Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Криптоспоридиоз у больныхВИЧ-инфекцией: клинико-экспериментальное и паразитологическое исследование
- Ученая степень
- доктора медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.10
Автореферат диссертации по медицине на тему Криптоспоридиоз у больныхВИЧ-инфекцией: клинико-экспериментальное и паразитологическое исследование
На правах рукописи
003464730
КАРТАШЕВ ВЛАДИМИР ВАСИЛЬЕВИЧ
КРИИТОСПОРИДИОЗ У БОЛЬНЫХ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ: КЛИНИКО-ЭКПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ И ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
14.00.10 - инфекционные болезни
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
1 д 1.|ДР
Ростов-на-Дону 2009
003464790
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научный консультант:
доктор медицинских наук,
профессор АМБАЛОВ Юрий Михайлович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, СИМОВАНЯН Эмма Никитична профессор
доктор медицинских наук, ЛУЧШЕВ Владислав Иванович профессор
доктор медицинских наук ЯГОВКИН Эдуард Александрович старший научный сотрудник
Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
сертационного совета Д 208.082.02 при ГОУ ВПО Ростовском государственном медицинском университете (344022 г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета
Защита состоится
оч 2009 г. в 10
часов на заседании дис-
Автореферат разослан
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук
Т.Н. Кузина
ОБЩАЯ ХАРАКЕТРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования
Более ста лет назад Эрнест Эдвард Тизер (1875 - 1965) впервые обнаружил и описал нового паразита из класса споровиков и дал ему название криптоспоридия (Е. Tyzzer, 1907).
С момента этого открытия прошло около 70 лет прежде чем крип-тоспоридиоз был выявлен у человека. В 1976 году почти одновременно были опубликованы описания двух случаев болезни, один из них в форме энтероколита у ребенка с сохранным иммунитетом (F. Nime et al., 1976), другой - в виде обильной водной диареи у взрослого больного с иммуно-депрессией (J.Meisel et al., 1976).
В целом 7 случаев криптоспоридиоза были опубликованы и суммированы в литературе к 1980 году, из них у 5 больных заболевание возникло на фоне иммунодепрессии (R. Bird, М. Smith, 1980). В связи с этим авторы отметили в своей публикации: «В тех случаях, когда иммунная система функционирует нормально, и нет никаких других фоновых поражений кишечника, криптоспоридиоз не представляет никаких проблем для здоровья и ориентировочно может рассматриваться как оппортунистический возбудитель». Эти слова были написаны в то самое время, когда стали регистрироваться первые случаи СПИД.
Уже через три года появилась первая статья, в которой были представлены 10 случаев криптоспоридиоза с затяжной водной диареей у больных СПИД гомосексуалистов (P. Ma, R. Soave, 1983). А еще через год число описанных в литературе случаев криптоспоридиоза у больных СПИД достигло пятидесяти (P. Ma, 1984). К концу 1984 года из числа всех описанных в литературе случаев криптоспоридиоза больные со СПИД составляли 83%, а 55% из них погибли (Т. Navin, D. Juranek, 1984).
Связь криптоспоридиоза со СПИД была настолько очевидной, что криптоспоридиоз стал одним из общепризнанных индикаторов СПИД задолго до открытия и описания самого вируса иммунодефицита человека. С начала эпидемии ВИЧ-инфекции и до сегодняшнего дня основная часть исследований, посвященных проблеме криптоспоридиоза, так или иначе были связаны с проблемой СПИД. Исследователей меньше интересовала проблема криптоспоридиоза у больных, находящихся на ранних
стадиях ВИЧ-инфекции. Отчасти это было обусловлено тем, что предположение о криптоспоридиозе и целенаправленное обследование больных на криптоспоридиоз выполнялось только у больных ВИЧ-инфекцией при появлении диареи.
Больные ВИЧ-инфекцией на стадии СПИД подвержены особо тяжелым затяжным и хроническим формам криптоспоридиоза с обильной водной диареей, обезвоживанием и неблагоприятным прогнозом для жизни (S. Pitlik et al., 1983; С. Petersen, 1992; В. Ramratnam, Т. Flanigan, 1997; D. Clark, 1999; S. Caccio, 2005). Однако, почти одновременно с описанием злокачественных форм криптоспоридиоза у больных СПИД появлялись единичные публикации о более благоприятных клинических вариантах болезни со спонтанным выздоровлением и сообщения о ее бессимптомных формах (F. Zar et al., 1985; F. Zar, 1990; E. Janoffet al., 1990; D. Saltzberg et al., 1991; C. Blanshard et al., 1992; R. Goodgame et al., 1993; I. McGowan et al., 1993; M. Pettoello-Mantovani et al., 1995; S. Chhin et al., 2006). Благоприятно протекающие формы любых болезней редко привлекают внимание врача.
Варианты клинического течения криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией напрямую зависят от степени выраженности иммуно-депрессии (Т. Flanigan et al., 1992; Е. Pozzio et al., 1997). Единичные публикации последних лет свидетельствуют также и о том, что клинические проявления криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией могут быть обусловлены биологическими свойствами отдельных видов и генотипов возбудителя (М. Messner et al., 2001; С. Chappell et al., 2006; V. Саша et al., 2007).
Важность проблемы криптоспоридиоза для больных ВИЧ-инфекцией неоднократно подчеркивалась и отечественными учеными (В.И. Покровский, В.В. Покровский, 1988; Н.А. Чайка, Т.В. Бейер, 1990; В.И. Покровский, Б.А. Годованный, 1995; В.В. Шкарин, С.Н. Соринсон, 1999; В.В. Покровский и др., 2000, 2003; Е.С. Белозеров, Е.И. Змушко, 2003; Ю.В. Лобзин и др., 2003; В.М.Волжанин, 2008). Однако специальные исследования по проблеме криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в России не выполнялись.
Образовавшийся разрыв между информацией о криптоспоридиозе у больных ВИЧ-инфекцией за рубежом и отсутствием данных о состоянии этой проблемы у больных ВИЧ-инфекцией в России, а также неоспори-
мое значение проблемы криптоспоридиоза для больных ВИЧ-инфекцией определяют актуальность данного исследования.
Цель работы. На основе изучения эпидемиологии криптоспоридиоза в Ростове-на-Дону, особенностей его клинического течения и лабораторной диагностики у больных ВИЧ-инфекцией, а также методов оценки биологических свойств паразита разработать программу диагностики и прогноза криптоспоридиоза у больных с разными стадиями ВИЧ-инфекции.
Задачи исследования:
1) исследовать чувствительность разных лабораторных методов диагностики криптоспоридиоза и определить частоту криптоспоридиоза у больных с ВИЧ-инфекцией, дать клиническую характеристику криптоспоридиоза в зависимости от клинической стадии ВИЧ-инфекции, а также изучить влияние разных клинических форм криптоспоридиоза на динамику клинического течения и прогноз ВИЧ-инфекции;
2) выполнить молекулярно-генетические исследования паразита и определить доминирующий вид криптоспоридий у больных ВИЧ-инфекцией в Ростове-на-Дону;
3) исследовать биологические особенности паразита, в частности, жизнеспособность ооцист, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией с разными клиническими проявлениями криптоспоридиоза, провести оценку вирулентности криптоспоридий при экспериментальной инфекции у лабораторных мышей БСЮ, а также потенциал роста на искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина;
4) провести исследование ооцист паразита в питьевой воде городской системы водоснабжения Ростова-на-Дону, а также изучить содержание ооцист криптоспоридий в речной воде бассейна Нижнего Дона для оценки ее роли в эпидемиологии криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией;
5) оценить потенциальную роль отдельных сельскохозяйственных животных и птиц как резервуара криптоспоридий и зоонозного источника инфекции для больных ВИЧ-инфекцией;
6) на основе полученных данных разработать программу оптимизации клинико-лабораторной диагностики и прогноза течения криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией.
Научная новизна
Установлены преимущества иммунологических методов лабораторной диагностики криптоспоридиоза (прямая иммунофлюоресценция и иммуномагнитная сепарация) при обследовании больных ВИЧ-инфекцией над традиционными методами лабораторной диагностики (прямая микроскопия, окраска мазка испражнений по Циль-Нильсену). Эти преимущества характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью методов первой группы, которые позволили выявить высокую частоту бессимптомных форм криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону.
Впервые установлена зависимость клинических проявлений и исходов криптоспоридиоза от клинической стадии ВИЧ-инфекции, а также отрицательное влияние хронического криптоспоридиоза на темпы про-грессирования ВИЧ-инфекции уже на ее начальных стадиях.
Впервые в России выполнено генотипирование криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией и определен доминирующий вид паразита у больных ВИЧ инфекцией в Ростовской области - С. рагушп.
Впервые в истории изучения криптоспоридиоза изучены биологические свойства криптоспоридий, обнаруживаемых в испражнениях больных ВИЧ-инфекцией. В частности, исследована жизнеспособность выделяемых с испражнениями больных ВИЧ-инфекцией ооцист по показателю активности эксцистирования и их вирулентность для мышей БСГО, а также потенциал роста паразита на искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина.
Впервые выполнена эпидемиологическая оценка качества питьевой воды в г. Ростове-на-Дону и речной воды бассейна Нижнего Дона по содержанию в ней ооцист криптоспоридий, а также определен потенциал зоонозного резервуара инфекции среди сельскохозяйственных животных, которым является крупный рогатый скот.
Практическая значимость
Разработана программа клинико-лабораторной диагностики и оценки прогноза криптоспоридиоз» у больных ВИЧ-инфекцией в зависимости от ее стадии.
Расширены показания к лабораторному обследованию больных ВИЧ-инфекцией на криптоспоридиоз. Рекомендованы методы лаборатор-
ной диагностики криптоспоридиоза, обладающие высокой специфичностью и чувствительностью, что повышает вероятность его распознавания у больных ВИЧ-инфекцией.
Изучены биологические особенности криптоспоридий, обнаруженных в испражнениях больных ВИЧ-инфекцией, выполнена оценка их жизнеспособности, потенциал роста при культивировании в искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина, разработана модель оценки вирулентности паразита на экспериментальной модели инфекции у мышей 8СГО.
Показано, что клинические проявления и исход криптоспоридиоза варьируют в зависимости от клинической стадии ВИЧ-инфекции, вероятность выздоровления существует только у больных на ранних стадиях ВИЧ-инфекции. Установлено отрицательное влияние криптоспоридиоза на темпы прогрессирования ВИЧ-инфекции даже на ранних клинических стадиях при отсутствии выраженного иммунодефицита. При выявлении криптоспоридиоза у больного ВИЧ-инфекцией следует включить его в число первоочередного кандидата для проведения высоко активной анти-ретровирусной терапии.
Установлен доминирующий вид паразита - С. ратяп, являющийся возбудителем криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией, естественный резервуар инфекции в природе - крупный рогатый скот, показано, что вода не является основным путем передачи инфекции.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1. При использовании высоко чувствительных методов лабораторной диагностики выявлена высокая частота криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону, который характеризуется на ее ранних стадиях значительным удельным весом легких и бессимптомных форм.
2. ВИЧ-инфекция и криптоспоридиоз оказывают взаимное отягчающее влияние. Отрицательное влияние ВИЧ-инфекции проявляется на поздних стадиях болезни и характеризуется увеличением удельного веса клинически проявляющихся и хронических форм криптоспоридиоза. Отрицательное влияние криптоспоридиоза выражается в ускорении темпов прогрессирования ВИЧ-инфекции у больных с хронической формой болезни, сопровождающейся диареей.
3. Доминирующим видом возбудителя криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону является С. parvum, что является свидетельством преимущественно зоонозного резервуара и источника инфекции.
4. Экспериментальная инфекция у мышей SCID является наиболее чувствительной моделью оценки вирулентности криптоспоридий, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией (с учетом видовой принадлежности обнаруженного паразита, представленного С. parvum), показатель эксцистирования ооцист и рост криптоспоридий на искусственной питательной среде не обладают такой чувствительностью.
5. Питьевая вода не является ведущим фактором передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону.
6. Основным естественным резервуаром инфекции в природе является крупный рогатый скот.
Внедрение результатов исследования в практику
Материалы диссертации внедрены:
1) в работу Областного центра по борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями в Ростовской области;
2) в работу Южного Окружного Центра СПИД;
3) в учебный процесс на кафедре инфекционных болезней РостГМУ Росздрава;
4) по теме диссертации опубликованы 26 работ;
5) оформлена заявка на патент «Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов» (№ 2009103545, приоритет от 03.02.2009);
6) подготовлены и опубликованы «Методические указания по лабораторной диагностике криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией» для инфекционистов и врачей клинических лабораторий (Ростов-на-Дону, 2008 г.).
Апробация работы
Основные результаты исследования представлены на научных конференциях: «Developing Research for a Common Future. The 2nd German-Russian Cooperative Symposium, 4-8 June, 2002» (Rostov-on-Don, Russia, 2002); «IWA Symposium on Health-Related Water Microbiology, 14-19
September, 2003» (Cape Town, South Africa, 2003); «Improving Research for a Common Future. The 3rd German-Russian Cooperative Symposium, 2931 May, 2004» (Cologne, Germany, 2004); «The 3rd Congresss of German-Greek Academy for Biomedicine, 29-31 May, 2004» (Kavala, Greece, 2004); «The Fourth International Giardia Conference and the First Combined Giardia/Crypto Meeting in Amsterdam, 20-24 September, 2004» (Amsterdam, Netherlands, 2004); «The 15th Japanese-German Symposium on Protozoan Diseases, 16-21 September, 2006» (Obihiro, Hokkaido, Japan, 2006). The
4-th German-Russian Cooperative Symposium, 6-10 June, 2006» (Rostov-on-Don, Russia, 2006). I Съезд инфекционистов ЮФУ (Краснодар, 2008). The
5-th German-Russian Cooperative Symposium, 14-17 June, 2008» (Cologne, Germany, 2008). Международная конференция «Физиология и патология иммунной системы», IV Международная конференция по иммунотерапии (Москва, 2008).
Публикации
Основные результаты диссертации представлены в 26 работах, в том числе в 9 изданиях, включенных в перечень рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 367 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, двух глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Список литературы включает 668 источников, из которых 34 опубликованы на русском языке и 634 - на иностранных языках. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 37 рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
1. Общая характеристика обследованных больных и методы исследования
В период с 2002 года по 2006 год было выявлено 182 больных ВИЧ-инфекцией с криптоспоридиозом. Диагноз криптоспоридиоза устанавливали путем обнаружения ооцист в испражнениях методом пря-
мой иммунофлюоресценции. Среди 182 больных криптоспоридиозом распределение больных по полу выглядело следующим образом: мужчин было 130 человек (71,4%), женщин - 52 (28,6%). Возраст обследованных больных колебался от 15 лет до 54 лет. Средний возраст больных составил 32,9 ± 0,6 лет. Характеристика распределения больных по возрасту представлена в таблице 1.
Таблица 1
Распределение больных криптоспоридиозом по возрасту
Показатель Возраст (в годах)
<15 16-20 21-25 26-30 31-35 36-40 41-45 46-50 51-55
Число больных Абс. 6 6 15 33 59 32 24 5 2
% 3,3 3,3 8,2 18,1 32,4 17,6 13,2 2,7 1,1
Заражение ВИЧ-инфекцией у большинства пациентов предположительно произошло в результате внутривенного употребления наркотиков в период с 1998 года по 2002 год. Подобный путь передачи ВИЧ-инфекции можно было рассматривать в качестве ведущего у 167 (91,8%) больных. Половой путь передачи в результате гетеросексуальных контактов предположительно имел место у 9 (4,9%) больных. Среди ВИЧ-инфицированных с таким путем заражения преобладали женщины - 7 (77,8%). У остальных 6 (3,3%) человек (женщин - 5, мужчин - 1) путь заражения мог быть смешанным, т.е. наряду с частой сменой половых партнеров и незащищенным сексом имела место практика эпизодического употребления внутривенно вводимых наркотиков.
Самым частым сопутствующим ВИЧ-инфекции заболеванием у всех обследованных больных с криптоспоридиозом был хронический гепатит С, который был выявлен у 158 (86,8%) из 182 больных. Хрони-че ский гепатит В был выявлен у 22 (12,1 %) обследованных больных ВИЧ -инфекцией.
Кроме серологических маркеров гепатита С у больных ВИЧ-инфекцией с криптоспоридиозом обнаруживались антитела класса к вирусу простого герпеса (156 больных - 85,7%), цитомегаловирусу (152 больных - 83,5%), токсоплазмам (69 больных - 37,9%).
Распределение больных с криптоспоридиозом по стадиям ВИЧ-инфекции выглядело следующим образом. У 9 (4,9%) человек на момент выявления криптоспоридиоза была диагностирована 3 стадия ВИЧ ин-
фекции. Самым массовым контингентом больных с криптоспоридиозом были больные 4А стадии ВИЧ инфекции, их под наблюдением было 126 (69,2%). Больных криптоспоридиозом с 4Б стадией ВИЧ-инфекции было выявлено 33 (18,1%). Диагноз ВИЧ-инфекции 4В стадии был установлен у 14 (7,7%) больных криптоспоридиозом. Все больные со стадией ВИЧ-инфекции 4В в течение короткого отрезка времени, чаще в пределах от 6 до 11 месяцев, в результате прогрессирования иммунодефицита и развития тяжелых вторичных заболеваний переходили в терминальную стадию ВИЧ-инфекции и погибали.
Программа обследования больных включала:
1) клиническое обследование (жалобы, данные анамнеза, физикаль-ный осмотр, консультации врачей различных медицинских специальностей - хирурга, гинеколога, невропатолога, ЛОР, психиатра и пр.);
2) общепринятые лабораторные исследования (клинические анализы крови и мочи, спинномозговой жидкости, рутинные биохимические тесты, оценка иммунного статуса, серологические маркеры вирусных гепатитов и оппортунистических инфекций);
3) инструментальные исследования (ЭКГ, ЭЭГ, рентгенограмма и ультразвуковое исследование различных органов по показаниям, радиоизотопные исследования печени и почек, компьютерная и магнитно-резонансная томография по показаниям);
4) бактериоскопия и бактериологическое исследование крови, мочи, спинномозговой жидкости, испражнений, мокроты (в том числе, на мико-бактерии туберкулеза), экссудатов.
С целью лабораторной диагностики криптоспоридиоза были использованы:
1) прямая микроскопия взвеси испражнений с использованием эталонного препарата очищенных ооцист из испражнений теленка, инфицированного в естественных условиях;
2) микроскопия мазка взвеси испражнений, окрашенного по методу Киньюн (Кдпуоип), котрый является модификацией окраски на кислотоустойчивые микроорганизмы по методу Циль-Нильсена, оличающийся тем, что препарат не нагревают на этапе окраски фуксином (Р. Ма, Я. Боауе, 1983),
3) метод прямой иммунофлюоресценции с помощью коммерческого
набора Crypto Cel (Cellabs Pty Ltd, Австралия), все этапы исследования выполняли в соответствии с инструкцией производителя;
4) для обнаружения ооцист криптоспоридий методом иммуно-магнитной сепарации был использован набор Dynabeads М-280 anti-Ciyptosporidium kit (Dyna], Норвегия).
Выделение ДНК из испражнений больных ВИЧ-инфекцией осуществляли после пяти циклов замораживания в жидком азоте и оттаивания при температуре 65° С для разрушения стенок ооцист. После этого для экстракции ДНК криптоспоридий из испражнений был использован коммерческий набор QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen GmbH, Германия). Все этапы исследования выполняли в соответствии с инструкцией производителя, прилагаемой к данному набору.
Для исследования видовой принадлежности криптоспоридий была использована полимеразная цепная реакция с вложенными праймера-ми (nested-ПЦР), описанная в публикации L. Xiao и соавт. (1999). Для выполнения первого этапа ПЦР и амплификации фрагмента ДНК SSU rRNA гена криптоспоридий размером 1325 пн были использованы прямой праймер 5'-TTCTAGAGCTAATACATGCG-3' и обратный праймер 5'-CCCTAATCCTTCGAAACAGGA-3\ Второй этап ПЦР имел своей целью амплификацию фрагмента ДНК SSU rRNA гена криптоспоридий размером от 826 пн до 864 пн. Для выполнения второго этапа ПЦР был использован продукт амплификации ДНК, полученный в результате выполнения первого этапа ПЦР. На втором этапе ПЦР были использованы прямой праймер 5' -GGAAGGGTTGTATTTATTAGATAAAG-3' и обратный праймер 5' - AAGG AGTA AGG А АС А АССТСС А-3'. Для выполнения ПЦР использовали термоциклер MyCycler Bio-Rad (Cat. No. 1709703, Bio-Rad Laboratories, Inc., CA 94547 USA).
Для изучения полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализ) продукт, полученный в результате выполнения второго этапа ПЦР, подвергали воздействию рестрикционных эндонуклеаз Sspl и Vspl (Promega, США). Препарат ДНК, подвергнутый воздействию эндонуклеаз Sspl и Vspl, подвергали электрофоретическому разделению в 2% агарозном геле. Визуализацию результатов осуществляли путем окраски ДНК при помощи бромистого этидия. Гель окрашивался в течение 60 мин. в растворе красителя с концентрацией последнего 1 мг/л. Результат визуализировали с помощью ультрафиолетового трансиллюминато-
pa LAS-4000 (Life Science, FUJIFILM, Japan) при помощи специальной встроенной программы и в соответствии с инструкцией изготовителя.
Для обнаружения ооцист криптоспоридий в питьевой воде Ростовской городской системы водоснабжения был использован метод фильтрации воды через полипропиленовый волокнистый фильтр с размером пор 1 мкм (Super Micro-Wynd CUNO, США), предложенный LeChevallier и соавт. (1991) в модификации Karanis и соавт. (1998). Образцы питьевой воды отбирали два раза в месяц с интервалом в две недели. Всего были исследованы 12 образцов воды по 600 л каждый.
Помимо исследования питьевой воды было выполнено исследование воды реки Дон. Место забора проб было выбрано с учетом ранее выполненного изучения проб питьевой воды. На протяжении первого этапа исследования местом забора был правый берег Дона на расстоянии 1 км вверх по течению от места городского водозабора. Воду для исследования в объеме по 10 литров забирали два раза в неделю в период с 24 апреля по 19 мая 2005 г. Всего для данного исследования было получено 9 образцов воды. В период 26-27 мая 2005 года были дополнительно исследованы 16 проб воды реки Дон и ее притоков на протяжении от Цимлянского водохранилища до г. Азов (протяженность участка акватории около 250 км). Объем каждой из проб также составлял 10 л. Ооцисты криптоспоридий выделяли из исследуемого образца речной воды методом флокуляции (Р. Karanis, A. Kimura, 2002; С. Kourenti et al., 2003).
Концентрацию и очистку ооцист из испражнений больных ВИЧ-инфекцией осуществляли путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и в градиенте плотности хлорида цезия (M. Arrowood, 2002).
Оценку жизнеспособности ооцист, выделенных из испражнений больных ВИЧ инфекцией с криптоспоридиозом, проводили по показателю их эксцистирования (М. Arrowood, 2002). Исследование вирулентности ооцист, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией, выполняли путем экспериментального заражения лабораторных мышей линии SC1D (К. Hikosaka et al., 2005).
Культивирование криптоспоридий, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией в искусственной питательной среде, которая не содержит клеток хозяина, осуществляли по методике, описанной N. Hijjawi с соавт. (2004).
Для оценки частоты криптоспоридиоза среди сельскохозяйственных
животных и птиц были исследованы испражнения 116 телят, 56 поросят, 64 цыплят и 48 утят. Были также исследованы испражнения 29 хищников Ростовского зоопарка и 15 дико живущих лис. Обнаружение ооцист в испражнениях выполняли методом прямой иммунофлюоресценции.
2. Результаты собственных исследований и их обсуждение
2.1 Сравнительная чувствительность лабораторных методов диагностики криитоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией
С помощью прямой микроскопии влажного мазка испражнений у 6 (12,5 ± 4,8%) больных ВИЧ-инфекцией из 48 были обнаружены ооцисты криптоспоридий, морфологически сходные с эталонным препаратом.
При микроскопии мазков, окрашенных по методу Киньюн, ооцисты были выявлены у 11 (22,9 ±6,1%) больных, причем у всех шести больных, у которых их удалось обнаружить ранее при диагностике методом прямой микроскопии. Среди И больных с положительными результатами диарея имела место у 8, но остальные трое больных сообщали об эпизодах диареи в течение последнего года. Статистически достоверной разницы между частотой обнаружения ооцист при прямой микроскопии и при окраске по Циль-Нильсену не было выявлено.
С помощью метода прямой иммунофлюоресценции ооцисты криптоспоридий были найдены в испражнениях 26 больных ВИЧ-инфекцией (54,2 ± 7,2%), включая всех 11 больных криптоспоридиозом, выявленных ранее с помощью микроскопии мазков после окраски по Циль-Нильсену. Из них у 9 больных на момент обследования была диарея, а из оставшихся 17 больных эпизоды диареи в отдаленном анамнезе отмечали 6 человек. Таким образом, связать положительный результат прямой иммунофлюоресценции с диареей при криптоспоридиоза можно было у 15 больных из 27 (56%). Метод прямой иммунофлюоресценции позволял обнаруживать ооцисты достоверно чаще, как по сравнению с прямой микроскопией влажного мазка испражнений (р < 0,05), так и по сравнению с микроскопией мазка после окраски по Циль-Нильсену (р < 0,01). У тех больных, у которых ооцисты не были обнаружены при окраске по Циль-Нильсену,
метод прямой иммунофлюоресценции позволял обнаружить даже единичные ооцисты в препарате.
Метод иммуномагнитной сепарации позволил обнаружить ооцисты у 37 (77,1 ± 6,1%) больных ВИЧ из 48 обследованных. При этом следует отметить, что из 11 вновь выявленных больных, у которых ооцисты не были найдены при использовании метода прямой иммунофлюоресценции, в пробах испражнений 10 больных было обнаружено всего по одной ооцисте, а у оставшегося одного больного - лишь три ооцисты во всем препарате. Метод иммуномагнитной сепарации давал более значимые статистически отличия в частоте выявления ооцист по сравнению с прямой микроскопией влажного мазка испражнений (р < 0,01), микроскопией мазка после окраски по Циль-Нильсену (р < 0,001) и методом прямой иммунофлюоресценции (р < 0,001). Диарея на момент обследования имела место у 9 больных с положительным результатом исследования испражнений методом иммуномагнитной сепарации, т.е. у оставшихся 2 из 11 больных с диареей не было установлено ее связи с криптоспориди-озом. Из 16 больных с диареей в анамнезе ооцисты были обнаружены у 7 человек, т.е. у 9 человек также не было оснований признавать причинную роль криптоспоридиоза при ранее имевшей место диарее. С другой стороны, ооцисты были обнаружены у 21 больного ВИЧ, у которых на протяжении последнего года до обследования, а также на момент обследования диарея отсутствовала.
Специфические методы обнаружения ооцист - метод прямой иммунофлюоресценции и метод иммуномагнитной сепарации, позволяли выявлять криптоспоридиоз у существенно большего числа больных. Недостатком метода иммуномагнитной сепарации является многоэтапность исследования и большие затраты времени на его выполнение. Поэтому при дальнейшей лабораторной диагностике криптоспоридиоза у всех обследованных нами больных ВИЧ инфекцией был использован метод прямой иммунофлюоресценции.
Клиническое значение обнаружения единичных ооцист в испражнениях больных ВИЧ без диареи подлежит специальному обсуждению. Полученные нами результаты использования высокочувствительных методов лабораторной диагностики криптоспоридиоза являются свидетельством высокой частоты бессимптомных или транзиторных форм криптоспоридиоза в популяции больных ВИЧ инфекцией в Ростове-на-Дону.
2.2 Клиническая характеристика криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией на момент установления диагноза
При обследовании 515 больных ВИЧ-инфекцией лабораторный диагноз криптоспоридиоза с помощью исследования испражнений методом прямой иммунофлюоресценции был установлен у 182 из них, что в целом составило 35,3 ± 2,1%.
Среди 39 обследованных больных с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции диагноз криптоспоридиоза был установлен у 9 больных, что составило 23,1 ± 6,7%. Из 332 больных с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции криптоспоридиоз был распознан у 126 (38,0 ± 2,7%) человек. Разница между частотой криптоспоридиоза у больных 3 и 4А клинических групп ВИЧ-инфекции была статистически значимой (р < 0,05). Больных с 4Б клинической группой ВИЧ-инфекции было обследовано 103, а диагноз криптоспоридиоза был выявлен у 33 (32,0 ± 4,6%), т.е. несколько чаще, чем у больных 3 группы, и реже, чем у больных 4А группы. Однако, эти отличия были статистически недостоверными (в обоих случаях р > 0,05). Криптоспоридиоз был обнаружен у 14 (34,1 ± 7,4%) из 41 больного с 4В клинической стадией ВИЧ-инфекции, но и в этом случае полученный показатель не имел статистически значимых отличий от таковых в группах больных 3 стадией, 4А стадией и 4Б стадией ВИЧ-инфекции (во всех трех случаях р > 0,05). Таким образом, только у больных с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции частота криптоспоридиоза была достоверно ниже по сравнению с больными с 4А клинической стадией.
Среди 9 больных криптоспоридиозом с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции диарея при первичном обследовании на момент госпитализации была выявлена у 3 (33,3 ± 16,6%) человек. Длительность диареи у одного больного составила 5 дней, у другого больного - 6 дней, у третьего больного диарея продолжалась 8 дней. Содержание СБ4+ лимфоцитов в группе больных криптоспоридиозом, относящихся к 3 клинической стадии ВИЧ-инфекций составило в среднем 0,348 ± 0,035 х 109/л (у больных с диареей - 0,304 ± 0,029 х 109/л, у больных без диареи - 0,370 ±0,049 х 107л, р > 0,05).
