Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Морфофункциональное исследование биоаминсодержащих структур тимуса в условиях антигенного воздействия и спленэктомии

РГБ 01

Стручко Глеб Юрьевич 2 О 1999

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Б И О АМИНСОДЕРЖ АЩИХ СТРУКТУР ТИМУСА В УСЛОВИЯХ АНТИГЕННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ И СПЛЕНЭКТОМИИ

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Стручко Глеб Юрьевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОАМИНСОДЕРЖАЩИX СТРУКТУР ТИМУСА В УСЛОВИЯХ АНТИГЕННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ И СПЛЕНЭКТОМИИ

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в медицинском институте Чувашского государственного университета им. И.Н. Ульянова

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор В.Е. СЕРГЕЕВА

Научный консультант: Заслуженный деятель науки ЧР,

доктор медицинских наук, профессор Л.М. МЕРКУЛОВА

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор В.В. ВАЛИУЛЛИН;

доктор медицинских наук, профессор М.В. УГЛОВА

Московский медицинский стоматологический институт им. H.A. Семашко

Защита состоится <<Л9 » ЩоМЯ 1999 г. в «~// » часов на заседании диссертационного совета К 064.15.11 в Чувашском государственном университете им. H.H. Ульянова по адресу: 428015, г. Чебоксары, Московский проспект,45

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке университета.

Автореферат разослан » 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук,

доцент А.Т. Смородченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Настоящее исследование является частью комплексной темы "Гистохимия биогенных аминов в морфофункциональном состоянии органов и тканей в норме и эксперименте" и входит в Координационный план РАМН.

К настоящему времени многие аспекты строения, функции, взаимодействия между клеточными структурами тимуса остаются неизученными (Ивановская Т.Е. и др., 1996; Харченко В.П. и др., 1998; Vander V et al., 1996; Iotti A et al., 1998; Coronato S-, 1998). Интерес к этим вопросам возрастает в связи с увеличением числа заболеваний, связанных с нарушениями иммунитета, а также отсутствием в практической медицине надежных способов профилактики и лечения патологий иммунной системы. Кроме того, тимус, как центральный орган иммунитета, принимает непосредственное участие в развитии аутоиммунных заболеваний вследствие нарушения элиминации «запрещенных» (аутоаг-рессивных) клонов лимфоцитов (Йегер JL, 1990; Харченко и др., 1998; Cohen J., 1986). Поэтому всестороннее исследование морфофункциональной организации тимуса является важным и перспективным направлением современной морфологии (Виноградов С,Ю. и др., 1996; Ивановская Т.Е. и др., 1996; Ventura R.G. et al., 1993; Milosevic D. et al., 1994; Bittencourt A.M. et al., 1995).

Спектр биологических эффектов биогенных аминов весьма обширен. Они регулируют большое количество процессов, поэтому нарушение синтеза и секреции биогенных аминов в различных структурах тпмуса обязательно скажется на функциональном состоянии иммунной, нервной и эндокринной системах организма (Белоусов Ю.Б., 1992; Гущин Г.В., 1992; Шиляев P.P. и др., 1996; Kleine-Tebbe J. et. al., 1990; Bado A. et. al., 1992; Aita M., 1993; iMarchelti B. et. al., 1994; Hasko G. et. al., 1995). Продукция биогенных аминов зависит от функционального состояния тимуса и наоборот (Гордон Д.С. и др., 1996; Виноградов С.Ю. и др., 1996). Однако не изучены механизмы регуляции синтеза и инактивации биогенных аминов, а также механизмы взаимодействия биоамин-содержащих структур тимуса.

Доказано, что при контакте организма с антигеном важное значение принадлежит нейромедиаторам, играющих роль как посредников для передачи нервных стимулов на лимфоидные клетки и обеспечивающих нейроиммуномо-дуляцию в зависимости от концентрации и соотношения друг к другу, так и непосредственно участвующих, в различных иммунных реакциях (Голубева H.H., 1984; Девойно Л.В. и др., 1985; Юрина H.A., 1988; Корнева Е.А. и др., 1988; Гордон Д.С., 1996).

К сожалению, в литературе практически отсутствуют данные о состоянии биоаминсодержащих структур тимуса в продуктивную фазу иммунного ответа после введения растворимого антигена, хотя имеются сведения об изучении влияния растворимого антигена на структуры тимуса в ранние сроки (от 10 минут до 4 часов) после введения (Сергеева В.Е., 1976-1996; Любовцева Л.А., 1980-1994; Сысоева Л.А., 1987; Гордон Б.М., 1990).

Особый интерес представляют все более часто встречающиеся вторичные иммунодефидиты после спленэктомии. В литературе много сведений о клинических и иммунологических нарушениях после удаления селезенки (Дурдыев М.Д. и др., 1985; Самсыгин С.А. и др., 1985; Кущ Н.Л. и др., 1987; Епифанов Н.С., 1991), но совершенно отсутствуют работы, которые касались бы исследования роли биогенных аминов тимуса в развитии постспленэктомического ги-поспленизма.

Приведенные выше данные свидетельствуют о важной роли тимуса и биогенных аминов в реализации различных иммунных процессов и о наличии многих нерешенных вопросов в этой проблеме.

Таким образом, исследование биогенных аминов в структурах тимуса в условиях антигенной стимуляции и после удаления селезенки в конце индуктивной и продуктивную фазы иммунного ответа, а также сравнение этих воздействий можно рассматривать как важную актуальную научную задачу для гистологии, иммунологии и иммуноморфологии.

Цель исследования. Изучить морфофункциональное состояние тимуса в условиях иммуностимуляции (введение растворимого антигена) и имунносу-прессии (спленэктомия) в конце индуктивной и продуктивную фазы иммунного ответа.

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:

1. Дать качественную характеристику тимусной дольки и определить содержание серотонина, катехоламинов и гистамина у интактньтх животных в различные месяцы года.

2. Исследовать обеспеченность биогенными аминами структур тимуса через 1,3,5.14 суток после введения растворимого антигена.

3. Исследовать биоаминсодержащие структуры тимуса через 3,7,15 дней после спленэктомии. Сравнить полученные данные с результатами после антигенной иммуностимуляции.

