Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке

ДИССЕРТАЦИЯ
Клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке - тема автореферата по медицине
Котовская, Мария Андреевна Москва 2007 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.39
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке

На правах рукописи

КОТОВСКАЯ Мария Андреевна

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АНТИТЕЛ К НУКЛЕОСОМАМ И БЕЛКАМ ТЕПЛОВОГО ШОКА ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ

14.00.39 - Ревматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□ОЗОб150Т

Москва - 2007

003061507

Работа выполнена в Государственном Учреждении Институте ревматологии Российской академии медицинских наук

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

АНАНЬЕВА Лидия Петровна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится 21 сентября 2007 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.018 01 при Государственном учреждении Институте ревматологии Российской академии медицинских наук (115522, Москва, Каширское шоссе, 34А)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного учреждения Института ревматологии Российской академии медицинских наук (115522, Москва, Каширское шоссе, 34А)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН НАСОНОВ Евгений Львович

доктор медицинских наук, профессор БАРАНОВ Андрей Анатольевич

Автореферат разослан

2007года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

ДЫДЫКИНА И.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность проблемы

Системная красная волчанка (СКВ) - системное аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии, патогенетически связанное с такими нарушениями иммунорегуляции, которые являются причиной гиперпродукции широкого спектра органонеспецифических аутоан-тител к различным компонентам ядра и иммунных комплексов, вызывающих иммуновоспалительное повреждение тканей и нарушения функций внутренних органов (Насонова В А., Насонов Е.Л.,2003)

Основным компонентом лабораторной диагностики СКВ является выявление аутоантител к клеточным антигенам, преимущественно к ядерным, таких как антитела к гистонам (anti-HST), односпи-ральной и двухспиральной ДНК Антитела к двухспиральной ДНК (дсДНК) в настоящее время являются наиболее распространенным диагностическим маркерам СКВ Однако они выявляются, не более чем в 50 % случаев, а уровень антител к дсДНК не всегда коррелирует с активностью заболевания (Simon J. и соавт., 2004) Другой, широко известный маркер СКВ - антинуклеарные антитела (АНФ), имеют достаточно низкий уровень специфичности в связи с высокой частотой выявления АНФ не только при СКВ, но и при других аутоиммунных заболеваниях (Cairns А.Р и соавт,, 2003)

В широком спектре антиядерных антител, выявляемых при СКВ, особое внимание уделяется антителам к нуклеосомам. Нуклеосома состоит из двойной спирали ДНК, обмотанной вокруг специфического комплекса из восьми нуклеосомных гистонов (гистонового окта-мера). Нуклеосома представляет собой дисковидную частицу с диаметром около 11 нм, содержащую по две копии каждого из нуклеосомных гистонов (Н2А, Н2В, НЗ, Н4) (Foumel S. и соавт., 2002).

По данным Amoura Z и соавт, 2000, нуклеосомы играют роль превалирующих патогенетических антигенов у больных СКВ, а появление антител к нуклеосомам ассоциируется с органньми поражениями (Simon и соавт, 2004) Важно отметить, что у пациентов с СКВ при скрининговом исследование было отмечена корреляционная связь между уровнем антител к нуклеосомам и поражением почек и центральной нервной системы (Wilhams R и соавт , 2001) Более того, антитела к нуклеосомам, так же как и аутореактивные Т - хелпе-

ры, специфичные к нуклеосомам были определены в сыворотоках больных СКВ (Chabre и соавт , 1995, Lu L., 1999). На биологических моделях СКВ было показано, что антитела к нуклеосомам выявляются до развития заблевания Однако до настоящего времени вопрос о специфичности антител к нуклеосомам при СКВ остается дискуссионным (Rumore А и соавт., 1990) До настоящего времени нет убедительных данных о преимуществах этого теста перед выявлением дсДНК (Mm D J , 2002).

В процессе разработки новых тестов, которые давали бы представление о характере нарушения гуморального иммунитета при СКВ, обратила на себя внимание группа сравнительно недавно открытых внутриклеточных белков, получивших название "белки теплового шока" (БТШ (Hsp)) или "стрессовые белки" Эти белки недостаточно изучены, но уже имеющиеся данные свидетельствуют о том, что они высоко консервативны в процессе филогенеза (Lindqulst S., 1986), необычно полифункциональны и играют важную роль во многих внутриклеточных иммунобиохимических процессах как в экстремальных, так и в нормальных условиях (Polla В S , 1988).

Таким образом, поиск новых диагностических маркеров является актуальным направлением в исследованиях, посвященных системной красной волчанке

Цель исследования

Изучить клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке больных

Задачи исследования

1 Определить частоту повышения антител к нуклеосомам в сыворотках больных СКВ и их связь с клинико - лабораторными проявлениями СКВ

2 Проанализировать связь уровня антител к нуклеосомам с антителами к дсДНК

3 Выявить уровень и частоту повышения антител к связанным гис-тонам в сыворотках больных СКВ, их связь с клинико-лабораторными параметрами СКВ

4 Исследовать уровень и частоту повышения антител к белкам теплового шока в сыворотках больных СКВ

Научная новизна

Впервые в настоящей работе на большом клиническом материале проведено одновременное исследование сывороточных концентраций антител к нуклеосомам, компонентам нуклеосом - гистонам и белкам теплового шока у больных СКВ, и проведено их сопоставление с клинико - лабораторными проявлениями и активностью этого заболевания

Выявлена связь антител к нуклеосомам у больных СКВ с поражением почек, центральной нервной системы и активностью заболевания

Впервые проведен детальный анализ клинических проявлений СКВ в зависимости от степени повышения уровня антител к гистонам Выявлена связь антител к гистонам Н2А и Н2В с поражением почек и центральной нервной системы у больных СКВ.

Впервые отмечена ассоциация уровня антител к пептиду убик-витина 42-76 с активностью СКВ

Практическая значимость

1 Определение антител к нуклеосомам имеет диагностическое значение при СКВ

2 Определение уровня антител к нуклеосомам целесообразно для определения активности СКВ

3. У больных СКВ с поражением почек целесообразно определение антител к нуклеосомам для оценки активности почечного процесса

Положения, выносимые на защиту

1. При СКВ с высокой частотой выявляются антитела к нуклеосомам

2 Одновременное определение антител к нуклеосомам и к дсДНК позволяет повысить чувствительность и специфичность лабораторной диагностики СКВ

3 У больных СКВ уровень антител к нуклесомам достоверно связан с клиническими и лабораторными параметрами, характеризующими активность заболевания

4. Повышение уровня антител к нуклеосомам у больных СКВ ассоциируется с поражением почек, ЦНС и активностью заболевания

Внедрение в практику

Основные результаты работы используются в клинике ГУ Института ревматологии РАМН

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы 1 статья, 3 тезиса.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 6-ой Европейской конференции по СКВ (Лондон, 2005), на заседании ревматологической секции Московского научного терапевтического общества (Москва, 2006) Первичная экспертиза диссертации проведена на заседании Ученого Совета ГУ Института ревматологии РАМН 19 июня 2007 года.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 94 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав с изложением материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и указателя лите-

ратуры, содержащего 7 отечественных и 123 зарубежных источников Диссертация проиллюстрирована 24 таблицами и 21 рисунком

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования

Работа проводилась в рамках совместного научного исследования «Роль антител к нуклесомам при СКВ» между ГУ Институт ревматологии РАМН и Институтом молекулярной и клеточной биологии (Франция)

В основу работы положены результаты клинико - иммунологического обследования 85 больных с системной красной волчанкой, находившихся на стационарном лечении в клинике ГУ Институт ревматологии РАМН, а так же 85 пациентов с СКВ, проходивших обследование в клинике University of New Mexico School of Medicine, Albuquerque (США) за период с 2002 по 2004 год Все больные имели достоверный диагноз СКВ. Достоверность диагноза подтверждалась наличием не менее 4-х критериев Американской Коллегии Ревматологов (1997 г), поражение центральной нервной системы при СКВ диагностировалось согласно классификации Американской Коллегии Ревматологов (1999 г) (Hochberg М.С, 1997, ACR, 1999) В группу сравнения были включены пациенты с ревматоидным полиартритом (РА) (п=36) и болезнью Шегрена (БШ) (п=31). Группа контроля состояла из 45 здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту

Группа больных СКВ состояла из 19 (11,1%) мужчин и 151(88,9%) женщины в возрасте от 14 до 81 года. Средний возраст больных на момент включения в исследование равнялся 34,6+13,8 лет (m±SD) Основную часть обследованных больных - 61,1 % - представляли пациенты в возрасте от 21 до 40 лет На время обследования 26 больных (15,2%) были моложе 20 лет и 17 больных (10%) - старше 50 лет Продолжительность заболевания варьировала от 1 месяца до 17 лет, составляя в среднем 86 + 59,9 месяца

