куприн // Вопросы онкологии. 1977. - т.23, №Ю. - с. 90-92

42. Корнева, Е.А. Гормоны и иммунная система / Е.А. Корнева, Э.К. Шхинек. — Л.: Наука, 1988.-251 с.

43. Корнева, Е.А. Введение в иммунофизиологию (учебное пособие) / Е.А. Корнева. СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2003. - 48 с.

44. Корнилов, Н.В. Адаптационные процессы в органах скелета / Н.В. Корнилов, А.С. Аврунин. СПб.: Морсар АВ, 2001. - 269 с.

45. Красильников, А.П. Методы изучения бактерицидных свойств сыворотки крови и фагоцитов: Метод. Рекомендации / А.П. Красильников. — Минск: МГМИ, 1984.-24 с.

46. Кузин, В. Б., Влияние препарата Мексидол на ряд показателей вегетативного статуса и гуморального иммунитета / В. Б. Кузин, Д. В. Тепаев // Фарма-тека. 2006. - № 16. - С.76-78.

47. Кукаркин, Н.Ю, Клинико-иммунологическая эффективность Бестима у больных вторичным пиелонефритом в раннем послеоперационном периоде. Автореф. дисс.к.м.н. / Н.Ю. Кукаркин. Челябинск. - 2006. - 22 с.

48. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. М.: "Медицина", 1985. - 255 с.

49. Левшин, Н.Ю. Профилактика тромботических осложнений у больных системной красной волчанкой / Н.Ю. Левшин, А.В. Аршинов, И.В. Масина и др. // Научно-практическая ревматология. — 2004. №2. - С. 96

50. Лобзин, Ю.В. Эффективность применения иммунопрепарата Бестим при острой нейроинфекции хламидийного генеза / Ю.В. Лобзин, А.Л. Позняк, А. С. Симбирцев и др. // Цитокины и воспаление. 2004. - №4. - С 45-46

51. Лондон, Е. С. Избранные труды / Лондон Е. С. Л. - 1968. - 234 С.

52. Лыков, А.П. Цитотоксическая активность клеток крови у больных раком желудка с различной активностью нервной системы / А.П. Лыков, А.А. Басс, И.Д. Ложкин и др. // Иммунология. 2000. - №6. - с. 43-46

53. Манько, В.М. Иммуномодуляция: история, тенденция развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. -№3. - С. 132-138.

54. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 340 с.

55. Маянский, А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия: Метод, рекомендации /А.Н. Маянский, М.К. Виксман. Казань, 1979. - 11с.

56. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. Казань: Магариф., 1993. - 192 с.

57. Маркова, Е.В. Модуляция ориентировочно-исследовательского поведения у мышей в процессе развития гуморального иммунного ответа / Е.В. Маркова, А.Ф. Повещенко, Н.А. Короткова и др. // Иммунология и микробиология. — 2002. т. 133, №5. - С. 534-536.

58. Машковский, М. Д. Лекарственные средства: пособие для врачей: В 2 т. / М. Д. Машковский. Харьков: Торсинг, 1998 - 543 с

59. Медицинские и лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии / Под ред. Карпищенко А.И. — СПб: Интермедика, 1998. Т. 1. - С. 290-292.

60. Международные рекомендации (этический кодекс) по проведению медико-биологических исследований с использованием животных, 1985. Режим доступа: http://www.bio.msu.ru/etical .html

61. Менщиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике / В.В. Мен-щиков М.: Медицина, 1987. - 386 с.

62. Методы изучения фагоцитирующих клеток при оценке иммунного статуса человека: Учеб. Пособие. / Под ред. И.С. Фрейдлин. Л. - 1986. - 37 с.

63. Михайленко, А.А. Роль корреляционных взаимосвязей в оценке функциональных возможностей иммунной системы / А.А. Михалейнко, Т.А. Федотова // Иммунология. 2000. - №6. - с. 59-61

64. Муртазина, Е.П. Влияние иммуномодулятора нейротропина на обучение крыс активно оборонительному поведению / Е.П. Муртазина, Б.В. Журавлев // Журнал высшей нервной деятельности. - 1994. - т.66, вып.6. - с. 974979

65. Мясная, Н.В. Особенности реакций иммунной системы мышей разных линий / Н.В. Мясная, А.А. Чурин, О.С. Борсук и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - т. 133, №10. - С. 437-439