4. Исследовать содержание сопряженных с биогенными аминами веществ - гликозаминогликанов и связанных липидов, изучить состояние тучных клеток в условиях иммуностимуляции (введение растворимого антигена) и имунносу-прессии (спленэктомия).

5. Провести корреляционный анализ по обеспеченности биогенными аминами структур тимуса после введения растворимого антигена и спленэктомии.

Научная новизна работы.

Впервые описаны количественные и качественные изменения биоамино-содержащих структур тимуса через 1,3,5 и 14 суток после введения растворимого антигена (иммуностимуляция). Выявлена существенная разница в обеспеченности нейромедиаторами премедуллярных, субкапсулярных, тучных клеток, лимфоцитов тимуса при введении иммуноглобулина и физраствора.

Новыми следует считать данные о том, что сезонность имеет существенное значение в определении направления иммунных реакций тимуса крыс после введения растворимого антигена.

Впервые представлены данные о морфофункциональном состоянии био-аминсодержащих структур тимуса через 3,7 и 15 суток после удаления селезенки (иммуносупрессия).

Впервые изучена корреляционная взаимосвязь между биоаминосодержа-щими структурами тимуса и их микроокружением в условиях иммуностимуля-ции (введение растворимого антигена) и кмунносупрессии (спленэкгомия).

Научно-практическая значимость работы.

Результаты исследования существенно расширяют представления о ней-роморфологии тимуса как центрального органа иммуногенеза в норме, в условиях иммуностимуляции (введение растворимого антигена) и имушюсупрессии (спленэктомия). Выявленные сезонные колебания концентраций биогенных аминов в различных структурах тимуса, несомненно, полезны для хронобиологии. Данные об особенностях обеспечения биогенными аминами тканевых структур тимуса в индуктивную и продуктивную фазы иммуногенеза после введения растворимого антигена и спленэктомии должны быть использованы при изучении патогенеза ряда иммунных нарушений.

Для практической иммунологии, безусловно, важны полученные результаты о том, что введение иммуноглобулина в качестве антигена - это существенное воздействие на собственную иммунную систему организма, приводящее к перераспределению в тимусе серотошша, катехоламинов и гистамкна, от которых во многом зависит сила и направление иммунного ответа. Это следует учитывать в практической медицине, в частности, при одновременном назначении фармпрепаратов, влияющих на медиаторный обмен.

Выявленные нами морфофункциональные изменения в тимусе после спленэктомии, приводящие к акциденталыюй инволюции органа и, в дальнейшем, к вторичному иммунодефициту, несомненно, ограничивают показания к тотальному удалению селезенки, что следует иметь ввиду врачам-хирургам и гематологам.

Полученные результаты используются в лекциях, читаемых на кафедрах медицинской биологии и гистологии, функциональной и лабораторной диагностики медицинского института при Чувашском государственном университете, а также в практической работе врачей-иммунологов Республиканского диагностического центра МЗ ЧР. Результаты исследования нашли отражение в опубликованных статьях, тезисах и сообщениях.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В конце индуктивной и продуктивную фазы иммунного ответа после введения растворимого антигена выявляются морфофункциональные изменения со стороны премедуллярных, субкапсулярных, тучных клеток, тимоцитов коркового и мозгового вещества тимуса, свидетельствующие об активации иммунных процессов: увеличение количества аминоцитов с параллельным нарас-

танием в них биогенных аминов, изменение морфологической структуры ти-мусной дольки. Выраженность и направление реакции биоаминсодержащих структур тимуса на введение растворимого антигена зависят от сезонов года.

2. Экспериментальное удаление селезенки, рассматриваемое в научной литературе как иммуносупрессивное воздействие, приводит к уменьшению размеров коркового и мозгового вещества дольки тимуса, значительному увеличению молодых форм тучных клеток, а также преобладанию гистамина во всех изучаемых структурах, особенно лимфоцитарной паренхимы, что характерно для акцидентальной инволюции тимуса.

3. Иммуностимуляция (введение растворимого антигена) и иммуносу-прессия (спленэктомия) приводят к перераспределению функциональных корреляционных связей между биоаминосодержащими структурами тимуса, изменению сопутствующих нейромедиаторам веществ (гликозаминогликанов, связанных липидов), а также качественного и количественного состава тучнокле-точной популяции тимуса. Но эти изменения существенно различны и отличаются от контрольной группы животных.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на: Международных медицинских конгрессах студентов (Каир, Египет, 1996,1997; Эйлат, Израиль, 1997; Стамбул, Турция, 1998); Всероссийской студенческой конференции "Актуальные вопросы медицины" (Москва, 1994); Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной юбилею Кубанской медицинской академии (Краснодар, 1995); объединенной научной сессии "Проблемы лимфологии и количественной патологии" (Москва, 1997); 1-ой и 2-ой национальной конференции Российской Ассоциации Аллергологов и Клинических иммунологов (РААКИ): современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии (Москва, 1997); III Международной конференции по функциональной нейроморфологии "Колосовские чтения-97" (Санкт-Петербург, 1997); научном совещании, посвященном 100-летию со дня рождения И.Г. Хлопина "Гистогенетический анализ изменчивости и регенерация тканей" (Санкт-Петербург, 1997); конференции молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины", посвященной 240-летию ММА им. И.М. Сеченова (Москва, 1998); итоговых научных конференциях Чувашского государственного университета (Чебоксары, 1994-1998).

По итогам открытого конкурса 1996 года работа автора "Люминесцентно-гистохимическая характеристика тучных клеток тимуса крыс в эксперименте" Государственным Комитетом Российской Федерации по высшему образованию была удостоена медали "За лучшую научную студенческую работу" (Москва, 1996).

Публикации. Опубликовано по теме диссертации 28 работ в материалах международных, Всероссийских, республиканских и областных научных конференций, из них 1 - монография, 6 - статей, 21 - тезис.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 184 страницах машинописного текста (собственно текста 148 страниц), состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методик, трех разделов собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 70 рисунками. Список литературы включает 374 источников, в том числе 165 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 210 белых беспородных крысах-самцах массой 170-300 г. Объектом исследования служил тимус, который извлекался под глубоким эфирным наркозом в одно и то же время суток (с 15 до 18 часов). При оценке результатов экспериментов всегда учитывали время года.

