Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Некоторые патогенетические аспекты развития микроангиопатий при сахарном диабете I типа

'Ые-,'

На правах рукописи

Исакова Наталья Викторовна

НЕКОТОРЫЕ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЗВИТИЯ МИКРОАНГИОПАТИЙ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ 1 ТИПА

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чита-2007

003176506

Работа выполнена в ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава"

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Цыбиков Намжял Нашатович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Пархоменко Юрий Викторович

кандидаг медицинских наук Юпочерева Наталья Николаевна

Ведущая организация: ГУ НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (г Новосибирск)

ственная медицинская академия Росздрава" по адресу 672090, г Чита, ул Горького, 39а

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава" по адресу 672090, г Чита, ул Горького, 39а

Автореферат разослан

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208 118 01 кандидат медицинских наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сахарный диабет (СД) является одной из ведущих медико-социальных проблем здравоохранения Согласно данным ВОЗ, во всем мире с каждым годом возрасгает число страдающих СД (Зак К П и др, 2002, Р Ъ, 1999), и в настоящее время на земном шаре их насчитывается

около 180 млн Только за последние 15 лет общее количество больных СД в Российской Федерации увеличилось в 2 раза (Дедов И И, 2006)

Развитие СД осложняется поражением сосудов микроциркуляторного русла - диабетической микроангиопатией Именно она определяет в большинстве случаев течение и прогноз заболевания (Балаболкин М И , 2000, Дедов И И ,2001)

У больных СД-1 диабетические микроангиопатии встречаются в 50-70% случаев (Дедов И И, 2001, Шестакова М В и др , 2005, ЬиэсЬег Т Б н др, 2003, Реггош Р, 2004) Диабетическая ретинопатия - самая частая причина слепоты у взрослых, в среднем она диагностируется у 40% страдающих СД-1 (Миленькая Т М и др , 2005) Во всем мире диабетическая нефропатия, осложненная хронической почечной недостаточностью, является лидирующей причиной смертности таких пациентов (Шестакова М В идр,2005)

Механизм ангиопатий при сахарном диабете носит многофакторный характер Отсутствие четких представлений о их патогенезе породило множество теорий гормональных, метаболических, гемореологических, иммунологических, генетических (Дедов И. И, 2000, Салтыков Б Б, 2002, Миленькая Т М, 2005, Шестакова М В и др , 2005, Бондарь И А , 2007, Ме1апйои Е , 2003) Однако исчерпывающего ответа на вопросы о сущности диабетической микроангиопатии до сих пор нет

В основе возникновения сосудистых осложнений СД-1 ведущее значение придается гипергликемии, с которой связаны неферментативное гликозилиро-вание белков, полиоловый путь метаболизма глюкозы, прямая глюкозотоксич-ность (Бондарь И А и др ,2000, Александровский Я А, 2005, Ое Ьоа Яюз М в идр, 1999, Вго\ушееМ, 2001, ЬикэсИА, 2001) Кроме того, высокий уровень глюкозы запускает развитие окислительного стресса (Bayii.es I W, 2000, Мегсип Р, 2000) При этом остаются не до конца изученными свободнорадикальные процессы в таких клетках крови как тромбоциты и моноциты, и их вклад в патогенез диабетических осложнений Аутоокисление глюкозы, неферментативное гликозилирование и активация метаболизма сорбитолапри этом заболевании могут быть источниками образования свободных радикалов, способствующих нарушению эндотелиальной функции сосудов (Балаболкин М И и др., 2000) При этом снижается способность эндотелия к синтезу оксида азота (N0) - важнейшего вазодилататора (Ярек - Мартынова И Я, 2004) Не исключе-

но, что аналогичные реакции протекают в тромбоцитах и моноцитах, претендующих на лидерские позиции развития эндотелиальной дисфункции при мик-роангиопатиях Однако этот процесс практически не освещен в доступной нам литературе

Несмотря на то, что в настоящее время считается доказанной аутоиммунная природа СД-1, роль этого звена в генезе диабетических микроангиопатий и внепанкреатических изменений остается до сих пор мало изученной

Целью настоящего исследования явилось изучение некоторых звеньев патогенеза микроангиопатий у больных сахарным диабетом 1 типа, реализуемых тромбоцитами и моноцитами, а также аутоиммунными процессами В ходе работы нами решались следующие задачи

1 Исследовать состояние системы ПОЛ - антиоксиданты и уровень N0 в тромбоцитах и моноцитах, а также функциональную активность этих клеток у больных сахарным диабетом 1 типа с неосложненным и осложненным течением

2 Выявить динамику аутоантител к антигенам поджелудочной железы, печени и почек при сахарном диабете с микроангиопатиями и без

3 Оценить характер взаимосвязей функциональной активности тромбоцитов и моноцитов с величинами ТБК-активных продуктов и N0, а также с динамикой аутоантител различных классов

4 Определить уровень агрегабельности тромбоцитов у пациентов сахарным диабеюм 1 типа с различными вариантами течения

5 Изучить степень активации системы комплемента при сахарном диабете

Научная новизна. Впервые доказано, что функциональная активность тромбоцитов и моноцитов, определенная методом хемшпоминесценции, у больных СД-1 повышается и особенно значительно - при появлении сосудистых осложнений

Показано, что в генезе микроангиопатий участвуют аутоантитела классов % А, ^ М и О к антигенам поджелудочной железы, печени и почек Доказано, что максимальное количество иммуноглобулинов этих классов регистрируется к антигенам печени Установлено, что аутоантитела различных классов играют неодинаковую роль в развитии аутоиммунных реакций, при этом основное значение принадлежит иммуноглобулинам М и О

Обнаружено, что концентрации аутоантител тесно взаимосвязаны с функциональной активностью тромбоцитов и моноцитов, причем последние в большей степени влияют на развитие аутоиммунных изменений при сахарном диабете

Впервые изучена динамика генерации N0 тромбоцитами и моноцитами больных СД-1 с различными вариантами течения При неосложненном СД-1

уровень N0 в этих клетках снижен, а при наличии микроангиопатий он увеличивается

Зарегистрированы взаимосвязи между функциональной активностью клеток, с одной стороны, и величинами ТБК-активных продуктов и N0 - с другой при наличии сосудистых осложнений у больных СД-1