Из 126 больных криптоспоридиозом и ВИЧ-инфекцией 4А клинической стадии диарея при обследовании была выявлена у 59 (46,8 ± 4,5%)
человек. Статистически значимых различий в частоте диареи у больных с 3 и 4А стадиями ВИЧ-инфекции, установлено не было. Максимальная частота стула 2-3 раза в день наблюдалась у 31 (52,4%) больного с диареей. У 21 (35,6%) больных с диареей было отмечено учащение стула до 4-5 раз в день. У оставшихся 7 (11,9%) больных диарея сопровождалась учащением стула до 6-8 раз в день. Диарея продолжалась менее двух недель у 32 (54,2%) больных, от двух до трех недель - у 23 (39,0%) больных и более трех недель - у оставшихся 4 (6,8%) больных. Ни у одного больного диарея не сохранялась более одного месяца. Содержание С04+ лимфоцитов у 126 больных криптоспоридиозом, относящихся к 4А клинической стадии ВИЧ-инфекции, составило в среднем 0,293 ±0,013 х 109/л (у больных с диареей - 0,261 ± 0,015 х 109/л, без диареи - 0,319 ± 0,019 х 109/л, р < 0,05).
Из числа 33 больных с 4Б клинической стадией диарея была выявлена у 24 (72,7 ± 7,9%) человек. Удельный вес больных криптоспоридиозом с диареей в этой группе был заметно выше, чем у больных с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции (33,3 ± 16,6%, р < 0,05), с одной стороны, и у больных с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции (46,8 ± 4,5%, р < 0,01), с другой. Частота стула 2-3 раза в день наблюдалась у 15 (62,5%) больных, 4-5 раз в день - у 7 (29,2%) больных, 6-8 раз в день
- у оставшихся 2 (8,3%) больных. Диарея менее двух недель отмечена у 6 (25,0%) больных, от двух до трех недель - у 9 (37,5%), и более месяца
- у 9 (37,5%) больных. Так же как и у больных 4А клинической стадии, ни у одного больного с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции диарея не сопровождалась обезвоживанием.
Концентрация СЭ4+ лимфоцитов у больных криптоспоридиозом с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции составила в среднем 0,166 ± 0,012 х 109/л (у больных с диареей - 0,151 ±0,011 х 109/л, без диареи
- 0,206 ± 0,028 х 107л, р < 0,05).
Больных криптоспоридиозом с 4В клинической стадией ВИЧ-инфекции под наблюдением было 14 человек, из них диарея наблюдалась у 11 (78,6 ± 11,4%), т.е. чаще по сравнению с больными на 3 стадии ВИЧ-инфекции (33,3 ± 16,6%, р<0,05), а также по сравнению с больными на 4А стадии ВИЧ-инфекции (46,8 ± 4,5%, р < 0,01). Статистически значимая разница между частотой диареи у больных криптоспоридиозом с 4Б (72,7 ± 7,9%) и 4В (78,6 ± 11,4%) стадиями ВИЧ-инфекции отсутствовала.
Из 11 больных криптоспориднозом с 4В клинической стадией ВИЧ-инфекции диарея у всех имела затяжной характер и продолжалась более одного месяца. В частности, у 3 (27,3%) больных она наблюдалась на протяжении 4-5 недель, у 5 (45,5%) - 6-7 недель, у оставшихся 3 (27,3%) - более двух месяцев.
Частота стула у 8 больных не превышала 5 раз в день. У 3 (27,3%) больных стул был чаще, испражнения имели водянистую консистенцию, но только у одного больного наблюдалось выраженное обезвоживание, частота стула у него достигала 10-12 раз в день. Только у этого больного можно было связывать выраженную потерю массы тела с дегидратацией.
Концентрация CD4+ лимфоцитов у больных криптоспориднозом с 4В стадией ВИЧ-инфекции составила в среднем 0,081 ±0,012 х 109/л (у больных с диареей - 0,067 ±0,017 х 109/л, без диареи - 0,135 ± 0,033 х 109/л, р > 0,05).
2.3 Результаты наблюдения за больными криптоспориднозом в отдаленном периоде
За всеми больными ВИЧ-инфекцией, у которых при первичном обследовании был выявлен криптоспоридиоз, осуществлялось наблюдение в динамике с повторным исследованием испражнений и оценкой клинических проявлений. В результате прогрессирования ВИЧ-инфекции и присоединения других вторичных заболеваний из 182 больных криптоспориднозом умер 31 (17,0 ± 2,8%) человек. Сроки наблюдения за всеми больными ВИЧ-инфекцией со смертельным исходом не превысили 1 года.
Из числа умерших только у 6 (19,4%) больных по результатам клинического наблюдения и патологоанатомического исследования был установлен диагноз СПИД. У всех умерших от СПИД криптоспоридиоз протекал с диареей, но только у одного больного испражнения были обильными, водянистыми и сопровождались обезвоживанием. Наряду с криптоспориднозом у него была правосторонняя пневмония, токсоплаз-моз головного мозга, распространенный кандидоз, хронический гепатит, эрозивный эзофагит с пищеводным кровотечением, кахексия (потеря массы более 30%). Еще у 5 больных со СПИД наблюдалась рецидиви-
рующая диарея с ремиссиями. Причиной смерти у этих 5 больных также был не криптоспоридиоз, а другие множественные и тяжелые вторичные заболевания (у 4 больных - диссеминированный туберкулез, у 1 больного - энцефалит).
У остальных 25 больных криптоспоридиозом смерть наступала на стадии 4Б (6 больных) и на стадии 4В (19 больных). Среди всех причин смерти у этих больных на первом месте по частоте был туберкулез легких с распадом и гематогенной диссеминацией (14 больных). Из оставшихся 11 больных основной причиной смерти у 6 больных был сепсис, у 3 - пневмония, у 1 - менингит и еще у 1 больного нефрит.
Из оставшихся 151 больных криптоспоридиозом из наблюдения по разным причинам (смена места жительства, повторная неявка для диспансерного обследования по вызову и пр.) выбыли 16 (10,6 ± 2,5%) человек, у которых не удалось проследить дальнейшее течение и исход криптоспори-диоза. В результате динамика и исход болезни в отдаленном периоде были прослежены у оставшихся 135 больных.
Из 7 больных криптоспоридиозом с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции, у которых удалось проследить дальнейшее течение болезни, выздоровели 6 (85,7 ± 13,2%) человек. Оставшийся больной продолжал выделять ооцисты криптоспоридий с испражнениями при наличии рецидивирующей 2-3 раза в год диареи. В течение двух лет наблюдения у этого больного наблюдалось прогрессирование ВИЧ-инфекции в 4А стадию.
Из 126 больных криптоспоридиозом с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции динамика болезни прослежена у 112. Из этого числа больных паразитологическос выздоровление наблюдалось у 29 (25,9 ± 4,1%) больных. Доля больных, выздоровевших от криптоспоридиоза на 4А клинической стадии ВИЧ-инфекции, была намного меньше, чем среди выздоровевших больных с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции (р < 0,001). Из 53 больных криптоспоридиозом с диареей на момент первичного обследования паразитологическое выздоровление при наблюдении в динамике наступило у 9 (17,0 ± 5,2%) человек, а из 59 больных без диареи на момент первичного обследования - у 20 (33,9 ± 6,2%). Разница статистически значима (р < 0,05).
Возможным вариантом объяснений указанной разницы в заметно более высокой частоте паразитологического выздоровления при криптос-поридиозе у больных с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции могло
быть то, что на момент выявлении криптоспоридиоза больные без диареи находились в стадии реконвалесценции. Другим возможным объяснением является то, что более сохранный иммунный статус у больных крип-тоспоридиозом с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции без диареи обеспечил возможность формирования противопаразитарного иммунитета и освобождение организма больного от паразита.
Ответ на первый вопрос можно получить по результатам оценки жизнеспособности и других биологических свойств ооцист, выделяемых с испражнениями. Известно, что при реконвалесценции наблюдается выделение с испражнениями преимущественно нежизнеспособных ооцист (Z. Bukhari, Н. Smith, 1997). Результаты оценки жизнеспособности ооцист, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией, приведены ниже.
Ответ на второй вопрос получить сложнее. Прямых доказательств о взаимосвязи отдельных показателей противопаразитарного иммунитета с паразитологическим выздоровлением от криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией до последнего времени не получено. В качестве косвенных доказательств может быть использован такой параметр, как темпы прогрессирования ВИЧ-инфекции у больных криптоспоридиозом с диареей по сравнению с больными без диареи.
После исключения из дальнейшего рассмотрения тех больных, у которых наблюдалось паразитологическое выздоровление, под наблюдением в динамике продолжали оставаться 83 больных с 4А стадией ВИЧ-инфекции, в том числе 44 больных с диареей. У них криптоспоридиоз протекал в хронической форме.
Из этой группы 44 больных с диареей 31 (70,5 ± 6,9%) больных сообщали о рецидивирующей диарее с малой частотой (от 2 до 3 раз в год) и продолжительностью на протяжении всего периода последующего наблюдения. В этой группе пациентов только у 18 (40,9 ± 7,4%) человек не было установлено признаков прогрессирования ВИЧ-инфекции, т.е. все эти больные по-прежнему оставались на 4А клинической стадии.
Из 39 больных без диареи на момент первичной диагностики криптоспоридиоза от 18 (46,2 ± 8,0%) больных при дальнейшем наблюдении также были получены сведения об эпизодах непродолжительной диареи с частотой 2-3 раза в год. Удельный вес больных с диареей в отдаленном периоде (при ее отсутствии на момент первичного обследования) в этой группе больных был заметно меньше, а разница с 44 больными пред-
ставленной выше группы по пропорции больных с диареей оказалась статистически значимой (р < 0,05). Признаков прогрессирования ВИЧ-инфекции из 39 больных без диареи на момент первичной диагностики криптоспоридиоза не наблюдалось у 26 (66,7 ± 7,5%). Этот показатель также заметно превышал аналогичный параметр в представленной выше группе из 44 больных, а обнаруженная разница была статистически достоверной (р < 0,05).
Еще один из возможных вариантов анализа выглядит так. Из 83 больных криптоспоридиозом с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции рецидивирующая диарея в отдаленном периоде наблюдения (вне зависимости от ее наличия на момент первичного обследования) имела место у 49 (59,0 ± 5,4%) больных. У остальных 34 (41,0 ± 5,4%) больных крип-тоспоридиоз также протекал в хронической форме, но бессимптомно. По истечении периода наблюдения у 44 (53,0 ± 5,5%) больных из 83 не наблюдалось прогрессирования ВИЧ-инфекции и перехода больных из 4А в 4Б или 4В клинические стадии. В группе из 34 больных с бессимптомным криптоспоридиозом отсутствие прогрессирования ВИЧ-инфекции наблюдалось у 24 (70,6% ± 7,8%). В то же время, в группе из 49 больных с хроническим криптоспоридиозом такое же течение ВИЧ-инфекции без прогрессирования имело место только у 20 (40,8 ± 7,0%) человек. Разница этих двух показателей была статистически значимой (р < 0,01).
Из 33 больных криптоспоридиозом с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции паразитологическос выздоровление наблюдалось всего у 3 (9,1 ± 5,0%) человек. Доля больных с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции, которые выздоровели от криптоспоридиоза, была намного меньше, чем в группе больных с 3 клинической стадией ВИЧ-инфекции (85,7 ± 13,2%, р < 0,001) и с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции (25,9 ± 4,1%, р< 0,01).
Из 24 больных с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции и диареей паразитологическое выздоровление наблюдалось в трех случаях. Все 3 выздоровевших больных с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции были из числа тех 9 больных, у которых диарея на момент первичного установления диагноза криптоспоридиоза отсутствовала (это составило 33,3 ± 15,7%).
Интересно, что практически с такой же частотой (33,9 ± 6,2%) наблюдалось выздоровление и среди больных криптоспоридиозом с 4А
клинической стадией ВИЧ-инфекции без диареи.
Из остававшихся под дальнейшим наблюдением 30 больных крип-тоспоридиозом с 4Б клинической стадией ВИЧ-инфекции умерли 17 больных. Из числа 24 больных с диареей при первичном обследовании умерли 15 (62,5 ±9,9%) человек, а из оставшихся 6 больных без диареи - 2 (33,3 ± 19,2%). Однако, при данном числе наблюдений статистически значимой разницы этих показателей не установлено.
Среди оставшихся 13 больных с 4Б стадией, которые были доступны дальнейшему наблюдению, у 9 человек наблюдалась диарея при первичном обследовании. В дальнейшем рецидивирующая диарея с периодами ремиссий сохранялась у всех 9 больных. Из 4 пациентов, у которых диарея при первичном обследовании отсутствовала, у всех были выявлены кратковременные эпизоды повторной диареи в отдаленном периоде. Признаков прогрессирования ВИЧ-инфекции за время наблюдения не было у 4 (30,8 ± 12,8%>) больных, у остальных 9 (69,2 ± 12,8%) больных ВИЧ -инфекция прогрессировала в 4В стадию.
Ни у одного из 14 больных криптоспоридиозом с 4В клинической стадией ВИЧ-инфекции паразитологического выздоровления не было зафиксировано вплоть до момента их смерти, которая наступала в результате усугубления иммунодефицита и прогрессирующего течения резистентных к терапии вторичных болезней. Диарея отсутствовала у 3 (21,4 ± 11,4%) больных, что свойственно бессимптомному течению криптос-поридиоза.
2.4 Молекулярно-генетическая характеристика криптоспоридий, обнаруженных у больных ВИЧ-инфекцией
Молекулярно-генетическая характеристика криптоспоридий стала предметом изучения только в конце 90-х годов 20 века и позволила четко определять источники инфекции, как при массовых вспышках заболевания, так и при спорадических случаях болезни. Изучение генотипов паразита на клиническом материале выявило отличия клинических проявлений при заражении тем или иным видом криптоспоридий.
Молекулярно генетические исследования были выполнены у 14 больных криптоспоридиозом с 4А клинической стадией ВИЧ-инфекции. Из числа отобранных 14 больных, у 7 человек криптоспоридиоз сопро-
вождался диареей, у других 7 человек имела место бессимптомная форма болезни. При отборе больных мы руководствовались критерием концентрации ооцист в испражнениях. У всех обследованных больных она была максимальной среди других представителей соответствующей группы. Это было предпринято для повышения вероятности положительных результатов экстракции ДНК для последующего исследования с помощью полимеразной цепной реакции с вложенными праймерами (ПЦР) и основанного на ней анализа полиморфизма рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализ).
Амплификация ДНК была успешной с каждым из всех 14 исследованных образцов испражнений. При электрофоретическом разделении вторичного продукта ПЦР, подвергнутого воздействию рестрикционной эндонуклеазы Ssp I, были получены три отчетливые полосы . Одна из полос соответствовала фрагменту величиной 448-450 пар нуклеотидв (пн), другая - фрагменту величиной 250-255 пн, третья - фрагменту величиной 108-110 пн (рис. 1).
Фрагменты ДНК:
а) 448-450 пн
б) 250-255 пн
в) 108-110 пн
Рис. 1. Результат ПЦР-ПДРФ анализа после воздействия рестрикционной эндонуклеазы вяр! (метки указаны жирными стрелками и соответствуют фрагменту ДНК величиной 500 пар нуклеотидов (пн))
В результате воздействия рестрикционной эндонуклеазы УБр I и последующего элетрофоретического разделения были получены две полосы. Одна полоса соответствовала фрагменту величиной 625-630 пн,
другая фрагменту 100-106 пн (рис. 2). По результатам ПДРФ-анализа все обнаруженные в испражнениях больных ВИЧ криптоспоридии были идентифицированы как С. parvum (ранее употреблявшиеся синонимы - С. parvum генотип 2 или С. parvum бычий генотип). Ни в одном из изученных образцов испражнений не было обнаружено ни С. hominis, равно как и ни одного другого из числа описанных у больных ВИЧ зоонозных генотипов паразита.
Рис. 2. Результат ПЦР-ПДРФ анализа после воздействия рестрикционных эндонуклеаз Узр! (метки указаны жирными стрелками и соответствуют фрагменту ДНК величиной 500 пар нуклеотидов (пн))
2.5 Оценка жизнеспособности ооцист криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ инфекцией, по показателю их экецистирования
Применительно к задачам данного исследования оценка жизнеспособности ооцист была выполнена у больных ВИЧ-инфекцией с крип-тоспоридиозом, который сопровождался клиническими проявлениями (диареей), а также у больных с бессимптомным течением. Исследование выполняло несколько задач. С одной стороны оно представляло собой попытку ответить на вопрос, является ли бессимптомное течение криптос-поридиоза признаком начинающегося выздоровления, с другой - давало возможность оценить в сравнении эпидемиологическую опасность боль-
Фрагменты ДНК:
б) 100-106 пн
а) 625-630 пн
ного криптоспоридиозом с диарей и без диареи. Известно, что в периоде ремиссии или реконвалесценции при отсутствии клинических проявлений больной продолжает выделять ооцисты криптоспоридий с испражнениями, но среди ооцист начинают преобладать нежизнеспособные формы (Z. Bukhari, Н. Smith, 1997; Caccio, Е. Pozio, 2006).
Исследование было выполнено у 25 больных с криптоспоридиозом с 4А стадией ВИЧ-инфекции. Из их числа у 13 человек криптоспоридиоз протекал бессимптомно, а у 12 больных сопровождался диареей. Оценка активности эксцистирования выявила следующее. У 13 больных ВИЧ-инфекцией без диареи средний показатель эксцистирования составил 82,7%±11,4%, а у 12 больных ВИЧ-инфекцией с диареей - 85,3%±12,1%. Статистически значимая разница этих показателей отсутствовала (р > 0,05).
Таким образом, у больных ВИЧ-инфекцией содержащиеся в испражнениях ооцисты характеризовались одинаково высокой степенью жизнеспособности независимо от наличия или отсутствия клинических проявлений в виде диареи. Использованный нами метод оценки жизнеспособности ооцист позволяет считать, что больные ВИЧ-инфекцией с криптоспоридиозом без диареи представляют такую же эпидемиологическую опасность, как и больные с диареей. Высокий процент эксцистирования ооцист криптоспоридий у больных с субклинической формой криптоспоридиоза не даст оснований полагать, что отсутствие диареи было признаком ремиссии или начавшегося выздоровления.
2.6 Оценка вирулентности ооцист криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией, при экспериментальном заражении мышей SCID
Мыши линии SCID, у которых нет ни Т-, ни В-лимфоцитов, представляют собой одну из наиболее адекватных экспериментальных моделей для оценки биологических свойств криптоспоридий, прежде всего их инфекционности (К. Hikosaka et al., 2005). До последнего времени интерес к оценке жизнеспособности ооцист был сконцентрирован на характеристике свойств паразита, обнаруживаемого в воде или подвергшегося воздействию дезинфицирующих средств. Удалось обнаружить только одну работу, в которой авторы выполнили исследование заразительности ооцист, выделенных от больных ВИЧ инфекцией, путем инокуляции
лабораторным животным (С. ЯассиП й а1., 2006). Нам удалось воспроизвести инфекцию у всех 24 животных, зараженных ооцистами из испражнении 24 больных ВИЧ-инфекцией (12 больных криптоспоридиозом с диареей и 12 больных - без диареи). Клиника криптоспоридиоза отсутствовала у всех зараженных мышей. На протяжении всего эксперимента и в отдаленные сроки наблюдения все мыши остались живы.
Заражающая доза ооцист, использованная нами для каждого отдельного опыта, была постоянной и составляла 103 ооцист. Несмотря на это биологическая модель позволила обнаружить разницу в вирулентности криптоспоридий, полученных от разных больных ВИЧ-инфекцией. Наши исследования показали, что из 24 исследованных образцов испражнений больных ВИЧ только в 3 (12,5%), если ориентироваться на сроки первого появления ооцист в кале мышей, или в 5 (20,8%) образцах, если ориентироваться на время достижения пика экскреции ооцист, содержались высоковирулентные криптоспоридии. Это число высоковирулентных криптоспоридий может быть увеличено до 8 (33,3%), если ориентироваться на самую высокую концентрацию ооцист паразита, которая была зафиксирована в испражнениях этих 8 мышей по итогам двух месяцев наблюдения. Таким образом, результаты экспериментальной инфекции у мышей БСГО дают основание предполагать, что у подавляющей части больных ВИЧ криптоспоридиоз был вызван штаммами паразита с невысокой вирулентностью.
Связь изученных нами параметров экспериментальной инфекции у мышей с наличием или отсутствием диареи при криптоспоридиозе у больных ВИЧ-инфекцией отсутствовала. Это свидетельствовало о том, что наличие или отсутствие диареи в большей мере определялось состоянием организма больного, чем вирулентностью и патогенностью каждого отдельного изолята паразита.
2.7 Результаты оценки биологических свойств криптоспоридий по росту в культуре (в питательной среде, не содержащей клеток хозяина)
Исследование культур криптоспоридий в течение первых двух часов инкубации позволило наблюдать процесс освобождения спорозо-итов из ооцист. При этом в культуре можно было видеть одновременно
целые ооциеты, частично освободившиеся от спорозоитов ооцисты, свободные спорозоиты, пустые оболочки ооцист.
В специальной серии исследований, посвященной изучению процесса трансформации спорозоитов в другие морфологические формы паразита в культуре, были получены следующие результаты.
На протяжении первого часа инкубации в среде доминировали ин-тактные (не освободившиеся от спорозоитов) ооцисты. В течение второго часа инкубации освобождение спорозоитов из ооцист становилось более активным. К концу второго часа в культуре преобладали свободные спорозоиты и оболочки ооцист, хотя можно было видеть единичные сохранившиеся ооцисты без признаков эксцистирования.
Первые признаки трансформации спорозоитов в другие клеточные формы появлялись спустя два часа инкубации. Их активность нарастала в течение последующих двух часов. Спорозоиты меняли форму и размеры, укорачиваясь и становясь толще. Клеточное ядро постепенно смещалось к центру, после чего в клетке соответственно расположению ядра формировалось выпячивание цитоплазмы. Клетка приобретала форму запятой.
Вслед за этой стадией развития в течение последующих двух часов инкубации, с четвертого по шестой час от начала культивирования, часть клеток приобретала форму веретена, а другая часть приобретала круглую или овальную форму. Спустя шесть-восемь часов инкубации овальные и веретенообразные клетки формировали небольшие группы. На этой стадии обнаруживались клеточные формы, которые по своему строению уже существенно отличались от спорозоитов. По своим морфологическим характеристикам клетки больше соответствовали трофозоитам, но выглядели полиморфно.
Динамика трансформации клеточных форм паразита в культуре не была подвержена вариациям и не отличалась между изолятами, полученными от разных больных. Мы также сравнивали разные методы стимуляции освобождения спорозоитов из ооцист. Они включали внесение в среду культивирования только свободных спорозоитов, частично экс-цистированных ооцист, а таюке интактных ооцист без эксцистирования. Никаких особенностей поведения культуры в зависимости от способа эксцистирования отмечено не было. Изученные нами добавки в среду культивирования также не оказывали влияния на описанную динамику трансформации спорозоитов в культуре.
На второй день роста культуры в ней можно было обнаружить только единичные целые или частично освободившиеся от спорозоитов ооцисты. В культуре преобладали активно двигавшиеся овальные и веретенообразные клетки с одним ядром. Клетки имели размеры от 1,5 до 2.0 мкм. Некоторые клетки располагались попарно с достаточно плотным контактом между ними, что могло быть признаком недавнего клеточного деления.
Известно, что для мерозоитов характерна веретенообразная форма с заостренными концами и смещенным к периферии цитоплазмы ядром. Такие клетки можно было обнаружить в культуре. Но некоторые клетки удлиненной формы имели закругленные концы, что отличало их от мерозоитов. Другой тип клеток более соответствовал морфологическим характеристикам трофозоитов. Ядро в таких клетках также располагалось несколько асимметрично и было окружено более широкой цитоплазмой. Клетки овальной формы находились в среде отдельно либо в составе кластеров, включавших от трех до нескольких десятков клеток.
В культуре редко удавалось наблюдать меронты первого и второго типов, хотя мерозоиты первого типа встречались достаточно часто в период от третьего до шестого дня инкубации культуры. Мерозоиты первого типа представляли собой клетки овальной или округлой формы с максимальными размерами 0,6 - 1,1 мкм в диаметре. Спустя шесть-девять дней инкубации можно было обнаружить в культуре единичные меронты второго типа. Их размеры варьировали от 9 мкм до 15 мкм в диаметре.
Начиная со второй недели культивирования и вплоть до одного месяца наблюдения все описанные выше формы развития паразита обнаруживались с различной частотой во всех изученных культурах.
Предположительно половые формы развития паразита (микрога-монты) появлялись в культуре начиная со второго дня культивирования, но чаще к концу первой недели роста и развития культуры. Ни в одной из культур не удалось наблюдать формирование новых ооцист паразита.
Выполненные в рамках данного исследования эксперименты по культивированию криптоспоридий в искусственной питательно среде, не содержащей клеток хозяина, показали следующее. Несмотря на все усилия и поиски путей стимуляции культуры, нам не удалось добиться полного завершения жизненного цикла. С другой стороны, нам удалось показать, что обнаруженные у больных ВИЧ-инфекцией паразиты обла-
дают некоторым потенциалом роста в условиях in vitro.
В сенсационной публикации авторы из Австралии утверждали, что им удалось в бесклеточной питательной среде добиться завершения жизненного цикла и получить ооцисты, обладавшие инфективностью для мышей (N. Hijjawi et al., 2004). Иными словами, были получены результаты, которые давали основания утверждать, что паразит больше не нуждается в хозяине, т.е не является облигатным внутриклеточным паразитом, как полагали на протяжении всей истории его изучения.
Появившаяся через два года после нее публикация авторов из США опровергла заявленную сенсационную возможность культивирования в бесклеточной среде (D. Girouard et al., 2006). Авторам из США не удалось увидеть ни одной из стадий развития паразита в питательной среде, приготовленной по рецептуре австралийских исследователей, с использованием заявленной ими методики культивирования.
Результаты наших исследований культуры криптоспоридий в бесклеточной питательной среде занимают промежуточное положение, культура характеризовалась ростом до некоторого предела, но нам не удалось добиться завершения жизненного цикла.
Исследование показало, что паразит способен проходить некоторые начальные стадии развития в искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина. Были детально изучены стадии трансформации в течение первых часов и суток культивирования. Трансформация начиналась спустя два часа инкубации и в основном завершалась спустя восемь часов культивирования. Она шла двумя путями и приводила к появлению двух типов клеток, морфологически сходных с трофозоитами и с мерозо-итами. Обнаружение в культуре трофозоитов сразу вслед за спорозоита-ми логично и соответствует тому, что обычно имеет место при инвазии паразита в клетку хозяина. Труднее объяснить появление веретенообразных клеток, морфологически напоминающих мерозоиты, но не вслед за трофозоитами, а параллельно с ними. Никаких вариантов объяснения не приведено и в публикации из Австралии, т.к. появление подобного типа клеток они отмечали спустя несколько дней культивирования (N. Hijjawi et al., 2004). Коллектив авторов из США был лишен этой проблемы трактовки, т.к. вообще не наблюдал никакой трансформации в культуре паразита (D. Girouard et al., 2006).
Формирование подобных клеток наблюдали авторы из Испании при
культивировании криптоспоридий в культуре клеток (М. Rosales et al., 2005), но только начиная с третьего дня инкубации.
Нам не удалось наблюдать ни в одной культуре агрегацию трофозои-тов и формирование меронтов первого типа или сходных с ними структур, равно как и половые стадии развития паразита, вновь сформировавшиеся ооцисты или спорозоиты в поздние сроки наблюдения за культурами. Данная модель in vitro не обладала чувствительностью, достаточной для выявления отличий между различными изолятами паразита, как это наблюдалось при экспериментальном инфицировании мышей SCID. Следует признать, что биологическая модель более адекватно отражала индивидуальных отличия изолятов паразита, выделенных от разных больных ВИЧ-инфекцией.
2.8 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в питьевой воде
Исследование питьевой воды было выполнено для оценки ее роли в качестве потенциального фактора передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией.
Нам удалось обнаружить всего две ооцисты паразита только в одном образце питьевой воды объемом 600 литров, который был получен во второй половине октября. Обе ооцисты были нежизнеспособными. Они представляли собой пустые оболочки без спорозоитов. Эпидемиологическое значение этой находки в плане потенциальной опасности пути заражения при употреблении питьевой воды минимально. Во-первых, все обнаруженные в питьевой воде ооцисты были нежизнеспособными, во-вторых, их удельная концентрация составила всего одну ооцисту в 300 литрах питьевой воды (при минимальной заражающей дозе 30 ооцист). Однако эта находка может представлять определенный интерес в контексте других результатов предпринятого нами исследования.
Результаты исследования питьевой воды позволили заключить, что она не может быть ведущим фактором передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в Ростове-на-Дону. Однако обнаружение даже следовых количеств ооцист и только в одном из 12 исследованных образцов питьевой воды свидетельствует о том, что потенциальная возможность контаминации воды ооцистами криптоспоридий существует. Об-
наружение ооцист криптоспоридий в питьевой воде стало поводом для исследования воды реки Дон.