Были проведены следующие II серии опытов:

I серия: эксперименты с введением растворимого антигена (человеческого противокоревого гамма-глобулина), которые проводились в течение всего года. Животные были разделены на 3 группы:

1-я - интактная (44 крысы);

2-я - контрольная (54 крысы, которым вводили внутрибрюшинно 1 мл физиологического раствора);

3-я - опытная (57 крыс, которым внутрибрюшинно вводили в качестве антигена человеческий противокоревой гамма-глобулин из расчета 0,5 мг на 100 г массы крысы. Доза адекватна человеческой лечебной, исходя из соотношения средней массы крысы и человека).

Тимус забирался через 1, 3, 5 и 14 суток после воздействия.

Н серия: эксперименты с удалением селезенки. Животные были разделены на 3 группы:

1 -я - интактная (10 крыс);

2-я - ложнооперированные животные (15 крыс, которым производился разрез по белой линии живота с дальнейшим наложением швов);

3-я - опытная (30 крыс, которым удалялась селезенка через разрез по белой линии живота. Спленэктомию проводили под глубоким эфирным масочным наркозом с соблюдением всех правил асептики и антисептики).

Тимус забирался через 3, 7 и 15 суток после воздействия.

Криостатные срезы тимуса обрабатывались следующими методами.

1. Люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной - для избирательного выявления биоаминсодержащих структур тимуса.

2. Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Эвена, Роста - с целью идентификации гистаминсодержащих структур тимуса.

3. Цитоспектрофлуориметрия - для оценки количественного уровня кате-холаминов, серотонина и гистамина в аминосодержащих структурах тимуса.

4. Метод окраски полихромным толуидиновым синим по Унна - для качественной и количественной характеристики тучных клеток.

5. Окраска Суданом черным "В" - для выявления внутриклеточных липи-

дов.

6. Окраска альциановым синим и сафранином по Спайсеру - для выявления зрелого гепарина и других кислых гликозаминогликанов с одновременным выявлением протеинов сафранином.

7. Окраска гематоксилином-эозином - в качестве общегистологической окраски с последующей морфометрией коркового и мозгового вещества.

8. Корреляционный анализ - для выявления достоверной взаимосвязи между показателями интенсивности люминесценции катехоламинов, серотонина и гистамина в изучаемых структурах тимуса.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Биоаминсодержащие структуры тимуса у интактных животных

Проведенные исследования показали, что у интактных крыс всегда четко очерчены дольки тимуса с заметным корковым и мозговым веществами. На границе кортикомедуллярной зоны располагается ряд гранулированных люми-несцирующих клеток, условно названных «премедуллярные клетки». Обычно это яркие клетки с желтовато-белыми гранулами, ограничивающие мозговое вещество в виде кольца или ободка. По периферии дольки выявляются более мелкие, беспорядочно расположенные, «субкапсулярные клетки» с беловато-желтыми включениями в цитоплазме. Во внутренней кортикальной зоне, по ходу кровеносных сосудов, на периферии долек обнаруживаются тучные клетки, которые располагаются обычно группами по 3-4 клетки.

Сезонность. Анализ литературных данных и собственных экспериментов, проводимых в разные времена года, позволяет сделать заключение, что концентрация моно- и диаминов в люминесцирующих структурах тимуса интактных животных весьма лабильна и определяется сезонами года (рис. 1,2).

Весной, особенно в марте, отмечается значительный подъем уровня моно- и диаминов во всех изучаемых структурах тимуса и регистрируется первый пик концентрации биоаминов. Весенняя активация аминопродуцентов (преме-дуллярных клеток) приводит к компенсаторному повышению нагрузки на ами-нопоглотители (субкапсулярные клетки) и увеличению адсорбционной способности тучных клеток, количество которых в эти месяцы заметно возрастает и в септах, и в паренхиме железы. Усиленная люминесценция аминоцитов тимуса на фоне диффузного свечения тимоцитов коркового и мозгового веществ сопровождается повышенной выявляемостью адренергических нервов с варикозными утолщениями, содержащих большое количество медиаторов. Характерным для всех аминосодержащих структур тимуса также является отмеченная нами положительная реакция с Суданом черным "В" на фосфолипиды, которые,

Рис.2. Динамика сезонных изменений серотонина в тамоцитах коркового вещества тамуса у интактных животных и через 1 сутки после введения растворимого антигена и физиологического раствора

интактныа животные----растворимый антиген.......физиологический раствор

по мнению ряда авторов, обладают аминосвязывающей способностью (Сергеева В.Е., Гордон Д.С., 1992; Vandongen R., 1984).

Летний период отличается снижением уровня нейромедиаторов в люми-нссцирующих структурах тимуса и сокращением количества самих аминоци-тов. Если в июле предпочтение за места связывания в клеточных структурах тимуса отдается катехоламинам, то в августе преобладает гистамин. Как известно, между гистамином, серотонином и катехоламинами в организме существует тесная связь. Конкурентные взаимоотношения между моно- и диаминами наблюдаются как на уровне рецепторов, так и на уровне внутриклеточных передатчиков (Соломонов В.Г. и др., 1990). Классический пример их взаимодействия как раз и наблюдался нами в летние месяцы: преобладание катехола-минов в аминопродуцентах и аминопоглотителях приводит к снижению концентрации серотонина и гистамина в этих клетках и увеличению их в окружающих тимоцитах. К концу августа в аминоцитах тимусной дольки мы наблюдали преобладание гистамина, который вытеснял катехоламины в паренхиму коркового и мозгового веществ. При этом аминопоглотительная способность субкапсулярных клеток пока еще оставалась на низком уровне. Такое перераспределение биогенных аминов, возможно, является физиологичным, так как будет стимулировать процессы иммуногенеза в тимусе в осенний период.

Осенью регистрируются скачкообразные изменения интенсивности свечения биоаминов, содержание которых достигает своего пика в сентябре и ноябре. Однако, если в сентябре в люминесцирующих клетках тимуса преобладает гистамин и катехоламины, достигая своих максимальных годовых значений, то в ноябре аминосинтетическая способность премедуллярных клеток направлена на увеличение концентрации серотонина. В ответ на повышение активности аминоцитов начинают выявляться тучные клетки с pj- и Рз-метахромазией, что, вероятно, является результатом инициации серотонином их ядерной программы, направленной на выработку гепарина (Csaba G., 1971). К концу ноября повышается процент тучных клеток с альцианофилией гранул цитоплазмы.

