Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Особенности экспрессии гена c-fos в мозге крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу

АВТОРЕФЕРАТ
Особенности экспрессии гена c-fos в мозге крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу - тема автореферата по медицине
Бабаи, Парвин Москва 1997 г.
Ученая степень
кандидата биологических наук
ВАК РФ
14.00.17
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности экспрессии гена c-fos в мозге крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу

^ На правах рукописи

БАБАИ Парвин

ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА 5 МОЗГЕ КРЫС С РАЗЛИЧНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ЭМОЦИОНАЛЬНОМУ СТРЕССУ

14.00.17 - Нормальная физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1997

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии Московской Медицинской Акаде им. И.М.Сеченова МЗ РФ, объединенной с научно-исследовательским инстит) нормальной физиологии им. П.К.Анохина РАМН в лаборатории молекулярных о< обучения и памяти, руководитель К.В.Анохин

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: академик РАМН, профессор К.В. Судаков

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор М.М.Козловская

доктор медицинских наук, профессор В.И.Баднков

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

Защита диссертации состоится " октября 1997 г. 00

BIZ часов на заседании диссертационного Совета Д.001.08.01 при НИИ нормальной физиологии им. П.К.Анохина РАМН (Москва, ул. Б. Никитская, 6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института. Автореферат разослан "22" сентября 1997 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат медицинских наук В.А.ГУМЕНЮК

I. Общая характеристика работы

Актуальность исследования. Среди многочисленных актуальных проблем »временной медицины и физиологии эмоциональный стресс занимает одно из ¡едущих мест. Эмоциональный стресс является основной причиной многих гсихосоциальных болезней, таких как неврозы и психозы (Судаков, 1995) :ердечно-сосудистые заболевания (Folkow, 1985; Henry, 1990; Судаков, 1984; Тазов, 1975), инсульты и нарушения мозгового кровообращения (Вальдман с ;оавт., 1976; Krenauer, 1980; Bender, 1979), язвенные поражения желудочно-аппечного тракта (Pare, 1990; Murison and Overmier, 1993) и иммунодефициты Корнева с соавт., 1987; Ader et al., 1990).

На устойчивость к эмоциональному стрессу оказывают влияние многие факторы, в том числе - индивидуальные характеристики организмов. Экспериментальные и клинические наблюдения указывают на то, что у разных шдивидов даже при стандартизованном стрессорном воздействии татологические проявления могут быть различными (Судаков с соавт., 1981; "анелина с соавт., 1979; Sherwitz 1978; Ickesc et al., 1979; Pittoer and Houston, 1980). В частности, крысы различных генетических линий обладают различной 1увствительностью к эмоциональному стрессу (Юматов и соавт, 1979; Судаков, L981; Shank and Anisma, 1988). Кроме того, как среди линейных, так и среди юлинейных крыс выявлены животные с различной индивидуальной устойчивостью к эмоциональному стрессу (Юматов и Скоцеляс, 1979; Судаков, 1992). Очевидно, что исследование этих индивидуальных типологических >собенностей животных, тесно связанных с функциями генетического аппарата Судаков, 1992), имеет важное значение для разработки мер по направленному товышению устойчивости организма к эмоциональному стрессу.

Активация генетического аппарата, особенно индукция генов раннегс реагирования ("ранних генов") в головном мозге при конфликтных ситуация; является одним из первых проявления эмоционального стресса (Smith et al. 1992; Borsook et al., 1994; Sharp et al., 1994). Ранние гены кодирую-регуляторные белки, которые являются транскрипционными факторами необходимыми для инициации долговременных изменений в нервных клетка: (Morgan and Curran, 1988; Matthies, et al., 1989; Anokhin et al., 1991). Быстра экспрессия этих генов под влиянием экстраклеточных стимулов позволяе использовать их как чувствительный маркер для определения акгиваци генетического аппарата нейрональных клеток при стрессорной стимуляци (Arnold et al., 1992; Pezzone et al., 1992; Senba et al., 1993). Установлено, что пр разных видах эмоционального стресса - иммобилизации (Arnold et al., 1992 Ryabinin et al., 1995), действии электрического тока (Pezzone et al., 1992; Вес and Fibiger, 1995), плавательном стрессе (Duncan et al., 1993) и влияни наказания при обучении активному и пассивному избеганию (Maleeva et al 1989; Anokhin and Ryabinin, 1993) наблюдается активация генетнческог аппарата нервных клеток, особенно экспрессия таких ранних генов как c-fos.

Однако связь между экспрессией ранних генов и устойчивость! животных к сгрессорным воздействиям практически не изучена. В частности н известно, зависит ли экспрессия гена c-fos при эмоциональном стрессе с индивидуальных особенностей животных и если да, то в каких структура мозга?

Цель и задачи исследования. В настоящей работе была поставлена цел изучить паттерны экспрессии гена c-fos при неизбегаемом электрокожно раздражении в мозге у крыс с различной устойчивостью к эмоциональном стрессу.

Задачи исследования:

1. Провести тестирование крыс на устойчивость и предрасположенность к эмоциональному стрессу по показателям их поведения в эмоциогенных тестах "открытое поле", "исследование нор" и "спрыгивание с платформы".

2. Щучить мозговую локализацию экспрессии гена с-/о$ в мозге данных крыс после элекгрокожного раздражения в модели "спрыгивание с платформы".

3. Установить особенности активации гена с-/оь в мозге у крыс, устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу. Определить структуры мозга, в которых у устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу животных в стрессогенной ситуации происходит наиболее выраженная экспрессия гена с-/о%.

4. Исследовать зависимость экспрессии гена с-/оз в структурах мозга от интенсивности электрического раздражения в модели "спрыгивание с платформы".

Научная новизна. В работе впервые показано, что индивидуальные особенности поведения, характеризующие различную устойчивость крыс к эмоциональному стрессу, существенно влияют на уровень экспрессии гена о/оэ в разных структурах головного мозга. В ответ на эмоциогенное воздействие экспрессия гена с-^Ь.? у крыс, устойчивых к эмоциональному стрессу, наблюдалась в меньшем числе структур мозга по сравнению с крысами, предрасположенными к эмоциональному стрессу.