2.9 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в воде бассейна реки Дон и его притоков
Обнаружение двух ооцист криптоспоридий в единственном образце питьевой воды поставило вопрос об оценке степени контаминации этим паразитом речной воды. Река Дон является единственным источником водоснабжения населения Ростова-на-Дону питьевой водой. Хозяйственная деятельность на территориях, прилегающих к руслу Дона или его притоков, может быть потенциальным фактором риска загрязнения речной воды. Населенные пункты и животноводческие фермы, расположенные по берегам Дона и его притоков, имеют разный уровень благоустройства и очистки стоков. Земледельческие хозяйства постоянно вносят в почву органические удобрения (навоз). Все это создает угрозу заражения воды реки Дон ооцистами криптоспоридий.
В первой серии исследований были изучены 9 образцов воды реки Дон, которые были получены из одного и того же места, расположенного на 1 км выше по течению от места Ростовского городского водозабора. Интерес к исследованию воды на этом участке реки был обусловлен тем, что именно в этом месте производится ее получение для последующей очистки, обеззараживания и подачи в городскую систему водоснабжения. Выше по течению от этого участка в основное русло реки Дон со стороны се правого берега впадает небольшая река Аксай. Забор проб воды производился с 24 апреля по 19 мая 2005 г. с кратностью два раза в неделю. Всего было отобрано и исследовано 9 образцов воды.
Результаты определения ооцист паразита в воде реки Дон на 1 км выше по течению от места городского водозабора позволили выявить их в каждом из 9 исследованных образцов. В дождливые дни было получено 4 образца воды для исследования (образцы № 1, № 2, № 3, № 5). Средняя концентрация ооцист криптоспоридий в речной воде составила 16,3 ± 2,7 в 10 литрах исследованного образца с колебаниями концентрации от 12 до 23 ооцист в 10 литрах воды. Пять образцов воды были получены в те дни, когда осадков не наблюдалось (образцы № 4, № 6, № 7, № 8, № 9) средняя концентрация ооцист в воде в эти дни была ниже и составила
10,2 ± 2,9 в 10 литрах с колебаниями от 5 до 21 ооцист в одном образце. При формальном анализе средние показатели концентрации ооцист в воде реки Дон в дождливые дни существенно не отличались от показателей их концентрации в дни без осадков, во всяком случае статистическая разница этих двух показателей отсутствовала.
Однако, следует обратить внимание на образец № 4, который формально был получен не в дождливый день, но в тот период, когда стояла дождливая погода и осадки в те дни были регулярными. Уровень воды в реке при заборе образца № 4 был таким же высоким, как и у других образцов, полученных во время дождей, что также косвенно указывает на взаимосвязь образца № 4 с дождливой погодой. Если этот образец № 4 включить в группу образцов, полученных во время дождей (образцы № 1, № 2, № 3, № 5 и плюс добавленный к ним образец № 4), и исключить его из числа образцов, полученных в сухую погоду (образцы № 6, № 7, № 8, № 9 минус образец № 4), то результаты выглядят по-иному. При таком варианте группировки средняя концентрация ооцист в речной воде в дождливую погоду составила 17,2 ± 2,7, а при отсутствии дождей - 7,5 ± 1,3 в 10 литрах исследованного образца. При таком варианте группировки образцов и статистического анализа разница между средней концентрацией ооцист в период дождей и в период отсутствия осадков становится статистически значимой (р < 0,05). Таким образом, гипотеза о влиянии атмосферных осадков на концентрацию ооцист в воде реки Дон имеет право на существование.
Если провести группировку результатов определения ооцист в зависимости от уровня воды в реке Дон, то получится, что при высоком уровне воды средняя концентрация ооцист составила 17,2 ± 2,7, а при низком уровне воды - 7,5 ± 1,3 (р < 0,05), что полностью соответствует приведенному выше варианту статистического анализа применительно к осадкам.
Для обнаружения ооцист криптоспоридий в воде реки Дон было выполнено еще одно исследование, которое предполагало забор воды реки Дон и ее главных притоков на участке от Цимлянского водохранилища до г. Азов. Задачей данного фрагмента исследования была эпидемиологическая оценка уровня контаминации ооцистами криптоспоридий отдельных участков реки Дон и воды ее основных притоков.
Образцы воды реки Дон и ее притоков отбирали 26-27 мая 2005 года.
В первый день были исследованы участки акватории в непосредственной близости от Ростова-на-Дону и в пределах городской черты. В этот же день был получен один образец воды в районе городского водозабора г. Азов, т.е. вниз по течению от Ростова-на-Дону.
На следующий день были произведены заборы проб воды из рек Маныч, Сал и Цимлянского судоходного канала, которые расположены на левом берегу Дона от Ростова до Волгодонска. Затем были выполнены заборы образцов воды из Цимлянского водохранилища, участков реки Дон и Северский Донец, которые расположены вдоль правого берега Дона.
Ооцисты криптоспоридий были обнаружены в 6 из 16 исследованных образцов речной воды. Образец № 1, полученный на левом берегу основного русла Дона и расположенный на уровне городского водозабора на противоположном берегу содержал всего 9 ооцист криптоспоридий в 10 литрах. Этот образец был получен с территории частного пляжа. Ниже по течению на левом берегу реки Дон расположены базы отдыха, а еще ниже по течению на уровне центральной части города находится городской пляж.
Самая высокая концентрация ооцист (565 в 10 л образца) была выявлена в реке Темерник на участке ее течения в центре города за 300 м до впадения в реку Дон (образец № 6). На втором месте по содержанию ооцист (335 в 10 л) была вода реки Дон, на участке вниз по течению после впадения в нее реки Темерник (образец № 5). Возможным объяснением таких результатов является то, что вода реки Темерник после впадение в русло Дона смешивается с донской водой и на короткой дистанции подвергается небольшому разбавлению. В воде той же реки Темерник в районе ботанического сада (образец № 8) содержание ооцист было еще ниже (95 в 10 л). Следует отметить, что именно на участке реки Темерник от ботанического сада и до ее впадения в реку Дон н нее попадает большой объем городских стоков. Возможно, этим и объясняется более интенсивное загрязнение воды реки Темерник на участке ее течения в районе городской застройки высокой плотности.
Приблизительно в одинаковой и сравнительно невысокой концентрации содержала ооцисты криптоспоридий вода реки Мертвый Донец (30 и 25 ооцист в 10 л, в образцах №3 и № 4, соответственно). По правому берегу реки Мертвый Донец расположен обширный участок малоэтажной застройки с преобладанием частных домовладений. В этом районе города
нет системы канализации, и преобладают туалеты с выгребными ямами. Часть населения, проживающего в районе реки Мертвый Донец, занимается разведением животных, включая крупный рогатый скот. Сточные воды с мест содержания животных имеют возможность непосредственного попадания в воду реки, особенно во время дождей и таяния снега. Выпас животных производится на правом и левом берегах реки Мертвый Донец. Кроме этого, река Мертвый Донец является одним их рукавов дельты реки Дон и питается водой из основного русла Дона. Таким образом, источником контаминации воды реки Мертвый Донец ооцистами криптоспоридий могут быть как основное русло реки Дон, так и стоки с территории частных домовладений.
Обращает на себя внимание тот факт, что вода Дона и его главных притоков (рек Маныч, Сал, Северский Донец) на всем протяжении вниз по течению от Цимлянского водохранилища (включая и воду самого Цимлянского водохранилища) до станицы Старочеркасской не содержала ооцист криптоспоридий. Определяемые количества ооцист в воде реки Дон появлялись в районе городского водозабора. Единственным вариантом объяснения этой находки является попадание ооцист в русло Дона ниже станицы Старочеркасской. В этом месте в реку Дон впадает небольшая река Аксай. На правом ее берегу на протяжении нескольких километров расположены населенные пункты с преобладанием частных малоэтажных домов с приусадебными хозяйствами. Система централизованной канализации отсутствует, поэтому население пользуется выгребными туалетами. На приусадебных участках, которые расположены на склоне, население занимается интенсивным разведением овощей, а также содержит скот. Правый и левый берег реки Аксай используется в качестве пастбищ для скота. Т.е. условия хозяйственной деятельности и благоустройства по берегам реки Аксай совпадали с таковыми в районе реки Мертвый Донец. Наиболее вероятно, что контаминация воды реки Дон в районе городского водозабора имела своим источником реку Аксай.
Результаты исследования ооцист в основном русле реки Дон на уровне города Азов в районе городского водозабора также дали неожиданный результат. В образцах воды реки Дон, полученных на уровне г. Азов ооцисты криптоспоридий обнаружены не были. Как уже было указано выше, вода основного русла реки Дон после впадения в нее реки
Темерник содержала достаточное количество ооцист криптоспоридий (образец № 5 - 335 ооцист в 10 литрах воды). Вода является настолько благоприятной средой для ооцист, что они сохраняют свою жизнеспособность в воде на протяжении нескольких месяцев, а исследование образцов № 2 и № 5 было выполнено в один и тот же день. Исследование воды было произведено в конце мая, т.е. температура воды также способствовала сохранению жизнеспособности ооцист.
Следует также учесть, что все образцы с № 9 по № 16 были получены на фоне стабильной сухой и солнечной погоды в течение предшествующей недели. Отсутствие осадков могло обусловить низкую вероятность попадания ооцист криптоспоридий в воду реки Дон в дни, которые предшествовали забору образцов.
Если приведенное допущение верно, то все же следует признать, что концентрация ооцист криптоспоридий в воде реки Дон не является высокой. В частности, в районе Ростовского водозабора в 9 пробах воды определяемая концентрация ооцист была невысокой по сравнению с другими участками, где ооцисты были обнаружены. Наиболее контаминиро-вана ооцистами вода реки Темерник, участок реки Дон после впадения в нее реки Темерник и вода реки Мертвый Донец.
Результаты исследования питьевой воды позволили обнаружить всего две ооцисты в одной из двенадцати исследованных проб при объеме каждой из проб в 600 литров. Полученный результат контрастировал с наличием достаточного количества ооцист в воде реки Дон в районе водозабора. Средняя концентрация в 9 исследованных образцах составила 12,9 ± 2,2 ооцист в 10 литрах, т.е. около 780 ооцист в пересчете на 600 литров (объем исследованных образцов питьевой воды). Исходя из этого следует заключить, что применяемая в Ростове-на-Дону технология очистки питьевой воды позволяет добиваться эффективного удаления ооцист криптоспоридий и сводить к предельному и безопасному минимуму их содержание в конечном продукте.
Наши исследования показали, что потенциал водного пути передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией, проживающих в Ростове-на-Дону, следует признать ничтожно малым. Результаты исследования воды не позволили установить ее существенной роли в эпидемиологии криптоспоридиоза.
2.10 Результаты исследования ооцист криптоспориднй в испражнениях сельскохозяйственных животных, хищников зоопарка и дико живущих лис
Для оценки потенциальной роли сельскохозяйственных животных как источника инфекции были выполнены исследования сельскохозяйственных животных и птиц, которые содержались на фермах в окрестностях Ростова-на-Дону и снабжали своей продукцией население города.
Исследование испражнений поросят не позволило обнаружить ооцисты криптоспориднй ни в одном из изученных образцов. Все исследованные испражнения птиц, цыплят и утят, также не содержали ооцист паразита.
В испражнениях 8 (16,3%) телят из 49 обследованных в 2005 году были обнаружены ооцисты криптоспориднй. В связи с этим было выполнено еще одно обследование телят с другой фермы в 2006 году. Это обследование позволило обнаружить ооцисты криптоспориднй в испражнениях 13 (19,4%) из 67 изученных проб испражнений от разных животных.
При этом у 16 из 21 животных концентрация ооцист в испражнениях была невысока и колебалась в пределах 103 - 104 ооцист в пересчете на грамм испражнений. У трех телят концентрация ооцист испражнений была 105 - 106 в пересчете на один грамм. У двух животных концентрация ооцист в испражнениях составила 107 в пересчете на грамм. Учитывая, что заражающая доза для человека составляет от 30 до 100 ооцист, обнаруженные у животных концентрации способны приводить к интенсивному заражению разнообразных объектов окружающей среды, включая водные ресурсы и сельскохозяйственные земледельческие угодья.
Определение принадлежности обнаруженных у телят ооцист криптоспориднй к конкретному виду паразита было выполнено с использованием морфометрических критериев.
Согласно данным литературы, крупный рогатый скот может быть резервуаром трех видов криптоспоридий, С. parvum, С. andersoni и С. mûris, при этом размеры ооцист С. parvum составляют 4,5x5,5 мкм, С. andersoni - 5,6x7,4 мкм, С. mûris 5,5x7,4 мкм (S. Caccio, 2005). Из представленных данных литературы видно, что трудности в определении видовой принадлежности ооцист возникают только при разграничении С.
andersoni и С. mûris, т.к. размеры ооцист у них практически одинаковы и намного больше, чем у С. parvum. Размеры обнаруженных в испражнениях телят ооцист соответствовали С. parvum. Эпидемиологическое значение обнаружения ооцист С. parvum у обследованных нами телят заключается в том, что С. parvum патогенна для человека и относится к числу самых частых возбудителей криптоспоридиоза в популяции людей, а С. andersoni заболевание у человека не вызывает.
Кроме сельскохозяйственных животных в 2005 году были обследованы испражнения 29 хищников Ростовского зоопарка. Зимой того же года были выполнены дополнительные исследования испражнений 15 дико живущих лис. Испражнения лис были обнаружены и собраны в окрестностях Ростова-на-Дону. Результаты исследования ооцист крип-тоспоридий во всех образцах испражнений хищников Ростовского зоопарка и дико живущих лис были отрицательными. Это позволило сделать заключение, что обследованные животные не являются резервуаром инфекции.
ВЫВОДЫ
1. Иммунологические методы лабораторной диагностики криптоспоридиоза обладают преимуществом по сравнению с микроскопическими методами и характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью, что позволяет выявлять даже бессимптомные формы болезни.
2. На ранних стадиях ВИЧ-инфекции криптоспоридиоз выявляется у небольшой части больных, течение болезни благоприятное и в большинстве случаев характеризуется спонтанным выздоровлением. По мере прогрессирования ВИЧ-инфекции и формирования иммунодефицита частота спонтанного выздоровления от криптоспоридиоза снижается, увеличивается частота хронических и клинически выраженных форм болезни.
3. Криптоспоридиоз, сопровождающийся клиническими проявлениями (диареей), приводит к ускоренному прогрессированию иммунодефицита и сокращению продолжительности жизни больных ВИЧ-инфекцией. С учетом негативного влияния криптоспоридиоза на прогноз ВИЧ-инфекции, установление этого диагноза целесообразно рассматривать как самостоятельное и независимое от других критериев показание
к немедленному назначению антиретровирусной терапии.
4. Экспериментальная инфекция у мышей БСШ является наиболее чувствительной моделью изучения вирулентности криптоспоридий. Показатель эксцистирования (освобождения спорозоитов) и культивирование паразита на искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина, не позволяют дифференцировать вирулентность отдельных изо-лятов паразита.
5. Наличие следовых концентраций ооцист в питьевой воде Ростовской городской системы водоснабжения и малой концентрации ооцист в воде реки Дон не представляет эпидемиологической опасности для больных ВИЧ-инфекцией. Повторяющаяся антигенная стимуляция малыми дозами паразита может способствовать формированию иммунитета и резистентности к последующему заражению криптоспоридиями. Это может быть одним из объяснений высокого удельного веса бессимптомных форм криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией с компенсированными нарушениями иммунитета.
6. Единственным установленным резервуаром криптоспоридий среди сельскохозяйственных животных является крупный рогатый скот, что косвенно подтверждают и результаты идентификации зоонозного вида криптоспоридий (С. раг/ит) в испражнениях всех обследованных больных ВИЧ-инфекцией.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. При выявлении у больного ВИЧ-инфекцией диареи или эпизодов диареи в анамнезе даже в случае ее отсутствия на момент обращения к врачу по любому другому поводу, пациенту рекомендуется выполнить обследование на криптоспоридиоз. Особое внимание следует проявлять к больным на стадиях ВИЧ-инфекции 4А, 4Б и 4В, а также на стадии СПИД.
2. При лабораторной диагностике криптоспоридиоза следует отдать предпочтение методу прямой иммунофлюоресценции, который прост в выполнении, обладает высокой чувствительностью и специфичностью по сравнению с прямой микроскопией испражнений или методом окраски мазка испражнений на кислотоустойчивые микроорганизмы.
3. Обнаружение криптоспоридиоза при эпизодах диареи у больных
ВИЧ-инфекцией с 4А, 4Б и 4В клиническими стадиями болезни следует рассматривать в качестве фактора неблагоприятного прогноза, что выражается в ускорении темпов прогрессирования иммунодепрессии. Выявление криптоспоридиоза у больных с ВИЧ-инфекцией на этих стадиях болезни следует рассматривать в качестве самостоятельного показания к немедленному назначению антиретровирусной терапии.
4. Крайне низкая вероятность водного пути передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией должна направлять усилия врачей на профилактику других вероятных путей заражения, в частности, полового.
5. Больным ВИЧ-инфекцией следует избегать прямого контакта с крупным рогатым скотом или испражнениями этих животных из-за высокого риска заражения крнптоспоридиозом.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Карташев В.В., Пономаренко Я.В., Ящинский JI.B., Быков С.А., Амбалов Ю.М., Пшеничная Н.Ю., Лаптева Л.А. Поражение органов пищеварения у больных ВИЧ-инфекцией // Актуальные вопросы патологии желудка и двенадцатиперстной кишки. Ростов-на-Дону. -2000.-С. 49-51.
2. Kartashev V., AmbalovY., Karanis P., Kushnir L., Sauhat S., Ponomarenko Y., Cryptosporidium infection in HIV patients // Developing Research for a Common Future. 2nd German-Russian Cooperative Symposium, 4-8 June 2002. -Rostov-na-Donu , Russia. - 2002 - P. 30-31.
3. Kartashev V., Mitov R., Kourenti C., Gusarev S., Ponomarenko Y., Kushnir L., Ambalov Y., Karanis P. Cryptosporidium parvum among HIV patients in Rostov region (Southern Russia) and detection of oocysts in tap water // IWA Symposium on Health-Related Water Microbiology, Cape Town, South Africa, 14-19 September 2003. - P. 123.
4. Kartashev V.V., Karanis P., Kushnir L., Sauhat S., Ponomarenko Y., Malysheva M., Bykov S., Ambalov Y., Ternovoi M. Current situation of cryptosporidiosis among HIV patients in Rostov area // Improving Research for a Common Future. 3rd German-Russian Cooperative Symposium, Cologne 13.-14. May 2004. Cologne, Germany. - 2004. - P. 14.
5. Kartashev V., Karanis P., Dumbadze O., Tverdohlebova T., Nogornii S., Ambalov Y., Gaeva Z., Dontsov D. Helminthosis and other parasitic diseases in Russia and in the Southern Administrative Region of Russia // Improving Research for a Common Future. 3rd German-Russian Cooperative Symposium, 13.-14. May 2004, Cologne, Germany. - 2004. -P. 17.
6. Kartashev V.V., Karanis P., Ponomarenko Y., Malysheva M., Bykov S., Gusarev S., Kudriavtsev L., Romanov N., Homman N. Study of histopathology of cryptosporidiosis as an opportunistic infection of the digestive tract in acquired immunodeficiency syndrome patients from Rostov area // Improving Research for a Common Future. 3rd German-Russian Cooperative Symposium, 13.-14. May 2004, Cologne, Germany. -2004. - P. 80.
7. Kartashev V.V., Karanis P., Kushnir L., Sauhat S., Ponomarenko Y., Malysheva M., Bykov S., Ambalov Y., Ternovoi M. Current situation of cryptosporidiosis among HIV patients in Rostov area // Improving Research for a Common Future. 3rd German-Russian Cooperative Symposium, 13.-14. May 2004, Cologne, Germany. - 2004. - P. 81.
8. Kartashev V., Karanis P., Sotiriadou I., Kourenti C. Investigations on Giardia and Cryptosporidium in drinking water in Rostov region (Southern Russia). Improving Research for a Common Future. 3rd German-Russian Co-operative Symposium, 13.-14. May 2004, Cologne, Germany. - 2004.
- P. 82.
9. Kartashev V., Karanis P., Ponomarenko Y., Malysheva M., Bykov S., Gusarev S., Kudriavtsev L., Romanov N., Homman N. Histopathology of cryptosporidiosis as an opportunistic infection of the digestive tract in AIDS patients 3 Congresss of German-Greek Academy for Biomedicine, 29-31 May 2004, Kavala, Greece. - 2004. - P. 30.
10. Karanis P., Kartashev V., Sotiriadou I., Kourenti C. Detection of Giardia and Cryptosporidium in drinking water in Rostov region (Southern Russia). 3 Congresss of German-Greek Academy for Biomedicine, 29-31 May 2004, Kavala, Greece. - 2004. - P. 31.
11. Kartashev V.V. Cryptosporidiosis - clinical presentation and therapy // International Giardia Conference and first combined Giardia/Crypto meeting in Amsterdam, 20-24 Sept., Amsterdam, Netherlands. - 2004.
- P. 55.
12. KartashevV.,KaranisP., Sotiriadoul.,KourentiC.,KostovaD. Giardiaand Cryptosporidium in drinking water supplies of Rostov region (Southern Russia) and Sofia (Bulgaria) // 4 International Giardia Conference and first combined Giardia/Crypto meeting in Amsterdam, 20-24 September, 2004, Amsterdam, Netherlands. - 2004. - P. 103.
13. Karanis P, Sotiriadou I, Kartashev V, Kourenti C, Tsvetkova N, Stojanova K. Occurrence of Giardia and Cryptosporidium in water supplies of Russia and Bulgaria // Environ Res. 2006 - Vol. 102, N 3. - P. 260-71.
14. Karanis P., Kushnir L., Sauhat S., Ponomarenko Y., Malysheva M., Bykov S., Ambalov Y., Ternovoi M. Cryptosporidiosis - clinical presentation and prognosis. Developing Research for a Common Future. 4-th German-Russian Co-operative Symposium, 25-28 May, 2004, Cologne, Germany, P. 41-43.
15. Karanis P, Kartashev V. New insights on the development, molecular biology and phylogeny of Cryptosporidium // The 15th Japanese-German Symposium on Protozoan Diseases - Obihiro, Japan, 2006 - P. 52-53.
16. Kartashev V, Ambalov Y, Ponomarenko Y, Karanis P. Cryptosporidiosis in humans - clinical presentation and prognosis in HIV patients from Russia II The 15th Japanese-German Symposium on Protozoan Diseases - Obihiro, Japan, 2006 - P. 54-55.
17. Kiouptsi K, Thekisoe O, Inoue N, Kartashev V, Karanis P. Evaluation and application of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) of DNA for the detection of Cryptosporidium // The 15th Japanese-German Symposium on Protozoan Diseases - Obihiro, Japan, 2006 - P. 80-81.
18. Sotiriadou I, Kartashev V, Karanis P. Application of molecular tools on environmental water for the common detection of Cryptosporidium, Giardia and Toxoplasma // The 15th Japanese-German Symposium on Protozoan Diseases - Obihiro, Japan, 2006 - P. 84-85.
19. Карташев B.B., Амбалов Ю.М., Бекетова E.B., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Быков С.А., Гусарев С.В. Криптоспоридиоз у больных с ранними стадиями ВИЧ-инфекции в Ростове-на-Дону // Инфекционные болезни - 2008, № 2. - С. 50 - 52.
20. Карташев В.В., Амбалов Ю.М., Бекетова Е.В., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Быков С. А., Гусарев С.В. Криптоспоридиоз у больных ВИЧ-инфекцией в Ростове-на-Дону // Эпидемиология и инфекционные болезни - 2008, № 3. - С. 21 - 24.
21. Карташев В.В., Амбалов Ю.М., Саухат С.Р., Шемшура А.Б., Бекетова Е.В., Быков С.А., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Ладычук М.Ю. Роль водных ресурсов в эпидемиологии криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией // Аллергология и иммунология - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 302.
22. Карташев В.В., Хачикян В.З., Амбалов Ю.М., Саухат С.Р., Шемшура А.Б., Бекетова Е.В., Быков С.А., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Ладычук М.Ю. Видовая характеристика криптоспоридий у больных ВИЧ-инфекцией и определение резервуара инфекции среди сельскохозяйственных животных // Аллергология и иммунология - 200-8. -Т. 9, №3.-С. 302.
23. Карташев В.В., Амбалов Ю.М., Саухат С.Р., Шемшура А.Б., Бекетова Е.В., Быков С.А., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Ладычук М.Ю. Изучение свойств криптоспоридий, обнаруженных в испражнениях больных ВИЧ-инфекцией с диареей и без диареи // Аллергология и иммунология - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 303.
24. Карташев В.В., Амбалов Ю.М., Саухат С.Р., Шемшура А.Б., Бекетова Е.В., Быков С.А., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Ладычук М.Ю. Проявления криптоспоридиоза на разных стадиях ВИЧ-инфекции // Аллергология и иммунология - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 303.
25. Карташев В.В., Амбалов Ю.М., Бекетова Е.В., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Быков С.А. Оценка жизнеспособности ооцист криптоспоридий, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией II Медицинская паразитология и паразитарные болезни -2008, №4.-С. 17-19.
26. Карташев В.В., Амбалов Ю.М., Бекетова Е.В., Пономаренко Я.В., Малышева М.И., Быков С.А. Сравнительная чувствительность лабораторных методов обнаружения ооцист криптоспоридий в испражнениях больных ВИЧ-инфекцией // Эпидемиология и инфекционные болезни - 2008, № 6. - С. 51 - 52.
Оглавление диссертации Карташев, Владимир Васильевич :: 2009 :: Ростов-на-Дону
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. Биологические особенности криптоспоридий
1.1 Биология криптоспоридий, история открытия и таксономия паразита.
1.2 Характеристика основных видов криптоспоридий, патогенных для человека.
1.3 Экспериментальный криптоспоридиоз у
Мышей SCID.
1.4 Культивирование криптоспоридий in vitro.
ГЛАВА II. Эпидемиология, лабораторная диагностика и особенности клинических проявлений криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией
2.1 Эпидемиология криптоспоридиоза.
2.2 Лабораторные методы диагностики криптоспоридиоза.
2.3 Клинические проявления криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией.
2.4 Лечение криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА III. Клиническая характеристика больных, объектов окружающей среды и методов исследования.
3.1 Клиническая характеристика больных.
3.2 Лабораторные методы диагностики криптоспоридиоза.
3.2.1 Метод прямой микроскопии испражнений.
3.2.1 Окраска ооцист криптоспоридий в мазке испражнений по методу Киньюн.
3.2.3 Метод прямой иммунофлюоресценции.
3.2.4 Метод иммуномагнитной сепарации.
3.3. Методика выделения ДНК, постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализ).
3.3.1 Метод экстракции ДНК.
3.3.2 Методика полимеразной цепной реакции — ПЦР.
3.3.3 Методика анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализ).
3.4 Методы исследования ооцист криптоспоридий в питьевой воде Ростовской городской системы водоснабжения и в воде бассейна реки Дон и его притоков.
3.4.1 Исследование ооцист криптоспоридий в питьевой воде.
3.4.2. Исследование ооцист криптоспоридий в воде бассейна реки Дон и его притоков.
3.5. Методы выделения, концентрации и очистки ооцист криптоспоридий из испражнений.
3.5.1. Метод предварительной очистки ооцист из испражнений путем осаждения.
3.5.2. Метод очистки и концентрации ооцист из испражнений путем центрифугирования в градиенте плотности раствора сахарозы и в градиенте плотности раствора хлорида цезия.
3.6 Оценка жизнеспособности ооцист криптоспоридий по показателю их эксцистирования (освобождения спорозоитов).
3.7 Оценка вирулентности ооцист криптоспоридий, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией, на модели экспериментальной инфекции у мышей линии SCID.
3.8 Методика культивирования криптоспоридий in vitro в среде, не содержащей клеток хозяина.
3.9 Характеристика обследованных сельскохозяйственных животных и птиц, хищников Ростовского зоопарка и дико живущих лис.
ГЛАВА IV. Результаты исследования.
4.1 Результаты сравнительной оценки чувствительности различных лабораторных методов диагностики криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией.
4.2 Клинические проявления и прогностическое значение криптоспоридиоза у больных на разных стадиях ВИЧ-инфекции.
4.2.1 Клиническая характеристика криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией на момент установления диагноза.
4.2.2 Результаты наблюдения за больными ВИЧ-инфекцией с криптоспоридиозом в отдаленном периоде.
4.3 Результаты исследования биологических свойств криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией.
4.3.1 Молекулярно-генетическая характеристика криптоспоридий, обнаруженных у больных ВИЧ-инфекцией.
4.3.2 Оценка жизнеспособности ооцист криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ инфекцией, по показателю их эксцистирования.
4.3.3 Оценка вирулентности ооцист криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией, при экспериментальном заражении мышей SCID.
4.3.4 Оценка биологических свойств криптоспоридий по росту в культуре (в питательной среде, не содержащей клеток хозяина).
4.4 Результаты исследования роли водного фактора передачи криптоспоридиоза и резервуара паразита среди животных.
4.4.1 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в питьевой воде.
4.4.2 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в воде бассейна реки Дон и его притоков.
4.4.3 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в испражнениях сельскохозяйственных животных, хищников зоопарка и дико живущих лис.
ГЛАВА V. Обсуждение результатов.
Выводы.
Введение диссертации по теме "Инфекционные болезни", Карташев, Владимир Васильевич, автореферат
Более ста лет назад Эрнест Эдвард Тизер (1875 — 1965) впервые обнаружил и описал нового паразита из класса споровиков (Е. Tyzzer, 1907). Автор дал название вновь открытому им паразиту «Cryptosporidium», т.к. в отличие от других споровиков его ооцисты не содержали спороцист, вместо них внутри ооцист располагались четыре спорозоита. Э. Тизеру также принадлежит еще один приоритет в отношении описанного им паразита, который был отнесен к категории оппортунистических, поскольку паразитирова-ние в железах слизистой оболочки желудка мышей, как установил автор, не приводило ни к каким клиническим проявлениям и сопровождалось едва заметными гистологическими изменениями.
