Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика гипертрофии небных миндалин у детей

АВТОРЕФЕРАТ
Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика гипертрофии небных миндалин у детей - тема автореферата по медицине
Иудина, Татьяна Александровна Санкт-Петербург 2012 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.03.02
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика гипертрофии небных миндалин у детей

На правах рукописи

005014421

ИУДИІІА Татьяна Александровна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГИПЕРТРОФИИ НЕБНЫХ МИНДАЛИН У ДЕТЕЙ

14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 МДР 2012

Санкт-Петербург - 2012

005014421

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Насыров Русла Абдуллаевич

Официальные оппоненты:

Хмельницкая Наталия Михайловна, доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО «Северо-западный медицинский университет им. И.И.Мечникова»

Кветной Игорь Моисеевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом патоморфологии ФГБУ "НИИАГ им. Д.О.Отта" СЗО РАМН

Ведущее учреждение:

ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздравсоцразвития РФ

Защита диссертации состоится 26 марта 2012 года в _часов на

заседании диссертационного совета Д 215.002.02 ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М.Кирова» МО РФ по адресу: 194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д.6.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ

Автореферат разослан « »_ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Чирский Вадим Семенович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Небные миндалины располагаются на входе в аэродигестивный тракт и являются составным элементом мукозального иммунитета, оказывая регулирующее влияние на развитие и функционирование системного иммунитета. Они отвечают за заселение носа, глотки и дыхательных путей иммунокомпетентными клетками и выступают основным продуцентом интерферона, а также регулятором интенсивности иммунного ответа и продукции необходимого количества slgA (Быкова В.П., 1995; Хмельницкая Н.М., Власова В.В., Косенко В.А., 2000; Brandtzaeg Р., 2003).

Гетерогенность структурной и функциональной организации обуславливает значительные трудности морфологической интерпретации, в частности гипертрофии небных миндалин. Гипертрофия небных миндалин обычно появляется в возрасте 2-5 лет и занимает одно из ведущих мест в структуре JIOP-заболеваний детского возраста (Цветков Э.А., 2003; Джамалутдинов Ю.А., Саидов М.З., Амирова П.Ю., 2006). Ряд авторов считает, что гипертрофия небных миндалин у детей младшего возраста является проявлением защитных реакций организма ребенка в процессе формирования иммунитета в ответ на любое антигенное воздействие. Вышесказанное определяет актуальность разработки и использования новых подходов и методов оценки структурно-функционального состояния небных миндалин, прежде всего иммуногистохимического (ИГХ) исследования. Имеется большое число работ, которые значительно расширили представления о морфогенезе патологических процессов в лимфатическом глоточном кольце (Быкова B.II., 1996; Хмельницкая Н.М., Ланцов A.A., Тимофеева Г.И. , 2000; Van Kempen M.J., Rijkers G.T., Van Cauwenberge P.B., 2000; Nave H., Gebert A., Pabst R, 2001; Bourges D. и соавт., 2004; TakahashiK. и соавт., 2006; Джамалутдинов Ю.А., Даудов Х.Ш., Саидов М.З., 2007). В то же время, работы, сочетающие данные морфологического и ИГХ исследования гипертрофии небных миндалин единичны. Несмотря на данные о причастности вирусов группы герпеса к

развитию хронического тонзиллита и гипертрофии небных миндалин (Епс1о Ь.Н., 2001; БаЫп Р. й а!., 2007), представления о значимости вирусных инфекций в развитии патологии небных миндалин фрагментарны. Отсутствуют работы по исследованию локализации в ткани небных миндалин антигенов цитомегаловируса (ЦМВ), вирусов простого герпеса (ВПГ), вируса папилломы человека (ВПЧ) и вируса Эпштейн-Барр (ВЭБ). Не встретили данных по исследованию в различных отделах гипертрофированных небных миндалин экспресии А и Е.

Сказанное выше свидетельствует об актуальности проведения иммуноморфологического исследования небных миндалин при их гипертрофии.

Цель исследования

Изучение и сравнительная оценка гистологических, морфометрических и иммуногистохимических особенностей ткани небных миндалин при их гипертрофии у детей различных возрастных групп.

Задачи исследования:

1. Исследовать характер гистологических изменений в различных компонентах небных миндалин при их гипертрофии.

2. Провести морфометрическое исследование эпителия и лимфоидных фолликулов небных миндалин.

3. Провести ИГХ исследование для выявления антигенов инфекционных агентов (вирусов простого герпеса 1 и 2 типов, папилломавируса, цитомегаловируса, вируса Эпштейн-Барр) в ткани миндалин.

