Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфологические особенности вегетативных ганглиев у животных с конституциональной алкогольной мотивацией

На правах рукописи

Волков Александр Владимирович

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВЕГЕТАТИВНЫХ ГАНГЛИЕВ У ЖИВОТНЫХ С КОНСТИТУЦИОНАЛЬНОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ МОТИВАЦИЕЙ

(экспериментальное исследование) 14.00.15 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов-2009

003482669

Работа выполнена в Государственном учреждении «Волгоградский научный центр Российской академии медицинских наук и администрации Волгоградской области» и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Писарев Вячеслав Борисович.

Мозеров Сергей Алексеевич;

Щеголев Александр Иванович.

Ведущая организация: Институт морфологии человека РАМН.

Защита состоится «_»_ 2009 года в_часов на заседании

диссертационного Совета Д 208.094.01 при ГОУ ВПО Саратовский ГМУим. В.И. Разумовского Росздрава по адресу: 410012, г. Саратов, ул Б. Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского» Росздрава.

Автореферат разослан «_»_2009 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

Маслякова Г.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Проблема алкоголизма и алкоголь-ассоциированной патологии в России стоит в ряду основных медико-социальных проблем, препятствующих сбережению нации и росту производительного населения [Пермяков A.B., Витер В.И., 2002; Разводовский, Ю. Е., 2008; Рыбакова М.Г. с соавт., 2009; Carrero R.J., Husain К., 2005].

В последнее время установлено, что конституциональная склонность к' потреблению этанола закреплена на генетическом уровне [Анохин К.В., Судаков К.В., 2003; Mukamal K.J., 2004; McCormick С.М., et al., 2007].

Частота детерминированного аддиктивного поведения в популяции людей составляет от 2% до 7%. В эксперименте на беспородных животных подобная склонность выявляется с той же частотой у крыс линии Вистар - до 15%, а при селекции удается вывести чистые линии животных, склонных к алкоголизации [Анохина И.П., 2000; Боголепов H.H. с соавт., 2002; Мхитаров В .А., 2008; Mann К. et al., 2001; Hamano Н. et al., 2002]. Показано, что у таких животных еще до алкоголизации имеются существенные особенности строения коры головного мозга, ядер гипоталамуса и продолговатого мозга [Писарев В.Б., с соавт., 2004, 2006; Гуров Д.Ю., 2005].

Детальные исследования животных, предпочитающих этанол, выявили множество особенностей, касающихся строения отдельных областей и ядер головного мозга, медиаторной организации ЦНС, биохимических особенностей систем биотрансформации этанола [Писарев В.Б. с соавт., 2003, 2006; Дробленков A.B. с соавт. 2008; Eriksson C.J.P., 1999, 2001; Matsumoto I. et al., 2001; Thompson R.H. et al., 2008].

В то же время патолого-анатомическая практика свидетельствует о том, что степень повреждения внутренних органов и, что особенно важно, ведущий механизм танатогенеза при алкоголь-зависимой смерти в весьма малой степени зависит от «стажа» и «рабочей дозы» умершего, от концентрации этанола в крови, моче, органах и тканях [Пауков B.C., Ерохин Ю.А., 2004; Пиголкин Ю.И. с соавт., 2006; Brozska М.М. et al., 2000; Wetterling Т. et al., 2000, 2004; Santos J.L. et al., 2006].

В последние годы во всем мире наблюдается повышенный интерес к изучению патогенеза алкогольной болезни с позиций конституциональной, генетической детерминированности влечения к этанолу [Анохина И.П., 2003; Писарев В.Б., с соавт., 2006; Потанин М.Б., 2008; Hesselbrock V., et al., 2004].

На наш взгляд, за пределами интереса исследователей остались вопросы нарушений вегетативной регуляции внутренних органов, структурными основами которых могут быть изменения в вегетативных ганглиях, функционально относящихся к симпатической и парасимпатической нервной системе. Хорошо известно, что вегетативная нервная система реагирует на различные токсические воздействия чрезвычайно вариабельно. Ее участие можно трактовать как элемент в формировании патологической системы, основой которой становится вегетативная дизрегуляция [Крыжановский Г.Н. с соавт., 2001, 2004]. Именно эти нарушения могут замыкать порочный круг, формируя необратимые изменения во внутренних органах при алкогольной болезни.

С этих позиций актуальным представляется морфологическое исследование различных вегетативных ганглиев как у животных с определенной склонностью к потреблению этанола, так и в динамике алкоголизации.

Цель работы - выявить закономерности строения вегетативных ганглиев, иннервирующих внутренние органы, у животных с различной конституциональной склонностью к потреблению этанола и их изменения в процессе алкоголизации.

Задачи исследования

1. Изучить строение висцеральных ганглиев сердца, печени, почек у животных, конституционально склонных и не склонных к потреблению этанола.

2. Изучить строение ганглиев паравертебральной симпатической цепочки у животных, конституционально склонных и не склонных к потреблению этанола.

3. Изучить в эксперименте морфологические изменения в вегетативных ганглиях, иннервирующих внутренние органы, в динамике принудительной алкоголизации.

4. Показать взаимосвязь морфологических изменений в вегетативных ганглиях и иннервируемых ими органах в динамике принудительной алкоголизации.

Научная новизна

В работе показано, что у животных с высокой алкогольной мотивацией имеются исходно более сложная организация висцеральных ганглиев печени и почек, а также паравертебрапьных ганглиев, но менее сложная организация висцеральных ганглиев почек.

Выявлены сроки, характер развития и наиболее значимые морфологические изменения в вегетативных ганглиях при алкоголизации лабораторных животных с различной алкогольной мотивацией. Показано, что для животных с высокой алкогольной мотивацией характерна более высокая степень повреждения нейронов висцеральных ганглиев сердца, а у животных с низкой алкогольной мотивацией - висцеральных ганглиев почек.

На основании корреляционного анализа предложены наиболее значимые параллели между изменениями в вегетативных ганглиях и внутренних органах - мишенях алкогольной болезни: снижению численной плотности нейронов и размеров их ядер, а также выраженности сателлитоза соответствуют более выраженные признаки алкоголь-зависимой патологии иннерви-руемых ими сердца, печени и почек.

Особенности выявленных изменений в вегетативных ганглиях, сердце, печени и легких у животных с различной алкогольной мотивацией показаны как структурные основы вегетативной дизрегуляции в формировании органо-патологии и течении алкогольной болезни.

Научно-практическая значимость

Полученные данные расширяют представления о природе конституциональных предпосылок к формированию алкоголь-зависимой патологии внутренних органов. Часть выявленных изменений может быть с успехом экстраполирована в диагностическую практику для прогноза особенностей органопатологии у лиц, имеющих конституциональную склонность к употреблению алкоголя.

Выявленные изменения в висцеральных ганглиях сердца, печени и почек, а также паравертебральных ганглиях в динамике алкогольной интоксикации позволили детализировать особенности формирования алкогольной кар-диомиопатии, гепатоза и нефропатии за счет участия в их развитии компонента вегетативной дизрегуляции.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У животных с конституциональной алкогольной мотивацией вне действия алкоголя имеются особенности строения висцеральных ганглиев внутренних органов и паравертебральных ганглиев, заключающиеся в различной склонности организации ганглиев и особенностей нейронного окружения.

2. При алкоголизации животных с высокой алкогольной мотивацией патология сердца, печени и почек развивается во взаимосвязи с морфологическими изменениями в вегетативных ганглиях, что становится субстратом вегета-

тивной дизрегуляции, участвующей в формировании органопатологии алкогольной болезни.