Устойчивые к эмоциональному стрессу животные характеризуются меньшим количеством с-/об позитивных клеток в большинстве исследованных структур мозга. Крысы, предрасположенные к эмоциональному стрессу, характеризуются выраженной активацией гена с-/о.ч в структурах мозга в ответ на эмоциогенное воздействие. Наибольшая индукция наблюдается в коре головного мозга, гипоталамусе и стволе мозга.

Научно практическое значаще работы. Полученные данные имет теоретическое значение для понимания молекулярно-генетических осн устойчивости к эмоциональному стрессу. Обнаруженный факт различи активации экспрессии гена c-fo s в мозге крыс, устойчивых предрасположенных к эмоциональному стрессу, открывает новые перспекгш для направленного повышения устойчивости предрасположенных субъектов эмоциональному стрессу. Результаты работы могут в дальнейшем послужи основой для направленной фармакологической регуляции устойчивости эмоциональному стрессу через воздействие на реактивность генетическо аппарата нервных клеток.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на Итогов сессии института нормальной физиологии им. П.К. Анохина Российской AW (январь 1997 г.), и на ХХХШ Международном конгрессе физиологических на (Санкт-Петербург, июль 1997 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из разделе "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результа-исследований", "Обсуждение", "Выводы" и "Список литературы". Объ< работы: 150 страниц машинописного текста. Диссертация содержит : иллюстрации. Список литературы включает 200 источников.

II. Материалы и методы исследования

Исследования выполнены на 148 крысах-самцах Вистар, весом 180-200 в возрасте 2-3 месяцев. В течение 9-ти дней перед основным эксперимент« животных подвергали приручению (хендлингу). С целью определен индивидуально-типологических особенностей поведения и устойчивое животных к эмоциональному стрессу их исследовали в тесте "открытое пол« (Hall, 1934; Harrington and Hellwig, 1979) а также в тесте "исследование но (Каткова и соавт., 1975; Flecher and Starr, 1985). В тесте "открытое поле"

течение 5 мин. регистрировали следующие параметры поведения: 1) латентный период первого движения, 2) латентный период выхода в центр, 3) количество пересеченных периферических квадратов, 4) количество пересеченных центральных квадратов, 5) количество периферических стоек, 6) количество центральных стоек, 7) число заглядываний в дыры, 8) продолжительность груминга, 9) дефекацию, 10) уринацию. В тесте "исследование нор" изучали следующие показатели: 1) латентный период первого выглядывания из "норы", 2) количество выглядываний. Для выделения "устойчивых" и "предрасположенных" к эмоциональному стрессу крыс использовали разработанные ранее поведенческие критерии (Кошшк и соавт., 1995).

Кроме того, у животных, протестированных в моделях "открытое поле" и "исследование нор" на прогностическую устойчивость к эмоциональному стрессу, изучали поведение в тесте "спрыгиваиие с платформы" (Jarvik and Essman, I960). Животных поочередно помещали на платформу (13x11x6 см), находящуюся в центре экспериментальной камеры (40x40x30 см). После спуска крысы на пол камеры, в момент когда все лапы животного оказывались на полу, на электродный пол камеры подавали электрический ток. Продолжительность действия тока составляла 5 сек. В экспериментах использовали две интенсивности тока. Крысы одной группы при спуске на пол получали ток силой 0.25 мА. Животные другой группы получали ток силой 2.5 мА. Крысы третьей группы составляли группу "активного контроля". Их также помещали на платформу, но после спускания на пол камеры им не наносили воздействия электрическим током. Спустя два часа после теста часть животных из каждой группы забивали декапитацией с помощью гильотины и брали мозг на иммуногистохимию. Другую часть животных из опытных и контрольных групп через 24 часа повторно помещали на платформу и тестировали оборонительный навык "пассивного избегания" (Jarvik and Essman, 1960). В течение 3-х минут теста измеряли следующие показатели: 1) латентный период первого спуска с

платформы на пол, 2) число спусков с платформы, 3) общее время пребывания животных на платформе, 4) латентный период второго и третьего спуска с платформы, 5) общее время пребывания животных на полу. Через два часг после тестирования этих животных также декантировали и мозг замораживали в жидком азоте для последующей иммуногистохимии.

Для иммуногистохимических экспериментов приготовляли криостатны« срезы мозга толщиной 20 мкм. Срезы были расположены на 24 уровнях мозга выбранных на основании атласа Paxinos & Watson (1982). Срезы фиксировали i 4% параформальдегиде, и c-Fos подобную иммунореакгивностъ в клетка: различных структур мозга определяли авидин-биотин пероксидазным методоь (Usu et al., 1981) с помощью поликлоналышх антител к белку c-Fos (Medak Germany) в разведении 1:8000 и стрептавидинового набора Vectastain Eliti (Vector Labs, USA).

Число c-Fos положительных клеток подсчитывали, использу: стереоскопический микроскоп MSB-20 ("Leica", Germany). Идентифицикацик структур на срезах мозга проводили с помощью атласов Paxinos & Watsoj (1982) и Swanson (1992).

Число c-Fos положительных клеток в идентифицированных структура мозга подсчитывали отдельно в левой и правой половинах мозга. Для каждой и структур у отдельного животного подсчитывали общее число c-Fo положительных нейронов, деленное на число срезов, на которых был представлена данная структура. Затем вычисляли среднее значение i стандартное отклонение числа c-Fos иммунопозитивных клеток в данно: структуре в каждой группе животных.

Достоверность полученных результатов оценивали с помощы статистического пакета "Statistica 5.0" по критерию Манна-Уитни дл поведенческих экспериментов, а также MANOVA и post hoc Tukey Test дл иммуногистохимических данных.

III. Результаты исследования 1. ТИПОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОВЕДЕНИЯ КРЫС

1.1. Тест "открытое поле"

Среди исследованных в "открытом поле" животных, согласно ранее разработанным критериям (Коплик и соавт., 1995), нами были выделены две крайние группы. Крысы первой группы (п=44) по сравнению крысами второй группы (п=53) характеризовались более коротким латентным периодом первого движения (4.88 ± 0.3, и 7.7 ± 0.5 с, р < 0.001) и выхода в центр (42.8 ± 5.8 и 185.4 ± 16.0 с, р < 0.001), более интенсивными горизонтальными перемещениями на периферии (113.2 ± 4.0 и 65.5 ± 3.9, р < 0.001) и в центре (25.1 ± 2.4 и 5.4 ± 1.0, р < 0.001), большей вертикальной активностью на периферии (13.2 ± 1.0 и 5.8 ± 0.5, р < 0.001) и в центре (4.6 ± 0.7 и 0.3 ± 0.1, р < 0.001), более выраженной исследовательской активностью по заглядыванию в дыры (11.4 ± 0.6 и 6.9 ± 0.45, р < 0.001) и меньшей продолжительностью груминга (9.4 ± 1.5 и 11.0 ± 1.8 с, р > 0.05). Количество дефекаций у этих групп было соответственно (2.3 ± 0.2 и 2.5 ± 0.2 ,р > 0.05), а количество уринаций (0.5 ± 0.1 и 0.6 ± 0.1, р > 0.05) (Рис 1). Остальные 50 исследованных крыс заняли промежуточное положение.

