Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Морфологическое исследование печени мышевидных грызунов из районов антропогенных воздействий

АВТОРЕФЕРАТ
Морфологическое исследование печени мышевидных грызунов из районов антропогенных воздействий - тема автореферата по медицине
Молодых, Ольга Павловна Новосибирск 1996 г.
Ученая степень
кандидата биологических наук
ВАК РФ
14.00.23
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Морфологическое исследование печени мышевидных грызунов из районов антропогенных воздействий

5 оа

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЁНИЕ

ИНСТИТУТ РЕГИОНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ МОРФОЛОГИИ

На правах рукописи

МОЛОДЫХ Ольга Павловна

МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПЕЧЕНИ МЫШЕВИДНЫХ ГРЫЗУНОВ ИЗ РАЙОНОВ АНТРОПОГЕННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск -1996

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии Сибирского отделения РАМН

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ

доктор медицинских наук, профессор л.м.непомнящих доктор биологических наук еллушникова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор м.с.виноградова кандидат биологических наук в.г.селятицкая

Ведущая организация:

Институт цитологии и генетики СО РАН

Защита диссертации состоится " " ы^ляЛ/юТЯ 1996 г. в часов на заседании диссертационного совета

Д 001.40.01 в НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (630117, Новосибирск, ул. Академика Тима-кова, 2; тел: 32-31-56).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН.

Автореферат диссертации разослан" 1996 г.

Ученый секретарь Совета доктор биологических наук

Е.Л.Лушникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Значительное усиление техногенного влияния на природные экосистемы в последние десятилетия обусловило разработку проблемы биологических эффектов, детерминированных комплексом физических и химических факторов на разных уровнях структурно-функциональной организации (Авцын А.П. и др., 1991; Москалев Ю.И., 1991; Непомнящих JI.M., 1991; Спитковский Д.М., 1992). Особую остроту эта проблема приобрела в связи с крупными техногенными катастрофами, а также выполнением программы ядерных испытаний, что вызвало загрязнение обширных территорий долгоживущими радионуклидами и химическими компонентами (Иванов В.И., 1991; Алексахин P.M., 1993; Поликарпов Г.Г., Ааркрог А., 1993; Зыкова A.C., Воронина Т.Ф., 1993; Киселев В.И. и др., 1994). В результате огромные кон-тингенты населения и биота постоянно или в течение длительного времени находятся в надфоновом радиационном поле и часто подвергаются действию химических раздражителей. Важно подчеркнуть, что это поле формируется как за счет внешнего у-излучения, так и за счет радионуклидов, попадающих в организм различными путями. Таким образом, живые организмы подвергаются хроническому сочетанному внешнему и внутреннему облучению спектром естественных и искусственных радионуклидов, которое в ряде случаев сопровождается контактом с большим количеством ксенобиотиков.

Учитывая то обстоятельство, что природный радиоактивный фон является одним из эволюционно значимых факторов (Алексахин P.M., 1986; Кузин A.M., 1991, 1995), можно полагать, что его изменения в относительно небольшом диапазоне, как и в случае других электромагнитных излучений, будут вызывать метаболические сдвиги и, как следствие, структурно-функциональную реорганизацию жизненно важных систем организма. Считается, что электромагнитные излучения имеют информационную природу и в большей степени воздействуют на регуляторные системы организма, определяя качество и интенсивность процессов жизнедеятель-

носги (Пресман A.C., 1974; Копанев В.И., Шакула A.B., 1985; Подколзин A.A. и др., 1994). Поэтому любые изменения электромагнитных потоков будут восприниматься живой системой как сигнал к изменению функционального статуса.

Изучение воздействия неблагоприятных факторов малой интенсивности проводится, как правило, раздельно, хотя следует оценивать весь комплекс факторов (Руднев М.И., 1993). Большинство исследований по комплексному воздействию химических факторов и радиоактивного излучения выполнены с высокими дозами агентов при наблюдении их аддитивного эффекта (Бахитова JI.M., Пашин Ю.В., 1990; Бутоло Н.В., Иванов В.Б., 1995). Исследования биологического действия малых доз ионизирующего излучения и других внешних воздействий стали проводиться относительно недавно. В настоящее время в этой области знаний проходит накопление научной информации и частичная систематизация данных. При этом современные концепции биологического действия малых и сопредельных с ними доз ионизирующего излучения базируются на закономерностях выхода хромосомных аберраций в различных клеточных культурах (Заичкина С.И. и др., 1992; Гераськин С. А., 1995).

Большое значение для оценки возможных биологических эффектов малых доз облучения и концентраций химических веществ имеет изучение диких животных, обитающих на территориях с, высоким уровнем техногенных загрязнений (Безель B.C., 1987; Ильенко А.И., Крапивко Т.П., 1989; Шишкина JI.H. и др., 1992; Зайнуллин В.Г. и др., 1994; Маслова К.И. и др., 1994). Интегральная оценка происходящих изменений может быть получена в морфологических исследованиях при анализе характера и направленности структурной реорганизации важнейших морфофункциональных систем организма и выяснении закономерностей организации регенераторных процессов в рассматриваемых условиях.

Печень является центральным органом метаболизма, играющим также большую роль в развитии адаптивно-компенсаторных процессов, чем объясняется большое внимание к ней при изучении последствий различных неблагоприятных

воздействий. Тем не менее многие вопросы, касающиеся особенностей и закономерностей морфофункциональной реорганизации печени диких животных, обитающих в экосистемах с высоким уровнем техногенных загрязнений, остаются не выясненными.