С момента открытия Э. Тизера прошло около 70 лет прежде чем крип-тоспоридиоз был выявлен у человека. В 1976 году почти одновременно были опубликованы описания двух случаев болезни, один из них в форме энтероколита у ребенка с сохранным иммунитетом (F. Nime et al., 1976), другой — в виде обильной водной диареи у взрослого больного с иммунодепрессией (J.Meisel etal., 1976).
В целом 7 случаев криптоспоридиоза были опубликованы и суммированы в литературе к 1980 году, из них у 5 больных заболевание возникло на фоне иммунодепрессии (R. Bird, М. Smith, 1980). В связи с этим авторы отметили в своей публикации: «В тех случаях, когда иммунная система функционирует нормально, и нет никаких других фоновых поражений кишечника, криптоспоридиоз не представляет никаких проблем для здоровья и ориентировочно может рассматриваться как оппортунистический возбудитель». Эти слова были написаны в то самое время, когда стали регистрироваться первые случаи СПИД.
Уже через три года появилась первая статья, в которой были представлены 10 случаев криптоспоридиоза с затяжной водной диареей у больных СПИД гомосексуалистов (P. Ma, R. Soave, 1983). А еще через год число описанных в литературе случаев криптоспоридиоза у больных СПИД достигло пятидесяти (Р. Ма, 1984). К концу 1984 года из числа всех описанных в литературе случаев криптоспоридиоза больные со СПИД составляли 83%, а 55% из них погибли (Т. Navin, D. Juranek, 1984).
Связь криптоспоридиоза со СПИД была настолько очевидной, что криптоспоридиоз стал одним из общепризнанных индикаторов СПИД задолго до открытия и описания самого вируса иммунодефицита человека. С начала эпидемии ВИЧ-инфекции и до сегодняшнего дня основная часть исследований, посвященных проблеме криптоспоридиоза, так или иначе были связаны с проблемой СПИД. Исследователей меньше интересовала проблема криптоспоридиоза у больных, находящихся на ранних стадиях ВИЧ-инфекции. Отчасти это было обусловлено тем, что предположение о крип-тоспоридиозе и целенаправленное обследование больных на криптоспоридиоз выполнялось только у больных ВИЧ-инфекцией при появлении диареи.
Больные ВИЧ-инфекцией на стадии СПИД подвержены особо тяжелым затяжным и хроническим формам криптоспоридиоза с обильной водной диареей, обезвоживанием и неблагоприятным прогнозом для жизни (S. Pitlik et al., 1983; С. Petersen, 1992; В. Ramratnam, Т. Flanigan, 1997; D. Clark, 1999; S. Caccio, 2005). Однако, почти одновременно с описанием злокачественных форм криптоспоридиоза у больных СПИД появлялись единичные публикации о более благоприятных клинических вариантах болезни со спонтанным выздоровлением и сообщения о ее бессимптомных формах (F. Zar et al., 1985; F. Zar, 1990; E. Janoff et al., 1990; D. Saltzberg et al., 1991; C. Blanshard et al., 1992; R. Goodgame et al., 1993; I. McGowan et al., 1993; M. Pettoello-Mantovani et al., 1995; S. Chhin et al., 2006). Благоприятно протекающие формы любых болезней редко привлекают внимание врача.
Варианты клинического течения криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией напрямую зависят от степени выраженности иммунодепрессии (Т. Flanigan et al., 1992; Е. Pozzio et al., 1997). Единичные публикации последних лет свидетельствуют также и о том, что клинические проявления криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией могут быть обусловлены биологическими свойствами отдельных видов и генотипов возбудителя (М. Messner et al., 2001; С. Chappell et al., 2006; Y. Cama et al., 2007).
Важность проблемы криптоспоридиоза для больных ВИЧ-инфекцией неоднократно подчеркивалась и отечественными учеными (В.И. Покровский, В.В. Покровский, 1988; Н.А. Чайка, Т.В. Бейер, 1990; В.И. Покровский, Б.А. Годованный, 1995; В.В. Шкарин, С.Н. Соринсон, 1999; В.В. Покровский и др., 2000, 2003; Е.С. Белозеров, Е.И. Змушко, 2003; Ю.В. Лобзин и др., 2003; В.М.Волжанин, 2008). Однако специальные исследования по проблеме криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в России не выполнялись. Было опубликовано описание случая сочетанного течения криптоспоридиоза и туберкулеза у больного ВИЧ-инфекцией (Краченко А.В. и др., 1993). В монографии Л.П. Сизякиной с соавт. (2000), посвященной проблеме ВИЧ-инфекции у детей, приведены данные о частоте криптоспоридиоза среди наблюдавшихся авторами больных на стадиях пре-СПИД и СПИД — 5,7% и 11%, соответственно.
Образовавшийся разрыв между информацией о криптоспоридиозе у больных ВИЧ-инфекцией за рубежом и отсутствием данных о состоянии этой проблемы у больных ВИЧ-инфекцией в России, а также важное значение проблемы криптоспоридиоза для больных ВИЧ-инфекцией определяют актуальность данного исследования.
Цель работы. На основе изучения эпидемиологии криптоспоридиоза в Ростове-на-Дону, особенностей его клинического течения у больных ВИЧ-инфекцией, методов лабораторной диагностики, и оценки биологических свойств паразита разработать программу диагностики и прогноза криптоспоридиоза у больных на разных стадиях ВИЧ-инфекции.
Задачи исследования:
1) исследовать чувствительность разных лабораторных методов диагностики криптоспоридиоза и установить частоту криптоспоридиоза у больных с ВИЧ-инфекцией, дать клиническую характеристику криптоспоридиоза в зависимости от клинической стадии ВИЧ-инфекции, а также изучить влияние разных клинических форм криптоспоридиоза на динамику клинического течения и прогноз ВИЧ-инфекции;
2) выполнить молекулярно-генетические исследования паразита и определить доминирующий вид криптоспоридий у больных ВИЧ-инфекцией в Ростове-на-Дону;
3) исследовать биологические особенности паразита, в частности, жизнеспособность ооцист, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией с разными клиническими проявлениями криптоспоридиоза, провести оценку вирулентности криптоспоридий при экспериментальной инфекции у мышей лини SCID, а также потенциал роста на искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина;
4) выполнить исследование ооцист паразита в питьевой воде городской системы водоснабжения Ростова-на-Дону, а также изучить содержание ооцист криптоспоридий в речной воде бассейна Нижнего Дона для оценки ее роли в эпидемиологии криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией;
5) оценить потенциальную роль отдельных сельскохозяйственных животных и птиц как резервуара криптоспоридий и зоонозного источника инфекции для больных ВИЧ-инфекцией;
6) на основе полученных данных разработать программу оптимизации клинико-лабораторной диагностики и прогноза течения криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией.
Научная новизна
Установлены преимущества иммунологических методов лабораторной диагностики криптоспоридиоза (прямая иммунофлюоресценция и иммуномагнитная сепарация) при обследовании больных ВИЧ-инфекцией над традиционными методами лабораторной диагностики (прямая микроскопия, окраска мазка испражнений по Циль-Нильсену). Эти преимущества характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью методов первой группы, которые позволили выявить высокую частоту бессимптомных формы болезни форм криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону.
Впервые установлена зависимость клинических проявлений и исходов криптоспоридиоза от клинической стадии ВИЧ-инфекции, а также отрицательное влияние хронического криптоспоридиоза на темпы прогрессирова-ния ВИЧ-инфекции уже на ее начальных стадиях.
Впервые в России выполнено генотипирование криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией и определен доминирующий вид паразита у больных ВИЧ инфекцией в Ростовской области — С. parvum.
Впервые в истории изучения криптоспоридиоза изучены биологические свойства криптоспоридий, обнаруживаемых в испражнениях больных ВИЧ-инфекцией. В частности, исследована жизнеспособность выделяемых с испражнениями больных ВИЧ-инфекцией ооцист по показателю активности эксцистирования и их вирулентность для мышей SCID, а также потенциал роста паразита на искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина.
Впервые выполнена эпидемиологическая оценка качества питьевой воды в г. Ростове-на-Дону и речной воды бассейна Нижнего Дона по содержанию в ней ооцист криптоспоридий, а также ^пределен потенциал зоонозного резервуара инфекции среди сельскохозяйственных животных, которым является крупный рогатый скот.
Практическая значимость
Разработана программа клинико-лабораторной диагностики и оценки прогноза криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в зависимости от ее стадии.
Расширены показания к лабораторному обследованию больных ВИЧ-инфекцией на криптоспоридиоз. Рекомендованы методы лабораторной диагностики криптоспоридиоза, обладающие высокой специфичностью и чувствительностью, что повышает вероятность его распознавания у больных ВИЧ-инфекцией.
Изучены биологические особенности криптоспоридий, обнаруженных в испражнениях больных ВИЧ-инфекцией, выполнена оценка их жизнеспособности, потенциал роста при культивировании в искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина, разработана модель оценки вирулентности паразита на экспериментальной модели инфекции у мышей SCID.
Показано, что клинические проявления и исход криптоспоридиоза варьируют в зависимости от клинической стадии ВИЧ-инфекции, вероятность выздоровления существует только у больных на ранних стадиях ВИЧ-инфекции. Установлено отрицательное влияние криптоспоридиоза на темпы прогрессирования ВИЧ-инфекции даже на ранних клинических стадиях при отсутствии выраженного иммунодефицита. При выявлении криптоспоридиоза у больного ВИЧ-инфекцией следует его в число первоочередного кандидата для проведения высоко активной антиретровирусной терапии.
Установлен доминирующий вид паразита, являющийся возбудителем криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией, естественный резервуар инфекции в природе, показано, что вода не является основным путем передачи инфекции.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1. При использовании высоко чувствительных методов лабораторной диагностики выявлена высокая частота криптоспоридиоза у больных
ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону, который характеризуется на ее ранних стадиях значительным удельным весом легких и бессимптомных форм.
2. ВИЧ-инфекция и криптоспоридиоз оказывают взаимное отягчающее влияние. Отрицательное влияние ВИЧ-инфекции проявляется на поздних стадиях болезни и характеризуется увеличением удельного веса клинически проявляющихся и хронических форм криптоспоридиоза. Отрицательное влияние криптоспоридиоза выражается в ускорении темпов прогрессирования ВИЧ-инфекции у больных с хронической формой болезни, сопровождающейся диареей.
3. Доминирующим видом возбудителя криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону является С. parvum, что является свидетельством преимущественно зоонозного резервуара и источника инфекции.
4. Экспериментальная инфекция у мышей SCID является наиболее чувствительной моделью оценки вирулентности криптоспоридий, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией (с учетом видовой принадлежности обнаруженного паразита, представленного С. parvum), показатель эксцистирования ооцист и рост криптоспоридий на искусственной питательной среде не обладают такой чувствительностью.
5. Питьевая вода не является ведущим фактором передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией в г. Ростове-на-Дону.
6. Основным естественным резервуаром инфекции в природе является крупный рогатый скот.
Внедрение в практику
Материалы диссертации внедрены:
1) в работу Областного центра по борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями в Ростовской области;
2) в работу Южного Окружного центра СПИД;
3) в учебный процесс на кафедре инфекционных болезней РостГМУ Росздрава;
4) по теме диссертации опубликованы 26 работ;
5) оформлена заявка на патент «Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов» (№ 2009103545, приоритет от 03.02.2009);
6) подготовлены и опубликованы «Методические указания по лабораторной диагностике криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией» для инфекционистов и врачей клинических лабораторий (Ростов-на-Дону, 2008 г.).
Апробация работы
Основные результаты исследования представлены на научных конференциях: «Developing Research for a Common Future. The 2nd German-Russian Cooperative Symposium, 4-8 June, 2002» (Rostov-on-Don, Russia, 2002); «IWA Symposium on Health-Related Water Microbiology, 14-19 September, 2003» (Cape Town, South Africa, 2003); «Improving Research for a Common Future. The 3rd German-Russian Cooperative Symposium, 29-31 May, 2004» (Cologne, Germany, 2004); « The 3rd Congresss of German-Greek Academy for Biomedi-cine, 29-31 May, 2004» (Kavala, Greece, 2004); « The Fourth International Giardia Conference and the First Combined Giardia/Crypto Meeting in Amsterdam, 20-24 September, 2004» (Amsterdam, Netherlands, 2004); «The 15th Japanese-German Symposium on Protozoan Diseases, 16-21 September, 2006» (Obi-hiro, Hokkaido, Japan, 2006). The 4-th German-Russian Cooperative Symposium, 6-10 June, 2006» (Rostov-on-Don, Russia, 2006). I Съезд инфекционистов ЮФУ (Краснодар, 2008). The 5-th German-Russian Cooperative Symposium, 1417 June, 2008» (Cologne, Germany, 2008). Международная конференция «Физиология и патология иммунной системы», IV Международная конференция по иммунотерапии (Москва, 2008).
Публикации
Основные результаты диссертации представлены в 26 работах, в том числе в 9 изданиях, включенных в перечень рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 337 страницах машинописного текста и состо-" ит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Список литературы включает 668 источников, из которых 34 опубликованы на русском языке и 634 — на иностранных языках. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 37 рисунками.
Заключение диссертационного исследования на тему "Криптоспоридиоз у больныхВИЧ-инфекцией: клинико-экспериментальное и паразитологическое исследование"
262 ВЫВОДЫ
1. Иммунологические методы лабораторной диагностики криптоспоридиоза обладают преимуществом по сравнению с микроскопическими методами и характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью, что позволяет выявлять даже бессимптомные формы болезни.
2. На ранних стадиях ВИЧ-инфекции криптоспоридиоз выявляется у небольшой части больных, течение болезни благоприятное и в большинстве случаев характеризуется спонтанным выздоровлением. По мере прогрессирования ВИЧ-инфекции и формирования иммунодефицита частота спонтанного выздоровления от криптоспоридиоза снижается, увеличивается частота хронических и клинически выраженных форм болезни.
3. Криптоспоридиоз, сопровождающийся клиническими проявлениями (диареей), приводит к ускоренному прогрессированию иммунодефицита и сокращению продолжительности жизни больных ВИЧ-инфекцией. С учетом негативного влияния криптоспоридиоза на прогноз ВИЧ-инфекции, установление этого диагноза целесообразно рассматривать . как самостоятельное и независимое от других критериев показание к немедленному назначению антиретровирусной терапии.
4. Экспериментальная инфекция у мышей SCID является наиболее чувствительной моделью изучения вирулентности криптоспоридий, Показатель эксцистирования (освобождения спорозоитов) и культивирование паразита на искусственной питательной среде, не содержащей клеток хозяина, не позволяют дифференцировать вирулентность отдельных изолятов паразита.
5. Наличие следовых концентраций ооцист в питьевой воде Ростовской городской системы водоснабжения и малой концентрации ооцист (ниже экспериментально установленной заражающей дозы) в воде реки . Дон не представляет эпидемиологической опасности для больных ВИЧ-инфекцией. Напротив, повторяющаяся антигенная стимуляция может способствовать формированию иммунитета и резистентности к последующему заражению криптоспоридиями, что может быть одним из объяснений высокого удельного веса бессимптомных форм криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией с компенсированными нарушениями иммунитета.
6. Единственным установленным резервуаром криптоспоридий среди сельскохозяйственных животных является крупный рогатый скот, что косвенно подтверждают и результаты идентификации зоонозного генотипа криптоспоридий (С. parvum) в испражнениях всех обследованных больных ВИЧ-инфекцией.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. При выявлении у больного ВИЧ-инфекцией диареи или эпизодов диареи в анамнезе даже в случае ее отсутствия на момент обращения к врачу по любому другому поводу, пациенту рекомендуется выполнить обследование на криптоспоридиоз. Особое внимание следует проявлять к больным на стадиях ВИЧ-инфекции 4А, 4Б и 4В, а также на стадии СПИД.
2. При лабораторной диагностике криптоспоридиоза следует отдать предпочтение методу прямой иммунофлюоресценции, который прост в выполнении, обладает высокой чувствительностью и специфичностью по сравнению с прямой микроскопией испражнений или методом окраски мазка испражнений на кислотоустойчивые микроорганизмы.
3. Обнаружение криптоспоридиоза при эпизодах диареи у больных ВИЧ-инфекцией с 4А, 4Б и 4В клиническими стадиями болезни следует рассматривать в качестве фактора неблагоприятного прогноза, что выражается в ускорении темпов прогрессирования иммунодепрессии. Выявление криптоспоридиоза у больных с ВИЧ-инфекцией на этих стадиях болезни следует расценивать в качестве самостоятельного показания к немедленному назначению антиретровирусной терапии.
4. Крайне низкая вероятность водного пути передачи криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией должна направлять усилия врачей на профилактику других вероятных путей заражения, в частности, полового.
5. Больным ВИЧ-инфекцией следует избегать прямого контакта с крупным рогатым скотом или испражнениями этих животных из-за высокого риска заражения криптоспоридиозом.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Карташев, Владимир Васильевич
1. Бейер Т. В., Сафонова Н. В., Хазенсон Л. В., Чайка Н.А. Лабораторная диагностика криптоспоридиоза у детей. — Л., 1987. 22 с.
2. Бейер Т.В., Антыкова Л.П., Гербина Г.И. и др. Обнаружение криптоспоридиоза человека в Ленинграде // Мед. паразитол. — 1990. № 2. -С. 45-48.
3. Бейер Т.В., Сидоренко Н.В., Анацкая О.В. Кишечный криптоспоридиоз в раннем возрасте и его последствия // Мед. паразит, и паразит, бол. — 2006. -№ 1. С. 3-7.
4. Белозеров Е.С., Змушко Е.И. ВИЧ-инфекция. Спб.: Питер, 2003. — 368 с.
5. Беляева В. В., Покровский В. В., Кравченко А. В. Консультирование при ВИЧ-инфекции: пособие для врачей различных специальностей. — М.: МЗРФ, 2003.-77 с.
6. Бердыклычева Г.Н., Язкурбанова О.А., Кривец З.Ф. и др. Клинико-лабораторные особенности криптоспоридиоза в Туркменистане // Тер. архив 1998. - Т. 70, № 11. - С. 42-43.
7. Волжанин В.М. Криптоспоридиоз // Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы): Руководство для врачей. / Под ред. В.П. Сергеева, Ю.В. Лобзина, С.С. Козлова. — СПб.: ООО «Издательство Фолиант», 2008. С. 136-141.
8. Дехнич А.В. Клинические и микробиологические аспекты криптоспоридиоза // Клиническая микробиология и антимикробная терапия. -2001.-№2.-С. 11-13.
9. Дубровский Ю.А., Емельянова Л.П. Эпидемиологическое значение почвы и водоемов в природных очагах криптоспоридиоза // Журн. микробиологии. 2003. - №4. - С. 100-103.
10. Емельянова Л.П., Лисина, С.В., Дубровский Ю.А., Дубровский В.Ю. Распространенность криптоспоридий в естественных экосистемах // Мед паразитол. 1999. - № 3. - С. 14-18.
11. Клинические рекомендации. ВИЧ-инфекция и СПИД / под ред. В.В. Покровского. М.: ГЭОТАР-Медицина, 2006. - 128 с.
12. Краченко А.В., Юрин О.Г., Ермак Т.Н. и др. Случай туберкулезного сепсиса и криптоспоридиоза у больного с ВИЧ-инфекцией // Тер. архив. — 1993.-Т. 65, № 11.-С. 30-31.
13. Криптоспоридиоз домашних животных (возбудители, клиническая картина, эпизоотология, диагностика, профилактика и лечение) / В.Ф. Никитин. М., 2007. - С. 36.
14. Лавдовская М.В., Лысенко А.Я., Басова Е.Н. и др. Система «хозяин — условно-патогенные простейшие». Влияние ионизирующей радиации на распространение криптоспоридиоза и пневмоцистоза // Паразитология. — 1996. Т. 30, № 2. - С. 153-158.
15. Лавдовская М.В., Лысенко А.Я., Горбунова Ю.П. и др. Особенности эпидемиологии криптоспоридиоза в Европейской части России // Мед. парзитол. 1996. - № 3. - С. 8-11.
16. Лобзин Ю.В., Жданов К.В., Пастушенков В. Л. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика, лечение. СПб.: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2003. - 144 с.
17. Ошевская З.А., Ляпина Н.И., Максимова Т.Ю. Случаи криптоспоридиоза в Тульской области // Мед. паразитол. 1996. - № 2. - С. 55-56.
18. Партии О.С., Пожалостина Л.В. Щербакова И.Т., Грачева Н.М. Криптоспоридиоз: эпидемиология, патогенез, клиника, диагностика и лечение // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2001. - № 5. - С. 55-58.
19. Пархоменко Ю.Т., Тишкевич О.А., Шахгильдян В.И. Анализ летальных исходов среди ВИЧ-инфицированных взрослых больных в Москве, 20022003 // Инфекционные болезни. 2004. - Т. 2, № 3. - С. 72-74.
20. Плотникова А.В., Андреев А.И., Лысенко А .Я. Первые случаи криптоспоридиоза человека в Москве // Мед. паразитол. — 1990. № 3. — С. 58-60.
21. Покровский В. И., Покровский В. В. Синдром приобретенного иммунодефицита. М.: Медицина, 1988. - 44 с.
22. Покровский В.В. Эпидемиология и профилактика ВИЧ-инфекции.- М.: Медицина, 1996. 275 с.
23. Покровский В.И. Годованный Б.А. Оппортунистическая инфекция при СПИДе. Эпидемиология и клиника криптоспоридиоза // Журн. микробиол. — 1995.-№ 2.-С. 106-109.
24. Покровский В. В., Ермак Т. Н., Беляева В. В., Юрин О. Г. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение. М.: ГЭОТАР Медицина, 2000. -496 с.
25. Покровский В. В., Ермак Т. Н., Беляева В. В., Юрин О. Г. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение. 2-е изд., испр. и доп. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2003. - 488 с.
26. Покровский В. В., Юрин О. Г., Беляева В. В. Клиническая диагностика ВИЧ-инфекции: практ. рук-во для студентов, врачей-интернов, клин, ординаторов и врачей всех специальностей. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. -90 с.
27. Покровский В. В., Юрин О. Г., Беляева В. В. И др. Клиническая диагностика и лечение ВИЧ-инфекции: практ. рук-во для студентов, врачей-интернов, клин, ординаторов и врачей всех специальностей. — М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2001. 92 с.
28. Романенко Н.А., Рахманин Ю.А., Сергиев В.П. О необходимости включения ооцист криптоспоридий в число показателей эпидемической безопасности питьевой воды // Гигиена и санитария. 2001. - № 1. - С. 18-19.
29. Романенко Н.А., Рахманин Ю.А., Сергиев В.П. Ооцисты криптоспоридий и эпидемическая безопасность питьевой воды в Российской Федерации // Мед. парзитол 2001. - № 2. - С. 11-13.
30. Романова Т.В., Шкарин В.В., Хазенсон Л.Б. Групповая вспышка криптоспоридиоза у детей // Мед. парзитол. 1992. - № 3. — С. 50-52.
31. Романова Т.В., Шкарин В.В., Хазенсон Л.Б. Особенности распространения криптоспоридиоза в Нижегородской области // Мед. парзитол. 1992. - № 4. - С. 5-7.
32. Сизякина Л.П., Чернышов В.Н., Симованян Э.Н. ВИЧ-инфекция у детей. Ростов н/Д: Изд-во РГМУ, 2001.- 140 с.
33. Шкарин В.В., Соринсон С.Н. ВИЧ/СПИД-инфекция. Двадцать лет спустя после начала пандемии: рук-во для врачей. — Н. Новгород: Изд-во НГМА, 1999. 146 с. (с. 64-67).
34. Abdo A., Klassen J., Urbanski S. et al. Reversible sclerosing cholangitis secondary to cryptosporidiosis in a renal transplant patient // J. Hepatol. 2003. -Vol.38, N 5.-P.688-691.
35. Abe N., Sawano Y., Yamada K. et al. Cryptosporidium infection in dogs in Osaka, Japan // Vet. Parasitol. 2002. - Vol. 108. - P. 185-193.
36. Abrahamsen M.S., Templeton T.J., Enomoto S. et al. Complete genome sequence of the apicomplexan, Cryptosporidium parvum // Science. — 2004. — Vol. 304.-P. 441-445.
37. Abubakar I., Aliyu S.H., Arumugam C. et al. Prevention and treatment of cryptosporidiosis in immunocompromised patients // Cochrane Database Syst Rev. 2007a.- Is.l. CD004932.
38. Abubakar I., Aliyu S.H., Arumugam C. et al. Treatment of cryptosporidiosis in immunocompromised individuals: systematic review and meta-analysis // Br. J. Clin. Pharmacol. 2007b. - Vol.63, N 4. - P.387-393.
39. Adal K.A., Sterling C.R., Guerrant R.L. Cryptosporidium and related species // Blaser M.J., Smith P.D., Ravdin J.I., Greenberg H.B., Guerrant R.L.'
40. Eds), Infections of the gastrointestinal tract. New York; Raven Press, 1995. - P. 1107-1128.
41. Adjei A., Lartey M., Adiku Т.К. et al. Cryptosporidium oocysts in Ghanaian AIDS patients with diarrhea // East Afr. Med. J. 2003. - Vol.80, N 7. - P.369-372.
42. Agarwal A., Ningthouja S., Sharma D. et al. Cryptosporidium and HIV // J. Indian Med. Assoc. 1998. - Vol.96, N 9. - P.276-277.
43. Aiello A. E., L. H. Xiao, J. R. Limor et al. Microsatellite analysis of the human and bovine genotypes of Cryptosporidium parvum // J. Eukaryot. Microbiol. -1999. Vol. 46. - P. 46S-47S.
44. Akiyoshi, D. E., X. Feng, M. A. Buckholt, G. Widmer, and S. Tzipori Genetic Analysis of a Cryptosporidium parvum human genotype 1 isolate passaged through different host species // Infect. Immun. -2002. — Vol. 70. P. 5670-5675.
45. Akiyoshi, D. E., J. Dilo, C. Pearson, S. Chapman, J. Tumwine, and S. Tzipori Characterization of Cryptosporidium meleagridis of human origin passaged through different host species // Infect. Immun. 2003. - Vol.71. -P.1828-1832.
46. Akiyoshi D.E., Tumwine J.K., Bakeera-Kitaka S., Tzipori S. Subtype analysis of Cryptosporidium isolates from children in Uganda // J. Parasitol. -2006. Vol.92, N 5. - P. 1097-1100.
47. Alvarez-Pellitero, P., and A. Sitja-Bobadilla Cryptosporidium molnari n. sp. (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) infecting two marine fish species, Sparus aurata L. and Dicentrarchus labrax L // Int. J. Parasitol. 2002. -Vol.32. - P.l007-1021.
48. Alves, M., O. Matos, F. Spano, and F. Antunes. 2000. PCR-RFLP analysis of Cryptosporidium parvum isolates from HIV-infected patients in Lisbon, Portugal // Ann. Trap. Med. Parasitol. -2000. Vol. 94. - P.291-297.
49. Alves, M., O. Matos, I. Pereira Da Fonseca, E. Delgado, A. M. Lourenco, and F. Antunes Multilocus genotyping of Cryptosporidium isolates from human HIV-infected and animal hosts // J. Eukaryot. Microbiol. 2001, Suppl. - P.17S-18S.
50. Alves, M., О. Matos, F. Antunes Multilocus PCR-RFLP analysis of Cryptosporidium isolates from HIV-infected patients from Portugal // Ann. Trop. Med. Parasitol. -2001. -Vol. 95. P. 627-632.
51. Alves M, Matos O, Antunes F. Microsatellite analysis of Cryptosporidium hominis and C. parvum in Portugal: a preliminary study // J. Eukaryot. Microbiol. 2003. Vol.50, Suppl. - P. 529-530.
52. Alves M, Xiao L, Sulaiman I, Lai AA, Matos O, Antunes F. Subgenotype analysis of Cryptosporidium isolates from humans, cattle, and zoo ruminants in Portugal // J Clin Microbiol. 2003. - Vol.41, N 6. - P.2744-2747.
53. Alves M, Xiao L, Antunes F, Matos O. Distribution of Cryptosporidium subtypes in humans and domestic and wild ruminants in Portugal // Parasitol Res. 2006. Vol.99, N 3. - P.287-292.
54. Amadi B, Mwiya M, Musuku J, Watuka A, Sianongo S, Ayoub A, Kelly P. Effect of nitazoxanide on morbidity and mortality in Zambian children with cryptsporidiosis: a randomised controlled trial // Lancet. 2002. - Vol.360, N 9343. -P.1375-1380.
55. Amar CF, Chalmers RM, Elwin K, Tynan P, McLauchlin J Blinded evaluation of DNA extraction and genotyping of stained Cryptosporidium on glass slides // Lett Appl Microbiol. 2002. - Vol. 35. - P. 486-488.
56. Amirkhanian YA, Kelly JA, McAuliffe TL. Psychosocial needs, mental health, and HIV transmission risk behavior among people living with HIV/AIDS in St Petersburg, Russia // AIDS. 2003. - Vol.17, N 16. - P.2367-2374.
57. Ananthasubramanian M, Ananthan S, Vennila R, Bhanu S. Cryptosporidium in AIDS patients in south India: a laboratory investigation // J. Commun Dis. -1997. Vol.29, N 1. - P.29-33.
58. Anderson, В. С. Experimental infection in mice of Cryptosporidium muris isolated from a camel //J. Protozool. -1991a. Vol. 38. -P.16S-17S.
