Автореферат и диссертация по медицине (14.01.22) на тему:Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лазатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом

ДИССЕРТАЦИЯ
Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лазатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лазатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом - тема автореферата по медицине
Кукушкина, Елена Владимировна Волгоград 2010 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.01.22
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лазатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом

004616009

КУКУШКИНА Елена Владимировна

КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЭНЗИМОВ ГУАНИЛОВОЙ ВЕТВИ ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА В ЛИЗАТАХ ЛИМФОЦИТОВ, ЭРИТРОЦИТОВ И ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

14.01.22 - ревматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- С .ПЕН 2010

Волгоград - 2010

004616009

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук «НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН» и ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, Центре реабилитации Управления делами Президента РФ

Научный руководитель: член-корреспондент РАМН, доктор

медицинских наук, профессор РОМАНОВ Александр Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Куличежо Людмила Леонидовна Волгоградский государственный медицинский университет

доктор медицинских наук Александров Андрей Вячеславович НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия»

Защита состоится "_" _2010 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.02 в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ.

Автореферат разослан " ___ "_2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.008.02 доктор медицинских наук, профессор

АР. Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Болезни костно-мышечной системы, типичным представителем которых является ревматоидный артрит (РА), составляют до 15% всех хронических заболеваний, регистрируемых в России. Причем, за последние 10 лет отмечается рост числа заболеваний опорно-двигательного аппарата на 40% (Н.В. Чичасова и др., 2004; Е.Л. Насонов и др., 2005). РА занимает особое место среди других ревматических болезней суставов, и, хотя его распространенность (от 0,5 до 1,5%) относительно небольшая, он считается одним из самых тяжелых заболеваний суставов. Медико-социальная значимость РА обусловлена ею неуклонно прогрессирующим течением, быстро приводящим к нарушению функций суставов, их анкилозированию, значительному ухудшению качества жизни, длительной и стойкой потере трудоспособности, ранней инвалидизации, выраженными экономическими затратами на лечение как со стороны государства, так и самих больных, сокращением продолжительности жизни на 5-10 лет, что делает борьбу с РА актуальной медико-социальной проблемой.

Борьба с РА осложняется неясностью многих аспектов этиопатоге-неза заболевания. Нередко возникают сложности в распознавании активности ревматоидного процесса даже у больных с достоверным диагнозом РА, часто приобретающего хроническое, субклиническое течение с нормальными параклиническими показателями, что приводит к несвоевременной и неадекватной терапии. Нередко затруднительной бывает и дифференциальная диагностика РА с другими заболеваниями суставов, протекающими атипично: остеоартроз (ОА), подагра и др., что делает эту проблему достаточно актуальной.

Участие иммунных механизмов в патогенезе РА не вызывает сомнений (Е.Л. Насонов, 2009), но, в то же время, используемые в лечении больных РА различные иммуномодуляторы часто не достигают желаемого эффекта. Не исключено, что это может быть связано с тем, что иммунные нарушения являются не единственным патогенетическим механизмом РА, или иммунные дефекты являются не первопричиной, а следствием каких-то других процессов, инициирующих иммунную дисрегуляцию.

В основе нарушений регуляции иммунных процессов лежат функциональные расстройства иммунокомпетентных клеток — лимфоцитов, метаболизм которых при РА изучен недостаточно. В то же время хорошо известно, что некоторые пуриновые метаболиты (гуанозин, аденозин) играют важную роль в метаболизме лимфоцитов, их созревании, пролиферации, дифференциации, и, следовательно, могут иметь прямое отношение к иммунорегуляторным процессам (Р.Т. Тогузов и др., 1986; Ю.В. Тихонов и др., 1997). Содержание пуриновых нуклеозидов в лимфоцитах регулируется соответствующими ферментами, и по их активности можног

судить о концентрации пуриновых метаболитов в клетках. Поэтому изучение активности энзимов пуринового метаболизма (ПМ), влияющих на функции лимфоцитов, представляется нам актуальным и перспективным направлением, способствующим пониманию отдельных звеньев патогенеза РА с иммуно-биохимических позиций. Кроме того, ферменты являются весьма чувствительными индикаторами воспалительных процессов, имеющих место при заболеваниях суставов. Исходя из этош, в нашей работе были изучены активности четырех энзимов гуаниловой ветви ПМ: гуаншщезаминазы (ГДА), гуанозиндезаминазы (ГЗДА), пуриннуклеозид-фосфорилазы (ПНФ) и гуанозинфосфорилазы (ГФ) в трех биологических средах: лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови. Выбор этих ферментов обусловлен их важной ролью в метаболизме пуринов.

Цель исследования. Повышение качества диагностики активности ревматоидного процесса, выявление особенностей ферментов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных РА с патогенетических позиций и в сравнительном аспекте с больными ОА и подагрой, изучение возможности использования показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ для оценки эффективности проводимой терапии больных РА.

Задачи исследования.

1. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови практически здоровых людей в зависимости от пола и возраста, установить референтные пределы активности энзимов, изучить корреляционные связи между активностью энзимов в различных биологических средах.

2. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах (лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови) у больных РА в процессе стационарного лечения: при поступлении, через 8-10 дней лечения, перед выпиской из стационара и оценить возможность использования энзимных показателей в объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных РА.

3. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах у больных РА в зависимости от степени активности патологического процесса, клинико-анатомических форм, характера течения, стадии поражений суставов, их функционального класса (ФК), наличия или отсутствия ревматоидного фактора (РФ).

4. Изучить корреляционные связи между активностью энзимов в различных биологических средах у больных РА с различной активностью патологического процесса.

5. Оценить информативность энзимных показателей крови в индикации минимальной активности ревматоидного процесса в сравнении с об-гцепршгятыми острофазовыми клинико-иммуно-биохимическими по-

казателями, используемыми для выявления активности процесса: СОЭ, СРБ, сиаловые кислоты, гамма-глобулины и др. 6. Изучить активность ГДА ГЗДА ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных контрольной группы: ОА и подагрой и провести сравнительные исследования энзимных показателей крови у больных РА с больными ОА и подагрой и отобрать наиболее информативные энзимные показатели, способствующие дифференциации этих трех заболеваний.

Научная новизна исследования. Впервые у больных РА в трех биологических средах: лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови были проведены исследования активности четырех ферментов 1уаниловой ветви ПМ: ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ и проведен анализ зависимости активности этих энзимов от степени активности процесса, характера течения, клшшко-анатомических форм, стадии поражения суставов, наличия РФ, ФК суставов и оценено влияние этих клинических факторов на своеобразие энзимного профиля крови. Доказано, что наибольшее влияние на энзимные показатели крови оказывает выраженность активности ревматоидного процесса. Показана более высокая чувствительность и информативность показателей активности ПНФ в эритроцитах, ГДА ПНФ и ГФ в лимфоцитах в отражении минимальной активности ревматоидного процесса, по сравнению с общепринятыми острофазовыми лабораторными показателями (СОЭ, СРБ и др.). Установлено, что отдельные энзимные показатели крови способствуют дифференциации РА ОА и подагры. Показано, что выявленные изменения активности энзимов в лимфоцитах способны вызвать нарушения функциональных свойств лимфоцитов и обусловить дискоординацию иммунных процессов при РА Установлено, что энзимные показатели крови в комплексе с клиническими данными способствуют объективизации контроля эффективности проводимой терапии больных РА.

Практическая значимость. Исследования активности ГДА ГЗДА ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальных проявлений активности патологическою процесса и назначению своевременной адекватной терапии, а также уточнению степени активности патологического процесса, характера течения заболевания и объективизации оценки эффективности проводимой терапии. Исследования активности вышеуказанных энзимов в трех биологических средах в комплексе с клиническими данными могут оказать существенную помощь при дифференциации РА ОА и подагры.

Внедрение в практику. Методы определения активности ГДА ГЗДА ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови с целью уточнения степени активности ревматоидного процесса и диффе-

ренциации PA, OA и подагры внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда. С результатами проведенных энзимных исследований, возможностями энзимной диагностики в ревматологии, их перспективой систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, аспиранты, клинические ординаторы, практические врачи на семинарах, научно-практических и клинических конференциях.

Основные положения, выносимые на защиту. Показатели активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальной активности ревматоидного процесса, уточнению степени активности, характера течения, объективизации оценки эффективности проводимой терапии, дифференциации PA, OA и пода гры.

Публикации и апробация работы. Основные положения диссертации опубликованы в 9 печатных работах. Материалы диссертации докладывались в 2008-2009 гг. на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета, НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 236 страницах текста (шрифт гарнитуры Times New Roman кегля 14 ггг с полуторным интерлиньяжем) и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологическом значении пуринового метаболизма и его отдельных ферментов; части II — собственных исследований, состоящей из 5 глав, включающих клиническую характеристику больных, методы исследований, результаты проведенных исследований, их обсуждение, выводы, практические рекомендации. Диссертация иллюстрирована 70 таблицами, 15 рисунками, 3 выписками из историй болезни. Библиографический указатель содержит 236 источников, из которых 97 отечественных и 139 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Под наблюдением в условиях стационара находились 114 больных, из которых 80 больных РА, 18 — OA и 16 больных подагрой. Среди больных РА было 57 (71,3%) женщин и 23 (28,7%) мужчины. Средний возраст больных РА — 42,5±0,9 лет, продолжительность заболевания — 8,5+0,3 лет. Диагностика РА осуществлялась в ходе всестороннего клинического обследования с использованием диагностических критериев Американской ревматологической ассоциации (АРА) (F. Arnett et al., 1988) и уточнялась в процессе лечения. Инструментальные (рентгенография, УЗИ,

ЭКГ), лабораторные (общий анализ крови, мочи, СОЭ, СРБ, РФ, сиаловые кислоты и др.) методы исследований использовались в качестве дополнительных. Степень активности ревматоидного процесса определялась в соответствии с диагностическими критериями АРА, рабочей классификацией, индексом DAS28 (В. А Насонова и др., 1997; J. Smolen et al., 2003), на основании которых I (минимальная) степень установлена у 16 (20%), II (умеренная) — у 50 (62,5%) и III (высокая) степень — у 14 (17,5%) больных. Медленно прогрессирующее течение (МПТ) определялось у 52 (65%) больных, быстро прогрессирующее течение (БПТ) — у 28 (35%) больных, серопозитивная форма — у 61 (76,3%), преимущественно суставная форма — у 53 (66,3%), внесуставные поражения — у 27 (33,8%) больных. У всех наблюдаемых больных РА определялись ограничения функциональных возможностей суставов: у 35 (43,8%) больных — ФК-2, у 38 (47,5%) — ФК-3 и у 7 (8,8%) — ФК-4. На основании рентгенологических исследований суставов (по Штейнброкеру) I стадия поражения суставов определялась у 8 (10%) больных, II стадия — у 41 (51,3%), 1П стадия — у 24 (30%) и IV стадия — у 7 (8,8%) больных. Из внесуставных поражений наиболее часто отмечалась патология мышц (31,3%), сердца (27,5%), желудочно-кишечного тракта (26,3%), легких (22,5%), почек (13,8%) и преобладали комбинированные поражения органов и тканей. Контрольная группа была представлена 30 практически здоровыми людьми (доноры станции переливания крови). Группы сравнения составили 18 больных OA и 16 больных подагрой. Среди больных OA были 5 (27,8%) мужчин и 13 (72,2%) женщин. Средний возраст больных OA — 52,6+0,85 лет, длительность заболевания — 9,67+0,43 лет. У всех больных отмечались явления синовита. Больные подагрой были представлены только мужчинами. Средний возраст — 46,2+1,05 лет, длительность болезни — 6,88+0,48 лет. Хроническая форма болезни наблюдалась у 9 (56,3%) больных, интермигтирующая (межприступная) — у 7 (43,7%) больных, легкое течение — у 6 (37,5%), средней тяжести — у 10 (62,5%) больных, тофусные отложения — у 7 (43,7%) больных. Явления артрита отмечались у всех больных подагрой.

Выделение лимфоцитов и эритроцитов из венозной крови проводилось по методу Böyum (1980) с использованием лимфосепа (Lympho separation mudium) фирмы "JCN Biomedical" с градиентом плотности 1,0771,079 г/мл. Количество клеток крови подсчитывалось под микроскопом. Лизаты клеток готовили путем замораживания, оттаивания, центрифугирования. Активность ГДА и ГЗДА определялась фенолшпохлоритным методом (W. Caraway, 1966), ГФ -— по приросту содержания гуанина (М. Yamada et al, 1989) и ПНФ — кинетическим методом (В. Robertson et al., 1973). Активность энзимов в лизатах клеток рассчитывалась в лимфоцитах на 1 мл, содержащий (до лизиса) 1><107 клеток, в эритроцитах —

1x109 клеток (для ГДА, ГЗДА и ГФ) и 1 *108 клеток (для ПНФ) и выражалась в имо ль/мин/мл.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием программных пакетов «БТАТШПКА 6.0». Для каждой исследуемой группы больных вычислялись следующие выборочные характеристики распределения: средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической (ш), среднее квадратическое отклонение (а), медиана, интерквар-тильный размах (25%-75%), что зависело от нормальности вариационных рядов, использовались параметрические и непараметрические методы. Для сравнения двух зависимых групп по одному признаку использовался не параметрический критерий Вилкоксона, двух независимых групп — критерий Манна-Уитни. Сравнение трех и более независимых групп проводилось по методу АЫОУА по Краскелу-Уолису. Анализ взаимосвязи признаков проводился с использованием метода Пирсона. Результаты считались достоверными при величинах достигнутого уровня значимости менее 0,05.

Для вычисления индекса ОА828(3) использовалась формула: 0,56 х х ^(ЧБС28) + 0,28 х (ЧПС28) + 0,7 х 1п(СОЭ) х 1,08 + 0,16.

Активность заболевания расценивается как низкая (ВАБ28 < 3,2), умеренная (ОАБ28 >3,2- < 5,1) и высокая (ОА828 > 5,1).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Существенных различий показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ у здоровых во всех трех биологических средах исследований в зависимости от пола и возраста не выявлено.

У больных РА (всей группы) при поступлении в стационар, по сравнению со здоровыми, в плазме (табл. 1) выше активность ГДА, ГФ, ПНФ (все р<0,001) и ниже ГЗДА (р=0,008), в лизатах эритроцитов (табл. 2) выше активность ГДА, ГФ, ПНФ (все р<0,001), в лизатах лимфоцитов (табл. 3) выше активность ГЗДА (р<0,001), ГФ (р=0,004), ниже ГДА (р<0,001) и ПНФ (р=0,036).

Через 8-10 дней лечения в плазме снизилась активность ГДА и ПНФ (р<0,001), ГФ (р=0,036), в эритроцитах снизилась активность ГФ (р<0,001), ПНФ (р=0,049), в лимфоцитах снизилась активность ГЗДА (р=0,042).

По окончании курса лечения наблюдалась существенная положительная динамика, практически, всех энзимных показателей: в плазме (табл. 4) снизились активности ГДА, ГФ, ПНФ (все р<0,001) и повысилась ранее сниженная активность ГЗДА (р=0,064), в эритроцитах (табл. 5) снизилась активность ГДА, ПНФ, ГФ (все р<0,001), в лимфоцитах (табл. 6) снизилась активность ГЗДА и ГФ (р<0,001), повысились активности ГДА и ПНФ (р<0,001).