В соответствии с данными Коплик и соавт. (1995), крысы, имеющие в открытом поле короткий латентный период первого движения и выхода в центр, а также выраженную двигательную активность на периферии и особенно в центре, были отнесены нами к устойчивым к эмоциональному стрессу животным, в то время как крысы, имеющие в открытом поле продолжительный латентный период первого движения и выхода в цёнтр, низкую активность как в центре так и на периферии и имеющие высокие показатели вегетативного баланса, были отнесены к предрасположешшм к эмоциональному стрессу.

ВЦ группа1 СЩ] группа2

** р < .001 * р < .05

1-Латентный период первого движения5-Количество периферических стоек 2 3

Латентный период выхода в центр Количество пересеченных периферических секторов 4-Количество пересеченных центральных секторов

6-Количество центральных стоек

7-Количество иссследованных объектов

8-Время груминга

9-Количество дефекаций

10-Уринация

Рис.1. Характеристики поведения первой ("устойчивые к эмоциональному стрессу" п=53) и второй ("предрасположенные к эмоциональному стрессу" п=44) групп крыс в тесте "открытое поле". По оси ординат - количественные показатели поведения, по оси абсцисс - значения показателей поведения. *р<0.05, **р<0.001 по сравнению с крысами 1-й группы.

1.2. Тест "исследование нор"

Латентный период первого выглядывания из "норы" составлял у кры первой группы в среднем 29.9 ± 3.9 с, а у крыс второй группы 49.4 ± 5.0 с (р • 0.01). Количество выглядываний из нор у крыс первой и второй группы : среднем составляло 14.9 ± 0.9 и 7.5 ± 0.5 соответственно (р < 0.001) (рис. 2" Латентный период первого выглядывания из норы у крыс, отнесенных промежуточной группе, составлял 36.0 ± 3 е., а количество выглядываний и нор 10.7 ±0.7.

Рис.2. Поведение крыс первой ("устойчивые к эмоциональному стрессу") (п=53) и второй ("предрасположенные к эмоциональному стрессу") (п=44) группы в тесте "исследование нор". На абсциссе показатели поведения: 1 - латентный период первого заглядывания в нору. 2 - количество заглядываний в норы. На ординате - количественные показатели. *р<0.05, **р<0.001 по сравнению с крысами первой группы.

N,-53 N,=44

Таким образом, крысы первой группы, имевшие большую активность в "открытом поле", демонстрировали в тесте "исследование нор" более короткий латентный период первого выглядывания и большую активность исследования нор. Наоборот, крысы второй группы, предрасположенные к эмоциональному стрессу и проявляющие в тесте "открытое поле" меньшую активность, характеризовались в тесте "исследование нор" большим латентным периодом первого выглядывания из нор и меньшей активностью исследования нор.

1.3. Тест "спрыгивание с платформы "

Поведенческий тест "спрыгивание с платформы" мы рассматривали как модель стрессорлого воздействия. Поэтому нас особенно интересовало как будут себя вести в этой задаче крысы, предварительно классифицированные в гестах "открытое поле" и "исследование нор" как устойчивые и предрасположенные к эмоциональному стрессу.

1.3.1. Поведение крыс при подкреплении током 0.25 мА

В этой серии экспериментов 11 крыс из группы, устойчивой к эмоциональному стрессу, 11 крыс из группы, предрасположенной к эмоциональному стрессу и 9 крыс из промежуточной группы при спрыгивании с платформы получали удары тока силой 0,25мА в течение 5 сек. Четыре крысы, которые при спрыгивании с платформы на пол не получали удара электрического тока, составили контрольную группу. Как показали эксперименты, латентный период первого спрыгиванкя на пол у крыс контрольной и экспериментальной групп не различался (3.8 ± 0.6 и 3.4 ± 0.5 е., р > 0.05).

На второй день крыс всех групп тестировали в экспериментальной камере. Результаты тестирования представлены в таблице 1.

Как следует из данных таблицы 1, крысы всех экспериментальных груш по сравнению с контрольными животными характеризовались достоверно боле< длительным латентным периодом первого и повторных спусков с платформы, ; также более коротким временем пребывания на полу. Крысы из группы ! ("устойчивые к эмоциональному стрессу") отличались от крыс группы : ("предрасположенные") более длительным латентным периодом первого ] повторных спусков с платформы, более длительным пребыванием н; платформе и меньшим временем пребывания на полу.

1.3 .2. Поведение крыс при подкреплении током 2.5 мА

В этой серии экспериментов 13 крыс из группы, устойчивой эмоциональному стрессу, 12 крыс из группы, предрасположенной эмоциональному стрессу, и 10 крыс из промежуточной группы в течение 5 се получали удары тока силой 2.5 мА. Изучали те же показатели, что и предыдущих опытах при действии тока в 0.25 мА. Проведенные опыт показали следующее (таблица 2).