59. Anderson, В. C. Prevalence of Cryptosporidium muris-like oocysts among cattle populations of the United States: preliminary report // J. Protozool. — 1991b. — Vol. 38. -P.14S-15S.
60. Anderson, D. R., D. W. Duszynski, and W. C. Marquardt Three new coccidia (Protozoa: Telosporea) from kingsnakes, Lampropeltis spp., in Illinois, with a redescription of Eimeria zamenis Phisalix, 1921 // J. Parasitol. 1968. — Vol.54.-P.577-581.
61. Angus, K. W., G. Hutchison, and H. M. Munro Infectivity of a strain of Cryptosporidium found in the guinea-pig (Cavia porcellus) for guinea-pigs, mice and lambs//J. Сотр. Pathol. 1985. - Vol. 95.-P.151-165.
62. Arikan S, Ergtiven S, Akyon Y, Gilnalp A. Cryptosporidiosis in immunocompromised patients in a Turkish university hospital // Acta Microbiol Immunol Hung. 1999. - Vol.46, N 1. -P.33-40.
63. Armon R, Gold D, Brodsky M, Oron G. Surface and subsurface irrigation with effluents of different qualities and presence of Cryptosporidium oocysts in soil and on crops // Water Sci Technol. 2002. - Vol.46, N 3. -P.l 15-122.
64. Armson A, Thompson RC, Reynoldson JA. A review of chemotherapeutic approaches to the treatment of cryptosporidiosis // Expert Rev. Anti Infect. Ther. — 2003. Vol. 1, N 2. - P. 297-305.
65. Arrowood MJ, Sterling CR. Comparison of conventional staining methods and monoclonal antibody-based methods for Cryptosporidium oocyst detection // J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol.27, N 7. - P. 1490-1495.
66. Arrowood MJ. Diagnosis // Cryptosporidium and Cryptosporidiosis. Fayer R (Ed.). New York; London; Tokyo: CRC Press, 1997. - P. 43-64, 45-47
67. Awad-el-Kariem, F. M., H. A. Robinson, D. A. Dyson, D. Evans, S. Wright, M. T. Fox, and V. McDonald Differentiation between human and animal strains of Cryptosporidium parvum using isoenzyme typing // Parasitology. 1995. — Vol. 110. -P.129-132.
68. Awad-el-Kariem, F. M. Significant parity of different phenotypic and genotypic markers between human and animal strains of Cryptosporidium parvum // J. Eukaryot. Microbiol. -1996. Vol. 43. - P.70S.
69. Awad-El-Kariem, F. M., H. A. Robinson, F. Petry, V. McDonald, D. Evans, and D. Casemore Differentiation between human and animal isolates of Cryptosporidium parvum using molecular and biological markers // Parasitol. Res. 1998.-Vol. 84. -P.297-301.
70. Awad-el-Kariem, F. M. Does Cryptosporidium parvum have a clonal population structure? // Parasitol. Today. 1999. - Vol. 15. - P.502-504.
71. Babiker A., Darbyshire J., Pezzotti P. et al. Antiparasitic agent atovaquone // Antimicrob. Agents Chemother. -2002. Vol. 46. - P. 1163-1173.
72. Bandoni, S. M., and D. W. Duszynski A plea for improved presentation of type material for coccidian // J. Parasitol. 1988. - Vol. 74. - P.519-523.
73. Barker, I. K., and P. L. Carbonel Cryptosporidium agni sp.n. from lambs, and Cryptosporidium bovis sp.n. from a calf, with observations on the oocyst // Z. Parasitenkd. 1974. - Vol. 44. - P.289-298.
74. Baumgartner A, Marder HP, Munzinger J, Siegrist HH. Frequency of Cryptosporidium spp. as cause of human gastrointestinal disease in Switzerland and possible sources of infection // Schweiz Med Wochenschr. 2000. - Vol.130, N 36. -P.1252-1258.
75. Bearup, A. J. 1954. The coccidia of carnivores of Sydney // Aust. Vet. J.-1954. — Vol. 30. -P.185-186.
76. Benotsch EG, Pinkerton SD, Dyatlov RV, DiFranceisco W, Smirnova TS, Dudko VY, Kozlov A. HIV risk behavior in male and female Russian sexually transmitted disease clinic patients // Int J Behav Med. 2006. - Vol.13, N 1. -P.26-33.
77. Berkman DS, Lescano AG, Gilman RH, Lopez SL, Black MM. Effects of stunting, diarrheal disease, and parasitic infection during infancy on cognition in late childhood: a follow-up study // Lancet. 2002. - Vol. 359. - P. 564-571.
78. Bern, С., B. Hernandez, M. B. Lopez, M. J. Arrowood, A. M. De Merida, and R. E. Klein. 2000. The contrasting epidemiology of Cyclospora and Cryptosporidium among outpatients in Guatemala // Am. J. Trop. Med. Hyg. -2000.-Vol. 63.-P. 231-235.
79. Bhattacharya, M. К., T. Teka, A. S. Faruque, and G. J. Fuchs. 1997. Cryptosporidium infection in children in urban Bangladesh // J. Trop. Pediatr.-1997. Vol. 43. - P. 282-286.
80. Bird, R.G. Protozoa and viruses. Human cryptosporidiosis and concomitant viral enteritis, p. 39-47. // Canning E.U. (ed.) Parasitological topics. Allen Press, Lawrence, Kans, 1981. - P. 39-47.
81. Bissuel F, Cotte L, Rabodonirina M, Rougier P, Piens MA, Trepo C. Paromomycin: an effective treatment for cryptosporidial diarrhea in patients with AIDS // Clin. Infect. Dis. 1994. - Vol. 18. - P. 447^149.
82. Blackburn BG, Mazurek JM, Hlavsa M et al. Cryptosporidiosis associated with ozonated apple cider // Emerg Infect Dis. 2006. - Vol.12, N 4. - P.684-686.
83. Blackman E, Binder S, Gaultier C, Benveniste R, Cecilio M. Cryptosporidiosis in HIV-infected patients: diagnostic sensitivity of stool examination, based on number of specimens submitted // Am J Gastroenterol. -1997. Vol.92, N 3. - P.451-453.
84. Blanshard C, Jackson AM, Shanson DC, Francis N, Gazzard BG. Cryptosporidiosis in HIV-seropositive patients // Q J Med. 1992. - Vol.85, N 307/308.-P.813-823.
85. Bobin S, Bouhour D, Durupt S, Boibieux A, Girault V, Peyramond D. Importance of antiproteases in the treatment of microsporidia and/or Cryptosporidia infections in HIV-seropositive patients // Pathol Biol (Paris). 1998. - Vol.46, N 6.1. P.418-419.
86. Brandonisio O, Maggi P, Panaro MA, Bramante LA, Di Coste A, Angarano G. Prevalence of cryptosporidiosis in HIV-infected patients with diarrhoeal illness // Eur J Epidemiol. 1993. - Vol.9, N 2. - P.190-194.
87. Brink, А. К., C. Mahe, C. Watera, E. Lugada, C. Gilks, J. Whitworth, and N. French. Diarrhoea, CD4 counts and enteric infections in a community based cohort of HIV infected adults in Uganda // J. Infect. 2002. - Vol.54, N 1. - P.99-106.
88. Brower, A. I., and M. R. Cranfield. Cryptosporidium sp.-associated enteritis without gastritis in rough green snakes (Opheodrys aestivus) and a common garter snake (Thamnophis sirtalis) // J. Zoo Wildl. Med. 2001. - Vol. 32. - P.101-105.
89. Brownstein, D. G., J. D. Strandberg, R. J. Montali, M. Bush, and J. Fortner Cryptosporidium in snakes with hypertrophic gastritis // Vet. Pathol. — 1977. 14. -P. 606-617.
90. Bruce BB, Blass MA, Blumberg HM, Lennox JL, del Rio C, Horsburgh CR Jr. Risk of Cryptosporidium parvum transmission between hospital roommates. // Clin Infect Dis. 2000. - Vol.31, N 4. - P.947-950.
91. Bukhari, Z., and H. V. Smith. Detection of Cryptosporidium muris oocysts in the faeces of adult dairy cattle in Scotland // Vet. Rec. 1996. - Vol. 138, N 3. -P.207-208.
92. Bukhari Z, Smith HV. Cryptosporidium parvum: oocyst excretion and viability patterns in experimentally infected lambs // Epidemiol Infect. 1997. -Vol.l 19, N 1. —P.105-108.
93. Buyilkbaba Boral O, Uysal H, Alan S, Nazlican O. Investigation of intestinal parasites in AIDS patients // Mikrobiyol Bui. 2004. - Vol.38, N 1/2. - P. 121-128.
94. Caccio S, Homan W, van Dijk K, Pozio E Genetic polymorphism at the beta-tubulin locus among human and animal isolates of Cryptosporidium parvum // FEMS Microbiol Lett.-1999.-Vol. 170.-P. 173-179.
95. Caccio SM, Homan W, Camilli R, Traldi G, Kortbeek T, Pozio E A microsatellite marker reveals population heterogeneity within human and animal genotypes of Cryptosporidium parvum // Parasitology. 2000. - Vol. 120. - P. 237-244.
96. Caccio SM, Spano F, Pozio E Large sequence variation at two microsatellite loci among zoonotic (genotype C) isolates of Cryptosporidium parvum // Int. J. Parasitol. 2001. - Vol. 31. - P. 1082-1086.
97. Caccio, S., E. Pinter, R. Fantini, I. Mezzaroma, and E. Pozio. Human infection with Cryptosporidium felis: case report and literature review // Emerg. Infect. Dis. 2002. - Vol. 8. - P. 85-86.
98. Caccio SM Molecular techniques to detect and identify protozoan parasites in the environment // Acta Microbiol Pol. 2003. - Vol. 52. - P. 23-34.
99. Caccio SM. Molecular epidemiology of human cryptosporidiosis // Parassitologia. 2005. - Vol. 47, N 2. - P. 185-192.
100. Caccio SM, Thompson RC, McLauchlin J, Smith HV. Unravelling Cryptosporidium and Giardia epidemiology // Trends Parasitol. 2005. - Vol. 21, N9.-P. 430-437.
101. Cacopardo B, Nigro L, Celesia BM, Minniti S, Brancati G, Montineri A, Nunnari A. Serum cytokines as predictors of clinical outcome in AIDS-related intestinal cryptosporidiosis // Ital J Gastroenterol Hepatol. 1998. - Vol.30, N 2. -P.162-166.
102. Call SA, Heudebert G, Saag M, Wilcox CM. The changing etiology of chronic diarrhea in HIV-infected patients with CD4 cell counts less than 200 cells/mm3 // Am J Gastroenterol. 2000. - Vol.95, N 11. - P.3142-3146.
103. Cama VA, Bern C, Sulaiman IM et al. Cryptosporidium species and genotypes in HIV-positive patients in Lima, Peru // J Eukaryot Microbiol. 2003. — Vol.50, Suppl.-P. 531-533.
104. Cama VA, Ross JM, Crawford S et al. Differences in clinical manifestations among Cryptosporidium species and subtypes in HIV-infected persons // J Infect Dis. 2007. - Vol.196, N 5. - P.684-691.
105. Camps M, Arrizabalaga G, Boothroyd J. An rRNA mutation identifies the apicoplast as the target for clindamycin in Toxoplasma gondii // Mol. Microbiol.-2002.-Vol. 43.-P. 1309-1318.
106. Camus, А. С., and M. K. Lopez Gastric cryptosporidiosis in juvenile red dru // J. Aquat. Anim. Health. 1996. - Vol. 8. - P.167-172.
107. Caputo C, Forbes A, Frost F, Sinclair MI, Kunde TR, Hoy JF, Fairley CK. Determinants of antibodies to Cryptosporidium infection among gay and bisexual men with HIV infection // Epidemiol Infect. 1999. - Vol.122, N 2. - P.291-297.
108. Carr A, Marriott D, Field A, Vasak E, Cooper DA. Treatment of HIV-1-associated microsporidiosis and cryptosporidiosis with combination antiretroviral therapy // Lancet. 1998. - Vol.351, N 9098. - P.256-261.
109. Carreno, R. A., N. J. Pokorny, H. Lee, J. T. Trevors, and S. A. De Grandis. Phenotypic and genotypic characterization of Cryptosporidium species and isolates // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 2001. - Vol. 26. - P. 95-106.
110. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Preliminary FoodNet data on the incidence of infection with pathogens transmitted commonly through food—10 states, 2007 // MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2008. - Vol.57, N 14. -P.366-370.
111. Certad G, Arenas-Pinto A, Pocaterra L, Ferrara G, Castro J, Bello A, Nunez L. Cryptosporidiosis in HIV-infected Venezuelan adults is strongly associated with acute or chronic diarrhea // Am J Trop Med Hyg. 2005. - Vol.73, N 1. - P.54-57.
112. Chalmers, R. M., K. Elwin, W. J. Reilly, H. Irvine, A. L. Thomas, and P. R. Hunter. Cryptosporidium in farmed animals: the detection of a novel isolate in sheep // Int. J. Parasitol. 2002. - Vol. 32. - P.21-26.
113. Chalmers RM, Hadfield SJ, Jackson С J, Elwin K, Xiao L, Hunter P. Geographic Linkage and Variation in Cryptosporidium hominis // Emerg Infect Dis. 2008. - Vol.14, N 3. - P.496-498.
114. Chappell CL, Okhuysen PC, Sterling CR, DuPont HL. Cryptosporidium parvum: intensity of infection and oocyst excretion patterns in healthy volunteers // J Infect Dis. 1996. - Vol. 173, N 1. - P.232-236.
115. Chappell CL, Okhuysen PC, Sterling CR, Wang C, Jakubowski W, Dupont HL. Infectivity of Cryptosporidium parvum in healthy adults with pre-existing anti-C. parvum serum immunoglobulin G // Am J Trop Med Hyg. 1999. — Vol.60, N 1.-P.157-164.
116. Chappell CL, Okhuysen PC, Langer-Curry R et al. Cryptosporidium hominis: experimental challenge of healthy adults // Am J Trop Med Hyg. 2006. - Vol.75, N 5.-P.851-857.
117. Checkley W, Gilman RH, Epstein LD, Suarez M, Diaz JF, Cabrera L, Black RE, Sterling CR. Asymptomatic and symptomatic cryptosporidiosis: their acute effect on weight gain in Peruvian children // Am J Epidemiol. 1997. — Vol.145, N 2. -P.156-163.
118. Chen XM, Levine SA, Tietz P et al. Cryptosporidium parvum is cytopathic for cultured human biliary epithelia via an apoptotic mechanism // Hepatology. -1998. Vol.28, N 4. - P.906-913.
119. Chen XM, Gores GJ, Paya CV, LaRusso NF. Cryptosporidium parvum induces apoptosis in biliary epithelia by a Fas/Fas ligand-dependent mechanism. // Am J Physiol. 1999. - Vol.277, N 3, Pt 1.-P.G599-608.
120. Chen XM, LaRusso NF. Cryptosporidiosis and the pathogenesis of AIDS-cholangiopathy // Semin Liver Dis. 2002. - Vol.22, N 3. - P.277-289.
121. Chhin S, Harwell JI, Bell JD et al. Etiology of chronic diarrhea in antiretroviral-naive patients with HIV infection admitted to Norodom Sihanouk Hospital, Phnom Penh, Cambodia // Clin Infect Dis. 2006. - Vol.43, N 7. -P.925-932.
122. Chrisp, С. E., and M. LeGendre. Similarities and differences between DNA of Cryptosporidium parvum and C. wrairi detected by the polymerase chain reaction // Folia Parasitol. 1994. - Vol. 41. - P.97-100.
123. Church DL, Sutherland LR, Gill MJ, Visser ND, Kelly JK. Absence of an association between enteric parasites in the manifestations and pathogenesis of
124. HIV enteropathy in gay men. The GI/HIV Study Group // Scand J Infect Dis. -1992. Vol.24, N 5. - P.567-575.
125. Clark DP. New insights into human cryptosporidiosis // Clin Microbiol Rev. 1999. — Vol.12, N 4. - P.554-563.
126. Clavel A, Arnal AC, Sanchez EC, Cuesta J, Letona S, Amiguet JA, Castillo FJ, Varea M, Gomez-Lus R. Respiratory cryptosporidiosis: case series and review of the literature // Infection. 1996. - Vol.24, N 5. - P.341-346.
127. Colford JM Jr, Tager IB, Hirozawa AM, Lemp GF, Aragon T, Petersen C. Cryptosporidiosis among patients infected with human immunodeficiency virus. Factors related to symptomatic infection and survival // Am J Epidemiol. 1996. -Vol.144, N 9.-P.807-816.
128. Collins CD, Blanshard C, Cramp M, Gazzard B, Gleeson JA. Case report: pneumatosis intestinalis occurring in association with cryptosporidiosis and HIV infection // Clin Radiol. 1992. - Vol.46, N 6. - P.410-411.
129. Conti S, Masocco M, Pezzotti P et al. Differential impact of combined antiretroviral therapy on the survival of italian patients with specific AIDS-defining illnesses // J Acquir Immune Defic Syndr. 2000. - Vol.25, N 5. - P.451-458.
130. Cordova Paz Soldan O, Vargas Vasquez F, Gonzalez Varas A et al. Intestinal parasitism in Peruvian children and molecular characterization of Cryptosporidium species // Parasitol Res. 2006. - Vol.98, N 6. - P.576-581.
131. Corso, P. S., M. H. Kramer, K. A. Blair, D. G. Addiss, J. P. Davis, and A. C. Haddix. Cost of illness in the 1993 waterborne Cryptosporidium outbreak, Milwaukee, Wisconsin // Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9. - P.426-431.
132. Coulliette AD, Huffman DE, Slifko TR, Rose JB. Cryptosporidium parvum: treatment effects and the rate of decline in oocyst infectivity // J Parasitol. 2006. -Vol.92, N 1.-P.58-62.
133. Cox MJ, Elwin K, Massad E, Azevedo RS. Age-specific seroprevalence to an immunodominant Cryptosporidium sporozoite antigen in a Brazilian population // Epidemiol Infect. 2005. - Vol.133, N 5. - P.951-956.
134. Crawford FG, Vermund SH, Ma JY, Deckelbaum RJ. Asymptomatic cryptosporidiosis in a New York City day care center // Pediatr Infect Dis J. -1988.- Vol.7, N 11.- P.806-807.
135. Crowe SM, Carlin JB, Stewart KI, Lucas CR, Hoy JF. Predictive value of CD4 lymphocyte numbers for the development of opportunistic infections and malignancies in HIV-infected persons // J Acquir Immune Defic Syndr. 1991. -Vol.4, N 8. - P.770-776.
136. Current WL. Human cryptosporidiosis // N Engl J Med. 1983. - Vol.309, N 22. - P.1325-1327.
137. Current WL, Reese NC, Ernst JV, Bailey WS, Heyman MB and Weinstein WM Human cryptosporidiosis in immunocompetent and immunodeficient persons. Studies of an outbreak and experimental transmission // N Engl J Med. — 1983.-Vol. 308.-P. 1252-1257.
138. Current, W. L., and N. C. Reese. A comparison of endogenous development of three isolates of Cryptosporidium in suckling mice // J. Protozool. 1986. — Vol. 33.-P. 98-108.
139. Current, W. L., S. J. Upton, and Т. B. Haynes. The life cycle of Cryptosporidium baileyi n. sp. (Apicomplexa, Cryptosporidiidae) infecting chickens // J. Protozool. 1986. - Vol. 33. - P.289-296.
140. Da Silva AJ, Bornay-Llinares F.J, Moura INS, Slemenda,SB, Tuttle JL and Pieniazek NJ Fast and reliable extraction of protozoan parasite DNA from fecal specimens // Mol Diagnos. 1999. - N 4. - P. 57-64.
141. Dann SM, Wang HC, Gambarin KJ et al. Interleukin-15 activates human natural killer cells to clear the intestinal protozoan Cryptosporidium // J Infect Dis. 2005. - Vol. 192, N 7. - P.l294-1302.
142. Das P, Roy SS, MitraDhar K, Dutta P, Bhattacharya MK, Sen A, Ganguly S, Bhattacharya SK, Lai AA, Xiao L. Molecular characterization of Cryptosporidium spp. from children in Kolkata, India // J Clin Microbiol. 2006. - Vol.44, N11.-P.4246-4249.
143. Dawson D. Foodborne protozoan parasites // Int J Food Microbiol. 2005. — Vol.103, N 2.-P.207-227.
144. Deng MQ, Lam KM, Cliver DO. Immunomagnetic separation of Cryptosporidium parvum oocysts using MACS MicroBeads and high gradient separation columns // J Microbiol Methods. 2000. - Vol.40, N 1. - P. 11-17.
145. Di Pinto A, Tantillo MG. Direct detection of Cryptosporidium parvum oocysts by immunomagnetic separation-polymerase chain reaction in raw milk // J Food Prot. 2002. - Vol.65, N 8. - P.1345-1348.
146. Dillingham RA, Lima AA, Guerrant RL. Cryptosporidiosis: epidemiology and impact // Microbes Infect. 2002. - Vol. 4, N 10. - P. 1059-1066.
147. Dionisio D, Orsi A, Sterrantino G et al. Chronic cryptosporidiosis in patients with AIDS: stable remission and possible eradication after long-term, low dose azithromycin // J Clin Pathol. 1998. - Vol.51, N 2. - P.138-142.
148. Dionisio D. Cryptosporidiosis in HIV-infected patients // J Postgrad Med 2002. Vol.48, N3.-P. 215-216.
149. Dowell SF, Holt EA, Murphy FK. Pancreatitis associated with human immunodeficiency virus infection: a matched case-control study // Tex Med. -1996. Vol.92, N 9. - P.44-49.
150. Dubey, J. P., and B. P. Pande Observations on the coccidian oocysts from Indian Jungle cat (Felis chaus) // Ind. J. Microbiol. 1963. - N 3. - P. 103-108.
151. Dubey, J. P., J. E. Markovits, and K. A. Killary Cryptosporidium muris-like infection in stomach of cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis) // Vet. Pathol. -2002.-Vol. 39.-P.363-371.
152. DuPont HL, Chappell CL, Sterling CR, Okhuysen PC, Rose JB, Jakubowski W. The infectivity of Cryptosporidium parvum in healthy volunteers // N Engl J Med. 1995. - Vol.332, N 13. - P.855-859.
153. Duszynski, D. W. Two new coccidia (Protozoa: Eimeriidae) from Costa Rican lizards with a review of the Eimeria from lizards // J. Protozool. 1969. — Vol.16.-P.581-585.
154. Dwivedi KK, Prasad G, Saini S, Mahajan S, Lai S, Baveja UK. Enteric opportunistic parasites among HIV infected individuals: associated risk factors and immune status Jpn // J Infect Dis. 2007. - Vol.60, N 2/3. - P.76-81.
155. Ebeid, M., A. Mathis, A. Pospischil, and P. Deplazes. Infectivity of Cryptosporidium parvum genotype I in conventionally reared piglets and lambs // Parasitol. Res. 2003. - Vol. 90. - P.232-235
156. Egorov A., Paulauskis J., Petrova L. et al. Contamination of water supplies with Cryptosporidium parvum and Giardia lamblia and diarrheal illness in selected Russian cities // Int. J. Hyg. Environ. Health. 2002. - Vol. 205, N 4. - P. 281289.
157. Egorov A., Frost F., Muller T. et al. Serological evidence of Cryptosporidium infections in a Russian city and evaluation of risk factors for infections // Ann. Epidemiol. 2004. - Vol.14, N 2. - P. 129-136.
158. El-Ghaysh, A., and J. Barrett. Isoenzyme activities of different strains of Cryptosporidium parvum // Vet. Parasitol. 1999. - Vol. 81. - P.l95-200.
159. Elwin K, Chalmers RM, Hadfield SJ et al. Serological responses to Cryptosporidium in human populations living in areas reporting high and low incidences of symptomatic cryptosporidiosis // Clin Microbiol Infect. 2007. -Vol.13, N 12.-P.1179-1185.
160. Enemark, H. L., P. Ahrens, C. J. Lowery, S. M. Thamsborg, J. M. Enemark, V. Bille-Hansen, and P. Lind. Cryptosporidium andersoni from a Danish cattle herd: identification and preliminary characterization // Vet. Parasitol. 2002. -Vol.107. -P.37-49.
161. Enemark, H. L., P. Ahrens, V. Bille-Hansen, P. M. Heegaard, H. Vigre, S. M. Thamsborg, and P. Lind. Cryptosporidium parvum: infectivity and pathogenicity of the 'porcine' genotype // Parasitology. 2003. - Vol. 126. -P.407-416.
162. Enriquez, F. J., and C. R. Sterling. Cryptosporidium infections in inbred strains of mice // J. Protozool. 1991. - Vol. 38. - P.100S-102S.
163. Epple HJ, Schmidt W, Zeitz M. Gastrointestinal manifestations of HIV infection // Med Klin (Munich). 2002. - Vol.97, N 1. - P.12-21.
164. Fall, A., R. C. Thompson, R. P. Hobbs, and U. Morgan-Ryan. Morphology is not a reliable tool for delineating species within Cryptosporidium // J. Parasitol.2003. Vol. 89. - P.399-402.
165. Fayer, R., C. Speer, and J. Dubey. The general biology of Cryptosporidium // Fayer R. (ed.), Cryptosporidium and cryptosporidiosis. CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla, 1997.-P. 1-41.
166. Fayer R, Morgan U, Upton SJ. Epidemiology of Cryptosporidium: transmission, detection and identification // Int. J. Parasitol. 2000. — Vol. 30, N 12/13.-P. 1305-1322.
167. Fayer, R., J. M. Trout, L. Xiao, U. M. Morgan, A. A. Lai, and J. P. Dubey. Cryptosporidium canis n. sp. from domestic dogs // J. Parasitol. — 2001. — Vol. 87. -P.1415-1422.
168. Fayer R. Cryptosporidium: a water-borne zoonotic parasite // Vet. Parasitol.2004.-Vol. 126, N 1. -P. 37-56.
169. Fayer R, Dubey JP, Lindsay DS Zoonotic protozoa: from land to sea. // Trends Parasitol. 2004. - Vol. 20. - P. 531-536.
170. Feltus DC, Giddings CW, Schneck BL, Monson T, Warshauer D, McEvoy JM. Evidence supporting zoonotic transmission of Cryptosporidium spp. in Wisconsin. // J Clin Microbiol. 2006. - Vol.44, N 12. - P.4303-4308.
171. Feng, X., S. M. Rich, S. Tzipori, and G. Widmer. Experimental evidence for genetic recombination in the opportunistic pathogen Cryptosporidium parvum // Mol. Biochem. Parasitol. 2002. - Vol. 119. - P.55-62.
172. Fichtenbaum CJ, Ritchie DJ, Powderly WG. Use of paromomycin for treatment of cryptosporidiosis in patients with AIDS // Clin. Infect. Dis. 1993. -Vol. 16.-P. 298-300.
173. Flanigan T, Whalen C, Turner J, Soave R, Toerner J, Havlir D, Kotler D. Cryptosporidium infection and CD4 counts // Ann Intern Med. 1992. - Vol.116, N 10. — P.840-842.
174. Flanigan TP, Bender JF. Paromomycin: no more effective than placebo for treatment of cryptosporidiosis in patients with advanced human immunodeficiency virus infection. AIDS Clinical Trial Group // Clin Infect Dis. 2000. - Vol.31, N 4. - P.1084-1092.
175. Fontaine M, Guillot E. An immunomagnetic separation-real-time PCR method for quantification of Cryptosporidium parvum in water samples // J Microbiol Methods. 2003. - Vol.54, N 1. - P.29-36.
176. Fontaine M, Guillot E. Development of a TaqMan quantitative PCR assay specific for Cryptosporidium parvum // FEMS Microbiol Lett. 2002. - Vol.214, N 1. -P.13-17.
177. Fontaine M, Guillot E. Study of 18S rRNA and rDNA stability by real-time RT-PCR in heat-inactivated Cryptosporidium parvum oocysts // FEMS Microbiol Lett. 2003. - Vol.226, N 2. - P.237-243.
178. Forbes A, Blanshard C, Gazzard B. Natural history of AIDS related sclerosing cholangitis: a study of 20 cases // Gut. 1993. - Vol.34, N 1. — P.l 1621.
179. Fretz R, Svoboda P, Ryan UM, Thompson RC, Tanners M, Baumgartner A. Genotyping of Cryptosporidium spp. isolated from human stool samples in Switzerland // Epidemiol Infect. 2003. - Vol. 131, N 1. - P.663-667.
180. Frost FJ, Muller T, Craun GL, Calderon DL, Hubbs SA. So many oocysts, so few outbreaks // J Am Waterworks Assoc. 1997. - Vol.89, N 1. - P.8-9.
181. Frost FJ, Fea E, Gilli G, Biorci F, Muller TM, Craun GF, Calderon RL. Serological evidence of Ciyptosporidium infections in southern Europe // Eur J Epidemiol. 2000. - Vol. 16, N 4. - P.385-390.
182. Fujikawa H, Miyakawa H, Iguchi K, Nishizawa M, Moro K, Nagai K, Ishibashi M. Intestinal cryptosporidiosis as an initial manifestation in a previously healthy Japanese patient with AIDS // J Gastroenterol. 2002. - Vol.37, N 10. -P.840-843.
183. Gajadhar, A. A. Host specificity studies and oocyst description of a Cryptosporidium sp. isolated from ostriches // Parasitol. Res. 1994. - Vol. 8. - P. 316-319.
184. Gallaher, M. M., J. L. Herndon, L. J. Nims, C. R. Sterling, D. J. Grabowski, and H. F. Hull. 1989. Cryptosporidiosis and surface water // Am. J. Public Health . 1989. - Vol.79. - P.39-42.