66. Мясная, Н.В. Чувствительность иммунокомпетентных клеток мышей линии DBA/2 и C57BL/6 к циклофосфану./ Н.В. Мясная, А.А. Чурин, О.С. Борсук и др.// Бюллютень эксперементальной биологии. 2003. - №4. — С. 427-431

67. Нестерова, И.В. Иммунотерапия и иммунные препараты / И.В. Нестерова А.А. Старченко, С.А. Иванова и др. // Справочник по иммунотерапии. — 2002. с. 88-99

68. Назаров, П.Г. АЦЕТИЛХОЛИН В ИММУНОРЕГУЛЯЦИИ / Назаров П.Г. // Журнал 'Цитокины и воспаление'. 2006. - № 3. — С. 23-25

69. Новиков, Д.К. Характеристика иммунофармакотерапевтических препаратов / Д.К. Новиков, Ю.В. Сергеев, В.И. Новикова // Иммунопатология. Иммунология аллергология. — 2002. №4. - с. 7-27

70. Овденко, М.Б. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения Бестима в комплексной терапии хронического рецидивирующего кандидозного вульвовагинита у женщин. Автореф. дисс.к.м.н. / М.Б. Овдоненко. Челябинск. - 2006. - 22 с.

71. Оськина, И.Н. Влияние отбора по поведению на первичный и вторичный иммунный ответу серых диких крыс / И.Н.Оськина, С.Г. Шихевич, Р.Г. Гу-левич // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. -т. 136, №10. - с. 455-458

72. Пат. №2091389 РФ от 27.09.97. Электронный ресурс. Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью / Л.А. Колобов, А.С. Симбирцев, С.В. Куликов и др. 1997. - Режим доступа: http://ru-patent.info/20/90-94/20913 89.html

73. Патологическая физиология Под. ред. А.Д. Адо и Л.М. Ишимовой М.: Медицина, 1980.-456 с.

74. Пигарева, Н. В. Изучение иммуномодулирующей активности нового пептидного соединения Бестима / Н.В. Пигарева, А.С. Симбирцев, А.А. Колобов и др. // Иммунология. 2000. - №1. - С. 33-35.

75. Пинегин, Б.В. Принципы применения иммуномодуляторов / Б.В. Пинегин. -Лечащий врач . 2000. - №8. - С. 34.

76. Подопригора, Г.И. Температура тела и реакция1 на пирогенал у безмикробных и обычных животных / Г.И. Подпригора // Бюллетень экспериментальной биологии. 1978. - №3. - с. 263

77. Полетаев, А.Б. Регуляторная метасистема. Иммуннонейроэндокринная регуляция гомеостаза / Полетаев А.Б., Морозова С.Г., Ковалев И.Е. М.: Медицина, 2002.-168 с

78. Поляк, А.И. "Разберемся с аллергией?!" 222 ответа на вопросы аллергика / А.И. Поляк, И.А. Тимошевская // Ростов-на-Дону: Книга, 1996 368 с.

79. Покровский, А.В. Первый опыт применения пульс-терапии циклофосфаном у больных с острой и подострой стадиями неспецифического аортоартериита / А.В. Покровский, Варава Б.Н. и др. // Терапевтический архив. 1990. - №1. -с. 43-46

80. Препараты. Биомедгамал. Предприятие по производству бактерийных препаратов. Электронный ресурс. Режим доступа: http:// www.medgamal.ru/articl .php?c= 16

81. Пуговкин, А.П. Морфофункциональные основы обеспечения нейрогумо-ральной регуляции иммунной системы / А.П. Пуговкин. Иммунофармако-логия. - СПб.: Наука, 1993. — С. 37-66.

82. Приказ Министерства высшего и среднего специального образования СССР №742 «Об утверждении Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных»; УК РФ, статья 245 «Жесткое обращение с животными»

83. Раздольская, Н.В. Изучение ультраструктурной организации вирулентных форм trichomonas vaginalis / Н.В. Раздольская, О.В. Гаврилова, И.Н. Теличко // МИКРОБИОЛОГИЯ. 2007. Т.8. - с. 283-291.

84. Романцев, М.Г. Циклоферон от эксперимента в клинику / М.Г. Роман-цев, A.J1. Коваленко // Санкт-Петербург. - 2002. - с. 13-19

85. Роттенберг, B.C. Психонейроиммунология новый аспект старой проблемы / B.C. Роттенберг // Природа. - 1991. - С.29-34

86. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" под общей редакцией Р.У. Хабриева, М., ОАО Изд. "Медицина", 2005. - 832 с.