Таблица I

Параметры поведения крыс в тесте "спрыгивание с платформы" при воздействии тока силой 0.25мА

Характеристика животных Л.П. первого спуска с платформы (сек) Общее время на платформе (сек) Число спусков с платформы Общее время пребываниян а полу (сек) Л.П. второго спуска с платформы (сек) Л.П. третьего спуска с платформы (сек)

Устойчивые (п=6) 43.6 ±31.0 146 ± 12 1.8 ±0.5 28 ± 12.9 136 ±27.3 163 ±15

Предрасположенные (п=7) * 8.8 ±2.6 119.8 ±22.3 2.5 ± 0.7 ** 53.2 ±21.7 ** 81.3 ±30.6 ** 155.8 ± 12.5

Промежуточные (п=5) * 17.5 + 3.4 * 34 ± 18.1 2.2 ±0.7 * 136 ±28.7 * 23.3 ±6.6 ** 33 ±9

Контрольные (п=4) 3.5 ±0.6 4.7 ± 1.7 1.25 ±0.25 175.25 ±1.7 7.8 ±4.8 -

*р < 0.05, ** р < 0.001, по сравнению с крысами контрольной группы |р < 0.05 по сравнению с предрасположенных к эмоциональному стрессу животными

Таблица II

Параметры поведения крыс в тесте "спрыгивание с платформы" при воздействии тока силой 2.5мА

Характеристика животных Л. П. первого спуска с платформы (сек) Общее время на платформе (сек) Число спусков с платформы Общее время пребывания на полу (сек) Л.П. второго спуска с платформы (сек) Л. П. третьего спуска с платформы (сек)

Устойчивые (п=13) 87.8 ±27.7 107.0 ±32.7 1.16 ±0.16 26.0 ±20.8 •ч 165.0 ±12 177.0 ±1.5

Предрасположенные (п=12) ** 38.0 ± 8.6 68.1 ±23.0 1,57 ±0.36 * 101.9 ±23.0 ** 65.0 ±26.3 ** 75.0 ± 24.0

Промежуточные (п=10) ** 61.4 ±24.2 ** 102.0 ± 26.8 1.87 ±0.32 ** 63.3 ± 16.3 * 132 ±16.7 ** 170.0 ±6.0

Контрольные (п=4) 3.5 ±0.6 4.8 ± 1.7 1.25 ±0.25 175.0 ±1.7 7.8 ±4.8 -

ы

*р < 0.05, ** р < 0.001, по сравнению с крысами контрольной группы

< 0.05 по сравнению с предрасположенных к эмоциональному стрессу животными

По сравнению с крысами, получившими в тесте "спрыгивание с платформы" электрокожное раздражение силой 0.25 мА, крысы, устойчивые к эмоциональному стрессу, получившие раздражение силой 2.5 мА характеризовались более длительным латентным периодом первого спуска с платформы, более длительным временем общего пребывания на платформе и меньшим числом спусков на пол и более коротким латентным периодом повторных спусков с платформы по сравнению с крысами, предрасположенными к эмоциональному стрессу.

2. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА С-ТОБ В СТРУКТУРАХ ГОЛОВНОГО МОЗГА У КРЫС ПОСЛЕ ЭМОЦИОГЕННОЙ

СТИМУЛЯЦИИ В ТЕСТЕ "СПРЫГИВАНИЕ С ПЛАТФОРМЫ"

9

В этой серии было исследовано 45 крыс в тесте "спрыгивание с платформы". Из них 13 было подвергнуто электрическому раздражению силой 0.25 мА, и 13 крыс - силой 2.5 мА. Еще 8 крыс было взято из группы контрольных животных, не получавших в тесте "спрыгивание с платформы" электрокожного раздражения. Дополнительную контрольную группу составили 10 крыс, которые вообще не подвергались тесту "спрыгивание с платформы". Их забивали для иммуногистохимических исследований в тот же день, что и крыс других групп, беря их непосредственно из домашней клетки.

Экспрессия транскрипционного фактора с-Роз у животных описанных групп была исследована в 84 различных структурах, расположенных на разных уровнях мозга. Результаты данной серии опытов суммированы на рисунках 3 -5.

В контрольных группах крыс экспрессия гена с-/05 была выражена крайне слабо. Клетки, имеющие с-Роэ иммунореакгивность, были обнаружены только в прелимбической и пириформной коре, эндопириформном ядре, обонятельных ядрах, гиппокампе и в области вентральной покрышки среднего мозга.

AoD- Anterior olfactory nucleus, dorsal part

AoL-Anterior olfactory nucleus, lateral part

AoM- Anterior olfactory nucleus,medial part

AoP- Anterior olfactory nucleus,posterior part

AoV- Anterior olfactory nucleus,ventral part

CL- daustrum; EN- Endopiriform nucleus

TU- Olfactory tubercle

LSV- Lateral septal nucleus, ventral part

VQB- Nucleus of the vertical Bmb of the diagonal band

Hipp- Hlppocamp

Ce- Central amygdaloid nucleus Me- Medial amygdaloid nucleus BL- Basolateral amygdaloid nucleus BM- Basomedial amygdaloid nucleus Ahi- Amygdalohippocampal area PLCO- Posterolateral cortical amygdaloid nucleus

Рис.3. Экспрессия гена c-fos в структурах мозга крыс при различной интенсивности электрокожного раздражения в тесте "спрыгивание с платформы". На абсциссе - структуры мозга. По оси ординат - количество c-Fos позитивных нейронов. * р < 0.05, ** р < 0.01, ***р < 0.001 по сравнению с группой, получавшей ток 0,25 мА На данном и последующих рисунках обозначения структур даны в соответствии со стереотаксическим атласом мозга крысы Paxinos & Watson (1982).

По сравнению с контрольными животными у крыс, подвернута элекгрокожному раздражению в тесте "спрыгивание с платформы практически во всех исследованных нами структурах мозга было выявли достоверное возрастание экспрессии гена с-/о5\

Как следует из данных, представленных на рис. 3-5, степень активащ экспрессии с-/о$ в разных структурах мозга была различной. Наибол интенсивная экспрессия гена с-^05 (свыше 40 с-Бов позитивных клето наблюдалась в поясе, поясной, ияфралимбической, фронтопариетально соматосенсорной, моторной и зрительной коре (поля 17 и 18а), обонятельном

120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

^ ^ s^ ¿*>

Acg-Anterior clngulate cortex Peg-Posterior clngulate cortex Po - Piriform cortex I LA- Infralimbic area eg- CIngulum

0.25 mA 2.5 MA

/ ^ ^ / f #

Frpass- Frontoparietal somatosensory cortex

Frpam- Frontoparietal motor area; Te- Temporal area

Mop- Primary motor area; Mos- Secondary motor area

Str17- Striate cortex, area 17

Strl 8-Striate cortex, area18

Strl 8a- Striate cortex, area 18a

Auv- Ventral auditory area

ORBM- Orbital auditor/ area

ORBV1- Orbital area lateral part

Рис.4. Экспрессия гена с-/о$ в структурах мозга крыс при различной интенсивности электрокожного раздражения в тесте "спрыгивание с платформы". На абсциссе - структуры мозга. По оси ординат - количество с-Роэ позитивных нейронов. * р < 0.05 по сравнению с группой, получавшей ток 0,25 мА_

бугорке, медиальном ядре миндалины, вентролатеральном, латеральном, паравентрикулярном и перимаммилярном ядрах гипоталамуса, в области вентральной покрышки среднего мозга и в верхних бугорках четверохолмия.