Апробация работы и публикации

Основные результаты исследования докладывались и обсуждались на юбилейной научно-практической конференции, посвященной 100-летию областной клинической больницы (Волгоград, 2005); 4-й Всероссийской конференции «Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации человека» (Волгоград, 2005); общероссийской конференции «Фундаментальные проблемы медицины» (Кисловодск, 2005); Российской научной конференции «Проблемы морфологии» (Астрахань, 2006).

Апробация работы осуществлена на расширенном заседании сотрудников отдела общей и экспериментальной патологии Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области и кафедры патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета 15 июня 2009 года.

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе статья в журнале «Вестник новых медицинских технологий» Перечня ВАК.

Внедрение результатов работы

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии и судебной медицины Волгоградского государственного медицинского университета. Практические рекомендации используются в работе Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области, Волгоградского областного патологоанатомического бюро и госпиталя ГУВД Волгоградской области.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, иллюстрирована 28 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка использованной литературы. Список использованной литературы содержит 245 источников (112 - на русском и 133 - на иностранных языках).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа носила экспериментальный характер и была выполнена с использованием белых лабораторных крыс. Протокол экспериментов был составлен в соответствии с принципами биоэтики, действующими правилами лабораторной практики (GLP) и согласован с Локальным независимым этическим комитетом (протокол № 16-2005 от 15 апреля 2005 года).

На первом этапе проведено неинвазивное тестирование 150 животных. Использованы два вида определения уровня алкогольной мотивации: тест предпочтения 5%-ного этанола питьевой воде [Салимов P.M., 1998] и тест определения порога вокализации при электроболевом воздействии [Мулик А.Б., 2002; Гуров Д.Ю., 2005]. В результате были сформированы две маргинальных группы: 14 крыс с высокой склонностью к потреблению алкоголя (ВСА) и 14 - практически не склонных (НСА) к его употреблению.

На втором этапе у 9 животных из каждой группы производили принудительную алкоголизацию пероральными дозами этанола (1 мл/кг) в течение 60 суток (п=5) и 120 суток (п=4), пять крыс все это время содержались в обычных условиях вивария без каких-либо манипуляций. Выведение животных из эксперимента производили передозировкой нембутала.

После эвтаназии сердце, печень и почки выделяли совместно с прилегающими тканями, чтобы получить по два блока: классический для изучения паренхимы органов, и блок, содержащий висцеральные ганглии. Аналогичным образом микропрепаровкой выделяли три блока мягких тканей, содержащих паравертебральные ганглии: соответствующие звездчатому ганглию (скелетотопически - C6-Th2), основным ганглиям грудного сегмента (Th3-Th9) и дистальным грудного с люмбальными (Thl0-L2).

Материал фиксировали в 10%-ном растворе формалина, после уплотнения заливали в парафин. С одного блока получали до 100 серийных срезов толщиной 5-7 мкм, ориентированных перпендикулярно оси ворот органа. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Нисслю, импрегнировали солями серебра по Бильшовскому. Срезы блоков, представленных паренхимой внутренних органов, окрашивали только гематоксилином и эозином.

Фотосъемка препаратов проведена на микроскопе Micros (Германия) с фотокамерой Pixera (Япония). Оцифрованные изображения подвергали количественному анализу с использованием компьютерно-аппаратного комплекса Ви-деотест-Морфо 4.0 (СПб, Россия) в соответствии с принципами морфометрии. В качестве количественных показателей в висцеральных ганглиях были вы-

браны средний объем ядер (мкм3), объемная доля ядер (mkm3/mkmj), численная плотность нейронов и сателлитов (1/мм3) [Автандилов Г.Г., 1996, 2002]. В качестве территории одного нейрона рассматривали область, окруженную кривой с удалением от границы перикарионов на 'Л их поперечника. С позиций такого деления рассчитывали средний объем нейронного окружения (мкм3), среднее число граничных нейронов и сателлитов [Писарев В.Б. с соавт., 2004].

На срезах, окрашенных по Нисслю, определяли степень алкоголь-индуцированного повреждения нейронов [Чубинидзе А.И., 1972], которые разделили на 4 группы: нормальные неизмененные (НН), слабоизмененные (СН), грубо измененные (ГН) и отсутствующие («клетки-тени», ОН). Степень поражения нейронов вычисляли по формуле:

СП (%) = 100 х (ОН+ГН+0,5СН) / (ГН+ОН+СН+НН)

В тканях сердца, печени и почек при морфометрии определяли объемные доли, средние размеры и численную плотность основных структурных элементов [Автандилов Г.Г., 1996,2002].

Классическую количественную морфологию дополняли радиальной морфометрией с помощью оригинальной программы Radiana, разработанной в Волгоградском научном центре РАМН [Писарев В.Б. с соавт., 2004; Ново-чадов В.В., 2005]. В качестве окончательных показателей использовали коэффициенты, характеризующие графическую функцию распределения тинкто-риальной плотности нейрона: К, - тангенс угла подъема кривой в восходящей части графика; Кг - тангенс угла снижения кривой; Im - максимальная интенсивность окраски в кольцевой зоне (усл. ед.); R - расстояние от центра ядрышка до зоны с Im (мкм); Vm- максимальная вариабельность интенсивности по секторам, усл. ед.

Математическую обработку данных проводили непосредственно из общей матрицы данных EXEL 7.0 (Microsoft, USA) с привлечением возможностей программ STATGRAPH 5.1 (Microsoft, USA). Она включала определение показателей средней, ее среднеквадратичного отклонения, моды и ошибки репрезентативности. Затем, руководствуясь закономерностями, принятыми для медико-биологических исследований, оценивали достоверность различий выборок и проводили корреляционный анализ [Зайцев В.М. с соавт., 2003; Новиков Д.А., Новочадов В.В., 2005].

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Особенности строения висцеральных и паравертебральных ганглиев у крыс с различной алкогольной мотивацией

Проведенные исследования показали, что в зависимости от локализации висцеральных ганглиев нет единства в характере структурной организации у крыс с высокой и низкой алкогольной мотивацией.

В висцеральных ганглиях сердца животных ВСА группы (в сравнении с ганглиями крыс НСА группы) отмечали относительно большие размеры самих ганглиев, несколько более плотную упаковку нейронов при небольшом числе сателлитов. Ганглии сердца животных ВСА группы отличались почти в 1,5 раза большим числом нейронов в единице объема. Средние размеры нейронов у них были достоверно меньше, чем таковые в группе НСА. Такая архитектоника обеспечивала каждому нейрону ганглия в ВСА группе относительно больший объем окружения и большее число граничных нейронов (табл. 1).

У животных ВСА группы отмечалось достоверно меньшее количество клеток-сателлитов в ганглиях. Коэффициент глия/нейрон в этой группе в сердечных ганглиях оказывался в 2,2 раза меньше, чем аналогичный показатель в группе НСА (Р<0,001).

Таблица 1

Показатели морфометрии нервных элементов сердца у крыс с различной конституциональной алкогольной мотивацией (М+т)_

Показатель Алкогольная мотивация

отсутствует высокая

Объемная доля нейронов в ганглии, % 8,3+0,4 8,4+0,6

Численная-Плотность нейронов в 1 мм3 42,7±2,8 61,7±5,1*

Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 98,1±8,0 74,0±6,1*

Средняя площадь сечения перикариона, мкм3 893,0±57,1 675,3±49,8*

Средний объем нейронного окружения, мкм3 16301±773 23054±1149*

Среднее число граничных нейронов в объеме Х3,1±1,0 9,2±0,7*

Объемная доля сателлитов в ганглии, % 22,3+1,1 8,3+0,5*

Численная плотность сателлитов в 1 мм3 566,0±42,3 487,1±31,8 *

Среднее число сателлитов в окружении нейрона 24,8±1,5 25,0±1,1

Коэффициент глия/нейрон 13,2±0,7 7,9±0,5 *

* - здесь и далее достоверные различия между группами

У нейронов животных ВСА группы был ближе расположен к центру тела клетки и больше по абсолютной величине максимум тинкториальной плотности, нарастание ее шло более резко, равно как и убывание к периферии

тела нейрона. Кривая характеризовалась относительно большей вариабельностью разброса по секторам (рис. 1А).