87. Сепиашвили, Р.И. Классификация и основные принципы применения им-муномодулирующих препаратов в клинической практике / Р.И. Сепиашвили // Аллергология и иммунология. 2002. — Т.З, №3. - с. 325-331

88. Сибиряк, С.В. Цитохром Р450 и иммунная система: факты, гипотезы,' перспективы / С.В. Сибиряк, В.А. Вахитов, Н.Н. Курчатова // Уфа: Гилем. -2003.-238 С.

89. Сотникова, Н.Ю., Влияние поливитаминного препарата Алвитил на иммунный статус у часто болеющих детей. / Сотникова Н.Ю., Громова О.А., Кудряшева А.В. и др. // Вопросы современной педиатрии, 2003, №4. — С. 16-19.

90. Судаков, К.В. Иммунные механизмы системной деятельности организма: факты и гипотезы / К.В.Судаков // Иммунология. 2003. - №6. - с.372-381

91. Суркина, И.Д. Действие интерферона-у на центральную нервную систему / И.Д. Суркина, К.Г. Гуревич // Успехи физиологических наук. — 2002. -Т.ЗЗ, №3. с.57-64

92. Сысоева, Г.М. Исследование иммунорегуляторных свойств индуктора интерферона у оппозитнореагирующих на антиген животных / Г.М. Сысоева, В.А. Разворотнев, В.А. Фадина и др. // Антибиотики и химиотерапия. — 1989. Т.34, №4. - с. 276-279

93. Ткачева, А.Г. Иммуномодулирующие эффекты бестима у больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки / А.Г. Ткачева, А.И. Долгушина, К.В. Никушкина и др.// Медицинская Иммунология. — 2005. -Т.7, №5-6.-с. 611-616

94. Трекова, Н.А. Влияние системного введения антител к глутамату на показатели поведения мышей С57В1/6 и BALB/C / Н.А. Трекова; JI.A. Ветрилэ // Журнал высшей нервной деятельности. 2004. - Т.54, №3. - С.398-402

95. Третьякова, И.Е. Регуляторная функция нейтрофилов в норме и в условиях меха-нической травмы. Автореф. дисс. канд. мед. наук. / И.Е. Третьякова. Челябинск, 1991. - 19 с.

96. Труфакин, В.А. Проблемы гистофизиологии иммунной системы / В.А. Труфакин, А.В. Шурлыгина // Иммунология. 2002. - №1. - с.4-8

97. Удут, Е.В. Механизмы действия различных препаратов эритропоэтина в условиях цитостатической миелосупрессии / Е.В. Удут, В.В. Жданов, J1.A. Гурьянцева и др. // БЮЛЛЕТЕНЬ СО РАМН. 2007 - №1 (123). - С. 13-14

98. Фаст, М.В. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения Бестима при вторичном сифилисе кожи и слизистых оболочек с давностью заболевания более 6 месяцев. Автореф. дисс.к.м.н. / М.В Фаст Челябинск. - 2006. - 22 с.

99. Федотова, Ю.О. Влияние 8-OH-DPAT на депрессивное поведение и обмен моноаминов в гиппокампе овариоэктомированных крыс / Ю.О. Федотова //

100. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2006. - Т.69, №1. - С. 12-17

101. Фрейдлин, И.С. Система мононуклеарных фагоцитов / И.С. Фрейдлин. -М.: Медицина, 1984. 271 с.

102. Фрейдлин, И.С. Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях / И.С. Фрейдлин, С.В. Неми-ровский, Т.А. Рудакова // Омск. 1976. — Вып. 4. — С. 13-14.

103. Хаитов, Р.М Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидоро-вич. Учебник. - М.: Медицина, 2000. - 432 с.

104. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2003. - № 4. - С. 196-203.

105. Чукичев, А.В. Иммунобиологическая активность нейтрофилов при травматиче-ской болезни (клинико-экспериментальное исследование). Дисс.д-ра мед. на-ук. / А.В. Чукичев. Челябинск, 1996. - 325 с.

106. Шабанов, П.Д. Оценка активности антидепрессантов на модели депрес-сивноподобного состояния у крыс, вызванного ограничением социального опыта / П.Д, Шабанов, P.O. Роик // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2005. -Т.68, №4. - С. 11-15

107. Шовен, Р. Поведение животных / Р. Шовен. Москва. - 1982. - 489 с.

108. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М.: Медицина, 1999. - 608 с.

109. Ярилин, А.А. Иммунный синапс как структурная основа презентации антигена / А.А. Ярилин // Иммунология. 2003. - №6. - С.347-350

110. Adams, P.M. Legator. Cyclophosphamide-induced spermatogenic effects detected in the F1 generation by behavioral testing / P.M. Adams, J.D. Fabricant, M.S. Legator // Science. Vol 211. - Issue 4477. - P. 80-82

111. Andre, В. R. Cancer Chemotherapy and Cognitive Function in Rodent Models: Memory Impairment Induced by Cyclophosphamide in Mice / B.R. Andre // Clinical Cancer Research. 2006 - Vol. 12, P. 5000-5001.

112. Aloe, L. Nerve growth factor and autoimmune diseases / L. Aloe, S.D. Skaper et all. // Autoimmunity. 1994. - № 2 (19). - P. 141-150.

113. Anisman, H. Neuroimmune mechanisms in health and disease: 1. Health. / H. Anisman, M.G. Baines et all. // CMAJ. 1996. - № 7 (155). - P. 867-874.

114. Anisman, H. Neuroimmune mechanisms in health and disease: 2. Desease. / H. Anisman, M.G. Baines et all. // CMAJ. 1996. - № 8 (155). - P. 1075-1082.

115. Banks, W.A. Interleukin-1 a in blood has direct access to cortical brain cells / W.A. Banks, A.J. Kastin, E.G. Gutierrez // Neurosci. Lett. 1993. - № 1 (163). -P.41-44.

116. Barouch, R. Differential regulation of neurotrophin expression by mitogens and neurotransmitters in mouse lymphocytes/ R. Barouch, E. Appel, G. Kazi-mirsky // J. Neuroimmunol. 2000. - № 2 (103). - P. 112-121.

117. Bernardini, R. Relevance of neuroendocrine-immune interactions / R. Bernar-dini, A. Chiarenza, N. Barbera et al. // Pharmacol. Res. 1992. - №2 (26). - P. 6869.

118. Burlet, A.J. Monocklonal anti-vaso-pressin (VP) antibodies penetrate VP neurons in vivo / A.J. Burlet, B.P. Leon-Henry, F.R. Robert et al. // Exp. Brain Res. -1987. Vol. 65, N 5. - P. 629-638.

119. Callahan, Т.A. Central nervous system activation following periphenal chemical sympathectomy: implications for neural-immune intractions / T.A. Callahan, J.A. Movnihan, D.T. Piekut // J. Brain. Behav. Immun. 1998. - №3 (12). - P. 230-241.

120. Camara, E.G. The brain and the immune system: A psychosomatic network / E.G. Camara, T.C. Danao // Psychosqmatics. 1989. - Vol. 30. - P. 140-146.

121. Carr, D.J. Neuroendocrine peptide receptors on cells of the immune system / D.J. Carr // J. Chem. Immunol. 1992. - Vol. 52 - P.84-105.

122. Carr, D.J. Cellular mechanisms involved in morphine-mediated suppression of CTL activity / D.J. Carr, G.W. Carpenter et al. // J. Adv. Exp. Med. Biol. 1995. -P.373131-373139.

123. Carr, D.J. The relevance of opioids and opioid receptors on immunocompe-tence and immune homeostasis / D.J. Can*, T.J. Rogers, R.J. Weber // J. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1996. - №3 (213). - P.248-257.

124. Celis, E.M. Measurement of grooming behaviour / E.M. Celis, E. Torre // Methods Neurosci. 1993 - V.14. - P. 359-378.

125. Chun, J. Developmental neurobiology: Alternative ends for a familiar story? / J. Chun, D.G. Schatz // J. Curr. Biol. 1999. - №7 (9). - P.251-253.

126. Cserr H.F. Cervical lymphatics, the blood-brain barrier and the innunoreactivi-ty of the brain: a new view / H.F. Cserr, P.M. Knopf // J. Immunology Today. -1992. №12 (13). P.507-512.

127. Dantzer, R. Cytokine-induced sickness behavior: Where do we stand? / Dant-zer, R. // Brain Behav Immun. 2001. №15. - P. 7-24.