Таблица 1

Активность энзимов в плазме крови здоровых и больных РА

__при поступлении___

Контингент Кол-ю б-ых Стат. пок-ли ГДА ПДА ПНФ ГФ

М 1,13 2,12 0,84 1,0

а 02 03 0,1 0,18

Здоровые 30 ш 0,04 0,06 0,02 0,03

Медиана 12 2,1 0,85 1,0

Квартили 1,0-13 1,9-23 0,77-0$ 0,9-1,1

М 1,93 1,86 135 136

Больные а 035 0,43 024 034

РА, вся 80 т 0,04 0,05 0,03 0,04

группа Медиана Квартили 1,91 1,7-22 1,7 1,6-2,0 137 12-и 134 1,2-1,5

РА, I сте- М о 1,54 0,16 1,94 0,18 М 0,14 0,94 0,15

пень ак- 16 т 0,04 0,04 0,03 0,04

тивности Медиана 13 1,95 1,09 0,94

Квартили 1,5-1,7 1,8-2,05 0,98-121 0,8-1,1

М 1,94 1,61 135 136

РА, II сте- а 027 0,16 0,2 0,15

пень ак- 50 гп 0,04 0,02 0,03 0,02

тивности Медиана 1,96 1,6 138 135

Квартили 1,8-2,14 1,5-1,7 124-и 125-1,46

М 235 2,66 1,65 1,86

РА, III сте- а 027 027 0,12 029

пень ак- 14 т 0,07 0,07 0,03 0,08

тивности Медиана 2,45 2,65 1,68 1,8

Квартили 2,1-2,56 2,4-2,9 1,6-1,74 1,7-2,1

РА, с сис- М 2,18 1,78 1,51 1,55

темными <7 озз 0,56 0,16 озз

поражениями (вся 27 т Медиана 0,06 225 0,11 1,5 0,03 1,5 0,06 1,52

труппа Квартили 1,88-2,41 1,5-1,7 1,43-1,62 135-1,64

РА, суставная форма (вся группа) 53 М о т Медиана Квартили 1,81 03 0,04 1,82 1,56-1,98 1,91 036 0,05 1,8 1,7-2,0 127 024 0,03 128 1,05-1,4 127 03 0,04 126 1,12-1,45

После проведенного курса лечения отмечалась нормализация в плазме активности ГФ, в лимфоцитах— ГДА ГЗДА ПНФ, в эритроцитах

— ГЗДА. Остальные энзимные показатели так и не достигли уровня здоровых.

Таблица 2

Активность энзимов в лизатах эритроцитов крови здоровых и

_больных РА при поступлении __

Контингент Кол-во 6-ых Стат. по к-л и тдд ПДА ПНФ ГФ

М 17,0 11,19 179,6 4,82

о 1,92 0,89 18,12 03

Здоровые 30 ш Медиана Квартили 0,35 16,95 15,6-19,2 0,16 10£5 103-11,8 331 1793 166-195 0,09 4,85 4,4-53

М 23,6 10,7 214,9 6,24

Больные о 6,11 4,43 33,63 0,72

РА, вся 80 ш 0,68 03 3,76 0,08

группа Медиана Квартили 25,35 21-28,1 9Д5 8,0-103 226 218-236 6Д 5,7-6,8

М 21Д 10,1 221,2 5,44

PA, I степень ак- 16 ст гп 3,33 0,83 039 0,1 736 1,84 038 0,1

тивности Медиана 21,15 10,15 2193 5,45

Квартили 18,5-21,5 9,9-10,4 218-225 5,2-5,7

М 27,46 8,28 232,4 6,22

PA, II сте- ст 2,57 0,77 7,49 032

пень ак- 50 ш 0,36 0,11 1,06 0,07

тивности Медиана 272 8Д5 2323 6Д

Квартили 25,4-29,4 7,6-9,0 226-238 5,8-6,6

М 12,88 19,86 145 Д 7ДЗ

PA, III сте- ст 0,78 1,88 11,88 039

пень ак- 14 гп 0,21 03 3,17 0,1

та вноси Медиана 12$ 203 140,0 7,25

Квартили 12,6-133 18,6-21,4 137-158 6,9-73

РА, с сис- М 253 10,6 219,2 636

темными а 12 535 40,4 038

поражениями (вся 27 ш Медиана 139 27$ 1,05 8,05 7,78 238 0,11 6,6

группа Квартили 21,5-303 7,7-9,7 230-242 6,0-7,0

РА, суставная форма (вся группа) 53 М ст гп Медиана Квартили 22,6 5,19 0,71 24,5 183-26,1 10,7 3,96 034 93 8,6-103 212,7 29,75 4,09 222 218-230 6,08 0,74 0,1 6,0 53-6,6

Таблица 3

Активность энзимов в лизатах лимфоцитов крови здоровых и _____больных РА при поступлении __

Контингент Кол-ю б-ых Стат. пок-ли ГДА ПДА ПНФ ГФ

М ст 11,1 0,86 7,65 0,76 34£ 339 113 1,45

Здоровью 30 ш 0,16 0,14 0,62 026

Медиана па 7,75 35,4 11,8

Квартили 10,5-11,6 7,0-83 323-36,4 103-123

М 9,02 9,87 31,2 13,6

Больные о 3,23 2,08 7,8 331

РА, вся 80 ш 0^6 (¡¿3 0,87 037

группа Медиана Квартили 83 6,8-103 9,9 8,8-11,2 30,0 27,2-32,2 13,0 11,7-14,6

М 14,6 6,91 44,8 19,0

PA, I сте- о 1,43 1,07 2,15 1,88

пень ак- 16 ш 036 0,27 034 0,47

тивности Медиана 15,1 6,8 45,7 18,9

Квартили 13,6-15,6 6,2-7,85 44,1-46,4 17,8-20,6

М 8Д1 9,96 29,7 13,0

PA, II сте- о 131 0,99 1,86 1,16

пень ак- 50 т 0,19 0,14 о?б 0,16

тивности Медиана Квартили 82 7,0-9,0 9,95 93-10,7 29,8 28,4-313 12,9 12,0-13,7

М 534 12,91 21,0 938

PA, III сте- о 031 0,77 1,46 0,98

пень ак- 14 ш 0,14 02 039 026

тивности Медиана 5,55 12,85 21,0 935

Квартили 55-5,9 123-13,6 19,6-22,4 8,8-10,1

РА, с сис- М 739 10,94 29,0

темн ыми а 236 1,76 8,12 2,41

пораже- 27 т 0,45 034 136 0,46

ниями (вся Медиана 6,8 11,0 273 11,8

группа Квартили 63-7,1 10,1-11,8 26,6-28,6 11,4-122

РА, суставная форма (вся группа) 53 М ст ш Медиана Квартили 9,85 331 0,45 8,8 8,0-113 932 2,04 0,28 9,2 8,6-103 323 7,46 1,03 31,2 293-32,6 14,4 3,4 0,47 13,6 12,8-15,9

Далее анализ энзимных показателей был проведен в зависимости от клинических особенностей заболевания.

У больных РА с системными поражениями, по сравнению с больными с преимущественно суставной формой РА, в плазме (табл. 1) выше активность ГДА, ПНФ, ГФ (все р<0,001) и незначительно ниже ГЗДА (р=0,082), в эритроцитах (табл. 2) выше активность ГФ, в лимфоцитах (табл. 3) ниже активность ГДА (р<0,001), ГФ (р=0,003), выше активность ГЗДА (р<0,001).

Таблица 4

Активность энзимов в плазме крови больных РА по окончании лечения

Контингент Кол-ю б-ых Стат. пок-ли ГДА ГЗДА ПНФ ГФ

М 1,4 1,96 1,02 1,06

Больные о 0,21 0,16 0,13 0,15

РА, вся 80 ш 0,02 0,02 0,01 0,02

группа Медиана Квартили 138 12-1,6 2,0 1,8-2,1 1,0 0,9-1,1 1,05 1,0-12

М 12 2,12 0,89 1,0

PA, I сте- ст 0,06 0,08 0,06 0,06

пень ак- 16 т 0,01 0,02 0,01 0,01

та иго ста Медиана 1Д9 2,1 05 1,0

Квартили 1,17-123 2,05-2,2 0,84-0,95 0,95-1,05

М 139 1,94 1,02 1,02

PA, II сте- с 0,15 0,14 0,11 011

пень ак- 50 ш 0,02 0,02 0,02 0,01

тивности Медиана 139 1,9 1,0 1,0

Квартили 13-и 1,8-2,0 0,95-1,11 0,93-1,12

М 1,68 1,86 1,18 1Д7

PA, III сте- а 0,21 0,18 0,09 0,19

пень ак- 14 т 0,06 0,05 0,02 0,05

тивно ста Медиана 1,73 1,85 1,21 12

Квартили 1,5-1,9 1,7-2,0 1,17-1,25 1,1-1,4

РА, с сис- М 134 1,93 1,11 1,14

темньгми ст 0,22 0,13 0,1 0,18

пораже- 27 т 0,04 0,02 0,02 0,03

ниями (вся Медиана 1,56 li> 1Д1 1,14

группа Квартили 137-1,65 1,8-2,0 1,03-1,18 1,0-12

РА, суставная форма (вся группа) 53 М а т Медиана Квартили 133 0,17 0,02 132 1,19-1,41 1,98 0,18 0,02 2,0 1,8-2,1 0£7 0,13 0,02 0,96 0,85-1,14 1,01 0,11 0,02 1,0 0,93-1,1

У больных РА с БПТ, по сравнению с больными с МПТ, в плазме выше активности ГДА, ПНФ и ГФ (все р<0,001), в эритроцитах выше активность ГЗДА (р=0,036), ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активности ГДА ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (все р<0,001).

Таблица 5

Активность энзимов в лизатах эритроцитов больных РА _по окончании лечения

1 Контингент Кол-во б-ых Стат. по к-ли ГДА ГЗДА ПНФ ГФ

М 18,4 112 187,6 4,98

Больные о 1,46 0,97 851 024

РА, вся 80 ш 0,16 0,11 0,95 0,03

группа Медиана Квартили 18,0 17,4-19,6 11,0 10,6-113 188,0 182-194 5,0 4,8-52

М 1739 112 185,4 4,79

PA, I сте- о 0,86 0,14 5£>8 0,17

пень ак- 16 т 0,22 0,04 1,49 0,04

тивности Медиана 17,25 11,15 1853 4,8

Квартили 16,7-17,95 11,05-113 182-190 4,7-4,9

М 18,41 10,71 191,6 4,96

PA, II сте- а 125 0,45 6,03 ол

пень ак- 50 ш 0,18 0,06 0,85 0,03

тивности Медиана 17,95 10,8 190 5,0

Квартили 17,6-19,5 10,4-11,1 188-196 4,8-5,1

PA, III сте- М а 1951 1,89 12,99 0,76 175,7 6,5 525 02

пень ак- 14 т 0,5 02 1,74 0,05

тивности Медиана 19,95 13,1 174,5 53

Квартили 18,6-20,8 12,7-13,6 170-180 5Д-53

РА, с сис- М 18,8 11,0 1913 5,09

темн ими о 1,4 1,06 10,9 0,17

поражениями (вся 27 гп Медиана 027 193 021 10,8 2,1 195,0 0,03 5Д

группа Квартили 17,9-19,7 103-112 190-198 5,0-5Д

РА, суставная форма (вся группа) 53 М а ш Медиана Квартили 18Д 1,46 02 17,8 173-183 из 0£2 0,13 11,1 10,9-113 185,7 629 0,86 185,0 182-190 4,92 0,25 0,03 4ß 4,7-5,1

Таблица 6

Активность энзимов в лизатах лимфоцитов крови больных РА по окончании лечения

Контингент Кол-во б-ьк Стат. пок-ли ГДА ПДА ПНФ ГФ

М 10,8 7,82 35,0 12,1

Больные о 0,88 0,47 2,73 036

РА, вся 80 т 0,1 0,05 03 0,06

группа Медиана Квартили 102 10-11,6 7,7 7,5-8,1 35,65 33,8-36,8 12,0 11,7-12,4

М 112 7,61 35,7 12,7

РА, I сте- ст 0,42 0,13 031 039

пень ак- 16 ш 0,1 0,03 0,13 0,15

тивности Медиана 11,8 7,6 353 1235

Квартили 11,6-12,1 7,5-7,7 353-36,0 122-133

М 10,77 7,67 36,2 12/)

РА, II сте- а 0,68 032 1,72 037

пень ак- 50 т 0,1 0,04 0,24 0,05

тивности Медиана 102 7,6 36,45 12,0

Квартили 10,3-11Д 7,4-8,0 34,7-37,7 11,6-122

М 9,73 839 30,1 11,71

РА, III сте- сг 0,29 0,42 1,14 039

пень ак- 14 ш 0,08 0,11 03 0,16

тивности Медиана 9,75 8,45 30,05 112

Квартили 9,6-92 83-8,7 293-312 112-122

РА, с сис- М 103 8,04 342 11,8

темными о 0,78 035 2,71 озб

поражениями (вся 27 т Медиана 0,15 10,1 0,11 8,0 032 34,7 0,11 11,7

фуппа Квартили 9,8-10,5 73-8,2 332-36,1 11,4-12,4

РА, суставная форма (вся группа) 53 М ст т Медиана Квартили 11,1 0,81 0,11 ПЛ 10,7-11,6 7,7 038 0,05 7,6 7,4-72 35,4 2,67 037 36,1 35-37,6 122 032 0,07 12,0 11,9-123

У больных с серопозигивной формой РА, по сравнению с серонега-тивной формой, в плазме выше активность ГДА, ГИФ (все р<0,001), ГФ (р=0,007) и ниже ГЗДА (р=0,04б), в эритроцитах выше активность ГФ (р=0,005), в лимфоцитах ниже активность ГФ (р=0,006) и выше ГЗДА (р-0,004).

У больных РА с I стадией поражения суставов, по сравнению с II стадией, в плазме ниже активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р=0,029) и ГФ

(р=0,006), в эритроцитах ниже активность ГФ (р=0,041), в лимфоцитах выше активность ГДА (р=0,006), ПНФ (р=0,005) и ГФ (р=0,005); по сравнению с III стадией, в плазме ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ (все р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р=0,006), ГФ (р<0,001) и ниже ГЗДА (р<0,001); по сравнению с IV стадией в плазме ниже активность ГДА ПНФ (р<0,001), ГФ (р=0,005) и выше ГЗДА (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА (р=0,004), ПНФ (р=0,003), ГФ (р<0,001) и выше ГЗДА (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА (р=0,043), ПНФ (р=0,044), ГФ (р<0,001) и ниже ГЗДА (р<0,001).

При II стадии, по сравнению с III стадией, в плазме ниже активность ГДА (р =0,047), ПНФ (р=0,039) и ГФ (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГФ, в лимфоцитах выше активность ГДА (р=0,041), ГФ (р=0,042) и ниже ГЗДА (р=0,006); по сравнению с IV стадией, в плазме и лимфоцитах статистически значимых различий не выявлено, а в эритроцитах ниже активность ГДА (р=0,038).

При III стадии, по сравнению с IV стадией, ни по одному энзимному показателю в трех средах статистически значимых энзимных различий не определялось.

У больных РА с ФК-2, по сравнению с ФК-3, в плазме ниже активность ГДА ПНФ, ГФ (все р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГЗДА (р=0,044) и ГФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (все р<0,001); по сравнению с ФК-4, в плазме ниже активность ГДА (р=0,042), ПНФ и ГФ (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГФ (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГЗДА (р<0,001), выше ПНФ (р=0,045) и ГФ (р=0,039).

У больных РА с ФК-3, по сравнению с ФК-4, ни по одному энзимному показателю в трех биологических средах статистически значимых различий не определялось.

Таким образом, проведенные исследования выявили определенную зависимость энзимных показателей от характера течения заболевания, клинико-анатомических форм, наличия или отсутствия РФ, стадии поражения суставов и их ФК, что показывает достаточно высокую чувствительность изученных энзимов в отражении различных клинических особенностей заболевания. В то же время в анализируемых группах были больные с различной активностью патологического процесса, которая могла оказать существенное влияние на энзимную активность крови.'Исходя из этого, ниже приведены результаты исследований в зависимости от степени активности ревматоидного процесса.