Цель и задачи исследования. Цель работы - сравнительный морфологический анализ печени мышевидных грызунов двух видов из природных экосистем с различным уровнем антропогенных загрязнений и выяснение структурных основ адаптивно-компенсаторной реорганизации печени в этих условиях.

Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:

1) провести сравнительный гистостереологический анализ печени мышевидных грызунов из природных экосистем с различным уровнем антропогенных загрязнений;

2) оценить с помощью методов кариометрического анализа степень полиплоидизации гепатоцитов у грызунов из разных экосистем;

3) определить особенности и закономерности внутриклеточной реорганизации гепатоцитов мышевидных грызунов из природных экосистем с различным уровнем антропогенных загрязнений.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное морфологическое исследование (световая и электронная микроскопия, кариометрический и стереологический анализ) печени мышевидных грызунов двух видов из природных экосистем, характеризующихся различным уровнем антропогенных загрязнений, с выделением общих закономерностей тканевых, клеточных и внутриклеточных перестроек.

Показано, что в условиях хронического воздействия антропогенных загрязнений (комплексного влияния химических агентов и ионизирующего излучения малой интенсивности) в печени лесных мышей и обыкновенных полевок развиваются стереотипные морфофункциональные изменения - выраженные дистрофические изменения гепатоцитов и нарушения гемодинамики в виде венозного и синусоидального полнокровия. Выраженность морфофункциональных изменений

коррелирует с уровнем антропогенных загрязнений.

Впервые установлено, что к общим закономерностям изменения тканевой архитектоники печени у мышевидных грызунов из районов с высоким уровнем антропогенных загрязнений относятся уменьшение объемного и поверхностно-объемного отношения синусоидов к гепатоцитам и снижение объемного отношения стромы к паренхиме.

Впервые обнаружено, что у лесных мышей и обыкновенных полевок из экологически неблагополучных районов в популяции гепатоцитов реализуются разные стратегии клеточной регенерации: у лесных мышей усиливается поли-плоидизация гепатоцитов (возрастает доля клеток с 8п и 16п ядрами), у обыкновенных полевок уменьшается плоидность гепатоцитов (преобладают клетки с 2п и 4п ядрами). У грызунов обоих видов из этих районов общей закономерностью клеточной регенерации гепатоцитов является уменьшение числа двуядерных клеток. Установлена корреляция между увеличением числа высокоплоидных гепатоцитов и уменьшением относительной массы печени.

Впервые показано, что у грызунов обоих видов из природных экосистем, подвергнутых значительной антропогенной трансформации, происходят стереотипные ультраструктурные изменения гепатоцитов, ведущими из которых являются: гипергликогеноз и перераспределение основных цито-плазматических органелл в клетке.

Выявлена общая закономерность внутриклеточной пространственной реорганизации гепатоцитов в условиях хронического действия техногенных загрязнений - значительное снижение (более чем на 30%) объемной плотности митохондрий, гранулярной и гладкой эндоплазматической сети, которое носит преимущественно диспропорциональный характер.

Практическая значимость. Полученные результаты раскрывают закономерности тканевых, клеточных и внутриклеточных перестроек в печени мышевидных грызунов, подвергающихся длительному воздействию факторов техногенной природы (комплексному действию химических агентов и " ионизирующего излучения малой интенсивности) и могут

быть использованы при разработке морфофункциональных критериев экологического мониторинга природных популяций.

Результаты работы имеют фундаментальное значение в плане выяснения особенностей и закономерностей клеточной и внутриклеточной регенерации гепатоцитов в условиях хронического воздействия факторов техногенной природы.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на 2-м съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995), 2-м Международном симпозиуме по проблемам саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма (Чолпон-Ата, 1995), Международной конференции по загрязнению окружающей среды (Санкт-Петербург, 1995), межлабораторном научном семинаре НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск, 1995).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации. Содержание диссертации изложено на 170 стр. машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы - 1 глава, характеристики материала и методов исследования - 1 глава, собственных исследований - 3 главы, обсуждения полученных результатов - 1 глава, выводов и списка литературы (250 источников). Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 42 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общая характеристика исследованного материала. Анализ морфофункционального состояния печени мышевидных грызунов проводили в трех районах Алтайского края. Участки отлова животных различались по уровню техногенного загрязнения: два района - Угловский и Локтевский - располагались в зоне прохождения радиоактивных облаков от атмосферных ядерных взрывов на Семипалатинском полигоне и на протяжении ряда лет (с 1949 по 1962 г.) подвергались радиационному загрязнению (Киселев В.И. и др., 1994).

В Локтевском районе животных отлавливали в окрестностях с.Новенское (плотность загрязнения по 137Cs составила 105 мКи/км2). В Угловском районе для отлова были выбраны окрестности сел Топольное и Лаптев Лог (содержание 137Cs в почве более 158 мКи/км2) (Силантьев А.Н. и др., 1993). Кроме того, значительный вклад в экологическую обстановку Лок-тевского района вносит интенсивное развитие горнорудной промышленности и накопление вследствие этого в почве большого количества тяжелых металлов и их солей (Ядерные испытания..., 1993). Третий участок отлова - окрестности населенного пункта Ключи (Тюменцевский район) был взят в качестве района сравнения.

Влияние высокого уровня экологической напряженности изучали на двух видах мышевидных грызунов: лесйой мыши Apodemus sylvaticus и обыкновенной полевки Microtus arvalis. Всего отловлено 234 грызуна: лесных мышей - 171, полевок -63.