4. Исследовать экспрессию ^ А и ^ Е в структурах небных миндалин при их гипертрофии.

5. Исследовать распределение Т- и В-лимфоцитов в различных отделах небных миндалин.

6. Изучить взаимосвязь гистологических изменений и иммуногистохимических показателей в небных миндалинах при их гипертрофии у детей различного возраста.

Научная новизна исследования

Представлена сравнительная оценка данных гистологического, иммуногистохимического исследований ткани небных миндалин при их гипертрофии у детей различного возраста. Впервые установлена преобладающая локализация антигенов вирусов (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ, ВОТ) в эпителиальном пласте, а также выраженность экспрессии ^ А и ^ Е в различных структурах миндалин. Обнаружено увеличение количества Т-лимфоцитов в светлых центрах в гипертрофированных (гиперплазированных) небных миндалин у детей старшего возраста. Впервые морфометрически определено увеличение толщины эпителия и изменения размеров лимфоидных фолликулов небных миндалин при их гипертрофии. Отмечена определенная взаимосвязь гистологических изменений и иммуногистохимических данных в ткани небных миндалин у детей различного возраста.

Практическая значимость работы

Полученные результаты гистологического и иммуногистохимического исследований расширяют представления о морфо-патогенезе гипертрофии небных миндалин. Выявленный характер изменений с учетом гетерогенной структуры небных миндалин может представлять ценность для анализа морфологических изменений при их гипертрофии у детей различных возрастных групп. Новые'данные о состоянии эпителиального слоя могут служить основой для разработки новых подходов этиопатогенетической терапии патологии небных миндалин.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В небных миндалинах при их гипертрофии наблюдаются характерные структурные изменения, имеющие видимые отличия в различных возрастных группах детей.

2. Наиболее характерной локализацией антигенов вирусов простого герпеса и папилломы человека и доминирующей мишенью патогенного воздействия является эпителиальный слой небных миндалин.

3. Показаны определенные соотношения между изменением люминарного эпителия и выраженностью экспрессии вирусных антигенов в небных миндалинах детей младшей и средней возрастных групп.

4. Особенностями изменений в старшей возрастной группе являются уменьшение размеров фолликулов, расширение межфолликулярной зоны и увеличение размеров участков, занимаемых соединительной тканью.

Личный вклад автора

Автором проведен аналитический обзор зарубежной и отечественной литературы ' по изучаемой проблеме, разработан дизайн исследования, осуществлен анализ медицинской документации. Анализ данных историй болезни, морфологического и морфометрического исследований и обработка данных проводились с личным участием автора. Анализ, интерпретация, изложение полученных данных, формулирование выводов и практических рекомендаций выполнены автором самостоятельно. Автор принимал участие в подготовке отчетов по плановым темам научно-исследовательских работ.

Реализация работы и ее апробация

Результаты исследований и основные положения работы были опубликованы в 6 печатных работах, в том числе 2 - в журналах, рекомендуемых ВАК. Доложены на III съезде Российского общества патологоанатомов в 2009г., IV съезде Российского общества детских патологов в 2010г., научно-практической конференции «Высокотехнологическая помощь в клинике педиатрической академии» в 20 Юг, заседании Санкт-Петербургской ассоциации патологоанатомов в 2011г.

Полученные результаты используются в работе патологоанатомического отделения клиники СПбГПМА, при преподавании на кафедрах патологической анатомии с курсом судебной медицины, отоларингологии СПбГПМА.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных данных, обсуждения собственных данных, выводов, списка

литературы. Работа содержит 6 таблиц, 34 микрофотографии. Библиографический указатель включает 108 литературных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В работе проанализированы результаты клинического, морфологического и иммуногистохимического исследования детей с гипертрофией небных миндалин. Был исследован операционный материал, полученный при тонзиллотомии/эктомии от 75 детей по поводу гипертрофии небных миндалин II-III степени. Выделены три возрастные группы: 1-я - в возрасте до 7 лет, младшая (41 наблюдение), 2-я - с 7 лет и до 12, средняя (23 случаев), 3-я -старше 12 лет, старшая группа (11 случаев).

При изучении ткани небных миндалин особое внимание уделялось состоянию эпителия зевной и криптальной поверхностей, субэпителиального слоя, содержимому просвета крипт, строению лимфоидной ткани с оценкой фолликулов и межфолликулярной области, включая сосуды микроциркуляторного русла, проявлениями воспалительной реакции и склероза стромы.

Во всех наблюдениях гистологические срезы окрашивались гематоксилином и эозином, азур-эозином по Романовскому - Гимзе, на эластические волокна по Вейгерту.

Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование материала на парафиновых срезах проводилось по схеме, рекомендуемой фирмой производителем. В ходе проведения иммуногистохимического окрашивания выполнялись отрицательные контрольные исследования. В работе использовали поликлональные антитела к вирусу простого герпеса II типа (HSV II) (Dako), к вирусу папилломы человека NCL-PVp (Novocastra) и к маркеру Т-лимфоцитов CD3 (Dako), моноклональные антитела к цитомегаловирусу (Novocastra), к вирусу Эпштейн-Барр (Novocastra), к маркеру В-лимфоцитов CD20 (Dako), к к IgA и к IgE (Novocastra).

Оценка результатов ИГХ исследования проводилась полуколичественным методом как слабо: «+» - 1-10 клеток, имеющих положительную окраску, умеренно: «++» - 11-20 клеток и резко положительная: «+++» - 21 и более клеток. Для вирусных антигенов это определялось для всего среза, для иммуноглобулинов - в одном поле зрения на увеличении х200. Экспрессия Т- и В-лимфодитов считалась в абсолютных числах в 10 полях зрения при увеличении х400 в различных структурах. Учитывая структурно-функциональную гетерогенность, интенсивность ИГХ реакции в Каждой миндалине (случае) оценивали в целом и отдельно: в эпителии, в субэпителиальном слое, а также в компонентах лимфоидной ткани (лимфоидных фолликулах и межфолликулярной зоне).

Морфометрию проводили с помощью программы AxioVision версия 4.6.3 фирмы CarlZeiss с измерением толщины эпителиального слоя, толщины субэпителиального склероза, площади лимфоидных фолликулов, светлых центров и полей склероза в строме. Для каждого структурного компонента проводилось минимум 10 измерений в различных полях зрения.

Статистическую обработку полученных результатов производили между двумя независимыми группами с помощью программы статистического анализа SPSS 9.0 (SPSS Inc., Chicago, IL., USA, 1999). Разницу между показателями принимали за статистически достоверную при р<0,05 (по t-критерию Стыодента).

Анализ клинических данных проводился по историям болезни. При этом во внимание принимались анамнез данного'заболевания, другие перенесенные заболевания, посещение детских учреждений, жалобы в момент поступления, аллергологический анамнез, данные объективного исследования. Все данные заносились в анкету.

Результаты исследования

Клиническая характеристика

Среди перенесенных заболеваний у детей в общей структуре преобладали частые (3 и более раз в год) острые респираторные инфекции (ОРИ) - 39

случаев (52%) и ветряная оспа - 33 наблюдений (44%). Далее следовали острые отиты (19 случаев (25%)) и ангины (18(24%)). Внутри групп распределение несколько отличалось от общей картины. Так в младшей возрастной группе в анамнезе жизни преобладали только частые ОРИ (24(59%)), с одинаковой частотой отмечались острые отиты и ветряная оспа (11(27%)). У детей средней возрастной группы наиболее частым перенесенным заболеванием была ветряная оспа (15(65%)), следующими по частоте были ОРИ (9(39%)), реже встречались ангины и бронхиты (по 6(26%) случаев). В третьей возрастной группе также в анамнезе чаще отмечалась перенесенная ветряная оспа (7(64%)), на втором месте были частые ОРИ и ангины (по 6(55%)), реже отмечался хронический тонзиллит (5(45%)), который ЛОР-врачами выделялся отдельно и сочетался с ангинами в 3-х наблюдениях. Кроме того в 3-й группе достаточно часто встречались острые отиты, синуситы и бронхиты (по 4 наблюдения (36%)). Следует отметить, что среди перенесенных заболеваний у детей младше 7-ми лет преобладают острые респираторные инфекции и отиты, развитие которых можно расценивать как осложнение этих инфекций, в связи с анатомическими особенностями евстахиевых труб, которые короче, шире и расположены более горизонтально, чем у взрослых.

У детей 7-11 лет (2-й группы) увеличивается доля заболеваний в прилежащих анатомических областях (бронхиты, пневмонии и отиты). Примерно такая же картина наблюдалась и у детей 12 лег и старше (3-й группы), за исключением пневмоний, которые не были отмечены клинически в исследованных случаях.

Среди предъявляемых жалоб преобладали жалобы на затрудненное носовое дыхание, храп во сне и эпизоды сонного апноэ. Такая же картина отмечалась в первых двух группах, при этом во второй группе по сравнению с первой более часто отмечались жалобы на снижение слуха (26%) и гнусавость (17%). В третьей группе жалобы предъявлялись с небольшой частотой (9-18%), за исключением рецидивирующих ангин (36%) и храпа во сне (27%). Данное

различие, по всей видимости, обусловлено более длительным течением патологического процесса.