Теоретическая и практическая значимость. Проведенное исследование позволяет считать, что изменения функциональной активности тромбоцитов и моноцитов, а также интенсификация процессов липопероксидации, увеличение уровня N0 в них являются важными механизмами развития диабетических микроангиопатий Вклад в патогенез сосудистых осложнений вносят аутоиммунные нарушения, о чем свидетельствуют высокие концентрации аутоанти-тел к антигенам различных внутренних органов у больных СД-1

Полученные результаты позволят прогнозировать течение заболевания и оптимизировать патогенетическую терапию

Внедрение результатов исследования в практику. Основные положения, вытекающие из проведенных исследований, внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия"

Основные положения, выносимые на защиту:

1 В тромбоцитах и моноцитах больных СД-1 с неосложненным течением при повышении функциональной активности происходит активация процессов липопероксидации на фоне усиления антиоксидантной защиты, а также уменьшения генерации оксида азота

2 У пациентов с микроангиопатиями в сыворотке, тромбоцитах и моноцитах происходит накопление ТБК-активных продуктов и N0 при снижении антиоксидантной защиты Одновременно активируется спонтанная и ристоми-цин-индуцированная агрегация тромбоцитов

3 При СД-1 вне зависимости от наличия осложнений регистрируются избыточные величины аутоантител классов О и М к антигенам поджелудочной железы, печени и почек, а при микроангиопатиях -А к антигенам печени и почек у больных при усилении общей протеолитической активности системы комплемента

Апробация работы. Материалы исследований доложены на IV региональной межвузовской конференция "Медицина завтрашнего дня" (Чита, 2005), на II заочной межвузовской научной конференции "Вопросы иммунопатологии и иммунореабилитации" (Курск, 2005), на X международной молодежной научной конференции "Молодежь Забайкалья культура здоровья - здоровое общество" (Чита, 2006), на XI международной молодежной научно-практической конференции "Молодежь Забайкалья эффективная экономика - благополучие

развш ия края" (Чита, 2007), на 72-й научной конференции КГМУ (Курск, 2007), на 41-й Всероссийской научной конференции сгудентов и молодых ученых "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины" (Тюмень, 2007), на совместном заседании кафедр патологической физиологии, нормальной физиологии, биохимии, фармакологии, педиатрии ФПК и ППС, интенсивной терапии, анестезиологии и реанимации и сотрудников НИИ Медицинской экологии ЧГМА (2007)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 2 -в изданиях, рекомендованных ВАК для освещения результатов диссертационных исследований

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 116 страницах, иллюстрирована 6 рисунками и 21 таблицей и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций Библиографический указатель включает 149 отечественных и 96 зарубежных источников

МАТЕРИАЛЫ И М ЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Клиническая характеристика обследованных лиц

В работе с обследуемыми соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской ассоциации (1964, 2000)

Контрольную группу составили 29 здоровых человек (средний возраст 29,1±0,6 года) без отягощенного семейного анамнеза по СД Из исследования исключались лица, получавшие препараты-донаторы N0 (нитраты, нитропрус-сид натрия и др )

Группа больных СД-1 состояла из 84 человек, находившихся на лечении в областном диабетологическом центре на базе эндокринологического отделения ГУЗ "Областная клиническая больница" г Читы в период с 2004 по 2007 годы Их средний возраст составил 31,8± 1,7 года

Диагноз СД-1 выставлялся в соответствии с критериями ВОЗ, принятыми в 2003 году Федеральной целевой программой "Сахарный диабет" (методические рекомендации) на основании совокупности анамнезов заболевания и жизни, наследственности, клинических проявлений

В зависимости от наличия осложнений пациенты были разделены на две подгруппы

- первая - 30 больных СД-1 без сосудистых осложнений, средний возраст - 29± 1,8 года,

- вторая - 54 больных СД-1, осложненным диабетическими микроангиопатия-ми, средний возраст - 35± 1,7 лет

Таблица 1

Характеристика исследуемых групп больных СД-1 (М±т)

Группы больных СД-1 Количество больных абс/% Средняя длит заботевания (лет) Уровень НЬАе1 >7,6% (декомпенсация) абс /% Степень тяжести

Средняя абс /% Тяжелая абс /%

1 группа 30 /35.8 3,0±0,4 26/86,7 25/43,85 5/18,50

2 группа 54 /64,2 9,5±0,4 47/87,0 32/56,15 22/81,50

Во второй подгруппе ретинопатия встречалась у 21 (40%) пациента, не-фропатия - у 17 (31 %), что отражает общую 1 енденцию их развития при СД-1 (ДедовИ И,2001)

Характеристика исследуемых групп представлена в таблице 1 Частота развития диабетических микроангиопатий находилась в прямой зависимости от длительности течения сахарного диабета, а также от уровня компенсации и степени тяжести

Сосудистые осложнения верифицировались на основании следующих признаков Диабетическая ретинопатия наружного осмотра глазного яблока, определения остроты зрения, офтальмоскопии с широким зрачком Диабетическая нефропатия подтверждалась исследованием мочи на микроальбуминурию (МАУ), протеинурию (свыше 300 мг/сутки белка), снижением скорости клубочковой фильтрации и азотовыделительной функции почек (подъем уровней мочевины и креатинина в сыворотке крови)

Методы исследования

Лабораторные исследования выполнялись в НИИ Медицинской экологии ЧГМА После клинического, инструментального обследования у пациентов производили забор крови У всех лиц (здоровых и больных СД-1) изучали биологические объекты сыворотку, тромбоциты и моноцигы

Пробы крови забирали из вены натощак, в положении сидя, в одно и то же время (8 часов утра) в 2 пробирки одна предназначалась для получения сыворотки, другая (с ЭДТА в конечной концентрации 1 мг/мл) - тромбоцитов и моноцитов

Клетки крови выделяли на градиенте плотности фиколл-верографина 1,055 г/см3 для выделения тромбоцитов, 1,086 г/см3 - для выделения моноцитов Их подсчет проводили в камере Горяева общепринятым методом

В сыворотке, тромбоцитах и моноцитах определяли величины ТБК-пози-тивного материала (Андреева Л И и соавт, 1988), активность каталазы (Коро-люкМ А и соавт, 1988)