Методы светооптического и электронно-микроскопического исследования. Для гистологического исследования образцы печени из большой доли фиксировали в 10% нейтральном формалине и обрабатывали по стандартной методике для получения парафиновых срезов. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по ван Гизону, ставили PAS-реакцшо.

Для электронно-микроскопического исследования образцы печени размерами не более 1 мм3 первоначально фиксировали в 4% растворе параформальдегида (Уикли Б., 1975; Dykstra M.J., 1992), затем постфиксировали в 1% растворе четырехокиси осмия и после дегидратации заливали в смесь эпона и аралдита для получения полутонких и ультратонких срезов. Полутонкие срезы окрашивали 1% раствором азура II, ставили PAS-реакцию. Ультратонкие срезы получали на ультратоме LKB III и после контрастирования уранилацетатом и цитратом свинца просматривали в электронном микроскопе JEM 100С при ускоряющем напряжении 80 кВ.

Для электронно-микроскопического и количественного морфологического анализа использовали печень половозре-

лых самцов (возрастная группа аёиШи), не пораженную гельминтами.

Методы морфометрического и стереологического анализа.

Морфометрический анализ включал определение абсолютной и относительной массы печени мышевидных грызунов по возрастным группам в каждом районе обследования.

Кариометрический анализ гепатоцитов проводили на полутонких срезах. Диаметр ядер гепатоцитов измеряли с помощью окулярного микрометра МОВ-1-15х в световом микроскопе МБИ-11. В каждой экспериментальной группе (один район обследования) оценивали по 1000 ядер гепатоцитов.

Для выделенных в результате параметрического анализа подсовокупностей (в каждом размерном распределении) определяли их численность и статистические параметры. Объемы ядер вычисляли на основании сферической модели. На основании совпадения кратности изменения объемов и плоидности ядер гепатоцитов (Бродский В .Я., Урываева И.В., 1981) производили установление плоидности каждой подсовокупности гепатоцитов.

Для каждого района обследования вычисляли также соотношение одно- и двуядерных гепатоцитов (на 1000 клеток для каждого района).

Тканевый стереологический анализ проводили на полутонких срезах с помощью многоцелевой тестовой системы, состоящей из коротких отрезков (Непомнящих Л.М. и др., 1984; Weibel Е.Я., 1969). Оценивали объемную и поверхностную плотность гепатоцитов, их ядер, синусоидальных гемо-капилляров, эндотелиальных клеток, а также клеток, волокон и основного вещества соединительной ткани. На основании первичных стереологических параметров рассчитывали вторичные: поверхностно-объемные отношения основных тканевых компонентов печени, объемные и поверхностно-объемные отношения гемокапилляров к гепатоцитам и объемное отношение стромы к паренхиме.

Ультраструктурный стереологический анализ гепатоцитов проводили на негативах при конечном увеличении в 30000 раз (первоначальное увеличение - 10000). Оценивали объем-

ную плотность митохондрий, гранулярной эндоплаз-матической сети (ЭС), гладкой ЭС и цитоплазмы (сюда включали гликоген, липидные капли, лизосомы, собственно цитоплазматический матрикс), а также поверхностную плотность митохондрий и мембран гранулярной и гладкой ЭС. На основании первичных стереологических параметров рассчитывали вторичные - объемные и поверхностно-объемные отношения основных ультраструктур.

Количественные данные обрабатывали с помощью методов математической статистики (Урбах В.Ю., 1963); средние значения сравнивали по критерию Стыодента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Масса тела у животных обоих видов из разных районов существенно не различалась, в то время как относительная масса печени у лесных мышей из экологически неблагополучных районов была уменьшена, а у полевок - увеличена (табл. 1).

Гистостереологический анализ печени мышевидных грызунов. У лесных мышей и обыкновенных полевок, отловленных в Тюменцевском районе, микроскопическое строение печени было близко к нормальному. Гепатоциты формировали балочные структуры и в основном равномерно окрашивались кислыми красителями; единичные клетки с эозино-фильной цитоплазмой встречались, как правило, вблизи портальных трактов. Гликоген выявлялся преимущественно в гепатоцитах, расположенных по периферии долек. У некоторых животных в гепатоцитах отмечались мелкие липидные включения. Нарушения гемодинамики зарегистрированы у отдельных животных.

Наиболее значительные изменения в микроскопическом строении печени обнаружены у животных обоих видов, отловленных в Локтевском районе, для которого характерно комплексное влияние факторов радиационной и химической природы. У большинства грызунов отмечалась выраженная гетерогенность гепатоцитов, обусловленная наличием клеток

Таблица 1. Масса тела и печени половозрелых особей мышевидных грызунов из разных районов Алтайского края (М ± ш)

Показатель _Районы обследования_

Тюменцевский Локтевский Угловский Лесные мыши

Масса тела, г 17.4 + 0.7 17.4 + 0.5 17.7 ±0.4

Масса печени, г 0.90 ± 0.05 0.82 + 0.04 0.86 ± 0.03

Относительная

масса печени, иг/г 52.2 ± 2.0 47.3 ± 1.7 49.0 ± 1.3

Полевки обыкновенные

Масса тела, г 28.2 ± 2.3 22.7 ± 2.2 30.3 ± 1.7

Масса печени, г 1.2 ±0.3 1.2 ±0.2 1.4 ±0.2

Относительная

масса печени, иг/г 42.6 ± 4.7 52.9 ± 5.7 47.4 ±6.5

с интенсивно эозинофильной цитоплазмой, расположенных преимущественно вблизи центральных вен, и клеток с обширными просветленными участками, регистрируемых чаще по периферии долек. В последних при постановке РАБ-реакции примерно у 30% животных наблюдались мощные отложения гликогена. Следует отметить, что в таких гепатоцитах ядро и цитоплазматические органеллы занимали незначительную часть клетки, а тинкториальные свойства гликогена были изменены - наблюдалась менее интенсивная РА8-положи-тельная окраска хлопьевидной цитоплазмы. У части животных (примерно в 30% случаев) в гепатоцитах регистрировались липидные включения, число и размеры которых возрастали по направлению к периферии долек.