128. Devoino, L. Immunological consequences of the reversal of social status in C57BL/6J mice / L. Devoino, E. Alperina, T. Pavina // Brain, Behavior, and Immunity. 2003. - V.17. - P.28-34.

129. Devoino, L. Involvement of brain dopaminergic structures in neuroimmuno-modulation / L. Devoino, E. Alperina et al. // Int. J. Neurosci. 1997. - №3-4 (91). -P. 213-228.

130. Devoino, L.V. Involvement of the nucleus accumbens in stimulation of the immune response in rats after activation of opioid mu receptors with DAGO / L.V. Devoino, M.A. Cheido, E.L. Alperina // Neurosci Behav Physiol. 2002. - V.32, N5. - P. 529-532.

131. Devoino, L.V. Involvement of the rat caudate nucleus in the immunostimulato-ry effect of DAGO / L.V. Devoino, M.A. Cheido, E.L. Alperina // Neurosci Behav Physiol. 2001.- V.31, N3. - P.323-326.

132. De-Souza, E.B. Corticotropin-releasing factor and interleukin-1 receptors in the brain-endocrine-immune axis. Role in stress response and infection / E.B. De-Souza // J. Ann. N-Y. Acad. Sci. 1993. - №697. - P. 9-27.

133. Dinarello, C.A. New concepts on the pathogene-sis of fever / C.A. Dinarello, J.G. Cannon, S.M. Wolff // Reviews of infections Diseases. 1988. - Vol 10. - P. 168-190.

134. Downing, J.E. Neural immunoregulation: emerging roles for nerves in immune homeostasis and disease / J.E. Downing, J.A. Miyan // J. Immunol. Today. -2000. №6 (21). - P. 281-289.

135. Esquifino, A.I. Local regulation of the immune response by the autonomic nervous system / A.I. Esquifino, D.P. Cardinali //J. Neuroimmunomodulation. -1994.-№5(1).-P. 265-273.

136. Ferenchk, M. Is the immune system our sixth sence? Relation between the immune and neuroendocrine systems / M. Ferenchk, V. Stvrtinov // Bratisl. Lek. Lis-ty. 1997. - Vol. 98, N 4. - P. 187-198.

137. Fleshner, M. Interleukin-1 beta induced corticosterone elevation and hypothalamic NE depletion is vagally mediated / M. Fleshner, L.E. Goehler et all // J. Brain. Res. Bull. 1995. - №6 (37). - P. 605-610.

138. Galoyan, A. Neurochemistry of brain neuroendocrine immune system: signal molecules / A. Galoyan // J. Neurochem. Res. 2000. - №9-10 (25). - P. 13431355.

139. Giang, D.W. Conditioning of cyclophosphamide-induced leukopenia in humans / D.W. Giang, A.D. Goodman, R.B. Schiffer et al. // J Neuropsychiatry Clin Neurosci. 1996. - Vol. 8. - P. 194-201

140. Griswold, J.A. White blood cell response to burn injury / J.A. Griswold // J. Semin. Nephrol. 1993. - №4 (13). - P. 409-415.

141. Hanisch, U.K. Interleukin-2 as a neuroregulatory cytokine / U.K. Hanisch, R. Quirion // J. Brain. Res. Brain. Res. Rev. 1995. - №3 (21). - P. 246-284.

142. Hesse, D.G. Cytokine appearance in human endotoxemia and primate bacteremia / D.G. Hesse, K.J. Tracey, Y. Fong et al // Surg Gynecol Obstet. 1988. Vol. 166.-P. 147—153

143. Heisler, L.K. Elevated anxiety and antidepressant-like responses in serotonin 5-HTia receptor mutant mice / L.K. Heisler, C. Hung-Ming, T.J. Brennan et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. - Vol. 95 (25). - P. 15049-15054

144. Hori, T. Bidirectional communication between neural and immune systems / T. Hori // J. Nippon. Rinsho. 1994. - №11 (52). - P. 2843-2849.

145. Kahn, M.A. Regulation of an oligodendrocyte progenitor cell line by the inter-leukin-6 family of cytokines./ M.A. Kahn, J. De-Vellis // J. Glia. 1994. - №2 (12). - P. 87-98.

146. Kang, D.H. Frontal brain asymmetry and immune function / D.H. Kang, R.J. Davidson, C.L. Сое et al. // Behavioral Neuroscience. 1991. - Vol. 6. - P. 860869.