При окраске на РНК большинство нейронов висцеральных ганглиев сердца оптическая плотность цитоплазмы нейронов мало различалась между группами, тогда как оптическая плотность ядрышек была в 2,2 раза более низкой в ВСА группе. Вариабельность яркости как в ядрышках, так и в цитоплазме околосердечных нейронов, имела большую величину в ВСА группе, по сравнению с соответствующим показателем в НСА группе. Коэффициент ДНК, отражающий его распределение в нейронах, был выше в ВСА группе примерно на 18% (Р<0,05).

Таким образом, можно было охарактеризовать особенности висцеральных ганглиев сердца крыс с высокой алкогольной мотивацией как сложноор-ганизованные структуры, сформированные большим числом относительно мелких нейронов с большим числом граничных клеток и относительно малым числом клеток-сателлитов. Полученные результаты позволяют предположить, что у животных с высокой конституциональной алкогольной мотивацией резервы парасимпатической вегетативной иннервации сердца при алкоголизации могут оказаться меньше.

При исследовании висцеральных ганглиев печени между ВСА и НСА группами на качественном уровне каких-либо существенных различий не прослеживалось, за исключением относительно более крупных размеров пе-рикарионов и несколько более плотного расположения нейронов у крыс с низкой алкогольной мотивацией.

При морфометрии висцеральных ганглиев печени у крыс ВСА группы выявлялись сравнительно малые размеры нейронов. Это не компенсировалось большей плотностью расположения нейронов, так что каждому нейрону ганглия соответствовал в "1,5 раза больший объем окружения при равном числе граничных нейронов. Кроме того, в ВСА группе отмечалось достоверно меньшее количество клеток-сателлитов в ганглиях (табл. 2).

Данные радиальной морфометрии выявляли меньшее (на 17,8%) значение Im в ВСА группе. К1 был в нейронах ВСА группы почти в 1,5 раза больше, в сравнении с аналогичным показателем в НСА группе, а значения К2 были примерно равными. В ВСА группе была зарегистрирована большая вариабельность яркости по секторам (рис. 1Б).

Данные факты можно трактовать как меньшее содержание и более равномерное распределение в цитоплазме окрашивающихся биополимеров в группе ВСА и связанная с этим меньшая активность ганглиев.

Таблица 2

Показатели морфометрии висцеральных ганглиев печени у крыс с различной конституциональной алкогольной мотивацией (М+ш)

Показатель Алкогольная мотивация

отсутствует высокая

Объемная доля нейронов в ганглии, % 9,3+0,7 7,1+0,6*

Численная плотность нейронов в I мм3 40,6+3,9 41,2±4,0

Средняя плошадь сечения ядер нейронов, мкм' 102,5±8,3 79,8+6,2*

Средний площадь сечения перикариона, мкм3 703,1+46,5 552,3+33,7*

Средний объем нейронного окружения, мкм3 19374±946 29484+1388*

Среднее число граничных нейронов в объеме 6,5±0,7 7,0+0,7

Объемная доля сателлитов в ганглии, % 11,3+1,0 9,8+0,9

Численная плотность сателлитов в 1 мм3 333,4±24,0 310,6+21,5

Среднее число сателлитов в окружении нейрона 14,2+1,1 13,0±1,2

Коэффициент глия/нейрон 8,20+0,66 7,54+0,55*

А Б

В Г

Рис. 1. Усредененные кривые при радиальной морфометрии нейронов вегетативных ганглиев крыс с различной конституциональной алкогольной мотивацией. А. Висцеральные ганглии сердца. Б. Висцеральные ганглии печени. В. Висцеральные ганглии почек. Г. Паравертебральные ганглии на уровне С7. Ось абсцисс - доли в масштабах ядра, ось ординат - обращенная удельная яркость в RGB формате.

Полученные данные свидетельствуют о том, что в области печени висцеральные ганглии не имеют столь выраженных различий у животных в зависимости от склонности к алкоголизации.

При сравнении висцеральных ганглиев почек на качественном уровне было отмечено, что для животных ВСА группы характерна в целом менее сложная организация вегетативных ганглиев. Нейроны были расположены несколько плотнее друг к другу, не образуя скоплений, были окружены умеренным количеством сателлитов. При серебрении выявлялись умеренная ар-гентофилия нейронов, незначительное количество проводников, ориентированных по длиннику ганглия. При количественном исследовании различия оказывались более заметными (табл. 3).

Таблица 3

Показатели морфометрии висцеральных ганглиев почек у крыс с различной конституциональной алкогольной мотивацией (М+ш)_

Показатель Алкогольная мотивация

отсутствует высокая

Объемная доля нейронов в ганглии, % 9,3+0,7 9,5+0,7

Среднее число нейронов в 1 мм3 ганглия 31,1+1,6 41,6+1,8*

Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 90,5+8,4 75,2+6,0

Средний объем перикариона нейронов, мкм3 681+44 968+47*

Средний объем нейронного окружения, мкм3 25611+1493 18440+934*

Среднее число граничных нейронов в объеме 9,0+0,8 12,8+1,1*

Объемная доля сателлитов в ганглии, % 6,2+0,4 6,1+0,4

Среднее число сателлитов в 1 мм3 69,05+4,8 44,1+3,0*

Среднее число сателлитов в окружении нейрона 11,0+0,8 5,2+0,4*

Коэффициент глия/нейрон 7,1+0,6 5,4+0,8*

Ганглии почек животных ВСА группы отличались относительно большим числом в объеме ткани нейронов, тогда как их размеры были достоверно меньше по сравнению с таковыми в НСА группе крыс (Р<0,05). В ганглиях выявлялось достоверно меньшее количество клеток-сателлитов (Р<0,05). Среднее количество сателлитов в окружении одного нейрона у животных ВСА группы оказывалось в 2,1 раза меньше, чем аналогичный показатель в группе НСА (Р<0,01).

При радиальной морфометрии в ВСА группе выявлялась относительно меньшая (на 13,2%) im нейронов висцеральных ганглиев почек в сравнении с крысами НС группы. У животных обеих групп зарегистрированы примерно равные углы подъема и снижения кривой распределения окраски на тионин, но вариабельность окраски была несколько больше в НСА группе (рис. ¡В).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о существовании, вне влияния этанола, целого ряда особенностей и в висцеральных ганг-

лиях почек. Они выражаются в наличии относительно более мелких нейронов, малом количестве клеток-сателлитов и внутриганглионарных нервных проводников. С учетом известных литературных данных о роли нейроглии как компенсирующего компонента при повреждении нейронов, следует предположить, что у животных ВСА группы при алкоголизации более вероятно развитие вегетативной дизрегуляции почек.

В паравертебральных ганглиях крыс, склонных к потреблению этилового алкоголя, были выявлены относительно большая объемная плотность и большие размеры нейронов, несколько уменьшенное количество клеток-сателлитов. Выраженность различий убывала в ряду С4-ТИ2 > Thl0-L2 > Th3-Th9, то есть наиболее выраженные признаки гипертрофии нейронов были обнаружены в паравертебральных ганглиях, ответственных за симпатическую иннервацию сердца, легких, а также почек и тонкой кишки. Минимальные различия выявлены в зоне, ответственной за симпатическую иннервацию печени и желудка (табл. 4).