Частота клинических и лабораторных проявлений СКВ у больных на момент обследования представлена в таблицах 1, 2

Таблица 1

ПРОЯВЛЕНИЯ " > > • ПАЦИЕНТЫ •

* ' ».о" ,> ' * 4 (%) . '

ЭРИТЕМАТОЗНЫЕ ПОРАЖЕНИЯ КОЖИ 50 29,4

ПОРАЖЕНИЕ СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК (язвенный стоматит) 36 21,1

АРТРИТ/ АРТРАЛГИИ 56 32,9

ПОЛИСЕРОЗИТ (перикардит и/или плеврит) 28 16,4

НЕФРИТ 51 30

- из них с нефротиче-ским синдромом 10 5,8

ПОРАЖЕНИЕ ЦНС 36 21,1

Анемия (гемоглобин < 100 г/л) 14 8,2

Лейкопения <2,7х109/Л < 3,4 х109/л 14 15 8,2 8,8

Тромбоцитопения <100 х 109/л 8 4,7

АНФ 68 40

За весь период болезни в обследованной группе с наибольшей частотой встречались такие клинические проявления СКВ, как поражение кожи (29,4%), артриты (32,9%), нефрит (30%), поражение ЦНС (21,1%) Поражения ЦНС проявлялось органическими поражениями, мигненозными головными болями и интеллектуально-мнестическими нарушениями и их сочетанием. Среди лабораторных нарушений с одинаковой частотой выявлялась анемия и лейкопения (8,2% и 8,2% соответственно) Антинуклеарный фактор в диагностических титрах регистрировался у 40% больных

Характер течения и активность СКВ по классификации В.А Насоновой (1972), а так же по SLEDAI (SLE Activity Index) (Gladman D D и соавт., 2002) представлена в таблице 2

Степень активности и характер течения СКВ

Таблица 2

- • Параметр количество '» i %з * ' '

SLED AI, баллы Mean 10,7 (SD 8 9)

Активность СКВ

I 67 39,4

II 77 45,2

III 26 15,2

Характер течения

Острый 28 16,4

Подострый 39 22,9

Хронический 103 60,5

Большинство больных СКВ имели хронический характер течения заболевания (60,5%) и минимальная (I) степень активности (42%)

При включении в исследование больным проводилось полное клиническое, лабораторное обследование по единому протоколу

Рентгенография грудной клетки выполнялась в рентгенологическом отделении ГУ Институт ревматологии (заведующая отделением - И.А.Удельнова)

Электрокардиографическое, эхокардиографическое и ультразвуковое исследование печени, селезенки, почек (при необходимости и других внутренних органов) проводилась в лаборатории функциональной диагностики (руководитель - профессор Э.С Мач)

Исследование гематологических, биохимических показателей крови и анализов мочи проводилось унифицированным методом в биохимической лаборатории (заведующая лабораторией -к б н Л.Н.Кашникова).

Иммунологическое обследование больных выполнялось в лаборатории клинической иммунологии (руководитель - профессор А И Сперанский), а так же на базе Института молекулярной и клеточной биологии (директор - С Мюллер) (Франция)

Антинуклеарный фактор (АНФ) определяли методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием срезов печени крыс

Антитела к нуклеосомам определяли иммуноферментным методом (ИФМ) с использованием коммерческих наборов (Quanta lite, США), согласно инструкции фирмы производителя Верхняя граница нормальной концентрации составляла 25 ЕД/мл (Mean + 3SD), что соответствует рекомендациям фирмы производителя, полученным при исследовании 300 сывороток здоровых доноров, а так калибро-

вочная кривая сверена с собственными данными, которые были получены при исследовании 45 сывороток здоровых доноров Калибровочная кривая зависимости оптической плотности стандарта от концентрации антинуклеосомальных антител в представлена на рисунке 1.

Антинуклеосомагъные антитела ЕД/мл

Рисунок 1 Калибровочная кривая зависимости оптической плотности стандарта от концентрации антинуклеосомальных антител

Антитела к двухспиральной ДНК определяли ИФМ с использованием коммерческих наборов (Quanta lite, США), согласно инструкции фирмы производителя. Верхняя граница нормальной концентрации (Cut off) составляла 20 ЕД/мл (Mean + 3SD), что соответствует рекомендации фирмы производителя, полученным при исследовании 150 сывороток здоровых доноров Калибровочная кривая концентрации антинуклеосомальных антител сверена с данными, которые были получены при исследовании 45 сывороток здоровых доноров в данном исследовании Калибровочная кривая зависимости оптической плотности стандарта от концентрации антител дсДНК представлена на рисунке 2.

/ 1

1

/

✓ {

J

/

О 20 40 60 во

Антитела дсДНК ЕД/мл

коммерческий набор

еобствамыа рвууг^таты_

Рисунок 2 Калибровочная кривая зависимости оптической плотности стандарта от концентрации антител к дсДНК

Антитела к гистонам Н2А, Н2В, НЗ, Н4 определяли ИФМ. Пептиды к гистонам Н2А, Н2В, НЗ, Н4 были синтезированы и очищены в Институте молекулярной и клеточной биологии Верхняя граница нормальной концентрации была определена по уровню Mean + 3SD, полученному при исследовании 60 здоровых доноров. Cut off определялся в единицах оптической плотности (ед.ОП) и составлял 0,20 ед ОП, 0,20 ед.ОП, 0,46 ед ОП и 0,5 ед.ОП соответственно.

Антитела к белкам теплового шока (Hsp 60, Hsp 70, Hsp 90) определяли ИФМ с использованием коммерческих материалов (Stressgen bioreagents corp, USA) Рекомбинантный человеческий Hsp 60 (концентрация протеина 0,85 мг/мл), рекомбинантный человеческий Hsp 70 (концентрация протеина 1,25 мг/мл), рекомбинантный человеческий Hsp 90 (концентрация протеина 1,05 мг/мл). Верхняя граница нормальной концентрации была определена по уровню Mean + 3SD и составляла 0,20 ед ОП, 0,20 ед ОП и 0,20 ед ОП соответственно

Антитела к белкам теплового шока (Убиквитину, пептиду уби-квитина 22-45 цистеин и пепетиду убиквитина 42-76) определяли ИФМ. Пептиды к убиквитину, пептиду убиквитина 22-45 цистеин и пептиду 42-76 были синтезированы и очищены в Институте молекулярной и клеточной биологии. Верхняя граница нормальной концентрации была определена по уровню Cut off (Mean + 3SD) и составляла 0,21 ед.ОП, 0,20 едОП и 0,23 ед.ОП соответственно Чувствительность и специфичность определения аутоантител в диагностике СКВ рассчитывали согласно рекомендациям Е.С (Vamvakas Е.С , 1998).

Статистический анализ проводился по программе на Statistica 7.0 (Statsoft, США). Применялись методы описательной статистики, непараметрические методы Значения уровней антител представлены в виде среднего ± стандартное отклонение. Разница концентраций между двумя сравниваемыми группами оценивалась с помощью непараметрического теста Манна-Уитни, при сравнении более двух групп наличие достоверности различий оценивалось по критерию Краскела - Уоллиса Выполнялся расчет описательных статистик, для оценки взаимосвязи двух признаков применялся непараметрический корреляционный анализ по методу Спирмена, результаты которого представлены коофицентом корреляции г и точным значение р.

Результаты исследования Антитела к нуклеосомам в исследуемых группах больных

Определение антител к нуклеосомам было проведено у 237 исследуемых больных (170 СКВ, 36 РА, 31 БШ) и 45 доноров группы контроля. В сыворотках доноров уровень антител к нуклеосомам варьировал от 0,26 ЕД/мл до 22,5 ЕД/мл, составляя в среднем 8,3 + 5,2 ЕД/мл. В сыворотках больных РА уровень антител к нуклеосомам определялся в диапазоне от 0,14 до 54,5 ЕД/мл, составляя в среднем 10,9 + 13,7 ЕД/мл, а в группе с БШ от 0,16 до 52,5 ЕД/мл средний уровень составлял 15,7 ± 11,5 ЕД/мл. Содержание антител к нуклеосомам у больных СКВ варьировало от 0,45 до 221,6 ЕД/мл, а их средние показатели 74,5 ± 62,9 ЕД/мл Увеличение уровня антител к нуклеосомам > 25 ЕД/мл отмечено у 112 пациентов СКВ (65,8%), 1 пациента с РА (2,8%), а у 5 пациентов с БШ (16,1%). Уровень антител к нуклеосомам достоверно превышали показатели контрольной группы и групп больных РА и первичным БШ (р<0,05)(рисунок 3).