При исследовании ЛОР-статуса у детей слизистые в большинстве случаев были розовые, чистые. Спаянные с миндалинами небные дужки были только у детей старшей возрастной группы (4 случая). Пробки в лакунах так же чаще отмечались у детей старше 7 лет, а у младших детей они отсутствовали. Увеличение регионарных лимфатических узлов отмечалось только в 2-х наблюдениях у детей первой группы.

В данных ЭКГ исследования в младшей и средней возрастных группах преобладало выявление синусовой аритмии (40% и 43% соответственно), а второй по выявляемое™ была неполная блокада правой ножки пучка Гиса (32% и 39% соответственно). В старшей возрастной группе чаще всего отмечалась неполная блокада правой ножки пучка Гиса (64%).

Результаты гистологического исследования

При гистологическом исследовании небных миндалин со стороны многослойного плоского эпителия определялись акантоз, гиперкератоз и формирование сосочковидных структур, в большей части расположенных в криптах. В части небных миндалин во всех слоях были видны увеличенные эпителиальные клетки, цитоплазма которых была вакуолизирована или опустошена, в вакуолях определялись мелкие базофильные включения. В отдельных клетках эпителия выявлялись увеличенные гиперхромные ядра с наличием в единичных из них светлых базофильных включений. Достаточно часто также отмечался мелкоглыбчатый распад (рексис) эпителиальных клеток, что может быть расценено как проявление апоптоза. Эпителиальный пласт небных миндалин в первой возрастной группе имел меньшее число слоев и толщину, по сравнению со второй группой, и эта разница была достоверна (р<0,5), в третьей группе отмечалось уменьшение толщины люминарного эпителия по сравнению со второй группой. Эпителий крипт во всех случаях в разной степени был инфильтрирован лимфоцитами и в небольшом количестве плазмоцитами, образуя лимфоэпителиальный слой. Во всех наблюдениях в

и

просвете крипт определялись эозинофильные массы, состоящие из ороговевших клеток эпителия, в ряде случаев определялись колонии кокково-палочковой микрофлоры, с примесью небольшого числа нейтрофильных лейкоцитов.

Лимфоидная ткань у детей первой группы была представлена гиперплазированными вторичными фолликулами с крупными светлыми центрами, которые были окружены лимфоидным пояском, образовывавшим чаще всего полулуние и лишь в единичных случаях располагавшимся равномерно. Лимфоидные фолликулы располагались близко друг к другу. У детей второй и третьей возрастных групп размеры фолликулов были в среднем меньшими, чем у детей младшего возраста. Однако во второй и третьей группах обращало внимание неравномерность гиперплазии, проявлявшаяся большей вариабельностью размеров фолликулов, а в отдельных случаях в миндалинах обнаруживались участки без фолликулов. Светлые центры чаще всего имели средние или крупные размеры с фигурами митозов, иногда митозы отсутствовали или были единичными. Лимфоидная ткань, находившаяся между фолликулами, содержала разное количество посткапиллярных венул с высоким эндотелием, в среднем 9-12 в поле зрения на увеличении 400, просвет которых в некоторых случаях был резко суженным. Эндотелиоциты в большинстве случаев были увеличенными, в цитоплазме определялась вакуолизации, в части сосудов отмечалась гиперплазия эндотелия с расположением клеток в несколько рядов. В зависимости от длительности заболевания в миндалинах отмечались склеротические изменения: в более младшем возрасте в виде нежно волокнистых структур между лимфоидными фолликулами, а в более старшем возрасте - выраженные разрастания грубоволокнистой ткани с атрофией фолликулов. Здесь же определялись кровеносные сосуды с резко утолщенными стенками за счет склероза, суженным просветом, гиперпластическим эндотелием. В соединительной ткани отмечались тучные клетки с явлением дегрануляции.

Результаты иммуногистохимического исследования ткани небных миндалин

При иммуногистохимическом исследования материала экспрессия антигенов вирусов выявлялась в виде зерен и глыбок на поверхности клеточной мембраны, в цитоплазме или в ядре, с преобладанием локализации в цитоплазме клеток. Экспрессия вирусных антигенов отсутствовала в 10 случаях из 37-ми. В остальных случаях экспрессия антигенов определялась в разных соотношениях, при этом экспрессия антигенов отдельных вирусов определялись в следующем количестве: вирус простого герпеса - 24 (65%) случаев, вирус папилломы человека - 14 (38%), цитомегаловирус - 7 (19%), вирус Эпштейн-Барр - 6 (16%).