Содержание нитрита в сыворотке крови изучали по методике П П Голикова и соавт (2004) Выделенные тромбоциты и моноциты разводили средой, состоящей из RPMI1640 (без фенолового красного), эмбриональной телячьей сыворотки (5%), гентамицина (80мкг/мл) Оптическую плогаость хромогенов проб измеряли при длине волны 546 нм (Голиков ПII, 2004, Cooke J Р и соавт, 1997)

Функциональную активность клеток крови оценивали по интенсивности их хемилюминисцентного свечения в ответ на стимул -10 мкл люминола (Ми-терева Д Е, Агафонов В Е, 2004) При этом регистрировались значение максимальной интенсивности сигнала (I max), выраженное в условных единицах (у е) и светосумма (S) - значение световой суммы за время проведения анализа

Исследование агрегации тромбоцитов производили на модели отечественного агрегометра марки "Биола" с использованием ристомицина При анализе arpera юграмм учитывались следующие параметры

1 По кривой среднего размера агрегатов (CPA) степень агрегации - максимальное значение среднего размера агрегатов после добавления индуктора (ЕД), скорость агрегации - максимальный наклон кривой среднего размера (ЕД/мин)

2 По кривой светопропускания (СП) степень агрегации - максимальное приращение светопропускания после добавления индуктора (%), скорость агрегации - максимальный наклон кривой светопропускания (%/мин)

Определение концентрации аутоантител классов IgA, IgM, IgG проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа набором реактивов ЗАО "Вектор-Бест" (г Новосибирск) В качестве антигенов использовали тканевой водно-солевой экстракт (Чернушенко Е Ф, 1981) различных органов поджелудочной железы, печени и почек Антиген готовили из соответствующей ткани, полученной от трупов молодых здоровых людей I (0) группы крови, погибших от случайной травмы

Общую гемолитическую активность классического (КПК) и альтернативного (АПК) путей активации системы комплемента определяли по методу JI В Козлова и соавт (1982)

Статистическая обработка материала проведена при помощи пакета программ "Biostat", версия 3 03 Учитывая нормальное распределение данных, при сравнении групп использовался t - критерий Стыодента для независимых выборок, различия считали значимыми при р<0,05 Результаты исследования представлены как М±т, где М - среднее значение, т - ошибка средней

При анализе взаимосвязей параметров применялся параметрический корреляционный метод Пирсона (Реброва О Ю , 2006)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Состояние процессов липопероксидации и антиокислительной защиты у больных сахарным диабетом 1 типа при наличии или отсутствии осложнений В связи с тем, что центральную роль в развитии диабетических микро-ангиопатий занимает окислительный стресс, нами было изучено состояние процессов липопероксидации и антирадикальной защиты в тромбоцитах и мо-ноци гах при СД-1

Как показали проведенные исследования, существенных отклонений от референтных значений ПОЛ в сыворотке крови у пациентов СД-1 без микроан-гиопатий не наблюдалось уровень ТБК-активных продуктов у здоровых -1,75±0,27 мкмоль/мг лигшдов, у больных -1,78±0,01 мкмоль/мг липидов (р>0,05), каталазная активность -1,82±0,14 и 1,69±0,11 нмоль/мг белка (р>0,05) соответ-ствешю При появлении сосудистых осложнений в сравнении со здоровыми отмечался дисбаланс в системе "ПОЛ - антиоксиданты" с увеличением содержания продуктов ПОЛ (2,36±0,06 мкмоль/мг липидов) и снижением активности каталазы (1,42±0,12 нмоль/мг белка) в сыворотке (р=0,03)

В тромбоцитах пациентов 1 группы (табл 2) происходило накопление ТБК - активных продуктов по сравнению с кровяными пластинками здоровых (р<0,05) на фоне повышенной активности каталазы (р<0,001) Развитие микроангиопа-тий провоцировало значительное увеличение конечных продуктов ПОЛ при этом уменьшалась каталазная активность

По нашим данным (табл 3) уровень ТБК-акгивных продуктов в моноцитах у больных СД-1 без микроангиопатий снижался (р<0,001), что связано, вероят-

Таблица 2

Состояние процессов липопероксидации и антиокислительной защиты фомбоцитов у больных СД-1 (М±т)

Изучаемые показатели Здоровые п-20 Больные СД-1

1 группа п=18 2 группа п=20

ТБК-акгивные продукты (мкмоль/м1 липидов) 4,20+0,06 4,62±0,05 р<0,001* 4,81X0,10 р,<0,001* р,>0,05

Катал аза (нмоль/мг белка) 1 53±0,03 4,54±0,09 р <0,001* 1,57±0,07 р > 0,05 р,<0,001*

Примечание * - достоверность различий при сравнении показателей р, - значение различий по отношению к здоровым,

р, - значение различий по отношению к больным СД-1 без сосудистых осложнений

Таблица 3

Состояние процессов липопероксидации и антиокислительной защиты моноцитов у больных СД-1 (М±ш)

Изучаемые показатели Здоровые п=20 Больные СД-1

1 группа п=18 2 группа п-20

ТБК-активные продукты (мкмоль/мг липидов) 4,27+0,42 2,56+0,16 р <0,001* 4,45+0,5 р>0,05 р <0,001*

Катал аза (нмочь/мг белка) 2,79±0,49 6,21+0,74 р<0,001* 2,05±0,01 р>0,05 р <0,001*

Примечание то же, что к таблице 2

но, с высокой степенью антирадикальной защиты

При появлении диабетических микроангиопатий в тромбоцитах и моноцитах каталазная активность значительно истощалась, поэтому отмечался рост метаболитов ПОЛ Низкий уровень антиоксидантов, возможно, отражает срыв адаптивных реакций организма, находящегося в условиях длительного метаболического стресса

Динамика генерации оксида азота при сахарном диабете

В сыворотке крови больных СД-1 вне зависимости от наличия или отсутствия осложнений наблюдалось высокое содержание N0 по сравнению со здоровыми людьми (р<0,05) (табл 4)

Таблица4

Содержание нитритов (мкмоль/л) в сыворотке и клетках крови у больных

СД-1 (М±ш)

