Автореферат и диссертация по медицине (14.00.41) на тему:Кальциноз биоклапанов сердца; биохимические и метаболические факторы развития и пути профилактики

РГб од

МИНИСТЕРСТВО! ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

г. и 1г..1 --.--

НАУЧМО-ИССЛЕДОВАТЕЛ ЬСКИЙ ИНСТИТУТ ТРАНСПЛАНТОЛОГИИ И ИСКУССТВЕННЫХ ОРГАНОВ

На правах рукописи

УДК 616.126.3-089.843-077-003.84-084'

Мищенко Борис Петрович

КАЛЬЦИНОЗ БИОКЛАПАНОВ СЕРДЦА; БИОХИМИЧЕСКИЕ И МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РАЗВИТИЯ И ПУТИ ПРОФИЛАКТИКИ

Специальность: 14.00.41 — «Трансплантология и искусственные органы» 03.00.04 — «Биохимия»

Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук в форме научного доклада

Москва 1993

/

/

Работа выполнена в Институте сердечно-сосудистой хирургии им. А. Н. Бакулева РАМН (директор — академик РАМН, профессор В. И. Бураковский) и в Эндокринологическом научном центре РАМН (директор — член-корреспондент РАМН, профессор И. И. Дедов).

Научный консультант: доктор медицинских наук Б. А. Фурсов

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор М. Л. Семеновский Доктор медицинских наук, профессор В. Н. Титов Доктор медицинских наук А. И. Малашенков

Ведущая организация: Научный центр хирургии РАМН

Защита диссертации состоится^.1993 г. в ^ часов на заседании специализированного совета Д.074.34.01 при Научно-исследовательском институте трансплантологии и искусственных органов МЗ РФ (123436, Москва, ул. Щукинская, 1).

Автореферат разослан - 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук,

профессор А. А. Писаревский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Дистрофический кальциноз относится к пологий фосфорно-кальциевого обмена, имеющего в организме слож-то гормональную регуляцию. Наиболее частым его проявлением явля-'ся кальциноз клапанов сердца у больных приобретенными пороками :рдца (ППС), главным образом ревматической этиологии. Такие поро-[ сердца подлежат хирургической коррекции с имплантацией механи-ских или биологических протезов. Мировой практикой накоплен i-летний опыт клинического применения биопротезов клапанов сердца предварительно обработанных глютаральдегидом свиных аортальных апанов и перикарда телят. К настоящему времени имплантировано лее 1 млн. биопротезов клапанов сердца (Леви Р.Д., 1991). Как по-зал многолетний опыт, биопротезы адекватно коррегируют внутри-рдечную гемодинамику и значительно снижают риск тромбоэмболичес-х осложнений даже в условиях ранней по сравнению с механическими аланами отмены антикоагулянтов Щукерман Г.И. исоавт., 1984, jilllgan D.G. et al., 1985). Вместе с тем, все биопротезы, неза-;имо от вида биологической ткани, из которых они приготовлены, твержены первичной тканевой дегенерации, приводящей к нарушению 1кции клапана и необходимости его замены (Schoen F.J. et al., 35). По данным литературы, дисфункция биоклапана сердца у боль-( пороками сердца обусловлена, в основном, кальцинозом биотка-(Mllano A. et al., 1984, Schoen F.J. et Hobson C.E., 1985, Va-íte M. et al., 1985), который в большинстве случаев сопряжен с неолитическим разрушением коллагена и перфорацией створок :hoen F.J., 1985).

Механизм кальцификации ревматически повреждённых клапанов и жлапанов сердца до конца не изучен. Процессы эктопической каль-1икации наиболее активны у детей и молодых пациентов (Цукёрман :. и соавт., 1985, Antunes М. et Santas L., 1984). Так, если у ослых пациентов дисфункция 502 биоклапанов вследствие кальцино-отмечена к 10 годам после операции, то в возрасте до 15 лет бо-50% биопротезов кальцинируются уже через 3 года после их имитации ( Schoen F.J. et al., 1984, 1985, Morgan R.J. et al., 5). Значительно повышен риск минерализации клапанов сердца у щин во время беременности (Devlrl Е. et al., 1984, Salasar Е. al., 1984, Gallo J.I. et al., 1986). Имеющиеся в анамнезе забо-ания почек, паращитовидных желез, опухоли костной ткани, нас-ственная патология кальциевого обмена являются противопоказани-к имплантации биоклапанов сердца по причине повышенного риска ьциноза (Valente М. et al., 1985).

Показано, что при обработке ксенопротезов клапанов сердца глю-эльдегидом с последующей имплантацией в одну и ту же позицию, >циноз биоткани развивается в разные сроки. Это указывает на что интенсивность кальцификации биоклапанов зависит от индивидных особенностей метаболизма организма больных. Биохимически-

ми и морфологическими исследованиями показано, что образование не органической основы кальциноза-гидроксиалатита (ГА), в ревматиче< ки повреждённых клапанах, биопротезах клапанов сердца, а также би< ткани ксенопротезов в эксперименте с подкожной имплантацией живо' ным происходит в определённой мере однотипно, но с разной инте; сивностыо (Schoen F.J. et al., 1984, 1988, Зайцев B.B., 1988). № пользование экспериментальной модели послужило основой интенсив» го изучения процессов кальцификации биоткани ксенопротезов. Одн, ко клиническая практика показала, что проблема эффективной и дл: тельной защиты биопротезов клапанов сердца остается нерешённой.

Изложенное свидетельствует о необходимости комплексного изуч ния патогенеза дистрофического кальциноэа клапанов сердца, con ставления значения гормональных и метаболических нарушений в орг низме больных со степенью патологических проявлений, создания si фективных методов фармакологической и химической стабилизации ко нобиопротезов.

Цель и задачи исследования:

Цель работы - определение биохимических и метаболических фа торов, влияющих на развитие дистрофического кальциноза биоклапано сердца в клинике и эксперименте, разработка путей эффективной пр филактики.

Реализацию поставленной цели осуществляли путём решения след ющих задач:

-определить особенности фосфорно-кальциевого обмена и его го мональной регуляции у пациентов с дистрофическим кальцинозом кл панов сердца;

-исследовать функциональное состояние печени и её роль в пр цессах кальцификации клапанов сердца у больных ППС;

-оценить участие фагоцитов крови в развитии минерализации кл панов сердца;

-выявить роль и влияние витамина Д на процессы кальциноза бу ткани ксенопротезов в эксперименте;

-исследовать протекторное антикальинфицирующее действие г верхностно активных веществ, металлосодержащих комплексонов, фс форных и фосфоновых соединений и полимерных покрытий при обработь ими биоткани ксенопротезов в эксперименте;

-определить степень защитного действия ингибиторов кальциног на протеолиэ коллагена ксенобиоткани в эксперименте;

-оценить в экспериментальных условиях эффективность отечес венного препарата ксидифон для фармакологической профилактш кальцификации биоткани ксенопротезов.

Научная новизна работы:

-На клиническом материале впервые изучены особенности гор) нальной регуляции фосфорно-кальциевого обмена у больных с диет] фической кальцификацией клапанов сердца. Выявлен дисбаланс rop¡ нов фосфорно-кальциевого и водно-электролитного обмена.

-В экспериментальных условиях с подкожной имплантацией диф< зионных камер животным показаны новые аспекты влияния витамина

¡а процессы минерализации биоткани ксенопротезов.

-На большом клиническом материале проведено комплексное изуче-ие функций печени и её межуточного обмена у больных ППС с дистро-ическим кальцинозом клапанов сердца. Показана сопряжённость про-ессов кальцификации клапанов сердца с состоянием внутриклеточной егенерации гепатоцитов.

-Разработана экспериментальная модель изучения кальцификации иоткани в опытах in vitro для скрининг-теста протекторного анти-зльцифицирующего действия химических стабилизаторов биопротезов лаланов сердца. В работе показана эффективность экспериментально-э метода подкожной имплантации биоткани в диффузионных камерах пя изучения патогенеза и профилактики процессов кальцификации.

-Экспериментально обоснованы направления предупреждения каль-1фикации и протеолитического разрушения коллагена биопротезов 1апанов сердца, заключающиеся в химической обработке биоткани ;енопротезов с помощью новых фиксированных форм ингибиторов и фмакологической профилактике отечественным лекарственным препа-1ТОМ ксидифон (авторские свидетельства: N 1381939 от 1987 г., 1510314, N 1545558 от 1989 г., N 1651890, N 1680148 от i991 г., 1тенты СССР: N 1823177, N 1823179).

Практическая значимость работы:

В итоге проведенных исследований определены факторы, способ-вующие развитию дистрофического кальциноза клапанов у больных С, учёт которых может быть основанием для выбора вида протеза и хирургической коррекции пороков клапанов сердца. Обоснована лее активная кальцификация биоткани ксенопротезов у детей.

Разработана скрининг-система для оценки активности антикальци-цирующей защиты ксеноматериала.

Разработаны способы химической стабилизации биоткани с зффек-вным торможением процессов кальцификации и протеолитического зрушения коллагена ксенопротезов.

В результате работы предложен метод антикальцифицирующей обра-гки ксеноматериала биопротеза клапана сердца нового типа "БИО-<С". Данный биопротез клапанов сердца внедрён в клиническую !ктику Института сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н.Бакулева W, используют его. и другие кардиохирургические центры страны. >нка непосредственных клинических результатов показала удовлет,->ительное функционирование трансплантатов с 1985 года.

На основании методов диагностики и обработки биопротезов заре-трированы 11 изобретений.

Апробация работы и публикации. Основные результаты диссертации ожены на III Всесоюзном съезде врачей-лаборантов (Таллин, 1985), союзном симпозиуме по медицинской эняимологии (Махачкала. 1Qflfi).

Всесоюзной конференции"Цитохром Р-450 и охрана окружающей сре-

(Новосибирск, 1987), III Всесоюзном совещании по химии и применю комплексонов и комплексонатов металлов (Челябинск, 1988), аучно-техническом семинаре "Гемосовместимые биоматериалы" (Киев, 3), II Всесоюзном совещании по применению комплексонов в меда-

цине (М, 1989), на заседании хирургической секции московского на учного кардиологического общества (М, 1990), I Всесоюзном съезде сердечно-сосудистой хирургии (М, 1990).

Модели биопротезов клапанов сердца, приготовленные с использо ванием антикальциевой химической стабилизации, в 1985 и 1986 гс дах экспонировались и удостоены медалей вднх СССР.

Материалы диссертации изложены в 49 печатных работах, опубликс ванных в виде статей и тезисов.

Структура и обьём работы. Диссертация представлена к защите е форме научного доклада, изложена на 68 страницах машинописногс текста. N

Результаты работы внедрены в практику ИССХ им.А.Н.Бакулеве РАМН, лаборатории клинической биохимии ЭЩ РАМН.

Содержание работы. Материалы диссертации оформлены на основг нии клинико-биохимического и функционального обследования больны> с явлениями дистрофического кальциноза клапанов сердца, а также экспериментального изучения патогенеза и разработки профилактига минерализации и разрушения биопротезов клапанов сердца.

Накопленный клинический и экспериментальный материал являете? результатом многолетней научно-исследовательской работы. Обследс ваны 479 больных ППС и 413 здоровых людей. В исследованиях испол! зованы 28 биохимических функциональных методов.

Оценку факторов развития кальциноза клапанов сердца проводил] у больных ППС ревматической этиологии в неактивной фазе. Больны! находились в отделении ППС (рук.отд. д.м.н., профессор Цукерма] Г.И.) ИССХ им.А.Н.Бакулева РАМН с целью оперативной коррекции m роков сердца. .

Наличие и степень кальциноза клапанов сердца устанавливали bi время операции протезирования клапанов сердца согласно принятой : институте классификации. Распределение больных по видам пороко: недостаточности кровообращения (НК) по классификации А.Д.Стражеск и В.Х.Василенко,' функционального класса заболевания (Ф.кл.) п классификации Нью-йорской ассоциации кардиологов представлено табл.1. Возраст бальных и здоровых по обследованным параметра составлял от 32.0±1.8 до 39.0±2.1 лет. Распределение по полу был практически равным для мужчин и женщин.

Регуляцию фосфорно-кальциевого обмена оценивали на основани базального содержания гормонов в сыворотке крови радиоиммунным м •годом при использовании коммерческих наборов: паратгормс (ПГ) -"Омега", фирмы "Cambridge medical diagnostics "(США), калы] тонин (KT), альдостерон и кортизол-фирмы "Sea-Ire-Sorin" (Фрг ция-Италия), 25-оксивитамин - фирмы "Roche" (Швейцария).

Содержание общего кальция (Ca) в сыворотке крови определяв флюориметрически на анализаторе "Корнинг-940" (Англия), фосфс (Р)- спектрофотометрически при использовании наборов реактивов мы "Берингер-Манхейм" (Германия), ионизированного кальщ (Са++)-на ионселективном анализаторе "Ciba-Corning 634" (Англия).

Содержание антипирина в сыворотке крови и слюне с целью оцет

)ункционального состояния эндоплазматического ретикулума (ЭР) ге-[атоцитов (антипириновая проба) и определения общей жидкости орга-1изма проводили по реакции Броди, с помощью разработанных нами ме-'одов*. Объём внеклеточной жидкости оценивали с испольованием тио-1ианата натрия по методу Pettinari V. et al., (1956).

Активность ферментов сыворотки крови: холинэстеразы (ХЭ), ще-очной фосфатазы (ЩФ), г-глютамилтрансферазы (r-ГТ), лейциларилами-азы (JIAA), аланинаминополипептидазы (ААПП) и аланиновой трансфе-азы (AJIT) определяли кинетическими методами с помощью наборов и о рекомендациям фирмы "Берингер-Манхейм"(Германия) на анализаторе корости реакции "ЛКБ 2086" (Швеция). Активность лизосомальных фер-ентов сыворотки крови и межтканевой жидкости: 8-глюкуронидазы 0-ГЛ), арилсульфатазы А (АСА), N-ацетил-в,Д-глюкозаминидазы (НАГ) пределяли спектрофотометрическими методами. Концентрацию альбуми-а сыворотки крови оценивали по методу Doumas В.Т. et al., (1972), реальбумина - иммунонефелометрическим методом, желчных кислот -тоориметрически с помощью З-а-гидроксистероиддегидрогенавы по реко-зндации фирмы "Hylomed" (Норвегия). Глюкгюовую кислоту в моче оп-эделяли по методу Simneus C.J. et ail., (1974), галактозу-фермента-ганым методом по рекомендации фирмы "Берингер-Манхейм" (Германия).