240 220 200 1S0 160 140 120 100 80 во

40

20 О 20

л=170 п=36 п=31 п=45

Рисунок 3 Уровень антинуклеосомальных антител у больных СКВ, РА, БШ и доноров

Больные СКВ в зависимости от результатов определения уровня антител к нуклеосомам были разделены на две подгруппы- с повышенным уровнем антител к нуклеосомам (>25 ЕД/мл) п = 112 и с нормальным уровнем (<25 ЕД/мл) п=58 (таблица 3).

Таблица 3

Частота основных клинических проявлений СКВ в зависимости от уровня _______ __антител к нуклеосомам

ПРОЯВЛЕНИЯ , " Антитела к нуклеосомам >25'ЕД/мл 1 ' Антитела ч ■кнуклеосомам Г „<25ЕД/Ш1, • у "4 1 1

. п=П2 5 ъ " п =5$ • . £ ""> ■ •

ЭРИТЕМАТОЗНЫЕ ПОРАЖЕНИЯ КО- 21 (18,7%) 29 (50%) нд

ЖИ

ПОРАЖЕНИЕ СЛИЗИСТЫХ ОБОЛО- 17 (15,2%) 19 (32,7%) н д

ЧЕК (язвенный стоматит)

АРТРИТ/ АРТРАЛ-ГИИ 38 (34%) 18(31%) Н.Д

ПОЛИСЕРОЗИТ 21 (18,7%) 7 (12%) 0,028

НЕФРИТ 46 (41%) 15 (25,8%) 0,0034

- из них с нефроти- 8 (7,1%) 2 (3,4%) 0,05

ческим синдромом

ПОРАЖЕНИЕ ЦНС 27 (24,1%) 9 (15,5%) 0,021

Анемия нд

(гемоглобин <100 г/л) 7 (6,25%) 7 (12%)

Лейкопения

<2,7х 10% <3,4х109/л 6 (5,3%) 8 (7,1%) 8 (13,8%) 7(12%) н.д Н.Д

Тромбоцитопения <100х109/л 5 (4,5%) 3 (5,2%) НД

АНФ 54 (48,2%) 14 (24,1%) 0,001

БЬЕОАГ, баллы 11,1 4Д 0,002

Активность СКВ

I II III 44 (39,3%) 49 (43,7%) 19 (17%) 23 (39,6%) 28 (48,3%) 7 (12%) н.д нд 0,05

Характер течения Острая Подострая Хроническая 21 (18,7%) 26 (23,2%) 65 (58%) 7 (12%) 13 (22,4%) 45 (77,6%) 0,048 н д нд

Статистически значимые различия между двумя группами больных были отмечены в первую очередь в отношении поражения почек, центральной нервной системы, полисерозита (р<0,05). Так же выявлены достоверные различия в активности СКВ: у больных с повышенным уровнем антител к нуклеосомам по сравнению с нормальным уровнем чаще регистрировалась III степень активности заболевания и реже I и II степени Такое соотношение сохранялось и балльной оценке активности заболевания с использованием индекса оценки активности SLEDAI (р<0,05).

Согласно литературным данным антитела к нуклеосомам превосходят по диагностической значимости антитела к дсДНК [Haddouk S и соавт, 2004, Decker Р, 2006] В нашем исследовании выявлена прямая корреляция выявления повышенного уровня антител к нуклеосомам и антител к дсДНК (г=0,70, р<0,0001) При анализе чувствительности и специфичности метода определения антител к нуклеосомам и к дсДНК было установлено, что при одновременном определении антител к нуклеосомам и дсДНК уровни чувствительности и специфичности наиболее высоки (таблица 4)

Таблица 4

Чувствительность и специфичность антител к нуклеосомам и к дсДНК при ____________СКВ, % _________

Показатель • VI . * i . - ' ... . Чувствительность * ~ Специфичность * *'

Антитела к нуклеосомам IgG 67,5% 92,5%

Антитела к дсДНК IgG 71,2% 91,7%

Антитела к нуклеосомам IgG и антитела к дсДНК IgG 86% 98,8%

Имеются данные о повышении уровня антител к нуклеосомам у больных СКВ и о тесной ассоциации их концентрации с активностью воспалительного процесса при СКВ. Оийеггег-АсИапгеп О А и соавт. (2006) выявил достоверную корреляцию активности заболевания и уровня антител к нуклеосомам, в то время как антитела к дс ДНК не отражали такой зависимости, а в другом исследовании уровень концентрации антител к нуклеосомам коррелировал и такими показате-

лями активности СКВ, как антитела к дс ДНК (Saisoong S и соавт., 2006) В проведенном нами исследовании, повешенный уровень как антител к нуклеосомам, так и антител к дсДНК кррелировал с активностью заболевания. При статистическом анализе выявлена прямая корреляция частоты выявления повышенного уровня антител к нуклеосомам и антител к дсДНК и индекса SLED AI (r=0,35, р<0,01 и г=0,31, р<0,01 соответственно)

При проведении сравнительной характеристике пациентов СКВ с положительным уровнем антител к нуклеосомам (>25 ЕД/мл) и антител к дсДНК (>20 ЕД/мл) статистически значимые различия между группами больных выявлены не были. В обеих группах были отмечены поражения почек, центральной нервной системы и полисерозита (р<0,05).

Достоверные различия в активности СКВ- у больных в обеих группах как с повышенным уровнем антител к нуклеосомам так и с повышенным уровнем к дсДНК по сравнению с нормальным уровнем чаще регистрировалась III степень активности заболевания и реже I и II степени. Такое соотношение сохранялось и балльной оценке активности заболевания с использованием индекса оценки активности SLEDAI (р<0,05)

Одним из наиболее часто встречающихся проявлений СКВ в обследованной группе было поражение почек У больных с нефритом концентрация антител к нуклеосомам была достоверно выше, чем у больных без поражения почек (р = 0,0023). Детальный анализ продемонстрировал, что максимальные уровни (достоверные) антинуклео-сомальных антител определялись у больных с нефритом с нефроти-ческим синдромом (НС) при сравнении с больными с нефритом без НС и больными без поражения почек (р<0,05) (рисунок 5)

Рисунок 5. Концентрация антител к нуклеосомам у больных с поражением почек и с различной патологией почек.

(1)-без нефрита, (2)- нефрит, (3)-нефритс нефротическим синдромом.

В нашем исследовании уровень антител к нуклеосомам был достоверно выше в группе с поражением ЦНС (р=0,001). При этом концентрация антител к нуклеосомам была достоверно выше, чем уров-нень антител к дсДНК (р=0,0034).

Антитела к пистонам в исследуемых группах

ГГо данным литературы антитела к гистонам бнаружевы при СКВ в 30 - 70% случаев при РА в 5-50%, склеродермии в 5-45%, еш-лимиозите/дерматомиозите в 20% случаев (5ЬоепГе1с1 У. И соавт., 2006). Уровени антител к гистонам Н2А и Н2В достоверно превышали показатели контрольной группы и ирупп больных РА и БШ (р<0,0 5). С одержан не антител к гистону Н2А у больных СКВ варьировало от 0,11 до 0,345 ЕД о.п., а их средние показатели 0,176 + 0, ¡34 ЕД о.п. Увеличение уровня антител к гистону Н2А > 0,20 ЕД о.п. отмечено у 74 пациентов СКВ (43,5%). 1 пациентов с РА (0,5%), а у 5 пациентов с БШ (2,9%). Содержание антител к гистону Н2В у больных СКВ варьировало от 0,16 до 0,415 ЕД о.п., а их средние показатели 0,212 + 0,174 ЕД о.п. Увеличение уровня антител к гистону Н2В > 0,20 ЕД о.л. отмечено у 85 пациентов СКВ (50%), у ни одного из пациентов с РА (0%), а у 3 пациентов с БШ (1,7%). Уровни антител к

гистонам НЗ и Н4 не превышали показатели контрольной группы и групп больных РА и БШ (р>0,05).

Статистически значимые различия повышенного уровня антител к гистонам Н2А и Н2В по сравнению с нормальным уровнем были отмечены в отношении поражения почек и центральной нервной системы, и активности заболевания (р<0,05).

Таким образом, определение гистонов Н2А и Н2В имеет достоверное значение при поражении у больных СКВ почечной ткани и ЦНС, а так же при оценке активности заболевания, что подтверждает гипотезу (Burlingame R W. и соавт , 1994) о раннем распознавании эпитопов нативного хроматина при поражении почечной ткани и вероятно ЦНС.