Материалы изучения Здоровые п=20 Больные СД-1

1 группа п=20 2 группа п=24

Сыворотка 29,81±0,80 32,92±1,20 р=0,03* 32,57±0 50 р,=0,006* р>0,05

Тромбоциты 13,46±0 40 11,72±0,60 р=0,02* 15,13+0,60 р,= 0,02* р2<0,001*

Моноциты 13,23±0 50 10,92+0 40 р <0,001* 14,86+0,50 р,=- 0,02* р <0,001*

Примечание i о же, что и к таблице 2 10

В то же время, концентрация нитритов в супернатанте культуры тромбоцитов больных без осложнений уменьшалась в отличие от ее уровней в кровяных пластинках контрольной группы (р<0,05), а при микроангиопатиях отмечалось увеличение генерации N0 этими клетками при сопоставлении как с донорами, так и пациентами 1 группы (р<0,001)

Продукция N0 моноцитами у больных 1 группы снижалась по сравнению со здоровыми (р<0,001) А при осложненном течении СД-1 наблюдалось ее увеличение как относительно показателей контроля (р<0,001), так и пациентов без микроангиопатий (р=0,02)

Функциональная активность клеток крови при сахарном диабете 1 типа

При исследовании функциональной активности тромбоцитов и моноцитов методом кемшпоминесценции обнаружено ее увеличение уже при СД-1 с неосложненным течением заболевания, достигая наибольшей выраженности при развитии диабетических микроангиопатий (табл 5,6)

Таблица 5

Функциональная активность громбоцитов у больных СД-1 (М±ш)

Изучаемые показатели Здоровые л—16 Больные СД-1

1 группа п=16 2 группа №=16

I шах, уе 0,19±0 08 1,19±0,01 р <0,001* 1,71±0,06 р<0,001* р2<0,001*

S уе 51,0±3,10 61,69±2,11 р,=0,008* 64,81*5,12 р=0,02* р>0,05

Примечание i о же, что и к таблице 2

Таблица б

Функциональная акт ивность моноцитов у больных СД-1 (М±т)

Изучаемые показатети Здоровые п=16 Больные СД-1

1 группа п=16 2 группа п=16

I шах, уе 1,071±0,10 2 78±0,10 р<0,001* 3,39±0,30 р,<0,001* р2>0,05

S, уе 51,0±4,10 60,29±2,11 р=0,05* 64 81±5,12 р=0,04* р,>0,05

Примечание то же, что и к таблице 2

Данное явление, на наш взгляд, может быть обусловлено высокой интенсивностью липопероксидании и генерации N0 у больных СД-1 В связи с этим мы провели корреляционный анализ между показателями ТБК-активных продуктов, N0 и интенсивностью хемилюминесценции при различных вариантах течения заболевания (табл 7)

Таблица 7

Корреляционные взаимоотношения функциональной активности моноцитов

и уровнем ТБК-активных продуктов и N0 у больных СД-1

Изучаемые показатели 1 группа 2 группа

ТБ N0 ТБ N0

Функциональная активность тромбоцитов +0,59 -0,34 +0,90 +0,80

Функциональная активность моноцитов -0,60 +0,51 +0,85 +0,6

Примечание в таблице приведены только достоверные коэффициенты корреляции Пирсона (р<0,05)

В группе больных без сосудистых осложнений отмечались положительные корреляционные связи умеренной силы между функциональной активностью тромбоцитов и уровнем ТБК-активных продуктов, а также хемшпоминес-центным свечением моноцитов и генерацией N0 В то же время, между функциональной активностью кровяных пластинок и продукцией N0 обнаружена о грицательная умеренной силы связь, также подобные взаимосвязи наблюдались между интенсивностью хемилюминесценции моноцитов и величинами ТБК-активных продуктов

При развитии микроангиопатий отмечался иной характер взаимоотношений показателей Между функциональной активностью тромбоцитов и уровнями ТБК-активных продуктов положительная корреляция усиливалась, а между хемилюминесцентным свечением моноцитов и продукцией N0 - оставалась прежней Направление корреляционных взаимосвязей между активностью тромбоцитов и генерацией N0 стало положительным и сильным, так же как между хемилюминесцентным свечением моноцитов и уровнем процессов липопероксидации

Особенности сосуцисто-тромбоцитарного гемостаза у больных сахарным диабетом 1 типа

Наши исследования показали, что у больных СД-1 значительно повышена спонтанная агрегация тромбоцитов, особенно при развитии сосудистых осложнений (табл 8)

Ристомицин-индуцированная агрегация тромбоцитов была также усиленной у пациентов с диабетическими микроангиопатиями (табл 9), что указывает на высокое содержание фактора фон Виллебранда (ФВ) Принимая во внимание, что ФВ является одним из надежных маркеров повреждения сосудис-

Таблица 8

Спош а иная агрегация тромбоцитов у больных СД-1 (М±ш)

Изучаемые показатели Здоровые Больные СД-1

п-20 1 группа п =20 2 группа п=30

CPA Степень агрегации, ед 1,23x0,24 l,26-t0,23 р >0,05 2,30±0,51 р=0.002* р,=0,002*

CPA Скорость агрегации, ед/мин 0,42±0,01 0,25±0,01 р <0 001* 0,61±0,15 р>0,05 р=0,05*

СП Степень агре1ации, % 1 19x0,05 4,70±0,80 р <0,001* 3,38X0,30 р,<0,001* р-0,08

СП Сюрость агрегации %/мин 2,43x0,60 2,35±0 60 р>0,05 3,94X0,52 р-0,06 р=0,05*

Примечание т о же, что и к таблице 2

Таблица 9

Ристомицин-индуцированная агрегация тромбоцитов у больных СД-1 (М±т)

Изучаемые иоказатети Здоровые Больные СД-1

п =20 1 группа п =20 2 группа п=30

CPA Степень агрегации, ед 6 84X0,79 4,96x0,56 р=0,04* 5 88+0,44 р>0,05 р>0,05

CPA Скорость агрегации, ед/мин 8,53X0,55 7,05x0,51 Р,=0,05* 6,62X0,55 р =0,02* р>0,05

СП Степень агрегации, % 67,68X1,36 78,58x1 20 р <0,001* 70 51±0,63 р=0,04* р2<0,001*

СП Скорость агрегации, %/мнн 40,88+1,65 65 17X1,08 р,<0,001* 55,73X0,53 р,<0 001* р2<0,001 *