В осеннее время года, по сравнению с предыдущим сезоном, нами регистрируется увеличение количества мембранных фосфолипидов в премедуллярных, субкапсулярных и тучных клетках, которые обладают биоаминсвязываю-щей способностью и предотвращают тем самым избыточную активацию кортикальных и медуллярных лимфоцитов.

В зимние месяцы отмечается уменьшение не только количества премедуллярных и субкапсулярных клеток, но и уровня биоаминов в них, особенно низким становится концентрация гистамина и катехоламинов с преобладанием серотонина. Тимоцитарная паренхима коркового и мозгового вещества, а также перимастоцитарного пространства люминесцирует слабым темно-зеленым свечением. Количество серотонина становится меньше по сравнению с предыдущим сезоном на 33%, катехоламинов - на 45%, а гистамина - в 2,5 раза.

Изменяются морфологические свойства тучных клеток, которые выявляются, в основном, в соединительнотканных перегородках и в кортико-медуллярной зоне. Это клетки со слабо сульфатированным созревающим гепа-

рином, окрашивающиеся Ргметахроматично. Параллельная окраска альциано-вым синим и сафранином выявляет чаще зрелые клетки с сафранинофильной цитоплазмай и замаскированным ядром. Встречаются микстовые виды с аль-цианофильным ядром.

Таким образом, степень концентрации биоаминов в аминоцитах тимуса в разное время года изменяется довольно резко, что важно учитывать при унификации результатов экспериментов, проводимых в различные периоды года.

2. Биоаминсодержащие структуры тимуса после введения растворимого антигена

Установлено, что введение растворимого антигена приводит к перераспределению биоаминов в люминесцирующих структурах тимуса. Степень и направление реакции зависят от сезона проведения опытов.

Так, в весенние месяцы через 1 сутки после введения у-глобулина на фоне высокого исходного содержания нейромедиаторов в органах иммунитета наблюдается достоверное понижение концентрации катехоламинов в преме-дуллярных и субкапсулярных клетках с одновременным некоторым повышением биоаминов в тимоцитах коркового и мозгового веществ. Значительно повышается выявляемость тучных клеток, особенно в.соединительнотканных перегородках. В основном это молодые формы тучных клеток, окра шизающяеся (51 -метахроматично.

Летом через 1 сутки после иммунизации выявляется достоверное стяжение уровня биоаминов в аминопродуцентах и увеличение та в амикопоглоти-телях, что приводит к медиаторному "обеднению" лимфоцитарной паренхимы коркового вещества. Как и в предыдущем сезоне года, введение растворимого антигена приводит к значительному увеличению количества тучных клеток со сниженным содержанием моноаминов и повышенной концентрацией диаминов. Однако их морфологические свойства разительно отличаются от весенних экспериментов: до 72% - это Т-2 и Т-3 формы, причем 2/3 из них приходится на полностью дегранулированные Т-3 формы тучных клеток. Это единственный сезон и единственный срок воздействия, когда тучные клетки окрашиваются у-метахроматично.

Осенью, когда у интактных животных наблюдаются наиболее высокие показатели биоаминов, введение иммуноглобулина приводит к снижению концентрации биоаминов в премедуллярных и субкапсулярных клетках, что слабо отражается на их уровне в тимоцитарной паренхиме. Исключение составляет уровень серотонина в субкапсулярных клетках, который не изменяется по сравнению с нормой ни весной, ни летом, ни осенью. Из выше упомянутого видно, что весной и осенью реакция люминесцирующих структур вилочковой железы на антиген идентичная. Но, в отличие от весенних экспериментов, не наблюдается количественных и качественных изменений со стороны тучных клеток, за исключением "омоложения" популяции тучных клеток в паренхиме железы.

В зимний период введение растворимого антигена вызывает эффект, абсолютно противоположный летнему: активизируются синтез медиаторов в аминопродуцентах и процесс их накопления в аминопоглотителях. Тимоциты приобретают диффузное зеленоватое свечение с желтоватым оттенком за счет экзоцитоза гранул биоаминов, содержание которых увеличивается в 1,6 - 1,7 раза. Почти в 3 раза увеличивается концентрация моноаминов в тимоцитах пе-римастоцитарного пространства на фоне двукратного повышения молодых форм тучных клеток.

Как видно из проведенных нами опытов, однодневный контакт с антигеном весной, летом и осенью приводит к подавлению бноаминных реакций в тимусной дольке. Однако сезонные влияния сказываются и на механизмах этих реакций. Так по данным Б.М. Гордон (1990) и В.Е. Сергеевой (1992) весной и осенью отмечено значительное повышение уровней биоаминов в структурах тимуса уже через несколько часов после антигенного воздействия, что является своеобразным стрессовым фактором для развивающихся лимфоцитов. В наших экспериментах через сутки выявляется гораздо меньшее количество люминес-цирующих нервных волокон и понижение аминосинтетической способности премедуллярных клеток, что можно рассматривать как ослабление нервных влияний в ответ на повышение уровня биоаминов в первые часы. Еще одним механизмом предотвращения накопления большого количества медиаторов в межклеточных пространствах через 1 сутки после введения антигена является увеличение тучных клеток, которые, вероятно, мигрируют сюда в виде предшественников из костного мозга и принимают участие в создании определенного биоамшшого микроокружения для тимоцитов. Тучные клетки, связывая биогенные амины, инактивируют их кислыми гликозаминогликанами, увеличение которых наблюдается нами в весенний и осенний периоды.

В летние месяцы через 24 часа после введения растворимого антигена нами регистрируются другие механизмы инактивации биогенных аминов. Во-первых, отмечается усиление аминопоглотительной способности клеток суб-капсулярного ряда на фоне низкой активности тучных клеток по адсорбции биоаминов. Во-вторых, значительно увеличивается выявляемое™ фосфолипи-дов, обладающих аминосвязывающей способностью.

Зимой отмечается замедленная реакция со стороны аминосодержащих структур тимуса. Уровень моно- и диаминов постепенно нарастает в первые часы после контакта организма с антигеном (Сергеева В.Е., 1991) и достигает максимума через 1 сутки. Это, вероятно, является результатом либо сниженной активности в это время года премедуллярных клеток, либо замедленным ответом биоаминсвязывающих структур тимуса на выброс медиаторов. Именно поэтому лишь через сутки после введения у-глобулина выявляется максимальный ответ нейроэндокринных структур тимуса, который в другие сезоны описан уже в первые часы (Сергеева В.Е., 1991).