Наименее выраженная активация экспрессии с-/об наблюдалась в гиппокампе, ограде, центральном, базолатералыюм и вазомедиалшом ядрах миндалины, паравентрикулярном, дорзомедиальном и центральном ядрах галамуса, в медиальном коленчатом теле, заднем и дорзальном ядрах гипоталамуса и в латеральной гипоталамической области.

* р < 0.05

Sc- Superior coillculus PT- Pretectal area CQ- Central gray of the pons PAG- Periaqueductal gray VTA- Ventral tegmental area RLI- Rostral linear nucleus

of raphe VP- Ventropalidum

VMH- Ventromedial hypothalamic nucleus

VMHD- Ventromedial hypothalamic nucleus, dorsal part

Ahy- Anterior hypothalamic area

DA- Dorsal hypothalamic area; LH- Lateral hypothalamic area LHA- Lateral hypothalamic area, anterior part PA- Paraventricular hypothalamic nucleus

PAMC- Paraventricular hypothalamic nucleus, magnocellular part

TMC- Tuberal magnocellular hypothalamic nucleus

Papc- Paraventricular hypothalamic nucleus, parvocellular part

PH- Posterior hypothalamic area

PMV- Premammillary nucleus, ventral part

Arc- Arcuate hypothalamic nucleus

Рис.5. Экспрессия гена с-/ох в структурах мозга крыс при различной интенсивности электрокожного раздражения в тесте "спрыгивание с платформы". На абсциссе - структуры мозга. По оси ординат - количество с-Роэ позитивных нейронов. * р < 0.05 по сравнению с группой, получавшей ток 0.25 мА.

Сопоставление групп крыс, подвергнутых эмоциогенной стимуляции 0.2 мА и 2.5 мА показало, что величина экспрессии в мозге крыс зависела о интенсивности электрокожного раздражения. Группа животных, получавши раздражение током силой 2.5 мА, имела достоверно более высокое п сравнению с группой 0.25 мА число с-Роэ иммунореактивных клеток обонятельных ядрах, эндопириформном ядре, поясе, передней поясной кор< соматосенсорной и моторной коре, вентральной части бледного шар; центральном сером веществе моста, ростральном ядре шва и вентрально покрышке среднего мозга.

Таким образом, по сравнению с крысами контрольной группы у крыс, подвернутых электрокожному раздражению в тесте "спрыгивание с платформы", практически во всех исследованных нами структурах мозга выявлена заметная активация экспрессии гена с-/об. Наибольшее количество с-Боб позитивных клеток наблюдалось в соматосенсорной и моторной коре, поясе, верхних бугорках четверохолмия, гипоталамусе, центральном сером веществе и вентральной покрышке среднего мозга. Экспрессия гена с-/об зависела от интенсивности эмоциогенной стимуляции, будучи более выраженной при более сильном электрокожном раздражении.

3. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА С-ГОБ У КРЫС. С РАЗЛИЧНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ЭМОЦИОНАЛЬНОМУ

СТРЕССУ

Анализ зависимости экспрессии гена с-/ол от поведенческих особенностей крыс, характеризующих их устойчивость или предрасположенность к эмоциональному стрессу (см. раздел 1), показал следующее (рис. 6-8).

Во всех изученных отделах мозга у крыс, предрасположенных к эмоциональному стрессу, экспрессия гена с-./Ь8 была намного выше, чем у устойчивых к эмоциональному стрессу животных.

Экспрессия гена с-/ох у крыс, предрасположенных к эмоциональному стрессу, наблюдалась в 92 структурах мозга, в то время, как у крыс, устойчивых к эмоциональному стрессу, она детектировалась только в 43 структурах.

Структурами, в которых у крыс, предрасположенных к эмоциональному стрессу, экспрессия гена с-/об при силе тока 2.5 мА была наиболее выраженной (свыше 40 с-Боб позитивных нейронов), являлись передняя часть поясной коры, поясная извилина, пириформная, эндопириформная, инфралимбическая, соматосензорная, моторная и зрительная кора (поля 17 и 18а), обонятельный

2.5 мА Т

I I УСТОЙЧИВЫЕ

Acg- Anterior cingulate cortex eg- Cingulum P0- Piriform cortex I LA- infralimbic area

ПРЕДРАСПОЛОЖЕННЫЕ

# #

Frpass- Frontoparietal somatosensory cortex Frpam- Frontoparietal motor area Str17- Striate cortex, area17 Str18a- Striate cortex, area18a

Рис.6. Экспрессия гена сф$ в разных структурах мозга крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу при электрокожном раздражении в тесте "спрыгивание с платформы". На абсциссе структуры мозга. По оси ординат - количество с-Боя позитивных нейронов. *р< 0.05, **р< 0.01, *** р< 0.001 по сравнению с группой устойчивых крыс.

бугорок, заднелатеральное корковое ядро миндалины, медиальное коленчато( тело, вентролатеральное и паравентрикулярное ядра гипоталамуса, латеральна) гипоталамическая область, верхние бугорки четверохолмия и обдасп вентральной покрышки среднего мозга.

У крыс, устойчивых к эмоциональному стрессу, экспрессия гена с-/о. была выраженной в лишь структурах инфралимбической коры и задней част переднего обонятельного ядра. В ядрах миндалины, таламуса, гипоталамуса ) ствола мозга у этих животных выраженной (более 40 с-Роэ позитивных клеток экспрессии гена с-/оз не отмечено.

0.25 мА . 2.5 мА

р < 0.05 р < 0.01

^ ^

I I устойчивые

АОР - Anterior olfactory nucleus,

posterior part En - Endopirrform cortex TU - Olfactory tubercle

ESI ПРЕДРАСПОЛОЖЕННЫЕ

Me - Medial amigdaloid nucleus PLCO - Posterolateral cortical amigdaloid nucleus

Рис.7. Экспрессия гена с-/ох в разных структурах мозга крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу при электрокожном раздражении в тесте "спрыгивание с платформы". На абсциссе структуры мозга. По оси ординат - количество с-Боз позитивных нейронов. *р< 0.05, **р< 0.01 по сравнению с группой устойчивых крыс.