Антитела к белкам теплового шока в исследуемых группах

В современной литературе имеются лишь единичные публикации о роли и значимости антител к белкам теплового шока при аутоиммунных заболеваниях При сравнении уровня антител к БТШ 90, 70 и 60 при различных аутоиммунных заболеваниях, значимое повышение было определено лишь в группе смешанных заболеваний соединительной ткани (Horvath L И соавт., 2001). У больных СКВ уровень антител к убиквитину и его пептидам определяется в 80 % случаев, а при иных аутоиммунных заболеваниях антитела к «малым» БТШ описаны менее в 15% случаев (Muller S и соавт ,1988) В нашем исследовании средние уровни антител к высокомолекулярным БТШ статистически не отличались от уровней в группе доноров Однако средний уровень антител к низкомолекулярному белку убиквитину был достоверно выше при СКВ, РА и БШ по сравнению с группой доноров. При этом статистически значимых различий между группами выявлено не было Антитела же к пептидам убиквитина с аминокислотной последовательностью 22-45 цистеин и 42-76 достоверно превышали показатели контрольной группы и групп больных РА и БШ (р=0,023 и 0,04 соответственно) (табл 5)

Таблица 5

Средний уровень концентрации антител к БТШ у больных СКВ и доноров

Показатель (п=170) ЕДо.п. Меап + вВ/ -- ЕД £>.п. ВШ ' , < (п~31) Меап+50, ЕДол. , Доноры *■> "<№=45)7 ,% Меаа %'Ш», '' - ЕДо.п., *

Антитела к БТШ 90 0,24 + 0,19 0,21 + 0,23 0,20 ±0,18 0,06 ±0,02

Антитела к БТШ 70 0,20 + 0,10 0,24 ± 0,2 0,20 ±0,13 0,08 ± 0,04

Антитела к БТШ 60 0,16 + 0,16 0,26 ± 0,22 0,19 ±0,14 0,12 ± 0,04

Антитела к убиквитину 0,38 + 0,59* 0,34 + 0,26* 0,3 ±0,21* 0,060 ± 0,02

Антитела к пептид убиквитина 22-45 цис-теин 0,34+0,40" 0,17 + 0,14 0,21 ±0,21 0,07 ± 0,02

Антитела к пептид убиквитина 42-76 0,37 + 0,30" 0,26 + 0,23 0,21 ±0,21 0,07 ± 0,04

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой доноров, ** - р<0,05 по сравнению с группами РА, первичным СШ и группой доноров

Наиболее тесные ассоциации были выявлены между антителами к пептиду убиквитина 42-76 и активностью заболевания (г=0,41, р=0,006) (рисунок 6).

з

К 0670 с

г

Рисунок 6 Ранговая корреляция Спирмена между уровнем пептида убиквитина 42-76 и активностью СКВ по БЬЕОА!

Таким образом, повышенный уровень антител к пептиду убик-витина 42-76 ассоциируется с активностью заболевания.

Связь между антителами к нуклеосомам, дсДНК, гистонам и белкам теплового шока с клинико-лабораторными параметрами

Установлены тесные корреляционные взаимосвязи между антителами к нуклеосомам, дсДНК, гистонами Н2А и Н2В, а так же убик-витином и его пептидами 22-45 цистеин и 42-76 (р<0,05) Выявлена положительная корреляция между повышенным уровнем антител к гистонам Н2А и Н2В и антителами к белкам теплового шока - пептидами убиквитина 22-45 цистеин и 42-76(р<0,05)

Больные с одновременным определением нескольких типов ау-тоантител были разделены на 2 подгруппы в зависимости от типов, определяемых антител, у 17 больных (10%) одновременно определялись антитела к нуклеосомам, дсДНК, гистонам Н2А и Н2В, убикви-тину и его пептидам (22-45 цистеин и 42-76) (группа 1), и у 35 (20,5%) одновременно определялись антитела к гистонам Н2А и Н2В и к пептидам убиквитина 22-45 цистеин и 42-76 (группа 2). Лабора-торно-клиническая характеристика больных обеих групп представлена в таблице 6

Таблица 6

Клинико-лабораторные показатели у больных с различными аутоантителами

при СКВ _

Параметр Группа I - , п=10 V*' , Грухцга2 * ' , '' ; ' №=35 -' »

ВОЗРАСТ, лет 41,7(11,3) 32,4 (6,3)

ДЛИТЕЛЬНОСТЬ БОЛЕЗНИ, мес. 67,2 ± 45,8 74,7 + 55,1

ЭРИТЕМАТОЗНЫЕ ПОРАЖЕНИЯ КОЖИ 3 (30%) 8 (22,8%)

НЕФРИТ 7 (70%) 6(17,1%)*

ПОРАЖЕНИЕ ЦНС 1 (10%) 1 (2,8%)

АРТРИТ/АРТРАЛГИИ 5 (50%) 10 (28,5%)

ПОЛИСЕРОЗИТ 2 (20%) 1 (2,8%)

Анемия (гемоглобин <100 г/л) 3 (30%) 3 (8,5%)

Лейкопения < 3,4 х Ю9/л 4 (40%) 5 (14,2%)

Тромбоцитопения <100 х 109/л 3 (30%) 2 (5,7%)

БЬЕЭА!, баллы 6,5 (4,2) 7,2 (5,6)

Примечание * - достоверность различий между группами (р<0,05)

Обращает на себя внимание, что в обеих группах длительность заболевания не превышала 10 лет, во второй группе пациенты были моложе Статистические достоверные различия между группами наблюдались только в отношении развития нефрита (р<0,05).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что антитела к нуклеосомам, гистонам Н2А и Н2В и низкомолекулярным белкам теплового шока при системной красной волчанке являются новыми высокочувствительными диагностическими маркерами, которые дают возможность мониторирования прогрессирующих поражений жизненно важных органов и систем, предопределяющих прогноз больных СКВ

ВЫВОДЫ

1. У пациентов СКВ частота обнаружения и средний уровень антител к нуклеосомам, гистонам Н2А и Н2В, низкомолекулярным белкам

теплового шока - пептиду 22-45 цистеин и 42-76 был достоверно выше, чем в контрольной группе (здоровые доноры), и у пациентов

РА и БШ (р<0,05) При этом в сыворотке крови больных СКВ по-

ложительный уровень антител к нуклеосомам был выявлен в 65,8% случаев, антител к гистонам Н2А и Н2В в 43,5% и 50% случаев соответственно, антител к пептиду убиквитина 22-45 цистеин и пеп-

тиду убиквитина 42-76 в 21,7% и 24,1% случаев соответственно.

2 У пациентов СКВ отмечена положительная корреляция уровня ан-

тител к нуклеосомам и антител к дсДНК (г=0,70, р<0,0001). Чувст-

вительность и специфичность антител к нуклеосомам и антител к

дсДНК была сходной (67,5% , 92,5% и 71,2% и 91,7% соответст-

венно) Определение антител к нуклеосомам наряду с антителами к дсДНК улучшает чувствительность и специфичность диагностики СКВ (86% и 98,8% соответственно).

3 У пациентов СКВ с волчаночным нефритом средний уровень антител к нуклеосомам был выше, чем у больных без поражения почек (74,5 ±41,2 ЕД/мл и 46,4 ± 26,9 ЕД/мл, соответственно, р<0,05). У пациентов с нефритом с нефротическим синдромом было отмечено наиболее существенное увеличение концентрации антител к нуклеосомам (89,6 + 62,9 ЕД/мл, р<0,05), чем у пациентов без нефро-тического синдрома (52,3 + 23,9 ЕД/мл, р<0,05).

4 Уровень антител к нуклеосомам у больных СКВ с поражением ЦНС был выше по сравнению с таковыми у больных без поражения ЦНС (88,1 ± 51,6 ЕД/мл и 56,4 ± 48,7 ЕД/мл соответственно, р=0,001)

5 Выявлена связь уровня антител к нуклеосомам с активностью СКВ по SLEDAI (г=0,35, р<0,01) Средние уровни антител к нуклеосомам у больных со второй и третьей степенями активности СКВ были достоверно выше по сравнению с таковыми у больных с первой степенью активности заболевания (р<0,05)

6 Отмечена связь сывороточного уровня антител к гистонам Н2А и Н2В с поражением почек и ЦНС при СКВ (р<0,05) и активностью заболевания по SLEDAI (г=0,38, р=0,0016 и г=0,42, р=0,0012 соответственно)

7. Установлена взаимосвязь уровня пептида убиквитина 42-76 с активностью заболевания по SLEDAI (г=0,41, р=0,006)

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Определение антител к нуклеосомам имеет диагностическое значение при СКВ

2 Определение уровня антител к нуклеосомам целесообразно для определения активности СКВ

3 У больных СКВ с поражением почек целесообразно определение антител к нуклеосомам для оценки активности почечного процесса

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Диагностическое значение антинуклеосомальных антител при системной красной волчанке / Котовская М.А., Насонов Е.Л. // Научно-практическая ревматология. - 2006 - № 4. - С 80-86

2. Kotovskaya М.А., Soloviev S К. Intravenous therapy of methylpredmsolone and cyclophosphamide m the treatment of early SLE. Lupus 2005,14(3),S73 English

3. Клинические, лабораторные и демографические особенности у больных с ранней не леченной системной красной волчанкой / Котовская М.А., Никишина Н Ю , Соловьев С К., Насонов ЕЛ// Научно-практическая конференция «IV Съезд ревматологов Рос-сии»-Тезисы. - Научно-практическая ревматология - 2005 -

№3(приложение) - С 67.