Эксперименты по исследованию тимуса через 3,5 и 14 суток после введения растворимого антигена проводились в августе. Месяц август был выбран

как наиболее стабильный по содержанию биогенных аминов в структурах тимуса.

Через 3 суток после введения человеческого иммуноглобулина в качестве антигена наблюдается постепенное возрастание уровня моноаминов в ами-нопродуцирующих клетках, но их содержание остается ниже интактного уровня (рис. 3). Клетки субкапсулярного ряда, люминесцирующие ярким беловато-желтым свечением, образуют четкий ряд в 2-3 слоя на периферии дольки. Существенных различий в интенсивности свечения тимоцитов коркового и мозгового веществ, а также микроокружения тучных клеток замечено не было. Концентрация гистамина в вышеуказанных структурах превышает контрольный уровень.

Содержание биогенных аминов в тучных клетках достигает низких для этих клеток показателей. Большинство этих клеток разрыхлены, дегранулиро-ваны, без нарушения целостности контуров клетки. Параллельная окраска срезов другими гистохимическими методиками показала некоторое снижение количества тучных клеток, особенно по сравнению с однодневным сроком после иммунизации. Заметного отличия от нормы по степени дегрануляции не обнаружено: в септе преобладают Т-2 и Т-3 формы (62%), из них 34% приходиа-л на полностью дегранулированные клетки.

На 5-е сутки после введения антигена концентрация серотошил vi кйте-холаминов в клетках внутренней кортикальной зоны возрастает ;; 1,5 раза по сравнению с нормой и в 2,3 раза по сравнению с однодневным сроком (рис. 1 Интенсивность свечения гистамина в этот срок превышает исходным уровень лишь на 40%. Визуально эти клетки выглядят яркими, округлыми с белс^то-желтой люминесценцией и образуют 3-4 ряда вокруг мозгового вещества. Снаружи от скоплений премедуллярных клеток расположены также интенсивно люминесцирующие субкапсулярные клетки. Уровень нейромедиатеров в последних превышает средние значения у интактных и контрольных животных, причем гистамин и норадреналин превалируют над серотонином.

Окраска на фосфолипиды показала наличие визуального параллелизма между премедулляриыми и субкапсулярными клетками но Фальку и лииидо-фильными клетками, число которых относительно одинаково. Слабая липидо-филия тимоцитов коркового и мозгового веществ сочетается с относительно невысоким содержанием биоаминов в этих структурах. Вероятно, это связано либо со снижением выброса медиаторов из аминопродуцентов, либо с усилением их эндоцитоза аминопоглотителями. Возможно, проявляются оба вышеуказанных феномена.

Через 2 недели после введения растворимого антигена содержание моноаминов в премедуллярных клетках достоверно выше исходных показателей на 20%, гистамина - на 57%, но намечается тенденция к снижению биоаминной активности этих клеток.

Субкапсулярные клетки реагируют аналогичным образом. Их поглотительные свойства способствуют накоплению медиаторов в клетках в большей степени, чем в норме, но, как и в премедуллярных клетках, здесь тоже намечается замедление этого процесса. Уровень биоаминов в тимоцитах коркового и мозгового веществ продолжает нарастать, достигая максимальных значений.

Окрашивание препаратов Суданом черным "В" выявляет четкий ряд темно-коричневых суданположительных клеток премедуллярного и субкапсуляр-ного ряда на фоне серо-желтой паренхимы тимуса. Среди этого ряда и по ходу септ обнаруживаются тучные клетки темно-серого цвета, разной степени де-грануляции. У интактных крыс применение этого метода выявляет лишь редкие скопления премедуллярных клеток серого цвета и единичные молодые тучные клетки на фоне слабопозитивной к Судану паренхиме коркового и мозгового веществ.

Введение растворимого антигена приводит к волнообразному изменению тучноклеточной популяции в септах тимусной дольки. Через 1 сутки появляется большое количество дегранулированных форм, через 3 суток - наблюдается "омоложение" тучных клеток, на 5-е сутки отмечается новая волна дегрануля-ции, а к 2-м неделям после введения антигена - повторное обновление популяции клеток, которые слабо отличаются от интактной группы животных. Тучные клетки в паренхиме тимуса выявляются значительно реже, но в 74% - это Т-2 и Т-3 виды клеток, что на 35% выше уровня подобных клеток у интактных и контрольных крыс.

3. Биоаминсодержащие структуры тимуса после спленэктомии

Эксперименты с удалением селезенки также проводились в августе для сравнения с результатами после введения растворимого антигена.

Экспериментальное удаление селезенки приводит к цитоморфологиче-ским изменениям в тимусной дольке. Так, через 3 суток премедуллярные клетки располагаются в 2-3, а в некоторых дольках - в 3-4 ряда вокруг мозгового вещества, принимающего неправильно овальную форму. Несмотря на то, что количество премедуллярных клеток в поле зрения практически не изменяется, они становятся более крупными, с ярко-желтым свечением и множеством плотно упакованных гранул внутри клетки. Количество серотонина в них возрастает по сравнению с интактным тимусом в 1,6 раз, гистамина - в 1,9 раз, ка-техоламинов - в 1,5 раз, причем уровень гистамина преобладает над другими аминами (рис. 4).

Аналогичные изменения происходят и в люминесцирующих клетках суб-капсулЛрного ряда, количество которых возрастает почти в 2 раза.

Вышеописанное увеличение биогенных аминов в клетках-продуцентах и клетках-поглотителях слабо сказывается на медиаторном обеспечении ткмоци-тов коркового и мозгового вещества тимуса. На препаратах, окрашенных гематоксилином-эозином, выявляется уменьшение размеров коркового вещества (от 170,13 мкм до 147,32 мкм) и увеличение размеров мозгового вещества (с 299,59 мкм до 335,88 мкм).