PA, I степень активности процесса. При поступлении на лечение, по сравнению со здоровыми, в плазме (табл. 1) выше активность ГДА и

ПНФ (р<0,001), ниже ГЗДА (р=0,042), в эритроцитах (табл. 2) выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах (табл. 3) выше активность ГДА, ПНФ, ГФ (все р<0,001) и ниже ПДА (р-=0,004). Индекс ОАБ28(3) составил 2,94±0,09 баллов. Если же учитывать не среднестатистические величины активности энзимов, а индивидуальные энзимные показатели, то за референтные пределы активности ферментов здоровых людей (М+2ст, условная норма) в плазме активность ПНФ выходила в 68,8% случаев, ГДА — в 50%, в эритроцитах активность ГДА — в 68,8%, ПНФ — в 87,5%, в лимфоцитах активность ГДА и ПНФ — в 87,5% и ГФ — в 100% случаев. В то же время у этих же больных за пределы нормы показатели СРБ, альфа-2-глобулинов выходили в 37,5% случаев, СОЭ, гамма-глобулинов, с таловых кислот, иммуноглобулинов О — в 31,3% случаев. То есть, отдельные энзимные показатели (ПНФ в трех средах, ГДА в эритроцитах и лимфоцитах, ГФ в лимфоцитах) были значительно более чувствительными и информативными в отражении минимальных проявлений активности патологического процесса, по сравнению с юученными общепринятыми острофазовьши лабораторными показателями в этом аспекте.

Результаты корреляционного анализа выявили в плазме наличие слабых связей между всеми ферментами, умеренные прямые связи в лимфоцитах и эритроцитах между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратные умеренные связи в эритроцитах мевду ГЗДА—ПНФ и ГЗДА— ГФ. Определялись прямые высокопрочные связи между активностью ГЗДА в трех средах, ПНФ пл. и ПНФлимф., умеренные прямые связи между активностью ГДА в трех средах, ГЗДАпл. и ГЗДАэр., ГФлимф. и ГФэр. и активностью ПНФ в трех средах.

Через 8-10 дней лечения в плазме снизилась активность ГДА (р=0,044), ПНФ (р=0,043), в эритроцитах снизилась активность ПНФ (р<0,001) и повысилась ранее сниженная активность ГЗДА (р=0,042), в лимфоцитах снизилась активность ГДА (р=0,046), ПНФ и ГФ (р<0,001). То есть, наиболее чувствительными в отражении меняющегося клинического состояния больных в ранние сроки лечения были показатели активности ПНФ в трех средах и ГФ в лимфоцитах.

По окончании курса стационарного лечения наблюдалась положительная динамика всех изученных энзимных показателей и отмечалась нормализация активности ГДА, ГФ и ПНФ плазме (табл. 4), всех энзимов в эритроцитах (табл. 5) и активности ГЗДА и ПНФ в лимфоцитах (табл. 6), но осталась сниженной активность ГЗДА в плазме (р=0,006) и повышенной активность ГДА (р=0,00б) и ГФ (р=0,007) в лимфоцитах. Индекс ОАБ28(3) за период лечения уменьшился на 45% (р<0,001) и составил 1,64+0,12 (ст=0,46) баллов.

У больных с системными поражениями, по сравнению с больными с суставной формой, в плазме ниже активность ГЗДЛ (р=0,003), выше ПНФ (р=0,046) и ГФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА (р=0,043), ПНФ (р<0,001), ГФ (р =0,026) и ниже ГЗДА (р=0,005), в лимфоцитах ниже активность ГДА иГФ (р<0,001), выше ГЗДА (р=0,006).

У больных с БПТ, по сравнению с больными с МГТГ, в плазме выше активность ГДА (р=0,043), ПНФ (р=0,008), в эритроцитах выше активность ГДА (р=0,046), ПНФ (р=0,042) и ниже ГЗДА (р=0,003), в лимфоцитах ниже активность ГДА (р<0,001), ГФ (р=0,044) и выше ГЗДА (р=0,004).

У больных РА с I стадией поражения суставов, по сравнению с II стадией, в плазме ниже активность ГДА (р=0,005) и выше ГЗДА (р=0,044), в эритроцитах выше активность ГЗДА (р =0,009), в лимфоцитах выше активность ГЗДА (р=0,049); по сравнению с III стадией, в плазме ниже активность ГДА (р=0,006), ПНФ (р=0,049), ГФ (р=0,042) и выше ПДА (р=0,046), в эритроцитах ниже активность ГДА (р=0,048), ПНФ (р=0,046) и выше ПДА (р=0,007), в лимфоцитах — различий не определялось (р>0,05). При II стадии, по сравнению с III стадией, в плазме ниже активность ГДА (р=0,048), в эритроцитах ниже активность ПНФ (р=0,009), в лимфоцитах ниже ГЗДА (р=0,048).

У больных с ФК-2, по сравнению с ФК-3, в плазме ниже активность ГДА (р=0,007), ГФ (р=0,049), в эритроцитах ниже активность ГДА (р=0,047), ПНФ (р<0,001) и выше ПДА (р=0,009), в лимфоцитах ниже активность ПДА (р=0,007), выше ГФ (р=0,006).

То есть, проведенные исследования показали, что и при одинаковой степени активности ревматоидного процесса клинические особенности заболевания оказывают существенное влияние на энзимный профиль крови. Причем, наибольшее влияние оказывают внесуставные поражения и БПТ и значительно меньшее — стадии поражения суставов.

PA, II степень активности процесса. При поступлении, по сравнению со здоровыми, в плазме (табл. 1) и эритроцитах (табл. 2) выше активность ГДА, ГФ, ПНФ п ниже ПДА (все р<0,001), в лимфоцитах (табл. 3) ниже активность ГДА, ПНФ, выше ГФ и ГЗДА (все р<0,001). Индекс DAS28 составил 3,87±0,06 (о =0,42) баллов.

В плазме выявлены умеренные прямые связи между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратные умеренные связи между ПДА—ПНФ, ГДА—ПДА; в эритроцитах — прямые умеренные связи между ГДА— ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратные умеренные связи между ГДА— ПДА, ПДА—ПНФ, ПДА—ГФ; в лимфоцитах — обратные умеренные связи между всеми энзимами, за исключением прямых умеренных связей между ГДА и ПНФ. Установлены прямые высокопрочные связи между ПДА в плазме и эритроцитах, ГФ в плазме и эритроцитах, прямые уме-

ренные связи между ГДА в плазме и эритроцитах, ПНФ в плазме и эритроцитах, ГФ в эритроцитах, лимфоцитах и плазме, обратные умеренные связи между ГДАпл.—ГДАлимф., ГДАэр.—ГДАлимф., ГЗДАпл.— ГЗДАлимф., ГЗДАэр.—ГЗДАлимф., ПНФпл.—ПНФлимф., ПНФэр — ПНФлимф.

Через 8-10 дней лечения в плазме и эритроцитах снизилась активность ГДА, ПНФ, ГФ и повысилась ранее сниженная активность ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах снизилась активность ГЗДА (р<0,001), повысилась активность ГДА (р=0,043) и ПНФ (р<0,001). Подобные изменения активности ферментов отмечались при хорошей эффективности терапии.

После проведенного курса лечения наблюдалась существенная положительная динамика всех энзимных показателей, и произошла нормализация активности ГФ в плазме (табл. 4) и эритроцитах (табл. 5), ГДА и ГЗДА в лимфоцитах (табл. 6), но остались в плазме и эритроцитах повышенными активности ГДА и ПНФ (р<0,001), сниженной активность ГЗДА (р-0,003), в лимфоцитах — повышенными активности ПНФ (р=0,042) и ГФ (р=0,041). Индекс ОАБ28 уменьшился на 38,5% (р<0,001).

У больных РА с системными поражениями, по сравнению с преимущественно суставной формой РА, в плазме и эритроцитах выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (все р<0,001).

При БПТ, по сравнению с МГТГ, в плазме ниже активность ГЗДА (р=0,004), выше активность ПНФ (р=0,006) и ГФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА, ПНФ, ГФ (все р<0,001) и ниже ГЗДА (р=0,041), в лимфоцитах ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (р<0,001).

Между всеми стадиями поражения суставов выявлены статистически значимые энзимные различия. Из 12 возможных различий (4 фермента в трех средах) между 1-Й стадиями определялись энзимные различия по 6 показателям, между ЫН стадиями— по 12 показателям, 1-1V стадиями — по 11, И-Ш стадиями — по 11, ¡НУ стадиями — по 8 и между Ш-ГУ стадиями— по 1 энзимному показателю.

У больных с ФК-2, по сравнению с ФК-3, в плазме выше активность ГЗДА, ниже ПНФ и ГФ (все р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже активность ГЗДА (все р<0,001); по сравнению с ФК-4, в плазме выше активность ГЗДА (р=0,007), ниже ПНФ (р=0,004) и ГФ (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА и ПНФ (р<0,001), ГФ (р=0,007) и выше ГЗДА (р<0,001), в лимфоцитах ниже активность ГЗДА (р<0,001), выше ПНФ (р<0,001) и ГФ (р=0,005). При ФК-3, по сравнению с ФК-4, в плазме и эритроцитах статистически значимых

энзимных различий не определялось, в лимфоцитах ниже активность ГДА (р=0,008).

Таким образом, проведенные исследования показали, что и при одинаковой (II) степени активности ревматоидного процесса на энзимный спектр крови существенное влияние оказывают клинические особенности заболевания. Наибольшее воздействие на энзимный профиль крови оказывают клинико-анатомические формы заболевания, характер течения, в меньшей степени — стадии поражения и ФК суставов.

PA, III степень активности процесса. При поступлении в стационар, по сравнению со здоровыми, в плазме (табл. 1) выше активность всех энзимов (р<0,001), в эритроцитах (табл. 2) ниже активность ГДА, ПНФ, выше ГФ и ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах (табл. 3) ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (все р<0,001).

Выявлены прямые высокопрочные корреляционные связи между ГЗДАэр.—ГЗДАлимф., ГФпл.—ГФэр., умеренные прямые связи между ГДАэр,—ГДАлимф., ПДАпл,—ГЗДАэр., ГЗДАпл,—ГЗДАлимф., ПНФэр.—ПНФлимф., обратные высокопрочные связи между ГДАпл.— ГДАлимф., обратные умеренные связи между ГДАпл.—ГДАэр., ПНФпл.—ПНФэр., ПНФпл.—ПНФлимф., ГФэр.—ГФлимф.

Через 8-10 дней лечения в плазме снизилась активность ГДА (р=0,007), ГЗДА (р=0,004), ГФ (р=-0,044) и ПНФ (р<0,001), в эритроцитах повысилась активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р=0,006), снизилась активность ГФ и ГЗДА (р<0,001), в лимфоцитах повысилась активность ГДА и ПНФ (р<0,001) и снизилась активность ГЗДА (р<0,001).

В процессе дальнейшей терапии, по мере улучшения клинического состояния больных, наблюдалась еще более выраженная положительная динамика всех энзимных показателей, но и но окончании стационарного лечения показатели активности всех энзимов в плазме (табл. 4), ГДА, ГЗДА и ГФ в эритроцитах (табл. 5), ГДА, ПНФ, ГЗДА в лимфоцитах (табл. 6) имели статистически значимые отличия от здоровых, и только отмечалась нормализация активности ПНФ в эритроцитах и ГФ в лимфоцитах.

Это свидетельствует о том, что проведенного курса лечения больных в стационаре недостаточно для полного купирования ревматоидного процесса и необходимо продолжение терапии в амбулаторных условиях. Индекс DAS28 за период стационарного лечения снизился на 46% (р<0,001).

У больных РА с системными поражениями, по сравнению с больными с суставной формой, в плазме выше активность всех энзимов (р=0,044-0,004), в эритроцитах ниже активность ГДА (р=0,007), ГЗДА (р=0,048), ПНФ (р=0,042), в лимфоцитах ниже активность ГДА (р=0,036), ПНФ (р=0,006), ГФ (р<0,001) и выше ПДА (р=0,034).

При БПТ, по сравнению с МПТ, в плазме выше активность ГДА ГЗДА ГФ (все р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГДА (р=0,004), ПНФ (р<0,001), выше ГЗДА (р=0,003), в лимфоцитах ниже активность ГДА (р=0,004), ПНФ (р=0,004), ГФ (р<0,001) и выше ГЗДА (р=0,043).

У больных с II стадией, по сравнению с III стадией, в плазме ниже активность ГДА (р<0,001), ГЗДА (р=0,002), в эритроцитах выше активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р=0,003), ниже ГЗДА (р=0,036), в лимфоцитах выше активность ГДА (р=0,004), ГФ (р=0,047) и ниже ГЗДА (р=0,038).

То есть, при РА с III степенью активности процесса, как и при 1-Й степенях, клинические особенности заболевания оказывают существенное влияние на энзимный профиль крови.

С целью определения возможности использования энзимных показателей для уточнения и дифференциации степени активности ревматоидного процесса нами был проведен сравнительный анализ энзимной активности крови.

У больных РА с I степенью активности процесса, по сравнению с II степенью, в плазме и эритроцитах ниже активность ГДА, ГФ, ПНФ и выше ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (все р<0,001); по сравнению с III степенью, в плазме ниже активность всех энзимов (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА и ПНФ, ниже ГФ и ГЗДА (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (все р<0,001).

При II степени, по сравнению с III степенью, в плазме ниже активность всех энзимов (р<0,001), в эритроцитах ниже активность ГЗДА и ГФ, выше ГДА и ПНФ (все р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (р<0,001).

То есть, каждая степень активности процесса имеет свои энзимоло-гические особенности крови, что в комплексе с клиническими данными позволяет четко установить ту или иную степень активности процесса.

Для того чтобы выявить, что же в большей степени влияет на энзимные показатели: степень активности процесса или характер течения, системность поражений, ФК и стадии поражения суставов, нами были провели сравнительные исследования энзимных показателей при одном и том же клиническом факторе, но при различной активности процесса. Сравнения были проведены у больных с I-II степенью активности

Так, у больных РА с I степенью и системными поражениями, по сравнению с больными РА с II степенью и суставной формой, в плазме несколько ниже активность ГДА ПНФ, ГФ и выше ГЗДА (р=0,041-0,18), в эритроцитах ниже активность ГДА (р<0,001), ГФ (р=0,213), выше ГЗДА (р=0,006) и ПНФ (р=0,215), в лимфоцитах вьпие активность ГДА ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА (все р<0,001). То есть, выявленные энзимные различия

весьма напоминают различия между 1-Й степенями без учета клинических особенностей. Но наиболее четкие статистически значимые различия определяются по активности всех энзимов в лимфоцитах и ГДА, ГЗДА в эритроцитах. На эти показатели и целесообразно ориентироваться в подобной клинической ситуации при дифференциации I и II степени активности процесса. Примерно аналогичная ситуация наблюдается и при сравнении энзимных показателен у больных РА с I степенью с БПТ и больных РА с II степенью и МПТ. То есть, несмотря на выраженное влияние клинических особенностей на энзимный профиль крови, степень их влияния недостаточна, чтобы нивелировать энзимные различия между степенями активности процесса и затруднить их идентификацию.