Сопоставление экспрессии гена о/оу в мозге крыс, устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу, показало, что после стимуляции током 2.5 мА у предрасположенных животных наблюдалось достоверно более высокое число с-Ров иммунопозитивных нейронов в обонятельных бугорках, поясе, поясной, эндопириформной, соматосензорной и моторной коре, заднелатеральном корковом ядре миндалины, вешромедиальном, паравентрикулярном и премаммилярном ядрах гипоталамуса, латеральной шпоталамической области, верхних бугорках четверохолмия и области вентральной покрышки среднего мозга.

! | УСТОЙЧИВЫЕ

VMH - Ventromedial hypothalamic nucleus LH - Lateral hypothalamic area Pa - Paraventricular hypothalamic nucleus PMV - Premammiilary nucleus

ПРЕДРАСПОЛОЖЕННЫЕ

Coll- Colliculus

VTA- Ventral tegmental area

Рис.8. Экспрессия гена с-/оз в разных структурах мозга крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу при электрокожном раздражении в тесте "спрыгивание с платформы". На абсциссе структуры мозга. По оси ординат - количество с-Роб позитивных нейронов. *р< 0.05, **р< 0.01, *** р< 0.001 по сравнению с группой устойчивых крыс.

Таким образом, животные, отнесенные по тестам "открытое поле" у "исследование нор" к группе прогностически предрасположенных I эмоциональному стрессу, при нанесении негативного эмоциогенноп воздействия продемонстрировали гораздо более выраженную активации экспрессии гена с-/оя в гораздо большем числе структур мозга, чем крысы прогностически устойчивые к эмоциональному стрессу.

IV. Обсуждение результатов

Проведенные нами опыты показали, что среди общей популяции крыс Зистар в тестах "открытое поле" и "исследование нор" выявляются две крайние руппы животных. Показатели поведения крыс первой группы, имевших «сраженную исследовательскую активность в тестах "открытое поле" и 'исследование нор", совпадали с характеристиками поведения крыс, имевших югласно данным Коплик с соавт (1995) высокую устойчивость к (моциональному стрессу. Поведение крыс второй группы, отличавшихся щительной латенцией начала исследовательского поведения, низкой юследовательской активностью и выраженными вегетативными реакциями, «ответствовало характеристикам поведения крыс, проявляющих, согласно 1анным Коплик с соавт (1995), предрасположенность к эмоциональному ¡трессу. В связи с этим крысы первой группы были отнесены нами к числу фогностически устойчивых к эмоциональному стрессу, а крысы второй группы к прогностически предрасположенным к эмоциональному стрессу животным.

Следует отметить, что сходное разделение крыс на две полярные апологические группы по показателям поведения в "открытом поле" габлюдалось и другими авторами (Вальдман и соавт., 1975, 1976; Забродин и :оавт 1989; Becker et al., 1989; Jones et al., 1993; Судаков и соавт., 1995). При itom было показано, что животные этих двух групп различаются реакцией на моциогенные воздействия (Стрекалова, 1995а), фармакологические препараты Вальдман и соавт, 1975, 1976) и пептидные вещества (Коплик и соавт., 1983; Рудаков и соавт., 1995; Стрекалова, 19956), что подтверждает существование лубоких нейрофизиологических и нейрохимических различий между швотпыми этих типов.

В наших экспериментах крысы первой и второй групп различались также го показателям выработки оборонительного навыка в тесте "спрыгивание с

платформы". Крыш из группы устойчивых к эмоциональному стрессу при тестировании навыка демонстрировали более длительные латентные периода спуска с платформы, чем предрасположенные к стрессу животные. Пр> нанесении ударов тока "устойчивые" животные быстрее, чек "предрасположенные", запрыгивали обратно на безопасную платформу получая, таким образом, меньше ударов током. Все это свидетельствует о том что в задаче "спрыгивание с платформы" крысы, устойчивые к эмоциональном] стрессу, демонстрировали более успешную выработку оборонительного навыка чем предрасположенные к стрессу животные.

Аналогичные данные о более высоких адаптивных способностях ; животных, имеющих выраженную исследовательскую активность в тест "открытое поле", были получены и другими авторами. Так, в работа Вальдмана с соавт., (1976) и Катковой с соавт., (1975) было обнаружено, что : тесте Скиннера животные, активные по поведению в "открытом поле", быстре 'Обучаются пищедобывательному оперантному навыку. Эксперименты Becker соавт., (1989) показали, что крысы с большей активностью в "открытом поле быстрее, чем крысы с меньшей активностью в "открытом поле", вырабатывал навыки условнорефлекгорного активного избегания. Согласно данным Pai (1994), длительность замирания крыс при обучении активному избеганию челночной камере обратно коррелировала с длительностью и исследовательского поведения в тесте "открытое поле".

Однако адаптация в моделях, использованных вышеприведенным авторами, непосредственно зависела от общей активности животных. Поэтом эти работы оставляют возможность того, что животные, более активные "открытом" поле, быстрее адаптируются в этих задачах за счет свое повышенной двигательной активности. Результаты наших эксперименте позволяют исключить такое объяснение, показывая, что животные из перво типологической группы (устойчивые к эмоциональному стрессу) лучп

¡ырабатывают адаптивные навыки независимо от их связи с уровнем мигательной активности. Эти крысы быстрее, чем предрасположенные к >моциональному стрессу животные, запрыгивали на безопасную платформу при ганесении элекгрокожного раздражения. Однако они же демонстрировали и эолее высокие латентные периоды спуска с платформы на пол камеры, где они гакануне получали удары током. Таким образом, наши данные демонстрируют, гго крысы из группы устойчивых к эмоциональному стрессу вырабатывают адаптивное поведение и предвидят повреждающие воздействия лучше, чем тредрасположенные к эмоциональному стрессу животные.

Следующей задачей нашей работы было исследовать экспрессию гранскрипционного фактора c-fos в различных структурах мозга у поведенчески гипизированных крыс в ответ на стрессогепное воздействие.