На фоне четко структурированной картины отмечаются участки скопления премедуллярных клеток с очень высоким содержанием биогенных аминов, содержание медиаторов в которых в 4-5 раз превышает уровень в близлежащих клетках премедуллярной зоны и в 6-8 раз - нормальные показатели. Такие участки выявлялись по одному на 3-4 дольки. Корковые тимоциты, находящиеся вокруг таких клеток, содержат в 1,5-2 раза биоаминов больше, чем лимфоциты других областей этой же дольки.

Удаление селезенки приводит к изменению качественного, и количественного состава тучных клеток. Количество тучных клеток возрастает в 1,5 - 2 раза. Клетки крупные, овальной формы с небольшим ядром в центре. Гранулы плотно упакованы и плохо дифференцируются. Уровень биогенных аминов в них достоверно увеличивается в 1,5-1,7 раз с незначительным преобладанием гистамина.

Через 7 суток после спленэктомии количество люминесцирующих клеток тимусной дольки увеличивается в поле зрения на 55% по сравнению с интакт-ными и ложнооперированными животными. Дольки четкие, небольших размеров, с хорошо ограниченным корковым и мозговым веществом. Обычно вокруг таких долек выявляются около 5-6 более мелких по размеру долек с прерывистым рядом люминесцирующих клеток. Такие «дольки-сателлиты» не обнаруживаются у интактной и контрольной групп животных.

Уровень нейромедиаторов в премедуллярных клетках по сравнению с трехдневным сроком практически не изменяется, но превышает контрольный уровень в 1,7 раз (рис. 4).

Рис. 4 Гистограмма интенсивности свечения биоаминов в премедуллярных клетках тимуса у интактных животных, через 3,7,15 суток после сплензктомии (с/экт) и ложной операции (л/о)

¡□серотанин игистамин о катехоламины |

Субкапсулярный ряд клеток плохо дифференцируется от премедуллярно-го. Содержание биогенных аминов в них несколько снижается по сравнению с предыдущим сроком, но превышает контрольные цифры в 1,4-1,5 раз. Уровень гистамина в них в 1,6 раз больше уровня серотонина и в 1,4 раза выше концентрации катехоламинов.

Между рядами субкапсулярных и премедуллярных клеток располагается корковое вещество с диффузным желтовато-зеленым свечением. Размеры коркового вещества продолжают уменьшаться и составляют 73% от исходных величин. Впервые отмечается уменьшение размеров мозгового слоя, которые составляют 67% от нормы.

Окраска толуидиновым синим позволила выявить значительное увеличение тучных клеток. Абсолютное их количество возрастает в 7-10 раз по сравнению с нормой. В септе и паренхиме тимуса в 2 раза увеличивается количество Т-0 и Т-1 форм тучных клеток на фоне значительного снижения Т-2 и Т-3 форм (в септе на 19% и 9%, в паренхиме - на 14% и 15% соответственно). Тучные клетки окрашиваются, в основном, рг и р2-метахроматично и встречаются не только в соединительнотканных перегородках и паренхиме тимуса, но и в жировой ткани, окружающей орган и обладающей люминесценцией.

Через 15 дней после удаления селезенки при люминесцентной микроскопии обнаруживается значительное уменьшение размеров и коркового, и мозгового вещества. Вокруг небольших долек неправильной формы располагаются по 6-8 «долек-сателлитов». Они состоят из мелких клеток, хаотично расположенных в паренхиме железы и имеющих характерную беловато-желтую люминесценцию.

Уменьшение размеров коркового и мозгового слоев подтверждается и при морфометрии срезов, окрашенных гематоксилином-эозином. Корковое вещество сокращается в 2,1 раза и составляет 81,8 мкм, а мозговое - в 2,3 раза и составляет 137 мкм.

Несмотря на то, что абсолютное количество премедуллярных клеток в поле зрения изменяется незначительно по сравнению с нормой, концентрация биоаминов продолжает заметно нарастать. Количество серотонина и гистамина превышает исходные значения в 1,8 раз, а гистамина - 2,2 раза. Концентрация медиаторов в субкапсулярных клетках также продолжает нарастать, но менее интенсивно, чем в премедуллярных клетках. Интенсивность свечения лимфоцитов достоверно не изменяется.

Проведенный корреляционный анализ показал, что у интактных животных выявляются хорошие корреляционные связи между биоаминсодержащнми структурами в весенние и осенние месяцы, а слабые связи - в летние и особенно в зимние месяцы. Введение растворимого антигена нарушает установленные связи, при этом появляются совершенно новые корреляционные взаимоотношения. Так, если в летнее время года у интактных крыс высокий коэффициент корреляции по гистамину регистрируется у большинства исследуемых пар, то через 1 сутки после иммунизации и количество, и сила корреляционных взаимоотношений сокращается почти вдвое. Параллельно этому регистрируется высокий коэффициент корреляции во многих исследуемых парах по катехола-минам. К 3 дням отмечается не только увеличение количества структур, поддерживающих между собой функциональные связи по всем биоаминам (особенно по гистамину и серотонину), но и рост силы функциональных взаимоотношений. Следует отметить, что такая активация гистамин- и серотонинсодер-жащих структур тимуса отмечается на фоне некоторой депрессии синтеза биоаминов. Через 5 суток, когда выявляется значительное увеличение уровня биогенных аминов и активация иммунного ответа, биоаминсодержащие структуры тимусной дольки утрачивают силу корреляционной связи по серотонину и ка-техоламинам, а также заметно сокращают количество пар со значимым коэффициентом корреляции по гистамину. Реакция люминесцирующих структур тимуса на введение физраствора в этот период исследования абсолютно противоположна. К концу второй недели после воздействия у-глобулином отмечается повторная волна увеличения количества корреляционных связей и их силы, и намечается лишь тенденция к восстановлению первоначальных физиологических взаимоотношений структур тимуса, участвующих в поддержании регуляции местного гомеостаза.

Удаление селезенки также приводит к перераспределению силы и направления функциональных корреляционных связей между биоаминсодержа-щими структурами тимуса, но картина отличается от таковой при введении растворимого антигена и ложнооперированных животных. Через 3 суток после спленэктомии отмечается усиление взаимодействий между катехоламинерги-ческими структурами дольки тимуса. На 7-е сутки активизируются гистаминер-гические структуры на фоне нарастающей акцидентальной инволюции тимуса. К 15 дням после операции, когда, по данным литературы, клинически уже выявляется синдром постспленэктомического гипоспленизма, нами регистрируется усиление взаимоотношений между серотонинсодержащими структурами тимуса.