Для экспериментальной оценки протекторного действия ингибито-эв кальцификации применяли модель подкожной имплантации биоткани :енопротезов животным по методу Flshbein М. etal., (1982). Ис-хльзовали крыс линии Вистар и кроликов породы Шиншилла в возрасте ^ответственно б и 8 недель. Степень кальцификации определяли по держанию Са и Р после сжигания ксеноматериала в муфельной печи >и температуре 600°С,с последующим растворением неорганического :татка в IN НС1 с расчётом на мг сухого веса биоткани. Содержание ксированных фосфоновых соединений рассчитывали по Р после их гид-1лиза и влажного обезоливания ксеноматериала в смеси концентриро-1нных серной и азотной кислот при температуре 300°С. Содержание . :нката и куприата этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) на био-■териале определяли после их десорбции по концентрации цинка и ди. Последнюю определяли с помощью наборов фирмы "Берингер-Ман-йм" (Германия), а цинк-методом титрования 0.01N раствором ЭДТА с дикатором эриохромом. Содержание комплексонов на биоткани рассчи-вали в мкг на мг веса влажной ткани. _

Степень протеолиза коллагена биоткани ксенопротезов : оценивали еле инкубации с раствором коллагеназы фирмы""Сигма" (США) по кон-нтрации оксипролина в реакционной среде, который определяли по тоду Ritchie J.С.et al., (1977). Кусочки биоткани диаметром 5 мм -кубировали в 1 мл 10 мМоль/л Hepes буфера, рН 7.0, содержащего 30 Е коллагеназы и 5 мМоль/л Са++, в течение 24 часов. Результа-рассчитывали в мг оксипролина/л.час.

Исследования проводили в лаборатории биохимии (рук.лаб. д.м.н. эфессор Сапрыгин Д.Б.), лаборатории биопротезирования (рук.лаб. ¿. н. Фурсов Б.А.) ИССХ им.А.Н.Бакулева РАМН и в лаборатории кли-1еской биохимии (руководимой автором) ЭНЦ РАМН.

ГОРМОНЫ И СОСТОЯНИЕ ФОСЗОРНО-КАЛЬЦИЕВОГО ОБМЕНА У БОЛЬНЫХ ППС С КАЛЬЦИНОЗОМ КЛАПАНОВ СЕРДЦА

Кальциноз является патологической альтернативой процессу фи Биологической минерализации костной ткани. Неорганическим субстрг том данных процессов является ГА - минерал, содержащий в основном Ca и Р. В связи с .этим особый интерес представляло изучение гомес стаза Ca и Р в крови и состояния гормональной регуляции фосфор но-кальциевого обмена у больных с активными проявлениями патологи ческой кальцификации.

Исследование обмена Ca у больных ППС и здоровых людей показг ло, что содержание общего и ионизированного Ca сыворотки крови больных с кальцинозом клапанов сердца практически не отличалось от аналогичных показателей у здоровых и больных без кальциноза клапанов, что соответствует литературным данным (Anderson Н.С., 1983).

Гиперфосфатемии придают патогенетическое значение в патологи ческой кальцификации (Harasaki Н. et al., 1979). В связи с этим.пс вышенное по сравнению с взрослыми содержание Р сыворотки крови у детей может быть постулировано как один из факторов повышение го риска у них кальцификации биоклапанов сердца. Проведенные нами исследования фосфатемии выявили незначительное, но достоверное пс сравнению с контрольной группой увеличение содержания Р сыворотки крови больных ППС как в целом по группе, так и в зависимости от вь раженности кальциноза клапанов (табл.2). Гиперфосфатемия отмеченг у 29% больных ППС. У больных с кальцинозом клапанов сердца имелась лишь тенденция к увеличению Р в крови. Не выявлена зависимость мел ду концентрацией Р в сыворотке крови и видом порока, стадией НК и Ф.кл. заболевания. Частота гиперфосфатемии была практически одйнг ковой у больных при наличии кальциноза клапанов и без такового.

При рассмотрении дистрофического кальциноза мы исходили иг представлений, что на патологическую минерализацию клапанов сердце больных ППС, наряду с факторами патогноматичными для данного прс . цесса;(вид порока, степень нарушения кровообращения, тяжесть пате логического процесса), оказывают влияние гормоны, прямо или косвен но регулирующие фосфорно-кальциевый обмен и процессы физиологичес кой кальцификации.

Анализ результатов определения кальцийрегулирующего гормонг паращитовидной железы - паратгормона, показал, что его базальная секреция в крови больных ППС с кальцинозом клапанов достоверно ну же, чем у больных без кальциноза (табл.3), но содержание ПГ в сывс ротке крови обеих клинических групп не имело достоверных отличий с группы здоровых людей. Определение концентрации ПГ сыворотки крову больных ППС с патологической минерализацией в зависимости от выра женности процесса выявило угнетение его секреции только у больных с MI степенью кальциноза клапанов сердца с достоверными отличиям? от 0 и II степеней кальцификации. Не выявлено достоверных различив базального уровня ПГ в сыворотке крови от вида порока сердца, ста

ии НК,- тяжести заболевания, а внутри каждой из групп - от нали-ия патологической кальцификации клапанов. Учитывая, что физиологи-еское действие ПГ связано с нормализацией гипокальциемического остояния путём его гиперпродукции, у больных ППС с калыданозом кла-анов сердца при нормокальциемии базальный уровень гормона был прак-ически равен таковому у здоровых и только при выраженном процессе атологической кальцификации его концентрация оказалась незначитель-

0 сниженной по сравнению с больными без аналогичных проявлений.

Определение базального уровня в крови кальцитонина, кальцийре-/лирующего антагониста ПГ, выявило более существенные особенности, эк, его концентрация в сыворотке крови больных ППС в целом по груп-

5 оказалась достоверно повышенной по сравнению с группой здоровых эдей(табл.З). Наибольшее изменение в концентрации КТ сыворотки кро-

1 наблюдалось у больных с кальцинозом клапанов, превышая таковую у щиентов без кальциноза и у здоровых людей, соответственно в 1.3 и

6 раза. Более того, у больных с наиболее выраженной кальцификаци-I клапанов (III степень) исследуемый показатель был достоверно по-ппен, по сравнению с 0 и I степенями кальциноза клапанов, соответ-'венно в 1.65 и 2.26 раза. Уровень базальной секреции КТ не завися от вида порока и тяжести заболевания. У больных с НК НА ста-[ей концентрация КТ была достоверно выше по сравнению с НК 0-1 адией, Р<0.02. При анализе однородной группы НК ПА стадией выяв-на тенденция к гиперпродукции КТ у больных с кальцинозом клапанов.

Минералокортикоид надпочечников, альдостерон, не оказывает ямого влияния на фосфорно-кальциевый обмен и процесс физиологи-ской кальцификации. Однако регулируя водно-злектролитный обмен, нный гормон активно влияет на количественный и качественный со-ав межтканевой жидкости, в частности, гидрофобной соединительной ани, что и определяет актуальность его исследования при дистрофиком кальцинозе клапанов сердца у больных ППС с нарушением' кро-эбращения.

Базальный уровень альдостерона сыворотки крови больных ППС в том достоверно превышал содержание гормона у здоровых людей абл.З). Это наблюдалось как у больных без кальциноза клапанов, (не его проявлением (132 и 189%). Анализ исследуемого показа-щ в зависимости от. выраженности патологической кальцификации шанов сердца показал значительное увеличение концентрации альг :терона при III степени кальциноза клапанов сердца, содержание юрого достоверно превалировало над таковым у больных без каль-юза (более чем в 2 раза).

Содержание альдостерона сыворотки крови больных с аортальными юками не отличалось от здоровых людей, но оказалось достоверно ;е, чем v больных с митральными и митрально-трикуспидяльными псами сердца, соответственно Р<0.001 и Р<0.01. При исследовании ьных ППС однородной группы по НК ПА стадии содержание альдосте-а в крови больных с кальцинозом клапанов оказалось в 1.5 раза е, чем у больных без такового, Р<0.001 (табл.4).

Назальное содержание кортизола у больных ППС с кальцинозом

клапанов сердца практически не отличалось от группы здоровых людер и бальных без кальциноза (табл.3). Не найдены отличия в концентр; ции кортизола сыворотки крови больных ШС в зависимости от степеш выраженности патологической кальцификации. Отмечено лишь достове{ ное снижение исследуемого показателя при аортальных пороках пс сравнению с митральными (Р<0.001), а также при НК 0-1 стадии пс сравнению с НК IIA стадии (Р<0.01).

Существенное' влияние на фосфорно-кальциевый обмен, физиолог! ческие и патологические процессы минерализации костной ткани окг зывают биологически активные формы витамина Д: 1.25-диоксихол< кальциферол (1.25-(ОН)гДз). его предшественник - 25-оксихолекальц1 ферол (25-0НДз) и дериват последнего - 24.25-диоксихолекальцифера (24.25-(ОН)гДз) (Бауман В.К., 1989). Доказано, что концентрацш 25-ОНДз в крови наиболее полно отражает обеспеченность организм; витамином Д (Спиричев В.Б., 1981, Arnaud S.В., Meger J., 1983)

При изучении патологической кальцификации клапанов сердц; больных ППС мы выявили изменения базального уровня 25-ОНДэ. Иссл< дуемый показатель в целом по группе оказался достоверно выше, че) у здоровых людей (табл.3). Содержание 25-ОНДз сыворотки кров] больных с кальциноэом клапанов достоверно превалировало над так( вым у больных без аналогичных проявлений. Отмечена гиперпродукци: 25-ОНДз У больных ППС в зависимости от степени выраженности каш циноза клапанов сердца.

Не выявлены различия в содержании 25-ОНДэ в сыворотке кров! больных ППС в зависимости от вида порока и тяжести заболевания. : больных с НК О-I стадии уровень 25-ОНДз в крови не отличался о1 группы здоровых людей, но оказался достоверно ниже, чем у больны с НК IIA и НК НБ-Ш стадий, соответственно Р<0.001 и Р<0.05 При исследовании однородной группы по НК IIA стадии концентраци: 25-ОНДз в сыворотке крови больных с кальцинозом клапанов достове; но превышала таковую у больных без кальциноза (табл.4). Из всег числа обследованных больных ППС выявлен лишь один случай с условн "токсическим" уровнем гипервитаминоза Д (более 100 нг/мл 25-ОНДз с нормокальциемией в крови (Спиричев В.Б., 1981).

Констелляция гормонов, влияющих на фосфорно-кальциевый обме у больных ППС показала, что содержание 25-ОНДз У больных без кал циноза клапанов сердца' позитивно коррелирует с показателями в кр ви КТ и кортизола, а взаимосвязь с концентрацией Р носит отриц тельный характер (табл.5). Выявлена также отрицательная взаим связь содержания Р в сыворотке крови с баэальным уровнем кортизол У больных с кальцинозом клапанов сердца аналогичных коррелятивны связей не обнаружено. Выявлено лишь атипичное взаимоотношение б зальных уровней 25-ОНДз и КТ сыворотки крови. Гипервитаминоз Д организме приводит к избыточному поступлению Са в кровь, провой руя увеличение продукции КТ, ответственного за поддержание норм кальциемии. Такая взаимосвязь выявляется у больных без кальциноэ клапанов сердца. У больных с патологической кальцификацией вза мосвязь данных показателей имеет достоверно отрицательный харг

'ер, что, возможно, является особенностью процесса кальциноза в >рганизме больных ППС. В то же время интимные механизмы этого вза-моотношения остаются неясными.

Таким образом, у больных ППС с проявлениями патологической альцификации клапанов сердца выявлен гормональный дисбаланс фос-юрно-кальциевого обмена при отсутствии существенного нарушения омеостаза Са и Р. Гипервитаминоз 25-ОНДз у больных с кальцинозом лапанов сердца имеет, по нашему мнению, важное значение в понима-ии процесса патологической кальцификации.

В экспериментах на крысах было показано, что при подкожной мплантации биоткани ксенопротезов клапанов сердца и искусственном ефиците витамина Л кальцификация биоматериала практически не про-сходила даже в том случае, когда крысам экзогенно вводили Са и Р физиологических концентрациях. Нормализация базального уровня итамина Д в крови животных способствовала активной кальцификации иоткани ксенопротезов клапанов сердца (Levy R.J.., 1985). Это даёт снование полагать, что увеличение содержания 25-ОНДз в крови ольных ППС является одним из активных факторов развития кальцино-а клапанов сердца.

Однако считают, что 25-ОНДз непосредственно не обладает био-эгической активностью при взаимодействии с тканями и клетками, го физиологическое действие определено способностью к дальнейшей эансформации в дигидропроизводные - 1.25-(ОН)гДз и 24.25-(ОН)гДз» эторая происходит в почках: первый из них является наиболее стивным.

Наличие у больных ППС нормокальциемии и практически нормально уровня ПГ не даёт основания говорить о гиперпродукции 25-(0Н)гДз- В то же время известно, что гиперпродукция КТ связа-1 с влиянием 1.25-(0Н)гДз: опосредованно-путём избыточного поступ-шия Са в кровь за счёт синтеза в кишечнике витамин Д-зависимого шьцийсвязывающего белка-кальбиндина (Бауман В.К., 1989), а также гтём прямого воздействия кальцитриола на синтез и секрецию КТ !aue F., Deutsche J., 1983, Segond N. et al., 1985). Наличие у »льных ППС с кальцинозом клапанов сердца отрицательной корреляцией взаимосвязи между содержанием в крови 25-ОНДз и КТ может ука-[вать на существование иного механизма гиперпродукции последнего, итывая физиологическое действие КТ, выявленная гиперпродукция_ о у больных ППС с патологической'кальцификацией клапанов может' ализоваться активным перераспределением Са из крови в межткане-е пространство и формированием условий интенсификации дистрофи-ского кальциноза.