Таблица 4

Показатели морфометрии паравертебральных ганглиев у крыс с различной конституциональной алкогольной мотивацией (М+т)

Показатель Алкогольная мотивация

отсутствует | высокая

Уровень C6-Th2

Объемная доля нейронов в ганглии, % Среднее число нейронов в 1 мм3 ганглия Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Объемная доля сателлитов в ганглии, % Коэффициент глия/нейрон 22,8+1,4 62,3+2,8 64,8+7,0 11,0+1,3 8,8+0,9 29,8+1,6* 82,2+3,1* 82,1+8,3* 8,0+0,4* 6,7+0,8*

Уровень Th3-Th9

Объемная доля нейронов в ганглии, % Среднее число нейронов в 1 мм3 ганглия Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Объемная доля сателлитов в ганглии, % Коэффициент глия/нейрон 17,0+1,5 55,3+4,0 43,5+3,3 9,6+0,7 8,0+0,9 20,3+1,8* 57,0+6,1 59,0+4,8* 10,5+1,0* 8,5+0,8

Уровень Thl0-L2

Объемная доля нейронов в ганглии, % Среднее число нейронов в 1 мм3 ганглия Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Объемная доля сателлитов в ганглии, % Коэффициент глия/нейрон 24,5+1,7 70,0+2,9 49,3+3,8 14,0+1,0 6,8+0,5 30,9+2,2* 77,5+2,1 59,1+4,3* 18,0+1,6* 9,1+0,7*

Радиальная морфометрия показала, что для нейронов паравертебральных ганглиев вне зависимости от алкогольной мотивации животных характерен краниокаудальный градиент, выражающийся в снижении гетерогенности

тинкториапьных свойств перикарионов нейронов. У крыс с высокой алкогольной мотивацией нейроны вегетативных ганглиев уровней от С6 до Th6 имеют меньшую однородность тинкториальной плотности тионина, что выявляется по относительно низким показателям К| , К2 и Vm. Данные свойства минимизируются в каудальном направлении. Интенсивность окраски тиони-ном Im не является различительным критерием, а показатель R информативен для выделения нейронов у крыс с высокой склонностью к алкогольной зависимости при исследовании паравертебральных ганглиев на уровнях Thl0-L2, что соответствует представительству иннервации почек и органов малого таза (рис. 1Г).

При окраске на РНК большинство нейронов хорошо прокрашивалась в исследуемой области как у крыс ВСА, так и НСА групп, отражая общую высокую синтетическую активность в этих нейронах. Цитоплазма нейронов паравертебральных ганглиев окрашивалась в 1,3 раза интенсивнее у животных ВСА группы, по сравнению с НСА группой. Величина отношения яркости ядрышка к цитоплазме, косвенно отражающая степень биосинтеза белков в клетке, оказывалась больше в ВСА группе.

Полученные данные можно трактовать как структурные основы более выраженной активности симпатической нервной системы у крыс, конституционально предрасположенных к потреблению алкоголя.

2. Формирование органопатологии и изменения в висцеральных ганглиях в течение принудительной алкоголизации

В висцеральных ганглиях сердца при воспроизведении принудительной алкоголизации у крыс на 60-е сутки эксперимента в ганглиях крыс ВСА группы выявлялось значительное количество нейронов, находящихся в состоянии дистрофии и атрофии. Среди скоплений ганглиозных клеток выявлялись истинные явления нейронофагии и сателлитоз. К 120-м суткам число атрофированных нейронов и нейронов-«теней» в интрамурапьном нервном аппарате сердца в еще большей степени возрастало.

При количественном анализе по мере принудительной алкоголизации значительно увеличивалось количество нейронов в состоянии дистрофии и атрофии, уменьшались численная плотность нейронов, их размеры (табл. 5).

Миокард интактных животных из НСА и ВСА групп практически не различался при качественном и количественном анализе. Небольшая тенденция к микросомии, свойственная животным ВСА группы [Мулик А.Б., 2003], выявлялась только при определении средних размеров КМЦ.

Таблица 5

Показатели морфометрин висцеральных ганглиев сердца крыс с различной алкогольной мотивацией после принудительной алкоголизации

Морфометрические показатели Принудительная алкоголизация

интактные I 60 сут | 120 сут

Высокая алкогольная мотивация

Степень повреждения нейронов, % Численная плотность нейронов, 1/мм3 Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Численная плотность сателлитов 1/мм3 Коэффициент глия/нейрон 1,7±0,2 61,7±5,11 * 74,0±6,1* 487,1±31,8 * 7,9±0,5 * 16,8±1,1 х * 50,9±3,8*" 61,0±6,1* х 547,8±25,8 * 10,7±0,7 *х 21,S±l,8 * 40,2i3,l* х 51,3i4,0* х 575,3±28,0 *1 14,3il,l *х

Низкая алкогольная мотивация

Степень повреждения нейронов, % Численная плотность нейронов, 1/мм3 Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Численная плотность сателлитов 1/мм3 Коэффициент глия/нейрон 1,4±0,2 42,7±2,8 98,1±8,0 566,0±42,3 13,2±0,7 11,2±0,9* 38,6±2,4 78,2±5,1 * 925,7±61,5Х 23,9±1,21 17,0±1,4Х 31,Ш,9' 66,2i3,9x 800,li53,8x 25,4±1,3Х

* - достоверные различия менаду группами ВСА и НСА,

х - в динамике принудительной алкоголизации (Р<0,05)

В сердце животных ВСА группы при принудительной алкоголизации происходили в целом более выраженное повреждение КМЦ и развитие кар-диомиопатии, соответствующее по срокам и характеру повреждению нейронов висцеральных ганглиев, иннервирующих орган. К 60-м суткам принудительной алкоголизации в сердце выявлялись достоверные качественные и количественные признаки кардиомиопатии: значительное уменьшение численной плотности ядер КМЦ (с 124,3±10,2 до 62,5±5,0 в 1 мм2, Р<0,01), сочетание их атрофии и гипертрофии, стромальная пролиферация и наличие жировых клеток на территории миокарда. Возрастали показатели вариабельности яркости миофибрилл (с 26,1 ±1,4% до 42,5±2,7%, Р<0,05) и средних размеров КМЦ.

На 120-е сутки эксперимента данные изменения были в целом более интенсивными, хотя существенного уменьшения численной плотности КМЦ уже не происходило. Это свидетельствовало о том, что в исследуемых группах на ранних сроках эксперимента более ярко выражен рестриктивный компонент алкогольной кардиомиопатии, в последующем - атрофический. Даже на самых поздних сроках эксперимента в миокарде встречались участки острого повреждения. Во всех случаях ее прослойки нарастали между функционирующими КМЦ диффузно, лишь умеренно деформируя мышечную ткань и формируя мелкоочаговый кардиосклероз.

С учетом описанных феноменов следует признать, что у крыс с высокой алкогольной мотивацией сердце становится местом наименьшего сопротивления при формировании органопатологии алкогольной болезни.

В нейронах висцеральных ганглиев печени основными проявлениями морфологических изменений на 60-е сутки принудительной алкоголизации также становились признаки повреждения нейронов и выраженный сателли-тоз. Однако повреждение затрагивало не все клетки: наличие до 25% гипер-хромных нейронов указывало на усиленную функцию данных нервных структур. К 120 суткам изменения приобретали еще более выраженный характер; хорошо была заметна мозаичность состояния нейронов: атрофированные нейроны, клетки-«тени» чередовались с гипертрофированными клетками, имеющими разветвленную сеть волокон вблизи перикариона. При сравнении изменений в ВСА и НСА группах некоторое преобладание изменений у животных с высокой алкогольной мотивацией не носило столь выраженного характера, как для сердечных ганглиев (табл. 6).