Примечание ю же, что и к таблице 2

той стенки, можно предположить, что повышение его уровня в плазме больных СД-1 с сосудистыми осложнениями свидетельствует о нарушении функции ондотелиальных клеток у данных пациентов

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что при данной патологии наблюдается изменение агрегационной активности кровяных пластинок

Содержание аутоантител к антигенам внутренних органов у больных сахарным диабетом 1 типа

Известно, что в основе патогенеза СД-1 лежит аутоиммунная деструкция ß-клеток поджелудочной железы (Кураева Т JI, 2003, Borg Н, 2001) Было решено исследовать уровень аутоантител к антигенам внутренних органов у лиц СД-1 с различным течением заболевания

При анализе динамики величин IgM отмечен их рост к антигенам поджелудочной железы уже при неосложненном течении заболевания (табл 10) Развитие микроангиопатий сопровождалось дальнейшим подъемом их количества Синхронно повышалось содержание подобных антител к антшенам печени и почек у пациентов 2 группы (р < 0,05)

Таблица 10

Содержание аутоантител класса Ig М (ед оп пл ) в сыворотке крови к антигенам внутренних органов у больных СД-1 (М±т)

Органы Здоровые п ~16 Больные СД-1

1 группа п=16 2 группа п=16

Поджелудочная железа 0,210±0,070 0,379+0,040 р =0,04* 0,405+0,040 р=0,02* р2>0,05

Печень 0,385+0,014 0,486+0,070 р >0,05 0,758+0,090 р <0,001* р = 0,02*

Почки 0,210+0,012 0,213+0 050 р>0,05 0,339+0,020 р <0,001* р2= 0 02*

Примечание то же, что и к таблице 2

Подобная же динамика наблюдалась и в содержании аутоантител класса в к антигенам внутренних органов - наибольшие концентрации регистрировались у пациентов с микроангиопатиями (табл 11) При неосложненном течении заболевания повышены уровни ^ С лишь к антигенам поджелудочной

железы

Колебания значений аутоантител класса ^ А в сыворотке крови больных СД-1 к антигенам поджелудочной железы имели свои особенности уровни этого иммуноглобулина снижались у пациентов обеих групп При развитии микроангиопатий концентрации ^ А повышались к антигенам печени и почек (табл 12)

Таблица 11

Содержание аутоантител класса Ig G (ед оп пл) в сыворотке крови к антигенам внутренних органов у больных СД-1 (М±т)

Органы Здоровые п=16 Ботьные СД-1

1 группа п=16 2 группа п=16

Поджелуд железа 0,224±0,060 0,626±0,080 р <0,001* 0,643±0,040 р,<0,001* р2>0,05

Печень 0,405±0,012 0,645±0,070 р=0,02* 0,734±0,090 р=0,001* р,>0,05

Почки 0,250±0,020 0,231±0,010 р>0 05 0,356±0,020 р,<0,001* р2<0 001*

Примечание то же, что и к таблице 2

Таблица 12

Содержание аутоантител класса Ig А (ед оп пл ) в сыворотке крови к антигенам внутренних органов у больных СД-1 (М±т)

Органы Здоровые п —16 Больные СД-1

1 группа п=16 2 группа п-16

Поджелудочная железа 0,286+0,018 0,226+0,020 р,=0,03* 0,243+0,050 Р,,>0'05

Печень 0,422±0,010 0,399±0,040 р >0,05 0,671 ±0,050 р <0,001* р <0,001*

Почки 0,220+0,020 0,284±0,030 р>0,05 0,294±0,040 р,-0,03* р>0,05

Примечание то же, что и к таблице 2

Обращает на себя внимание тот факт, что максимальный уровень аутоан-тител всех классов регистрировался к антигенам печени, свидетельствующий о высокой степени заинтересованности этого органа в патогенезе аутоиммунных реакций при развитии сахарного диабета 1 типа Кроме того, у больных СД-1 с микроангиопатиями отмечались повышенные концентрации аутоанти-тел к антигенам почек, что указывает на текущий аутоиммунный процесс в тканях этого органа у таких пациентов

Появление многочисленных аутоантител к непанкреатическим антигенам можно объяснить поликлональной активацией иммунной системы, на которую ранее указывали L D Petersen (1999), N Somoza(2001) Не исключен и другой механизм При длительной гипергликемии при СД-1 происходит неферментативное тикозилирование белков базального слоя сосудов и мембран клеток различных органов, подобная модификация структурных компонентов провоцирует приобретение ими аутоантигенных свойств и образование низкоспецифичных аутоантител

Учитывая отличия в показателях функциональной активности тромбоцитов и моноцитов у пациентов СД-1 от референтных значений, атакже наличие высоких уровней аутоантител к антигенам внутренних органов, мы изучили корреляционные взаимоотношения между этими показателями (табл 13)

Установлено, что содержание Ig А к антигенам поджелудочной железы находилось в отрицательной умеренной силы корреляционной взаимосвязи с выраженностью функциональной активности тромбоцитов и моноцитов у больных СД-1 без сосудистых осложнений При наличии же микроангиопатий данная зависимость носила обратную направленность и сильную силу связи

При сопос гавлении величин Ig М, Ig G и функциональной активности клеток крови выявлены положительные однотипные корреляционные связи независимо от наличия или отсутствия диабетических сосудистых изменений

Содержание аутоантител Ig А к антигенам печени зависело только от функциональной активности моноцитов при СД-1 с микроангиопатиями Уровни Ig М положительно коррелировали с хемилюминесцентным свечением как тромбоцитов, так и моноцитов у пациентов обеих групп При этом сила связи была выше с активностью моноцитов Сильная зависимость активности этих клеток выявлена от концентрации Ig G, реагирующего с антигенами печени Похожие взаимоотношения, только умеренно выраженные, обнаружены между Ig G и активностью тромбоцитов при различных вариантах течения СД-1

Аутоантт ела класса Ig А к антигенам почек слабоотрицательно коррелировали с интенсивностью хемилюминесцентного свечения тромбоцитов и моноцитов при неосложненном течении сахарного диабета и положительно -только с моноцитами у больных с микроангиопатиями В то же время, выявле-