Экспрессия антигенов вируса простого герпеса в первой возрастной группе выявлялось в 17 наблюдениях из 22-х (77%). Во всех случаях положительная реакция наблюдалась в клетках поверхностного слоя эпителиального пласта, при этом в 5-ти случаях определялась как резко выраженная. Следует отметить обнаружение в 4-х наблюдениях слабой экспрессии антигена ВПГ в единичных лимфоцитах и плазматических клетках находящихся в пределах эпителиального пласта (в зоне лимфоэпителиального симбиоза). В 2-х случаях экспрессия была выявлена в цитоплазме единичных клеток (макрофаги, плазмоциты) субэпителиального слоя. В цитоплазме макрофагов светлых центров фолликулов экспрессия выявлялась в 8 наблюдениях. В 14-ти наблюдениях антиген определялся в массах, которые находились в криптах и лежали на поверхности эпителия, в виде зерен коричневого цвета. Экспрессия антигенов вируса папилломы человека в 1-й возрастной группе определялась в эпителиальном слое, субэпителиально и в лимфоидной ткани. В эпителиальном пласте она выявлялась в 12 из 22-х случаях (55%). В 1-м случае экспрессия была выявлена в цитоплазме единичных мононуклеаров субэпителиального слоя. В светлых центрах прокрашивание обнаружилось в 3-х наблюдениях с локализацией в цитоплазме макрофагов. В 10 из 19 случаев определялось сочетание экспрессии антигенов

ВПГ и ВПЧ. Экспрессия антигенов ЦМВ и ВЭБ выявлялась только слабо положительная в 5 (23%) и 4 (18%) наблюдениях соответственно. Экспрессия антигенов ЦМВ обнаруживалась в эпителии и субэпителиально по 2 случая, в светлом центре (рис.1,а) и в клетках эндотелия - по 1-му случаю. В положительных на ВЭБ случаях экспрессия в 2-х наблюдениях определялась в эпителиальных клетках, и по 1-му - субэпителиально, в светлом центре, в эндотелии мелких сосудов.

Во второй возрастной группе (дети от 7 до 12 лет) экспрессия антигенов вируса простого герпеса выявлялась в 5-ти случаях из 10-ти (50%). Во всех случаях она наблюдалась в клетках поверхностного слоя эпителиального пласта. В одном наблюдении обнаружена экспрессия антигена ВПГ в единичных плазмоцитах, расположенных в пределах эпителия. В 3-х случаях экспрессия обнаружена в цитоплазме единичных клеток (макрофаги, плазмоциты) субэпителиального слоя. В макрофагах светлых центров фолликулов экспрессия выявлялась в 5 наблюдениях. В 2-х случаях наблюдалась экспрессия в эндотелиальных клетках сосудов микроциркуляторного русла, расположенных в межфолликулярной зоне. Экспрессия антигенов вируса папилломы человека наблюдалась лишь в 1-м случае из 10-ти (10%), в клетках поверхностного слоя эпителиального пласта, макрофагах светлых центров фолликулов и содержимом крипт. Сочетание экспрессии антигенов ВПГ и ВПЧ встретилось у 1-го пациента. Экспрессия антигенов ВЭБ и ЦМВ, по 2 (по 20%) в каждом случае, выявлялась только слабо положительная. В положительных на ВЭБ случаях экспрессия определялась в светлом центре и эндотелии мелких сосудов. Экспрессия антигенов ЦМВ обнаруживалась в эпителии, субэпителиально и в светлом центре.

В третьей возрастной группе (дети старше 12 лет) экспрессия антигенов вируса простого герпеса выявлялась в 2-х случаях из 5-ти (40%). В одном случае она наблюдалась в клетках поверхностного слоя эпителиального пласта. В одном наблюдении обнаружена экспрессия антигена ВПГ в единичных

плазмоцитах, расположенных в пределах эпителия. Экспрессия антигенов вируса папилломы человека наблюдалась лишь в 1-м случае из 5-ти (20%), в единичных плазматических клетках поверхностного слоя эпителиального пласта. Сочетание экспрессии антигенов ВПГ и ВПЧ встретилось у 1-го пациента. Экспрессия антигенов ВЭБ и ЦМВ не выявлялась.