Таблица 6

Показатели морфометрии висцеральных ганглиев печени крыс с различной алкогольной мотивацией после принудительной алкоголизации

¡УГорфометрические показатели Принудительная алкоголизация

интактные 60 сут 120 сут

Высокая склонность к алкоголизации

Степень повреждения нейронов, % 2,0±0,2 21,№1,8 * 27,5±2,1*

Численная плотность нейронов, 1/мм3 41,2±4,0 35,1±2,6* 31,2±2,4*

Средняя площадь сечения ядер

нейронов, мкм2 79,8±б,2* 80,0±6,9* 55,2±4,5*

Численная плотность сателлитов, 1/мм3 310,6±21,5 537,0±29,5* 545,1±29,4*

Коэффициент глия/нейр он 7,54±0,55* 17,2±1,3* 18,0±1,5*

Низкая склонность к алкоголизации

Степень повреждения нейронов, % 1,5±0,2 19,8±1,5* 17,0±1,4"

Численная плотность нейронов, 1/мм3 40,6±3,9 36,3±2,2 31,8±2,0*

Средняя площадь сечения ядер

нейронов, мкм2 102,5±8,3 98,2±5,0 * 75,1±4,3'

Численная плотность сателлитов, 1/мм3 333,4±24,0 482,2±38,Г 601,9±47,0 *

Коэффициент глия/нейрон 8,20±0,66 16,1±1,5* 17,8±1,4*

Таким образом, при исследовании висцеральных ганглиев печени в динамике принудительной алкогольной интоксикации нами не было выявлено сколько-нибудь значительных особенностей, связанных с конституциональной алкогольной мотивацией. В то же время сам объем повреждения ганглиев был достаточно велик, так что никоим образом нельзя отрицать влияние са-

мого повреждения вегетативной регуляции печени в формировании алкоголь-зависимого повреждения этого органа.

В печени в процессе принудительной алкоголизации крыс развивались хорошо известные процессы хронического повреждения этанолом и его дериватами. На 60-е сутки они в большей степени соответствовали картине жирового гепатоза с минимальными признаками токсического гепатита, на 120-е сутки - начальным стадиям цирроза печени. Каких-либо различий в выраженности патологии печени между НСА и ВСА группами на качественном уровне мы не отметили, что свидетельствует о малой зависимости характера и степени алкогольного повреждения печени у крыс от склонности к алкогольной зависимости.

В висцеральных ганглиях почек после принудительной алкоголизации на всех сроках эксперимента была характерна мозаичность состояния нейронов: помимо повреждения нейронов от умеренной дистрофии до нейро-нофагии, обнаруживалось до 15% нейронов в состоянии гипертрофии с большим хорошо окрашенным ядром. Значительно возрастало количество клеток-сателлитов. Данные морфологические изменения оказывались более выражены у животных НСА группы (табл. 7).

Таблица 7

Показатели морфометрии висцеральных ганглиев почек крыс с различной алкогольной мотивацией после принудительной алкоголизации

Морфометрические показатели Принудит ельная_аща) гол изация

интактные | 60 сут | 120 сут

Высокая склонность к алкоголизации

Степень повреждения нейронов, % Численная плотность нейронов, 1/мм3 Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Численная плотность сателлитов, 1/мм3 Коэффициент глия/нейрон 1,3±0,1 41,6+1,8* 75,2+6,0 441,1+30,0* 9,4+0,8* 12,5±0,9* 37,4±2,7 66Д)±5,1 668,2±27,0* 14,1±1,0* 11,8±0,5* 34,8±2,1* 59,1±5,0* 712,1±29,4* 15,2±1,3*

Низкая склонность к алкоголизации

Степень поврездения нейронов, % Численная плотность нейронов, 1/мм3 Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм" Численная плотность сателлитов, 1/мм3 Коэффициент глия/нейрон 1,5±0,1 31,1+1,6 90,5+8,4 269,0+47,8 7,1+0,6 16,2±1,1** 26,1±2,2*х 69,2±4,1*5 424,5±30,7* 14,5±1,3* 18,8±1,6* * 20,1±1,7* * 66,4±4,2* * 460,8+40,5" 20,3±1,7*"

Таким образом, исследование висцеральных ганглиев почек выявило их более раннее и выраженное повреждение у крыс с НСА, что может являться структурными основами более выраженной вегетативной дизрегуляции в

формировании алкогольной нефропатии у данного конституционального типа животных. Данные изменения не являются специфичными и были описаны ранее рядом авторов при остром отравлении алкоголем, остром и хроническом эндотоксикозе [Фролов В.И., 2004; Богачев A.A., 2006].

В почках при алкоголизации уже на 60-е сутки выявляли значительные нарушения структуры органа. Клубочки выглядели сморщенными и плотными, между клубочком и утолщенной капсулой имелись свободные пространства, частично заполненные светлыми гомогенными массами. Эпителий проксимальных и, более заметно, дистальных канальцев был значительно поврежден и частично слущен в просвет. В состоянии некроза находилось относительно малое количество клеток. На 120-е сутки, помимо различных признаков гломерулярного и канальцевого повреждения, обращало на себя внимание появление новообразованной соединительной ткани, которая распространялась между канальцами, нарушая их архитектонику. При сравнении на количественном уровне изменения в почках крыс у животных с низкой алкогольной мотивацией выглядели несколько более яркими, в сравнении с аналогичными в ВСА группой. Наиболее характерными количественными изменениями в паренхиме почек были уменьшение объемной доли клубочков (больше -в ВСА группе), сокращение мочевого пространства при увеличении доли соединительной ткани. Степень повреждения эпителия канальцев у животных НСА группы была выше (с 3,0+0,4% до 19,2+1,3%) в сравнении с аналогичным показателем в ВСА группе (с 2,6+0,3% 15,4+2,0%), а прирост соединительной ткани - в НСА группе был выше в 1,4 раза (Р<0,05).

В паравертебральных симпатических ганглиях при принудительной алкоголизации к 60 суткам выявляли преимущественно гипертрофию большинства нейронов и увеличение количества клеток-сателлитов. Помимо гипертрофированных нейронов и двуядерных нервных клеток встречались также поврежденные нейроны в состоянии вакуолизации цитоплазмы, острого набухания, сморщивания и даже клетки-«тени». В части ганглиев, в особенности шейного отдела (краниальном шейном и звездчатом) отмечались небольшие кровоизлияния и их последствия в виде небольшого скопления си-дерофагов. К 120 суткам описанные явления нарастали, в отдельных случаях выявлялась периваскулярная инфильтрация симпатических ганглиев и пери-ганглионарной клетчатки лимфоцитами с единичными макрофагами, появлялись явления сателлитоза и нейронофагии. В ткани ганглиев наблюдался выраженный сателлитоз с присоединием соединительнотканного замещения.

Максимально выраженные признаки гипертрофии регистрировались в паравертебрапьных ганглиях, ответственных за симпатическую иннервацию сердца и легких. В этих паравертебральных ганглиях наблюдалась значительная степень повреждения нейронов, нарастающая между 60 и 120 сутками интоксикации (табл. 8).