Таблица 13

Корреляционные взаимоотношения функциональной активности моноцитов и тромбоцитов и уровней аутоантигел различных классов к антигенам внутренних органов у больных СД-1

Изучаемые показатели 1 группа больных 2 группа больных

Функциональная активность Функциональная активность

тромбоцитов моноцитов тромбоцитов моноцигов

Поджелудочная железа

1ёА -0,42 -0,34 +0,68 +0,88

+0,74 +0,64 +0,65 +0,52

1йО +0,69 +0,61 +0,38 +0,63

Печень

Ы А - - - +0,58

+0,36 +0,52 +0,43 +0,68

+0,42 +0,78 +0,37 +0,79

Почки

1§А -0,24 -0,25 - 4 0,47

- +0,77 +0,64 +0,82

- +0,79 +0,58 +0,76

Примечание то же, что и к таблице 7

ны сильные положительные связи уровней М и ^ О с функциональной активностью моноцитов у пациентов СД-1 обеих групп и умеренной силы с активностью тромбоцитов при наличии сосудистых осложнений

Суммируя вышеизложенное, можно сделать вывод, что повышение функциональной активности тромбоцитов и моноцитов находится в патогенетических взаимоотношениях с содержанием аутоантигел классов 1« А, М и С к антигенам различных органов При этом моноциты, исходя из наших данных, играют доминирующую роль в патогенезе аутоиммунных нарушений при

СД-1

Активность системы комплемента при сахарном диабете 1 типа

У больных СД-1 наблюдалась активация системы комплемента по обоим путям по сравнению со здоровыми (табл 14)

Из приведенных данных видно, чго степень активации комплемента при СД-1 с диабетическими микроангиопатиями по классическом)' пути ниже, чем у пациентов СД-1 без осложнений (р<-0,001) Вероятно, снижение активности

Таблица 14

Активность системы комплемента по классическому и альтернативному

пути (у с)

Изучаемые показатели Здоровые П--20 Больные СД-1

1 группа п=16 2 группа 11=20

КПК 23,23+2,70 120,80+4,10 р,<0,001* 85,80+2,01 р,<0,001* р2<0,001*

АПК 59,51+1,80 73,30+0,10 р,<0,001* 159,90+1,40 р <0,001* р<0001*

Примечание то же, что и к таблице 2

системы комплемента при сосудистых осложнениях можег быть связано с истощением ее компонентов В то же время у больных 2 группы активность системы комплемента по альтернативному пути оказалась выше, чем при неосложненном течении (р<0,001)

ВЫВОДЫ

1 В тромбоцитах и моноцитах больных СД-1 с неосложненным течением повышается антиоксидантная защита, а при наличии микроангиопатий ее уровень снижается, в кровяных пластинках усиливаю гея процессы липоперок-сидации При этом в сыворотке крови увеличивается содержание ТБК-ак-тивных продуктов и уменьшается каталазная активность

2 В сыворотке крови больных СД-1 без микроангиопатий увеличивается содержание оксида азота, а в тромбоцитах и моноцитах снижается При наличии осложнений в клетках крови отмечается гиперпродукция этого радикала

3 Функциональная активность тромбоцитов и моноцитов повышается при неосложненном течении заболевания и усиливается более значительно при наличии микроангиопатий из-за активации процессов липопероксидации и генерацииТЧО

4 В сыворотке крови пациентов СД-1 регистрируются аутоантитела 1§ (5 и ^ М к антигенам поджелудочной железы, печени и почек При развитии сосудистых осложнений концентрация исследуемых классов аутоантител возрастает, кроме ^ А, уровень которого снижается к антигенам поджелудочной железы

5 Колебания концентрации иммуноглобулинов классов в, М, А находятся в

тесных взаимоотношениях с функциональной активностью тромбоцитов и моноцитов, что свидстельс! вует о их совместном участии в механизме возникновения диабетических микроангиопатий

6 У пациентов СД-1 с сосудис шми о сложнениями усиливается спонтанная и ристомицин-индуцированная агрегация тромбоцитов

7 При СД-1 вне зависимости от наличия осложнений повышается общая про-теолитическая активность комплемента по обоим путям При разви ши микроангиопатий альтернативный путь системы комплемента активируется в большей степени

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

С целью прогнозирования развития диабетических микроангиопатий необходимо проведение комплексного лабораторного обследования, включающего, кроме общепринятых методов исследования, определение функциональной активности тромбоцитов и моноцитов методом хемилюминесценции, а также изучение уровня 1 БК-активных продуктов в клетках крови у больных СД-1

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Исакова Н В Активность системы комплемента в сыворотке больных сахарным диабетом / Н В Исакова, 3 Ц Ринчинов// Материалы IV региональной -межвузовской конференции ''Медицина завтрашнего дня" - Чита, 2005 - С 147-148

2 Исакова Н В Аутоантитела к непанкреатическим тканям у больных сахарным диабетом типа 1 / Н В Исакова, Е В Фефелова//Материалы II заочной межвузовской научной конференции "Вопросы иммунопатологии и имму-нореабилитации" -Курск,2005 -С 17

3 Исакова Н В Динамика аутоантител к непанкреатическим тканям у больных сахарным диабетом типа 1 / И В Исакова, Е В Фефелова // Материалы X международной молодежной научно-практической конференции "Молодежь Забайкалья культура здоровья - здоровое общество" - Чита, 2006 - С 40-42

4 Исакова Н В Участие системы комплемента в патогенезе сахарного диабета / Н В Исакова, 3 Ц Ринчинов // Сборник научных статей, посвященный конференции им академика Б С Гракова - Красноярск, 2006 - С 104-107

5 Исакова Н В К патогенезу сахарного диабета 1 типа / Н В Исакова, Е В Фефелова// Сборник научно-практических работ, посвященный 15-летию Читинского Областного Диагностического Центра - Чита, 2006 - С 109 -111

6 Аутоантитела к различным антш енам у больных сахарным диабетом / Т М Вишнякова, Н В Исакова, Е В Фефелова, Н Н Цыбиков//Аллергология и

иммунология - 2006 -Т 6, № 3 - С 408 - 409

7 Оценка функциональной активности мононуклеарных клеток методом хеми-люминесценции/С И Михайличенко, Н В Исакова, П Б Цыдендамбаев, Е В Фефелова // Материалы X международной молодежной научно-практической конференции "Молодежь Забайкалья эффективная экономика - благополучное развитие края" - Чита, 2007 - С 93-96