У 40% полевок и 65% лесных мышей наблюдались нарушения гемодинамики - синусоидальное и венозное полнокровие. В некоторых случаях регистрировался лимфостаз и умеренный перипортальный склероз. Примерно у 30% животных отмечалась инфильтрация портальных трактов мононук-леарами, иногда значительная.

Общий характер морфофункциональных изменений печени, выявленных у мышевидных грызунов из Угловского

района, был таким же, как и в предыдущей группе, но выраженность отдельных изменений была иной. Гетерогенность гепатоцитов регистрировалась примерно у 40% животных. При этом значительные отложения гликогена выявлялись у трети животных, но его распределение по клетке было более равномерным, а тинкториальные свойства мало изменены. Примерно у трети лесных мышей обнаружены митозы гепатоцитов. Нарушения гемодинамики регистрировались у половины животных. Чаще (в 60% случаев) отмечалась умеренная мононуклеарная инфильтрация портальных трактов.

Выявленные морфологические изменения носят неспецифический характер и были обнаружены в печени животных при токсических и ионизирующих поражениях, а также у мышевидных грызунов, обитающих вблизи Чернобыльской АЭС (Саркисов Д.С., Туманов В.П., 1990; Пинчук В.Г. и др., 1991; Шишкина Л.Н. и др., 1992).

По данным стереологического анализа, наиболее существенные изменения тканевой архитектоники печени обнаружены у лесных мышей из Локтевского района и полевок из Угловского и Локтевского районов.

У лесных мышей из Локтевского района была достоверно увеличена объемная плотность гепатоцитов при сравнении с животными из Тюменцевского и Угловского районов. Одновременно отмечено значительное уменьшение (на 30%) объемной плотности синусоидальных гемокапилляров. Поверхностная плотность этих структур снижалась не столь значительно, что обусловило достоверное увеличение (на 33%) поверхностно-объемного отношения синусоидов. Разнонаправленные изменения объемной плотности синусоидов и гепатоцитов вызвали достоверное снижение (на 30%) их объемного отношения (рис. 1); поверхностно-объемное отношение этих тканевых компонентов было уменьшено незначительно (на 9%).

У лесных мышей из Локтевского района отмечено также уменьшение объемной и поверхностной плотности клеток соединительной ткани (соответственно на 36 и 44%, Р < 0,01) и объемной плотности основного вещества и волокон соеди-

0.18 0.16 0.14 -0.12 -0.1 0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0

т

" Щ

Щщ

ш

Лесная мышь

□ Тюменцевский район ЕЗЛоктевский район ВУгловский район

Полевка обыкновенная

Рис. 1. Объемные отношения синусоидов к гепатоцитам в печени мышевидных грызунов. * - р < 0,05, ** - р < 0,01.

0.2 -г 0.18 -0.16 -0.14 0.12 + 0.1 0.08 + 0.06 0.04 0.02 + 0

Лесная мышь

Полевка обыкновенная

Рис. 2. Объемные отношения стромы к паренхиме в печени мышевидных грызунов. ** - р < 0,01.

нительной ткани (на 20%). В результате у них было достоверно уменьшено (на 31%) объемное отношение стромы к паренхиме (рис. 2).

Изменения пространственной организации тканевого микрорайона печени полевок из Угловского и Локтевского районов носили однонаправленный характер и заключались прежде всего в уменьшении объемной плотности синусоидов (соответственно на 24 и 19%). У полевок из районов с высоким уровнем техногенного загрязнения заметно возрастала объемная плотность эндотелиальных клеток (на 42 и 114%), а также клеток соединительной ткани (на 31 и 51%).

У этих же животных отмечено уменьшение объемной плотности основного вещества и волокон соединительной ткани (на 26 и 23%). Это обстоятельство и снижение объемной плотности синусоидов обусловили уменьшение объемного отношения стромы к паренхиме (на 24 и 18%) (см. рис. 2). Примерно в такой же степени было снижено объемное отношение синусоидов к гепатоцитам (соответственно на 28 и 21%) (см. рис. 1).

Таким образом, изменения тканевой архитектоники печени у мышевидных грызунов из районов со значительным уровнем техногенных загрязнений носили однонаправленный характер и проявлялись прежде всего в уменьшении объемных и поверхностно-объемных отношений синусоидов к гепатоцитам. Это обстоятельство в значительной степени обусловливало снижение объемного отношения стромы к паренхиме. Исключение в данном отношении составили лесные мыши из Угловского района, у которых основные стерео-логические показатели печени незначительно отличались от таковых у животных из района сравнения.