4. Факторы риска и клиническая характеристика пациентов с «ранней» СКВ / Котовская М.А., Никишина Н Ю, Соловьев С К, Насонов Е Л. // Научно-практическая конференция «V Северозападная конференция по ревматологии»' Сборник тезисов. - 2005 -С.60.

Котовская Мария Александровна

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АНТИТЕЛ К НУКЛЕОСОМАМ И БЕЛКАМ ТЕПЛОВОГО ШОКА ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ

Автореферат диссертации на соискание ученой

степени кандидата медицинских наук

ЛИЦЕНЗИЯ ПД 00608

Формат 60x84/16. 1,38 уел п.л Бумага офсетная 80 гр. Тираж 100 экз. Заказ 109

Отпечатано с готовых о/м в типографии ООО «Медина-Принт» ул. Новослободская д. 14/19 стр. 5 тел./факс: 787-62-21

 
 

Оглавление диссертации Котовская, Мария Андреевна :: 2007 :: Москва

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Антитела к нуклеосомам.

1.2. Белки теплового шока.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Общая характеристика обследованных больных.

2.2. Характеристика активности и течения СКВ.

2.3. Клинические, лабораторные и инструментальные методы исследования

2.4. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Уровень антител к нуклеосомам в исследуемых группах.

3.2. Уровень антител к дсДНК в исследуемых группах.

3.3. Сравнительная характеристика уровня антител к нуклеосомам и антител к дсДНК в группе больных СКВ.

3.4. Связь уровня антител к нуклеосомам и дсДНК с активностью СКВ.

3.5. Анализ уровней антител к нуклеосомам и антител к дсДНК у больных СКВ с поражением почек.

3.6. Анализ уровней антител к нуклеосомам и антител к дсДНК у больных СКВ с поражением центральной нервной системы.

3.7. Уровень антител к гистонам в исследуемых группах.

3.8. Уровень антител к белкам теплового шока в исследуемых группах.

3.9. Связь антител к нуклеосомам, дсДНК, гистонам и белкам теплового шока с клинико-лабораторными параметрами.

Глава 4.0БСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

 
 

Введение диссертации по теме "Ревматология", Котовская, Мария Андреевна, автореферат

Актуальность проблемы

Системная красная волчанка (СКВ) - системное аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии, патогенетически связанное с такими нарушениями иммунорегуляции, которые являются причиной гиперпродукции широкого спектра органонеспецифических аутоантител к различным компонентам ядра и иммунных комплексов, вызывающих иммуновоспалительное повреждение тканей и нарушения функций внутренних органов (Насонова В.А., Насонов ЕЛ,2003).

Основным компонентом лабораторной диагностики СКВ является выявление аутоантител к клеточным антигенам, преимущественно к ядерным, таких как антитела к гистонам (anti-HST), односпиральной и двухспиральной ДНК. Антитела к двухспиральной ДНК (дсДНК) в настоящее время являются наиболее распространенным диагностическим маркерам СКВ, однако по некоторым данным они выявляются не более чем в 50 % случаев, а уровень антител к дсДНК не всегда коррелирует с активностью (Simon et al., 2004). Другой, широко известный маркер СКВ - антинуклеарные антитела (АНФ), имеют достаточно низкий уровень специфичности, в связи с высокой частотой выявления АНФ не только при СКВ, но и при других аутоиммунных заболеваниях.

В достаточно широком спектре антиядерных антител, выявляемых при СКВ, особое внимание уделяется антителам к нуклеосомам. Нуклеосома состоит из двойной спирали ДНК, обмотанной вокруг специфического комплекса из восьми нуклеосомных гистонов (гистонового октамера). Нуклеосома представляет собой дисковидную частицу с диаметром около 11 нм, содержащую по две копии каждого из нуклеосомных гистонов (Н2А, Н2В, НЗ, Н4).

По данным Amoura Z et al. 2000, нуклеосомы играют роль превалирующих патогенетических антигенов у больных СКВ, а появление антител к нук-леосомам ассоциируется с органными поражениями (Simon et al., 2004). Более того, антитела к нуклеосомам, так же как и аутореактивные Т - хелперы, специфичные к нуклеосомам были определены в сыворотках больных СКВ (Chabre et al., 1995, Lu L., 1999). У пациентов с СКВ при скрининговом исследование была отмечена корреляционная связь между уровнем антител к нуклеосомам и поражением почек и центральной нервной системы (Williams et al., 2001). На биологических моделях СКВ было показано, что антитела к нуклеосомам выявляются до развития заболевания, однако до настоящего времени остается дискуссионным вопрос о специфичности этих аутоантител при СКВ (Rumore et al., 1990). Нет убедительных данных о преимуществах этого теста перед выявлением антител к дсДНК (Simon et al., 2004).

При поиске новых тестов, которые давали бы представление о состоянии иммунокомпетентных клеток крови при СКВ, обратила на себя внимание группа сравнительно недавно открытых внутриклеточных белков, получивших название "белки теплового шока" (БТШ или Hsp) или "стрессовые белки". Эти белки недостаточно изучены, но уже имеющиеся данные говорят, что они высоко консервативны в процессе филогенеза (Lindqulst S., 1986), необычно полифункциональны - играют важную роль во многих внутриклеточных иммуно-биохимических процессах как в экстремальных, так и в нормальных условиях (Polla B.S., 1988), что позволяет предположить об участии белков теплового шока в формировании патобиохимических внутриклеточных связей.

Таким образом, совершенствование диагностики заболевания является на сегодняшний день наиболее актуальным направлением в исследованиях, посвященных СКВ.

Цель работы

Изучить клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке.

Задачи

1. Определить частоту повышения антител к нуклеосомам в сыворотках больных СКВ и их связь с клинико - лабораторными проявлениями СКВ.

2. Проанализировать связь уровня антител к нуклеосомам с антителами к дсДНК.

3. Выявить уровень и частоту повышения антител к связанным гистонам в сыворотках больных СКВ, их связь с клинико-лабораторными параметрами СКВ.

4. Исследовать уровень и частоту повышения антител к белкам теплового шока в сыворотках больных СКВ.

Научная новизна

Впервые в настоящей работе на большом клиническом материале проведено одновременное исследование сывороточных концентраций антител к нуклеосомам, компонентам нуклеосом - гистонам и белкам теплового шока у больных СКВ, и проведено их сопоставление с клинико — лабораторными проявлениями и активностью этого заболевания.

Выявлена связь антител к нуклеосомам у больных СКВ с поражением почек, центральной нервной системы и активностью заболевания.

Впервые проведен детальный анализ клинических проявлений СКВ в зависимости от степени повышения уровня антител к гистонам. Выявлена связь антител к гистонам Н2А и Н2В с поражением почек и центральной нервной системы у больных СКВ.

Впервые отмечена ассоциация уровня антител к пептиду убиквитина 4276 с активностью СКВ. !

Практическая значимость

1. Определение антител к нуклеосомам имеет диагностическое значение при СКВ

2. Определение уровня антител к нуклеосомам целесообразно для определения активности СКВ

3. У больных СКВ с поражением почек целесообразно определение антител к нуклеосомам для оценки активности почечного процесса

Положения, выносимые на защиту

1. При СКВ с высокой частотой выявляются антитела к нуклеосомам.

2. Одновременное определение антител к нуклеосомам и к дсДНК позволяет повысить чувствительность и специфичность лабораторной диагностики СКВ.

3. У больных СКВ уровень антител к нуклесомам достоверно связан с клиническими и лабораторными параметрами, характеризующими активность заболевания.