Чтобы понять смысл изменения активности изученных нами энзимов при РА с патогенетических позиций, необходимо оценить биохимические последствия энзимных изменений в иммунокомпетенгных клетках — лимфоцитах. Выявленный нами дефицит ПНФ в лимфоцитах,_ особенно выраженный при РА с умеренной и высокой активностью процесса, способствует накоплению в них естественных субстратов ПНФ: гуанозина и дезоксигуанозина. Эти метаболиты являются мощными ингибиторами ри-бонуклеотидредуктазы, что ведет к снижению синтеза ДНК, преимущественно в Т-лимфоцитах (Н. Simmonds et al., 1984). Избыточное содержание дезоксигуанозина в лимфоцитах обладает цитотоксическим действием на них, особенно на Т-лимфоцигы, что ведет к нарушению процессов созревания, пролиферации и дифференциации Т-клеток, частичной потере ими супрессорного воздействия на В-лимфоцигы, что обуславливает дискоор-динацию иммунных процессов при PA (М. North et al., 1980; D. Karson et al., 1982). Имеется мнение, что характер метаболизма лимфоцитов определяет иммунную реактивность организма и обеспечивает основу иммунных реакций, и, что именно ферменты ПМ (АДА и ПНФ) участвуют в различных иммунных реакциях, и изменения их активности за пределы физиологической нормы ведут к появлению иммунопатологических ситуаций (М.В. Робинсон и др., 1986; 1993). Изменения активности других энзимов, расщепляющих гуанозин: ГЗДА и ГФ, направлены на удаление избытка гуанозина в лимфоцитах. Но, вероятно, их потенциала для нормализации уровня туанозина в клетках не хватает. Исходя из этого, мы предполагаем, что в основе некоторых патогенетических механизмов РА лежат нарушения ПМ в лимфоцитах. То есть, имеющаяся иммунопатология при РА является вторичной по отношению к нарушениям ПМ в иммунокомпетенгных клетках, что подразумевает новые патогенетические подходы в лечении больных РА, основанные на коррекции активности энзимов ПМ, в том числе и ПНФ. К ним могут относиться методы, направленные на использование активаторов ПНФ и ингибиторов активности энзимов (5'-НТ и др.), обеспечивающих поставку гуанозина в клетки. Известно, что вве-

дение больным с дефицитом ПНФ смеси фермента (ПНФ) и эритроцитов крови, предварительно облученной (УФО), а также трансплантация костного мозга проявлялись нормализацией количества Т-лимфоцитов, активности ПНФ и уровня мочевой кислоты (С. Broome et al., 1996). Сочетание иммуномодуляторов и активаторов ПНФ нам представляется весьма перспективным направлением в лечении больных РА

Группу сравнения № 1 составили больные OA с синовитом, у которых, по сравнению со здоровыми (табл. 7), в плазме выше активность ГФ и ГДА (р<0,001), незначительно выше ПНФ (р>0,05) и ниже ГЗДА (р<0,001), в эритроцитах ниже активность всех энзимов: ГДА ПНФ, ГФ (все р<0,001) и ГЗДА (р=0,038), в лимфоцитах ниже активность ГДА выше ГЗДА, ПНФ и ГФ (все р<0,001). Оказалось достаточно много общего в изменениях активности ферментов при РА и OA. Так, ири обоих заболеваниях в плазме выявлено повышение активности ГДА, ПНФ и ГФ, в эритроцитах — снижение активности ГЗДА, в лимфоцитах — повышение активности ГФ, ГЗДА и снижение ГДА Но в количественном аспекте эти энзимные изменения были различными. Кроме того, выявлены и разнонаправленные изменения активности энзимов, позволяющие разграничивать РА и OA, но с учетом степени активности ревматоидного процесса.

Результаты сравнительного анализа показали, что у больных РА (всей группы), по сравнению с больными OA с синовитом, в плазме выше активность ГДА и ПНФ (р<0,001), незначительно выше ГЗДА (р=0,072) и ГФ (р=0,081); в эритроцитах выше активность ГДА ПНФ, ГФ (р<0,001) и незначительно выше ГЗДА (р=0,214); в лимфоцитах ниже активность ПНФ (р<0,001), ГФ (р=0,004), незначительно ниже ПДА (р=0,263) и несколько выше активность ГДА (р=0,312). При дифференциации РА и OA целесообразно ориентироваться на показатели ГДА ПНФ и ГФ в эритроцитах, активность которых снижена при OA, но повышена при РА.

Группу сравнения № 2 составили больные подагрой, у которых по сравнению со здоровыми (табл. 7) в плазме выше активность ГДА (р<0,001), ПНФ (р=0,047), ГФ (р<0,001) и ниже ГЗДА (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА (р=0,004), ГЗДА (р<0,001), ГФ (р=0,006) и ниже ПНФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ПНФ (р<0,001), ниже активность ГДА и ГФ (р<0,001) и незначительно ниже ГЗДА (р=0,132).

Сравнительные исследования показали, что у больных РА по сравнению с больными подагрой, в плазме выше активность ГДА (р<0,001), ГЗДА (р=0,038) и ПНФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ПНФ и ГФ (р<0,001), ГДА (р=0,041) и ниже ГЗДА (р=0,047), в лимфоцитах выше активность ГЗДА и ГФ, ниже ПНФ (р<0,001).

Таблица 7

Активность энзимов в крови больных остеоаррозом и подагрой

Контингент Кол-во б-ых Стат. по к-л и Г ДА ГЗДА ПНФ ГФ

Плазма

Больные О А с синови-том 18 М а ш 1,57 0,19 0,04 1,68 0,14 0,03 0,87 0,14 0,03 1,25 0,17 0,04

Больные подагрой (вся группа) 16 М а гп 1^6 037 0,09 136 039 0.1 0£5 0,2 0,05 134 034 0,08

Больные подагрой с хронической формой 9 М а ш 1,82 0,25 0,08 127 0Д1 0,07 1,01 од 0,07 138 0,16 0,05

Больные подагрой с интер митгару ющей формой 7 М а ГП 1Д1 0,16 0,06 1,94 0,17 0,06 0,87 0,2 0,07 1,03 0,23 0,09

Лизаты эритроцитов

Больные ОА с синови-том 18 М а гп 12,4 134 036 юз 13 035 152,9 10£>5 238 3,77 037 0,09

Болшые подафой (вся группа) 16 М а т 19,6 437 1,09 13,1 1,89 0,47 133,9 16,06 4,01 535 038 0,14

Больные подагрой с хронической формой 9 М а т 22,8 2,49 0,83 13,0 1,73 038 122,8 10,69 336 5,02 0,47 0,16

Больные подагрой с интер митгиру ющей формой 7 М о ш 15,4 1,99 0,75 133 2,21 0,84 148,1 838 3,17 5,77 0,41 0,16

Лизаты л и мфо цито в

Больные ОА с синовн-том 18 М а т 8,75 1,14 0,27 10,2 136 037 45,4 4,45 1,05 16,2 2,67 0,63

Болшые подагрой (вся группа) 16 М о т 9,13 1,42 035 7,47 0,46 0,12 45,0 5 £6 1,49 9,42 137 039

Болшые подагрой с хронической формой 9 М о т 8,08 0,49 0,16 7,71 037 0,12 48,8 5,07 1,69 8,27 0,76 0Д5

Болшые подагрой с интер митгиру ющей формой 7 М о ш 10,47 0,97 037 7,17 039 0,15 40,1 2,25 0,85 10£ 0,9 034

Исследования также показали наличие существенных энзимных различий между хронической и ингермигтирующей формами подагры. Так, у больных с хронической формой, по сравнению с ингермиттирующей (табл. 7), в плазме выше активность ГДА и ГФ (р<0,001), ниже ГЗДА (р<0,001), в эритроцитах выше активность ГДА (р<0,001), ниже ПНФ (р<0,001) и ГФ (р=0.005), в лимфоцитах выше активность ГЗДА (р=0,007), ПНФ (р<0,001), ниже активность ГДА и ГФ (р<0,001).

Исходя из этого, нами были проведены сравнительные исследования активности энзимов у больных РА и больных подагрой с каждой формой раздельно. Так, у больных РА (всей группы), по сравнению с больными с интермиттирующей формой подагры, в плазме выше активность ГДА и ПНФ (р<0,001), ГФ (р=0,042) и ниже незначительно активность ГЗДА (р=0,182), в эритроцитах выше активность ГДА и ПНФ (р<0,001), незначительно выше ГФ (р=0,058) и ниже ГЗДА (р=0,064), в лимфоцитах выше активность ГЗДА (р<0,001), ГФ (р=0,043), ниже ПНФ (р=0,004) и незначительно ниже ГДА (р=0,082); по сравнению с хронической формой, в плазме выше активность ГЗДА и ПНФ (р<0,001), в эритроцитах выше активность ПНФ и ГФ (р<0,001), в лимфоцитах выше активность ГФ (р<0,001), ГЗДА (р=0,006) и ниже ПНФ (р<0,001).

То есть, независимо от формы подагры, между ней и РА определяются статистически значимые энзимные различия. В то же время, как при подагре, так и при РА имеется много общего в изменениях активности энзимов, проявившегося в их однонаправленности Так, при РА и подагре в плазме наблюдается повышение активности ГДА, ПНФ, ГФ и снижение ГЗДА, в эритроцитах — повышение активности ГДА и ГФ, в лимфоцитах — снижение активности ГДА. Но выявлены и разнонаправленные изменения активности энзимов: при РА в эритроцитах отмечалось повышение активности ПНФ и снижение ГЗДА, а при подагре — снижение активности ПНФ и повышение ГЗДА, в лимфоцитах при РА — повышение активности ГФ, ГЗДА и снижение активности ПНФ, а при подагре — противоположные изменения активности этих энзимов. При дифференциации РА и подагры целесообразно ориетироваться на вышеуказанные разнонаправленные изменения активности энзимов в эритроцитах и лимфоцитах. В то же время необходимо отметить, что при РА, ОА и подагре определялось достаточно много общего в изменениях активности энзимов ПМ, что, вероятно, свидетельствует о некоторой общности в патогенетических механизмах этих заболеваний. Но имеющиеся разнонаправленные энзимные изменения в трех биосредах указывают и на некоторые различия в патогенетических звеньях РА, ОА и подагры.

Таким образом, проведенные нами энзимные исследования в трех биологических средах выявили достаточно большую чувствительность

изученных энзимных показателей в отражении минимальных проявлений активности ревматоидного процесса, показали возможность использования их в уточнении степени активности ревматоидного процесса, объективизации контроля эффективности проводимой терапии, дифференциации РА, ОА и подагры. Выявленные существенные нарушения ПМ в лимфоцитах крови больных РА позволяют более глубоко понять отдельные патогенетические механизмы РА и наметить новые патогенетические подходы в лечении, основанные на коррекции активности энзимов в иммуно-компетенгных клетках.

ВЫВОДЫ

1. У больных РА с I степенью активности процесса, по сравнению со здоровыми, в плазме выше активность ГДА, ПНФ и ниже ГЗДА в ли-затах лимфоцитов и эритроцитов выше активность ГДА ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА Чем выше степень активности ревматоидного процесса, тем выше в плазме активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА в эритроцитах — выше активность ГФ и ГЗДА в лимфоцитах — ниже активность ГДА ПНФ, ГФ и выше ГЗДА Между всеми степенями активности процесса определяются выраженные энзимные различия, способствующие их дифференциации.

2. Наиболее информативными в отражении минимальной активности ревматоидного процесса оказались: в эритроцитах показатели активности ПНФ, в лимфоцитах — ГДА ПНФ и ГФ, которые выходили за референтные пределы здоровых в 87,5% — 100% случаев, в то время как показатели СРД СОЭ, сиаловых кислот, гамма- и альфа-2-глобулинов, иммуноглобулинов О у этих же больных — только в 31,3-37,5% случаев.

3. Наиболее выраженные изменения активности энзимов в трех биологических средах наблюдаются у больных РА при системных поражениях, БГГГ, серопозигивной форме, но наибольшее влияние оказывает выраженность активности патологического процесса. Изученные энзимные показатели крови способствуют уточнению степени активности ревматоидного процесса, клинико-анатомических форм и вариантов течения заболевания.

4. Наиболее лабильными в отражении меняющегося клинического состояния больных в ранние сроки лечения (8-10 дней) при минимальной активности ревматоидного процесса были показатели активности ПНФ и ГФ в лимфоцитах и ПНФ в эритроцитах, на которые целесообразно ориентироваться при оценке адекватности используемой терапии При И-Ш степени, практически, все энзимные показатели в те же сроки лечения достаточно четко отражают динамику клинического состояния больных.

5. Период начинающейся клинической ремиссии у больных РА в процессе стационарного лечения сопровождается нормализацией (референтные пределы здоровых) активности всех изученных энзимов в трех биологических средах при I степени активности ревматоидного процесса; при II степени — нормализацией в плазме активности ГЗДА, ГФ, в эритроцитах — ГЗДА, ПНФ и ГФ, в лимфоцитах — всех энзимов; при III степени — в плазме нормализацией активности ГЗДА, в эритроцитах и лимфоцитах — ПНФ и ГФ.

6. Корреляционный анализ выявил в плазме у больных РА с I степенью наличие статистически значимых прямых связей между ГДА—ПНФ, при II степени — прямых умеренных связей между ГДА—-ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратных умеренных связей между ГДА— ГЗДА и ГЗДА—ПНФ, при III степени — прямых высокопрочных связей между ГДА—ПНФ и ГДА—ГФ; в лимфоцитах при I степени — прямых статистически значимых связей между ГДА—ПНФ, ГДА— ГФ и ПНФ—ГФ, при II степени — прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ и обратных слабых и умеренных связей между другими ферментами; в эритроцитах при I степени — наличие прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратных связей между ГЗДА—ПНФ и ГЗДА—ГФ, при II степени — упрочение тех же связей, что и при I степени, при III степени — наличие обратных умеренных связей между ГДА—ГЗДА, ГДА—ГФ, ГЗДА—ПНФ, ПНФ—ГФ и прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ и ГЗДА— ГФ.

7. У больных РА (всей группы), по сравнению с больными подагрой (всей группы), в плазме выше активность ГДА, ГЗДА и ПНФ, в лиза-тах эритроцитов выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА, в ли-затах лимфоцитов выше активность ГЗДА, ГФ, ниже активность ПНФ.

8. У больных РА (всей группы), по сравнению с больными ОА с синови-том, в плазме выше активность ГДА и ПНФ, в лизатах эритроцитов выше активность ГДА, ПНФ и ГФ, в лизатах лимфоцитов ниже активность ПНФ и ГФ.

9. Значительно сниженные активности ПНФ, ГФ и повышенная активность ГЗДА в лимфоцитах больных РА, особенно при тяжелом течении заболевания, свидетельствуют о выраженных нарушениях ПМ в иммунокомпетенгных клетках, что может привести к расстройству процессов созревания, пролиферации и дифференциации лимфоцитов, нарушению их функциональных свойств, дискоординации иммунной регуляции, что может составить один из наиболее важных патогенетических механизмов РА.

10. Исследования активности ГДА, ПДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах: лизатах эритроцитов, лимфоцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальной активности ревматоидного процесса, уточнению степени активности процесса, клинических форм, характера течения, объективизации оценки эффективности проводимой терапии, выявлению патогенетических механизмов РА, дифференциации РА с ОА и подагрой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Следует ориентироваться на следующие референтные пределы величин активности энзимов у здоровых людей (условную норму), вычисленные по формуле: М+2ст (95% вероятность):

- плазма крови (нмоль/мин/мл) — активность ГДА: 0,73-1,53; ПДА: 1,52-2,72; ПНФ: 0,64-1,04; ГФ: 0,64-1,36;

- лизаты эритроцитов (нмоль/мин/мл х 109 клеток) — активность ГДА: 13,2-20,8; ПДА: 9,4-13,0; ГФ: 3,82-5,82; (нмоль/мин/мл х Ю8 клеток) — активность ПНФ: 143,4-215,8;

- лизаты лимфоцитов (нмоль/мин/мл х Ю7 клеток) — активность ГДА: 9,4-12,9; ПДА: 6,1-9,2; ПНФ: 28,1-41,7; ГФ: 8,614,4.

2. Для выявления минимальной активности ревматоидного процесса, разграничения фаз клинической ремиссии и обострения целесообразно определять активность ПНФ в лизатах эритроцитов и активность ГДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, которые в 88-100% случаев выходят за референтные пределы здоровых людей.

3. Для оценки эффективности терапии больных РА с I степенью в ранние сроки целесообразно ориентироваться на клинические данные и показатели активности ПНФ, ГФ в лимфоцитах и ПНФ в эритроцитах. При II-III степени РА, практически, все энзимные показатели в те же сроки лечения достаточно четко отражают динамику клинического состояния больных.