Выявленные различия в степени изменений тканевой архитектоники печени у мышевидных грызунов разных видов определяются в большей степени их экологической принадлежностью и пищевыми связями, а не разными таксономическими группами. Полевки обыкновенные, ведущие преимущественно норный образ жизни и употребляющие в пшцу, наряду с зеленым кормом и семенами, корневища и

прикорневые части растений (Бобринский H.A. и др., 1965; Громов И.М., Поляков И.Я., 1977), продолжают испытывать на себе более выраженное радиационное воздействие, поскольку именно в почвах в настоящее время содержится большая часть долгоживущих радионуклидов (137Cs и 90Sr) (Криволуцкий Д.А., 1985; Силантьев А.Н. и др., 1993). Другими словами, эти животные с большей вероятностью подвергаются внешнему и внутреннему хроническому облучению.

В отличие от полевок лесные мыши являются обитателями биотопов с древесной и кустарниковой растительностью и ведут активный образ жизни над поверхностью почвы (Аргиропуло А.И., 1940). В результате чего на них в настоящее время большее воздействие могут оказывать другие техногенные факторы, поступающие из атмосферы, в частности, химической природы. Возможно также, что в результате развития горнорудной промышленности в Локтевском районе происходит постоянный вынос радионуклидов из почв и загрязнение ими растительного покрова от оседающей пыли, что и обусловило значительную тканевую реорганизацию печени у лесных мышей из этого района. Популяции обоих видов грызунов характеризуются открытостью и неизолиро-вапностью, но для рода Microtus отмечается более низкая подвижность по сравнению с родом Apodemus (Лукьянов O.A., 1993).

Кариометрический анализ гепатоцитов. Анализ гистограмм размерного распределения ядер гепатоцитов у грызунов обоих видов выявил полимодальность распределения, которая обусловлена как неоднородностью клеточной популяции вследствие полиплоидизации, так и присутствием на срезах различных профилей ядер, относящихся к одному размерному классу.

Методами математической статистики в популяции гепатоцитов лесных мышей выделено четыре субпопуляции, характеризующие ядра с 2, 4, 8 и 16 наборами хромосом (табл. 2). Полученные результаты свидетельствуют о том, что влияние комплекса техногенных факторов не вызывает существенного изменения диаметра ядер гепатоцитов лесных мы-

Таблица 2. Результаты кариометрического анализа популяции гепатоцитов мышевидных грызунов

Показатель

Диаметр ядер, мкм 2п 4п 8п 16п

Число ядер, %о 2п 4п 8п 16п

Число клеток, °/оо одноядерных двуядерных

Диаметр ядер, мкм 2п 4п 8п

Число ядер, %о 2п 4п 8п

Число клеток, %о одноядерных двуядерных

Районы обследования

Тюменцевский Локтевский Угловский

Лесные мыши

5.07 ± 0.05 6.50 ± 0.02 8.05 ± 0.03 9.27 ± 0.04

113 513 321 53

849 ±5 151 ±5

5.16 ±0.04 6.52 + 0.02 8.00 + 0.02 9.66 ± 0.08"

80 397 460 63

866 ±9 134 + 9

Полевки обыкновенные

4.79 ± 0.04 6.22 ±0.02 7.97 ± 0.04

138 650 212

859 ±6 141 ±6

4.85 ±0.03 6.01 ±0.02 7.70 ± 0.05

217 679 104

877 ±8 123 ±8

5.16 ±0.04 6.51 ±0.02 8.00 ±0.03 9.50 ± 0.06*

92 468 375 65

865 ±5 135 ±5

4.92 ±0.04 6.17 ±0.02 7.79 ± 0.06

133 775 92

862 ±8 138 ±8

Примечание. * - р < 0,05, ** - р < 0,01.

шей, относящихся к одному размерному классу, за исключением ядер с 16 наборами хромосом: отмечено небольшое, но достоверное увеличение среднего диаметра ядер у животных из Локтевского и Угловского районов (соответственно на 4 и 2 %).

У лесных мышей из Локтевского и Угловского районов выявлено преобладание в популяции гепатоцитов клеток с высокоплоидными ядрами: число 16п ядер увеличено соответственно на 19 и 23 %, 8п ядер - на 43 и 17 %, по сравнению с животными из Тюменцевского района.

В популяции гепатоцитов полевок обыкновенных выделено три субпопуляции, характеризующие ядра с 2, 4 и 8 наборами хромосом (см. табл. 2). У животных из экологически неблагоприятных районов выявлен сдвиг гистограмм размерного распределения ядер гепатоцитов в область меньших значений. Так, у полевок из Локтевского района число 2п и 4п ядер было увеличено на 57 и 4 %, соответственно, а в Углов-ском - число 4п ядер увеличено на 19 %.

Следует подчеркнуть, что у мышевидных грызунов обоих видов, несмотря на разнонаправленность изменений плоид-ности гепатоцитов по районам, обнаружена корреляция между увеличением числа высокоплоидных гепатоцитов и снижением массы печени (см. табл. 1 и 2).

В районах с высоким уровнем антропогенных загрязнений наблюдалось также снижение числа двуядерных гепатоцитов: у лесных мышей - на 11 %, у полевок обыкновенных -на 2 и 13 % (соответственно в Угловском и Локтевском районах).

Феномен полиплоидии по-разному трактуется в современной литературе - и как особая геномная мутация (Гильяно Н.Я., Малиновский О.В., 1984), и как специфическая форма регенерации (Бродский В.Я., Урываева И.В., 1981). Усиление полиплоидизации гепатоцитов обнаружено при различных поражениях печени, в частности и при радиационных (Гильяно Н.Я. и др., 1988; Москалев Ю.И., 1989). Считается, что полиплоидные клетки более радиорезистентны, а феномен полиплоидизации представляет собой неспецифический меха-

низм защиты на тканевом уровне (Календо Г.С., 1993). При этом степень полиплоидизации гепатоцитов отражает напряженность регенераторных процессов и коррелирует с силой повреждающих воздействий.