4. Повышение уровня антител к нуклеосомам у больных СКВ ассоциируется с поражением почек, ЦНС и активностью заболевания.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 4 работы: 3 - в отечественной печати, 1 -в зарубежной.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на: •S Lupus meeting, London, UK, 2005;

S Заседание ревматологической секции Московского научного терапевтического общества, Москва, 2006;

Первичная экспертиза проведена на заседании Ученого совета ГУ Институт ревматологии РАМН.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 93 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав с изложением материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, содержащего 7 отечественных и 123 зарубежных источников. Диссертация проиллюстрирована 24 таблицами и 21 рисунком.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке"

ВЫВОДЫ

1. У пациентов СКВ частота обнаружения и средний уровень антител к нуклеосомам, гистонам Н2А и Н2В, низкомолекулярным белкам теплового шока — пептиду 22-45 цистеин и 42-76 был достоверно выше, чем в контрольной группе (здоровые доноры), и у пациентов РА и БШ (р<0,05). При этом в сыворотке крови больных СКВ положительный уровень антител к нуклеосомам был выявлен в 65,8% случаев, антител к гистонам Н2А и Н2В в 43,5% и 50% случаев соответственно, антител к пептиду убиквитина 22-45 цистеин и пептиду убиквитина 42-76 в 21,7% и 24,1% случаев соответственно.

2. У пациентов СКВ отмечена положительная корреляция уровня антител к нуклеосомам и антител к дсДНК (г=0,70, р<0,0001). Чувствительность и специфичность антител к нуклеосомам и антител к дсДНК была сходной (67,5% , 92,5% и 71,2% и 91,7% соответственно). Определение антител к нуклеосомам наряду с антителами к дсДНК улучшает чувствительность и специфичность диагностики СКВ (86% и 98,8% соответственно).

3. У пациентов СКВ с волчаночным нефритом средний уровень антител к нуклеосомам был выше, чем у больных без поражения почек (74,5 + 41,2 ЕД/мл и 46,4 + 26,9 ЕД/мл, соответственно, р<0,05). У пациентов с нефритом с нефротическим синдромом было отмечено наиболее существенное увеличение концентрации антител к нуклеосомам (89,6 + 62,9 ЕД/мл, р<0,05), чем у пациентов без нефротического синдрома (52,3 + 23,9 ЕД/мл, р<0,05).

4. Уровень антител к нуклеосомам у больных СКВ с поражением ЦНС был выше по сравнению с таковыми у больных без поражения ЦНС (88,1 +51,6 ЕД/мл и 56,4 + 48,7 ЕД/мл соответственно, р=0,001).

5. Выявлена связь уровня антител к нуклеосомам с активностью СКВ по SLEDAI (г=0,35, р<0,01). Средние уровни антител к нуклеосомам у больных со второй и третьей степенями активности СКВ были достоверно выше по сравнению с таковыми у больных с первой степенью активности заболевания (р<0,05).

6. Отмечена связь сывороточного уровня антител к гистонам Н2А и Н2В с поражением почек и ЦНС при СКВ (р<0,05) и активностью заболевания по SLEDAI (г=0,38, р=0,0016 и г=0,42, р=0,0012 соответственно).

7. Установлена взаимосвязь уровня пептида убиквитина 42-76 с активностью заболевания по SLEDAI (г=0,41, р=0,006).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Определение антител к нуклеосомам служит дополнительным диагностическим тестом при СКВ, позволяет уточнить активность процесса и наличие органной патологии (нефрита и поражения ЦНС).

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2007 года, Котовская, Мария Андреевна

1. Избранные лекции по клинической ревматологии: Учебное пособие для слушателей институтов и факультетов последипломного образования / Под ред. Насоновой В.А., Бунчука Н.В. М.: Медицина, 2001. - 272 с.

2. Лим В. И., Аглямова Г. В. Принципы формирования пространственной структуры белков и нуклеиновых кислот. Стереохимическое моделирование // Молекулярная биология. 1999. - N 6. - С. 1027-1034.

3. Насонова В.А. Системная красная волчанка. М.: Медицина, 1972. - 143 с.

4. Насонова В.А. Системные заболевания соединительной ткани: этиология и патогенез // Врач. 2000. - N 9. - С. 3-5

5. Петушкова Е. В. Гистоны и перенос генетической информации: Пер. с англ. М., Лит, 1968. - 17 с.

6. Рациональная фармакотерапия ревматических заболеваний: Руководство для практикующих врачей / Под ред. Насоновой В.А., Насонова Е.Л. — М.: Литтерра, 2003. 507 с.

7. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. М.: МедиаСфера, 2002. - 312 с.

8. ACR Ad Hoc Committee. The American College of Rheumatology Nomenclature and Case Definition for Neuropsychiatric Lupus Syndromes // Arthrit. Rheum. 1999. - V. 42. - P. 599-608.

9. Akashi Y., Yoshizawa N. Participation of histones and ubiquitin in lupus nephritis // Nippon Jinzo Gakkai Shi. 1995. - V. 37(8). - P. 462-467.

10. Amoura Z., Koutouzov S., Piette J.C. The role of nucleosome in lupus / Curr. Opin. Rheumatol. 2000. - 12. P. 369-373.

11. Amoura Z., Piette J.C., Bach J.F. et al. The key role of nucleosomes in lupus // Arthrit. Rheum. 1999. - V. 42. - P. 833-843.

12. Arndt V, Daniel C, Nastainczyk W. et al. BAG-2 acts as an inhibitor of the chaperone-associated ubiquitin ligase CHIP // Mol. Biol. Cell. 2005. - V. 16. -P. 5891-5900.

13. Arrigo AP. Heat shock proteins as molecular chaperones // Med. Sci. (Paris). -2005.-V. 21.-P. 619-625.

14. Arrigo AP. The cellular "networking" of mammalian Hsp27 and its functions in the control of protein folding, redox state and apoptosis //Adv. Exp. Med. Biol. -2007. V. 594.-P. 14-26.

15. Bartis D., Boldizsar F., Kvell K. et al. Intermolecular relations between the glucocorticoid receptor, ZAP-70 kinase, and Hsp-90 // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2007. V. 2. P. - 253-258.

16. Beere H.M., Wolf B.B., Cain K. et al. Heat-shock protein 70 inhibits apoptosis by preventing recruitment of procaspase-9 to the Apaf-1 apoptosome //

17. Nat. Cell. Biol. 2000. V.8. P. - 469-475.

18. Bitar KN, Kaminski MS, Hailat N. et al. Hsp27 is a mediator of sustained smooth muscle contraction in response to bombesin //

19. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991.-V. 31. P. - 1192-1200.

20. Bombardier С., Gladman D.D., Urowitz M.B. et al. Derivation of the SLEDAI (a disease activity index for lupus patients) // Arthrit. Rheum. 1992. - V. 35. - P. 630-640.

21. Brodsky J.L., Bauerle M., Horst M. et al. Mitochondrial Hsp70 cannot replace BiP in driving protein translocation into the yeast endoplasmic reticulum // FEBS Lett. 1998. - V.18. -P. 183-186.

22. Burlingame R.W., Boey M.L., Starkebaum G. et al. The central role of chromatin in autoimmune responses to histones and DNA in systemic lupus erythematosus // J. Clin. Invest. 1994. - V. 94. - P. 184-192.

23. Burlingame RW, Cervera R. Anti-chromatin (anti-nucleosome) autoantibodies // Autoimmun Rev. 2002. - V. 1. - P.321-328.

24. Cairns A.P., McMillan S.A., Crockard A.D. et al. Antinucleosome antibodies in the diagnosis of systemic lupus erythematosus // Ann. Rheum. Dis. 2003. — V. 62.-P. 272-273.

25. Casciola-Rosen L.A., Anhalt G., Rosen A. Autoantigen targered in systemic lupus erythematosus are clustered in two populations of surface structures on apoptotic kerarinocytes // J. Exp. Med. 1994. - V. 179. - P.1317-1330.

26. Chabre H., Amoura Z., Piette J.C. et al. Presence of nucleosome restricted antibodies in patients with systemic lupus erythematosus // Arthrit. Rheum. - 1995. -V. 38.-P. 1485-1491.

27. Chirardello A., Doria A., Zampieri S. et al. Antinucleosome antibodies in SLE: a two-year follow-up study of 101 patients // J. Autoimmun. 2004. - V. 22. - P. 235-240.

28. Conroy S.E., Faulds G.B., Williams W. et al. Detection of autoantibodies to the 90 kDa heat shock protein in systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases // Br. J. Rheumatol. 1994. - V.33. - P.923-926.

29. Cutforth T, Rubin G.M. Mutations in Hsp83 and cdc37 impair signaling by the sevenless receptor tyrosine kinase in Drosophila // Cell. — 1994. V.77. - P. 1027-1036.