4. При дифференциации РА с ОА или подагрой целесообразно ориентироваться на референтные пределы активности энзимов у здоровых людей. У больных РА с I-I1 степенью активности ГДА и ПНФ в эритроцитах в 69%, 100% случаев и 88%, 100% случаев, соответственно, выходят за верхние границы нормы. При РА с III степенью активность ПДА превышает норму в 100% случаев. В лимфоцитах при РА с I степенью активность ГДА в 88% случаев превышает верхние границы нормы, а при РА с III степенью активность ПНФ в 100% случаев выходит за

нижние пределы нормы. Подобных изменений активности энзимов не наблюдалось ни у одного больного ОА

5. При дифференциации РА с подагрой целесообразно ориентироваться на показатели активности ГЗДА, ПНФ в эритроцитах и ГДА ГФ, ГЗДА и ПНФ в лимфоцитах. При РА с II степенью активность ГЗДА в эритроцитах. выходит за нижние пределы нормы в 92% случаев, при РА с III степенью активность ПНФ превышает норму в 88-100% случаев. В лимфоцитах при РА с I степенью активности ГДА и ГФ в 88% и 100% случаев, соответственно, превышают верхние границы нормы; при II-III степени активность ГЗДА выше нормы в 68 и 100% случаев, соответственно, а при III степени активность ПНФ в 100% случаев выходит за нижние границы нормы. Подобных изменений активности энзимов при подагре не отмечалось.

ПУБЛИКАЦИИ

1. Бедина С.А, Мартемьянов В.Ф., Кукушкина Е.В., Рогаткина Т.Ф., Ермолаева RA Активность энзимов нуклеинового метаболизма в эритроцитах больных ревматоидным артритом // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. науч. работ / Под ред. акад. РАМН А Б. Зборовского. — Вып. XXVL —Волгоград, 2009. — С. 12-13.

2. Кукушкина Е.В., Мозговая Е.Э., Мартемьянов В.Ф., Зборовская И.А, Стажаров МЮ. Активность пуриннуклеозидфосфорилазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом// Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. на-

■ уч. работ / Под ред. акад. РАМН А.Б. Зборовского. — Вып. XXVI. — ; Волгоград, 2009. — С. 32-33.

3. Кукушкина Е.В., Фофанова Н.А, Хортиева С.С., Бедина С.А, Мартемьянов В.Ф. Активность гуаниндезаминазы и гуанозиндезаминазы в лизатах эритроцитов больных ревматоидным артритом II Актуальные 1 проблемы современной ревматологии. Сб. науч. работ / Под ред. акад.

■ РАМН А.Б. Зборовского. — Вып. XXVI. - Волгоград, 2009. - С. 33-34.

4. Мартемьянов В.Ф., Зборовский А.Б., Филимонова Ю.К., Мозговая Е.Э., Кукушкина Е.В. Активность энзимов гуанилового пула пурино-вого метаболизма в плазме крови больных ревматоидным артритом // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. науч. работ / Под ред. акад. РАМН А. Б. Зборовского. — Вып. XXVI. — Волгоград, 2009. — С. 41-42.

5. Стажаров М.Ю., Кукушкина Е.В., Мартемьянов В.Ф., Филимонова К).К. Энзимный профиль крови больных ревматоидным артритом в зависимости от клинических особенностей заболевания // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. науч. работ / Под ред. акад. РАМН А.Б. Зборовского. — Вып. XXVI. - Волгоград, 2009. - С. 75-76.

6. Зборовская И.А, Слюсарь О.П., Кукушкина Е.В., Григорьянц С.Р., Мартемьянов В.Ф., Мозговая Е.Э. Активность энзимов гуанилового пула пуринового метаболизма при подагре и ревматоидном артрите // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. науч. работ / Под ред. акад. РАМН А. Б. Зборовского. — Вып. XXVII. — Волгоград, 2010.—С. 39-40.

7. Кукушкина Е.В., Абрамов Н.К, Некрасова С.П., Бедина С.А, Мартемьянов В.Ф., Евдокимова Е.В. Энзимные методы исследований в дифференциации ревматоидного артрита и ревматоидной формы псо-риатического артрита // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сб. науч. работ / Под ред акад. РАМН А.Б. Зборовского. — Вып. XXVII. — Волгоград, 2010. — С. 50-51.

8. Мартемьянов В.Ф., Кукушкина Е.В., Бедина С.А, Мозговая Е.Э., Стажаров МЮ. Активность энзимов пуринового метаболизма в крови больных ревматоидным артритом с минимальной активностью патологического процесса // Вестн. современной клинич. медицины. Актуальные проблемы в терапевтической практике. Сб. науч. трудов конференции. — Казань, 2010. — С. 112-113.

9. Кукушкина Е.В., Мозговая Е.Э., Романов АИ. К исследованию активности энзимов гуа пило вой ветви пуринового метаболизма в периферической крови больных ревматоидным артритом // Кремлевская медицина. Клинический вестник. — 2010. — № 2. — С. 85-87.

КУКУШКИНА Елена Владимировна

КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЭНЗИМОВ ГУАНИЛОВОЙ ВЕТВИ ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА В ЛИЗАТАХ ЛИМФОЦИТОВ, ЭРИТРОЦИТОВ И ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печати 14.10.10. Формат 60x84/16 Печать офс. Уч.-изд. л. 1,8. Тираж 100 экз. Заказ № 470.

Отпечатано с готового оригинал- макета в типографии издательства «Перемена » 400131, Волгоград, пр.им. Ленина,27

 
 

Оглавление диссертации Кукушкина, Елена Владимировна :: 2010 :: Волгоград

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. ПУРИНОВЫЙ МЕТАБОЛИЗМ: МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ.

Глава 3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Выделение клеток крови и приготовление их лиза-тов.

3.2. Определение активности гуаниндезаминазы.

3.3. Определение активности гуанозиндезаминазы.

3.4. Определение активности пуриннуклеозидфосфо-рилазы.

3.5. Определение активности гуанозинфосфорилазы

Глава 4. АКТИВНОСТЬ ЭНЗИМОВ В КРОВИ ЗДОРОВЫХ

ЛЮДЕЙ.

Глава 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭНЗИМНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ У

БОЛЬНЫХ РА.

5.1. Энзимные показатели крови у больных РА всей группы.

5.2. Энзимные исследования у больных РА с I степенью активности процесса.

5.3. Энзимные исследования у больных РА с II степенью активности процесса.

5.4. Энзимные исследования у больных РА с III степенью активности процесса.

Глава 6. СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЭНЗИМОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РА, ПОДАГ

РОЙ И ОА.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ

 
 

Введение диссертации по теме "Ревматология", Кукушкина, Елена Владимировна, автореферат

Актуальность проблемы. Болезни костно-мышечной системы, к которым относится и ревматоидный артрит (РА), составляют до 15% всех хронических заболеваний, регистрируемых в Российской Федерации. Причем, за последние 10- лет отмечается рост числа заболеваний опорно-двигательного аппарата на-40% (55, 97). Медико-социальная значимость РА обусловлена достаточно высокой распространенностью болезни (до 2% населения), поражающей преимущественно» лиц трудоспособного возраста (чаще женщин), выраженной временной1 и стойкой потерей трудоспособности (второе место по случаям и третье — по дням среди всех причин нетрудоспособности); высокой инвалидизацией больных (в течение первых пяти лет болезни около 50% больных теряют трудоспособность), значительными экономическими затратами на лечение как со стороны государства, так и самих больных-,, сокращением продолжительности жизни на 510 лет, что делает борьбу с РА весьма актуальной медико-социальной проблемой.

Достаточно сложна первичная диагностика РА, так как дебют и дальнейшее течение болезни по клинической симптоматике нередко напоминают другие заболевания суставов: остеоартроз (ОА), подагру, реактивные артриты, что делает дифференциацию болезней суставов весьма актуальной проблемой. Но даже при правильной и своевременной диагностике РА, течение которого характеризуется чередованием периодов обострений и ремиссий, нередко возникают сложности в распознавании активности ревматоидного процесса, часто приобретающего хроническое, субклиническое течение с нормальными параклиническими показателями, что приводит к несвоевременной и неадекватной терапии.

Борьба с РА осложняется неясностью многих аспектов этиопатогене-за заболевания. Патогенез РА представляется весьма сложным, включающим разнообразные звенья: воспалительные, дистрофические, аллергические, генетические, инфекционные, иммунологические, из которых наиболее интенсивно изучаются последние, и на их нормализацию направлено основное лечение больных. Участие иммунных механизмов в патогенезе РА не вызывает сомнений; но,, в то же время, используемые в лечении больных различные иммуномодуляторы часто не достигают желаемого эффекта. Не исключено, что. это'может быть обусловлено тем, что иммунные нарушения являются не единственным и основным патогенетическим механизмом РА или тем, что иммунные.дефекты являются не первопричиной, а следствием каких-то других процессов, инициирующих иммунную дискоординацию. Вследствие этого и иммунные препараты оказываются малоэффективными, так как их действие направлено не на первопричину, а на следствие.

В основе нарушений регуляции иммунных процессов лежат функциональные расстройства иммунокомпетентных клеток, в том числе и лимфоцитов, метаболизм которых при РА изучен недостаточно. В. то же время достаточно хорошо известно, что некоторые пуриновые метаболиты (гуанозин, аденозин) играют важную роль в метаболизме лимфоцитов; их созревании, дифференциации; пролиферации и, следовательно, могут иметь прямое отношение к иммунорегуляторным процессам в организме в норме и патологии (18; 19, 27, 62, 80, 134).

Содержание пуриновых нуклеозидов в клетках, в том числе и в лимфоцитах, регулируется соответствующими ферментами, и по их активности представляется возможность суждения о концентрации пуриновых метаболитов в клетках крови.

Исходя-из этого, нам представляется, что изучение активности энзимов, участвующих в метаболизме пуриновых соединений и влияющих на функции лимфоцитов; является достаточно актуальным и перспективным направлением, способствующим пониманию отдельных звеньев патогенеза РА с иммуно-биохимических позиций. Кроме того, ферменты. являются весьма чувствительными индикаторами различных воспалительных, дистрофических процессов, и определение их активности имеет хорошие перспективы в диагностике различных заболеваний. Исходя из этого, нами в работе были изучены активности четырех энзимов гуаниловой ветви пури-нового метаболизма (ПМ): гуаниндезаминазы (ГДА), гуанозиндезаминазы (ГЗДА), пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и гуанозинфосфорилазы (ГФ) в трех биологических средах: лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных РА. Выбор этих ферментов обусловлен их важной ролью в метаболизме пуринов.

Цель исследования. Повышение качества диагностики активности ревматоидного процесса, выявление особенностей гуаниловой ветви пури-нового метаболизма в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных РА с патогенетических позиций и в сравнительном аспекте с больными ОА и подагрой, изучение возможности использования показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ для оценки эффективности проводимой терапии больных РА.

Задачи исследования.

1. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови практически здоровых людей в зависимости от пола и возраста; установить референтные пределы активности энзимов, изучить корреляционные связи между активностью энзимов в различных биологических средах.

2. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах (лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови) у больных РА в процессе стационарного лечения: при поступлении, через 8-10 дней лечения, перед выпиской из стационара и оценить возможность использования энзимных показателей в объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных РА.

3. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах у больных РА в зависимости от степени активности патологического процесса, клинико-анатомических форм, характера течения, стадии поражений суставов, их функционального класса (ФК), наличия или отсутствия ревматоидного фактора (РФ).

4. Изучить корреляционные связи между активностью энзимов в различных биологических средах у больных РА с различной активностью патологического процесса.

5. Оценить информативность энзимных показателей крови в индикации, минимальной активности ревматоидного процесса в сравнении с общепринятыми острофазовыми клинико-иммуно-биохимическими показателями, используемыми для выявления активности процесса: СОЭ, СРБ, сиаловые кислоты, гамма-глобулины и др.

6. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных контрольной группы: ОА и подагрой и провести сравнительные исследования энзимных показателей крови у больных РА с больными ОА и подагрой и отобрать наиболее информативные энзимные показатели, способствующие дифференциации этих трех заболеваний.

Научная новизна исследования.

Впервые у больных РА в трех биологических средах: лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови были проведены исследования активности четырех ферментов гуаниловой ветви ПМ: ГДА, ГЗДА, ПНФ' и ГФ и проведен анализ зависимости активности этих энзимов от степени активности процесса, характера течения, клинико-анатомических форм, стадии поражения суставов, наличия РФ, ФК суставов и оценено влияние этих клинических факторов на своеобразие энзимного профиля крови. Доказано, что наибольшее влияние на энзимные показатели крови оказывает выраженность активности ревматоидного процесса. Показана более высокая чувствительность и информативность показателей активности ПНФ'в эритроцитах, ГДА, ПНФ и ГФ в лимфоцитах в отражении минимальной активности ревматоидного процесса, по сравнению с общепринятыми острофазовыми лабораторными показателями (СОЭ, СРБ и др.).

Установлено, что отдельные энзимные показатели крови способствуют дифференциации РА, ОА и подагры. Показано, что выявленные изменения активности энзимов в лимфоцитах способны вызвать нарушения функциональных свойств лимфоцитов и обусловить дискоординацию иммунных процессов при РА.

Установлено, что энзимные показатели крови в комплексе с клиническими данными способствуют объективизации контроля эффективности проводимой терапии больных РА. Практическая значимость.

Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальных проявлений активности патологического процесса и назначению своевременной адекватной терапии, а также уточнению степени активности патологического процесса, характера течения заболевания и объективизации оценки эффективности проводимой терапии. Исследования активности вышеуказанных энзимов в трех биологических средах в комплексе с клиническими данными могут оказать существенную помощь при дифференциации РА, ОА и подагры.

Внедрение в практику.

Методы определения активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови с целью уточнения степени активности ревматоидного процесса и дифференциации РА, ОА и подагры внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда.

С результатами проведенных энзимных исследований, возможностями энзимной диагностики в ревматологии, их перспективой систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, аспиранты, клинические ординаторы, практические врачи на семинарах, научно-практических и клинических конференциях.

Основные положения, выносимые на защиту.

Показатели активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими' данными способствуют выявлению минимальной активности ревматоидного процесса, уточнению степени активности, характера течения, объективизации оценки эффективности проводимой терапии, дифференциации PA, OA и подагры. Публикации и апробация работы.

Основные положения диссертации опубликованы в ** печатных работах. Материалы диссертации докладывались в 2008-2009 гг. на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета, НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 236 страницах текста (шрифт гарнитуры Times New Roman кегля 14 пт с полуторным интерлиньяжем) и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологическом значении пури-нового метаболизма и его отдельных ферментов; части II — собственных исследований, состоящей из 5 глав, включающих клиническую характеристику больных, методы исследований, результаты проведенных исследований, их обсуждение, выводы, практические рекомендации.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лазатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом"

197 ВЫВОДЫ

1. У больных РА с I степенью активности процесса, по сравнению со здоровыми, в плазме выше активность ГДА, ПНФ и ниже ГЗДА, в ли-затах лимфоцитов и-эритроцитов выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА. Чем выше степень активности ревматоидного процесса, тем выше в плазме активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА, в эритроцитах — выше активность ГФ и ГЗДА, в лимфоцитах — ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ и выше ГЗДА. Между всеми степенями активности процесса определяются выраженные энзимные различия, способствующие их дифференциации.

2. Наиболее информативными в отражении минимальной активности ревматоидного процесса оказались: в эритроцитах показатели активности ПНФ, в лимфоцитах — ГДА, ПНФ и ГФ, которые выходили за референтные пределы здоровых в 87,5% — 100% случаев, в то время как показатели СРБ, СОЭ, сиаловых кислот, гамма- и альфа-2-глобулинов, иммуноглобулинов в у этих же больных — только в 31,3-37,5% случаев.