В изученных популяциях мышевидных грызунов выявлена различная направленность изменения плоидности гепатоцитов, что может отражать как видовые особенности в организации регенераторных процессов на клеточном уровне, так и различный характер воздействия техногенных факторов на исследуемые клеточные популяции.

В области высоких доз нарастание средней плоидности гепатоцитов с увеличением дозы ионизирующего облучения сравнимо с таковой в процессе естественного старения (Гильяно Н.Я., Малиновский О.В., 1984). Однако показано, что усиление плоидности гепатоцитов в процессе старения, в частности у крыс, наблюдается до определенного возраста. Так, у 24-месячных крыс начинает проявляться другая тенденция - уменьшается число клеток с высокоплоидными ядрами и возрастает число клеток с диплоидными ядрами (Рябинина З.А., 1964). С этих позиций, снижение плоидности гепатоцитов у полевок из экосистем со значительным уровнем техногенных загрязнений можно рассматривать как феномен своеобразного "популяционного старения".

Экспериментально установлено, что регенерирующая печень утрачивает одну из своих важнейших функций - метаболизм токсических веществ (Саркисов Д.С., Туманов В.П., 1990). Поскольку полиплоидизация - процесс необратимый (Бродский В.Я., Урываева И.В., 1981), и постоянная стимуляция гепатоцитов приводит к их дальнейшей полиплоидизации, то постепенно в печени лесных мышей преобладающей становится популяция гепатоцитов с ослабленной или инги-бированной детоксикационной функцией.

Выявленные различия в уровнях плоидности гепатоцитов у мышевидных грызунов из экосистем, подвергающихся техногенным загрязнениям, показывают, что на основании только этого морфофункционального критерия нельзя судить об интенсивности антропогенных воздействий. Требуется ком-

плексная оценка происходящих изменений на всех уровнях структурной организации.

Внутриклеточная организация гепатоцитов мышевидных грызунов из природных экосистем. Ультраструктура большинства гепатоцитов грызунов обоих видов, отловленных в Тюменцевском районе, в основном соответствовала таковой у других мелких грызунов (Алексеев В.А., Сечина Н.П., 1984; Калашникова М.М., Смирнова О.В., 1991). В умеренно плотной цитоплазме хорошо различались цистерны гранулярной ЭС, полиморфные митохондрии, везикулы гладкой ЭС; практически во всех клетках встречался хорошо развитый пластинчатый комплекс Гольджи. При этом митохондрии располагались в серединных зонах клеток и были наиболее многочисленными на синусоидальном пошосе. Гликоген был представлен в а-форме и в основном равномерно распределялся по клетке. В гепатоцитах полевок, чаще чем у лесных мышей, регистрировались липидные капли различных размеров; иногда отмечались их частичное истощение и мембранная трансформация. Эндотелиоциты синусоидов были преимущественно электронно-плотными, фенестрирован-ными; в просветах синусоидов и перисинусоидально часто встречались клетки Купфера.

У мышевидных грызунов из Локтевского и Угловского районов ультраструктурные изменения гепатоцитов проявлялись прежде всего в своеобразном гипергликогенозе - мощных отложениях гликогена в а-форме, которые занимали большую часть клеток. Электронная плотность гликогена была уменьшена, при этом часто отмечалась его секвестрация, а также очаговый или диффузный лизис. Остальные органеллы в таких гепатоцитах были как бы сжаты, сконденсированы, из-за чего их электронная плотность была увеличена. Наблюдалось перераспределение органелл по клетке - митохондрии и окружающие их цистерны гранулярной ЭС чаще располагались вблизи ядра или по периферии клеток. Следует отметить, что у грызунов из Локтевского района подобные изменения были более выраженными; в некоторых случаях наблюдался практически тотальный лизис гликогена с образованием

"пустых" пространств, в которых различались единичные ветвистые частицы р-гликогена. У животных обоих видов встречались гепатоциты, в цитоплазме которых содержались преимущественно везикулы гладкой ЭС и немногочисленные митохондрии, в результате чего цитоплазма таких клеток приобретала ячеистый вид.

Следует отметить, что в гепатоцитах грызунов из районов с высоким уровнем антропогенных загрязнений регистрировались ультраструктурные признаки снижения белоксинтези-рующей функции: сегрегация ядрышек на фибриллярную и гранулярную компоненты, редукция гранулярной и гладкой ЭС, а также пластинчатого комплекса Гольджи. Наблюдалось усиление процессов аутофагии с образованием остаточных телец (миелиноподобных структур), которые выводились в пространство Диссе и затем появлялись в просветах синусои-дов. На билиарном полюсе клеток часто встречались вторичные лизосомы с включениями липофусцина. Желчные капилляры, как правило, были расширены, в них регистрировались осмиофильные мембранные структуры.

В просветах синусоидов встречались клетки Купфера и лимфоциты, перисинусоидально - фибробласты, но у животных из Локтевского района число этих клеток было уменьшено. В пространстве Диссе между микроворсинками гепато-цитов иногда различались небольшие пучки коллагеновых волокон.