8 Исакова Н В Состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза при диабетических микроангиопатиях/Н В Исакова, Е В Фефелова//Сборник трудов 72-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН - Курск, 2007 - С 115 -117

9 Исакова Н В Роль оксида азота в патогенезе сахарного диабета/Н В Исакова, Е В Фефелова//Материалы 41-й всероссийской научной копференции студентов и молодых ученых "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины" -Тюмень,2007 -С 195-196

10 Влияние вилона на состояние иммунитета и коагуляционного гемостаза у больных сахарным диабетом разного возраста/Б И Кузник, И В Исакова, Н Н Ключерева, Н В Малеева, И С Пинелис // Успехи геронтологии -2007 -Т 20,№2 -С 106-115

11 Исакова Н В Функциональная активность тромбоцитов и моноцитов у боль-

ных сахарным диабетом 1 типа с неосложненным и осложненным течением/Н В Исакова, Н Н Цыбиков, Е В Фефелова//Забайкальский медицинский вестник -2007 -№3 -С 16-19

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

Аг - антиген

Ат - антитело

АДФ - аденозидифосфат

АПК - альтернативный путь активации комплемента

ИЛ - интерлейкин

КПК - классический путь активации комплемента

МАУ - микроальбуминурия

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СД - сахарный диабет

СД-1 - сахарный диабет 1 типа

СОД - супероксиддисмутаза

СП -светопропускание

CPA - средний радиус агрегатов

ТБК - тиобарбитуровая кислота

ФВ - фактор Виллебранда

ЭДТА -этилендиаминтетраацетат

Ig - иммуноглобулин

NO - оксид азота

Лицензия ИД №03077 от 23 10 00 Подписано в печать 11 10 07 Бумага офсетная Формат60х847]6 Уелпеч л-1,0Тираж 100 Заказ№ 1442007

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул Горького, 39а

Сахарный диабет (СД) является одной из ведущих медико-социальных проблем медицины. Согласно данным ВОЗ, во всём мире с каждым годом возрастает число страдающих СД [62, 245], и сегодня на земном шаре их насчитывается около 180 млн. Экспертная оценка заболеваемости диабетом позволяет считать, что к 2010 г. в мире будет регистрироваться более чем 230 млн, а к 2025 г. - 300 млн больных [48, 181].

Только за последние 15 лет общее количество пациентов СД в Российской Федерации увеличилось в 2 раза [48]. Распространенность этой эндокринной патологии в России составляет 5% от населения страны [46, 147], что к настоящему времени составляет более 8 миллионов людей [51].

Течение СД характеризуется поражением сосудов микроциркуляторного русла - диабетической микроангиопатией. Именно она определяет в большинстве случаев течение, характер осложнений и прогноз заболевания-[15, 50, 54]. При данной эндокринопатии риск развития таких состояний, как почечная недостаточность, инфаркт миокарда, инсульт, облитерирующие заболевания нижних конечностей, вплоть до гангренозной диабетической стопы в 4 раза выше, чем у лиц, не страдающих диабетом [46, 50, 51, 171, 220].

В связи с широкой распространенностью СД в развитых странах (4-5% от общей популяции) очевиден рост заболеваемости и количества больных с диабетическими микроангиопатиями, частота которых в настоящее время достигает 50-70% [53]. Встречаемость диабетической полинейропатии в европейской популяции больных составляет около 50%, что соответствует распространенности ее в Северной Америке, по данным Ротчестерского исследования [7]. СД — самая частая предпосылка слепоты у взрослых, развиваясь примерно у 2-4% пациентов. При этом она отмечается в 25 раз чаще, чем в общей популяции: в среднем, диагностируется у 40% всех больных СД-1 [54]. Во всем мире диабетическая нефропатия и осложняющая ее хроническая почечная недостаточность (ХПН) являются лидирующей причиной смертности пациентов СД-1 [150]. По данным Российского регистра больных с ХПН на 2002 г., среди всех пациентов, находящихся на хроническом гемодиализе, 30% страдают СД [53].

Механизм ангиопатий при сахарном диабете носит многофакторный характер. Отсутствие четких представлений о их патогенезе породило множество теорий: гормональных, метаболических, гемореологических, иммунологических, генетических [12, 28, 47, 54, 109, 115, 159, 221]. Однако исчерпывающего ответа на вопросы о сущности диабетической микроангиопатии до сих пор нет.

В основе возникновения сосудистых осложнений СД-1 ведущее значение придается повреждающему действию гипергликемии, с которым связаны неферментативное гликозилирование белков, полиоловый путь метаболизма глюкозы, прямая глюкозотоксичность [1, 31, 175, 232]. Кроме того, высокий уровень глюкозы запускает развитие окислительного стресса [17, 159]. При этом остаются не до конца изученными свободнорадикальные процессы в таких клетках как тромбоциты и моноциты, и их вклад в патогенез диабетических осложнений. Аутоокисление глюкозы, неферментативное гликозилирование и активация метаболизма сорбитола могут быть источниками образования свободных радикалов при этом заболевании [17], способствующих нарушению эндотелиальной функции сосудов [15]. При этом эндотелий теряет способность к синтезу оксида азота (NO) - важнейшего вазодилататора [149]. Не исключено, что аналогичные реакции протекают в тромбоцитах и моноцитах, претендующих на лидерские позиции развития эндотелиальной дисфункции при микроангиопатиях. Однако этот процесс практически не освещен в доступной нам литературе.

Несмотря на то, что в настоящее время считается доказанной аутоиммунная природа СД-1, роль этого звена в генезе диабетических микроангиопатий и внепанкреатических изменений остается до сих пор слабо изученной.

Знание механизмов пато- и морфогенеза сосудистых изменений при сахарном диабете позволяет понять многие особенности этого заболевания и проводить своевременное патогенетическое лечение.

Целью настоящего исследования явилось изучение некоторых звеньев патогенеза микроангиопатий у больных сахарным диабетом 1 типа, реализуемых тромбоцитами и моноцитами, а также аутоиммунными процессами.