У детей 1 группы экспрессия А в эпителиальном и субэпителиальном слоях наиболее часто отмечалась умеренно выраженная экспрессия. Среднее значение экспрессии ^ А в эпителии небных миндалин 1 группы детей определялось как 1,86±0,36, в субэпителиальной зоне - 2,05±0,36, в области фолликулов - 1,3±0,36, в межфолликулярной области - 1,14±0,24. Во 2 группе отмечалось увеличение интенсивности экспрессии А. Выраженная экспрессия чаще определялась в эпителиальном пласте и субэпителиально. Так, в эпителии среднее значение экспрессии было 2,5±0,24, в субэпителиальной зоне - 2,4±0,48, в фолликулах - 1,5±0,24 и в межфолликулярной зоне -1,6±0,48. В 3 группе детей экспрессия А определялась чаще как слабо и умеренно выраженная. Среднее значение экспрессии ^ А в эпителии небных миндалин третьей группы детей было 1±1,65, в субэпителиальной зоне -1,8±1,1, в фолликулярной области - 1,4±1,1 и в межфолликулярной зоне -1,2±0,55. Статистическая обработка выявила существенные отличия по экспрессии А только в эпителии между 1 и 2 группами. При этом экспрессия ^ А в эпителии 2 группы детей была достоверно выше, чем в первой (р<0,05).

Экспрессия ^ Е во всех группах преимущественно определялась как слабо выраженная. Среднее значение экспрессия 1ц Ев эпителии небных миндалин 1 группы детей определялось как 1Д4±0,36, в субэпителиальной зоне - 1,0±0,24, в области фолликулов - 1,0±0,24, в межфолликулярной области -0,73±0,24. Во 2 группе среднее значение экспрессии ^ Е в эпителии было 0,9±0,48, в субэпителиальной - 0,8±0,48, в фолликулах - 0,7±0,24 и в межфолликулярной зоне - 0,6±0,48. Среднее значение экспрессии Е в эпителии в третьей группе было 0,б±1,1, в субэпителиальной зоне - 1,2±0,55, в фолликулярной области - 1,4±1,1 и в межфолликулярной зоне - 1,0±0,55.

Обратило внимание наличие экспрессии Ig Е в цитоплазме поверхностных клеток эпителия небных миндалин. Следует отметить, что при изучении выраженности экспрессии Ig Е достоверных различий между зонами небных миндалин и в разных группах детей не выявлено.

В первой группе CD20 позитивные клетки (В-лимфоциты) в эпителии зевной поверхности и субэпителиально выявлялись в среднем до 20 в поле зрения. В межфолликулярной области В-лимфоциты были отмечены уже в среднем до 120 в поле зрения. В светлых центрах фолликулов и зоне лимфоэпителиального симбиоза почти все поле зрения было представлено В-клетками (не поддаваясь подсчету). CD3 позитивные клетки (Т-лимфоциты) в большом числе обнаруживались только в межфолликулярной области, при этом в эпителии зевной поверхности и субэпителиально выявлялось в среднем 10 клеток в поле зрения, в области короны фолликула - 25. В области светлых центров фолликулов обнаруживалась экспрессия до 18 CD3 позитивных клеток.

Во второй группе распределение CD20 позитивных клеток было аналогично первой группе. Выраженных отличий по числу клеток экспрессирующих CD20 в различных зонах небных миндалин выявлено не было. Однако число CD3 позитивных клеток в области короны и светлых центров фолликулов было более чем в два раза большим, по сравнению с первой группой.

В третьей группе по распределению и числу клеток экспрессирующих CD20 существенные отличия в различных зонах небных миндалин не были отмечены. При этом обращало внимание на значительное увеличение Т-лимфоцитов в области короны и светлых центров фолликулов. По сравнению с первой группой в указанных зонах число CD3 позтивных клеток было больше, чем в 3-4 раза, а по сравнению со второй группой - более чем в 2 раза. Тем не менее, статистическая обработка не выявила достоверных различий между группами (р>0,05), возможно из-за большой вариабельности исследуемых величин.

Таким образом, нами выявлено уменьшение частоты экспрессии антигенов вирусов у детей более старших групп по сравнению с пациентами младшего возраста. Наибольший уровень экспрессии иммуноглобулинов отмечается для ^ Ав области эпителия в средней возрастной группе. А при исследовании распределения Т- и В-лимфоцитов определяется тенденция к увеличению количества Т-лимфоцитов находящихся в области светлых центров фолликулов. При этом обращало на себя внимание значительное увеличение Т-лимфоцитов в области короны и светлых центров фолликулов у детей старшей возрастной группы. По сравнению с первой группой в указанных зонах число СБЗ позтивных клеток было больше, чем в 3-4 раза, а по сравнению со второй группой - более чем в 2 раза. Тем не менее, статистическая обработка не выявила достоверных различий между группами (р>0,05), возможно из-за большой вариабельности исследуемых величин.