Таблица 8

Показатели морфометрии паравертебральных ганглиев уровня С6-Т1)2 у крыс с различной алкогольной мотивацией после принудительной алкоголизации

Морфометрические показатели Принудительная алкоголизация

интактные | 60 сут ] 120 сут

Высокая склонность к алкоголизации

Степень повреждения нейронов, % Численная плотность нейронов, 1/мм3 Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Численная плотность сателлитов, 1/мм3 Коэффициент глия/нейрон 3,5±0,2 29,8+1,6 82,2+3,1 182,1+8,3 6,7+0,8 12,0±1,1* 27,0±2,0 85,0+4,9 355,0±25,4* 13,3±1,2* 28,1±1,6* 20,8±1,7* 80,8±5,0 627,1±40,2* 26,4±1,5*

Низкая склонность к алкоголизации

■ Степень повреждения нейронов, % Численная плотность нейронов, 1/мм3 Средняя площадь сечения ядер нейронов, мкм2 Численная плотность сателлитов, 1/мм3 Коэффициент глия/нейрон 3,3±0,3 22,8+1,4 62,3+2,8 164,8+7,0 8,8+0,9 18,1±1,2** 22,1±2,0 72,1+4,6* 405,2±33,0* 18,7±1,7* 37,0±1,5* 1 17,3±1,6* 70,3±4,5* 680,5±45,4* 31,4±2,2**

Степень повреждения нейронов оказывалась выше (до 37%) в НСА группе, в сравнении с тем же показателем в ВСА группе (Р<0,05). Повреждение нейронов сопровождалось снижением их численной плотности, достоверной только на 120 сутки опыта: - на 28% в ВСА группе, на 22% - в НСА группе, но меньшей в абсолютном значении численной плотности. Размеры ядер нейронов при этом практически не изменялись. Численная плотность сателлитов многократно прирастала, так что коэффициент глия/нейрон превышал значения у интактных животных на 120-е сутки принудительной алкоголизации в ВСА группе-в 3,7 раза, в НСА группе-в 3,5 раза (Р<0,001).

Выраженность изменений убывала в ряду C4-Th2 > Thl0-L2 > Th3-Th9, то есть полученные данные связывали с сегментарными особенностями трофики, кровоснабжения и функциональной нагрузки данного отдела нервной системы, что могло частично объяснять особенности вегетативной дизрегупя-ции, сопровождающей течение принудительной алкоголизации.

Таким образом, проведенное исследование выявило наличие достоверных признаков токсического повреждения в сердце, печени и почках и иннер-

вирующих их вегетативных ганглиях, в различной степени зависящее от уровня алкогольной мотивации. В целом, сформировавшаяся органопатоло-гия при длительной алкогольной интоксикации представляет собой порочный круг, в котором нарушение структуры и функции одного органа неизбежно приводит к нарушению структуры и функции других органов [Пермяков A.B., Витер В.И., 2002; Пауков B.C., Ерохин Ю.А., 2004].

3. Результаты корреляционного анализа

В ходе корреляционного анализа была выявлена достоверная отрицательная зависимость между степенью повреждения нейронов в висцеральных ганглиях сердца и численной плотностью КМЦ (г=-0,722) и вариабельностью яркости миофибрилл (г=-0,800). Численная плотность нейронов имела положительные корреляции с этими же показателями (в пределах 0,627-0,739). Две интересных зависимости выявлены в отношении численной плотности сателлитов: с вариабельностью яркости миофибрилл (-0.739) и вариабельностью размеров КМЦ (0,722). В паравертебральных ганглиях соответствующего уровня (C6-Th2) выявлено четыре сильных связи: положительная корреляция между степенью повреждения .нейронов и вариабельностью яркости миофибрилл (r=0,711), отрицательные - между средними размерами ядер нейронов и численной плотностью КМЦ (г=-0,684), между численной плотностью сателлитов и численной плотностью КМЦ (-0,754), ей же и вариабельностью яркости миофибрилл (-0,851).

Таким образом, корреляционный анализ позволил не только доказать влияние вегетативной нервной системы на формирование дисметаболической кардиомиопатии, но и выявить взаимодополняющий и во многом альтернативный вклад висцеральных ганглиев сердца и паравертебральных ганглиев соответствующего уровня в этот процесс.

При корреляционном анализе морфометрических показателей печени и ганглиев, ее иннервирующих, у животных ВСА группы в динамике принудительной алкоголизации было выявлено гораздо меньше связей. Три корреляционные связи выявлены в отношении показателей висцеральных ганглиев печени: положительные между степенью повреждения нейронов и ОД соединительной ткани (0,718), численной плотностью нейронов и ОД паренхимы печени (0,680) и отрицательная связь - между той же плотностью нейронов и ОД соединительной ткани в печени (-0,757). Также три сильных корреляционных связи выявлены для единственного показателя в паравертебральных ганглиях на уровне Th3-Th9 - численной плотности сателлитов. Его связи с

ОД паренхимы (-0,683) и ОД соединительной ткани и средними размерами ядер клеток Купфера (положительные 0,668 и 0,715) свидетельствовали о роли имеющегося сателлитоза паравертебральных ганглиев в развитии алкогольной патологии печени.

При анализе показателей морфометрии висцеральных ганглиев почек были выявлены всего две сильные связи в отношении степени повреждения нейронов: отрицательная с ОД клубочков (-0,691) и положительная - с ОД соединительной ткани (0,753). При этом было выявлено несколько связей средней силы (порядка 0,440-0,575), связывающих отдельные показатели морфометрии почек и их висцеральных ганглиев.

Еще меньшими были связи между морфометрией почек и паравертебральных ганглиев уровня Thl0-L2. Единственной сильной корреляцией оказалась положительная связь между численной плотностью сателлитов и объемом мочевого пространства (0,670).

Резюмируя полученные данные, можно сделать несколько обобщений в отношении роли вегетативной дизрегуляции в пато- и морфогенезе алкогольных поражений внутренних органов. Корреляционный анализ выявил многочисленные взаимосвязи между морфометрическими показателями внутренних органов и вегетативных ганглиев. Некоторые из них, судя по анализу элементов вегетативной нервной системы, способствуют развитию алкогольного поражения внутренних органов (в основном - периферические парасимпатические ганглии), другие - препятствуют развитию органопатологии при этом процессе (выявлены преимущественно в паравертебральных ганглиях).

Многочисленные исследования и статистики по эпидемиологии алкоголизма подчеркивают многообразие форм алкогольной болезни. Мы разделяем точку зрения о том, что существует несколько очерченных форм алкогольной болезни на третьей стадии ее развития. При этом могут преобладать: энцефалопатия и психотические расстройства, жировой гепатоз и цирроз печени, алкогольная кардиомиопатия и нефропатия [Автандилов Г.Г., 1985; Пауков B.C. с соавт., 1991; Богомолов JI.B., 2003; Пауков B.C., Ерохин Ю.А., 2004].

Для склонности к алкогольной зависимости характерно более выраженное и связанное с вегетативными структурами повреждение сердца, для животных с низкой алкогольной мотивацией - почек. В отношении печени какой-либо зависимости не установлено.

При хроническом потреблении алкоголя наиболее длительной оказывается стадия неспецифически повышенной резистентности, характеризующейся толерантностью к потреблению этанола. Она наступает на 2-3-м месяце

воздействия и является своеобразной формой «привыкания» организма к яду. В ее основе лежит повышение уровня функционирования регуляторных систем, в частности системы гипоталамус - гипофиз - кора надпочечника по типу хронического стресса. Обнаруженные нами изменения в висцеральных и па-равертебрапьных ганглиях являются морфологическим субстратом такой вегетативной дизрегуляции: увеличение симпатических влияний на сердце и снижение - на почку создает условия для повреждения структур и дополнительной стимуляции роста соединительной ткани.

Длительное употребление алкоголя создает во внутренних органах и вегетативных ганглиях патологическую систему, которая продолжает функционировать и критически изменяет свою активность после прекращения потребления алкоголя. Такая декомпенсация может рассматриваться как один из механизмов критического нарастания нагрузки на патологически измененный миокард, что наряду с другими вариантами (печеночно-почечная недостаточность, пищеводные кровотечения, энцефалопатии) может являться основным механизмом танатогенеза.

ВЫВОДЫ

1. Висцеральные ганглии сердца, в меньшей степени - печени, крыс с высокой конституциональной алкогольной мотивацией отличаются относительно сложной организацией нейронных групп, которая проявляется в высокой численной плотности нейронов, относительно малых размерах их ядер, малом объеме нейронного окружения и низком коэффициенте глия/нейрон. Висцеральные ганглии почек у крыс с высокой алкогольной мотивацией отличаются относительно менее сложной организацией и большим количеством сателлитов.