3. Наиболее выраженные изменения активности энзимов в трех биологических средах наблюдаются у больных РА при системных поражениях, БПТ, серопозитивной форме, но наибольшее влияние оказывает выраженность активности патологического процесса. Изученные энзимные показатели крови способствуют уточнению степени активности ревматоидного процесса, клинико-анатомических форм и вариантов течения заболевания.

4. Наиболее лабильными в отражении меняющегося клинического состояния больных в ранние сроки лечения (8-10 дней) при минимальной активности ревматоидного процесса были показатели активности ПНФ и ГФ в лимфоцитах и ПНФ в эритроцитах, на которые целесообразно ориентироваться при оценке адекватности используемой терапии. При II-III степени, практически, все энзимные показатели в те же сроки лечения достаточно четко отражают динамику клинического состояния больных.

5. Период начинающейся клинической ремиссии у больных РА в процессе стационарного лечения, сопровождается нормализацией (референтные пределы, здоровых) активности всех изученных энзимов в трех биологических средах при I степени активности ревматоидного процесса; при II« степени — нормализацией в плазме активности ГЗДА, ГФ, в эритроцитах — ГЗДА, ПНФ и ГФ, в лимфоцитах — всех энзимов; при III степени' — в плазме нормализацией активности ГЗДА, в эритроцитах и лимфоцитах — ПНФ и ГФ.

6. Корреляционный- анализ выявил в плазме у больных РА с I степенью наличие статистически значимых прямых связей между ГДА—ПНФ, при II степени — прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратных умеренных связей между ГДА— ГЗДА и ГЗДА—ПНФ, при III степени — прямых высокопрочных связей между ГДА—ПНФ и ГДА—ГФ; в лимфоцитах при I степени — прямых статистически значимых связей между ГДА—ПНФ, ГДА— ГФ и ПНФ—ГФ, при II степени — прямых умеренных связей между ГДА-—-ПНФ и обратных слабых и умеренных связей между другими ферментами; в эритроцитах при I степени — наличие прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ, ГДА—ГФ, ПНФ—ГФ и обратных связей между ГЗДА—ПНФ и ГЗДА—ГФ, при И степени — упрочение тех же связей, что и при I степени, при III степени — наличие обратных умеренных связей между ГДА—ГЗДА, ГДА—ГФ, ГЗДА—ПНФ, ПНФ—ГФ и прямых умеренных связей между ГДА—ПНФ и ГЗДА— ГФ.

7. У больных РА (всей группы), по сравнению с больными подагрой (всей группы), в плазме выше активность ГДА, ГЗДА и ПНФ, в лизатах эритроцитов выше активность ГДА, ПНФ, ГФ и ниже ГЗДА, в лизатах лимфоцитов выше активность ГЗДА, ГФ, ниже активность ПНФ.

8. У больных РА (всей группы), по сравнению с больными О А с синови-том, в плазме выше активность ГДА и ПНФ, в лизатах эритроцитов выше активность ГДА, ПНФ и ГФ, в лизатах лимфоцитов ниже активность ПНФ и ГФ.

9. Значительно сниженные активности ПНФ, ГФ и повышенная активность ГЗДА в лимфоцитах больных РА, особенно при тяжелом течении заболевания, свидетельствуют о выраженных нарушениях ПМ в иммунокомпетентных клетках, что может привести к расстройству процессов созревания, пролиферации и дифференциации лимфоцитов, нарушению их функциональных свойств, дискоординации иммунной регуляции, что может составить один из наиболее важных патогенетических механизмов РА.

10. Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах: лизатах эритроцитов, лимфоцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальной" активности ревматоидного процесса, уточнению степени активности процесса, клинических форм, характера течения, объективизации оценки эффективности проводимой терапии, выявлению патогенетических механизмов РА, дифференциации РА с ОА и подагрой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Следует ориентироваться на следующие референтные пределы величин активности энзимов у здоровых людей (условную норму), вычисленные по формуле: М±2сг (95% вероятность):

- плазма крови (нмоль/мин/мл) — активность ГДА: 0,73-1,53; ГЗДА: 1,52-2,72; ПНФ: 0,64-1,04; ГФ: 0,64-1,36;

- лизаты эритроцитов (нмоль/мин/мл х 109 клеток) — активность ГДА: 13,2-20,8; ГЗДА: 9,4-13,0; ГФ: 3,82-5,82; (нмоль/мин/мл х 108 клеток) — активность ПНФ: 143,4-215,8;

- лизаты лимфоцитов (нмоль/мин/мл х 107 клеток) — активность ГДА: 9,4-12,9; ГЗДА: 6,1-9,2; ПНФ: 28,1-41,7; ГФ: 8,614,4.

2. Для выявления минимальной активности ревматоидного процесса, разграничения фаз клинической ремиссии и обострения целесообразно определять активность ПНФ в лизатах эритроцитов и активность ГДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, которые в 88-100% случаев выходят за референтные пределы здоровых людей.

3. Для оценки эффективности терапии больных РА с I степенью в ранние сроки целесообразно ориентироваться на клинические данные и показатели активности ПНФ, ГФ в лимфоцитах и ПНФ в эритроцитах. При II-III степени РА, практически, все энзимные показатели в те же сроки лечения достаточно четко отражают динамику клинического состояния больных.

4. При дифференциации РА с ОА или подагрой целесообразно ориентироваться на референтные пределы активности энзимов у здоровых людей. У больных РА с I-II степенью активности ГДА и ПНФ в эритроцитах в 69%, 100% случаев и 88%, 100% случаев, соответственно, выходят за верхние границы нормы. При РА с III степенью активность ГЗДА превышает норму в 100% случаев. В лимфоцитах при РА с I степенью активность ГДА в 88% случаев превышает верхние границы нормы, а при РА с III степенью активность ПНФ в 100% случаев выходит за нижние пределы нормы. Подобных изменений активности энзимов не наблюдалось ни у одного больного ОА.

5. При дифференциации РА с подагрой целесообразно ориентироваться на показатели активности ГЗДА, ПНФ в эритроцитах и ГДА, ГФ, ГЗДА и ПНФ в лимфоцитах. При РА с II степенью активность ГЗДА в эритроцитах выходит за нижние пределы нормы в 92% случаев, при РА с I-II степенью активность ПНФ превышает норму в 88-100% случаев. В лимфоцитах при РА с I степенью активности ГДА и ГФ в 88% и 100% случаев, соответственно, превышают верхние границы нормы; при II-III степени активность ГЗДА выше нормы в 68 и 100% случаев, соответственно, а при III степени активность ПНФ в 100% случаев выходит за нижние границы нормы. Подобных изменений активности энзимов при подагре не отмечалось.

202

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Кукушкина, Елена Владимировна

1. Безирджян X. О., Акопян Ж. И. Сравнительное изучение пуриннукле-озидфосфорилазы из почек, селезенки, печении эмбрионов кролика // Биохимия. — 1987. — Т. 52, № 12. — С. 2022—2028.

2. Безирджян X. О., Кочерян Ш. М., Акопян Ж. И. Выделение гексамер-ной формы пуриннуклеозидфосфорилазы Е. coli. Сравнительное исследование тримерной и гексамерной форм фермента // Биохимия. -1986. — Т. 51, № 7. — С.1085—1092.

3. Брискер А. Д., Григорчук В. Н. Диагностическое и прогностическое значение определения активности гуаниндезаминазы при болезни Боткина // Сов. медицина. — 1972. — № 5: — С. 53—55.

4. Буриан А. Е., Федоров Н. А. Активность гуаниндезаминазы и адено-зиндезаминазы при хроническом гломерулонефрите // Клин, медицина. — 1980. — Т. 58, № 12. — С. 92—95.

5. Дмитриенко Н.П. Внеклеточный аденозинтрифосфат и его влияние на функции клеток // Укр. биохимический журн. — 1990. — № 2. — С. 313.

6. Дмитриенко Н.П. Ферменты превращения внеклеточных адениннук-леотидов // Укр. биохимический журн. — 1981. — № 1. — С. 114-123.

7. Елисеев В.В., Марихина Б.Л. Сравнительная оценка противогипокси-ческих свойств некоторых нуклеозидов и нуклеотидов // Хим.-фарм. журн. — 1986. — С. 271-277.

8. Елисеев В.В., Слободская В.В, Ильин Г.И., Костин Э.Д. Влияние рибоксина, уридина, уридин-5-монофосфата и гуанозина на дистрофию миокарда // Хим.-фарм. журн. — 1985. — № 6. — С. 694-696.

9. Земсков В.М. Иммуномоделирующие эффекты нуклеозидов и их производных. Дефекты нуклеинового метаболизма и иммунодефициты // Иммунология. — 1990. — № 3. — С. 4-8.

10. Клиническая иммунология и аллергология. Под редакцией Йегера Л: В 3-х томах. Пер. с нем. Т. 1. - М.: Медицина, 1990. — 526 с.

11. Ленинджер А. Л. Основы биохимии: В 3 т. Пер. с англ. — М.: Мир, 1985. —Т. 2. —368 с.

12. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека: Пер. с англ. — М.: Мир, 1980. —366 с.

13. Марри Р., Гриннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: В 2-х томах. Пер. с англ. — Т. 2. — М.: Мир, 1993. — 245 с.

14. Мартемьянов В. Ф., Зборовский А. Б., Стажаров М. Ю. и др. Активность энзимов пуринового метаболизма при ревматоидном артрите, остеоартрозе и подагре // Вестник Волгоградской медицинской академии. — Волгоград, 2000. — Т. 56, Вып. 6. — С. 104—107.

15. Мецлер Д.Э. Биохимия: В 3-х томах. Пер. с англ. — Т. 3. — М.: Мир, 1980.—487 с.

16. Митченко И. К., Онойко И. М. Диагностическое значение активности гуаниндезаминазы (гуаназы) сыворотки крови при болезни Боткина // Врачебн. дело. — 1970. — № 12. — С. 130—133.

17. Насонов E.JI. Новые аспекты фармакотерапии ревматоидного артритаблокада КО-стимуляции Т-лимфоцитов // Рус. мед. журн. — 2009.1. Т. 17, №13.—С. 150-155.

18. Насонов Е.Л. Перспективы применения статинов в ревматологии // Рус. мед. журн. — 2003. — Т. 11, № 32. — С. 1273-1276.

19. Насонов Е.Л. Эффективность и безопасность ингибиторов; фактора некроза опухоли а при ревматоидном артрите // Рус. мед. журн; — 2008. — Т. 16, № 24. — С. 1602-1609.

20. Насонов Е.Л., Каратеев Д.Е., Чичасова Н.В. Новые возможности применения лефлуномида при ревматоидном артрите // Русский мед. журн. —2005.—Т. 13, №24, — С. 1573-1576.

21. Насонов Е.Л., Лукина Г.В., Сигидин Я.А. и др. применение монокло-нальных антител к В-лимфоцитам (ритуксимаб) при ревматоидном артрите в России (предварительные результаты Российского регистра) // Тер. архив. — 2008. — № 8. — С. 57-62.

22. Насонова В.А., Астапенко М.Г. Клиническая ревматология: Руководство для врачей. М.: Медицина, 1989. — 592 с.

23. Некрасова С. П., Хортиева С. С., Черных Т. П. и др. Системная склеродермия и пуриновый метаболизм // Актуальные проблемы современной ревматологии: Сб. науч. работ. / Под ред. акад. А.Б. Зборовского— Волгоград, 2001. — С. 130—131.

24. Пересыпкин В.В. Клинико-патогенетическое значение элементов про-и антиоксидантной систем крови у больных остеохондрозом поясничного отдела позвоночника и их изменения в процессе комплексной терапии : Дис. . канд. мед. наук. —Волгоград, 2001. — 216 с.

25. Потапова Г.И., Храмцова С.Н., Сухов Т.Н., Мухоян И.А. Биохимические механизмы нарушений функционирования лимфоцитов и макрофагов при злокачественном росте // Вестн. РАМН. — 1993. — № 4. — С. 3-7.

26. Рачинский Л.Ф. Сравнительная оценка эффективности антигипокси-ческих препаратов в экспериментальной терапии острой кровопотери: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Ленинград, 1974. — 27 с.

27. Робинсон М.В., Топоркова Л.Б., Труфакин В.А. Морфология и метаболизм лимфоцитов. — Новосибирск: Наука, Сиб. отд-е, 1986. — 127 с.

28. Робинсон М.В., Труфакин В.А. Ферменты пуринового обмена в жизнедеятельности иммунокомпетентных клеток // Успехи современной биологии. — 1993. — Т. 113, Вып. 1. — С. 82-93.

29. Родин А. Ю., Давидян В. С., Бедина С. А. и др. Энзимный профиль крови у больных с ассиметричной формой псориатического артрита // Актуальные проблемы современной ревматологии и кардиологии: Сб. науч. работ— Волгоград, 2004. — Вып. 21. — С. 93—94.

30. Рябов Г.А., Ладыгин. С.С., Азизов Ю.М., Пасечник И.Н. Оценка гипоксии по метаболизму пуриновых соединений // Вестн. АМН СССР. — 1991. —№7. —С. 3-7.

31. Соковнина Я. М., Пестина Т. И., Тенцова И. А. и др. Аденозиндезами-наза и пуриннукггеозидфосфорилаза тромбоцитов крови при различных гематологических заболеваниях // Вестн. АМН СССР. — 1984. — № 8. — С. 75—80.

32. Соковнина Я. М., Пестина Т. И., Тенцова И. А. и др. Пуриннуклео-зидфосфорилаза тромбоцитов крови при различных заболеваниях крови // Вопр. мед. химии. — 1985. — Т. 31, № 2. — С. 76—79.

33. Соковнина Я. М., Пестина Т. И., Чижова А. И. и др. Аденозиндезами-наза тромбоцитов крови при различных гематологических заболеваниях // Вопр. мед. химии. — 1985. — Т. 31, № 3. — С. 26—30.

34. Стажаров М.Ю. Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов пуринового метаболизма и антиоксидантной системы крови у больных ревматоидным артритом, остеоартрозом и подагрой: Дис. . канд. мед. наук. — Волгоград, 1998. — 220 с.

35. Страйер П. Биохимия: В 3 т. Пер. с англ. — Т. 2. — М.: Мир, 1984. — 307 с.

36. Талалаева Л. Е. Некоторые показатели пуринового обмена у детей, больных сахарным диабетом: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Москва, 1974. — 29 с.

37. Тиле П., Шредер Х.Е. Эпидемиология и патогенез нарушений пуринового обмена // Тер. архив. — 1987. —№4. — С. 14-18.

38. Тогузов Р. Т., Тихонов Ю. В., Талицкий В. В. и др. Регуляция метаболизма пуриновых и пиримидиновых производных — основа диагностики патологических состояний в эксперименте и клинике // Вестник АМН СССР. — 1986. — № 8. — С. 40—52.

39. Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. — София, 1966. — 1038 с.

40. Турчина А.Г., Москвичев Б.В. Елисеев В.В., Башкович А.П. Применение в медицине гуаниновых соединений и способы их получения // Антибиотики и химиотерапия. — 1989. — Т. 39, № 12. — С. 938-943.

41. Федоров H.A., Радуловацкий М.Г., Чехович Г.Е. Циклические нуклео-тиды и их аналоги в медицине. — М.: Медицина, 1990. — 191 с.

42. Федоров Н. А., Фураева Л. Л., Фомиченко Л. Б. и др. Активность гуа-ниндезаминазы сыворотки крови в норме и при гепатотропных воздействиях // Лаб. дело. — 1969. —№ 9. — С. 539—541.

43. Филановская Л.И., Блинов М.Н. Ферменты обмена пуриновых нуклео-тидов как биохимические маркеры дифференцировки нормальных и лейкозных клеток (обзор литературы) // Вопр. мед. химии. — 1986. —Т. 32, № 6. — С. 10-16.

44. Филановская Л.И., Блинов М.Н., Того A.B. Влияние пуриновых нук-леозидов на лейкоциты в норме и при лейкозах // Экспериментальная онкология. — 1987. — Т. 9, № 3. — С. 39-43.