Повышенный уровень 25-ОНДз ведет к избыточному образованию о леривата - 24.25-(0Н)?Дз. Последний, как известно, обладает ецифической ролью в процессах эндохондриального развития костной ани (Ornoy A. et al., 1985) посредством влияния на специфические цепторы пролиферативной зоны костей (Somjen D. et al., 1983). зможно сходное его влияние и на эктопическую кальцификацию кланов сердца.

СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ У БОЛЬНЫХ ППС И ЕЁ РОЛЬ В РАЗВИТИИ КАЛЫЩФИКАЦИИ КЛАПАНОВ СЕРДЦА

Печень является полифункциональным органом с высоким уровне метаболических процессов, который прямо или косвенно контролируе практически все виды обмена веществ (Березов Т.Т., Коровга Б.Ф., 1986). Функционирование органа с учётом роли иннервации кровоснабжения определено состоянием внутриклеточных регенерш онных процессов в гепатоцитах, обеспечивающих протекание всех { акций в печени в условиях эффективного кровотока и гуморальной I гуляции . В связи с этим актуальным явилось изучение особенносте функционального состояния печени и её межуточного обмена у больш ППС с дистрофическим кальцинозом клапанов сердца.

Функциональное состояние эндоплазматического ретикулума гепатоцитов больных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

Основными компонентами, составляющими белковый каркас ЭР ] патоцитов, являются цитохром Р-450 и сопряжённые с ним фермен' (Лукьянова Л.Д. и соавт., 1982), именуемые в литературе моноокси назами, оксидазами смешацного типа, осуществляющие так называем! микросомальное окисление. Они выполняют основную роль в биотра! формации ксенобиотиков, эндогенных веществ и субстратов. В часи сти, ферментами ЭР гепатоцитов осуществляется первый этап образо: ния гормона - кальцитриола из витамина Д. Учитывая, что фармако: нетические параметры лекарственного препарата антипирина имеют ч кую взаимосвязь с содержанием цитохрома Р-450 в печени, мы испо. зовали опеделение Т1/2 антипирина для оценки функционального сос яния ЭР гепатоцитов.

Проведенные исследования Т1/2 антипирина у больных ППС с па логической минерализацией клапанов сердца выявили чёткую зави мость между изучаемым параметром и степенью кальциноза клапан ■сердца (табл.6 и рис.1). Так, больные без следов кальцификации к панов имели наиболее выраженное угнетение функционального сост ния ЭР гепатоцитов, показатель которой достоверно отличался от кового больных с II и III степенями кальциноза клапанов, соответ венно в 1.3 и 1.43 раза. Несмотря на тот факт, что Т1/2 антипири во всех представленных группах больных ППС достоверно превышал н мальные значения, прослеживается закономерность, согласно котор по мере выраженности степени кальциноза клапанов сердца данный казатель приближался к функциональному статусу здоровых людей.

Выявлены различия исследуемого показателя от вида порока НК. Так, у больных с аортальными пороками угнетение функции ЭР патоцитов наименее выражено, ситуация усугубляется у больных с \ ральными пороками, а особенно с вовлечением в патологический г цесс трёхстворчатого клапана. Т1/2 антипирина у больных ППС с 0-1 стадией практически не отличался от данного показателя у здс

к людей, а с отягощением нарушения кровообращения приобретал бое патологический характер.

Анализ результатов Т1/2 антипирина больных ШС с наличием лыдиноза клапанов сердца и без такового в зависимости от вида рока, НК и тяжести заболевания показал, что практически во всех следованных группах функциональный статус ЭР гепатоцитов у боль-х с кальцинозом был активнее, чем у больных без патологической льцификации клапанов сердца (табл.7).

Анализ индивидуальных показателей функционального статуса ЭР патоцитов в зависимости от НК показал, что у больных с кальцино-»1 клапанов сердца Т1/2 антипирина находился, в основном, в градах нормы (707,), а у больных с НК II-III стадий без кальциноза танов выявлялись в подавляющем большинстве (77%) патологические зультаты (рис.2).

Ранее было показано, что биотрансформация антипирина у людей ютически детерминирована (УеБеИ Е.Э. еЬ а1., 1971). При обсле-¡ании нами 57 практически здоровых военнослужащих в возрасте ■19 лет, . находившихся, в идентичных условиях и на одинаковом пи-юм режиме, были выявлены быстрый и более медленный типы людей печёночной биотрансформации антипирина (рис.3). Соответствующие днестатистические результаты составили б.9±0.2 часа и 10.7±0.3 а, Р<0.001. Однотипный бимодальный характер распределения инди-уальных показателей выявлен у больных ППС в однородных группах НК (рис.4).

Дисперсия распределения показателя функционального статуса ЭР атоцитов у здоровых людей, а также у больных ППС в идентичных ппах по НК свидетельствует, что данный генетически детерминиро-ный фактор сопряжён с предрасположенностью определенных групп ьных ППС к кальцификации клапанов и биоклапанов сердца. По-види-у, этим объясняется тот факт, что даже при длительно выраженном /шении кровообращения ПБ-Ш стадий у больных ППС ("застойная" энь), приводящем к развитию кардиального цирроза, практически ;е чем у 1/2 больных с кальцинозом клапанов сердца Т1/2 антипи-1 соответствует нормальным значениям. Проведенные нами аналогич-исследования у больных с циррозами печени алкогольной и вирус-этиологии (группа сравнения) с признаками портальной гипертен-показали значительное угнетение функционального состояния ЭР. иоцитов: показатели Т1/2 антипирина составили от 26.2 до 32.1 >в.

В настоящее время неизвестны интимные механизмы взаимосвязи ¡.ессов биотрансформации в печени и кальцификации в организме, [антом интерпретации аналогичной взаимосвязи могут служить дан-

сб относительном гиперпитаминозе Л у больных ППС. Известно, образование 25-ОНДз происходит в печени с участием микросо-ной витамин Д-25-гидроксилазы, т.е. фермента ЭР гепатоцитов п Р.Б.,Бе 1,иса Н.Г., 1980). В связи с этим очевидно, что интен-ость образования данного гормонального соединения зависит от ционального состояния ЭР гепатоцитов. Поскольку у больных ППС

с кальцинозом клапанов сердца данная система находится в более ак тивноы состоянии, чем у больных без кальциноза, уровень образова ния и содержания в крови 25-ОНДз у них будет выше, что и было под тверждено проведенными нами исследованиями. Более того, выявлена однонаправленность изменений статуса изучаемой функциональной сис теш печени, содержания в крови 25-0НДэ и степени выраженности кальциноза клапанов сердца. Однако остаётся неясным тот факт, чтс при почти одинаковом активном функциональном состоянии ЭР гепатовд тов содержание 25-ОНДз в сыворотке крови здоровых людей оказалось достоверно^ ниже, чем у больных ППС. По-видимому, это связано с ш тенсивностйо эндогенного биосинтеза или катаболизма 25-ОНДз в оргг низме больных ППС, тем более, что при относительно высокой актга ности процесса гидроксилирования скоростьчего распада (Т1/2) в 0{ ганизме человека небольшая и составляет около 20 суток (Неасйас .1.6. .адапоэаига 5., 1976).

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют, чтс функциональный статус ЭР гепатоцитов у бальных ППС с дистрофичес кой катцификацией клапанов сердца находится в.более.активном ссх тоянии по сравнению с больными без кальциноза клапанов. Выявлен: сопряжённость степени выраженности кальциноза клапанов сердц; больных ППС, функционального состояния ЭР гепатоцитов и гиперпрс дукции 25-ОНДз-

Белково-синтетическая функция печени у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

С целью оценки функционального статуса белково-синтетически' процессов печени у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца лр водили определение в сыворотке крови концентрации преальбумин альбумина, а также активности ХЭ, синтезируемых рибосомальным апп ратом шероховатого ЭР гепатоцитов.

Определение' показателей белково-синтетической функции печен больных ППС с патологической кальцификацией клапанов сердца выяв ло закономерные изменения изучаемых параметров (табл.8). Так, п каэатели преальбумина, альбумина и активности ХЭ сыворотки кров больных ППС с кальцинозом клапанов сердца практически соответств вали нормальным значениям и оказались достоверно выше, чем у бол ных без кальциноза. При определении содержания альбумина и акти ности ХЭ сыворотки крови в зависимости от наличия минерализаци для однородных групп по НК ПА и НК ПБ-Ш стадий показало, чт при кальцинозе клапанов сердца больных ППС исследуемые показател достоверно превышали таковые у больных без кальциноза клапанов 8 исключением концентрации альбумина при НК ПБ-Ш стадии, где ш лась аналогичная тенденция (табл.9).

Таким образом, по данным содержания в сыворотке крови преа* , бумина, а также альбумина и ХЭ, соответственно, признаки острой хронической белково-синтетической недостаточности печени была выр жены, в основном, у пациентов без дистрофической минерализации ю

анов сердца. У больных ППС с кальцинозом клапанов эти показатели рактически не отличались от нормальных значений. Это свидетельст-ует о том, что функциональный статус шероховатого ЭР гепатоцитов больных с эктопическим кальцинозом находится в более активном остоянии по сравнению с больными ШС без указанных проявлений.

Обмен углеводов в печени больных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

Оценку углеводной функции печени больных ППС проводили с по-эщью функциональной нагрузочной пробы с галактозой. Как известно, алактоза свободно проникает в гепатоциты и превращается в печени глюкозо-1-фосфат с затратой свободной энергии. К тому же, образу-цаяся в процессе катаболизма галактозы УДФ-глюкоза трансформируйся в активную форму Д-глюкуроновой кислоты, которая используется синтезе глюкозамингликанов соединительной ткани и в фазе конь-'ации полярных веществ. Нарушение энергообразовагельных процессов печени ведёт к снижению содержания макроэргов в гепатоцитах, что свою очередь ограничивает превращение галактозы. Последняя выво-ггся из организма с мочой. Галактозу вводили лерорально в дозе 5 г/кг массы тела с последующим определением её содержания в сумной моче.

Суточная экскреция неметаболизированной галактозы у больных [С с кальцинозом клапанов практически не отличалась от здоровых дей (табл.10). У больных без кальциноза клапанов сердца суточная скреция галактозы достоверно превышала таковую у здоровых людей больных с кальцификацией клапанов сердца.

Показатели суточной экскреции галактозы в целом по группе льных ППС не зависили от стадии НК, тяжести заболевания и вида рока, хотя наиболее значимая экскреция отмечалась у больных с влечением в патологический процесс трикуспидального клапана. При ализе однородных групп больных ППС с НК ПА, НК ИБ-Ш стадий и трально-трикуспидальными пороками суточная экскреция галактозы у циентов без кальциноза более чем в 2 раза превышала таковую у льных с эктопической кальцификацией клапанов сердца.

Таким образом, способность к катаболизму галактозы у больных з патологического проявления кальцификации клапанов сердца менее., эажена, что свидетельствует о некотором ограничении свободной эргии в гепатоцитах. Возможным последствием данного проявления тяется выявленное у больных ППС без кальциноза клапанов сердца зтоверное повышение неконьюгированной фракции билирубина сыво-гки крови по сравнению с здоровыми и больными ППС с дистрофичес--\ кальцификацией клапанов. Из проведенных исследований следует, ) углеводная функции ¡¡вчени у больных ППС с кальципсосм клапанов >дца находится в более активном состоянии, чем у больных без вы-, [енных процессов минерализации клапанов.

Экскреция Д-глюкаровой кислоты у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

Оценку состояния межуточного обмена в печени больных ППС с кальцинозом клапанов сердца проводили по уровню катаболизма Д-глю куроновой кислоты с определением в суточной моче одного из конеч ных метаболитов -.Д-глюкаровой (сахарной) кислоты (Б1тпеиз СЛ. е1 а1., 1974). Д-глюкуроновая кислота в значительном количестве содер жится в соединительной ткани в качестве компонента гликозамингли канов, а активная её форма УДФ-глюкуроновая кислота участвует в фа зе конъюгации биотрансформированных ксенобиотиков и эндогенных субстратов. Показано, что уровень экскреции Д-глюкаровой кислоты служит показателем интенсивности катаболизма Д-глюкуроновой кисло ты в организме (31ез1 Э. et а1., 1977).

Проведенные исследования суточной экскреции Д-глюкаровой кис лоты у больных ППС выявили существенную особенность. Так, катабо лизм Д-глюкуроновой кислоты у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца имел тенденцию к снижению по сравнению с контрольной груп пой. У"больных без кальциноза клапанов исследуемый показатель дос товерно превышал таковой у здоровых людей и у больных с кальцино зом клапанов сердца, соответственно в 2.1 и 2.7 раза (табл.11).

Уровень экскреции ^глюкаровой кислоты в целом по группе больных ППС не зависел от вида порока, НИ и тяжести заблевания Однако исследуемый показатель у больных ППС с кальцинозом клала нов в однородных по НК группах был значительно ниже такового у больных без кальциноза клапанов сердца, соответственно при НК ПА стадии в 2.8 раза, при НК ПБ-Ш стадии - в 1.9,раза.

Таким образом, выявленная особенность экскреции Д-глюкаровой кислоты у больных с кальцинозом клапанов сердца свидетельствует о более низкой интенсивности внутрипечёночного катаболизма Д-глюку роновой кислоты по сравнению с больными без признаков патологи ческой кальцификации клапанов сердца.

Интенсивность обмена УДФ-глюкуроновой кислоты в печени связа на с уровнем активности фермента ЭР гепатоцитов -глюкуронилтрансфе разы, недостаточность которой является одной из причин гипербили рубинемий непрямого типа. Так как ферменты ЭР гепатоцитов обладают индуцибельностью, в практике используется медикаментозная коррен ция их ферментной недостаточности, как, например, назначение фене барбитала при гемолитических желтухах или при синдроме Жильбера.

В табл.12 представлены показатели индуктивной терапии больных ППС с гипербилирубинемией непрямого типа с помощью фенобарбитала (0.3 г в сутки, в течение 5-7 дней). Показано, что на фоне компе* сации гипербилирубинемии выявилась значительная активация функцис нального состояния ЭР гепатоцитов (цитохрома Р-450 - по Т1/2 ант» пирина, глюкуронилтрансферазы - по экскреции Д-глюкаровой кислоты) а также косвенного показателя индукции- г-ГТ сыворотки крови.