2. Паравертебральные ганглии животных с высокой алкогольной мотивацией отличаются высокой объемной долей нейронов, которые имеют большие размеры ядра и имеют более сложноорганизованное нейронное окружение. Эти особенности характеризуются краниокаудальным градиентом: максимальные различия у крыс с высокой и низкой алкогольной мотивацией выявляются на уровне звездчатого ганглия, минимальные - на уровне ТЬ10-Ь2.

3. При хронической принудительной алкогольной интоксикации в висцеральных ганглиях внутренних органов выявляется картина токсического поражения: нейроны с признаками дистрофических изменений, нейронофа-

гии с заместительным сателлитозом. Степень поражения нейронов убывает в ряду: висцеральные ганглии сердца > ганглии почек > ганглии печени. Повреждению и значительной убыли нейронов в паравертебральных ганглиях предшествует период гипертрофии и умеренного сателлитоза, интенсивность реакции убывает в ряду звездчатый ганглий > ганглии уровня Th3-Th9 > ганглии уровня Thl0-L2.

4. Для животных с высокой алкогольной мотивацией характерно относительно более быстрое прогрессирование алкогольной кардиомиопатии. Количественные характеристики кардиомиоцитов (уменьшение численной плотности, средних размеров и нарушение тинкториальных свойств цитоплазмы) коррелируют с показателями токсического повреждения нейронов и реакции сателлитов в висцеральных ганглиях сердца и звездчатом ганглии.

5. Развитие алкогольного поражения печени не имеет особенностей, связанных с различиями в алкогольной мотивации, но ее количественные признаки (снижение объемной доли паренхимы, увеличение объемной доли соединительной ткани) имеют многочисленные корреляционные связи с показателями токсического повреждения нейронов и реакции сателлитов в висцеральных ганглиях печени и паравертебральных ганглиях на уровне Th3-Th9.

6. Более быстрое и выраженное развитие алкогольной нефропатии характерно для животных с низкой алкогольной мотивацией. Количественные характеристики патологии почек (уменьшение объемной доли клубочков и мочевого пространства, степень повреждения канальцевого эпителия и увеличение объемной доли соединительной ткани) коррелируют с показателями токсического повреждения нейронов и реакции сателлитов в висцеральных ганглиях почек и паравертебральных ганглиях на уровне Th9-L2.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Волков, A.B. Роль длительного злоупотребления спиртсодержащими жидкостями в формировании органопатологии и танатогенезе / А.А.Богачев, А.В.Волков, В.В. Новочадов // Областной клинической - 100: Юбил. сб. науч. статей. - Волгоград, 2005. - С. 126-129.

2. Волков, A.B. Морфофункциональная характеристика вегетативных ганглиев почек крыс с конституциональной алкогольной мотивацией/

A.В.Волков, В.Б.Писарев, B.B. Новочадов // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН.-2005.-№2.-С. 14-16.

3. Волков, A.B. Морфометрические особенности строения вегетативных ганглиев печени крыс при конституциональной предрасположенности к потреблению этанола / A.B. Волков // Успехи современного естествознания. -2005.-№10.-С. 41-42.

4. Волков, A.B. Морфология висцеральных ганглиев сердца у крыс с конституциональной склонностью к алкогольной зависимости / А.В.Волков,

B.Б.Писарев, В.В. Новочадов // Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации человека: Материалы 4-й Всероссийской конференции. - Волгоград, 2005. - С. 220-222.

5. Волков, A.B. Морфологические особенности паравертебральных вегетативных ганглиев у животных с высокой конституциональной склонностью к алкогольной болезни / A.B. Волков, В.В. Новочадов // Успехи современного естествознания. - 2005. - №12. - С. 70.

6. Компьютерный анализ в оценке нейроэндокринной дизрегуляции как компонент органопатологии при хроническом эндотоксикозе /

C.А.Калашникова, Л.В.Полякова, A.B. Волков и др. // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2006. - №2. - С. 42-43.

7. Волков, A.B. Радиальная морфометрия в оценке изменений нейронов, вызванных воздействием эндогенных факторов / А.В.Волков, Н.В.Ермолаев, С.А. Калашникова // Вестник новых медицинских технологий. - 2008. - №1. -С. 24-26.

Подписано в печать 26.09.09. Формат 60x84/16. Бум. тип М1. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1.0. Тираж 100. Заказ 93. Волгоградский государственный медицинский университет 400131, Волгоград, Пл. Павших борцов, I.

Актуальность.

Проблема алкоголизма и алкоголь-ассоциированной патологии в России стоит в ряду основных медико-социальных проблем, препятствующих сбережению нации и росту производительного населения [Заиграев Г.Г., 2002; Пермяков A.B., Витер В.И., 2002].

В последнее время установлено, что конституциональная склонность к потреблению этанола закреплена на генетическом уровне [Анохин К.В., Судаков К.В., 2003; Mukamal K.J., 2004; McCormick С.М., et al., 2007].

Детерминированность аддиктивного поведения присутствует у 2-7% индивидуумов популяции. В эксперименте на беспородных животных подобная склонность выявляется с примерно той же частотой, в линиях Вис-тар - до 15%, а при целенаправленном отборе удается вывести чистые линии животных, склонных к алкоголизации [Шабанов П.Д., 1998; Анохина И.П., 1992, 2000; Боголепов H.H., с соавт., 2002; Arendt Т., 1994; Mann К., et al., 2001; Hamano Н., et al., 2002].

Показано, что у таких животных еще до алкоголизации имеются определенные особенности строения коры головного мозга, ядер гипоталамуса и продолговатого мозга [Гуров Д.Ю., 2005; Писарев В.Б., с соавт., 2004, 2006].

Детальные исследования животных, предпочитающих этанол, выявили множество морфофункциональных особенностей, касающихся строения отдельных областей и ядер головного мозга, медиаторной организации центральной нервной системы, биохимических особенностей систем хемоби-отрансформации этанола [Зиматкин С.М., 1995; Лебедев А. А., с соавт., 1995; Ашмарин И. П. с соавт., 1996; Боголепов H.H., с соавт., 2000; Писарев В.Б., с соавт., 2003, 2006; Гуров Д.Ю., 2002, 2004; Тотолян A.A., 2003;

Eriksson C.J.P., 1999, 2001; Matsumoto I., et al., 2001; Thompson R.H., et al., 2003].

В то же время, патолого-анатомическая практика свидетельствует о том, что степень повреждения внутренних органов и, что особенно важно, ведущий механизм танатогенеза при алкоголь-зависимой смерти, в весьма малой степени зависит от «стажа» и «рабочей дозы» умершего, от концентрации этанола в крови, моче, органах и тканях [Галицкий Ф.А., 1995; Саф-рай А.Е., с соавт., 1996, 2002; Витер В.И., 1998, 2002; Меденцов А.А., 1999; Пиголкин Ю.И., с соавт., 2000; Brozska М.М., et al., 2000; Wetterling Т., et al., 2000, 2004; Santos J.L., et al., 2003].

В последние 10-15 лет во всем мире наблюдается повышенный интерес к изучению патогенеза алкогольной болезни с позиций конституциональной, генетической детерминированности влечения к этанолу [Анохина И.П., 2001, 2003; Писарев В.Б., с соавт., 2003; Hesselbrock V., et al., 2004].

На наш взгляд, за пределами интереса исследователей остались вопросы нарушений вегетативной регуляции внутренних органов, структурными основами которых могут быть изменения в вегетативных ганглиях, функционально относящихся к симпатической и парасимпатической нервной системе. Хорошо известно, что вегетативная нервная система реагирует на различные токсические воздействия чрезвычайно вариабельно. В хронической ситуации подобные изменения можно трактовать как элемент в формировании патологической системы, основой которой становится вегетативная дизрегуляция. Именно эти нарушения могут замыкать порочный круг патологической системы, формируя необратимые изменения во внутренних органах - неотъемлемый компонент алкогольной болезни [Крыжа-новский Г.Н., с соавт., 2001, 2004].