45. Филановская Л. И., Блинов М. Н., Того А. В. и др. О деградации пуринов в лейкоцитах при острых нелимфобластных лейкозах // Вопр. мед. химии. — 1988. — Т. 34, Вып. 6. — С. 71—76.

46. Филановская Л. И., Вартанян Н. Л., Того А. В. и др. Ферменты катабо-лических превращений пуриновых нуклеотидов лимфоцитов в норме и при хроническом лимфолейкозе // Вопр. мед. химии. — 1985. — Т. 31, №3. —С. 48—52.

47. Филановская Л. И., Того А. В., Щербакова Е. Г. и др. Энзиматические маркеры при хроническом миелолейкозе и их значение для инденти-фикации бластного криза // Вопр. онкологии. —-1990. — Т. 36, № 9. — С. 1053—1058.

48. Харченко М1 Ф., Рыбакова Л. П~, Филановская Л. И. и др. Некоторые биохимические особенности лейкоцитов при бластном кризе хронического миелолейкоза// Вопр. мед. химии. — 1998. — Т. 44, Вып. 3. — С. 274—280.

49. Черных Т. П., Бедина С. А., Стажаров М. Ю. и др. Активность сывороточной гуаниндезаминазы у больных ревматоидным артритом // Мат. юбилейной конф., посвященной 15-летию НИИ КиЭР РАМН — Волгоград, 2000. — С. 621

50. Черных Т. П., Мякишев М. В., Стажаров М. Ю. Клинико-патогенетическое значение ферментов пуринового обмена при остео-артрозе // Актуальные проблемы совр. ревматологии: Тез. докл. научн. конф. — Волгоград, 1999. — С. 111.

51. Чичасова Н.В., Имаметдинова Г.Р. Препарат найз (нимесулид) в лечении заболеваний суставов // Науч. практич. ревматология. — 2004. — №3. —С. 34-36.

52. Adam Т., Sevcik J., Fairbanks L. D., Bartak P. Determination of Purine Nucleoside Phosphorylase Activity in Human Erythrocytes by Capillary Electrophoresis // J. Chromatogr. B. Biomed. Scien. Appl. — 1997. — Vol. 698, № 1-2. — P. 308—311.

53. Alfazema L. N., Hows M. E., Howells-S., Perrett D. Optimised Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography of UV-absorbing Compounds in Urine // Adv. Exp. Med. Biol. — 1998. — Vol. 431. — P. 171—176.

54. Appelboom Т., Mandelbaum J., Vertongen F. Purine enzyme levels in rheumatoid arthritis // J. • Rheumatol. — 1985. — Vol. 12, № 6. — P. 1075—1078.

55. Armstrong M.A., Shall S., Hawkins S.A. et al. Reduction of monocyte 5'-nucleotidase activity by gamma-interferon in multiple sclerosis and autoimmune diseases // Ann. Neurol. — 1988. — Vol. 24, № 1. — P. 12—16.

56. Amrett F.C., Edworth SJVL, Bloch D.A. et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis //Arthritis Rheum. — 1988. — Vol. 31. — P. 315-324.

57. Bantia S., Montgomery J. A., Johhnson H. G., Walsh G. M. In Vivo and in Vitro Pharmacology Activity of the Purine Nucleoside Phosphorylase Inhibitor BCX-34: the Role of GTP and dGTP // Immunopharmacology. — 1996. — Vol. 35, № 1. — P.53—63.

58. Benveniste P., Cohen A. p53 Expression is required for thymocyte apop-tosis induced by adenosine deaminase deficiency // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. — 1995. — Vol. 92. — № 18. — P. 8373-8377.

59. Biron K. K, Stanat S.C., Sorrell J.B. et al. Metabolic activation of the nucleoside analog 9-{2-hydroxyl-1 -(hydroxymethyl)ethoxy.methyl}guanine in human cytomegalovirus // Prot. Nat. Acad. Sci. USA. — 1985. — Vol. 82. — № 8. — P. 2473-2477.

60. Bowen T. L., Lin W. C., Whitman W. B. Characterization of Guanine and Hypoxanthine Phosphoribosyltransferases in Methanococcus Voltae // J. Bacterid. — 1996. — Vol. 178, № 9. — P. 2521—2526.

61. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood // Scand.I. Clin. Lab. Invest. — 1968. — Vol. 21. — Suppl. 97 (Paper IV) —P. 77-89.

62. Boyum A. Separation of white blood cells // Nature. — 1964. — Vol. 204. — P. 793-794.

63. Broome C.B., Graham M.L., Saulabury F.T., Hershfield M.S., Buckley R.H. Correction of purine nucleoside phosphorylase deficiency by transplantation of allogeneic bone marrow from a sibling // J. Pediatr. — 1996. -Vol.128. №3.-P.373-376.

64. Buc H.A., Moncion A., Hamet M. et al. Influence of adenosine deaminase inhibition on the phosphoinoside turnover in the initial stages of human T cell activation // Eur. J. Immunol. — 1990. — Vol. 20. — P. 611-615.

65. Camici M., Tozzi M. G., Allegrini S. et al. Purine Savage Enzyme Activities in Normal and Neoplastic Human Tissues // Cancer Biochem. Biophys.1990. — Vol. 11, № 3. — P. 201—209.

66. Canepari S., Caruncchio V., Girelli A. M., Messina A. New Method for Guanase Activity Measurement by High-Performance Liquid Chromatography // J. Chromatogr. — 1993. — Vol. 616, № 1. — P. 25—30.

67. Caraway W. T. Colometric Determination of Serum Guanase Activity // Clin. Chem. — 1966. —Vol. 12. —P. 187—193.

68. Castellano B., Gonzalez B., Finsen B. R., Zimmer J. Histochemical Demonstration of Purine Nucleoside Phosphorylase in Microglial and Astroglial Cells Adult Rat Brain // J. Histochem. and Cytochem. — 1990. — Vol. 38, № 11. —P. 1535—1539.

69. Castro-Gaga M., Novo I., del Rio R. et al. Effects of Chronic Alopurinol Therapy on Purine Metabolism in Duchenne Muscular Dystrophy // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1987. — Vol. 147, № 1. — p. 152— 157.

70. Ceballos G., Tuttle J. B., Rubio R. Differential Distribution of Purine Metabolizing Enzymes between Glia and Neurons // J. Neurochem. — 1994.

71. Vol. 62, № 3. — P. 1144—1153.

72. Chantin C., Bonin B., Boulien R., Bory C. Liquid Chromatography Study of Purine Metabolism Abnormalities in Purine Nucleoside Phosphorylase Deficiency // Clin. Chem. — 1996. — Vol. 42, № 2. — P. 326—328.

73. Chor H. S. Purification and Partial Characterization of Purine Nucleoside Phosphorylase from Serrtia Marcescens // Biosci. Biotechnol. Biochem. — 1998. — Vol. 62, № 4. — P. 667—671.

74. Ciccarelli R., Dilorio P., Giuliani P. et al. Rat cultured astrocytes releas guanin-based purines in basal conditions and after hypoxia-hypoglicemia // Glia. — 1998. — Vol. 25. — № 1. — P. 93-98.

75. Corny R. M., Bantia S., Turner H. S. et al. Effects of a Novel Purine Nucleoside Phosphorylase Inhibitor, BCX-34, on Activation and Proliferation of Normal Human Lymphoid Cells // Immunopharmacology. — 1998. — Vol. 40, № 1. —P. 1—9.

76. Davies Z. P., Taylor K. M. Rat Brain Guanine Deaminase: Correlation with Regional Levels of Cyclic GMP Phosphodiesterase // J. Neurochem. — 1979. — Vol. 33, № 4. p. 951—952.

77. Durak I., Cetin R., Canbolat O. et al. Adenosine Deaminase, 5'-Nucleotidase, Guanase and Cytidine Deaminase Activities in Gastric Tissue from Patients with Gastric Cancer // Cancer Lett. — 1994. — Vol. 84. № 2. — P. 199—202.

78. Durak J., Beduk Y., Kavutcu M. et al. Activity of the Enzymes Participating in Purine Metabolism of Cancerous and Noncancerous Human Kidney Tissue // Cancer Invest. — 1997. — Vol. 15, № 3. — P. 212—216.

79. Edwin M., Knights J. R., James L. et al. Serum Guanase Determination: a Liver Function Test // J. Lab. & Clin. Med. — 1965. — Vol. 65, № 2. — P. 355—360.

80. Ellis G., Spooner R. J., Goldberg D. M. Automated Kinetic Assays for Routine Determination of Adenosine and Guanase Activities of Human Serum // Clin. Chem. Acta. — 1973. — Vol. 47, № 1. — P. 75—87.

81. Ericson A., Niklasson F., Verdier C. Metabolism of guanosine in human erytrocytes // Vox sang. — 1985. — Vol. 48. — № 2. — P. 72-83.

82. Farcas W. R., Stanawitz T. Effects of Plumbous Ion on Guanine Metabolism // J. Inorg. Biochem." — 1979. — Vol. 11, № 1. — P. 31—38.

83. Fleischman A., Hershfield M. S., Toutain S. et al. Adenosine Deaminase Deficiency and Purine Nucleoside Phosphorylase Deficiency in Common Variable Immunodeficiency // Clin. Diagn. Lab. Immunol. — 1998. — Vol. 5,№3. —P. 399—400.

84. Fouw N.J., Ma D.D., Michalevicz R. et al. Differential cytotoxicity of de-oxyguanosine and' 8-aminoguanosine for human leukemic cell lines and normal bone marrow progenitor cells // Hematol. Oncol. — 1984. — Vol. 2. —№2. —P. 189-197.

85. Fowa N.I., Ma D.D., Michalevicz R. et al.Differential cytotoxicity of de-oxyguanosine and 8-aminoguanosine for human leukemic cell lines and normal bone marrow progenitor cells // Hematol. Oncol. — 1984. —Vol. 2 — №2. —P. 189-197.

86. Franco R., Canela E. I., Bozal J. Purine Catabolism in Rat Brain // Rev. Esp. Fisiol. — 1981. — Vol. 37, № 3. — P. 355—362.

87. Fredholm B.B. Analisis of purines // Life Sci. — 1987. — Vol. 41. — № 17. —P. 837-840.

88. Fusté R., Bozal J. Mecanismo reaccional de la purin nucleósido fosforilasa de hígado de ave. II. Inhibición por los productos de la reacción // Rev. Esp. Fisiol. — 1975. — Vol. 31, № 4. — P. 265—269.

89. Gilbertsen R. B., Scott M. E., Dong M. K. et al Preliminary Report on 8-Amino-9-(2-thienylmethyl)guanine, a novel and-Potent Purine Nucleoside Phosphorylase Inhibitor // Agents and Actions. — 1987. — Vol. 21, № 34. —P. 272—274.

90. Greengard O., Head J. F., Goldberg S. L. Uridine Kinase, Adenilate Kinase and Guanase in Human Lung Tumors II Cancer Res. — 1080. — Vol. 40, №7. —P. 2295—2299.

91. Gurpta N. K., Glatz M. D. Isolation and Characterization of Human Liver Guanine Deaminase // Arch. Biochem. Biophis. — 1985. — Vol. 236, № 1. — P. 266—267.

92. Hansen S. U., Bols M. 1-Azaribofuranoside Analogues as Designed Inhibitors of Purine Nucleoside Phosphorylase. Synthesis and Biological Evaluation // Acta Chem. Scand. — 1998. — Vol.53, № 10. — P. 1214—1222.

93. Hayashi K., Ito S. Study of the Procedure to Prove Guanase Histochemi-cally and Distribution of the Enzyme in Human Tissues // Nippon Sho-kakibyo Gakkai Zasshi. — 1987. — Vol. 84, № 4. — P. 878—888.

94. Hirschhorn R. Conversion of human Erythrocyte Adenosine Deaminase activity to different tissue-specific Isozymes // J. Clin. Invest. — 1975. — Vol. 55. —P. 661-667.

95. Hosek B., Bonácek J., Kautská J. The Effect of Hypoxia on the Activity of Purine Nucleoside Phosphorylase in Rat // Biomed. Biochem. Acta. — 1986. — Vol. 45, № 3. — P. 281—284.

96. Hosek B., Bonácek J., Sikulová J. Purine metabolizing enzyme activities in radiosensitive tissues of mice after sublethal whole — body irradiation // Gen. Physiol, and Biophys. — 1989. — Vol. 8, № 1. — P. 63—71.

97. Ito S., Syundo J., Tsuji Y. et al. Histochemical and biochemical studies of guanase in the kidney // Jap. J. Clin. — 1987. — Vol. 16. — № 3. -— P. 225-228.

98. Ito S., Takaoka T., Kajimoto Y. et al. Prevention of Posttransfusional nonA, non-B-Hepatitis by a Screening Test for Hepatitis C virus Antibody of Donor Blood // Tokushima J. Exp. Med. — 1991. — Vol. 38, № 1-2. — P. 19—23.

99. Ito S., Takaoka T., Kishi S. et al. Clinical and Experimental Studies of the Determination of Serum Guanase Activity in Acute Myocardial Infarction // Jpn. Circ. J. — 1981. — Vol. 45, № 5. — P. 525—531.

100. Ito S., Takaoka T., Mori H., Teruo A. A Sensitive New Method for Measurement of Guanase with 8-Azaguanine in Bicine bis-Hydroxyethylglycine Buffer as Substrate // Clin. Chem. Acta. — 1981. — Vol. 115, № 2. — P. 135—144.

101. Ito S., Takaoka T., Nakaya Y. et al. Clinical Value of the Determination of Serum Guanase Activity-. Studies on Patients and Experimental Data from Mongrel Dogs and Cultured Rat Hepatocytes // Gastroenterology. — 1982. — Vol. 83. №5. —P. 1102—1105.

102. Ito S., Ysuji Y. Prevention of Posttransfusional non-A, non-B hepatitis Using the Screening Test for Guanase Activity of Donor Blood // Gastroenterol. Jpn. — 1988. — Vol. 23, № 2. — P. 153—159.

103. Iwahana H., Itakura M. Inherited disorders of uric acid metabolism classification, enzimatic- and DNA-diagnosis // Nippon. Rinsho. — 1996. — Vol. 54. — № 12. — P. 3303-3308.

104. Jensen K. F. Purine Nucleoside Phosphorylase from Salmonella typhi-murium and Escherichia coli. Initial Velocity Kinetics Ligand Binding and Reaction Mechanism // Eur. J. Biochem. — 1976. — Vol. 61, № 2. — P. 377—386.

105. Jones D. D., Roberts E. L., Davies A. G. The Estimation of Serum Guanosine Deaminase Activity in Liver Disease // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. — 1983. — Vol. 21, № 12. — P. 835—840.

106. Kalcar H. M. Differential Spectrophotometry of Purine Compounds by Means of Specific Enzymes I. Determination of Hydroxypurine Compounds // J. Biol. Chem. — 1947. — Vol. 167. — P. 429—443.

107. Kalckar H. M. Differential Spectrophotometry of Purine Compounds by Means of Specific Enzymes. 111. Studies of the Enzymes of Purine Metabolism // J. Biol. Chem. — 1947. — Vol. 167, № 2. — P. 461-^75.

108. Kalkan A., Bulut V., Erel O., Avici S., Bingol N. K. Adenosine Deaminase and Guanosine Deaminase Activities in Sera of Patients with Viral Hepatitis // Met. Inst. Oswaldo Crus. — 1999. — Vol. 94, № 3. — P. 383—386.

109. Kanzava F., Hoshi A., Nishimoto T., Kuretani K. Inhibition of Guanine Deaminase with Derivatives of 5-Amino-4-imidazolecarboxamide // Chem. and Pharm. Bull. — 1970. — Vol. 18, № 2. — P. 392—394.