Прежде всего проведенные опыты показали, что после электрокожного раздражения в тесте "спрыгивание с платформы " в различных структурах мозга крыс резко повышалась экспрессия гена c-fos. Экспрессия c-fos при разнообразных стрессорных воздействиях была ранее выявлена и в работах других авторов. Повышение уровней мРНК и белка c-Fos в мозге крыс и мышей наблюдалась при электроболевой стимуляции (Малеева с соавт.,1989; Анохин с соавт., 1991; Campeau et al., 1991; Pezzone et al, 1992; Anokhin and Ryabinin, 1993; Beck and Fibiger., 1995), при иммобилизационном стрессе (Honkanemi et al., 1992; Konenji et al., 1992), при плавательном стрессе (Bonaz et al., 1992; Duncan et al., 1993; Melia et al., 1995), после введения формалина (Hut et al., 1994) и инъекции физраствора (Dragunow et al., 1989; Gubits et al., 1989).

Быстрая индукция c-fos в ответ на воздействие различных стрессорных стимулов в разных структурах мозга позволяет предположить, что он является универсальным регуляторным геном в нервной системе (Малеева с соавт., 1989; Kaczmarek, 1989). Известно, что ген c-fos кодирует ядерный белок и играет роль в регуляции экспрессии других генов (Morgan and Curran, 1991). Биологический

смысл экспрессии c-fos при стрессорных воздействиях находят в том, чт< стрессорные стимулы могут индуцировать экспрессию c-fos и другк транскрипционных факторов, которые потом изменяют экспрессию гено: синтеза нейромедиаторов, рецепторов и нейропешвдов, обеспечивая тем самки долговременные изменения физиологических и нервных функций (Curran an Cohen, 1988; Post, 1992; Анохин и Судаков, 1993; Sharp et al., 1994). В частносп было показано, что белок c-Fos может участвовать как генетический медиатор изменениях функций организма через активацию таких вторичных ("поздних' генов, как гены кортикотропин рияизинг-фактора, проопиомеланокоргинг проэнкефалина и тирозин-гидроксилазы (Giovanelli et al., 1990; Pesico et al 1993; De Boer et al., 1994; Borsook et al., 1994; Junhui and Yunsong, 1994; Bosco < al., 1996).

Учитывая подобные ключевые позиции гена c-fos в опосредовали долговременных реакций организма на стрессорные воздействие представлялось особенно важным более детально изучить взаимосвязь межд стрессом и индукцией экспрессии c-fos в клетках мозга. В нашей работе м; использовали два различных подхода к анализу этой взаимосвязи.

В первой части работы мы исследовали зависимость экспрессии c-fos с интенсивности внешних стрессорных воздействий. С этой целью мы сравнивал экспрессию c-fos в мозге крыс, получивших электрокожное раздражен* десятикратно различающейся силой тока (0.25 и 2.5 мА). При обрабоп результатов этой серии опытов мы пользовались традиционным методо усреднения данных от всех животных, вне зависимости от их индивидуальна типологических особенностей.

Второй подход был направлен на решение главной задачи настоял« работы - сравнить экспрессию гена c-fos у крыс с различной устойчивостью эмоциональному стрессу. Для этого мы сопоставляли экспрессию c-fos щ неизбегаемом электрокожном раздражении в мозге у крыс, предварителы

разделенных на группы устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу.

Эксперименты первой серии показали, что экспрессия гена c-fos в мозге крыс зависела от интенсивности эмоциогенной стимуляции, будучи более выраженной при более сильном электрокожном раздражении. К числу структур, где экспрессия c-fos при сильном электроболевом раздражении оказалась значительно более выраженной, принадлежали ряд областей коры головного мозга, а также центральное серое вещество моста, ядра шва и вентральная покрышка среднего мозга.

Активация c-fos в данных областях наблюдалась рядом авторов и при других видах острого стресса (Dragunow, et al., 1989; Smith, et al., 1992; Senba, et al., 1993; Yoshifumi, et al., 1994). То, что в наших экспериментах интенсивность экспрессии c-fos при более сильной болевой стимуляции была выше в области расположения тел катехоламинергических и серогонинергических нейронов, позволяет предсказать различные последствия стресса разной интенсивности для функций этих систем. Не исключено, что в катехоламинергических нейронах этот эффект может опосредоваться через увеличение транскрипции гена тирозингидроксилазы, который, как известно, регулируется посредством белка c-Fos (Bosco et al., 1996).

Различная степень активации монаминергических систем при разных интенсивностях раздражения может быть причиной наблюдавшихся нами различий экспрессии гена c-fos в коре головного мозга, куда проецируются аксональные терминали монаминергических клеток (Bloom, 1987). Подтверждением этому предположению служат эксперименты, показывающие, что увеличение концентрации норадреналина при стрессорной ситуации повышает активацию гена c-fos в мозге крыс (Guoying, 1991; Gubits, et al., 1989).

Более высокая активация транскрипционных факторов в корковые нейронах при более сильном токе может, в свою очередь, обусловливать боле« прочную выработку оборонительного навыка у группы с силой тока 2.5 мА пс сравнению с группой 0.25 мА (ср. Таблицы 1 и 2). Это заключение совпадает ( существующей гипотезой о роли гена с-/оз в инициации адаптивны: модификаций поведения и в механизмах консолидации долговременной намял (Оое1& е1 а1., 1986; Касгтагек, 1992; Анохин, 1988,1997).

Однако наибольший интерес, как нам кажется, представляют результат! второй части работы - сопоставления экспрессии с-/ол у животных с различно: прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу. Наш аналн показал, что при нанесении стрессогенного стимула с одинаковым физическими параметрами экспрессия гена с-/<м у таких животных чрезвычайн различается.

Прежде всего, удары тока одинаковой силы вызывали экспрессию с-Роэ гораздо большем числе структур мозга у предрасположенных, чем устойчивых животных (92 и 43 структуры соответственно). Например, при сю тока 0.25 мА число с-Роб позитивных нейронов в области вентральнс покрышки среднего мозга у предрасположенных к эмоциональному стрес< животных составило в среднем 66 клеток на срез, тогда как у устойчив! животных с-Ров экспрессирукяцие нейроны в этой структуре вообще ] обнаруживались. Сходная картина наблюдалась и для других структур мозга.

Кроме того, в ряде структур мозга, где увеличение экспрессии с-Рох ответ на стимуляцию наблюдалось у крыс обеих групп, степень активации бы значительно выше в группе предрасположенных к эмоциональному стрес животных (см. рис. 6-8). В частности, при силе тока 2.5 мА число с-Р позитивных нейронов в области вентральной покрышки среднего мо; составило в среднем 143 клетки на срез у предрасположенных

моциональному стрессу крыс и лишь 14 клеток на срез у устойчивых к стрессу сивотных.