С этих позиций актуальным представляется морфологическое исследование различных вегетативных ганглиев как у животных с определенной склонностью к потреблению этанола, так и в динамике алкоголизации.

Цель работы - выявить закономерности строения вегетативных ганглиев, иннервирующих внутренние органы, у животных с различной конституциональной склонностью к потреблению этанола и их изменения в процессе алкоголизации.

Задачи исследования.

1. Изучить строение висцеральных ганглиев сердца, печени, почек и паравертебральных ганглиев у животных, конституционально склонных и не склонных к потреблению этанола.

2. Изучить в эксперименте морфологические изменения в вегетативных ганглиях, иннервирующих внутренние органы, в динамике принудительной алкоголизации.

3. Показать взаимосвязь морфологических изменений в вегетативных ганглиях и иннервируемых ими органах в динамике принудительной алкоголизации.

4. Выявить наиболее информативные критерии участия вегетативной дизрегуляции в формировании органопатологии в динамике принудительной алкоголизации.

Научная новизна.

В работе показаны, что у животных с высокой алкогольной мотивацией имеются исходно более сложная организация висцеральных ганглиев печени и почек, а также паравертебральных ганглиев, но менее сложная организация висцеральных ганглиев почек.

Выявлены сроки, характер развития и наиболее значимые морфологические изменения в вегетативных ганглиях при алкоголизации лабораторных животных с различной алкогольной мотивацией. Показано, для животных с высокой алкогольной мотивацией характерна более высокая степень повреждения нейронов висцеральных ганглиев сердца, а у животных с низкой алкогольной мотивацией - висцеральных ганглиев почек.

На основании корреляционного анализа предложены наиболее значимые параллели между изменениями в вегетативных ганглиях и внутренних органах — мишенях алкогольной болезни: снижению численной плотности нейронов и размеров их ядер, а также выраженности сателлитоза соответствуют более выраженные признаки алкоголь-зависимой патологии иннервируемых ими сердца, печени и почек.

Особенности выявленных изменений в вегетативных ганглиях, сердце, печени и легких у животных с различной алкогольной мотивацией показаны как структурные основы вегетативной дизрегуляции в формировании органопатологии и течении алкогольной болезни.

Научно-практическая значимость.

Полученные данные расширяют представления о природе конституциональных предпосылок к формированию алкоголь-зависимой патологии внутренних органов. Часть выявленных изменений может быть с успехом экстраполирована в диагностическую практику, для прогноза особенностей органопатологии у лиц, имеющих конституциональную склонность к употреблению алкоголя.

Выявленные изменения в висцеральных ганглиях сердца, печени и почек, а также паравертебральных ганглиях в динамике алкогольной интоксикации позволили детализировать особенности формирования алкогольной кардиомиопатии, гепатита/гепатофиброза и нефропатии за счет участия в их развитии компонента вегетативной дизрегуляции.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У животных с конституциональной алкогольной мотивацией вне действия алкоголя имеются особенности строения висцеральных ганглиев внутренних органов и паравертебральных ганглиев, заключающиеся в различной склонности организации ганглиев и особенностей нейронного окружения.

2. При алкоголизации животных с высокой алкогольной мотивацией патология сердца, печени и почек развивается во взаимосвязи с морфологическими изменениями в вегетативных ганглиях, что становится субстратом вегетативной дизрегуляции , участвующей в формировании органопатологии алкогольной болезни.

Апробация работы и публикации.

Основные результаты исследования докладывались и обсуждались на юбилейной научно-практической конференции, посвященной 100-летию областной клинической больницы (Волгоград, 2005); 4-й Всероссийской конференции «Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации человека» (Волгоград, 2005); Общероссийской конференции «Фундаментальные проблемы медицины» (Кисловодск, 2005); Российской научной конференции «Проблемы морфологии» (Астрахань, 2006).

Апробация работы осуществлена на расширенном заседании сотрудников отдела общей и экспериментальной патологии Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области и кафедры патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета 24 ноября 2007 года.

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе статья в журнале «Вестник новых медицинских технологий» Перечня ВАК и 2 - в сборниках материалов Всероссийских конференций - 2.

Реализация и внедрение результатов работы.

Работа выполнена на базе отдела общей и экспериментальной патологии (зав. отделом - член-корреспондент РАМН В.Б. Писарев) Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области (директор - академик РАМН В.И. Петров).

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии и судебной медицины Волгоградского государственного медицинского университета. Практические рекомендации используются в работе Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области, Волгоградского областного патолого-анатомического бюро и Госпиталя ГУВД Волгоградской области.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, иллюстрирована 28 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка использованной литературы. Список использованной литературы содержит 245 источников (112 на русском и 133 - на иностранных языках).

ВЫВОДЫ

1. Висцеральные ганглии сердца, в меньшей степени - печени, крыс с высокой конституциональной алкогольной мотивацией отличаются относительно сложной организацией нейронных групп, которая проявляется в высокой численной плотности нейронов, относительно малых размерах их ядер, малом объеме нейронного окружения и низком коэффициенте глия/нейрон. Висцеральные ганглии почек у крыс с высокой алкогольной мотивацией отличаются относительно менее сложной организацией и большим количеством сателлитов.

2. Паравертебральные ганглии животных с высокой алкогольной мотивацией отличаются высокой объемной долей нейронов, которые имеют большие размеры ядра и имеют более сложноорганизованное нейронное окружение. Эти особенности характеризуются краниокаудальным градиентом: максимальные различия у крыс с высокой и низкой алкогольной мотивацией выявляются на уровне звездчатого ганглия, минимальные - на уровне ТЫ0-Ь2.

3. При хронической принудительной алкогольной интоксикации в висцеральных ганглиях внутренних органов выявляется картина токсического поражения: нейроны с признаками дистрофических изменений, нейронофа-гии с заместительным сателлитозом. Степень поражения нейронов убывает в ряду: висцеральные ганглии сердца > ганглии почек > ганглии печени. Повреждению и значительной убыли нейронов в паравертебральных ганглиях предшествует период гипертрофии и умеренного сателлитоза, интенсивность реакции убывает в ряду звездчатый ганглий > ганглии уровня ТЬЗ-ТЬ9 > ганглии уровня ТЫ0-Ь2.

4. Для животных с высокой алкогольной мотивацией характерно относительно более быстрое прогрессирование алкогольной кардиомио-патии. Количественные характеристики кардиомиоцитов (уменьшение численной плотности, средних размеров и нарушение тинкториальных свойств цитоплазмы) коррелируют с показателями токсического повреждения нейронов и реакции сателлитов в висцеральных ганглиях сердца и звездчатом ганглии.

5. Развитие алкогольного поражения печени не имеет особенностей, связанных с различиями в алкогольной мотивации, но ее количественные признаки (снижение объемной доли паренхимы, увеличение объемной доли соединительной ткани) имеют многочисленные корреляционные связи с показателями токсического повреждения нейронов и реакции сателлитов в висцеральных ганглиях печени и паравертебральных ганглиях на уровне ТЬЗ-ТЬ9.

6. Более быстрое и выраженное развитие алкогольной нефропатии характерно для животных с низкой алкогольной мотивацией. Количественные характеристики патологии почек (уменьшение объемной доли клубочков и мочевого пространства, степень повреждения канальцевого эпителия и увеличение объемной доли соединительной ткани) коррелируют с показателями токсического повреждения нейронов и реакции сателлитов в висцеральных ганглиях почек и паравертебральных ганглиях на уровне ТЬ9-Ь2.