Если учесть, что функциональное состояние ЭР гепатоцитоь больных ППС с кальцинозом клапанов сердца достоверно выше, чем V

5ольных без кальциноза, очевидно, что повышенная экскреция Д-глю-<аровой кислоты в последней группе не связана с усилением катаболизма УДФ-глюкуроновой кислоты. Различия в экскреции исследуемого юказателя у больных ППС обеих обследованных групп, по-видимому, обусловлены уровнем катаболизма Д-глюкурновой кислоты гликозамин-'ликанов соединительной ткани и интенсивностью их обновления.

Следовательно, проведенные исследования суточной экскреции Ьглюкаровой кислоты выявили различия в межуточном обмене печени юльных ППС: практически нормальный уровень катаболизма Д-глюкуро-ювой кислоты у пациентов с дистрофической кальцификацией на фоне сраженного нарушения кровообращения и его интенсификация у боль-!ых без кальциноза клапанов сердца.

Содержание желчных кислот сыворотки крови у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

Желчные кислоты образуются из холестерина с участием гидро-силаз ЭР гелатоцитов. Уровень желчных кислот в крови определяется нтенсивностью синтеза, печёночно-кишечного обмена и поглощения ге-атоцитами.

Проведенные исследования содержания в сыворотке крови общих елчных кислот выявили достоверно выраженную гиперхолемию у боль-ых ППС. Достоверно повышенным оказалось содержание общих желчных ислот у больных ППС без кальциноза клапанов сердца и у пациентов проявлениями патологической кальцификации клапанов по сравнению контрольной группой здоровых (табл.13). Частота патологических эзультатов по обеим группам составила соответственно 58 и 81%. У эльных с кальцинозом клапанов сердца содержание общих желчных лслот в сыворотке крови оказалось достоверно выше, чем у больных 53 кальциноза клапанов сердца на 38%.

Анализ исследуемых показателей у больных ППС в целом по груп-5 не выявил различий в зависимости от вида порока и тяжести завоевания. Однако обнаружена четкая закономерность уровня гиперхоле-ш от стадии НК. Если при НК 0-1 стадии содержание общих желчных гслот у больных ППС достоверно не отличалось от здоровых • людей, ) с отягощением кровообращения больных ППС гиперхолемия достовер-) возрастала для НК IIA и НК IIB-III стадий, соответственно в 3.3. 4.6 раза. Показатели гиперхолемии всех стадий НК имели между corn достоверные различия, причём у больных с кальцинозом клапанов ■рдца с НК I IB-111 стадией содержание общих желчных кислот сыво- ' »тки крови достоверно превышало таковое у больных без кальциноза, 0.01.

Таким образе;.:, обнаруженная гиперхолемия у больных ППП ппиле-льствует о нарушении транспорта желчных кислот из плазмы в гепа-циты, причём у больных с проявлениями патологической кальцифика-и в организме данный эффект более выражен по сравнению с больны-ППС без аналогичных проявлений. Учитывая различия в функцио-льном статусе ЭР гепатоцитов данных обследованных групп, гипер-

холемия у больных с кальцинозом клапанов сердца может быть следс вием более активного синтеза и печёночно-кишечного обмена желчны; кислот.

Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови больных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

Показано, что в местах патологического обызвествления в opri низме выявляется повышенная активность ЩФ. В процессе минерализ,' ции костной ткани данному ферменту придаётся существенное знач! ние (Бауманов. К., 1989). После открытия в организме эндогенны; тканевых ингибиторов образования и роста кристаллов ГА, таки как пирофосфат, фосфоцитрат (Shankar R. et-.al., 1984), роль ЩФ : процессах кальцификации приобрела первостепенное значение. По с: ществу, данный фермент является регулятором образования и рост, кристаллов ГА и, таким образом, активно влияет на процессы физи логической и патологической минерализации в организме. Этим o6yi ловлена актуальность изучения активности ЩФ сыворотки крови бол ных ППС с кальцинозом клапанов сердца.

Проведенные исследования выявили, что гиперферментемия ЩФ н ходится в прямой зависимости от степени выраженности патологиче кой.кальцификации клапанЬв сердца (рис.5). Показано, что у больны без кальциноза клапанов среднее значение активности фермента сыв ротки крови оказалось достоверно ниже нормального уровня (Р<0.02 а также у больных со II и III степенью .кальциноза клапанов сердц соответственно Р<0.002 и Р<0.001. У больных ППС с минимальными пр явлениями кальциноза клапанов сердца активность ЩФ сыворотки кров практически соответствует группе здоровых людей, а у больных со J и III степенью показатели фермента оказались достоверно выше, че в контрольной группе (соответственно Р<0.01 и Р<0.001), а также больных с I степенью кальциноза клапанов сердца (соответственн Р<0.05 и Р<0.02)'.

Анализ результатов в целом по группе больных ППС в зависим сти от,вида порока, нарушения кровообращения и тяжести заболевали выявил различия исследуемого показателя от стадии НК и Ф.кл.забол вания. Так, у больных с НК IIB-III стадий активность фермента сыв ротки крови оказалась Достоверно выше, чем у больных с 0-1 и II стадиями НК, соответственно Р<0.02 и Р<0.01. Исследуемый показ тель у больных ППС с 4 Ф.кл. достоверно превалировал над таковы при 3 Ф.кл. заболевания, Р<0.02.

В табл.14 представлена активность ЩФ сыворотки крови больнь ППС с кальцинозом клапанов сердца и без такового в зависимости с вида порока, НК и Ф.кл. заболевания. Показано, что внутри каждс нозологической группы с патологией митрального и сочетанного му рального и трикуспидального клапанов средние значения активное! фермента сыворотки крови практически не зависили от выраженное! патологической кальцификации клапанов. У больных с аортальных пороками исследуемый показатель при кальцинозе клапанов был дост

верно выше ■ по сравнению с больными без кальциноза. У больных с кальцинозом, страдающих НК ПА и НК ПБ-Ш стадий, средние значения активности фермента в крови оказались достоверно выше, чем у больных без кальциноза с теми же стадиями НК. Аналогичная ситуация выявлена при анализе активности ЩФ сыворотки крови в зависимости от тяжести патологического процесса при 3 и 4 Ф.кл. заболевания.

Таким образом, проведенные исследования активности ЩФ сыворотки крови больных ШС с кальцинозом клапанов сердца показали, что данный критерий в основном не сопряжен с видом порока, а в большей мере зависит от нарушения кровообращения и тяжести заболевания. Выявленная зависимость ферментемии от степени кальциноза клапанов сердца, а также достоверное увеличение активности фермента сыворотки крови у больных с кальцинозом внутри однородных патологических состояний с учётом физиологической роли фермента в организме указывает на тот факт, что гиперэнземия ЩФ играет патогенетическое значение в процессах кальцификации клапанов сердца у боль-1ых ШС.

Известно, что интенсивность кальцификации биоклапанов сердца г детей значительно более выражена, чем у взрослых (Schoen F.J. et i]., 1984, 1985). Активность ЩФ сыворотки крови в детском возрасте ¡начителыю превалирует (примерно в 3 раза) над таковой у взрос-1ых, что является одним из факторов риска активации процессов ми-(ерализации клапанов сердца у детей, страдающих ППС. Подтвержде-:ием данного факта могут служить полученные нами результаты актив-ости ЩФ сыворотки крови больных ППС в молодом и детском возрасте, реди обследованного контингента больных ППС имелись 12 пациентов возрасте от 4 до 15 лет (4 больных с кальцинозом клапанов серд-а, у 8 пациентов следов минерализации клапанов не обнаружено), ыявлено, что у больных без кальцификации клапанов сердца среднее начение активности фермента сыворотки крови оказалось значительно иже, чем у больных с кальцинозом (соответствующие результаты сос-авили 130.0И5.4 Е/Л и 329.0±73.4 Е/Л, Р<0.05).

Анализ литературных данных и результатов проведенных исследо-ший позволяет объяснить интенсивность кальцификации биопротезов 1апанов сердца в детском возрасте, так как провоцирующие патологи-гскую минерализацию факторы (гиперферментемия ЩФ, повышенная фос-иемия, активированный функциональный статус ЭР гепатоцитов, вита-m Д- зависимое формирование скелета) у детей исходно выражены [льнее, чем у взрослых.

Выявленное увеличение активности ЩФ сыворотки крови у больных С с кальцинозом клапанов сердца побудило к изучению источника и рактера гиперферментемии ЩФ. Известно, что ЩФ в организме чело-ка представлена несколькими йзоформаий: печеночной, костной, ки-чной и плацентарной при беременности. Для выявления источника рментемии у больных ППС с кальцинозом клапанов была изучена кон-елляция ферментов, изоформы которых содержатся в различных тканях органах, отличительных от изоформ ЩФ, но имеющие основной приз-■с-печёночную принадлежность. Таковыми ферментами являются г-ГТ,

ААПП и JIM. Все они относятся к мембранным ферментам и располага ются на наружной поверхности микроворсинок цитоплазматической мем браны. В печени основная активность данных ферментов, как и ЩФ выявляется в эпителии желчных канальцев и на синусоидальной поверх ности гепатоцитов. Последние, контактируя с плазмой крови в прост ранстве Диссе, создают, в основном, фоновые значения их ферментеми В табл.15 представлены коэффициенты корреляционных связей исследуе мых ферментов, полученные на большом числе наблюдений и при различ ных состояниях организма больных ППС (в исходе, при операции на "открытом" сердце, в послеоперационном периоде, при осложнениях сердечной недостаточности, печёночно-почечной недостаточности и др.). Выявлена положительная корреляционная зависимость для всех фермейтов. Взаимосвязь r-ГТ с другими мембранными ферментами не сит параболический характер, а остальные ферменты имеют между собс прямую линейную зависимость. Таким образом, проведенные исследова ния указывают, что основным источником ферментемии ЩФ и других ме бранных ферментов у больных ППС в данном случае является печень.

Активность мембранных ферментов сыворотки крови больных ППС с дистрофической кальцификацией клапанов сердца.

Гиперферментемия ЩФ у больных ППС с кальцинозом клапанох сердца из-за высокого фонового значения не является оптимальны» маркёром оценки состояния внутриклеточных регенерационных процес сов в гепатоцитах. В большей степени этому соответствуют мембрш ные ферменты: r-ГТ, ААПП и JIAA, активность которых в сыворотке кре ви больных ППС, как показано нами, имеет сильную положительную ко] реляционную взаимосвязь с ЩФ.

Исследования показали, что их ферментемия у больных ППС' < кальцинозом клапанов сердца достоверно превышала аналогичные пок; затели у больных без данного патологического проявления (табл.16 Наибольшей чувствительностью и информативностью обладает r-ГТ, hmi ющая низкую фоновую активность и высокую способность к индукции. I табл.17 приведены средние значения активности r-ГТ сыворотки кров: здоровых и больных ППС в зависимости от степени кальциноза клапан сердца и других состояний, характеризующих данное заболевание. И следования показали, что гиперферментемия r-ГТ находится в прямо зависимости от выраженности минерализации клапанов. У больных бе кальциноза клапанов искомый показатель, достоверно превышающий т ковой у здоровых людей, оказался достоверно ниже больных с кальц нозом клапанов в целом по группе, а также по сравнению с III ст пенью данного проявления. Выявлены достоверные различия активност т-ГТ сыворотки крови в зависимости от вида порока, стадии НК и т жести заболевания больных ППС. Уровень гиперферментемии r-ГТ бол ных ППС с кальцинозом клапанов достоверно превышал таковой у бол ных без данного патологического проявления при митральных и митра но-трикуспидальных пороках, а также при НК ПА и НК IIB-III ст дий (рис.6).

Выявленные положительные корреляционные взаимосвязи активнос-и исследованных мембранных ферментов у больных ППС оказались не-авнозначными в зависимости от наличия дистрофической минерализа-ии в организме (табл.18). Так, если у больных с кальцинозом клапа-ов сердца отмечена положительная корреляционная зависимость прак-ически для всех исследуемых ферментов, то у больных без кальцино-а клапанов сердца аналогичная взаимосвязь только между ААПП и ЛАА слабая взаимосвязь между т-ГТ и ЩФ.

Таким образом, проведенные исследования функционального сос-эяния и межуточного обмена печени больных ППС показали, что у патентов с процессами дистрофической кальцификации клапанов сердца э всем изучаемым параметрам имелись достоверные отличия от боль-га без проявлений патологической минерализации. В большинстве 1учаев выявлена зависимость изучаемых показателей от степени вы-^енности кальциноза клапанов сердца. Анализ исследуемых резуль-1тов функционального состояния и межуточного обмена печени для [нородных по НК групп, как основного патогенетического фактора [жести заболевания клапанной патологии сердца, показал достовер— 1е различия для обеих обследованных групп больных ППС. Всё это адетельствует о том, что печень принимает активное участие в юцессах дистрофической кальцификации в организме больных ППС. В язи с этим представляется актуальным изучение механизма влияния чени на эктопическую минерализацию клапанов сердца больных ППС.

Взаимосвязь нарушения кровообращения и процессов кальцификации клапанов сердца при ППС.

Нормальное функционирование гепатоцитов тесно связана с ак-вностью внутриклеточных пластических процессов, т.е. внутрикле-чной регенерации, уровень которой варьирует в зависимости от кторов воздействия и системы регуляции. Последние влияют на пень посредством эффективности её кровотока. Как известно, повреж-ние клапаного аппарата сердца больных ППС приводит к развитию , нарушению перфузии органа и формированию "застойной" печени, я изучения влияния, кровоснабжения печени на внутриклеточную ре-черацию гепатоцитов и, как показано выше, сопряжённые с этим прайсы минерализации в организме больных ППС потребовалась разработ-простого, доступного и объективного метода определения общего веночного кровотока. Поставленная цель могла быть достигнута, ес-была бы доказана экспериментально и обоснована математически за-:имость общего печеночного кровотока, измеренного прямым методом, гатенсивности экскреции используемых для оценки поглотительно-вы-штельной функций печени одного из краситслсй. Решение данной 1ачи возможно лишь в экспериментальных условиях с использованием ;усственного кровообращения (ИК), где имеются предпосылки прове-[ия прямого определения кровотока печени.