Стереологический анализ выявил в основном одинаковую направленность изменений количественных характеристик органелл гепатоцитов у мышевидных грызунов обоих видов из районов со значительным уровнем антропогенных загрязнений. В наибольшей степени изменялись количественные показатели митохондрий и гранулярной ЭС. У лесных мышей из Локтевского и Угловского районов объемная плотность митохондрий была уменьшена соответственно на 33 и 29% по сравнению с животными из Тюменцевского района, а у полевок - соответственно на 46 и 37% (рис.3). Поверхностная плотность митохондрий уменьшалась примерно в такой же степени, что способствовало сохранению их поверхностно-

450 у 400 -350 300 250 200 150 100 50 0

-- т

-- п

и

Т

Лесная мышь

Полевка обыкновенная

□ Тгоменцевский район □ Локтевский район ЕЗУгловский район

Рис. 3. Объемная плотность (мм3/см3) митохондрий в гепато-цитах мышевидных грызунов. * - р < 0,05.

80 т

70 60 + 50

40 + 30 20 -10 -0

Лесная мышь

Полевка обыкновенная

Рис. 4. Объемная плотность (мм3/см3) гладкой эндоплазма-тической сети. * - р < 0,05, ** - р < 0,01.

объемного отношения.

У лесных мышей из экологически неблагополучных районов отмечено снижение объемной (в среднем на 32%) и поверхностной (в среднем на 25%) плотности гранулярной ЭС. В то время как у полевок уменьшение (на 29%) объемной плотности гранулярной ЭС зарегистрировано только в Лок-тевском районе. Поверхностная плотность гранулярной ЭС в гепатоцитах полевок, наоборот, была увеличена (на 27 и 62% соответственно у животных из Локтевского и Угловского районов), что способствовало увеличению поверхностно-объемного отношения (соответственно на 44 и 50%) этого внутриклеточного компартмента.

У грызунов обоих видов значительно были уменьшены количественные показатели гладкой ЭС (рис. 4). У лесных мышей из Локтевского и Угловского районов объемная плотность гладкой ЭС была достоверно снижена соответственно на 66 и 56%, а поверхностная - на 48 и 13%. У полевок объемная плотность гладкой ЭС уменьшалась соответственно на 42 и 56%, а поверхностная плотность - на 54% у животных в обоих районах.

Заметно возрастала у грызунов из экологически неблагополучных районов объемная плотность цитоплазмы (в среднем на 30%) у лесных мышей и на 40% у полевок). Следует отметить, что увеличение этого показателя было обусловлено в основном увеличением объемной плотности гликогена, которая составляла от 30 до 50% от объемной плотности цитоплазмы. У животных из района сравнения на долю гликогена приходилось от 5 до 10% объема цитоплазмы.

Пропорциональное уменьшение объемной плотности митохондрий и гранулярной ЭС в гепатоцитах лесных мышей из экосистем, подвергнутых значительной антропогенной трансформации, способствовало сохранению объемного отношения этих компартментов. В то время как более значительное снижение объемной плотности митохондрий в гепатоцитах полевок вызывало снижение объемного отношения митохондрий к гранулярной ЭС на 42%.

Анализ объемного отношения митохондрий и гладкой ЭС

выявил, наоборот, значительное увеличение этого параметра у лесных мышей из экологически неблагополучных районов (соответственно в 2 и 1,6 раза в Локтевском и Угловском районах), что свидетельствует о более выраженном уменьшении объемной плотности гладкой ЭС. У полевок объемное отношение митохондрий к гладкой ЭС было увеличено (в 1,4 раза) только в Угловском районе.

Параллельно у животных обоих видов отмечено значительное увеличение (в 27 - 35 раз ) объемного отношения гликогена к митохондриям, что, вероятно, свидетельствует об изменении энергетического и углеводного обменов гепатоци-тов в рассматриваемых экологических условиях.

Накопление гликогена в гепатоцитах отмечено при некоторых наследственных заболеваниях (Авцын А.П., Шахламов В.А., 1979; Струков А.И. и др., 1990), у больных хроническим гепатитом различной этиологии (вирусной, алкогольной, токсической) (Кудрявцева М.В., 1987), а также в экспериментальных условиях при избыточном потреблении фруктозы (Riede U.N., Sasse D., 1981). В гепатоцитах крыс, получавших фруктозу, обнаружено также значительное уменьшение объемной плотности митохондрий и гранулярной ЭС (Riede U.N. et al., 1975).

Пострадиационное увеличение содержания гликогена в печени и глюкозы в крови было показано в экспериментах по облучению организма в сублетальных и летальных дозах (Кендыш И.Н., 1974). На основании того, что экранирование печени при общем облучении не предотвращало гипергликемию. был сделан вывод о ведущей роли внепеченочных механизмов в реализации действия радиации на обмен углеводов, в частности гиперсекреции гшококортикоидов. Однако сравнительный анализ действия радиации и других стрессирую-щих факторов (охлаждения, гипоксии, введения адреналина) показал, что только облучение вызывает продолжительное и значительное увеличение концентрации углеводов в крови и печени.

В экспериментах с предварительным мечением тканей крыс 14С-глицином было показано, что после облучения

меченые субстраты накапливались в крови и печени, в которой происходила трансформация меченых метаболитов в гликоген. Эти данные рассматриваются как прямое доказательство активации глюконеогенеза из эндогенных метаболитов, появляющихся в крови в результате пострадиационной деструкции радиочувствительных тканей. Считается, что в механизме пострадиационного синтеза углеводов в печени первичным событием является глюконеогенез, посредством которого вторично стимулируется гликогенез (Кендыш И.Н., 1974).

Механизмы гипергликогенеза гепатоцитов при хроническом воздействии ионизирующего излучения в малых дозах не известны. Вероятно, в этих условиях стимуляция гликогенеза и глюконеогенеза или ингибирование гликолиза обусловлены в большей степени изменением функциональной активности соответствующих генов вследствие возможных изменений в конформационной структуре хроматина (Гераськин С.А., 1995).