Выше уже указывалось, что экспрессия гена, кодирующего фермент интеза катехоламинов тирозингидроксилазу, регулируется посредством с-Роэ. 1оэтому столь различная экспрессия с-Боз в областях расположения тел атехоламинергических нейронов у устойчивых и предрасположенных крыс южет непосредственно обусловливать и разницу в синтезе катехоламинов у сивотных этих групп. Действительно, у предрасположенных к «прессу крыс !ыло отмечено повышение уровня дофамина и снижение норадреналина в ипоталамусе и среднем мозге (Коплик и соавт., 1986). Более того, различие в одержании моноаминов в структурах мозга является одним из показателей стойчивости организма к эмоциональному стрессу (Белова, 1984; МсМас1юп, [уеШапску, 1992).

Особо следует отметить, что при раздельном анализе групп крыс, стойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу, карты аспределения экспрессии гена с-/оа в мозге существенно отличались от средненных данных. При усреднении экспериментальных данных экспрессия ена с-/е>5 наблюдалась в коре, миндалине, таламусе, гипоталамусе и стволе гозга. При индивидуальном анализе мы получили свертенно другие данные. У рыс, устойчивых к эмоциональному стрессу, выраженная экспрессия гена с-/о$ габлюдалась только в инфралимбической коре и обонятельных ядрах. В стволе юзга у этой группы экспрессии гена с-/оя не обнаружено. У (редрасположенных к эмоциональному стрессу крыс обнаружена выраженная кспрессия гена с-/оя во многих структурах коры головного мозга, миндалины, аламуса, гипоталамуса и ствола мозга. В ряде структур мозга различия между ктивацией гена с-/а? у устойчивых и предрасположенных к стрессу крыс были толь существенными, что значительно превышали различия в экспрессии

между усредненными группами крыс с десятикратно отличающейс стимуляцией электрическим током (ср. рис. 3-5 и 6-8).

Таким образом, наши результаты свидетельствуют о том, что усреднени экспериментальных данных не может быть использовано для выявлена истинной природы эмоционального стресса. Кроме этого они позволяют понят противоречие литературных данных, касающееся различий паттерне экспрессии гена c-fos при одних и тех же видах стресса (Boaaz and Tache, 199: Melia et al., 1994; Kanonen et al., 1992; Smith et al., 1992). Приведенные автор! как и большинство других исследователей, используют усреднении экспериментальные данные без учета индивидуально-типологичеекк особенностей животных. Однако полученные в настоящих эксперимента результаты свидетельствуют о том, что экспрессия гена c-fos существен* зависит от индивидуальной устойчивости крыс к эмоциональному стрессу и < ишологичесих особенностей их поведения в тестах "открытое поле" "исследование нор". Они также показывают, что индивидуальный анал! экспрессии гена c-fos у крыс с различной устойчивостью к эмоционально» стрессу, дает значительные преимущества для понимания нервных молекулярных механизмов стресса по сравнению с традиционнь среднестатистическим подходом, игнорирующим типологические особенное животных.

V. Выводы

1. В популяции крыс Вистар по тестам "открытое поле" и "исследование но выявляются две крайние группы животных. Крысы первой группы отличают более коротким латентным периодом первого движения и выхода в цент высокой активностью на периферии и особенно в центре, более корона латентным периодом первого заглядывания в нору и большей активност

исследования нор. Крысы второй группы характеризуется большим латентным периодом первого движения и выхода в центр, низкой активностью на периферии и особенно в центре, большим латентным периодом первого заглядывания в нору и меньшей активностью исследования нор.

Крысы первой группы по прогностическим показателям поведения в тесте "открытое поле" и "исследование нор" относятся к устойчивым, а крысы второй группы - к предрасположенным к эмоциональному стрессу животным.

2. Крысы с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу характеризуются различными показателями обучения в тесте "спрыгивание с платформы" .

Крысы, устойчивые к эмоциональному стрессу, характеризуются более длинным латентным периодом спуска с платформы, более длительным пребыванием на платформе и более коротким временем пребывания на электрифицированном полу по сравнению с крысами, предрасположенными к эмоциональному стрессу. Все это свидетельствует о том, что крысы, устойчивые к эмоциональному стрессу, обучаются и предвидят повреждающие воздействия лучше, чем предрасположенные к эмоциональному стрессу животные.

3. У крыс, предварительно подвергнутых стрессорному элекгрокожному воздействию в тесте "спрыгивание с платформы", в структурах изокортекса, штокортекса, теленцефалона, таламуса, амигдалы, и особенно в гипоталамусе и стволе мозга обнаружена выраженная экспрессия гена с-/оз. Интенсивность экспрессии гена с-/о£ зависит от силы электрического раздражения.

1. Выявлены различия в экспрессии гена с-^оэ в структурах мозга у крыс, устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу.

Наиболее выраженная и интенсивная экспрессия гена с-/о5 отмечена у срыс, предрасположенных к эмоциональному стрессу. После электрокожного

раздражения в тесте "Спрыгивание с платформы" у этих животаь максимальная экспрессия гена с-/оя проявляется в большинстве областей кор головного мозга, миндалине, структурах обонятельной системы, гипоталамусе в стволе мозга. У крыс, устойчивых к эмоциональному стрессу, в этих > условиях экспрессия гена с-/оу выявляется только в инфралимбической коре обонятельных ядрах.

5. Проведенные нами опыты показали, что усреднение эксперименталып данных не может быть использовано для выявления истинных молекулярш механизмов и физиологических проявлений эмоционального стрес< Индивидуальный анализ с учетом устойчивости животных к эмоционально! стрессу обнаруживает более специфическую картину экспрессии гена с-^оз мозге.

Публикации по теме диссертации:

1. P. Babaei, О. Dolgov, K.V. Anokhin, K.V. Patterns of immediate early ge expresssion in the rat brain after passive avoidance training. Abstracts of XXX International Congress of Physiological Sciences, St.- Petersburg, 1997, P092.13.

2. P. Babaei, K.V. Anokhin, K.V Sudakov, O.N. Dolgov. Stress-induced c-j expression in the rat brain is correlated with the individual typological characterist of animal behavior, NeuroReport (in press).