Разработка метода. Печёночный кровоток определяли методом, раз-

дельного венозного возврата. Интубированным собакам с фентаниловым наркозом проводили срединную лапаротомию. Канюли в верхней полой вене устанавливали через непарную вену - через ушко правого пред сердия. Канюлировали также обе бедренные вены. Для возврата арте риализированной крови канюлировали одну из общих сонных артерий. В грудной"полости на полые вены турникеты накладывали внеперикарди ально. В брюшной полости на нижнюю полую вену турникет накладывали между печенью и местом впадения правой почечной вены. Разделение венозного возврата в аппарат ИК происходило при затягивании выше указанных турникетов во время ИК. Кровоток бассейна верхней полой вены направлялся в аппарат по магистрали, соединённой с канюлей в верхней полой вене, печёночный кровоток - по магистрали, соединён ной с канюлей, проведенной в нижнюю полуд вену через ушко правого предсердия, кровоток инфрапечёночного бассейна - по магистрали, соединённой с канюлями в бедренных венах. Применяли канюли фирмы "Аргил" (США) с внутренним диаметром 4, 5, 6 и 7 мм. Пропускная способность канюль на 50% превышала максимальный кровоток в реги оне. Кровь дренировалась в аппарат гравитационным способом. Точка притока в аппарат находилась на 20-"25 см ниже'уровни предсердии.

Определение печёночного кровотока проводили с помощью калиб рованного сосуда и секундомера без прерывания потока по магистрали и изменения уровня точки^притока. Скорость кровотока рассчитывали в мл за 1 минуту на 1 кг массы животного.

В качестве показателя экскреции красителя, бромсульфалеина использовали остаточную дозу препарата в-крови, которую определяли в зависимости от концентрации красителя через 10 минут после введе ния и объёма распределения, т.е. объёма циркулирующей плазмы (ОЦП) Чтобы нивелировать результаты, зависящие от массы животных и ОШ рассчитывали процент остаточной дозы препарата. Для исследований элиминации красителя из кровотока использовали диагностический пре парат "Zweifarbstofftest" фирмы "Merck" (Германия), содержащий в 1 мл 30 мг бромсульфалеина и 10 мг трипанового красного. Последний использовали для определения ОЦП. Перед каздым исследованием произ водили забор контрольной пробы крови до введения препарата. Затем препарат вводили в оксигенатор из расчёта 2 мл на 10 кг массы жи вотного (6 мг/кг) и ровно через 10 минут отбирали пробу крови из магистрали верхней полой вены. С 9 по 10 минуты от момента введе ния препарата собирали кровь в измерительный сосуд из печёночной магистрали. Измеряли объём печёночной порции крови за 1 минуту которая затем возвращалась в оксигенатор. Последующие измерения проводили аналогичным образом по 2-4 исследования на эксперимент. В процессе ИК создавали условия снижения печёночного кровотока для расширения изучаемого диапазона зависимости элиминации красителя из крови от объёма общего печёночного кровотока. Концентрацию три панового красного и бромсульфалеина в крови определяли согласно инструкции, прилагаемой к препарату. В зависимости от вводимой до зы бромсульфалеина, его концентрации в крови через 10 минут после введения и ОЦП рассчитывали процент остаточной дозы препарата.

Эксперименты проводили на собаках массой от 10 до 16 кг. Произведено 28 параллельных исследований печёночного кровотока и элиминации красителя. Анализ соотношения исследуемых показателей выявил линейную зависимость логарифма элиминации красителя и печёночного кровотока (г=-0.834, Р<0.001). Математический анализ полу-ieHHbix данных позволил рассчитать функцию зависимости остаточной юзы препарата в крови от печёночного кровотока: Y=2.288-0.025Х 1ли Х- 28 /о.025. где Х-показатель печёночного кровотока, выраженный в мл/мин.кг массы тела, Y-логарифм процента остаточной дозы грепарата через 10 минут после введения, 2.288 и 0.025-рассчитан-tbie постоянные коэффициенты.

Таким образом, на основании экспериментальных исследований и [атематического анализа полученных данных зависимости элиминации ромсульфалеина из крови от печёночного кровотока был разработан ростой и адекватный метод определения регионарного кровотока пече-и. Достоинством метода является быстрота исполнения (20-30 мин), также возможность исследования данного параметра в процессе изу-ения влияния лекарственных препаратов или.различных манипуляций а кровоток в печени.-Противопоказанием к использованию данного ме-эда являются состояния, нарушающие поглотительную функцию печени колестазы, гепатиты и др.).

Разработанная модель была использована для определения печё-эчного кровотока у здоровых и больных митральными пороками сердца э и после операции клапанного протезирования в условиях ИК габл.19). Полученные результаты у здоровых людей согласуются с гаературными данными (Fischer А., 1961, СовцоваС.А., 1987).

У больных с нарушением кровообращения выявлено снижение обще) печёночного кровотока, причём степень его усугубляется с выра-(нностыо НК. Так, снижение печёночного кровотока при НК IIA ста-¡и в среднем составило 18% по сравнению с здоровыми, при НК ПБ-I стадий-37%. После операции клапанного протезирования в услови-ИК, несмотря на восстановление зачыкательной функции створок трального клапана, показатели снизились до 49 и 69 %, соответст-нно, что явилось результатом централизации кровообращения при НК, рушения микроциркуляции внутренних органов, эффективности сердеч-й деятельности в раннем п/о периоде, прессингового действия кате-ламинов, вазопресина и многих других причин.

Угнетение общего печёночного кровотока при операции на "откры-и" сердце в условиях ИК было использовано нами в качестве клини-:кой модели для изучения характера изменений, которые, как было мазано, сопряжены с развитием кальциноза клапанов сердца у боль-( ППС. Для изучения влияния нарушенного печёночного кровотока на ^pHppaimnjmHfi процессы в гепатопитах было обследовано 180 боль-с ППС до и после операции клапанного протезирования в условиях в динамике: ежедневно в.течение 1-ой п/о недели и.еженедельно в 1ение 1 места. Для того, чтобы нивелировать разброс результатов., азатели активности мембранных ферментов оценивали в % к исход: значениям.

На рис.7а представлена п/о динамика активности мембранных ферментов и биохимических показателей сыворотки крови. Как видно, изменения активности ферментов оказались однотипны, но с разной чувствительностью исследованных маркёров. Наиболее информативным оказался фермент r-ГТ, который, как указывалось выше, имеет наиболее выраженную корреляционную взаимосвязь с ЩФ сыворотки крови (табл.15). В динамике изменений активности мембранных ферментов можно выделить три фазы: 1 - уровень снижения, 2 - длительность ин-гибирования, 3 - уровень активации к концу недели.

Учитывая, что мембранные ферменты являются также маркёрами холестаза и воспаления паренхимы печени (Подымова С.Д., 1984), на рис.7б представлена динамика основных биохимических параметров, ха растеризующих эти состояния: содержание в, сыворотке крови желчных кислот, прямой фракции билирубина, а также активности AJIT. Наибо лее чувствительный показатель при различной патологии печени, кон центрация желчных кислот в крови, существенно не менялся в тече ние всего периода обследования. Содержание прямого билирубина и ак . тивность АЛТ сыворотки крови повышались к 4-5 суткам после опера ции и затем данные показатели резко снижались, в то время как ак тивность мембранных ферментов оставалась значительно повышенной в течение месяца и более.

Таким образом, выявленная в динамике п/о периода гиперфер ментемия мембранных энзимов не обусловлена холестазом, воспалением или другими деструктивными процессами паренхимы печени, а свиде тельствует об активации внутриклеточной регенерации гепатоцитох тогда как в раннем п/о периоде - о депрессии этих процессов. Ка? видно, активация данных маркёров происходит раньше нормализацт перечисленных биохимических параметров и поэтому динамика показг телей активности мембранных ферментов, особенно r-ГТ, в сыворотга крови может служить прогностическим критерием оценки состояния ш чени. Уровень снижения, длительность ингибирования и активация прс цессов внутриклеточной регенерации гепатоцитов находятся в завис] мости от вида порока, стадии НК и тяжести заболевания (рис.8а,б,в

Свидетельством влияния кровоснабжения печени на внутриклето' ную регенерацию гепатоцитов может служить положительная корреляц онная взаимосвязь между показателями общего печеночного кровоток после операции и Z снижения активности r-ГТ сыворотки крови на 3-п/о сутки (п=26, г=+0.769, Р<0.001). Обнаужена также зависимост динамики активности т-ГТ сыворотки крови в п/о периоде от состо ния сердечной деятельности в конце 1-х п/о суток, когда замык тельная функция клапанов сформирована. Так, при сердечном индекс (СИ) более 2.5 л/мин/м2 состояние процессов внутриклеточной реген рации оказалось более активным по сравнению с аналогичными пок зателями при СИ менее 2.5 л/мин/м2 (рис.8г).

Снижение печёночного кровотока после операции в условиях И привело к значительному угнетению функциональной активности ЭР г патоцитов с наибольшей его депрессией в 2-е п/о сутки и с полол тельной динамикой к концу 1-й недели (рис.9). Анализ исследуемог

показателя в 1-е п/о сутки в зависимости от вида порока показал, что у больных с дефектами митрального клапана происходит более выраженное по сравнению с аортальными пороками угнетение функционального состояния ЭР гепатоцитов. Соответствующие результаты Т1/2 антипирина составили 35.1±1.3 час. и 2б.8±2.3 час., Р<0.05. Послеоперационная динамика показателя функционального статуса ЭР гепатоцитов, несмотря на количественные и качественные различия, изменялась однотипно показателям активности мембранных ферментов сыворотки крови 5ольных ППС, что также свидетельствует о подавлении внутриклеточной регенерации печени вследствие нарушения печёночного кровотока. Меж-цу показателями СИ и Т1/2 антипирина в 1-е п/о сутки выявлена отри-дательная корреляционная взаимосвязь нелинейного характера (п=24, >-0.652, Р<0.01), т.е. с угнетением сердечной деятельности проис-(одит подавление функционального состояния ЭР гепатоцитов.

Процессы минерализации клапанов и биоклапанов сердца больных ШС проходят в межтканевой водной фазе гидрофобных компонентов соединительной ткани. В связи с этим актуальным было проведение исследований водно-электролитного обмена больных ППС, перенесших опе->ацию на сердце в условиях ИК, т.е. при состояниях, провоцирующих >езкое нарушение общего печёночного кровотока. Изучение объёмов щдкостных пространств (общей, внеклеточной, внутриклеточной жид-;ости и ОЦП) в конце 1-х п/о суток показало, что объём внеклеточ-юго сектора достоверно превышал доперфузионные значения в среднем ia 4.51±0.49 л/м2 у больных с митральными пороками и аортальными-а 1.64±0.5 л/м2, Р<0.001, с достоверными различиями по обследовании группам (Р<0.001). Учитывая, что ОЦП и объёмы внутриклеточной идкости обследованных групп существенно не менялись, полученные езультаты свидетельствуют в данных обстоятельствах о нарушении одного обмена, протекающего по типу внеклеточной гипергидратации отёка), причём у больных с пороками, приводящими к "застойной" ечени, эти изменения были более выражены.

Анализ общей суммы осмотически активных компонентов внекле-очной жидкости (произведение осмоляльности крови на объём внекле-очного сектора) показал, что в 1-е п/о сутки наблюдалось досто-ерное увеличение данного показателя у больных митральными порока-и (Р<0.001) по сравнению с здоровыми , тогда как у больных аор-альными пороками отмечено незначительное увеличение данного пара; этра. Значительная внеклеточная гипергидратация у больных с мит-альными пороками с увеличением общей суммы внеклеточных осмотиче-■си активных компонентов соответствует классическим представлениям механизме распределения жидкости в соответствии с осмотическим эадиентом.

R 1-е п/о сутки между показателями объёма внеклеточной жидкого и Т1/2 аптипирина обследованных групп больных ППС выявлена шьная положительная корреляционная взаимосвязь (п=22, г=+0.794, :0.001)„ т.е. с угнетением функционального статуса ЭР гепатоцитов юисходит увеличение объёма жидкости внеклеточного сектора.

Исследование базального уровня гормона водно-электролитного

обмена, альдостерона, показало, что в 1-е п/о сутки его концентра ция превышала исходные дооперационные значения. Соответствующие ре зультаты составили 348.0±29.0 пг/мл и 209.0±16.8 пг/мл, п=21 Р<0.01.

Определение показателей Т1/2 антипирина, внеклеточной жидкое ти и концентрации альдостерона позволило вскрыть патогенетические звенья нарушения водного обмена у больных ППС при условиях, прово цирующих снижение общего печёночного кровотока в используемой кли нической модели ИК. Угнетение функциональной активности ЭР приво дит к снижению катаболизма альдостерона ферментами данной системы - (его гидроксилирования и глюкуронирования). Гиперальдостеронизм (вторичный, гепатогенный) ведёт к задержке в организме больных натрия и воды, что, несомненно, потенциирует внеклеточную гипер гидратацию. Кроме того, в конце 1-х п/о суток выявлена отрицатель ная корреляционная взаимосвязь' между показателями сердечной дея тельности - СИ, и объёмом внеклеточной жидкости (г=-0.632, Р<0.01) что подтвердило классическую концепцию о связи гемодинамических и водно-электролитных расстройств. __________

Таким образом,"проведенные исследования механизма влияния не рушения кровообращения больных ШС на процессы кальцификации клг панов сердца показали, что при "остром" нарушении внутрипечёночноу гемодинамики происходит^ значительное угнетение показателей внуч риклеточной регенерации гепатоцитов. Данный процесс активизируете? после восстановления клапанного аппарата и улучшения нагнетател! ной функции сердца в результате предпосылок к нормализации общегс печёночного кровотока, показатель которого будет зависеть от эффе1 тивности сердечной деятельности. Поскольку, как показано выш( процессы минерализации сопряжены с активацией внутриклеточной. р< ' генерации гепатоцитов выявляется парадоксальный факт, свидетельс вующий о том, что с ухудшением функциональной активности печен] больных ППС ингибируется процесс дистрофической кальцификации ] организме, а с восстановлением или активацией органа резко возра! тает фактор активного риска кальциноза клапанов сердца.