30. Decker P. Nucleosome autoantibodies // Clin. Chim. Acta. 2006. - V.366. -P.48-60.

31. Dix D.J. Hsp70 expression and function during gametogenesis // Cell Stress Chaperones. 1997.- V.2.-P.73-7.

32. Dokladny K., Wharton W., Lobb R. et al. Induction of physiological thermotol-erance in MDCK monolayers: contribution of heat shock protein 70 // Cell Stress Chaperones. 2006. - V. 11. - P.268-275.

33. Duncan RF. Inhibition of Hsp90 function delays and impairs recoveiy from heat shock // FEBS J. 2005. - V.272. - P.5244-5256.

34. Emlen W, Neibur J, Kadera R. Accelerated in vitro apoptosis of lymphocytes from patients with systemic lupus erythematosus // J. Immunol. 1994.1. V. 152. — P.3685-92.

35. Esser C., Alberti S., Hohfeld J. Cooperation of molecular chaperones with the ubiquitin/proteasome system // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - V.29. -P.171-188.

36. Esser C., Scheffner M., Hohfeld J. The chaperone-associated ubiquitin ligase CHIP is able to target p53 for proteasomal degradation // J. Biol. Chem. 2005.- V.22. P. 27443-27448.

37. Eversole-Cire P., Concepcion F.A., Simon M.I.et al. Synergistic effect of Bcl-2 and BAG-1 on the prevention of photoreceptor cell death // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. — V.41.-P.1953-61.

38. Eato (Sato) H, Miyata M, Kasukawa R. Expression of heat shock protein on lymphocytes in peripheral blood and synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis. J Rheumatol. 1996 Dec;23(12):2027-32.

39. Fawcett T.W., Sylvester S.L., Sarge K.D. et al. Effects of neurohormonal stress and aging on the activation of mammalian heat shock factor 1 // J. Biol. Chem.- 1994. V.23. - P. 32272-32278.

40. Fournel S., Muller S. Anti-nucleosome antibodies and T-cells response in systemic lupus erythematosus // Ann. Med. Interne. 2002. - V.8. - P. 513-519.

41. Fournel S., Muller S. Synthetic peptides in the diagnosis of systemic autoimmune diseases // Curr. Protein Peptide Sci. 2003. - V.4. - P.261-276.

42. Fritzler M.J., Salazar M. Diversity and origin of rheumatologic autoantibodies. Clin. Microbiol. Rev. 1991. - V.4. - P.256-269.

43. Geissler A., Rassow J., Pfanner N. et al. Mitochondrial import driving forces: enhanced trapping by matrix Hsp70 stimulates translocation and reduces the membrane potential dependence of loosely folded preproteins //

44. Mol. Cell. Biol. 2001. - V.21. - P.7097-7104.

45. Gladman DD., Ibanez D., Urowitz MB SLEDAI 2000. J Rheumatol, 2002;29:288-291.

46. Haddouk S., Ben Ayed M., Baklouti S. et al. Autoantibodies in systemic lupus erythematosus: spectrum and clinical associations // Patholog. Biolog. — 2004. — V.53. -P.311-317.

47. Haddouk S., Ben Ayed S., Baklouti S. et al. Clinical significance of antinu-cleosome antibodies in Tunisian systemic lupus erythematosus patients / Clin. Rheumatol. 2005. - V.24. - P.219-222.

48. Hmida Y., Schmit P., Gilson G. et al. Falure to detect antinucleosome antibodies in scleroderma: comment on the article by Amoura et al. // Arthrit. Rheum. -2002.-V. 46.-P. 280-282.

49. Hochberg M.C. Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus // Arthrit. Rheum. -1997.-V. 40.-P. 1725-1734.

50. Holtmann H., Winzen R., Holland P. et al. Induction of interleukin-8 synthesis integrates effects on transcription and mRNA degradation from at least three different cytokine- or stress-activated signal transduction pathways //

51. Mol. Cell. Biol. 1999.-V.19.-P. 6742-6753.

52. Horvath L., Czirjak L., Fekete B. et al. Levels of antibodies against Clq and 60 kDa family of heat shock proteins in the sera of patients with various autoimmune diseases // Immunol. Lett. 2001. - V.l. - P. 103-109.

53. Kiang J.G., Bowman P.D., Lu X. et al. Geldanamycin prevents hemorrhage-induced ATP loss by overexpressing inducible HSP70 and activating pyruvate dehydrogenase // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver. Physiol. 2006. - V.291. -P.l 17-127.

54. Kimura Y., Rutherford S.L., Miyata Y. et al. Cdc37 is a molecular chaperone with specific functions in signal transduction // Genes Dev. 1997. - V. 15. - P. 1775-1785.

55. KogaF., Xu W., Karpova T.S. et al. Hsp90 inhibition transiently activates Src kinase and promotes Src-dependent Akt and Erk activation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2006. V.25. - P.l 1318-11322.

56. Koutouzov S., Jeronimo AL., Campos H. et al. Nucleosomes in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus // Rheum. Dis. Clin. North Am. 2004. V.30. -P.529-558.

57. Latchman D.S., Isenberg D.A. The role of hsp90 in SLE // Autoimmunity. -1994.-V.19.-P.211-218.

58. Lavoie J.N., Hickey E., Weber L.A. et al. Modulation of actin microfilament dynamics and fluid phase pinocytosis by phosphorylation of heat shock protein 27 // J. Biol. Chem. 1993. - V. 15. - P.24210-24214.

59. Li G.C., Mivechi N.F., Weitzel G. Heat shock proteins, thermotolerance, and their relevance to clinical hyperthermia // Int. J. Hyperthermia. — 1995. — V.l 1. — P.459-488.

60. Loes van den Berg., Nossent H., Rekvig Ole. Prior anti-ds DNA antibody status does not predict later disease manifestations in systemic lupus erythematosus // Clin. Rheumatol. 2006. - V.25. - P.347-352.

61. Lovell R., Madden L., Carroll S. et al. The time-profile of the PBMC HSP70 response to in vitro heat shock appears temperature-dependent // Amino Acids. — 2006.-V.25.-P. 10- 12.

62. Mehler M.F., Marmur R., Gross R. et al. Cytokines regulate the cellular pheno-type of developing neural lineage species // Int. J. Dev. Neurosci. 1995. -V.13.-P. 213-40.

63. Min D.J., Kim S.J., Park S.H. et al. Anti-nucleosome antibodies: significance in lupus patients lacking anti-double-stranded DNA antibody // Clin. Exp. Rheumatol. 2002. - V.20. - P. 13-18.

64. Miyata M., Sato H., Kasukawa R. et al. Significance of endogenous heat shock protein in adjuvant arthritis // J. Rheumatol. 1999. - V.26. - P.2210-2214.

65. Mohan C., Adams S., Stanik V. et al. Nucleosome: a mojor immunogen for pathogenic autoantibody-inducing T cells in lupus // J. Exp. Med. 1993. - V. 177.-P. 1367-1368.

66. Mohan C., Liu C., Xie C., Williams R. Anti subnucleosome reactivities in systemic lupus erythematosus patients and their first-degree relatives / Clin. Exp. Immunol. - 2001. - V. 123. - P. 119-126.

67. Monestier M., Decker P., Briand J.P. et al. Molecular and structural properties of three autoimmune IgG monoclonal antibodies to histone H2B // J. Biol. Chem. -2000. V.275. - P.13558 - 13559.

68. Muller S., Briand J.P., Van Regenmortel M.H. Presence of antibodies to ubiq-uitin during the autoimmune response associated with systemic lupus erythematosus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1988. V.85. - P. 8176-8180.

69. Neckers L. Development of small molecule Hsp90 inhibitors: utilizing both forward and reverse chemical genomics for drug identification // Curr. Med. Chem. 2003. — V.10. - P.733-739.

70. Ng K.P., Manson J.J., Rahman A. et al. Association of antinucleosome antibodies with disease flare in serologically active clinically quiescent patients with systemic lupus erythematosus // Arthritis Care & Research. 2006. - V.55. — P. 900-904.

71. Norton P.M., Isenberg D.A., Latchman D.S. Elevated levels of the 90 kd heat shock protein in a proportion of SLE patients with active disease //

72. J. Autoimmun. 1989. - V.2. - P. 187-195.

73. Pak M., Hoskins J.R., Singh S.K. et al. Concurrent chaperone and protease activities of ClpAP and the requirement for the N-terminal ClpA ATP binding site for chaperone activity // J. Biol. Chem. 1999.- V.2. - P. 19316-19322.

74. Papatheodorou P., Domanska G., Oxle M. The enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) Map effector is imported into the mitochondrial matrix by the TOM/Hsp70 system and alters organelle morphology // Cell Microbiol. 2006. -V.8.-P. 677-89.