110. Kelley W.N. Mechanisms of purine overproduction in man // Fortshr. Urol, und Nephrol. — 1981. — Vol. 16. — P. 19-24.

111. Kerstens P.J., Stolk J.N., Boerbooms A. et al. Purine enzymes in rheumatoid arthritis: possible association with response to azathioprine. A pilot study // Ann. Rheum. Dis. — 1994. — Vol. 53, № 9. — P. 608—611.

112. Kerstens P.J., Stolk J.N., De Abreu R.A. et al. Azathioprine — related bone marrow toxicity and low activities of purine enzymes in patients with rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. — 1995. — Vol. 38, № 1. — P. 142—145.

113. Kidder G. W., Nolan L. L. The in Vivo and in Vitro Action of 4-Amino-5-imidazolecarboxamide in Trypanosomatid Flagellates // Mol. Biochem. Parasitol. — 1981. — Vol. 3, № 5. — P. 265—269.

114. Kizaki H., Sakurada T. Simple Micro-Assay Method for Enzymes of Purine Metabolism // J. Lab. and Clin. Med. — 1977. — Vol. 89, № 5. — P. 1135—1144.

115. Kocic G., Vlahovic P., Dordevic V. et al. Effects of growth factors on the enzymes of purine metabolism in culture of regenerating rat liver cells // Arch. Physiol. Biochem. 1995. — Vol. 103. — № 6. — P. 715-719.

116. Korber W., Meisterernst E., Hermann G. Quantitative measurement of adenosine deaminase from human erythrocytes // Clin. Chim. Acta. 1975. -Vol. 63.-P. 323-333.

117. Kramp B., Teichmann W., Rehpenning W. Über die Bestimmung der Serrumguanaseactivität bei Zeberparenchymerkrankungen // Dtsch. Z. Verdauungs und Stoffwechselkrank. — 1973. — Bd. 33, № 1. — S. 11— 15.

118. Kumar S., Josan V., Sanger K. et al. Studies of Guanine Deaminase and Its Inhibitors in Rat Tissue // Biochem. J. — 1967. — Vol. 102. — P. 691— 704.

119. Kuzmits R., Seyfried H., Wolf A., Muller M. M. Evaluation of Serum Gua-nase in Hepatic Diseases // Enzyme. — 1980. — Vol. 25, № 3. — P. 148— 152.

120. Lewis A. S., Glantz M. D. Monomeric Purine Nucleoside Phosphorylase from Rabbit Liver. Purification and Characterization // J. Biol. Chem. — 1976. — Vol. 251, № 2. — P. 407—413.

121. Lewis A. S., Glantz M. D. Rabbit Liver Guanine Deaminase: Chemical, Physical, and Kinetic Properties // J. Biol. Chem. — 1974. — Vol. 249, № 12, —P. 3862—3866.

122. Li L., Wang Y., Wang W. Effect of Ionizing Radiation on Erythrocyte Purine Nucleoside Phosphorylase and Reticulocytes and Their Relationship // Clin. J. Radiol. Med. and Prot. — Vol. 10, № 6. — P. 391—394.

123. Majkic-Singh N., Popovic D., Spasic S. Evaluation of the Spectrophotometry Assay of Guanase with 2,2'-Azeno-di(3-ethylbenzthiazaline)-6-sulphonate (ABTS) as Chromogen // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. — 1986. — Vol. 24, № 6. — P. 387—392.

124. Mao C., Cook W. J., Zhou M et al. The Crystal Structure of Escherichia Coli Purine Nucleoside Phosphorylase: a Comparison with the Human Enzyme Reveals a Concerved Topology // Structure. —■ 1997. — Vol. 5, № 10. —P. 1373—1383.

125. Marcert M. L., Finkel B. D., McLaughlin T. M. et al. Mutation in Purine Nucleoside Phosphorylase Deficiency // Hum. Mutat. — 1997. — Vol. 9, №2. —P. 118—121.

126. Martemyanov V. F., Stazharov M. Y., Bedina S. A., Chernykh T. P. Rheumatoid arthritis and purine metabolism // Annals of Rheumatic Diseases: Abstracts of XIV European League Against Rheumatism Congress. — Scotland, 1999. —P. 76.

127. Mesarosova A., Hrivnakova A., Klobusicka M., Babusikova O. Chronic Myeloid Leukemia: Correction between Purine Metabolism Enzyme Activities and Membrane Immunophenotype // Neoplasma. — 1995. — Vol. 42, № 1.—P. 9—14.

128. Miles R. W., Tyler P. C., Furneaux R. H. et al. One-third-the-sites Transition-state Inhibitors for Purine Nucleoside Phosphorylase // Biochemistry. — 1998. —Vol. 37, № 24. — P. 8615—8621.

129. Miyamoto S., Ogawa H., Shiraki H., Nakagawa H. Guanine Deaminase from Rat Brain. Purification, Characteristics and Contribution to Ammoni-agenesis in the Brain // J. Biochem. — 1982. — Vol. 91, № 1. — P. 167— 176.

130. Murakami K., Mitsui A., Tsushima K. Purine Nucleoside Phosphorylase of Chicken Liver // Biochem. Biophis.Acta. — 1971. — Vol. 235, № 1. — P. 99—105.

131. Nakahara M., Takanara M., Yamauchi M et al. Guanase Activity in the Donor Serum and Incidence of Posttransfusion Hepatitis non-A, non-B // Ann. Acad. Singapore. — 1986. — Vol. 15, № 2. — P. 215—220.

132. Negishi O., Ozawa T., Imagawa H. Guanosine Deaminase and Guanine Deaminase from Tea Leaves // Bioscien. Biotechnol. and Biochem. — 1994. —Vol. 58, №7. —P. 1277—1281.

133. Nishikawa Y., Fukumoto K., Watanabe F. Characterizations of Human Liver Guanase // Jap. J. Clin. — 1985. — Vol. 14, № 6. — P. 375—380.

134. Nishikawa Y., Fukumoto K., Watanabe F. Clinical Evaluation of Serum Guanase Activity in Liver Diseases // Clin. Biochem. — 1984. — Vol. 17, №5. —P. 327—330.

135. Nishikawa Y., Fukumoto K., Watanabe F. Simple Rapid Determination of Serum Guanase Activity with Hitachi-736 Automated Discrete Analyzer // Clin. Chem. — 1985. — Vol. 31, № 1. — p. 103—105.

136. Nishikawa Y., Ono N., Fukumoto K., Watanabe F. Clinical Application of Serum Guanase Analysis by Electrophoresis // Rinsho Byori. — 1988. — Vol. 36,№ 11.—P. 1313—1316.

137. North M. E., Newton C. A., Webster A. D. Phosphorylation of Deoxy-guanosine by B and T Lymphocytes in Purine Nucleoside Phosphorylase Deficiency // Clin. Exp. Immunol. — 1980. — Vol. 42, № 3. — P. 523— 529.

138. Pagani R., Tabucchi A., Carlucci F., Marinello E. Gli enzimi del catabolismo dei nucleotidi purinici nelle leucemie, nelle immunodeficienze co-genite e alvuisite // G. Ital. Chem. — 1991. — Vol. 16. № 4. — P. 217— 229.

139. Pruslin F. H., Reem G. H. Immunofluorescence: a Sensitive and Rapid Method for the Detection of Purine Nucleoside Phosphorylase in Single Cells // J. Immunol. Meth. — 1980. — Vol. 34. № 2. — P. 127—132.

140. Rajappan V. P., Hosmane R. S. Analogues of Azepinomycin as Inhibitors of Guanase // Nucleosides Nucleotides. — 1998. — Vol. 17, № 7. — P. 1141—1151.

141. Rajappan V. P., Hosmane R. S. Investigation into Biochemical Mode of Inhibition of Guanase by Azepinomycin: Synthesis and Biochemical Screening of Several Analogues of Azepinomycin // Nucleosides Nucleotides. — 1999. — Vol. 18, № 4-5. — P. 835—836.

142. Rajappan V. P., Hosmane R. S. Synthesis and Guanase Inhibition Studies of Novel Ring-Expanded-Purine Analogue Containing a 5:7-Fussed, Planar, Aromatic Heterocyclic Ring System // Bioorg. Med. Chem. Lett. — 1998.

143. Vol. 8, № 24. — P. 3649—3652.

144. Robertson B. C., Hoffee P. A. Purification and properties of Purine Nucleoside Phosphorylase from Salmonella Typhimurium // J. Biol. Chem. — 1973. — Vol. 248, № 6. — P. 2040—2043.

145. Rodbell M., Lutz B., Stephen L. et al. The clucagen-sensetive Adenyl Cyclase System in plasma membranes of rat Liver // J. Biol. Chem. — 1971.1. Vol. 246. — P. 1877-1888.

146. Romo C.A., Lorente T.F., Salazar V.V. Primary immunodeficiencies and purine metabolesm // Rev. Clin. Esp. — 1985. — Vol. 177. — № 6. — P. 247-253.

147. Rossi C.A., Solaini G., Hakim G. Reversible Immobilization of Guanine Deaminase by Covalent Chromatography // J. Mol. Catal. — 1977. — Vol. 2, № 3. —P. 163—170.

148. Russell N.H., Hoffbrand A.V., Bellingham A.J. Potential use of purine nucleosides and enzyme inhibitors for selective depletion of Thy-lymphoblasts from human bone marrow // Leuk. Res. — 1986. — Vol. 10.3. —P. 325-329.

149. Sakiyama T. Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) // Nippon Rinsho. — 1996. — Vol. 54, № 12. — P. 3220—3225.

150. Salaspuro M. Use of Enzymes for the Diagnosis of Alcogol-Related Organ Damand // Enzyme. — 1987. — Vol. 37, № 1-2. — P. 87—107.

151. Sanfilippo O., Camici M., Tozzi M. G. et al. Relationship between the Levels of Purine Salvage Pathway Enzymes and Clinical/Biological Aggressiveness of Human Colon Carcinoma // Cancer Biochem. Biophys. — 1994. — Vol. 14, № 1. — P. 57—66.

152. Saxena A. K., Ahmad S., Shanker K., Kishor K. New Guanine Deaminase Inhibitors // Pharmacol. Res. Commun. — 1984. — Vol. 16, № 3. — P. 243—252.

153. Saxena A.K., Ahmad S., Shanker K. et al. New Imidazolyethiocarbamides as Guanine Deaminase Inhibitors // Pharmazie. — 1980. — Vol. 35. № 1.1. P. 16—18.

154. Mutagenesis // Biochemistry. — 1997. — Vol. 36, № 39. — P. 11749— 11756.

155. Stoeckler J. D., Ryden J. B., Parks R. E. Inhibitors of Purine Nucleoside Phosphorylase. Effects of 9-Deazapurine Ribonucleosides and Synthesis,of 5'-Deoxy-5'-iodo-9-deazainosine // Cancer Res. — 1986. — Vol. 46, № 4. — P. 1774—1778.

156. Sumi S., Wada Y. Purine Nucleoside Phosphorylase Deficiency // Ryoikibetsu Shokogun Shirizu. — 1998. — Vol. 18, № 1. — P. 458—459.

157. Takehara M., Ling F., Isawa S. et al. Molecular Cloning and Nucleotide Sequence of Purine Nucleoside Phosphorylase and Uridine Phosphorylase Genes from Klebsiella sp. // Bioscien. Biotechnol. Biochem. — 1995. — Vol. 59, № 10. — P. 1987—1990.

158. Tavenier M., Skladanowski A. C., De Abreu R. A., De Jong J. W. Kinetics of Adenilate Metabolism in Human and Rat Myocardium // Biochem. Bio-phis. Acta. — 1995. — Vol. 1244, № 2-3. — P. 351—356.

159. Tuttle J.V., Krenitsky T.A. Effects of acyclovir and its metabolites on purine nucleoside phosphorylase // J. Biol. Chem. — 1984. — Vol. 259. — № 7. — P. 4065-4069.

160. Van Der Weyden M., Martin B., Bailey Z. A Micromethod for Determining Adenosine Deaminase and Purine Nucleoside Phosphorylase Activity in Cells from Human Peripheral Blood // Clin. Chem. Acta. — 1978. — Vol. 82, № 1—2. — P. 179—184.

161. Van Laarhoven J. P., Spierenburg G. Th., Collet H. et al. Purine Interconversion Pathways in T, B, Ty and T-Ty Cells from Human Peripheral Blood

162. Purine Metab. Man. Proc. 4th Int. Symp. Hum. Purine and Pyrimidine Metab., Maastrich, 13-18 June, 1982. Pt. B., New York; London, 1984. — P. 111—118.

163. Wada Y., Yagihashi A., Terasawa K. et al. BCX-34: a Novel selective Im-munosupressant: Purine Nucleoside Phosphorylase Inhibitor // Artif. Organs. — 1996. — Vol. 20, № 8. — P. 849—852.

164. Williams S. R., Gekeler V., Mclvor R. S., Martin D. W. A Human Purine Nucleoside Phosphorylase Deficiency Caused by a Single Base Change // J. Biol. Chem. — 1987. — Vol. 262, № 5. — P. 2332—2338.

165. Wyngaarden J. B. Control of purine biosinthesis // Fortshr. Urol, und Nephrol. — 1981. — Vol. 16. — P. 5-7.

166. Yamada W. The Phosphorolysis of Nucleosides by Rabbit Bone Marrow // J. Biol. Chem. — 1961. — Vol. 236, № 11. — P. 3043—3046.

167. Yamada M., Okahara M., Onishi M. Studies on the Determination of Serum Nucleoside Phosphorylase Activities with Enzymatic Method // Jap. Med. Technol. — 1989. — Vol. 38, № 1. — P. 66—70.

168. Yamamoto T., Moriwaki Y., Takahashi C. et al. Determination of Plasma Purine Nucleoside Phosphorylase Activity by High-Performance Liquid Chromatography // Anal. Biochem. — 1995. — Vol. 227, № 1. — P. 135— 139.

169. Yasmineh W. G. Simple Ultraviolet Spectrophotometric Method for the Determination of Serum Guanase Activity // Clin. Biochem. — 1988. — Vol. 21, № 4. — P. 239—243.

170. Yoshino M., Hayashi R., Katsumata Y. et al. Blood oxypurines and erythrocyte 2,3-diphosphpglicerate levels at high altitude hypoxia // Life Sei. — 1980. —Vol. 27.—№ 14. —P. 1265-1269.

171. Yuan G., Bin J. C., McKay D. J. et al. Cloning and Characterization of Human Guanine Deaminase. Purification and Partial Aminoacid Sequence of Mouse Protein // J. Biol. Chem. — 1999. — Vol. 274, № 12. — P. 8175—8180.

172. Zborovsky A. B., Martemyanov V. F., Stazharov M. Y. et al. Activities of Purine Metabolism Enzymes and Antioxydant System in Rheumatoid Arthritis Patients // Annals of Rheumatic Diseases. — 2001. — Vol. 60, Suppl. 1. —P. 229.

173. Zborovsky A. B., Martemyanov V. F., Stazharov M. Y. et al. Difference of Purine Metabolism at Gout and Osteoarthritis // XIV EULAR Congress: Abstract. Glasgow (Scotland), June 6-11, 1999. — 1999. — P. 278.

174. Zborovsky A. B., Martemyanov V. F., Stazharov M. Y. et al. The Differential Diagnostic Specifities of Purine Enzymes Activity System in Rheumatoid Arthritis and Gout // Annals of Rheumatic Diseases. — 2001. — Vol. 60, Suppl. 1.—P. 327.

175. Zborovsky A. B., Stazharov M. Y., Martemyanov V. F. et al. Purine Metabolism and Antioxidant System in Osteoarthritis // Annals of Rheumatic Diseases. — 2001. — Vol. 60, Suppl. 1. — P. 225.

176. Zoref-Shani E., Shirin C., Sidi Y. et al. Metabolism of Guanine and Guanine Nucleotides in Primary Rat Cardiomyocyte // Biochem. Mol. Med. — 1995. —Vol. 55, №2. —P. 149—155.