Исследование большинства показателей печени однородных груп по НК выявило, что у больных ППС с кальцинозом клапанов они боле активизированы, чем у больных без аналогичного патологического пр цесса. Учитывая, что метаболическая регуляция гепатоцитов осущест ляется гуморально через кровь, то, кроме эффективности внутрипеч ночной гемодинамики, на активацию внутриклеточной регенерации геп тоцитов могут оказывать влияние в значительной мере биологическ активные вещества - "клеточные" гормоны - регуляторы пластически процессов паренхимы печени. Однако в клинической практике данны вопрос не изучен.

ВИТАМИН Д-ЗАВИСИМАЯ КАЛЬЩШКАЦИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Ранее было показано, что процессы калыщноза можно моделировать путём подкожной имплантации экспериментальным животным ство-' рок клапанов сердца или биоткани ксенопротезов (Flshbein М. et al., 1982). Проведенные исследования кальцификации биоткани ксенопротезов на витамин Д-лишённых животных (LevyR.J., 1985) свидетельствуют о том, что уровень витамина Д-обеспеченности в крови имеет первостепенное значение для процесса минерализации биоматериала, а также о том, что его влияние носит сложный характер и не ограничивается только известными физиологическими проявлениями.

Учитывая повышенное содержание 25-ОНДз в сыворотке крови Зольных ППС с кальцинозом клапанов сердца, нами была изучена роль гипервитаминоза Д в патогенезе кальциноза биоткани ксенопротезов в эксперименте на животных с подкожной имплантацией биоматериала : помощью диффузионных камер, исключающих контакт биоткани с имму-юкомпетентными клетками.

Эксперименты проводили на кроликах-самцах, 2-х месячного воз-эаста. Были выделены 3 группы животных: 1 - контрольная, II - с пе-юральной нагрузкой СаС1г (0.5 г на 1 кг массы тела в сутки) и III 'руппа с введением субтоксической дозы витамина Д (50000 ME актив-юсти на 1 кг массы тела в сутки в виде 0.57. масляного раствора), каждому кролику имплантировали образцы биоткани ксенопротезов :ердца в диффузионных камерах и без них. Опорным каркасом камер ¡лужила тефлоновая цилиндрическая втулка с диаметром отверстия 10 [м и длиной 8 мм. Торцовые части втулки герметически закрывали [авсановым "ядерным" фильтром с диаметром пор 0.56 мкм. В камеры -;редварительно помещали образцы биоткани (1x1 см), а объём камер аполняли 0.15 М NaCl. Каждому животному подсаживали в подкожную ; летчатку 6 диффузионных камер и 3 контрольных образца. Операцию о имплантации проводили на фоне тиопенталовой анестезии. Длитель-ость имплантации исследуемых образцов составила 2, 4 и 8 недель, о истечении каждого из указанных сроков извлекали 2 камеры и 1 онтрольный образец. Накопленную в камерах межткэневую жидкость отирали для определения наличия клеток, уровня активности лизосомаль-ых ферментов и химического состава биожидкости. Контрольные образы и образцы из камер высушивали и подвергали исследованию на сс£-ержание Са. Использование диффузионных камер с размерами пор зна-ительно меньшими, чем размер клеток, позволило исключить прямое заимодействие последних с исследуемыми образцами. Данные цитологи-еских исследований показали наличие единичных клеток в камерах, в зновном нейтрофилов и лимфоцитов.

Результаты определения содержания Са в имплантированных образах указывают на возможность кальцификации биоткани и без непо-эедственого контакта клеток с имплантируемым материалом. Содежа-ie Са в контрольных образцах увеличивалось в зависимости от срока . ¿плантации и было значительно выше, чем в обрацах из камер. При .

сравнении трёх экспериментальных групп обнаружено, что избыток витамина Д значительно увеличивает скорость и интенсивность кальцификации. Введение в рацион кроликов высоких доз Са также влияло на скорость процесса кальцификации, но это влияние было выражено в значительно меньшей степени. Аналогичная тенденция наблюдалась и для образцов в камерах. Это позволяет предположить важную роль гуморальных факторов, (в данном случае высокий уровень Са и, особенно, витамина Д) в начальных стадиях кальцификации биоматериалов.

Проведенные модельные эксперименты in vivo показали, что кальцификация биоткани может протекать без непосредственного контакта клетЪк с имплантируемым материалом. Однако прямое воздействие фагоцитирующих клеток на имплантант ускоряет и усиливает процесс кальцификации.

В содержимом камер, представляющем собой диффундирующую за время имплантации межтканевую жидкость, после центрифугирования определяли содержание Са и Р, основных компонентов ГА, а также активность лизосомальных ферментов: 0-ГЛ, АСА и НАГ. Выбор данных ферментов был определен их участием в катаболизме гликозаминглика-нов соединительной ткани'. Параллельно с извлечением камер у животных проводили забор крови из ушной вены, в сыворотке которой определяли содержание Са и Р-

Ранее было показано, что токсическое действие витамина Д проявляется в нарушении содержания Са и Р в крови (Спиричев В.В., 1977). В экспериментах по кальцификации биоткани у кроликов III группы, получавших субтоксическую дозу витамина Д, изменения концентрации Са и Р в сыворотке крови по сравнению с I и II группами животных не надены. Содержание Са сыворотки крови II группы с нагрузкой СаС1г также не отличалось от тдкового контрольной группы. .

Исследование биожидкости камер показало, что содержание Са и Р в I и II группах экспериментальных животных за период 2-8 недельной имплантации не изменялось (рис.10). В III группе выявлено достоверное снижение концентрации Са, по сравнению с I и II группами, соответственно на 42 и 43%. Содержание же Р в биожидкости камер животных, получавших витамин Д, оказалось значительно выше, чем в

I и II группах, соответственно в 3.25 и 3.34 раза. Выявленный дисбаланс исследуемых показателей в биожидкости камер III группы привёл к значительному снижению коэффициента Са/Р по сравнению с I и

II группами, соответственно в 3.3 и 3.4 раза. Полученные данные убе дительно свидетельствуют, что под влиянием витамина Д в межтканевоь' жидкости происходит ревкое перераспределение Са и Р, основных химических компонентов, формирующих неорганическую основу кальциноза -ГА. Известно, что физиологически устойчивое молярное соотношение данных элементов в растворах составляет 1.0-1.2, как, например, в

'сыворотке крови. Увеличение содежания Р относительно свободного Са приводит к дестабилизации их равновесия и быстрому образованию фос-форно-кальциевых труднорастворимых соединений с формированием кристаллов ГА (Brown W.E., Chow L.C., 1981). Подобный процесс происходит под влиянием витамина Д (111 группа), в результате чего межтка-

невая жидкость у экспериментальных животных становится кальинфицирующей средой, обеспечивающей наблюдаемое интенсивное формирование кальциноза имплантированной биоткани.

Исследование биожидкости, полученной из камер с 2-х недельным сроком имплантации, показало, что витамин Д провоцирует достоверное по сравнению с I и II группами животных увеличеие рН среды. Соответствующие результаты составили: 7.66±0.03, 7.53±0.03 и 7.48± 0.05, Р<0.02 и Р<0.01. Этот факт представляет интерес тем, что за-щелачивание среды, содержащей свободный Са и Р, является благоприятным условием интенсивного образования ГА (Леонтьев В.К., 1978).

Значительное увеличение содержания Р в межтканевой жидкости может быть результатом распада лейкоцитов, особенно нейтрофилов, вследствие фагоцитарной атаки инородного тела. В результате воздействия лейкоцитов на биоткань в контроле и на материал диффузионных камер в межтканевой жидкости должны появляться маркёры фагоцитирующих клеток, каковыми являются лизосомальные ферменты. В таком случае уровень их активности может указывать на интенсивность лейкоцитарной_инфильтрации.

В табл.21 представлены показатели активности лизосомальных ферментов биожидкости диффузионных камер в зависимости от длительности имплантации биоматериала. Найдено, что активность 8-ГЛ, основного лейкоцитарного маркёра, не отличается во всех трёх группах животных в течение одного и того же срока имплантации. Этот факт свидетельствует о том, что фагоцитарная атака во всех группах была одинаковой, а значительное увеличение концентрации Р в биожидкости-камер III группы не связано с распадом клеток.

Активность АСА в биожидкости животных, получавших витамин Д, оказалась достоверно ниже, чем в I и II группах. По-видимому, витамин. Д или его активные метаболиты прямо или косвенно подавляют активность АСА в фагоцитирующих клетках. Активность НАГ в аналогичных условиях оказалась достоверно выше, что может свидетельствовать э витамин Д-зависимой активации соединительнотканного инкапсулирования диффузионных камер, как инородных тел, так как известно, что -1АГ является маркёром развития фиброзообразовательных процессов в эрганизме (Pott G. et al., 1981).

Активность всех исследованных ферментов в биожидкости увеличивалась в зависимости . от длительности имплантации биоматериала подобно кальцинозу биоткани с тем лишь отличием, что их активность в эазные сроки во всех трёх группах оказалась одинаковой.

Известно, что гипервитаминоз Д приводит к ускоренной патологической минерализации костей и кальцификации тканей . в организме. Свойство витамина Д провоцировать увеличение Р в межтканевой жидкости может свидетельствовать о том, что именно такое соотношение юследуемых элементов является для процесса минерализации оптк-<альным. Доказательством этого могла бы служить оценка физиологи-[еских процессов минерализации путём получения и исследования (ежтканевой жидкости ростовых зон костей у молодых экспериментальна животных или животных, получавших субтоксическую дозу витамина

Д. Для получения костной межтканевой жидкости использовали ростовую зону голени задних лапок кроликов. Пластинки ростовой зоны очищали от хрящевого покрытия, взвешивали и дробили на мелкие кусочки. Межтканевую жидкость экстрагировали 0.15 М NaCl и после центрифугирования определяли концентрацию Ca и Р с учётом кратности разведения.

Полученные результаты показали, что у молодых животных, у которых процессы костеобразования происходят интенсивно, содержание исследуемых элементов составило:Са - 7.87±0.22 мМ/л, Р - 24.0±0.52 мМ/л (п=4), а коэффициент Са/Р был равен 0.33. У взрослых животных у которых 'процессы минерализации в основном уже сформировались, содержание элементов значительно менялось: Ca - 15.1±0.1 мМ/л, Р ■ 7.8±0.4 мМ/л (п=4), коэффициент Са/Р оказался 1.94. У взрослых животных, получавших витамин Д, эти значения составили: Ca - 7.7± 0.15 rnM/л, Р - 14.2±3.9 мМ/л (п=4), а коэффициент Са/Р - 0.68. Полученные результаты согласуются с результатами подкожной имплантации диффузионных камер, где при гипервитаминозе Д мы наблюдали аналогичное соотношение Ca и Р.

Экспериментальные исследования с использованием диффузионных камер дают основание полагать, что под влиянием витамина Д в створках ревматически изменённых клапанов или в биоткани ксенопро тезов могут создаваться неблагоприятные условия защелачивания межтканевой среды и дестабилизации равновесия Ca и~Р. Это служит реальной причиной образования ГА и развития кальциноэа створок Выявленный у больных ППС относительный гипервитаминоз 25-ОНДз яв ляется фактором развития кальцификации клапанов и биоклапанов сердца.

На основании проведенных экспериментальных исследований, кли нических наблюдений и анализа научной литературы можно определить 2 типа развития дистрофической кальцификации клапанов сердца боль ных: пассивный и активированный.

Первый тип связан с избыточным поступлением Ca в организм и образованием в межфибриллярном пространстве створок клапанов и био клапанов переходных фосфорно-кальциевых соединений с последующим их превращением в кристаллы ГА. Формирование и рост последних, ин тенсивность образования кальциноза клапанов и биоклапанов сердца определяется многими факторами межтканевой среды соединительной ткани створок: концентрациями Ca и Р, обуславливающими состав фос форно-кальциевых соединений и их способность к трансформации в ГА pH- среды, содержания ингибиторов образования и роста кристаллов ГА. Первый тип более характерен для большинства взрослых больных ППС ревматической этиологии, у которых кальциноз клапанов развива ется длительное время, а также у определённой категории пациентов с биопротезами клапанов сердца, относящихся к контингенту со сни женным темпом развития дистрофического кальциноза.

Активированный тип определяется повышенным накоплением в мея тканевой среде Р и образованием метастабильного фосфорно-кальциевс го соотношения с первичным формированием либо кристаллов ГА, либо

|юсфорно-кальциевых соединений, активно трансформирующихся в последний. Всё это ведёт к интенсивному формированию кальциноза. Аналогичные процессы наблюдаются в ростовой зоне костной ткани (нук-яеарная теория кальцификации). К активированному типу следует от-¡ести категорию пациентов с формированием кальциноза створок в 1ервые годы после имплантации биопротезов клапанов сердца. Раннему [юрмированию и интенсивности развития кальциноза способствует дис-5алане кальцийрегулирующей системы гормонов, особенно повышенное эбеспечение организма активными метаболитами витамина Д, состояния, фиводящие к гиперферментемии ЩФ, как регулятора роста и образова-шя кристаллов ГА в тканях, увеличение водного пространства, заще-[ачивание межтканевой среды, активирование внутриклеточной регене->ации гепатоцитов. К данному типу относятся в значительной мере патенты детского и молодого возраста, так как рано развивающийся альциноз биоклапанов сердца сочетается с выраженными провоцирующи-и факторами развития дистрофической кальцификации у данного кон-ингента больных.

Выявленный механизм активированной кальцификации позволяет читать, что для защиты ксенопротезов от дистрофической кальцифи-ации необходима химическая обработка ксеноматериала веществами, бладающими фиксированными функциональными группами, которые ак-ивно и прочно связывают Са. Создание повышенного его содержания а коллагене и в межуточном пространстве биоткани сформирует "за-итный кальциевый слой", и, таким образом, устраняется возможность верхвысокого накопления . Р, как основного фактора процессов пато-эгической кальцификации.

МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС С КАЛЬЦИНОЗОМ КЛАПАНОВ СЕРДЦА

Морфологические исследования резецированных кальцинированных гворок ревматически повреждённых клапанов сердца больных ППС попали наличие в них фагоцитирующих клеток (Чекарева Г.А., 1982). »веденные нами экспериментальные исследования, как показано вы-¡, свидетельствуют о том, что прямое воздействие фагоцитирующих [еток на биоткань ускоряло и усиливало процесс кальцификации. Это (илось предпосылкой для оценки фагоцитарной активности крови в* шисимости от наличия патологического процесса кальцификации кланов сердца в организме больных ППС.

Для решения данного вопроса был использован разработанный на; способ оценки окислительного метаболизма гранулоцитов, включаю-х жйг/бацив цельной крови с опсониэированнкми частицами в при-тствии хромагена (адреналина тартрата) с последующей фотометри-. ской детекцией в супернатанте супероксиданиона кислорода (Ог-), личество которого выявляли по концентрации образованного адре-хрома*. Метод определения фагоцитарной активности, основанный на явлении "респираторного взрыва" окислительного метаболизма гра-

нулоцитов в цельной крови по их супероксидобразующей функции, позволил провести поиск оптимального стимулятора образования этой токсической формы кислорода. Обнаружено, что интенсивность окислительного метаболизма гранулоцитов существенно зависит от типа оп-сонизированных частиц, применённых для активации фагоцитарной активности. Использование опсонизированного микрококка (micrococcus lysodeicticus) позволило значительно улучшить количественную характеристику окислительного метаболизма ло сравнению с опсонизи-рованным зимозаном (2.7 раза), опсонизированным золотистым стафилококком. тцп Кован (11.7 раза). Особенностью метода является отсутствие зависимости величины показателя окислительного метаболизма фагоцитов от абсолютного количества лейкоцитов и абсолютного количества гранулоцитов крови. В основе 'этих существенных различий, обусловливающих полноценность ответа гранулоцитов .путём "взрыва" окислительного метаболизма, по-видимому, лежат особенности антигенной структуры матрицы опсонизированного или иммунного комплекса, подлежащего фагоцитозу. Вследствие этого реализуются особенности механизмов опсонизации, доля участия в них прямого или альтернативного пути комплемента, а также соотношение количества рецепторов к антителам и комплементам на поверхности фагоцитирующих гранулоцитов.

Проведенные исследования показали, что метаболическая активность фагоцитов крови больных ППС с кальцинозом клапанов сердца оказалась достоверно повышенной по сравнению со здоровыми и больными без данного патологического процесса (табл.20). Исследуемый показатель в целом по группе больных ППС не зависел от вида порока и тяжести заболевания. Однако метаболическая активность фагоцитов цельной крови однородной группы. НК IIA стадии была достоверно выше у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца, чем без него PcO.Ol.

Обнажение антигенных структур коллагена ревматически повреждённых створок или биоткани ксенопротезов вызывает _фагоцитарную атаку. Повреждающим действием на коллаген обладает О2- (Гавриленко Г.А., 1986). Перекись водорода, генерируемая миелопероксидазой фа гоцитов, и галоиды, в частности, хлор, образуют перхлорную кислоту которая активирует латентную коллагеназу нейтрофилов (Wels S.J. et al., 1985) и латентные металлосодержащие протеазы (Shah S.V.et al 1983) путём инактивации аг-ингибитора протеаз (Clark R.А.,1983). В результате данных воздействий морфологически выявляется деградация и дефрагментация коллагенновых структур створок биоклапанов (Яро шинский Ю.Н., 1990), что способствует появлению новых зон нуклеа ции кальцификации.

Однако данный процесс происходит локально, так как при иссле довании лизосомальных ферментов сыворотки крови достоверного увели чения активности В-ГЛ и АСА у больных ППС с кальцинозом клапанов сердца не обнаружено. Исследование же активности НАГ сыворотки кро ви больных 1ШС показало, что у пациентов с кальцинозом клапанов сердца активность фермента достоверно превышала уровень здоровых

людей и больных без патологической кальцификации (табл.23).

Исследуемый показатель находился в прямой зависимости от выраженности нарушения кровообращения и имел наибольшую величину у больных с митрально-трикуспидальными пороками. При анализе однородной группы по НК IIA стадии активность НАГ у больных ППС с дистрофическим кальцинозом клапанов сердца достоверно превышала таковую больных без данного патологического проявления, Р<0.02.

Выявленный характер изменений активности НАГ от НК, по-видимому, связан с развивающимся у больных ППС кардиалъным фиброзом печени, так как ранее показано, что активность данного фермента в крови коррелирует с морфологическими проявлениями фиброза пе.чени и содержанием в крови растворимого проколлаген-пептида (Pott G. et al., 1981). Любому патологическому процессу в печени противодействуют восстановительные регенеративные процессы (Блюгер А.Ф., 1983). Так, активность НАГ сыворотки крови больных ППС имеет линейную корреляционную связь с активностью ЩФ (п=71, г=+0.944, Р<0.001) и параболическую -с активностью r-ГТ (п=б5, г=+0.632, Р<0.001), т.е. с маркёрами внутриклеточной регенерации гепатоцитов, активность которой связана со степенью выраженности процессов кальцификации.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ОСНОВЫ ПРОФИЛАКТИКИ КАЛЬЦИНОЗА

Кальцификация имплантированных биопротезов сдерживает их широкое применение. Важными факторами, определяющими устойчивость !иоткани к кальцификации, являются способы фармакологической профилактики или предимплантационной химической обработки, выбор ко-'орых диктует механизм и патогенез кальциноза.

Фармакологическая профилактика кальцификации биоткани ксенопротезов в эксперименте.

Дифосфоновые соединения, являясь аналогами природного ингиби-ора кальцификации - пирофосфата, практически не подвержены фермен-ативному гидролизу ЩФ. Экспериментальные исследования с подкожной мплантацией животным биоткани ксенопротезов ( створок свиного ортального клапана и перикарда телёнка) проведены с целью изуче-ия эффективности торможения кальцификации дифосфонатами отечес?-енного производства: 1-гидроксиэтилиденбисфосфоновой кислотой лекарственный препарат ксидифон) и З-диметиламино-1-гидроксипропи-иденбисфосфоновой кислотой (Амок), соединений, разработанных со-гветственно Институтом химических реактивов и особо чистых хими-гских веществ МХП РФ и Институтом элементоорганических соединений и.А.Н.Несмеянова РАН.

Исследуемый биоматериал, обработанный глютаровым альдегидом ^ фосфатном буфере, имел большую склонность к кальцификации, чем жсированный глютаральдегидом на Нереэ буфере. Данный эффект свя-ш, в первом случае, с избыточным накоплением Р биотканью и.

во-втором случае, с наличием ингибиторной сульфатной группировки органического буфера Нереэ (рис.11). Поскольку в процессе импланта ции Нереэ диффундирует из биоткани, выявлено пролонгирование каль циноза по сравнению с образцами, обработанными в фосфатном буфе ре.

У животных, получавших перорально по 50 мг/кг массы тела кси дифон и Амок, степень кальциноза биоткани ксенопротезов была зна чительно ниже по сравнению с контрольной группой. Амок обладал большей степенью антикальцифицирущего водействия на фиксированную глютаровым альдегидом биоткань, чем ксидифон. При внутримышечное введении препаратов степень кальцификации имплантированного ксенс перикарда также была значительно ниже, чем в контрольной группе (рис.12). Подученное влияние было прямо пропорционально дозе ввод» мого дифосфоната, а внутримышечное введение препаратов в большей степени замедляло развитие кальцификации, чем пероральное. Этот факт обьясняется теи, что через желудочно-кишечный тракт всасывав! ся только 1-22 вводимой дозы с медленным поступлением в кровь \ быстрым .выведением препаратов из организма почками, т.е. более ни; кими концентрациями дифосфонатов в крови (Юрьева Э.А. и соавт. 1990). У животных, получавших Амок, отмечалась ЗОХ потеря веса, г при внутримышечном введении суточной дозы препарата, равной 1С мг/кг массы тела, на 7-8 сутки при явлении мышечной тетании былг зафиксирована гибель животных. При введении ксидифона в дозе $ мг/кг массы тела практически не наблюдалась задержка развития Ж1 вотных и потеря веса, но данные параметры усугублялись при дозе 1С мг/кг массы тела. Гибель животных не происходила.

Допустимая терапевтическая дозировка препарата ксидифон дл; пациентов составляет в среднем 20 мг/кг массы, тела в сутки пр: приёме внутрь, что, согласно проведенным экспериментам, обладав1 незначительным подавлением процессов дистрофической кальцификаци Для подтверждения влияния ксидифона на кальциевый обмен и опред ления степени данного воздействия исследовали содержание Са кров у собак после однократного внутривенного введения препарата в доз 5 мг/кг массы тела (табл.24). Показано, что уровень кальциеми практически не изменялся в течение 3-х часов после введения, н смотря на то, что создаваемая концентрация в крови дифосфоната сотни раз превышала таковую при пероральном приеме терапевтическо дозы. Учитывая, что дифосфонаты, как хелаторы Са, могут приводит к гипокальциемии, основному побочному проявлению, проведенные и следования свидетельствуют о том, что для повышения эффективное! профилактики кальциноза клапанов сердца возможно применение боле высоких терапевтических дозировок ксидифона. Однако это утвержд ние относится в первую очередь к взрослым пациентам, у которых г вершены процессы формирования скелета, а также по жизненным поь заниям для пациентов, которым из-за выраженной кальцификации фу розного кольца клапанного аппарата сердца и корня аорты с учёте состояния больного отказывается в операции клапанного протезирог ния.

Полученные данные по профилактике кальцификации биоткани ксе-топротезов согласуются с результатами экспериментов Levy R.J.et il., (1985), изучавших эффективность дифосфоната этидрона (зарубеж-шй аналог ксидифона). Нами проведено сравнение данных препаратов ю их эффективности торможения кальцификации и степени влияния на развитие молодых экспериментальных животных, которым внутримышечно ¡водился препарат в дозе 5 мг/кг массы тела в течение 30 дней. От-ючено, что ксидифон обладает более выраженным ингибирующим влия-[ием на процесс кальцификации (рис.13), а также мягким действием ia обмен Са, практически не оказывая отрицательного воздействия а развитие экспериментального животного, в то время как при , ис-ользовании этидрона наблюдалась 10% задержка в увеличении массы ела по сравнению с контрольной группой.

Длительность курса лечения ксидифоном с целью профилактики альцификации клапанов сердца и биоткани ксенопротезов требует альнейшего изучения. Однако сейчас можно рекомендовать ежеквар-альные курсы приёма терапевтических доз ксидифона в течение 1 ме-яца. Тем более известно, что дифосфонаты, кроме активного ингиби-эвания эктопичёской'кальцификации, способствуют снижению актйь— эсти ЩФ сыворотки крови (Doudlas D.L. et al., 1980), а также облазит определённым противовоспалительным эффектом (Flora L., 1979). :е это делает целесообразным их назначение больным в раннем п/о ;риоде, когда у пациентов с биопротезами имеется остаточная анти-шность имплантированного биоклапана. Торможение активности ЩФ сы-)ротки крови указывает на перспективность применения ксидифона у !тей.

Особый интерес представляет возможность терапевтического летя больных для рекальцификации биопротезов клапанов сердца с мощью дифосфонатов. Для определения эффективности такой терапии ли проведены эксперименты с кальцинированной биотканью, где со-ржание Са устанавливали рентгенофдюорисцентным методом на энерго-сперсионном анализаторе TEFA III (Германия). Образцы биоткани им-антировали в подкожную клетчатку кроликам, получавшим внутримы-чные иньекции Амок и ксидифона ежедневно в течение 30 дней. По ончании периода имплантации соответствующие образцы анализирова-тем же методом. Полученные результаты представлены на рис. 14. и концентрациях препаратов 1 мг/кг и 5 мг/кг массы тела в сутки эчительной рекальцификации'достичь не удалось, хотя отмечается* зденция к снижению кальцификации в зависимости от дозы препарата, зможно, увеличение дозы препаратов позволило бы добиться более эаженного влияния. Но, как показали первые серии экспериментов профилактике кальциноза с помощью Амок и ксидифона, увеличение эдимого препарата выше 5 мг/кг массы в сутки оказывало отрица-шное влияние на развитие молодых животных.

Как известно, больные с начавшимся кальцинозом биопротёзов, проявляющимся гемодинамкчески, не имеют показаний к реоперации шуждены "пассивно" ожидать постоянного ухудшения состояния, можность подавления патологического кальциноза биоткани ксено-

протезов или рекальцификации с помощью более эффективных дозировок или новых дифосфоновых соединений позволит отдалить срок повторной операции или её исключить.

Полученные экспериментальные данные указывают на перспектив ность такого подхода к решению проблемы. Однако, как и в случае фармакологической профилактики кальциноза, возможность рекальцифи кации биопротезов в клинических условиях требует дальнейшего изу чения.

Химическая стабилизация биоткани ксенопротезов.

Разработка метода кальцификации биоткани In vitro. Для успел ного поиска ингибиторов кальцификации биоткани ксенопротезов пс требовалась разработка скрининговой системы предварительной оценю эффективности их протекторного действия. Показано, что вероятны* предшественником ГА может быть октакальций фосфат-СавНв(Р04)б 5НгС (Brow VI.Е. et al., 1981, Legeros R.Z. et al.., 1.985). Последний i растворах и биогелях трансформируется в ГА в течение 1-2 суток. Мс лярное соотношение Са и Р в данных соединениях составляет соотвеч ственно 1.33 и 1.67 (коэффициент Са/Р). В настоящее время разрабс таны условия образования ГА в фосфорно-кальциевой среде in vitre (Cheung P.M., 1985). Однако формирование кристаллов ГА происходи: в течение 21 суток, что соответствует длительности опытов npi подкожной имплантации биоткани экспериментальным животным, но ( менее выраженной кальцификацией. При использовании перенасыщенно! кальцифицирующей среды образование кристаллов октакальция фосфат; на полимерных покрытиях происходит в течение 1 суток (Adamic R.J.et al., 1988). Если учесть, что образование и трансформацм кристаллов октакальция фосфата в ГА может составить 3-4 суток, ti данная модель может быть с успехом использована для оценки кальц] фикации и ингибирования этого процесса биоткани ксенопротезов.