185. Garcia LS, Shimizu RY. Evaluation of nine immunoassay kits (enzyme immunoassay and direct fluorescence) for detection of Giardia lamblia and Cryptosporidium parvum in human fecal specimens // J Clin Microbiol. 1997. — Vol.35, N 6.-P.1526-1529.
186. Garone MA, Winston В J, Lewis JH. Cryptosporidiosis of the stomach // Am J Gastroenterol. 1986. - Vol.81, N 6. - P.465-470.
187. Gatei, W., R. W. Ashford, N. J. Beeching, S. K. Kamwati, J. Greensill, and C. A. Hart. Cryptosporidium muris infection in an HIV-infected adult, Kenya. Emerg // Infect. Dis. 2002a. - Vol. 8. - P.204-206.
188. Gatei W, Greensill J, Ashford RW, Cuevas LE, Parry CM, Cunliffe NA, Beeching NJ, Hart CA Molecular analysis of the 18S rRNA gene of
189. Cryptosporidium parasites from patients with or without human immunodeficiency virus infections living in Kenya, Malawi, Brazil, the United Kingdom, and Vietnam // J Clin Microbiol. 2003. - Vol. 41. - P. 1458-1462.
190. Gatei W, Barrett D, Lindo JF, Eldemire-Shearer D, Cama V, Xiao L. Unique Cryptosporidium population in HIV-infected persons, Jamaica // Emerg Infect Dis. 2008. Vol.14, N 5. - P.841-843.
191. Gelman SF, Brandt LJ. Pneumatosis intestinalis and AIDS: a case report and review of the literature // Am J Gastroenterol. 1998. - Vol.93, N 4. - P.646-650.
192. Gentile G, Caprioli A, Donelli G et al. Asymptomatic carriage of Cryptosporidium in two patients with leukemia // Am J Infect Control. 1990. — Vol.18, N 2.-P.127-128.
193. Gentile G, Venditti M, Micozzi A et al. Cryptosporidiosis in patients with hematologic malignancies // Rev. Infect. Dis. 1991. - Vol. 13.- P. 842-846.
194. Gibbons, C. L., B. G. G. Gazzard, M. Ibrahim, S. Morris-Jones, C. S. L. Ong, and F. M. Awad-El-Kariem. Correlation between markers of strain variation in Cryptosporidium parvum: evidence of clonality // Parasitol. Int. 1998. - Vol. 47. -P.139-147.
195. Gibbons CL, Ong CS, Miao Y et al. PCR-ELISA: a new simplified tool for tracing the source of cryptosporidiosis in HIV-positive patients // Parasitol Res. 2001.-Vol.87,N12.-P.1031-1034.
196. Giles, M., K. A. Webster, J. A. Marshall, J. Catchpole, and Т. M. Goddard. Experimental infection of a lamb with Cryptosporidium parvum genotype 1. Vet. Rec.-2001.-Vol. 149.-P.523-525.
197. Girouard D, Gallant J, Akiyoshi DE, Nunnari J, Tzipori S. Failure to propagate Cryptosporidium spp. in cell-free culture // J Parasitol. 2006. — Vol.92, N 2. - P.399-400.
198. Glaberman, S., I. M. Sulaiman, C. Bern, J. Limor, M. M. Peng, U. Morgan, R. Gilman, A. A. Lai, and L. Xiao. A multilocus genotypic analysis of Cryptosporidium meleagridis // J. Eukaryot. Microbiol. — 2001, Suppl.— P.19S-22S.
199. Glaberman S, Moore JE, Lowery CJ, Chalmers RM, Sulaiman I, Elwin K, Rooney PJ, Millar ВС, Dooley JS, Lai AA, Xiao L. Three drinking-water-associated cryptosporidiosis outbreaks, Northern Ireland // Emerg Infect Dis. -2002. Vol.8, N 6. - P.631-633.
200. Glaeser C, Grimm F, Mathis A, Weber R, Nadal D, Deplazes P Detection and molecular characterization of Cryptosporidium spp. isolated from diarrheic children in Switzerland // Pediatr Infect Dis J. 2004. - Vol. 23. - P. 359-361.
201. Glaser CA, Angulo FJ, Rooney JA. Animal-associated opportunistic infections among persons infected with the human immunodeficiency virus // Clin Infect Dis. 1994. - Vol. 18, N 1. - P. 14-24.
202. Gobet P, Toze S. Relevance of Cryptosporidium parvum hsp70 mRNA amplification as a tool to discriminate between viable and dead oocysts // J Parasitol. 200la. - Vol.87, N 1. - P.226-229.
203. Gobet P, Toze S. Sensitive genotyping of Cryptosporidium parvum by PCR-RFLP analysis of the 70-kilodalton heat shock protein (HSP70) gene // FEMS Microbiol Lett. 2001b. - Vol.200, N 1. -P.37-41.
204. Godwin ТА. Cryptosporidiosis in the acquired immunodeficiency syndrome: a study of 15 autopsy cases//Hum Pathol. 1991.-Vol.22, N 12.-P. 1215-1224.
205. Goh S, Reacher M, Casemore DP et al. Sporadic cryptosporidiosis, North Cumbria, England, 1996-2000 // Emerg. Infect. Dis. 2004. - Vol. 10. - P. 10071015.
206. Gomez Morales MA, Pozio E, Croppo GP. Serodiagnosis of cryptosporidiosis in Italian HIV-positive patients by means of an oocyst soluble antigen in an ELISA // J Infect. 1992. - Vol.25, N 2. - P.229-236.
207. Gomez Morales MA, Ausiello CM, Urbani F, Pozio E. Crude extract and recombinant protein of Cryptosporidium parvum oocysts induce proliferation ofhuman peripheral blood mononuclear cells in vitro // J. Infect. Dis. — 1995. Vol. 172, N2.-P. 211-216.
208. Gomez Morales MA, Ausiello CM, Guarino A et al. Severe, protracted intestinal cryptosporidiosis associated with interferon-deficiency: pediatric case report // Clin. Infect. Dis. 1996. - Vol. 22, N 8. - P. 848-850.
209. Gomez-Couso H, Mendez-Hermida F, Castro-Hermida JA, Ares-Mazas E. Cooking mussels (Mytilus galloprovincialis) by steam does not destroy the infectivity of Cryptosporidium parvum // J Food Prot. 2006. — Vol.69, N 4. — P.948-950.
210. Goodgame RW, Genta RM, White AC, Chappell CL. Intensity of infection in AIDS-associated cryptosporidiosis // J Infect Dis. 1993. - Vol.167, N 3. -P.704-709.
211. Gottschalk, C. Beitrag zur Faunistik der Vogelkokzidien Thuringens und Sachsens // Beitr. Vogelkd. 1972. - Vol. 18. - P.61-69.
212. Graczyk, Т. К., M. R. Cranfield, J. Mann, and J. D. Strandberg. Intestinal Cryptosporidium sp. infection in the Egyptian tortoise, Testudo kleinmanni // Int. J. Parasitol. 1998. - Vol. 28. - P. 1885-1888.
213. Griffiths Ж. Human cryptosporidiosis: epidemiology, transmission, clinical disease, treatment, and diagnosis // Adv Parasitol. 1998. - Vol.40. - P. 37-85.
214. Grinberg A, Lopez-Villalobos N, Pomroy W, Widmer G, Smith H, Tait A. Host-shaped segregation of the Cryptosporidium parvum multilocus genotype repertoire // Epidemiol Infect. 2008. - Vol.136, N 2. - P.273-278.
215. Grube H, Ramratnam В, Ley С, Flanigan TP. Resolution of AIDS associated cryptosporidiosis after treatment with indinavir // Am J Gastroenterol. 1997. — Vol.92, N 4. - P.726.
216. Guarino A, Spagnuolo MI, Giacomet V et al. Effects of nutritional rehabilitation on intestinal function and on CD4 cell number in children with HIV // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2002. - Vol.34, N 4. - P.366-371.
217. Guerin JM, Malebranche R, Elie R et al. Acquired immune deficiency syndrome: specific aspects of the disease in Haiti // Arm N Y Acad Sci. 1984. -Vol.437. -P.254-263.
218. Guerrant RL. Cryptosporidiosis: an emerging, highly infectious threat // Emerg Infect Dis. 1997.-Vol.3, N 1.-P.51-57.
219. Gunthard M, Meister T, Luthy R, Weber R. Intestinal cryptosporidiosis in HIV infection: clinical features, course and therapy // Dtsch Med Wochenschr. 1996. Vol. 121, N 21. - P.686-692.
220. Guy, J. S., M. G. Levy, D. H. Ley, H. J. Barnes, and Т. M. Gerig. 1987. Experimental reproduction of enteritis in bobwhite quail (Colinus virginianus) with Cryptosporidium and reovirus // Avian Dis. 1987. - Vol. 31.- P.713-722.
221. Guyot K, Follet-Dumoulin A, Lelievre E et al. Molecular characterization of Cryptosporidium isolates obtained from humans in France // J Clin Microbiol. 2001. Vol.39, N 10. - P.3472-3480.
222. Hajdusek O, Ditrich O, Slapeta J Molecular identification of Cryptosporidium spp. in animal and human hosts from the Czech Republic // Vet Parasitol. 2004. - Vol. 122. - P.l83-192.
223. Hampton, J. С., В. Rosario. The attachment of protozoan parasites to intestinalepithelial cells of the mouse // J. Parasitol. 1966. - Vol. 52. - P.939-949.
224. Hayward AR, Levy J, Facchetti F et al. Cholangiopathy and tumours of the pancreas, liver and biliary tree in boys with X-linked immunodeficiency with hyper-IgM syndrome // J. Immunol. 1997. - Vol. 158. - P. 977-983.
225. Hellard M, Hocking J, Willis J, Dore G, Fairley C. Risk factors leading to Cryptosporidium infection in men who have sex with men // Sex Transm Infect. 2003. Vol.79, N 5. -P.412-414.
226. Hewitt RG, Yiannoutsos CT, Higgs ES et al. Azithromycin therapy for ryptosporidium parvum infection in four children infected with human immunodeficiency virus // J. Pediatr. 1996. - Vol. 129. - P. 297-300.
227. Higgins JA, Fayer R, Trout JM et al. Real-time PCR for the detection of Cryptosporidium parvum // J Microbiol Methods. 2001. - Vol.47, N 3. - P.323-337.
228. Hijjawi NS, Meloni BP, Ng'anzo M et al. Complete development of Cryptosporidium parvum in host cell-free culture // Int J Parasitol. 2004. -Vol.34, N 7. - P.769-777.
229. Hlavsa MC, Watson JC, and Beach MJ Cryptosporidiosis surveil-lance, United States 1999-2002 // MMWR Surveill Summ. 2005. - Vol. 54. - P. 1-8.
230. Hoerr, F. J., W. L. Current, and Т. B. Haynes. Fatal cryptosporidiosis in quail//Avian Dis. 1986.-Vol. 30. -P.421-425.
231. Holmberg SD, Moorman AC, Von Bargen JC et al. Possible effectiveness of clarithromycin and rifabutin for cryptosporidiosis chemoprophylaxis in HIV disease. HIV Outpatient Study (HOPS) Investigators // JAMA. 1998. - Vol. 279. -P. 384-386.
232. Hoover, D. M., F. J. Hoerr, W. W. Carlton, E. J. Hinsman, and H. W. Ferguson Enteric cryptosporidiosis in a naso tang, Naso lituratus Bloch Schneider // J. Fish Dis. 1981. - N 4. - P.425-428.
233. Houpt ER, Bushen OY, Sam NE et al. Short report: asymptomatic Cryptosporidium hominis infection among human immunodeficiency virus-infected patients in Tanzania // Am J Trop Med Hyg. 2005. — Vol.73, N 3. -P.520-522.
234. Hsu, В. M., and H. H. Yeh. Removal of Giardia and Cryptosporidium in drinking water treatment: a pilot-scale study // Water Res. 2003. - Vol. 37. — P.1111-1117.
235. Hung CC, Tsaihong JC, Lee YT et al. Prevalence of intestinal infection due to Cryptosporidium species among Taiwanese patients with human immunodeficiency virus infection // J Formos Med Assoc. 2007. - Vol.106, N 1. -P.31-35.
236. Hunter PR, Nichols G. Epidemiology and clinical features of Cryptosporidium infection in immunocompromised patients // Clin Microbiol Rev. 2002. Vol.15, N 1.-P.145-154.
237. Hunter PR, Chalmers RM, Syed Q, Hughes LS, Woodhouse S, Swift L Foot and mouth disease and cryptosporidiosis: possible interaction between two emerging infectious diseases // Emerg Infect Dis .- 2003. Vol. 9. - P. 109-112.
238. Hunter PR, Hughes S, Woodhouse S, Raj N, Syed Q, Chalmers RM, Ver-lander NQ, Goodacre J Health sequelae of human cryptosporidiosis in immunocompetent patients // Clin Infect Dis. 2004a. - Vol. 39. - P. 504-510.
239. Hunter PR, Hughes S, Woodhouse S et al. Sporadic cryptosporidiosis case-control study with genotyping // Emerg Infect Dis. 2004b. - Vol.10, N 7. -P.1241-1249.
240. Hunter PR, Thompson RC. The zoonotic transmission of Giardia and Cryptosporidium // Int J Parasitol. 2005. - Vol.35, N 11/12. - P.l 181-1190.
241. Inman, L. R., and A. Takeuchi. 1979. Spontaneous cryptosporidiosis in an adult female rabbit // Vet. Pathol. 1979. - Vol. 16. - P.89-95.
242. Inungu JN, Morse AA, Gordon C. Risk factors, seasonality, and trends of cryptosporidiosis among patients infected with human immunodeficiency virus // Am J Trop Med Hyg. 2000. - Vol.62, N 3. - P.384-387.
243. Iseki, M. Cryptosporidium felis sp. n. (Protozoa: Eimeriorina) from the domestic cat // Jpn. J. Parasitol. 1979. - Vol. 28. -P.285-307.
244. Iseki, M., T. Maekawa, K. Moriya, S. Uni, and S. Takada. Infectivity of Cryptosporidium muris (strain RN 66) in various laboratory animals. Parasitol. Res. 1989.- Vol.75. -P.218-222.
245. Ives NJ, Gazzard BG, Easterbrook PJ. The changing pattern of AIDS-defining illnesses with the introduction of highly active antiretroviral therapy (HAART)in a London clinic // J Infect. 2001. - Vol.42, N 2. - P. 134-9.
246. Jablonowski H, Szelenyi H, Becker K, Lubke HJ, Borchard F, Strohmeyer G, Hengels KJ. Sclerosing cholangitis with papillary stenosis in an HIV-infected patients with Cryptosporidium infection // Z Gastroenterol. 1994. - Vol.32, N 8. -P.441-443.
247. Jakobi V, Petiy F. Humoral immune response in IL-12 and IFN-gamma deficient mice after infection with Cryptosporidium parvum // Parasite Immunol.-2008. Vol.30, N 3. -P.151-161.
248. Janoff EN, Limas C, Gebhard RL, Penley KA. Cryptosporidial carriage without symptoms in the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) // Ann Intern Med. 1990. - Vol.112, N 1. - P.75-76.
249. Jellison KL, Hemond HF, Schauer DB Sources and species of Cryptosporidium oocysts in the Wachusett Reservoir watershed // Appl Environ Microbiol. 2002. - Vol. 68. - P.569-575.
250. Jervis, H. R., T. G. Merrill, and H. Sprinz. Coccidiosis in the guinea pig small intestine due to a Cryptosporidium // Am. J. Vet. Res. — 1966. — Vol. 27. P. 408-414.
251. Joachim A. Human cryptosporidiosis: an update with special emphasis on the situation in Europe // J Vet Med В Infect Dis Vet Public Health. 2004. -Vol.51, N 6.-P.251-259.
252. Johnston SP, Ballard MM, Beach MJ, Causer L, Wilkins PP. Evaluation of three commercial assays for detection of Giardia and Cryptosporidium organisms in fecal specimens // J Clin Microbiol. 2003. - Vol.41, N 2. - P.623-626.
253. Jordan WC. Clarithromycin prophylaxis against Cryptosporidium enteritis in patients with AIDS // J. Natl Med. Assoc. 1996. - Vol. 88. - P. 425^127.
254. Jougla E, Pequignot F, Carbon С et al. AIDS-related conditions: study of a representative sample of 1203 patients deceased in 1992 in France // Int J Epidemiol. 1996.-Vol.25, N 1.-P.190-197.
255. Kadappu KK, Nagaraja MV, Rao PV, Shastry BA. Azithromycin as treatment for cryptosporidiosis in human immunodeficiency virus disease // J. Postgrad. Med. 2002. - Vol. 48. - P. 179-181.
256. Kaneta, Y., and Y. Nakai. 1998. Survey of Cryptosporidium oocysts from adult cattle in a slaughter house // J. Vet. Med. Sci. 1998. - Vol. 60. - P.585-588.
257. Kang G, Srivastava A, Pulimood AB, Dennison D, Chandy M. Etiology of diarrhea in patients undergoing allogeneic bone marrow transplantation in South India // Transplantation. 2002. - Vol.73, N 8. - P. 1247-1251.
258. Karasudani T, Aoki S, Takeuchi J et al. Sensitive detection of Cryptosporidium oocysts in environ-mental water samples by reverse transcription-PCR // Jpn J Infect Dis. 2001. - Vol. 54. - P. 122-124.
259. Kassa M, Comby E, Lemeteil D, Brasseur P, Ballet JJ. Characterization of anti-Cryptosporidium IgA antibodies in sera from immunocompetent individuals and HIV-infected patients // J Protozool. 1991. - Vol.38, N 6. - P.179S-180S.
260. Kazlow PG, Shah K, Benkov KJ, Dische R, LeLeiko NS. Esophageal cryptosporidiosis in a child with acquired immune deficiency syndrome // Gastroenterology. 1986. - Vol.91, N 5. - P. 1301-1303.
261. Kehl KS, Cicirello H, Havens PL. Comparison of four different methods for detection of Cryptosporidium species // J Clin Microbiol. 1995. - Vol.33, N 2. — P.416-418.
262. Keusch GT, Hamer D, Joe A, Kelley M, Griffiths J, Ward H. Cryptosporidia—who is at risk? // Schweiz Med Wochenschr. 1995. - Vol.125, N 18. - P.899-908.
263. Khalakdina A, Tabnak F, Sun RK, Colford JM Jr. Race/ethnicity and other risk of factors associated with cryptosporidiosis as an initial AIDS-defining condition in California, 1980-99 // Epidemiol Infect. 2001. - Vol.127, N 3. -P.535-543.
264. Kiang KM, Scheftel JM, Leano FT et al. Recurrent outbreaks of cryptosporidiosis associated with calves among students at an educational farmprogramme, Minnesota, 2003 // Epidemiol Infect. 2006. - Vol.134, N 4. - P.878-886.
265. Kim LS, Hadley WK, Stansell J, Cello JP, Koch J. Declining prevalence of cryptosporidiosis in San Francisco // Clin Infect Dis. 1998a. - Vol.27, N 3. — P.655-656.
266. Kim LS, Stansell J, Cello JP, Koch J. Discrepancy between sex- and water-associated risk behaviors for cryptosporidiosis among HIV-infected patients in San Francisco // J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 1998b. - Vol.19, N 1. -P.44-49.
267. Koudela, В., and D. Modry. New species of Cryptosporidium (Apicomplexa, Cryptosporidiidae) from lizards // Folia Parasitol. 1998. - Vol. 45. -P.93-100.
268. Koudela, В., D. Modry, and J. Vitovec. Infectivity of Cryptosporidium muris isolated from cattle // Vet. Parasitol. 1998. - Vol. 76. - P. 181-188.
269. Kozisek F, Craun GF, Cerovska L, Pumann P, Frost F, Muller T. Serological responses to Cryptosporidium-specific antigens in Czech populations with different water sources // Epidemiol Infect. 2008. - Vol.136, N 2. - P.279-286.
270. Krasinski K, Borkowsky W, Holzman RS. Prognosis of human immunodeficiency virus infection in children and adolescents // Pediatr Infect Dis J. 1989.-Vol.8, N4.-P.216-220.
271. Ksobiech K, Somlai AM, Kelly JA et al. Demographic characteristics, treatment history, drug risk behaviors, and condom use attitudes for U.S. and
272. Russian injection drug users: the need for targeted sexual risk behavior interventions // AIDS Behav. 2005. - Vol.9, N 1. - P. 111-120.
273. Laberge I, Griffiths MW, Griffiths MW. Prevalence, detection and control of Cryptosporidium parvum in food // Int J Food Microbiol. 1996. - Vol.32, N 1/2. -P.1-26.
274. Laberge I, Ibrahim A, Barta JR, Griffiths MW. Detection of Cryptosporidium parvum in raw milk by PCR and oligonucleotide probe hybridization // Appl Environ Microbiol. 1996. - Vol.62, N 9. - P.3259-3264.
275. Lake IR, Harrison FC, Chalmers RM et al. Case-control study of environmental and social factors in-fluencing cryptosporidiosis // Eur J Epidemiol. 2007. Vol.22, N11.- P.805-811.
276. Landsberg, J. H., and P. I. 1986. Ultrastructural study of the coccidian Cryptosporidium sp. from stomachs of juvenile cichlid fish. Dis // Aquat. Org. 1986.-Vol.2.-P.13-20.
277. Laurent F, McCole D, Eckmann L, Kagnoff MF. Pathogenesis of Cryptosporidium parvum infection // Microbes Infect. 1999. - Vol.1, N 2. -P.141-148.
278. Le Blancq, S. M., N. V. Khramtsov, F. Zamani, S. J. Upton, and T. W. Wu. Ribosomal RNA gene organization in Cryptosporidium parvum // Mol. Biochem. Parasitol. 1997. - Vol.90. - P.463-478.
279. Le Moing V, Bissuel F, Costagliola D et al. Decreased prevalence of intestinal cryptosporidiosis in HIV-infected patients concomitant to the widespread use of protease inhibitors // AIDS. 1998. - Vol.12, N 11. - P.1395-1397.
280. Learmonth JJ, Ionas G, Ebbett KA, Kwan ES (2004). Genetic characterization and transmission cycles of Cryptosporidium species isolated from humans in New Zealand // Appl Environ Microbiol. 2004. - Vol. 70. - P. 3973-3978.
281. Leoni F, Amar C, Nichols G et al. Genetic analysis of Cryptosporidium from 2414 humans with diarrhoea in England between 1985 and 2000 // J Med Microbiol. 2006. - Vol.55, Pt 6. - P.703-707.
282. Levine, N. D. Protozoan parasites of domestic animals and of man.- Burgess Publishing Co., Minneapolis, Minn, 1961.
283. Levine, N. D. Some corrections of coccidian (Apicomplexa: Protozoa) nomenclature // J. Parasitol. 1980. - Vol. 66. - P.830-834.
284. Levine, N. D. Taxonomy and review of the coccidian genus Cryptosporidium (protozoa, apicomplexa) // J. Protozool. 1984. - Vol. 31. -P.94-98.
285. Levine, N. D. Phylum II. Apicomplexa Levine 1970 // J. J. Lee, S. H. Hunter, and E. C. Bovee (ed.), An illustrated guide to the protozoa. Society of Protozoologist.- Allen Press, Lawrence, Kan, 1985. P.322-374.
286. Lew EA, Poles MA, Dieterich DT. Diarrheal diseases associated with HIV infection // Gastroenterol Clin North Am. 1997. - Vol. 26, N 2. - P.259-290.
287. Lim YA, Rohela M, Sim BL, Jamaiah I, Nurbayah M. Prevalence of cryptosporidiosis in HIV-infected patients in Kajang Hospital, Selangor. Southeast // Asian J Trop Med Public Health. 2005. - Vol.36 Suppl. - P. 30-33.
288. Limor JR, Lai AA, Xiao L. Detection and differentiation of Cryptosporidium parasites that are pathogenic for humans by real-time PCR // J Clin Microbiol. 2002. - Vol.40, N 7. - P.2335-2338.
289. Lindquist, H. D., J. W. Bennett, M. Ware, R. E. Stetler, M. Gauci, and F. W. Schaefer. Testing methods for detection of Cryptosporidium spp in water samples // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2002. - Vol. 32. - P. 190-194.
290. Lindsay, D. S., B. L. Blagburn, and C. A. Sundermann. Morphometric comparison of the oocysts of Cryptosporidium meleagridis and Cryptosporidium baileyi from birds // Proc. Helminthol. Soc. Wash. 1989. - Vol. 56. - P.91-92.
291. Lindsay, D., and B. Blagburn. Cryptosporidiosis in birds // J. P. Dubey, C. A. Speer, and R. Fayer (ed.), Cryptosporidiosis in man and animals. CRC Press, Inc., Boca Raton, Fl, 1990. - P.133-148.
292. Lindsay, D. S., B. L. Blagburn, and F. J. Hoerr. Small intestinal cryptosporidiosis in cockatiels associated with Cryptosporidium baileyi-like oocysts // Avian Dis. 1990. - Vol. 34. - P.791-793.
293. Lindsay, D. S., B. L. Blagburn, F. J. Hoerr, and P. C. Smith. Cryptosporidiosis in zoo and pet birds // J. Protozool. 1991. - Vol. 38. - P.180S-181S.
294. Lindsay, D. S., S. J. Upton, D. S. Owens, U. M. Morgan, J. R. Mead, and B. L. Blagburn. Cryptosporidium andersoni n. sp. (Apicomplexa: Cryptosporiidae) from cattle, Bos taurus // J. Eukaryot. Microbiol. 2000. - Vol. 47. - P.91-95.
295. Llorente MT, Clavel A, Varea M et al. Evaluation of an immunochromatographic dip-strip test for the detection of Cryptosporidium oocysts in stool specimens // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2002. - Vol.21, N 8. -P.624-625.
296. Llorente MT, Clavel A, Varea M, Pilar Goni M, Sahagun J, Olivera S. Cryptosporidium felis infection, Spain // Emerg Infect Dis. 2006. - Vol.12, N 9. -P.1471-1472.
297. Llorente MT, Clavel A, Goni MP et al. Genetic characterization of Cryptosporidium species from humans in Spain // Parasitol Int. 2007. - Vol.56, N 3.-P.201-205.
298. Llovo, J., A. Lopez, J. Fabregas, and A. Munoz. 1993. Interaction of lectins with Cryptosporidium parvum // J. Infect. Dis. 1993. - Vol. 167. - P. 1477-1480.
299. Lopez-Velez R, Tarazona R, Garcia Camacho A, Gomez-Mampaso E, Guerrero A, Moreira V, Villanueva R. Intestinal and extraintestinalcryptosporidiosis in AIDS patients // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1995. — Vol.14, N 8. -P.677-681.
300. Lowery CJ, Millar ВС, Moore JE et al. Molecular genotyping of human cryptosporidiosis in Northern Ireland: epidemiological aspects and review // Ir J Med Sci. 2001a. - Vol. 170. - P. 246-250.
301. Lowery, C. J., J. E. Moore, В. C. Millar, K. A. McCorry, J. Xu, P. J. Rooney, and J. S. Dooley. Occurrence and molecular genotyping of Cryptosporidium spp. in surface waters in Northern Ireland // J. Appl. Microbiol. — 2001b.-Vol. 91. -P.774-779.
302. Luft, B. J., D. Payne, D. Woodmansee, and C. W. Kim. Characterization of the Cryptosporidium antigens from sporulated oocysts of Cryptosporidium parvum // Infect. Immun. 1987. - Vol. 55. - P. 2436-2441.
303. Lumadue JA, Manabe YC, Moore RD, Belitsos PC, Sears CL, Clark DP. A clinicopathologic analysis of AIDS-related cryptosporidiosis // AIDS. 1998. — Vol.12, N 18.-P.2459-2466.
304. Ma P, Soave R. Three-step stool examination for cryptosporidiosis in 10 homosexual men with protracted watery diarrhea // J Infect Dis. 1983. - Vol.147, N 5. - P.824-828.
305. MacKenzie, W. R., J. J. Kazmierczak, and J. P. Davis. An outbreak of cryptosporidiosis associated with a resort swimming pool // Epidemiol. Infect. -1995.-Vol. 115. P.545-553.
306. Maggi P, Larocca AM, Quarto M et al. Effect of antiretroviral therapy on cryptosporidiosis and microsporidiosis in patients infected with human immunodeficiency virus type 1 // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2000. - Vol.19, N 3. -P.213-217.
307. Maign6 G, Martinez V, Thellier M et al. Cryptosporidial diarrhoea in two HIV-infected patients: potential efficacy of rifampicin for successful treatment // AIDS. 2007. - Vol.21, N 9. - P.1221-1222.
308. Majewska AC, Sulima P, Werner A, Baralkiewicz G, Juszczyk J, Pieniazek NJ. Cryptosporidiosis in HIV-positive patients // Wiad Parazytol. 1999. - Vol.45, N 2. - P.125-128.
309. Makni F, Cheikrouhou F, Ayadi A. Parasitoses and immunodepression // Arch Inst Pasteur Tunis. 2000. - Vol.77, N 1/4. - P.51-54.
310. Maliha GM, Hepps KS, Maia DM et al. Whipple's disease can mimic chronic AIDS enteropathy // Am J Gastroenterol. 1991 - Vol.86, N 1. - P.79-81.
311. Mallon M, MacLeod A, Wastling J et al. Population structures and the role of genetic exchange in the zoonotic pathogen Cryptosporidium parvum // J Mol Evol. 2003. - Vol. 56. - P. 407-417.
312. Mallon ME, MacLeod A, Wastling JM, Smith H, Tait A Multilocus genotyping of Cryptosporidium parvum Type 2: population genetics and sub-structuring. Infect Genet Evol 3: 207-18.
313. Manabe YC, Clark DP, Moore RD et al. Cryptosporidiosis in patients with AIDS: correlates of disease and survival // Clin Infect Dis. 1998. - Vol.27, N 3. -P.536-542.