Как видно из наших экспериментов, корреляционный анализ подтверждает не только отличие действия антигена и спленэктомии, но и является очень чувствительным тестом к антигенным и неантигенным факторам воздействия, влекущим за собой изменения биоаминных взаимоотношений нейроэн-докринных структур тимуса.

Таким образом, нами установлено, что сезонный фактор имеет существенное значение в определении направления иммунных реакций тимуса лабораторных крыс на введение растворимого антигена, а также влияет на темп развития этих реакций. Также выявлено, что введение растворимого антигена приводит к иммуностимуляции центрального органа иммуногенеза, что проявляется увеличением количества аминоцитов с параллельным нарастанием в них биогенных аминов, изменением морфологической структуры тимусной дольки. По данным Л.С. Румянцевой (1977) в этот период увеличивается вес тимуса, значительно усиливается пролиферативная активность, увеличивается число средних и больших лимфоцитов, плазмацитов, макрофагов, а также нарастает число митозов. И по нашим данным, и по данным Л.С. Румянцевой (1977) максимальный ответ тимуса на введение растворимого антигена регистрируется на 5 сутки после воздействия.

Удаление селезенки, напротив, приводит к подавлению иммунного ответа и развитию акцидентальной инволюции тимуса, что выражается достоверным уменьшением размеров коркового и мозгового вещества дольки, значительным увеличением тучноклеточной популяции, а также преобладанием гис-тамина во всех структурах тимуса, особенно в лимфоцитарной паренхиме органа.

Результаты работы позволяют предположить, что аминосодержащие структуры тимуса посредством синтеза, секреции и инактивации биогенных аминов участвуют, вероятно, в регуляции скорости дифференцировки и выброса лимфоцитов в периферическую кровь. Премедуллярные, субкапсулярные и тучные клетки, наряду с нервными волокнами принимают участие в создании определенного биоаминного гомеостаза в органе и, возможно, в организме в целом. Поэтому любое антигенное и неантигенное воздействие приводит к перестройке обеспечения биогенными аминами структур тимуса и, соответственно, изменению их функционирования.

ВЫВОДЫ

1. Концентрация биогенных аминов в люминесцирующих аминосодер-жащих структурах тимуса интактных крыс подвержена сезонным колебаниям. Выявлены три пика высокого содержания биогенных аминов в марте, сентябре, ноябре (по нарастающей). В летние и зимние месяцы во всех аминосодержа-щих структурах тимуса отмечены низкие показатели биоаминов.

2. Введение человеческого у-глобулина в качестве растворимого антигена приводит к изменению уровня биогенных аминов в премедуллярных, суб-капсулярных клетках, тимоцитах коркового и мозгового вещества, а также тучных клетках. Выраженность и направление реакции биоаминсодержащих структур тимуса через 1-14 суток носят волнообразный характер и зависят от сезонов года.

3. В ответ на введение растворимого антигена через 1 сутки достоверно снижается уровень серотонина и катехоламинов в премедуллярных и тучных клетках тимуса, но увеличивается концентрация гистамина в субкапсулярных, тучных клетках, а также тимоцитах мозгового вещества. Интенсивность свечения биогенных аминов во всех изученных структурах нарастает через 3 суток, достигая максимальных величин на 5 сутки после воздействия. Тенденция к нормализации уровня биогенных аминов в тимусе выявляется лишь к концу 14 суток после введения растворимого антигена.

4. Экспериментальное удаление селезенки у крыс приводит к значительному изменению морфофункционального состояния биоаминсодержащих структур тимуса. Через 3 суток регистрируется достоверное увеличение уровня биогенных аминов во всех изученных структурах тимуса. Через 7 суток отмечается дальнейший рост биоаминов, уменьшение размеров коркового и мозгового вещества, значительное увеличение количества молодых форм тучных клеток. Максимальная концентрация биогенных аминов, особенно гистамина, и дальнейшее уменьшение размеров коркового и мозгового вещества выявляются через 15 суток после спленэктомии.

5. Иммуностимуляция (введение растворимого антигена) и иммуносу-црессия (спленэктомия) приводят к разнонаправленным изменениям морфологии тучных клеток тимуса. Если после введения растворимого антигена наблюдается нарастание дегранулированных форм тучных клеток в тимусе и появление новых популяций этих клеток с р3- и у-метахромазией, то спленэктомия приводит к значительному увеличению молодых форм тучных клеток с Р,- и р2-метахромазией.

6. При введении растворимого антигена выявляется уменьшение и количества, и силы корреляционных взаимоотношений между биоаминсодержащи-ми структурами тимуса по серотонину и гистамину. Параллельно этому во многих исследуемых парах регистрируется высокий коэффициент корреляции по катехоламинам. В дальнейшем сила и направление функциональных взаимосвязей подвергается волнообразным изменениям с увеличением коэффициента корреляции по всем биогенным аминам на 3 и 14 сутки.

После спленэктомии на 3 сутки отмечается увеличение коэффициента корреляции между катехоламинсодержащими структурами тимуса, на 7 сутки -между гистаминсодержащими структурами, а через 15 суток высокий коэффициент корреляции выявляется между серотонинсодержащими люминесцирую-1цими клетками тимуса и их микроокружением.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Реакция нейромедиаторной системы тимуса на введение растворимого антигена // Мед. журнал Чувашии. - N1-2(4). - 1995. - С.118-119. (Соавт. - Сергеева В.Е., Петрова H.A., Павлова Н.Е.)

2. Respons of rat's thymus mast cells to immunisation // Amrit medical journal. Supplementary of vestnik.- V.l. - N1.- 1995,- P.12-13.

3. Адренергическая иннервация тимуса через сутки после введения иммуноглобулина человека // Тез. докл. 2 съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1995. - Ч.И. - С.417-418. (Соавт. - Сергеева В.Е., Петрова H.A.).

4. Люминесцентно-гистохимическое исследование тучных клеток тимуса у крыс после введения растворимого антигена // Тез. докл. студ. науч. общества, посвященного юбилею Кубанской государственной медицинской Академии. - Краснодар, 1995.- С.339-340. (Соавт. - Петрова H.A.).