Как правило, гликогенозы гепатоцитов сопровождаются перераспределением органелл в клетке, прежде всего митохондрии и гранулярной ЭС (Riede U.N., Sasse D., 1981). Подобное перераспределение органелл, например, локализация митохондрий вдоль латеральной и базалыюй плазматических мембран, наблюдалось и при других видах повреждений, в частности при аллергической альтерации гепатоцитов (Бархина Т.Г., Томилец В.А., 1984), что отражает некоторые общие закономерности реорганизации этих клеток при неблагоприятных воздействиях.

Выявленный феномен накопления большого количества гликогена и фундаментальной пространственной реорганизации гепатоцитов у мышевидных грызунов из экосистем со значительным уровнем антропогенных загрязнений представляет собой, вероятно, как наследственно закрепленные изменения, так и реакцию на персистирующие неблагоприятные факторы физической и химической природы.

выводы

1. Хроническое воздействие техногенных факторов на природные популяции лесной мыши и обыкновенной полевки вызывает комплекс морфофункциональных изменений в печени, которые затрагивают все уровни структурной организации: органный, тканевый, клеточный и внутриклеточный. При этом характер и выраженность тканевых и внутриклеточных изменений определяются экологической принадлежностью и не зависят от таксономической группы. Изменения на органном и клеточном уровне видоспецифичны.

2. В печени мышевидных грызунов в условиях хронического воздействия антропогенных факторов развиваются стереотипные морфофункциональные изменения - выраженные дистрофические изменения гепатоцитов и нарушения гемодинамики в виде венозного и синусоидального полнокровия. Выраженность морфофункциональных изменений коррелирует с интенсивностью антропогенных загрязнений.

3. Общим принципом тканевой реорганизации печени мышевидных грызунов из районов, подвергнутых антропогенной трансформации, является уменьшение объемного и поверхностно-объемного отношения синусоидов к гепатоци-там и снижение объемного отношения стромы к паренхиме.

4. В популяции гепатоцитов мышевидных грызунов из экологически неблагополучных районов реализуются разные (видовые) стратегии клеточной регенерации: у лесных мышей усиливается полиплоидизация гепатоцитов (возрастает доля клеток с 8п и 16п ядрами), у обыкновенных полевок плоид-ность гепатоцитов уменьшается (возрастает доля клеток с 2п и 4п ядрами). Общей закономерностью клеточной регенерации у грызунов обоих видов является уменьшение числа двуя-дерных гепатоцитов.

5. Усиление полиплоидизации гепатоцитов у лесных мышей из экологически неблагополучных районов коррелирует с уменьшением у них относительной массы печени; у обыкновенных полевок снижение плоидности гепатоцитов сопровождается увеличением относительной массы печени.

6. Ультраструктурные изменения гепатоцитов мышевидных грызунов обоих видов из экологически неблагополучных районов носят стереотипный характер и проявляются, прежде всего, в гипергликогенозе и существенном перераспределении органелл в клетке. Одновременно в гепатоцитах регистрируются ультраструктурные признаки снижения белоксинтези-рующей функции: редукция гранулярной и гладкой эндоплаз-матической сети и пластинчатого комплекса Гольджи, усиление процессов аутофагии.

7. Закономерностью внутриклеточной пространственной реорганизации гепатоцитов мышевидных грызунов в условиях хронического воздействия антропогенных загрязнений является значительное снижение (более чем на 30%) объемной плотности митохондрий, гранулярной и гладкой эндоплазматической сети. При этом изменения объемной плотности основных органелл гепатоцитов носят преимущественно непропорциональный характер.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сравнительный анализ популяции гепатоцитов у мышевидных грызунов из районов с разными экологическими условиями // 2-й съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1995. - Ч. 2. - С. 300 - 301 (соавт. Е.Л.Лушникова).

2. Гистостереологический анализ печени лесных мышей из районов с различными экологическими условиями // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: Материалы II Международ, симпоз. - Бишкек, 1995. - Ч. 1. - С. 116 - 117 (соавт. ЕЛ.Лушникова).

3. Morphofunctional status of hepatocytes of wild rodents from the regions with difierent levels of anthropogenic pollution // ICEP'95 and ICONE'95. - St. Petersburg, 1995. - P. 149 (соавт.: E.L.Lushnikova, L.M.Nepomnyashchikh).

4. Кариометрический анализ популяции гепатоцитов лесных мышей из районов с разным уровнем техногенного за-

грязнения // Бюл. экспер. биол. - 1996. - N 2. - С. 223 - 227 (соавт. Л.М.Непомнящих).

5. Ультраструктурная реорганизация гепатоцитов мышевидных грызунов из экосистем с различной антропогенной модификацией // Клинические и экспериментальные исследования молодых ученых Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск, 1996. - С. 83.

6. Гистостереологический анализ печени мышевидных грызунов из районов с неблагоприятными экологическими условиями // Клинические и экспериментальные исследования молодых ученых Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск, 1996. - С. 84 (соавт. Н.В.Ащеулова).

Соискатель •">'пР/жу О.П.Молодых

Подписано в печать 12.01.96 г. Формат бумаги 60x84/16

Печ. л. 1,0. Заказ N 17 . Тираж 100 экз. Оригинал-макет подготовлен в редакционно-издательском отделе НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН. Редактор- корректор Н.Ащеулова.

Типография СО РАМН, 1996 г. 630117, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2