147. Kita, M. Induction of cytokines in human peripheral blood mononuclear cells by mycoplasmas / M. Kita, Y. Ohmoto, Y. Hirai et al. // Microbiol. Immunol. -1992. -Vol.36. -P.507-516.

148. Korst, D.R. Multiple myeloma. II. Analysis of cyclophosphamide therapy in 165 patients./ D.R. Korst, G.O. Clifford, W.M. Fowler et al. // JAMA 1964 -Vol. 189.-P.758-762

149. Krueger, J.M. Interferon alpha-2 enhances slow-wave sleep in rabbits / J.M. Krueger, C.A. Dinarello, S. Shoham et al // Int. J. Immunopharmacol 1987 -Vol. 9. - P. 23-30.

150. Krzymowski, T. New pathways in animal reproductive physiology frontiers and perspectives/ T. Krzymowski // J. Physiol. Pharmacol. 1992. - №4 (43). -P.5-19.

151. Kullmann, D.M. Spillover and synaptic cross talk mediated by glutamate and GABA in the mammalian brain / D.M. Kullmann // Prog. Brain Res. 2000. -Vol.125.-P.339-351

152. Licinio, J. Central nervous system cytokines and their relevance for neurotoxicity and apoptosis / J. Licinio // J. Neural. Transm. Suppl. 1997. - P. 4926949275.

153. Lister R.G. The use of the plus-maze to measure anxiety in the mouse. / R.G. Lister// Psychopharmacology. 1987. - №92. - P. 180-185.

154. Loeffler, M. Immunostimulatory Effects of Low-Dose Cyclophosphamide Are Controlled by Inducible Nitric Oxide Synthase / M. Loeffler, J.A. Kruger, R.A. Reisfeld // Cancer Research. 2005. - №65. - P. 5027-5030

155. Lupu, V. The effect of reduced glutathione (TAD-600) on the behavior of rats neonatally intoxicated with ethanol / V.Lupu, M. Dorofteiu // Rom J Physiol. -1994. Vol. 31 (1 -4) - P. 59-67

156. Mapp, P. The role of substance P in rheumatic disease. / P. Mapp, B. Kidd // Semin. Arthritis Rheum. 1994. Vol. 23 (Suppl. 3). - P. 3-9.

157. Marazziti, D. Immune cell imbalance in major depressive and panic disorders / D. Marazziti, F. Ambrogi, R. Vanacore et al. // Neuropsychobiology. 1992. -Vol.26.-N. 1-2.-P. 23-26.

158. Mitrovic, B. Neurotransmitters and cytokines in CNS pathology / B.Mitrovic, F.C.Martin et al. // J. Prog. Brain. Res. 1994. - Vol. 103. - P. 319-330.

159. Oomura, Y. Functional correlation between feeding-related neurons and chemical senses / Y. Oomura, Z. Karadi, H. Nishino et al. // Olfaction and Taste XI , Tokyo: Springer-Verlag. 1994. - P. 502-506

160. Oomura, Y. Effects of acidic fibroblast growth factor on neuronal activity of the parvocellular part in rat paraventricular nucleus. / Y. Oomura, T. Urashima, A. Shiokawa//Neurobiology. 1995. Vol. 3(3-4). - P. 329-338

161. Ormsby, C.E. Long term memory retrieval deficits of learned taste aversion are ameliorated by cortical fetal brain implants / C.E. Ormsby, Rami'rez-Amaya, V. & Bermudez-Rattoni, F. // Behavioral Neuroscience.- 1998. №112. - P. 172-182

162. Page, G.G. The immune-suppressive nature of pain / G.G. Page, S. Ben-Eliyahu // Semin. Oncol. Nurs. 1997. - V. 13, N1. - P. 10-15.

163. Pardy, K. The influence of interleukin-2 on vasopressin and oxitocin gene expression in the rodent hypothalamus / K. Pardy, D. Murphy, D. Carter // J. Neu-roimmunol. 1993. - №2 (42). - P. 131-138

164. Pellow, S. Anxiolytic and anxiogenic drug effects on exploratory activity in an elevated plus-maze. A novel test of anxiety in the rat / S. Pellow, S.E. File // Pharmacol Biochem Behav. 1986. - №24. - P. 525-529

165. Penkowa, M. IL-6 deficiency leads to reduced metallothionein-I+II expression and increased oxidative stress in the brain stem after 6-aminonicotinamide treatment / M. Penkowa, J. Hidalgo // J. Exp. Neurol. 2000. - №1 (163). - P. 72-84.