5. Сезонные изменения биогенных аминов в структурах тимуса у крыс и влияние растворимого антигена на биоаминный статус // Мед. журнал Чувашии. - 1996. - №1-2. - С. 129-133.

6. Влияние растворимого антигена на медиаторную активность крови у крыс // Тез. докл. XXIX студ. научной конфер. - Чебоксары, 1996. - С. 50. (Соавт. - Сергеева В.Е.).

7. Биоаминное обеспечение тимуса на 1,3 и 5 сутки после введения растворимого антигена// Тез. докл. XXX студ. научной конфер. - Чебоксары, 1996. - С.59. (Соавт. - Мохаммед Захид, Сергеева В.Е.).

8. Effect of soluble antigen under seasone chenge of bioamine system in thymus of rat's // IV international student conferense. - Cairo, Egipt, 1996.- P. 46. (Соавт. - Gyan Shrestha, Nirmal Лш, Devendrá Karki).

9. Участие центрального органа иммуногенеза в развитии постсгшенэк-томического гипоспленизма // Тез. докл. 1-й Нац. конф. РААКИ: Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунокоррекции. - Москва, 1997. - С. 325. (Соавт. - Сергеева В.Е., Мохаммед Захид, Германова С.Р.).

10. Адренергические структуры тимуса и селезенки после введения растворимого антигена и гидрокортизона // Тез. докл. науч. совещ. "Гистогенетический анализ изменчивости и регенерация тканей". - СПб, 1997. -С. 86. (Соавт. - Порфирьева С.А., Бычкова О.В., Мохаммед Захид).

11. Мастоциты тимуса и вторичный иммунодефицит после спленэктомии // Мат. науч. совещ. "Гистогенетический анализ изменчивости и регенерация тканей". - СПб, 1997. - С. 86-87. (Соавт. - Сергеева В.Е., Мохаммед Захид, Германова С.Р.).

12. Влияние нейроэндокринных клеток тимуса на развитие вторичного иммунодефицита после спленэктомии // III Междун. конф. по функциональной нейроморфологин "Колосовские чтения-97". - СПб, 1997. - С. 86. (Соавт. -Германова С.Р., Мохаммед Захид, Сергеева В.Е.).

13. Участие центрального органа иммунитета в развитии постспленэкто-мического гипоспленизма и вторичного иммунодефицита // Тез. докл. XXXI студ. науч. коиф. ''Человек, университет, общество" - Чебоксары, 1997. - С. 93. (Соавт. - Германова С.Р., Мохаммед Захид, Сергеева В.Е.).

14. Акциденталыхая инволюция тимуса как компонент развития вторичного иммунодефицита после экспериментального удаления селезенки // Мед. журнал Чувашии. - Л*°3. - 1997. - С. 197-205. (Соавт. - Мохаммед Захид, Германова С.Р.).

15. Luminescent-histochemical of the structures of thymus and lymphatic nodes of rats early periods of immunological reaction after injection soluble antigen // V international student conferense. - Cairo, Egipt, 1997. - P. 185. (Соавт. -Smorodchenko А,Т., Sergeeva V.E., Muhammad Zahid).

16. Cytoiogical changes of APUD-cells in rats thymus after removal of spleen // V international student conferense. - Cairo, Egipt, 1997. - P. 186. (Соавт. -Muhammad Zahid).

17. Bioamines ensuring of structures of thymus and spleen during experiments // Internal. J. of Iinmunorehabilitation. - Israel, Eilat, 1997. - P. 189. (Соавт. -Porfireva S.A., Sergeeva V.E., Bychkova O.V., Muhammad Zahid).

18. Участие тучных клеток в ранней фазе иммунного ответа тимуса на введение растворимого антигена// Иммунология, 1997. - №6. - С. 55-56.

19. Реакция центральных и периферических органов иммуногенеза после введения человеческого иммуноглобулина // Тез. докл. конф. молодых ученых России с межд. участием - Москва, 1998. - С. 92-93. (Соавт. - Мохаммед Захид, Порфирьева С.А., Агафонкин С.А.).

20. Роль биоаминосодержащих структур тимуса и надпочечников в развитии вторичного иммунодефицита после экспериментального удаления селезенки // Мат. конф. молодых ученых России с межд. участием - Москва, 1998. -С. 91-92. (Соавт. - Мохаммед Захид).

21. Реакция нейромедиаторной системы тимуса у крыс после спленэктомии//Морфология, 1998. - Т.113, №1. - С. 105-108.

22. Влияние пассивной иммунизации на регуляцию собственного клеточного иммунитета // Тез. докл. конф. "Актуальные проблемы в клинике внутренних болезней". - Чебоксары, 1998. - С.8. (Соавт. - Сергеева В.Е., Меркулова Л.М.).

23. Гистологическое подтверждение развивающейся акцидальной инволюции тимуса в ответ на удаление селезенки // Тез. конф. "Актуальные проблемы в клинике внутренних болезней". - Чебоксары, 1998. - С.8-9.

24. The cytospeclrofluoro-metrical examination of bioamines in the luminescent structures of central and peripheral organs of immunity after the contact with antigens II Intern. Medical Congress. - Istanbul, Turkey, 1998. - P. 74. (Соавт. - Sergeeva V.E., Merkulova L.M.),

25. The role of thymus and adrenal gland in the pathogenesis of the development of infectional complication after the removal spleen // Intern. Medical Congress. - Istanbul, 1998. - P. 75. (Соавт. - Mohammed Zahid, Germanova Svetla, Pant Bhaskar),

26. Участие макрофагов тимуса и селезенки в реакциях интенсивного и подавленного иммунитета // Тез. докл. 2-ой Нац. конф. РААКИ: Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунокоррекции. - Москва, 1998. - С. 339. (Соавт. - Бочкарева А.Г., Олангин О.И., Порфирьева С.А., Гордон Д.С., Сергеева В.Е.).

27. Реакция биоаминсодержащих структур тимуса на введение растворимого антигена // Изд-во Чувашского госуниверситета. - Чебоксары, 1999. - 130 с. (Соавт. - Сергеева В.Е.).

28. Реакция структур брыжеечных лимфатических узлов на спленэкто-мию // Мат. науч. совсщ. "Экспериментально-гистологический анализ соединительных тканей и крови". - СГ15, 1999. - С. 20. (Соавт. - Кузьмин С.П., Кузьмин О.П.).