В ходе работы нами решались следующие задачи:

1. Исследовать состояние системы ПОЛ - антиоксиданты и уровень N0 в тромбоцитах и моноцитах, а также функциональную активность этих клеток у больных сахарным диабетом 1 типа с неосложненным и осложненным течением.

2. Выявить динамику аутоантител к антигенам поджелудочной железы, печени и почек при сахарном диабете с микроангиопатиями и без.

3. Оценить характер взаимосвязей функциональной активности тромбоцитов и моноцитов с величинами ТБК-активных продуктов и N0, а также с динамикой аутоантител различных классов.

4. Определить уровень агрегабельности тромбоцитов у пациентов сахарным диабетом 1 типа с различными вариантами течения.

5. Изучить степень активации системы комплемента при сахарном диабете.

Научная новизна

Впервые доказано, что функциональная активность тромбоцитов и моноцитов, определенная методом хемилюминесценции, у больных СД-1 повышается и особенно значительно - при появлении сосудистых осложнений.

Показано, что в генезе сосудистых осложнений участвуют аутоантитела классов А, ^ М и 1§ О к антигенам поджелудочной железы, печени и почек. Доказано, что максимальное количество иммуноглобулинов этих классов регистрируется к антигенам печени. Установлено, что аутоантитела различных классов играют неодинаковую роль в развитии аутоиммунных реакций, при этом основное значение принадлежит иммуноглобулинам М и в.

Обнаружено, что концентрации аутоантител тесно взаимосвязаны с функциональной активностью тромбоцитов и моноцитов, причем последние в большей степени влияют на развитие аутоиммунных изменений при сахарном диабете.

Впервые изучена динамика генерации N0 тромбоцитами и моноцитами больных СД-1 с различными вариантами течения. При неосложненном СД-1 уровень N0 в исследуемых клетках снижен, а при наличии микроангиопатий он увеличивается.

Зарегистрированы взаимосвязи между функциональной активностью клеток, с одной стороны, и величинами ТБК-активных продуктов и N0 - с другой при наличии сосудистых осложнений у больных СД-1.

Теоретическая и практическая значимость работы

Проведенное исследование позволяет считать, что изменения функциональной активности тромбоцитов и моноцитов, а также процессов липопероксидации, увеличение уровня N0 в них являются важными механизмами развития диабетических микроангиопатий. Вклад в патогенез сосудистых осложнений вносят аутоиммунные процессы, о чем свидетельствуют высокие концентрации аутоантител к антигенам различных внутренних органов у больных СД-1.

Полученные результаты позволят повысить качество диагностики, прогнозировать течение заболевания и оптимизировать патогенетическую терапию.

Положения, выносимые на защиту:

1. В тромбоцитах и моноцитах больных СД-1 с неосложненным течением при повышении функциональной активности происходит активация процессов липопероксидации на фоне усиления антиоксидантной защиты, а также уменьшается генерация N0.

2. У пациентов с микроангиопатиями в сыворотке, тромбоцитах и моноцитах происходит накопление ТБК-активных продуктов и N0 при снижении антиоксидантной защиты. Одновременно активируется спонтанная и ристомицин-индуцированная агрегация тромбоцитов.

3. При СД-1 вне зависимости от наличия осложнений регистрируются избыточные величины аутоантител классов в и М к антигенам поджелудочной железы, печени и почек; а при микроангиопатиях - к антигенам печени и почек у больных при усилении общей протеолитической активности системы комплемента.

Апробация работы

Материалы исследований доложены на: IV региональной межвузовской конференции «Медицина завтрашнего дня» (Чита, 2005); II заочной межвузовской научной конференции «Вопросы иммунопатологии и иммунореабилитации» (Курск, 2005); X международной молодежной научной конференции «Молодежь Забайкалья: культура здоровья - здоровое общество» (Чита, 2006); XI международной молодежной научно-практической конференции «Молодежь Забайкалья: эффективная экономика — благополучие развития края» (Чита, 2007); 72-й научной конференции КГМУ (Курск, 2007); 41-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины» (Тюмень, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК для освещения результатов диссертационных исследований.

Сведения о внедрении

Основные положения, вытекающие из проведенных исследований, внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии ГОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия».

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 116 страницах, иллюстрирована 6 рисунками и 21 таблицей и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Библиографический указатель включает 149 отечественных и 96 зарубежных источников.

ВЫВОДЫ:

1. В тромбоцитах и моноцитах больных СД-1 с неосложненным течением повышается антиоксидантная защита, а при наличии микроангиопатий' ее уровень снижается; в кровяных пластинках усиливаются процессы липопероксидации. При этом в сыворотке крови увеличивается содержание ТБК-активных продуктов и уменьшается каталазная активность.

2. В сыворотке крови, больных СД-1 без микроангиопатий увеличивается содержание оксида азота; а в тромбоцитах и моноцитах снижается. При наличии осложнений в клетках крови отмечается гиперпродукция- этого радикала.

3. Функциональная активность тромбоцитов и моноцитов повышается при неосложненном течении заболевания и усиливается более значимо при наличии микроангиопатий из-за активации процессов липопероксидации и генерации N0.

4. В сыворотке крови пациентов СД-1 регистрируются аутоантитела и ^М к антигенам поджелудочной железы, печени и почек. При развитии, сосудистых осложнений концентрация исследуемых классов аутоантител возрастает, кроме класса 1§А, уровень которого снижается лишь к антигенам поджелудочной железы.

5. Колебания концентрации иммуноглобулинов классов О, М, А находятся в', тесных взаимоотношениях с функциональной активностью тромбоцитов - и моноцитов, что свидетельствует о их совместном участии в механизме возникновения диабетических микроангиопатий.

6. У больных СД-1 с сосудистыми осложнениями усиливается спонтанная и ристомицин-индуцированная агрегация тромбоцитов.

7. При СД-1 вне зависимости от наличия осложнений повышается общая протеолитическая активность комплемента по обоим путям. При развитии-микроангиопатий альтернативный путь системы комплемента активируется! в большей степени.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

С целью прогнозирования развития диабетических микроангиопатий необходимо проведение комплексного лабораторного обследования, включающего, кроме общепринятых методов диагностики, определение функциональной активности тромбоцитов и моноцитов методом хемилюминесценции, а также изучение уровня ТБК-активных продуктов в клетках крови у больных СД-1.

92