314. Martinez I, Belda Neto FM. Contribution to the laboratory diagnosis of human cryptosporidiosis // Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2001. - Vol.43, N 2. -P.79-82.
315. Matos О, Tomas A, Aguiar P, Casemore D, Antunes F. Prevalence of cryptosporidiosis in AIDS patients with diarrhoea in Santa Maria Hospital, Lisbon // Folia Parasitol (Praha). 1998. - Vol.45, N 2. - P.163-166.
316. Mayr, E. Systematics and the origin of species. Columbia University Press, New York, N.Y, 1942.
317. McGowan I, Hawkins AS, Weller IV. The natural history of cryptosporidial diarrhoea in HIV-infected patients // AIDS. 1993. - Vol.7, N 3. - P.349-354.
318. Mead, J. R., R. C. Humphreys, D. W. Sammons, and C. R. Sterling. Identification of isolate-specific sporozoite proteins of Cryptosporidium parvum by two-dimensional gel electrophoresis // Infect. Immun. 1990. - Vol. 58. - P.2071-2075.
319. Mele R, Gomez Morales MA, Tosini F, Pozio E. Indinavir reduces Cryptosporidium parvum infection in both in vitro and in vivo models // Int J Parasitol. 2003. - Vol.33, N 7. -P.757-764.
320. Mendes Maia, A., S. Ogassawara, H. Pena, and A. Hoge. 1995. Oocysts of Cryptosporidium spp in the faces of bovines in Montes Claros, MG, Brazil // Arq. Bras. Med. Vet. Zootec. 1995. - Vol. 47. - P.717-719.
321. Mengesha B. Cryptosporidiosis among medical patients with the acquired immunodeficiency syndrome in Tikur Anbessa Teaching Hospital, Ethiopia // East Afr Med J. 1994. - Vol.71, N 6. - P.376-378.
322. Mercado R, Garcia M. Asymptomatic cryptosporidiosis in an infant // Bol Chil Parasitol. 1994. - Vol.49, N 3/4. - P.71-72.
323. Mercado R, Buck GA, Manque PA, Ozaki LS. Cryptosporidium hominis infection of the human respiratory tract // Emerg Infect Dis. 2007. - Vol.13, N 3. - P.462-464.
324. Messner MJ, Chappell CL, Okhuysen PC. Risk assessment for Cryptosporidium: a hierarchical Bayesian analysis of human dose response data // Water Res. 2001. - Vol.35, N 16. - P.3934-3940.
325. Miao YM, Awad-El-Kariem FM, Franzen С et al. Eradication of Cryptosporidia and microsporidia following successful antiretroviral therap // J Acquir Immune Defic Syndr. 2000. - Vol.25, N 2. - P.124-129.
326. Millar ВС, Finn M, Xiao L, Lowery С J, Dooley JSG, Moore JE Cryptosporidium in foodstuffs: an emerging aetiological route of human foodborne illness // Trends Food Sci Technol. 2002. - Vol. 3, N 1. - P. 168-187.
327. Millard PS, Gensheimer KF, Addiss DG et al. An outbreak of cryptosporidiosis from fresh-pressed apple cider // JAMA. 1994. - Vol.272, N 20. -P.l 592-1596.
328. Miller JR. Decreasing cryptosporidiosis among HIV-infected persons in New York City, 1995-1997 // J Urban Health. 1998. - Vol.75, N 3. - P.601-602.
329. Miller WA, Atwill ER, Gardner IA et al. Clams (Corbicula fluminea) as bioindicators of fecal contamination with Cryptosporidium and Giardia spp. infreshwater ecosystems in California // Int J Parasitol. 2005a. - Vol.35, N 6. — P.673-684.
330. Miller WA, Miller MA, Gardner IA et al. New genotypes and factors associated with Cryptosporidium detection in mussels (Mytilus spp.) along the California coast // Int. J. Parasitol. 2005b. - Vol. 35, N 10. - P. 1103-1113.
331. Miller WA, Gardner IA, Atwill ER et al. Evaluation of methods for improved detection of Cryptosporidium spp. in mussels (Mytilus californianus) // J Microbiol Methods. 2006. - Vol.65, N 3. - P.367-379.
332. Miron, D., J. Kenes, and R. Dagan. 1991. Calves as a source of an outbreak of cryptosporidiosis among young children in an agricultural closed community // Pediatr. Infect. Dis. J. 1991. - Vol. 10. - P. 438-441.
333. Miron D, Colodner R, Kenes Y. Age-related seroprevalence of Cryptosporidium in northern Israel // Isr Med Assoc J. 2000. - Vol.2, N 5. — P.343-345.
334. Моего ft A, Sabin С A, Youle M et al. Changes in AIDS-defining illnesses in a London Clinic, 1987-1998 // J Acquir Immune Defic Syndr. 1999. - Vol.21, N 5. -P.401-407.
335. Moles B, Torres L, Milagro A, Gorricho J, Seoane A, Navascues J. Incidence of Cryptosporidium in Zaragoza: an 8-year study (1989-1996) // Enferm Infecc Microbiol Clin. 1998. - Vol.16, N 8. - P.356-358.
336. Monge R, Arias ML. Presence of various pathogenic microorganisms in fresh vegetables in Costa Rica // Arch Latinoam Nutr. 1996. - Vol.46, N 4. — P.292-294.
337. Monge R, Chinchilla M, Reyes L. Seasonality of parasites and intestinal bacteria in vegetables that are consumed raw in Costa Rica // Rev Biol Trop. -1996. Vol.44, N 2A. - P.369-375.
338. Monis PT, Thompson RC Cryptosporidium and Giardia zoonoses: fact or fiction? // Infect Genet Evol. 2003. - Vol. 3. - P. 233-244.
339. Monkemuller KE, Call SA, Lazenby AJ, Wilcox CM. Declining prevalence of opportunistic gastrointestinal disease in the era of combination antiretroviral therapy // Am J Gastroenterol. 2000. - Vol.95, N 2. - P.457-462.
340. Moon A, Spivak W, Brandt LJ. Cryptosporidium-induced gastric obstruction in a child with congenital HIV infection: case report and review of the literature // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 1999. - Vol.28, N 1. - P.108-111.
341. Morales Gomez MA. Highly Active AntiRetroviral Therapy and cryptosporidiosis // Parassitologia. 2004. - Vol.46, N 1/2. - P.95-99.
342. Moreno-Camacho A, Lopez-Velez R, Munoz Sanz A, Labarga-Echevarria P. Intestinal parasitic infections and leishmaniasis in patients with HIV infection // En-ferm Infecc Microbiol Clin. 1998. - Vol.16 Suppl 1. - P. 52-60.
343. Morgan, U. M., С. C. Constantine, D. A. Forbes, and R. C. Thompson. Differentiation between human and animal isolates of Cryptosporidium parvum using rDNA sequencing and direct PCR analysis // J. Parasitol. 1997. — 83. — P.825-830.
344. Morgan, U. M., K. D. Sargent, A. Elliot, and R. C. Thompson. Cryptosporidium in cats—additional evidence for C. felis // Vet. J. 1998a. — Vol. 156. - P.159-161.
345. Morgan, U. M., K. D. Sargent, P. Deplazes, D. A. Forbes, F. Spano, H. Hertzberg, A. Elliot, and R. C. Thompson. Molecular characterization of
346. Cryptosporidium from various hosts // Parasitology. — 1998a. Vol. 117. - P.31-37.
347. Morgan, U. M., D. A. Forbes, and R. C. A. Thompson. Molecular epidemiology of Cryptosporidium parvum infection // Eur. J. Protistol. 1998. — Vol.34. -P.262-266.
348. Morgan UM, Buddie JR, Armson A, Elliot A, Thompson RC. Molecular and biological characterisation of Cryptosporidium in pigs // Aust Vet J. 1999a. -Vol.77, N 1.-P.44-47.
349. Morgan, U. M., P. T. Monis, R. Fayer, P. Deplazes, and R. C. Thompson. Phylogenetic relationships among isolates of Cryptosporidium: evidence for several new species //J. Parasitol. 1999c. - Vol. 85. -P.l 126-1133.
350. Morgan, U. M., L. Xiao, R. Fayer, A. A. Lai, and R. C. Thompson. Variation in Cryptosporidium: towards a taxonomic revision of the genus // Int. J. Parasitol. 1999f.-Vol. 29. - P. 1733-1751.
351. Morgan, U., L. Xiao, I. Sulaiman, R. Weber, A. A. Lai, R. C. Thompson, and P. Deplazes. Which genotypes/species of Cryptosporidium are humans susceptible to? // J. Eukaryot. Microbiol. 1999g. - Vol. 46. - P.42S-43S.
352. Morgan, U. M., L. Xiao, J. Limor, S. Gelis, S. R. Raidal, R. Fayer, A. Lai, A. Elliot, and R. C. Thompson. Cryptosporidium meleagridis in an Indian ring-necked parrot (Psittacula krameri) // Aust. Vet. J. 2000a. - Vol. 78. - P. 182-183.
353. Morgan, U. M., L. Xiao, B. D. Hill, P. O'Donoghue, J. Limor, A. Lai, and R. C. Thompson Detection of the Cryptosporidium parvum 'human' genotype in a dugong (Dugong dugon) // J. Parasitol. 2000b. - Vol. 86. - P.1352-1354.
354. Morgan, U. M., L. Xiao, P. Monis, A. Fall, P. J. Irwin, R. Fayer, К. M. Denholm, J. Limor, A. Lai, and R. C. Thompson. Cryptosporidium spp. in domestic dogs: the 'dog'; genotype // Appl. Environ. Microbiol. 2000c. - Vol. 66. -P.2220-2203.
355. Morgan, U. M., L. Xiao, R. Fayer, A. A. Lai, and R. C. Thompson. Epidemiology and strain variation of Cryptosporidium parvum // Contrib. Microbiol. 2000d. - Vol. 6. - P. 116-139.
356. Moskovitz BL, Stanton TL, Kusmierek JJ. Spiramycin therapy for cryptosporidial diarrhoea in immunocompromised patients // J. Antimicrob. Chemother. 1988. - Vol. 22, Suppl. B. - P. 189-191.
357. Moss DM, Chappell CL, Okhuysen PC, DuPont HL, Arrowood MJ, Hightower AW, Lammie PJ. The antibody response to 27-, 17-, and 15-kDa Cryptosporidium antigens following experimental infection in humans // J Infect Dis. 1998. - Vol.178, N 3. - P.827-833.
358. Mtambo, M. M., E. Wright, A. S. Nash, and D. A. Blewett. 1996. Infectivity of a Cryptosporidium species isolated from a domestic cat (Felis domestica) in lambs and mice //Res. Vet. Sci. 1996. Vol. 60. -P.61-64.
359. Muench, T. R., and M. R. White. Cryptosporidiosis in a tropical freshwater catfish (Plecostomus spp.) // J. Vet. Diagn. Investig. 1997. - Vol. 9. - P.87-90.
360. Murphy, W. J., E. Eizirik, W. E. Johnson, Y. P. Zhang, O. A. Ryder, and S. J. O'Brien. Molecular phylogenetics and the origins of placental mammals // Nature. -2001a. Vol. 409. -P.614-618.
361. Musial CE, Arrowood MJ, Sterling CR, Gerba CP. Detection of Cryptosporidium in water by using polypropylene cartridge filters // Appl Environ Microbiol. 1987. - Vol.53, N 4. - P.687-692.
362. Muthusamy D, Rao SS, Ramani S et al. Multilocus genotyping of Cryptosporidium sp. isolates from human immunodeficiency virus-infected individuals in South India // J Clin Microbiol. 2006. - Vol.44, N 2. - P.632-634.
363. Nacro B, Bonkoungou P, Nagalo К et al. Clinical profile of cryptosporidiosis in a pediatric hospital environment in Burkina Faso // Med Trop (Mars). 1998. - Vol.58, N 1. - P.47-50.
364. Navin TR, Juranek DD. Cryptosporidiosis: clinical, epidemiologic, and parasitologic review // Reviews of Infectious Diseases. 1984. — Vol.6, N 3. — P.313-327.
365. Neill, M. A., S. K. Rice, N. V. Ahmad, and T. P. Flanigan. Cryptosporidiosis: an unrecognized cause of diarrhea in elderly hospitalized patients // Clin. Infect. Dis. 1996. - Vol. 22 .- P. 168-170.
366. Newman RD, Zu SX, Wuhib T et al. Household epidemiology of Cryptosporidium parvum infection in an urban community in northeast Brazil // Ann Intern Med. 1994. - Vol.120, N 6. -P.500-505.
367. Newman, R. D., C. L. Sears, S. R. Moore, J. P. Nataro, T. Wuhib, D. A. Agnew, R. L. Guerrant, and A. A. M. Lima. Longitudinal study of Cryptosporidium infection in children in northeastern Brazil // J. Infect. Dis. . -1999.-Vol.180.-P. 167-175.
368. Ng J, Eastwood K, Durrheim D et al. Evidence supporting zoonotic transmission of Cryptosporidium in rural New South Wales // Exp Parasitol. -2008. — Vol.119,N 1. -P.192-195.
369. Nichols, G. L., J. McLauchlin, and D. Samuel. 1991. A technique for typing Cryptosporidium isolates // J. Protozool. 1991. - Vol.38. - P.237S-240S.
370. Nimri, L. F., and S. S. Hijazi. 1994. Cryptosporidium. A cause of gastroenteritis in preschool children in Jordan // J. Clin. Gastroenterol. 1994. — Vol. 19. -P.288-291.
371. Nina, J. M., V. McDonald, D. A. Dyson, J. Catchpole, S. Uni, M. Iseki, P. L. Chiodini, and K. P. McAdam. Analysis of oocyst wall and sporozoite antigens from three Cryptosporidium species // Infect. Immun. 1992a. - Vol.60. - P. 1509-1513.
372. Nouri M, Karami M. Asymptomatic cryptosporidiosis in nomadic shepherds and their sheep // J Infect. 1991. - Vol.23, N 3. - P.331-333.
373. Nouri M, Toroghi R. Asymptomatic cryptosporidiosis in cattle and humans in Iran//Vet Rec. 1991. - Vol.128, N 15. - P.358-359.
374. Nouri, M. A Cryptosporidium muris like parasite in cattle and camels in Iran // Indian Vet. J. 2002. - Vol.79 , N 3. - P.558-559.
375. Oberhuber G, Lauer E, Stolte M, Borchard F. Cryptosporidiosis of the appendix vermiformis: a case report // Z Gastroenterol. 1991. - Vol.29, N 11. — P.606-608.
376. O'Brien E, Mclnnes L, Ryan U. Cryptosporidium GP60 genotypes from humans and domesticated animals in Australia, North America and Europe // Exp Parasitol. -2008.-Vol.l 18, N l.-P.l 18-121.
377. Ochiai Y, Takada. C, Hosaka M. Detection and discrimination of Cryptosporidium parvum and C. hominis in water samples by immunomagnetic separation-PCR // Appl Environ Microbiol. 2005. - Vol.71, N 2. - P.898-903.
378. O'Donoghue, P. J. Cryptosporidium and cryptosporidiosis in man and animals // Int. J. Parasitol. 1995. - Vol. 25. -P.139-195.
379. Ogunkolade, B. W., H. A. Robinson, V. McDonald, K. Webster, and D. A. Evans. Isoenzyme variation within the genus Cryptosporidium // Parasitol. Res.-1993.-Vol. 79.-P. 385-388.
380. O'Keefe EA, Wood R, Van Zyl A, Cariem AK. Human immunodeficiency virus-related abdominal pain in South Africa. Aetiology, diagnosis and survival // Scand J Gastroenterol. 1998. - Vol.33, N 2. - P.212-217.
381. Okhuysen PC, Chappell CL, Sterling CR, Jakubowski W, DuPont HL. Susceptibility and serologic response of healthy adults to reinfection with Cryptosporidium parvum // Infect Immun. 1998b. - Vol.66, N 2. - P.441-443.
382. Okhuysen, P. С., C. L. Chappell, J. H. Crabb, C. R. Sterling, and H. L. DuPont. Virulence of three distinct Cryptosporidium parvum isolates for healthy adults//J. Infect. Dis. 1999. -Vol. 180.-P. 1275-1281.
383. Okome-Nkoumou M, Boguikouma JB, Kombila M. Opportunistic diseases in HIV-infected patients at the Jeanne Ebori Foundation in Libreville // Gabon Med Trop (Mars). 2006. - Vol.66, N 2. - P. 167-171.
384. Ong CS, Eisler DL, Goh SH et al. Molecular epidemiology of cryptosporidiosis outbreaks and transmission in British Columbia, Canada // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1999. - Vol. 61, N 1. - P.63-69.
385. Ong CS, Eisler DL, Alikhani A, Fung VW, Tomblin J, Bowie WR, Isaac-Renton JL Novel Cryptosporidium genotypes in sporadic cryptosporidiosis cases: first report of human infections with a cervine genotype // Emerg Infect Dis. -2002. Vol.8. - P. 263-268.
386. Ortega, Y. R., R. R. Sheehy, V. A. Cama, К. K. Oishi, and C. R. Sterling. Restriction fragment length polymorphism analysis of Cryptosporidium parvum isolates of bovine and human origin // J. Protozool. 1991. - Vol. 38. - P.40S-41S.
387. Palmieri F, Cicalini S, Froio N et al. Pulmonary cryptosporidiosis in an AIDS patient: successful treatment with paromomycin plus azithromycin // Int J STD AIDS. 2005. - Vol.16, N 7. - P.515-517.
388. Pande, В. P., В. В. Bhatia, and P. P. S. Chauhan. A new genus and species of cryptosporidiid coccidia from India // Acta Vet. Acad. Sci. Hung. 1972. -Vol. 22.-P.231-234.
389. Paperna, I., and M. Vilenkin. Cryptosporidiosis in the gourami Trichogaster leeri: description of a new species and a proposal for a new genus, Piscicryptosporidium, for species infecting fish // Dis. Aquat. Org. — 1996. Vol. 27. - P. 95-101.
390. Park JH, Guk SM, Han ET, Shin EH, Kim JL, Chai JY. Genotype analysis of Cryptosporidium spp. prevalent in a rural village in Hwasun-gun, Republic of Korea // Korean J Parasitol. 2006. - Vol.44, N 1. - P.27-33.
391. Pavlasek, I. Cryptosporidia: biology, diagnosis, host spectrum, specificity, and the environment // Rem. Klin. Mikrobiol. 1991. - Vol. 3. - P.290-301.
392. Pavlasek, I. The black-headed gull (Larus ridibundus L.), a new host for Cryptosporidium baileyi (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) // Vet. Med. (Praha). -1993. Vol. 38. - P.629-638.
393. Pavlasek, I. Cryptosporidia and other endoparasites in heifers imported into the Czech Republic // Vet. Med. (Praha). 1995. - Vol. 40. - P.333-336.
394. Pavlasek, I., M. Lavickova, P. Horak, J. Krai, and B. Krai. Cryptosporidium varanii n. sp. (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) in Emerald monitor (Varanus prasinus Schegel, 1893) in captivity at Prague zoo // Gazella. 1995. - Vol. 22. -P. 99-108.
395. Pavlasek, I. Findings of Cryptosporidia in the stomach of hens and of exotic and wild birds // Veterinarstvi. 2001. - Vol. 51. - P. 103-108.
396. Pedersen C, Danner S, Lazzarin A et al. Epidemiology of cryptosporidiosis among European AIDS patients // Genitourin Med. 1996. - Vol.72, N 2. - P. 128131.
397. Pedraza-Diaz, S., C. Amar, and J. McLauchlin. The identification and characterisation of an unusual genotype of Cryptosporidium from human faeces as Cryptosporidium meleagridis // FEMS Microbiol. Lett. 2000. - Vol. 189. -P.189-194.
398. Pedraza-Diaz S, Amar C, Nichols GL, McLauchlin J Nested poly-merase chain reaction for amplification of the Cryptosporidium oocyst wall protein gene // Emerg Infect Dis. 2001. - Vol. 7. - P. 49-56.
399. Pellerdy, L. Coccidia and coccidiosis. Akademiai Kiado, Budapest, Hungary, 1965.
400. Pellicelli AM, Palmieri F, Spinazzola F et al. Pulmonary cryptosporidiosis in patients with acquired immunodeficiency syndrome // Minerva Med. 1998. — Vol.89, N 5.-P.173-175.
401. Репа, H. F., N. Kasai, and S. M. Gennari. Cryptosporidium muris in dairy cattle in Brazil // Vet. Parasitol. 1997. - Vol. 73. - P.353-355.
402. Peng, M. M., M. L. Wilson, R. E. Holland, S. R. Meshnick, A. A. Lai, and L. Xiao. Genetic diversity of Cryptosporidium spp. in cattle in Michigan:implications for understanding the transmission dynamics // Parasitol. Res. -2003a. Vol. 90. - P.175-180.
403. Peng MM, Meshnick SR, Cunliffe NA, Thindwa BD, Hart CA, Broadhead RL, Xiao L Molecular epidemiology of cryptosporidiosis in children in Malawi // J Eukaryot Microbiol. 2003b. - Vol. 50, Suppl. - P. 557-559.
404. Pereira, S. J., N. E. Ramirez, L. Xiao, and L. A. Ward. Pathogenesis of human and bovine Cryptosporidium parvum in gnotobiotic pigs // J. Infect. Dis. — 2002,-Vol.186.-P.715-718.
405. Petersen C. Cryptosporidiosis in patients infected with the human immunodeficiency virus // Clin Infect Dis. 1992. - Vol.15, N 6. - P.903-909.
406. Petry F. Epidemiological study of Cryptosporidium parvum antibodies in sera of persons from Germany // Infection. 1998. — Vol.26, N 1. — P.7-10.
407. Pettoello-Mantovani M, Di Martino L, Dettori G et al. Asymptomatic carriage of intestinal Cryptosporidium in immunocompetent and immunodeficient children: a prospective study // Pediatr Infect Dis J. 1995. — Vol.14, N 12. — P. 1042-1047.
408. Pieniazek NJ, Bornay-Llinares FJ, Slemenda SB et al. New Cryptosporidium genotypes in HIV-infected persons // Emerg Infect Dis. 1999. — Vol.5, N 3. - P.444-449.
409. Pinlaor S, Mootsikapun P, Pinlaor P et al. Detection of opportunistic and non-opportunistic intestinal parasites and liver flukes in HIV-positive and HIV-negative subjects // Southeast Asian J Trop Med Public Health. 2005. - Vol.36, N 4. -P.841-845.
410. Pita-Fernandez L, Vargas-Castrillon J, Pazos C, Gallego I, Garcia-Monzon C. Colitis by Cryptosporidium as initial manifestation of acquired immunodeficiency syndrome // Rev Esp Enferm Dig. 2006. - Vol.98, N 8. — P.621-623.
411. Pitlik SD, Fainstein V, Garza D et al. Human cryptosporidiosis: spectrum of disease. Report of six cases and review of the literature // Arch Intern Med. 1983. - Vol. 143, N 12. - P.2269-2275.
412. Portnoy D, Whiteside ME, Buckley E III, MacLeod CL. Treatment of intestinal cryptosporidiosis with spiramycin // Ann. Intern. Med. — 1984. Vol. 101. -P.202-204.
413. Pouillot R, Beaudeau P, Denis JB, Derouin F. AFSSA Cryptosporidium Study Group. A quantitative risk assessment of waterborne cryptosporidiosis in France using second-order Monte Carlo simulation // Risk Anal. 2004. - Vol.24, N 1.-P.1-17.
414. Pozio E, Rivasi F. Caccio SM Infection with Cryptosporidium hominis and reinfection with Cryptosporidium parvum in a transplanted ileum // APMIS. -2004. Vol. 112. - P. 309-313.
415. Pozio E. Highly Active AntiRetroviral Therapy and opportunistic protozoan infections // Parassitologia. 2004. - Vol.46, N 1-2. - P.89-93.
416. Pozio E, Morales MA. The impact of HTV-protease inhibitors on opportunistic parasites // Trends Parasitol. 2005. - Vol.21, N 2. - P.58-63.
417. Preiser G, Preiser L, Madeo L. An outbreak of cryptosporidiosis among veterinary science students who work with calves // J Am Coll Health. 2003. — Vol.51, N 5.-P.213-215.
418. Pretty, J. N., C. Brett, D. Gee, R. E. Hine, C. F. Mason, J. I. L. Morison, H. Raven, M. D. Rayment, and G. van der Bijl. An assessment of the total external costs of UK agriculture // Agric. Syst. 2000. - Vol. 65. - P.l 13-136.
419. Priest JW, Li A, Khan M et al. Enzyme immunoassay detection of antigen-specific immunoglobulin G antibodies in longitudinal serum samples from human cryptosporidiosis patients // Clin. Diagn. Lab. Immunol. — 2001. Vol. 8. — P. 415-423.
420. Proctor, S. J., and R. L. Kemp. 1974. Cryptosporidium anserinum sp. N. (Sporozoa) in a domestic goose Anser anser L., from Iowa // J. Protozool. — 1974. Vol. 21.- P.664-666.
421. Quiroz ES, Bern C, MacArthur JR et al. An outbreak of cryptosporidiosis linked to a foodhandler // J Infect Dis. 2000. - Vol. 181. - P. 695-700.
422. Raccurt CP, Brasseur P, Verdier RI et al. Human cryptosporidiosis and Cryptosporidium spp. in Haiti // Trop Med Int Health. 2006. - Vol.11, N 6. -P.929-934.
423. Raccurt CP. Worldwide human zoonotic cryptosporidiosis caused by Cryptosporidium felis // Parasite. 2007. - Vol.14, N 1. - P. 15-20.
424. Ramakrishnan K, Shenbagarathai R, Uma A et al. Thirumalaikolundusubramanian P. Prevalence of intestinal parasitic infestation in HIV/AIDS patients with diarrhea in Madurai City, South India // Jpn J Infect Dis. -2007. Vol.60, N 4. - P.209-210.
425. Ramratnam B, Flanigan TP. Cryptosporidiosis in persons with HIV infection // Postgrad Med J. 1997. - Vol.73, N 865. - P.713-716.
426. Rao Ajjampur SS, Asirvatham JR, Muthusamy D et al. Clinical features & risk factors associated with cryptosporidiosis in HIV infected adults in India // Indian J Med Res. 2007. - Vol.126. - P. 553-557.
427. Ravn P, Lundgren JD, Kjaeldgaard P et al. Nosocomial outbreak of cryptosporidiosis in AIDS patients // BMJ. 1991. - Vol.302, N 6771. - P.277-280.
428. Reeders JW, Yee J, Gore RM et al. Gastrointestinal infection in the immunocompromised (AIDS) patient // Eur Radiol. 2004. - Vol.14, Suppl 3. -P.E84-102.
429. Ribeiro PC, Pile E, Queiroz MM, Norberg AN, Tenorio JR. Cryptosporidiosis occurrence in HIV+ patients attended in a hospital // Brazil Rev Saude Publica. 2004. - Vol.38, N 3. - P.469-470.
430. Richardson AJ, Frankenberg RA, Buck AC et al. An outbreak of waterborne cryptosporidiosis in Swindon and Oxfordshire // Epidemiol Infect. 1991. -Vol.107, N3.-P.485-495.
431. Riggs MW. Recent advances in cryptosporidiosis: the immune response // Microbes Infect. 2002. - Vol. 4, N 10. - P.l067-1080.
432. Rigo CR, Franco RM. Comparison between the modified Ziehl-Neelsen and Acid-Fast-Trichrome methods for fecal screening of Cryptosporidium parvum and Isospora belli // Rev Soc Bras Med Trop. 2002. - Vol.35, N 3. - P.209-214.
433. Rimhanen-Finne R, Horman A, Ronkainen P, Hanninen ML An IC-PCR method for detection of Cryptosporidium and Giardia in natural surface wa-ters in Finland // J Microbiol Methods. 2002. -Vol. 50. - P. 299-303.
434. Ritter, G. D., D. H. Ley, M. Levy, J. Guy, and H. J. Barnes. Intestinal cryptosporidiosis and reovirus isolation from bobwhite quail (Colinus virginianus) with enteritis // Avian Dis. 1986. - Vol. 30. - P.603-608.
435. Robertson B, Sinclair MI, Forbes AB, Veitch M, Kirk M, Cunliffe D, Willis J, Fairley CK Case-control studies of sporadic cryptosporidiosis in Mel-bourne and Adelaide, Australia // Epidemiol Infect. 2002. - Vol. 128. - P. 419-431.
436. Robertson LJ, Gjerde B. Isolation and enumeration of Giardia cysts, Cryptosporidium oocysts, and Ascaris eggs from fruits and vegetables // J Food Prot. 2000. - Vol.63, N 6. - P.775-778.
437. Robertson LJ, Gjerde B. Occurrence of Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts in raw waters in Norway // Scand J Public Health. 2001. - Vol.29, N 3. -P.200-207.
438. Robertson LJ, Gjerde В Occurrence of parasites on fruits and vege-tables in Norway // J Food Prot. 2001. - Vol. 64. - P. 1793-1798.
439. Robertson LJ, Johannessen GS, Gjerde BK, Loncarevic S. Microbiological analysis of seed sprouts in Norway // Int J Food Microbiol. 2002. — Vol.75, N 1/2.-P.l 19-126.
440. Robinson P, Okhuysen PC, Chappell CL et al. Substance P expression correlates with severity of diarrhea in cryptosporidiosis // J Infect Dis. 2003. — Vol.188, N 2.-P.290-296.
441. Rondanelli EG, Scaglia M. Atlas of Human Protozoa. Masson, Milan, Paris and Bonn, 1993.
442. Rosales MJ, Cordon GP, Moreno MS, Sanchez CM. Extracellular like-gregarine stages of Cryptosporidium parvum // Acta Trop. 2005. - Vol.95, N 1. -P.74-78.