75. Park S.J., Suetsugu S., Takenawa T. Interaction of HSP90 to N-WASP leads to activation and protection from proteasome-dependent degradation // EMBO J. — 2005.-V.20.-P. 1557-1570.

76. Parsell DA, Lindquist S. The function of heat-shock proteins in stress tolerance: degradation and reactivation of damaged proteins // Annu. Rev. Genet. 1993. -V.27. - P.437-496.

77. Peng X., Guo X., Borkan S.C. Heat shock protein 90 stabilization of ErbB2 expression is disrupted by ATP depletion in myocytes // J. Biol. Chem. 2005. -V.13. -P.13148-13152.

78. Piper P.W., Truman A.W., Millson S.H. Hsp90 chaperone control over transcriptional regulation by the yeast Slt2(Mpkl)p and human ERK5 mitogen-activated protein kinases (MAPKs) // Biochem. Soc. Trans. 2006. - V.34. — P. 783-785.

79. Pisetsky D.S. Anti-DNA and autoantibodies // Curr. Opin. Rheumatol. 2000. -V.12. -P.364-368.

80. Qing G., Yan P., Xiao G. Hsp90 inhibition results in autophagy-mediated pro-teasome-independent degradation of IkappaB kinase (IKK) // Cell Res. 2006. — V.l6.-P. 895-901.

81. Rao H.Y., Yao K., Tang X.J. et al. Expression of heat shock protein 70 and heat shock protein 27 in lens epithelial cells induced by contusion and thermotoler-ance in rat model // Zhonghua Yan Ke Za Zhi. 2006. - V.42. - P. 241-245.

82. Rhodes A.D., Spitali M., Hutchinson G. et al. Expression, characterization and purification of simian immunodeficiency virus soluble, oligomerized gpl60 from mammalian cells // J. Gen. Virol. 1994. - V.75. - P. 207-213.

83. Ripley BJ, Isenberg DA, Latchman DS. Elevated levels of the 90 kDa heat shock protein (hsp90) in SLE correlate with levels of IL-6 and autoantibodies to hsp90 // J Autoimmun. 2001. - V. 17. - P. 341-346.

84. Ritossa F.Discovery of the heat shock response // Cell Stress Chaperones. — 1996. V.l. -P.97-98.

85. Rogalla Т., Ehrnsperger M., Preville X. et al. Regulation of Hsp27 oligomeri-zation, chaperone function, and protective activity against oxidative stress/tumor necrosis factor alpha by phosphorylation // J. Biol. Chem. 1999. - V.274. - P. 8947-8956.

86. Ruchalski К., Mao H., Li Z. et al. Distinct hsp70 domains mediate apoptosis-inducing factor release and nuclear accumulation // J. Biol. Chem. 2006. -V.24.-P.-7873-7880.

87. Saisoong S, Eiam-Ong S, Hanvivatvong O. Correlations between antinu-cleosome antibodies and anti-double-stranded DNA antibodies, СЗ, C4 and clinical activity in lupus patients // Clin. Exp. Rheumatol. 2006. - V. 24. -P. 51-58.

88. Sallai K., Nagy E., Derfalvy B. et al. Antinucleosome antibodies and decreased deoxyribonuclease activity in sera of patients with systemic lupus eruthematosus // Clin. Diagn. Labor. Immunol. 2005. - V.l. - P. 56-59.

89. Sanchez Y., Parsell D.A., Taulien J. et al. Genetic evidence for a functional relationship between Hsp 104 and Hsp70 // Bacteriol. 1993. - V.20. - P. 64846491.

90. Sato S., Kodera M., Haswgawa M. et al. Antinucleosome antibody is a major autoantibody in localized scleroderma // Br. J. Dermatol. 2004. - V. 151. - P. 1182-1188.

91. Shoenfeld Y., Gershwin M.E., Meroni P.L. Autoantibodies // Elservier. 2006. -P. 169-176.

92. Simon J.A., Cabiedes J., Ortiz E. et al. Anti-nucleosome antibodies in patients with systemic lupus erythematosus of recent onset. Potential utility as a diagnostic tool and disease activity marker // Rheumatol. 2005. - V.43. - P. 220-224.

93. Sondermann H., Scheufler C., Schneider C. et al. Structure of a Bag/Hsc70 complex: convergent functional evolution of Hsp70 nucleotide exchange factors //Science. -2001.-V. 23.-P. 1553-1557.

94. Stankiewicz A.R., Lachapelle G., Foo C.P. et al. Hsp70 inhibits heat-induced apoptosis upstream of mitochondria by preventing Bax translocation // J. Biol. Chem. 2005. - V. 18. - P. 38729-38739.

95. Steiman C.R. Free DNA in serum and plasma from normal adults // J. Clin. Invest. 1975. - V.56. - P. 512-515.

96. Su Y, Jia RL, Han L, Li ZG. Role of antinucleosome antibody in the diagnosis of systemic lupus erythematosus // Clinical Immunology. 2007. - V.122. -P.l 15-120.

97. Suer W., Dahnrich C., Schumberger W., Stocker W. Autoantibodies in SLE but not in scleroderma react with protein-stripped nucleosomes // J. Autoimmun. -2004.-V. 22.-P. 325-334.

98. Swiecki С., Stojadinovic A., Anderson J. et al. Effect of hyperglycemia and nitric oxide synthase inhibition on heat tolerance and induction of heat shock protein 72 kDa in vivo // Am. Surg. 2003. - V. 69. - P. 587- 592.

99. Tasneem S, Islam N, Ali R. Crossreactivity of SLE autoantibodies with 70 kDa heat shock proteins of Mycobacterium tuberculosis // Microbiol Immunol. 200. -V.45.-P. 841-846.

100. Terasawa K., Yoshimatsu K., Iemura S. Cdc37 interacts with the glycine-rich loop of Hsp90 client kinases // Mol. Cel.l Biol. 2006. - V. 26. - P. 3378-3389.

101. Textbook of biochemistry with clinical correlations // Ed. T.M. Devlin, Willy-Lyss, N.Y. -2002. P. 750-752, 1055-1073.

102. Vamvakas E.C. Meta-analyze of studies of the diagnostic accuracy of laboratory tests: a review of the concepts and methods // Arch. Pathol. Lab. Med. -1998.-V.122.-P. 675-686.

103. Villalta D., Tozzori R., Bizzaro N. et al. The relevance of autoantigen source and cutoff definition in antichromatin (nucleosome) antibody immunoassays. Ann. NY Acad. Sci.-2005.- V.1050.-P. 176-184.

104. Wang Q., Mosser D.D., Bag J. Induction of HSP70 expression and recruitment of HSC70 and HSP70 in the nucleus reduce aggregation of a polyalanine expansion mutant of PABPN1 in HeLa cells // Hum. Mol. Genet. 2005. - V.14. - P. 3673-3684.

105. Wickner S., Maurizi M.R. Here's the hook: similar substrate binding sites in the chaperone domains of Clp and Lon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1999. -V.20.-P. 8318-8320.

106. Willams RC, Malone CC., Decker P., Mufler S. Detection of nucleosome particles in serum and in plasma from patients with systemic lupus erythematousus using monoclenal antibody 4H7 // J. Rheumatol. 2001. - V.28. - P. 81-94.

107. Wright L., Barril X., Dymock B. et al. Structure-activity relationships in purine-based inhibitor binding to HSP90 isoforms. Chem. Biol. 2004. - V. 11. -P. 775-85.

108. Xu W., Yuan X., Beebe K., Xiang Z., Neckers L. Loss of Hsp90 association up-regulates Src-dependent ErbB2 activity // Mol. Cell. Biol. 2007. - V. - 27.- P. 220-228.

109. Yao K., Rao H., Wu R., Tang X., Xu W. Expression of Hsp70 and Hsp27 in lens epithelial cells in contused eye of rat modulated by thermotolerance or quercetin // Mol. Vis. 2006. - V. 9. - P. 445-450.

110. Yost H.J., Lindquist S. Translation of unspliced transcripts after heat shock // Science. -1988.-V. 16.-P. 1544-1548.

111. Yun B.G., Matts R.L. Differential effects of Hsp90 inhibition on protein kinases regulating signal transduction pathways required for myoblast differentiation // Exp. Cell. Res. 2005. - V. 307. - P. 212-223.

112. Zhang W., Hirshberg M., McLaughlin S.H. et al. Biochemical and structural studies of the interaction of Cdc37 with Hsp90 // J. Mol. Biol. 2004. - V. 16.- P. 891-907.

113. Zhao C., Hashiguchi A., Kondoh K. et al. Exogenous expression of heat shock protein 90kDa retards the cell cycle and impairs the heat shock response // Exp. Cell. Res. 2002. - V. 275. - P. 200-214.