Морфометрическое исследование небных миндалин

В первой группе среднее значение толщины эпителия 0,112±0,012 мм. Среднее количество слоев эпителиальных клеток в этой группе 19. Общий размер фолликула в среднем составлял 360,4х1(Г3±39,6х1(Г3мм2. Единичные фолликулы занимали площадь, выходящую за пределы поля зрения. Средние размеры светлых центров -217,3х1(гз±30,3х1(р мм2 (табл. 1).

Во второй группе среднее значение толщины эпителия 0,149±0,021 мм. Среднее количество слоев эпителиальных клеток в этой группе 24. Общий размер фолликула в среднем составлял 314,0х 10_3±32,4х 10"3 мм2. Единичные фолликулы занимали площадь, выходящую за пределы поля зрения. Средние размеры светлых центров - 192,5 х 10~3± 16,5 х 10"3 мм2 (табл. 1).

В третьей группе среднее значение толщины эпителия 0,12±0,015 мм. Среднее количество слоев эпителиальных клеток в этой группе 14. Общий размер фолликула в среднем составлял 377,5х10~3±57,4х10~3мм2. Единичные фолликулы занимали площадь, выходящую за пределы поля зрения. Средние размеры светлых центров - 215,5х 10~3±40,9х1(Г3 мм2 (табл. 1).

Таблица 1. Результаты морфометрического исследования эпителия и фолликулов небных миндалин

Средние значения 1-я группа 2-я группа 3-я группа Р

Высота эпителия, мм 0,091±0,011 0,149±0,021 0,12±0,015 р<0,05*

Площадь фолликула, мм 2 360,4х10"3 ±39,6x10""3 314,0x1o"5 ±32,4x10"3 377,5x10"3 ±5 7,4x1 о"3 р>0,05

Площадь светлого центра фолликула, мм 2 217,ЗхЮ"3 ±30,3 х10"3 192,5 х10"3 ± 16,5x10"3 215,5х10"3 ±40,9x10"3 р>0,05

*- при сравнении 1 и 2 групп

При проведении статистической обработки полученных результатов достоверная разница выявлена при сравнении толщины эпителия 1-й и 2-й групп (р<0,05). Сравнение остальных показателей не выявило статистически достоверной разницы между различными группами. Корреляционный анализ не показал связи частоты выявления вирусов и толщины эпителия.

Проведенное морфологическое и иммуногистохимическое исследования могут свидетельствовать об определенной динамике изменений небных миндалин при их гипертрофии у детей различных возрастных групп. Так у детей старшего возраста (2 и 3 группы) в отличие от младшего (1 группа), отмечалось увеличение количества слоев эпителия и соответственно его толщины. Обратило внимание уменьшение экспрессии антигенов исследованных вирусов в старших возрастных группах, при этом в 3-й группе они выявлялись только в пределах эпителия и отсутствовали в лимфоидной ткани. Отмечена определенная зависимость: утолщение люминарного эпителия миндалин в старших возрастных группах сопровождалось уменьшением у них экспрессии антигенов вирусов. Учитывая современные представления о модулирующем влиянии эпителия на развитие процессов в небной миндалине (Torre V. и соавт., 2000), обнаруженное нами увеличение толщины эпителия миндалин можно рассматривать как проявление одной из защитных функций.

По данным литературы в небных миндалинах клеточный иммунный ответ преобладает над гуморальным (Komorowska А. и соавт., 2005), и мы полагаем, что обнаруженное увеличение с возрастом количества CD3 положительных клеток является отражением становления местного иммунитета и иммунной системы в целом. На большую эффективность местного иммунитета может указывать и более высокая экспрессия IgA в эпителии и субэпителиальном слое небных миндалин у детей второй группы по сравнению с первой. Эти данные также могут быть рассмотрены в качестве причин, объясняющих значительно меньшую выраженность экспрессии антигенов вирусов в миндалинах детей старших возрастных групп. Известно, что признаками аллергической реакции являются наличие в ткани IgE и дегрануляция тучных клеток. На нашем материале были выявлены оба этих признака, указывающих на проявление аллергизации у детей.

Полученные нами результаты иммуноморфологического исследования согласуются с данными клинических наблюдений (Зарубин С.С., 2007), свидетельствующих о наибольшей частоте хронических заболеваний ЛОР органов у детей 4-х лет и уменьшении распространенности гипертрофии глоточной и небных миндалин с увеличением возраста детей. При воспалении небных миндалин происходит активация фибробластов, что может со временем приводить к замене иммунологически активной ткани фиброзной тканью (PassaliD. и соавт., 2004). С этим, по-видимому, связано выявленное нами увеличение количества соединительной ткани в небных миндалинах у детей старшего возраста.