443. Rosenblatt JE, Sloan LM. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Cryptosporidium spp. in stool specimens // J Clin Microbiol. 1993. — Vol.31,N 6. - P. 1468-1471.
444. Rossi P, Rivasi F, Codeluppi M et al. Gastric involvement in AIDS associated cryptosporidiosis // Gut. 1998. - Vol.43, N 4. - P.476-477.
445. Rossignol JF, Hidalgo H, Feregrino M et al. A double-blind placebo-controlled study of nitazoxanide in the treatment of cryptosporidial diarrhoea in AIDS patients in Mexico // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1998. - Vol. 92. - P. 663-666.
446. Rossignol JF, Ayoub A, Ayers MS. Treatment of diarrhea caused by Cryptosporidium parvum: a prospective randomized, double-blind, placebocontrolled study of nitazoxanide // J. Infect. Dis. 2001. - Vol. 184. - P. 103-106.
447. Rossignol JF. Nitazoxanide in the treatment of acquired immune deficiency syndrome-related cryptosporidiosis: results of the United States compassionate useprogram in 365 patients // Aliment Pharmacol Ther. 2006. - Vol.24, N 5. -P.887-894.
448. Roy SL, DeLong SM, Stenzel SA et al. Risk factors for sporadic cryptosporidiosis among immunocompetent persons in the United States from 1999-2001 // J Clin Microbiol. 2004. - Vol. 42. - P. 2944-2951.
449. Ryan, U. M., L. Xiao, C. Read, I. M. Sulaiman, P. Monis, A. A. Lai, R. Fayer, and I. Pavlasek. A redescription of Cryptosporidium galli Pavlasek, 1999 (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) from birds // J. Parasitol. 2003a. - Vol. 89. -P.809-813.
450. Ryan UM, Samarasinghe B, Read С et al. Identification of a novel Cryptosporidium genotype in pigs // Appl Environ Microbiol. — 2003b. Vol.69, N 7. - P.3970-3974.
451. Ryan U, Xiao L, Read С et al. Identification of novel Cryptosporidium genotypes from the Czech Republic // Appl Environ Microbiol. 2003c. — Vol. 69. -P. 4302-4307.
452. Ryan UM, Monis P, Enemark HL et al. Cryptosporidium suis n. sp. (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) in pigs (Sus scrofa) // J Parasitol. 2004. — Vol.90, N 4.-P.769-773.
453. Saez-Llorens X, Odio CM, Umana MA, Morales MV. Spiramycin vs. placebo for treatment of acute diarrhea caused by Cryptosporidium // Pediatr. Infect. Dis. J. 1989. - Vol. 8. - P. 136-140.
454. Saksirisampant W, Eampokalap B, Rattanasrithong M et al. A prevalence of Cryptosporidium infections among Thai HIV-infected patients // J Med Assoc Thai. 2002. - Vol.85, Suppl 1. - P. S424-428.
455. Saltzberg DM, Kotloff KL, Newman JL, Fastiggi R. Cryptosporidium infection in acquired immunodeficiency syndrome: not always a poor prognosis // J Clin Gastroenterol. 1991. - Vol.13, N 1. -P.94-97.
456. Samson VE, Brown WR. Pneumatosis cystoides intestinalis in AIDS-associated cryptosporidiosis. More than an incidental finding? // J Clin Gastroenterol. 1996. - Vol.22, N 4. - P.311-312.
457. Sanad MM, Al-Malki JS. Cryptosporidiosis among immunocompromised patients in Saudi Arabia // J Egypt Soc Parasitol. 2007. - Vol.37, N 2, Suppl. -P.765-774.
458. Sanchez-Mejorada G, Ponce-de-Leon S. Clinical patterns of diarrhea in AIDS: etiology and prognosis // Rev Invest Clin. 1994. - Vol.46, N 3. - P. 187196.
459. Sandhu SK, Priest JW, Lammie PJ et al. The natural history of antibody responses to Cryptosporidium parasites in men at high risk of HIV infection // J Infect Dis. 2006. - Vol.194, N 10. - P.1428-1437.
460. Sarfati C, Bourgeois A, Menotti J et al. Prevalence of intestinal parasites including microsporidia in human immunodeficiency virus-infected adults in Cameroon: a cross-sectional study // Am J Trop Med Hyg. 2006. - Vol.74, N 1. — P.162-164.
461. Satoh, M., K. Hikosaka, T. Sasaki, Y. Suyama, T. Yanai, M. Ohta, and Y. Nakai. 2003. Characteristics of a novel type of bovine Cryptosporidium andersoni // Appl. Environ. Microbiol. 2003. - Vol. 69. - P.691-692.
462. Shigematsu M, Nagano Y, Millar ВС et al. Molecular detection and identification of Cryptosporidium species in lettuce employing nested small-subunit rRNA PCR and direct automated sequencing // Br J Biomed Sci. 2007. — Vol.64, N3.-P.133-135.
463. Sidhu S, Flamm S, Chopra S. Pneumatosis cystoides intestinalis: an incidental finding in a patient with AIDS and cryptosporidial diarrhea // Am J Gastroenterol. 1994. - Vol.89, N 9. - P. 1578-1579.
464. Singh HR, Singh NG, Singh ТВ. Estimation of CD4+ and CD8+ T-lymphocytes in human immunodeficiency virus infection and acquired immunodeficiency syndrome patients in Manipur // Indian J Med Microbiol. -2007. Vol.25, N 2. - P. 126-132.
465. Slavin, D. 1955. Cryptosporidium meleagridis (sp. nov.) // J. Сотр. Pathol. -1955. Vol. 65. -P.262-270.
466. Slifko TR, Smith HV, Rose JB (2000). Emerging parasite zoonoses associated with water and food // Int J Parasitol. 2000. - Vol. 30. - P. 1379-1393.
467. Smerdon WJ, Nichols T, Chalmers RM et al. Foot and mouth disease in livestock and reduced cryptosporidiosis in humans, England and Wales // Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9, N 1. - P. 22-28.
468. Smith H, Nichols RA. Zoonotic protozoa food for thought // Parassitologia. -2006.-Vol.48, N 1/2.-P. 101-104.
469. Smith HV, Corcoran GD. New drugs and treatment for cryptosporidiosis // Curr Opin Infect Dis. 2004. - Vol.17, N 6. - P.557-564.
470. Smith HV, Nichols RA, Grimason AM. Cryptosporidium excystation and invasion: getting to the guts of the matter // Trends Parasitol. 2005. - Vol.21, N 3. -P.133-142.
471. Smith HV, Caccio SM, Tait A et al. Tools for investigating the environmental transmission of Cryptosporidium and Giardia infections in humans // Trends Parasitol. 2006. - Vol.22, N 4. - P. 160-167.
472. Smith KE, Stenzel SA, Bender JB et al. Outbreaks of enteric infections caused by multiple pathogens associated with calves at a farm day camp // Pediatr Infect Dis J. 2004. - Vol.23, N 12. - P. 1098-1104.
473. Smith NH, Cron S, Valdez LM, Chappell CL, White AC Jr. Combination drug therapy for cryptosporidiosis in AIDS // J Infect Dis. 1998. - Vol.178, N 3. -P.900-903.
474. Sopwith W, Osborn K, Chalmers R, Regan M. The changing epidemiology of cryptosporidiosis in North West England // Epidemiol. Infect. 2005. - Vol. 133.-P. 785-793.
475. Sorvillo F, Beall G, Turner PA, Beer VL, Kovacs AA, Kraus P, Masters D, Kerndt PR. Seasonality and factors associated with cryptosporidiosis among individuals with HIV infection // Epidemiol Infect. 1998. - Vol.121, N 1. -P. 197-204.
476. Sorvillo FJ, Lieb LE, Kerndt PR, Ash LR. Epidemiology of cryptosporidiosis among persons with acquired immunodeficiency syndrome in Los Angeles County // Am J Trop Med Hyg. 1994. - Vol.51, N 3. - P.326-331.
477. Spano F, Putignani L, Crisanti A et al. Multilocus genotypic analysis of Cryptosporidium parvum isolates from different hosts and geographical origins // J Clin Microbiol. 1998b. - Vol.36, N 11. - P.3255-3259.
478. Sreter, Т., and I. Varga. Cryptosporidiosis in birds—a review // Vet. Parasitol. -2000. Vol. 87.- P.261-279.
479. Sreter, Т., Z. Egyed, Z. Szell, G. Kovacs, M. Nikolausz, K. Marialigeti, and I. Varga. Morphologic, host specificity, and genetic characterization of a European Cryptosporidium andersoni isolate // J. Parasitol. 2000. - Vol.86. - P.1244-1249.
480. Stantic-Pavlinic, M., L. Xiao, S. Glaberman, A. A. Lai, T. Orazen, A. Rataj-Verglez, J. Logar, and I. Berce. Cryptosporidiosis associated with animal contacts // Wien. Klin. Wochenschr. 2003. - Vol. 115. - P.l25-127.
481. Striepen B, Pruijssers AJ, Huang J et al. Gene transfer in the evolution of parasite nucleotide biosynthesis // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2001. - Vol. 101, P. 3154-3159.
482. Sulaiman, I. M., X. L., C. Yang, L. Escalante, A. Moore, С. B. Beard, M. J. Arrowood, and A. A. Lai. Differentiating human from animal isolates of Cryptosporidium parvum // Emerg. Infect. Dis. 1998. - Vol. 4. - P.681-685.
483. Sulaiman, I. M., A. A. Lai, M. J. Arrowood, and L. Xiao. Biallelic polymorphism in the intron region of beta-tubulin gene of Cryptosporidium parasites //J. Parasitol. 1999. - Vol. 85. - P. 154-157.
484. Sulaiman, I. M., U. M. Morgan, R. C. Thompson, A. A. Lai, and L. Xiao.2000. Phylogenetic relationships of Cryptosporidium parasites based on the 70-kilodalton heat shock protein (HSP70) gene // Appl. Environ. Microbiol. 2000. -Vol.66.-P. 2385-2391.
485. Sulaiman, I. M., A. A. Lai, and L. Xiao. A population genetic study of the Cryptosporidium parvum human genotype parasites // J. Eukaryot. Microbiol.2001. Suppl. — P.24S-27S.
486. Sulaiman, I. M., A. A. Lai, and L. Xiao. Molecular phylogeny and evolutionary relationships of Cryptosporidium parasites at the actin locus // J. Parasitol. 2002. - Vol. 88. - P.388-394.
487. Sulaiman IM, Hira PR, Zhou L et al. Unique endemicity of cryptosporidiosis in children in Kuwait // J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol. 43, N 6. - P. 2805-2809.
488. Sunnotel O, Lowery CJ, Moore JE, Dooley JS, Xiao L, Millar ВС, Rooney PJ, Snelling WJ. Cryptosporidium // Lett Appl Microbiol. 2006. - Vol.43, N 1. -P.7-16.
489. Tadesse A, Kassu A. Intestinal parasite isolates in AIDS patients with chronic diarrhea in Gondar Teaching Hospital, North west Ethiopia // Ethiop Med J. 2005. - Vol.43, N 2. - P.93-96.
490. Takacs J, Amirkhanian YA, Kelly JA, Kirsanova AV, Khoursine RA, Mocsonaki L. "Condoms are reliable but I am not": A qualitative analysis of AIDS-related beliefs and attitudes of young heterosexual adults in Budapest,
491. Hungary, and St. Petersburg, Russia // Cent Eur J Public Health. 2006. - Vol.14, N 2. - P.59-66.
492. Talens A, Montoya E, Cubells ML et al. Acute pancreatitis and acquired immunodeficiency syndrome // Rev Esp Enferm Dig. 1996. - Vol.88, N 2. -P.155-159.
493. Tangermann, R. H., S. Gordon, P. Wiesner, and L. Kreckman. 1991. An outbreak of cryptosporidiosis in a day-care center in Georgia // Am. J. Epidemiol. 1991.-Vol. 133. -P.471-476.
494. Tanriverdi S, Tanyeli A, Ba§lami§li F et al. Detection and genotyping of oocysts of Cryptosporidium parvum by real-time PCR and melting curve analysis // J Clin Microbiol. 2002. - Vol.40, N 9. - P.3237-3244.
495. Teunis P.F.M. MedemaM G.J.; Kruidenier L.; HavelaarM A.H. Assessment of the risk of infection by Cryptosporidium or Giardia in drinking water from a surface water source // Water Res. 1997. - Vol. 31, N 6. - P. 1333-1346.
496. Teunis PF, Chappell CL, Okhuysen PC. Cryptosporidium dose response studies: variation between isolates // Risk Anal. 2002. - Vol.22, N 1. - P. 175183.
497. Thomas AG, Phillips AD, Walker-Smith JA. Cryptosporidiosis in England and Wales: prevalence and clinical and epidemiological features. Public Health Laboratory Service Study Group // Br. Med. J. 1990. - Vol. 300, N 7. - P.774-777.
498. Thompson, RC A Presidential address: rediscovering parasites using molecular tools- towards revising the taxonomy of Echinococcus, Giardia and Cryptosporidium // Int J Parasitol. 2002. - Vol. 32. - P. 493-496.
499. Thompson RC, Olson ME, Zhu G, Enomoto S, Abrahamsen MS, Hijjawi NS. Cryptosporidium and cryptosporidiosis // Adv. Parasitol. 2005. - Vol. 59, N l.-P. 77-158.
500. Tiangtip, R., and S. Jongwutiwes. 2002. Molecular analysis of Cryptosporidium species isolated from HIV-infected patients in Thailand // Trop. Med. Int. Health. 2002. - Vol. 7. - P.357-364.
501. Tilley, M., S. J. Upton, and P. S. Freed. A comparative study of the biology of Cryptosporidium serpentis and Cryptosporidium parvum (Apicomplexa: Cryptosporidiidae // J. Zoo Wildl. Med. 1990. - Vol. 21. - P.463-467.
502. Tilley, M., and S. J. Upton. Electrophoretic characterization of Cryptosporidium parvum (KSU-1 isolate) (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) // Can. J. Zool.- 1990.-Vol. 68. P.l 513-1519.
503. Tilley, M., S. J. Upton, B. L. Blagburn, and В. C. Anderson. Identification of outer oocyst wall proteins of three Cryptosporidium (Apicomplexa: • Cryptosporidiidae) species by 1251 surface labeling // Infect. Immun. 1990. — Vol. 58. — P.252-253.
504. Tilley, M., S. J. Upton, and С. E. Chrisp. A comparative study on the biology of Cryptosporidium sp. from guinea pigs and Cryptosporidium parvum (Apicomplexa) // Can. J. Microbiol. 1991. - Vol. 37. - P.949-952.
505. Tilley, M., and S. J. Upton. Sporozoites and merozoites of Cryptosporidium parvum share a common epitope recognized by a monoclonal antibody and two-dimensional electrophoresi // J. Protozool. 1991. - Vol. 38. - P.48S-49S.
506. Torres, J., M. Gracenea, M. S. Gomez, A. Arrizabalaga, and O. Gonzalez-Moreno. The occurrence of Cryptosporidium parvum and C. muris in wild rodents and insectivores in Spain // Vet. Parasitol. 2000. - Vol. 92. - P.253-260.
507. Triffitt, M. J. Observations on two new species of coccidia parasitic in snakes // Protozoology. 1925. - N 1. - P. 19-26.
508. Tumwine JK, Kekitiinwa A, Nabukeera N et al. Cryptosporidium parvum in children with diarrhea in Mulago Hospital, Kampala, Uganda // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2003. - Vol. 68, N 6. - P.710-715.
509. Tyzzer, E. A sporozoon found in the peptic glands of the common mouse // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1907. - N 5. - P. 12-13.
510. Tyzzer, E. An extracelluar coccidium, Cryptosporidium muris (gen. & sp. nov.), of the gastric glands of the common mouse // J. Med. Res. 1910. - Vol. 18. — P.487-509.
511. Tyzzer, E. Cryptosporidium parvum (sp. nov.), a coccidium found in the small intestine of the common mouse // Arch. Protisenkd. 1912. - Vol. 26. — P.394-412.
512. Tzipori, S., K. W. Angus, E. W. Gray, I. Campbell, and F. Allan. Diarrhea in lambs experimentally infected with Cryptosporidium isolated from calves // Am. J. Vet. Res. 1981. - Vol.42. - P. 1400-1404.
513. Tzipori, S., J. K. Griffiths. Natural history and biology of Cryptosporidium parvum // Adv. Parasitol. 1998. - Vol. 40, N 1. - P.5-36.
514. Tzipori S, Widmer G. A hundred-year retrospective on cryptosporidiosis // Trends Parasitol. 2008. - Vol.24, N 4. - P. 184-189.
515. Umejiego NN, Li C, Riera T, Hedstrom L, Striepen B. Cryptosporidium parvum IMP dehydrogenase: identification of functional, structural, and dynamic roperties that can be exploited for drug design // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. -P. 40320^40327.
516. Ungar BL, Soave R, Fayer R, Nash ТЕ. Enzyme immunoassay detection of immunoglobulin M and G antibodies to Cryptosporidium in immunocompetent and immunocompromised persons // J Infect Dis. 1986 Mar. — Vol.153, N 3. — P.570-578.
517. Ungar BL, Gilman RH, Lanata CF, Peres-Schael I. Seroepidemiology of Cryptosporidium infection in two Latin American populations // J Infect Dis. -1988. Vol.157, N 3. - P.551-556.
518. Ungar BL, Mulligan M, Nutman ТВ. Serologic evidence of Cryptosporidium infection in US volunteers before and during Peace Corps service in Africa//Arch Intern Med. 1989.-Vol.149.-P.894-897.
519. Upton, S. In vitro cultivation // Cryptosporidium and cryptosporidiosis / R. Fayer, (ed.). CRC Press, Boca Raton, Florida, 1997. - P. 181-201.
520. Upton, S. J., and W. L. Current. The species of Cryptosporidium (Apicomplexa: Cryptosporidiidae) infecting mammals // J. Parasitol. 1985. -Vol.71.-P. 625-629.
521. Upton, S. J., Barnard S. M. Two new species of coccidia (Apicomplexa: Eimeriidae) from Madagascar Gekkonids // J. Protozool. — 1987. -Vol. 34. — P.452-454.
522. Upton, S. J., С. T. McAllister, P. S. Freed, and S. M. Barnard. 1989. Cryptosporidium spp. in wild and captive reptiles // J. Wildl. Dis. 1989. - Vol. 25. -P.20-30.
523. Upton, S. J. Suborder Eimeriorina Leger, 1911 // J. J. Lee, G. F. Leedale, and P. Bradbury (ed.), The illustrated guide to the protozoa, 2nd ed. Society of Protozoologists Allen Press, Lawrence, Kans, 2000. - P.318-339.
524. Vajpayee, M., S. Kanswal, P. Seth, and N. Wig. Spectrum of opportunistic infections and profile of CD4 counts among AIDS patients in north India // Infection. 2003. - Vol. 31, N 5. - P. 336-340.
525. Vakil NB, Schwartz SM, Buggy BP et al. Biliary cryptosporidiosis in HIV-infected people after the waterborne outbreak of cryptosporidiosis in Milwaukee // N Engl J Med. 1996. - Vol.334, N 1. - P. 19-23.
526. Velasco M, Pintor E, Piret MV et al. Diarrhea caused by Cryptosporidium as the initial manifestation of AIDS in an elderly man // Enferm Infecc Microbiol Clin.- 1997. Vol.15, N 9. - P. 495-496.
527. Ventura G, Cauda R, Larocca LM et al. Gastric cryptosporidiosis complicating HIV infection: case report and review of the literature // Eur J Gastroenterol Hepatol. 1997. - Vol.9, N 3. - P. 307-310.
528. Vetterling, J. M., A. Takeuchi, and P. A. Madden Ultrastructure of Cryptosporidium wrairi from the guinea pig // J. Protozool. 1971. — Vol.18. -P.248-260.
529. Vetterling, J. M., H. R. Jervis, T. G. Merrill, and H. Sprinz Cryptosporidium wrairi sp. n. from the guinea pig Cavia porcellus, with an emendation of the genus //J. Protozool. 1971. - Vol. 18. -P.243-247.
530. Ward PI, Deplazes P, Regli W et al. Detection of eight Cryptosporidium genotypes in surface and waste waters in Europe // Parasitology. — 2002. Vol 124.-P. 359-368.
531. Weber R, Bryan RT, Bishop HS et al. Threshold of detection of Cryptosporidium oocysts in human stool specimens: evidence for low sensitivity of current diagnostic methods // J Clin Microbiol. 1991. - Vol.29, N 7. - P. 13231327.
532. Webster KA, Smith HV, Giles M et al. Detection of Cryptosporidium parvum oocysts in faeces: comparison of conventional coproscopical methods and the polymerase chain reaction // Vet Parasitol. 1996. - Vol. 61, N 1/2. - P. 5-13.
533. Weinstein, P., M. Macaitis, C. Walker, and S. Cameron Cryptosporidial diarrhoea in South Australia. An exploratory case-control study of risk factors for transmission // Med. J. Aust. 1993. - Vol. 158. - P. 117-119.
534. Wetzel, R. Ein neues Coccid (Cryptosporidium vulpis sp. nov.) aus dem Rotfuchs // Arch. Wissenschaft. Prak. Tier. 1938. - Vol.74. - P.:39-40.
535. White AC, Chappell CL, Hayat CS et a. Paromomycin for cryptosporidiosis in AIDS: a prospective, double-blind trial // J. Infect. Dis. 1994. - Vol.170. - P. 419-424.
536. White AC, Robinson P, Okhuysen PC et al. Interferon-gamma expression in jejunal biopsies in experimental human cryptosporidiosis correlates with prior sensitization and control of oocyst excretion // J Infect Dis. — 2000. — Vol.181, N 2. -P. 701-709.
537. White С A Nitazoxanide: a new broad spectrum antiparasitic agent // Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2004. - Vol. 2, N 1. - P. 43-49.
538. Widmer, G., L. Tchack, F. Spano, and S. Tzipori. A Study of Cryptosporidium parvum genotypes and population structure // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 1998a. - Vol. 93. - P.685-686.
539. Widmer, G. Genetic heterogeneity and PCR detection of Cryptosporidium parvum // Adv. Parasitol. 1998. - Vol. 40. - P.223-239.
540. Widmer, G., L. Tchack, C. L. Chappell, and S. Tzipori. Sequence polymorphism in the beta-tubulin gene reveals heterogeneous and variable population structures in Cryptosporidium parvum // Appl. Environ. Microbiol. -1998b.-Vol. 64. P.4477-4481.
541. Widmer G, Orbacz EA, Tzipori S. beta-tubulin mRNA as a marker of Cryptosporidium parvum oocyst viability // Appl Environ Microbiol. 1999. — Vol.65, N 4.-P.1584-1588.
542. Widmer G, Feng X, Tanriverdi S. Genotyping of Cryptosporidium parvum with microsatellite markers // Methods Mol Biol. 2004. - Vol.268. - P.l77-87.
543. Wielinga PR, de Vries A, van der Goot TH, Mank T, Mars MH, Kortbeek LM, van der Giessen JW. Molecular epidemiology of Cryptosporidium in humans and cattle in The Netherlands // Int J Parasitol. 2008. - Vol.38, N 7. - P.809-817.
544. Wiesner J, Seeber F. The plastid-derived organelle of protozoan human parasites as a target of established and emerging drugs // Expert Opin. Ther. Targets. 2005. - Vol. 9. - P. 23-44.
545. Wildman, D. E. A map of the common chimpanzee genome // Bioessays. -2002. Vol. 24. - P.490-493.
546. Wiwanitkit V, Srisupanant M. Cryptosporidiosis occurrence in anti-HIV-seropositive patients attending a sexually transmitted diseases clinic // Thailand. Trop Doct. 2006. - Vol.36, N 1. - P.64.
547. Xiao L, Sulaiman I, Fayer R, Lai AA. Species and strain-specific typing of Cryptosporidium parasites in clinical and environmental samples // Mem Inst Oswaldo Cruz. 1998. - Vol.93, N 5. - P.687-91.
548. Xiao L, Lai RB, Lai AA. Effect of immune activation induced by Cryptosporidium parvum whole antigen on in vitro human immunodeficiency virus type 1 infection // J Infect Dis. 1999. - Vol.180, N 2. - P.559-563.
549. Xiao L, Morgan UM, Limor J et al. Genetic diversity within Cryptosporidium parvum and related Cryptosporidium species // Appl Environ Microbiol. 1999a. - Vol.65, N 8. - P.3386-3391.
550. Xiao L, Escalante L, Yang C, Sulaiman I, Escalante AA, Montali RJ, Fayer R, Lai AA. Phylogenetic analysis of Cryptosporidium parasites based on the small-subunit rRNA gene locus // Appl Environ Microbiol. 1999b. - Vol.65, N 4. -P.1578-1583.
551. Xiao, L., J. R. Limor, L. Li, U. Morgan, R. C. Thompson, and A. A. Lai. Presence of heterogeneous copies of the small subunit rRNA gene in
552. Cryptosporidium parvum human and marsupial genotypes and Cryptosporidium felis // J. Eukaryot. Microbiol. 1999c. - Vol. 46. -P. 44S-45S.
553. Xiao, L., U. M. Morgan, R. Fayer, R. C. Thompson, and A. A. Lai. Cryptosporidium systematics and implications for public health // Parasitol. Today. -2000a.-Vol. 16. -P.287-292.
554. Xiao L, Alderisio K, Limor J, Royer M, Lai AA Identification of species and sources of Cryptosporidium oocysts in storm waters with a small-subunit rRNA-based diagnostic and genotyping tool // Appl Environ Microbiol. 2000b. - Vol. 66.-P. 5492-5498.
555. Xiao L, Bern C, Limor J, Sulaiman I, Roberts J, Checkley W, Cabrera L, Gilman RH, Lai AA. Identification of 5 types of Cryptosporidium parasites in children in Lima, Peru // J Infect Dis. 2001a. - Vol.183, N 3. - P.492-497.
556. Xiao L, Singh A, Limor J et al. Molecular characterization of Cryptosporidium oocysts in samples of raw surface water and wastewater // Appl Environ Microbiol.-2001b.-Vol. 67.-P. 1097-1101.
557. Xiao L, Bern C, Arrowood M, Sulaiman I, Zhou L, Kawai V, Vivar A, Lai AA, Gilman RH. Identification of the Cryptosporidium pig genotype in a human patient // J Infect Dis. 2002b. - Vol. 185, N 12. - P. 1846-1848.
558. Xiao L, Ryan UM. Cryptosporidiosis: an update in molecular epidemiology // Curr Opin Infect Dis. 2004. - Vol.17, N 5. - P.483-490.
559. Xiao L, Fayer R, Ryan U, Upton SJ Cryptosporidium taxonomy: recent advances and implications for public health // Crit Rev Microbiol. — 2004a. Vol. 17, N 1. — P. 72-97.
560. Xiao L, Lai AA, Jiang J. Detection and differentiation of Cryptosporidium oocysts in water by PCR-RFLP // Methods Mol Biol. 2004. - Vol.268. - P. 163176.
561. Xiao L, Ryan UM, Graczyk TK et al. Genetic diversity of Cryptosporidium spp. in captive reptiles // Appl Environ Microbiol. 2004b. - Vol.70, N 2. - P.891-899.
562. Xiao, L., C. Bern, I. M. Sulaiman, A. A. Lai. Molecular epidemiology of human cryptosporidiosis // R. C. A. Thompson (ed.), Cryptosporidium: from molecules to disease. Elsevier, Amsterdam, The Netherlands, 2004c. - P. 227262.
563. Xiao L, Feng Y. Zoonotic cryptosporidiosis // FEMS Immunol Med Microbiol. 2008. - Vol.52, N 3. - P.309-323.
564. Xu P, Widmer G, Wang Y et al. The genome of Cryptosporidium hominis Nature .- 2004. Vol. 431. - P. 1107-1112.
565. Yagita, K., S. Izumiyama, H. Tachibana et al. Molecular characterization of Cryptosporidium isolates obtained from human and bovine infections in Japan // Parasitol. Res. 2001. - Vol. 87. - P.950-955.
566. Yoshida H, Matsuo M, Miyoshi T et al. An outbreak of cryptosporidiosis suspected to be related to contaminated food, October 2006, Sakai City, Japan. Jpn // J Infect Dis. 2007. - Vol.60, N 6. - P. 405-407.
567. Zannou DM, Kinde-Gazard D, Vigan J et al. Clinical and immunological profile of HIV infected patients in Cotonou, Benin // Med Mai Infect. 2004. -Vol.34, N5. - P.225-228.
568. Zar F, Geiseler PJ, Brown VA. Asymptomatic carriage of Cryptosporidium in the stool of a patient with acquired immunodeficiency syndrome // J Infect Dis. 1985.-Vol.151 N1. -P.195.
569. Zar FA. Asymptomatic carrier state foj* Cryptosporidium // Am J Med. -1990 . Vol.89, N 4. -P. 545-546.
570. Zardi EM, Picardi A, Afeltra A. Treatment of cryptosporidiosis in immunocompromised hosts // Chemotherapy. 2005. - Vol.51, N 4. - P. 193-196.
571. Zhou L, Singh A, Jiang J, Xiao L Molecular surveillance of Cryptosporidium spp. in raw wastewater in Milwaukee: implications for understanding outbreak occurrence and transmission dynamics // J Clin Microbiol. 2003. — Vol. 41.-P. 5254-5257.
572. Zu SX, Li JF, Barrett LJ et al. Seroepidemiologic study of Cryptosporidium infection in children from rural communities of Anhui, China and Fortaleza, Brazil // Am J Trop Med Hyg. 1994. - Vol.51, N 1. - P. 1 -10.