166. Pfaff, D. Precision in mouse behavior genetics / D. Pfaff // Proc Natl Acad Sci USA. 2001. -Vol. 11 - P. 5957-5960

167. Pousset, F. Cytokines as mediators in the central nervous system / F. Pousset // J. Biomed. Pharmacother. 1994. - №10 (48). - P. 425-431.

168. Piruzian, L.A. Effect of prodigiozan and pyrogenal on the neural regulation of the frog heart L.A. Piruzian, M.R. Mukumov, L.V. Sorokin, et al. // Toksikol. -1985. Vol. 48(2). - P. 69-72.

169. Li Qiu-shi. Immunoregulatory Effect of Neocortex in Mice / Li Qiu-shi. Yang Gui-zhen // Immunological Investigations. 1987. - Vol. 16. - Issue 2. - P. 87 - 96

170. Rassnik, S. Anti-stress action of a corticotropin-releasing factor antagonist on behavioral reactivity to stressors of varying type and intensity. / S. Rassnik, K.T. Britton, G.F Koob et al. // Neuropsychopharmacology. — 1994. Vol.11. - P. 179

171. Renoux, G. A balanced brain asymmetry modulates T cell-mediated events / G. Renoux, K. Biziere, M. Renoux et al // J. Neuroimmunol. - 1983. - №5. - P. 227-238.

172. Rivest, S. Influence of cytokines on neuroendocrine functions during immune response. Mechanisms involved and neuronal pathways / S. Rivest, S. Lacroix // J. Ann. Endocrinol. (Paris). 1995. - №3 (56). - P. 159-167.г

173. Rivier, С. Mechanisms mediating the effects of cytokines on neuroendocrine functions in the rat / C. Rivier, S. Rivest // Ciba. Found. Symp. 1993. - Vol. 172. - P. 204-220.

174. Sacerdote, P. Centrally injected nerve growth factor modulates peripheral immune responses in the rat / P. Sacerdote, B. Manfredi et al. // J. Neuroendocrinol-ogy. 1996. - №4 (64). - P. 274-279.

175. Smith, E.M. IL-10 as a mediator in the HP A axis and brain / E.M. Smith, P. Cadet et al. // J. Neuroimmunol. 1999. - №1-2 (100). - P. 140-148.

176. Stem, L. The tail suspension test: a new method for screening antidepressants in mice / L. Stem, R. Chermat, B. Thierry et al. // Psychopharmacology. 1985. -№85. - P. 367-370

177. Sumizura, A. Lymphokines faciliate maturation of oligodendrocytes in vitro / A. Sumizura, D.H. Siblerberg // Brain Res. 1989. - Vol. 480, N 1—2. - P. 51-57.

178. Wahle, M. Impaired catecholaminergic signaling of В lymphocytes in patients with chronic rheumatic diseases / M. Wahle, S. Kolker, A . Krause et al // Ann Rheum Dis. 2001. - №60. - P. 505-510

179. Weiner, FI.L. Immunology and immunotherapy in Alzheimer's disease / H.L.Weiner, D. Frenkel // Nature Rev. Immunol. 2006. - №6. - P. 404-416.

180. Weischer, M.L., 1976. A simple device for measuring exploratory activity and motility in mice. / M.L. Weischer // Psychopharmacology. 1976. №50. P. 275279.

181. Wenner, M. Acute electrical stimulation of lateral hypothalamus increases natural killer cell activity in rats / M. Wenner, N. Kawamura et al. // J. Neuroim-munol. 1996. -№1 (67). - P. 67-70.

182. Wilson: Williams Textbook of Endocrinology, 9th ed., 1998. Режим доступа: http://sarcoidosis.by.ru/english/stress7.htm

183. Yacoubi, M. El. Behavioral, neurochemical, and electrophysiological characterization of a genetic mouse model of depression / M. El. Yacoubi, S. Bouali, D. Popa et al // Proc Natl Acad Sci USA. 2003. - Vol. 100 (10) - P. 6227-6232

184. Zhang, J. A functional analysis of EP4 receptor-expressing neurons in mediating the action prostaglandin E2 within specific nuclei of the brain in response to interleukin-1 beta / J. Zhang, S. Rivest // J. Neurochem. 2000. - №5 (74). - P. 2134-2145