Как видно из представленных материалов, при исследовании ткани небных миндалин необходима оценка всех структурных компонентов небных миндалин с использованием иммуногистохимического метода, позволяющего провести патогенетическую оценку выявленных изменений.

ВЫВОДЫ

1. При гипертрофии небных миндалин у детей отмечается утолщение люминарного эпителия. Наибольшее утолщение наблюдается у детей 7-11 лет

(р< 0,5), меньшее у детей старше 12 лет (р>0,05) и минимальное - у детей младше 6 лет.

2. У детей старших возрастных групп при гипертрофии небных миндалин размеры лимфоидных фолликулов имели тенденцию к уменьшению, при этом отмечалось расширение межфолликулярной зоны и появление участков без фолликулов, соответственно увеличивались размеры участков, занимаемых соединительной тканыо с утолщением коллагеновых волокон.

3. В небных миндалинах экспрессия антигенов ряда вирусов (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ, ВПЧ), уменьшается с возрастом. Антиген вируса простого герпеса достоверно чаще определяется у детей до 6 лет по сравнению с более старшими. Во всех группах экспрессия антигенов ВПГ и ВПЧ достоверно чаще выявлялась в эпителиальном пласте, чем в других структурах небных миндалин.

4. При гипертрофии небных миндалин отмечаются явление дегрануляции тучных клеток и наличие ^Е во всех структурах, которые могут являться косвенными признаками аллергизации у детей.

5. В средней возрастной группе (7-11 лет) наблюдалось наибольшее увеличение толщины люминарного эпителия небных миндалин, при этом экспрессия антигенов вирусов выявлялась значительно меньше, а экспрессия 1§А в эпителии и субэпителиальном слое была более выраженная по сравнению с первой группой.

6. С возрастом количество Т-лимфоцитов в светлых центрах небных миндалин при их гипертрофии нарастает, что может свидетельствовать об увеличении межклеточного взаимодействия и клеточноопосредованного иммунного ответа.

7. Установлен различный характер морфологических изменений в гипертрофированных небных миндалинах у детей различных возрастных групп. У детей 7-11 лет преобладают реакции эпителия, сопровождающиеся его гиперплазией, у детей 6 лет и младше - преимущественной гиперплазией

лимфоидных фолликулов, что отражает неоднородный характер адаптивных изменений ткани небных миндалин при данной патологии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При гистологическом исследовании необходима оценка всех структурных компонентов небных миндалин, обращая внимание на толщину эпителия, наличие изменений в эпителиоцитах, а так же на состояние лимфоидного компонента.

2. Для более объективной оценки патологии небных миндалин необходимо использование иммуногистохимического метода.

3. При анализе состояния небных миндалин следует учитывать возможность их вирусного поражения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иудина Т.А., Зайцев B.C., Насыров P.A. Иммуногистохимическое исследование небных миндалин у детей с хроническим тонзиллитом // Материалы III съезда Российского общества патологоанатомов 26-30 мая 2009 года. - Самара, 2009. - С. 199-200.

2. Насыров P.A., Иудина Т.А., Цветков Э.А., Зайцев B.C., Кукушкина O.E. Характер морфологических изменений в гипертрофированных небных миндалинах при экспрессии антигенов вирусов группы герпеса и папилломы человека // Российская оториноларингология. Приложение, 2010. - № 1. - С. 170-175.

3. Иудина Т.А., Насыров P.A. Иммуногистохимическое исследование гипертрофии небных миндалин у детей '// Труды IV съезда Российского общества детских патологов 17-19 мая 2010 года. - СПб, 2010. - С. 255-256.

4. Иудина Т.А., Насыров P.A. Иммуногистохимическое исследование экспрессии иммуноглобулинов и локализации Т- и B-лимфоцитов в небных миндалинах при их гипертрофии у детей // Высокотехнологическая медицинская помощь в клинике педиатрической академии. Особенности ведения новорожденных. Материалы научно-практической конференции 8-9 ноября 2010 года. - СПб, 2010,- С.37-39

5. Иудина Т. А., Насыров P.A. Морфологическое и иммуногистохимическое исследование гипертрофии небных миндалин у детей // Архив патологии, 2010. - №6. - С. 21-25.

6. Насыров P.A., Иудина Т.А. Иммуноморфологическое исследование небных миндалин при их гипертрофии у детей различного возраста // Архив патологии, 2011. - № 5. - С. 32-36.

Подписано в печать 15.02.2012 г. Формат 60x84/16 Объем 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 184

Типография ВМедА им. С.М. Кирова 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6.