Конечная концентрация ингредиентов кальцифицирующей сред] составляет 3 мМ/л СаС1г, 2.25 гпМ/л КН2РО4 и 55 mM/л КС1. Коэффиц ент молярного отношения Са/Р равен 1.33. Как видно, содержали элементов приближается к физиологическим значениям, но с перенас щением КС1. Среда готовится перед каждым опытом на деионизирова ной свежепрокипячённой воде при температуре 37°С, рН 7.0±0.0 После приготовления среды контролируется концентрация Са и Р. Дл стандарта Са и Р использовали ГА фирмы "Bio-Red Lab"(США).

Кусочки перикарда теленка, размером 2x3 см, обработанны 0.625 % глютаровым альдегидом в течение 14 дней, подвешивали н нитке в 0.5-литровом флаконе на расстоянии 1-2 см от дна. Флако заполняли 400 мл кальцифицирующей среды, закрывали пробкой СО2-улавливающим фильтром и помещали в термостат при 37°С на 4 с ток. По окончании инкубации кусочки перикарда извлекали из флакон жидкость с образцов удаляли фильтровальной бумагой и биоткань с шили до постоянного веса. Затем проводили определение Са и Р в би

кани. Содержимое их рассчитывали в мкг /мг веса сухой биоткани с чётом фоновых значений данных элементов в образцах ксеноперикарда элёнка.

Проведенные исследования показали, что инкубация образцов зеноперикарда телёнка в кальцифицирущей среде в течение 4 суток эиводит к накоплению в биоткани соединения Са и Р по характерис-1ке соответствующего ГА с молярным коэффициентом Са/Р 1.65±0.04 1=22). Содержание Са колебалось от 11 до 38 мкг/мг веса сухой биосани и в среднем (X±sx) составило 20.5±1.2 мкг/мг веса сухой биосани.

Таким образом, инкубирование биоткани в кальцифицирующей сре-( с рН 7.0 в течение 4 суток при 37°С позволяет оценить процесс шерализации ксенопротеза. Данный метод можно использовать как ;рининг-тест для предварительной оценки эффективности ингибирова-[я кальциноза биоткани.

Оценка биологических свойств ксеноматериала, обработанного льфо- и фосфосодержащими полианионами. Известно, что соединения, держащие наряду с фосфатными сульфо-группы, блокируют процессы льцификации (Tew W.P. et al., 1980). Так, хондроитин-сульфат, яв-ющийся естественным ингибитором кальцификации соединительной тка-, после ковалентной фиксации на коллагене был с успехом применён я предупреждения минерализации биоткани протезов клапанов сердца imni M.F. et al., 1987). К числу сульфосодержаших ингибиторов пьциноза относится и гепарин (Новикова С.П., 1988). Антикальцифи-эующим действием обладает также додецилсульфат натрия-ДДС (Levy J. et al., 1984), вещество со стериохимически открытой свободной иьфо-группой. Являясь поверхностно активным соединением, ДДС лег-проникает вглубь биоткани и неспецифически сорбируется на колла-ie и протеингликанах. Возможным механизмом антикальцифицирующего гствия ДДС является активная фиксация из среды ионов Са с образо-1ием "защитного кальциевого слоя". В литературе ингибирующее дей-ше ДЦС на процессы кальциноза относят к его способности удалять биоткани кислые фосфолипиды (Levy R.J. et al., 1984), хотя выше-[веденные сульфосодержащие соединения, являясь протекторами каль-газа, подобным действием не обладают.

При исследований кальцификации ксеноперикарда телёнка, фикси-анного глютаровым альдегидом и обработанного IX ДДС в 5 мМ Не; буфере рН 7.4, в опытах in vitro нами обнаружен ингибиторный , ект.(5.7±1.6 против 20.5±1.2 мкг/мг сухого веса биоткани в конт-е, Р<0.001, с Са/Р равным 1.67±0.08, т.е. соответствующему коэф-иенту ГА).

Полученные данные послужили основанием для изучения ингибитор-о действия ДДС на процессы кальцификации in vivo методом подкож-имплантации (рис.15). Результаты исследований свидетельствуют эм, что под влиянием ДДС интенсивность развития кальциноза во у<ени значительно менее выражена, чем в контрольной группе.

Известно, что одним из наиболее важных критериев долговечное-

ти биопротеза клапанов сердца является механическая прочность би ткани, используемой для его приготовления. Детергентное действи ДДС на ксеноматериал приводит к разрыву межмолекулярных связе кроме ковалентных, освобождению дополнительных аминогрупп с поел дующей их фиксацией глютаровым альдегидом. Это подтвердили иссл дования проведенные с помощью усовершенствованного динамометра т па Поляни: прочностные характеристики ксеноперикарда, обработали го после фиксации 0.625% глютаровым альдегидом 1% ДДС в течение' суток с последующей дополнительной фиксацией в глютаровом аяьдег де, значительно возросли (табл.25).

Обработка ксенопротезов 1% ДЦС в значительной мере повлиял на протеолитическую устойчивость коллагена биоткани (табл.32 Кроме того, данная технология обработки улучшает гемосовместимы свойства ксенопротезов клапанов сердца (табл.26).

Улучшение биологических свойств ксеноперикарда телёнка по влиянием ДДС легло в основу метода обработки биопротезов новог типа - "БИОНИКС", внедрённого в клиническую практику ИССХ и А.Н.Бакулева РАМН. В настоящее время Институт располагает опыте 60 трансплантаций биопротезов "БИОНИКС" в митральную и аортальну позиции с 8-летним сроком наблюдения. Реоперирован лишь 1 пациен по поводу кальциноза биоклапана сердца на 7 году функционировали биопротеза после имплактации. У остальных пациентов отмечаете удовлетворительное их функционирование без видимых проявлений кал циноза в то время, как при чисто глютаральдегидной технологии с работки первые случаи кальциноза биопротезов отмечались через 2. года после имплантации.

Однако литературные данные свидетельствуют о том, что веледе вие неспецифической сорбции на биоткани ДДС в системе .кровотока, С дет вымываться из ксеноматериала, что в свою очередь приведёт развитию кальциноза биоклапана (АгЬиэип! Е. е1 а1., 1983, 1984) Проведенные нами эксперименты подтвердили данное предположен Биоткань, обработанную глютаровым альдегидом и ДДС, отмывали в л минарном потоке 0.15 М МаС1 с 10-кратной сменой его в течение 4-суток. Отмытые образцы биоткани, имплантированные в подкожну клетчатку крыс, через 21 сутки показали выраженную' степень калы фикации, что было связано с удалением ингибитора из ксеноматериа; (рис.16).

Таким образом, экспериментальные,, клинические и литературнь данные позволяют считать, что метод обработки ксенопротезов 1% Дг значительно улучшает биологические свойства ксеноматериала и г медляет процесс кальцификации биоткани, однако десорбция ДДС кровотоке не позволяет полностью решить проблему дистрофическох кальциноза биопротезов. В этом плане более перспективным меш оказаться использование прочно фиксированных на биоткани ксенощ теза ингибиторов кальциноза. В качестве последних привлекают В1 мание' фосфосодержащие вещества и среди них, в первую очередь, ан; ги естественных ингибиторов образования и роста кристаллов ГА-пи[ фосфат и фосфоцитрат. Неорганический пирофосфат подавляет прецш

тацию фосфата кальция из раствора, блокирует трансформацию аморфных фосфатов кальция в ГА, предотвращает агрегацию ГА в крупные гроздья (Вельтищев Ю.Е. с соавт., 1983, Дятлова Н.М., 1984, Юрьева Э.А., Архипова О.Г., 1985). Фосфоцитрат является интрацеллзолярным регулятором кальцификации. Хотя функция его изучена недостаточно, экспериментальные данные свидетельствуют о его способности эффективно блокировать патологическую кальцификацию (БГ)акаг Я. е1 а1., 1984).

В качестве фиксированных форм фосфосодержащих ингибиторов кальцификации были использованы синтезированные в ИНЭОС им. А.Н. Несмеянова РАН сложные макромолекулярные органические соединения, содержащие альдегидную (А1)* и диальдегидную (Аг)* группировки, совалентно связывающиеся с аминогруппами коллагена. Проведенные жспериментальные исследования выявили выраженный антикальцифици->ующий эффект указанных соединений (табл.27).

Изучение прочностных характеристик ксеноперикарда, обработан-юго этими препаратами, выявило снижение механической прочности осле обработки препаратом А1 и улучшение данных свойств при ис-ользовании препарата Аг (табл.25). Это связано с тем,' что в пером случае альдегидная группа препарата А1 конкурирует с глютар-льдегидом за место связывания на коллагене, во втором же случае иальдегидные группы препарата А2 оказывают потенциирующее сшиваю-, ее действие совместно с глютаральдегидом за счет увеличения рас-тояния между альдегидными группами и возможности сшивки коллагено-ых волокон между собой. ■

Однако фосфатные группы А1 и А2 подвержены гидролизу и, сле-эвательно, длительное ингибирующее влияние этих препаратов стано-пся сомнительным. Наиболее перспективным в этом плане является ^пользование фиксированных фосфосодержащих соединений, устойчивых действию гидролаз. К таковым относятся фосфоновые соединения. .

Влияние фосфоновых соединений на биологические свойства ксе-)протезов. С тех пор, как была установлена важность пирофосфата ш подавления кальцификации, начался синтез фосфоновых соедине-[й, аналогичных пирофосфату . Был синтезирован ряд соединений, 1еющих амино- или иминофункциональные группы, за счет которых воз-гаа их ковалентная фиксация на биоткани с помощью сшивающих реа-нтов: глютарового альдегида и водорастворимых карбодиимидов.

С целью изучения воздействия фиксированных форм фосфоновых единений на биологические свойства ксеноматериала биопротезов ли исследованы: 3-амино-1-гидроксипропан-1,1-дифосфоновая кисло-(АПДФ), иминометилдифосфоновая кислота (ИДФ). и имино-бис-2-эти-' ден-1,1-дифосфоновая кислота (ИТФ). Первое соединение < широко ис- . дьзуется для обработки биоткани ксенопротезов в эксперименте и . цинической практике за рубежом, последние два синтезированы ответственно Институтом химических■реактивов и особо чистых хими-:ких веществ МХП РФ и Институтом химической кинетики и горения РАН. Отличительной особенностью ИТФ от дифосфонатов является

то, что -он имеет 2 дифосфоновые группировки и является тетрафосфо-натом.

Чтобы не нарушать прочностные характеристики биоматериала, создаваемые обработкой глютаральдегидом, который сшивает коллаге-новые волокна по аминогруппам лизина, фиксацию фосфоновых соединений проводили с помощью водорастворимого карбодиимида путём сшивания карбоксильных групп белков ксеноматериала и амино- или имино-групп фосфонатов.

Фосфоновые группы, являясь комплексонатами, активно и прочно связывают и удерживают Ca, создавая таким образом на биоткани ксе-нопротезов "защитный кальциевый слой", который, как показано выше, играет важную протекторную роль ингибирования процессов кальцифи-кации. Введение в молекулу ИТФ дополнительной фосфоновой группы должно усиливать антикальцифицирующий эффект, чем и объясняется перспективность использования данного препарата для ингибирования минерализации биопротезов.

В качестве сшивающего реагента был использован водорастворимый карбодиимид:1-этил-3 (3-диметиламино) пропил карбодиимид HCl с оптимумом реакционного сшивающего действия при pH 5.0 в сочетании с 1-гидроксибензотриазолом, который является акселератором данного процесса. Проведенные исследования по фиксации ингибиторов кальци-фикации на ксеноперикарде телёнка позволили выявить оптимальные условия обработки биоткани ксенопротезов клапанов сердца. Концентрация фосфоновых соединений и карбодиимида составили по 20 мМ/л и более, время обработки - 1 сутки, что согласуется с литературными данными (Nimni М.Е. et al., 1987). Концентрация 1-гидроксибензотри-азола составила 50 мМ/л. Обработка перикарда теленка вышеописанным способом фосгеновыми соединениями показала, что фиксация препаратов ИДФ, АПДФ и ИТФ составила соответственно 11.0±0.67, 8.0±0.33 и 9.1±0.33 мкг/мг веса сухой биоткани, т.е. около 1%. Столь малое содержание препарата фиксированого на ксеноматериале определяется количеством свободных карбоксильных групп коллагена и протеинглика-нов биоткани.

Проведенные исследования инкубации образцов биоткани, предварительно обработанной 0.625% глютаральдегидом в течение 14 суток, с фиксированными на ней. фосфоновыми соединениями в кальцифицирую-щей среде в течение 4 суток показали достоверное снижение накопления Ca на ксеноматериале по сравнению с контролем. Соответствующие результаты для ИДФ, АДЦФ и ИТФ составили: 4.9±0.6, 4.2±0.7 и 3.9±0.5 мкг/мг веса сухой биоткани, Р<0.001. Са/Р оказалось равным соответственно 1.27±0.1, 1.31±0.09 и 1.33±0.07.

Таким образом, фосфоновые соединения, фиксированные на биоткани, ингибируют процесс кальцификации в опытах In vitro соответственно в 4.2, 4.9 и 5.3 раза. Коэффициенты Са/Р указывают на по давление формирования кристаллов ГА. Полученные данные согласуются с литературными, полученными в опытах in vitro с АЦДФ (Nimni М.Е. et al., 1987).

■ Исследования эффективности ингибирования кальцификации био

гкани с фиксированными фосфоновыми соединениями проведены на моде-ш подкожной имплантации крысам на период 30 и 90 суток (табл.28). 1оказано, что даже незначительное содержание на биоткани АПДФ и 1ТФ эффективно предотвращает кальцификацию длительно имплантируе-юго ксеноперикарда телёнка. Кратность ингибирования составила со->тветственно 7.6 и 11.2 раза. Что же касается ИДФ, то при подсадке сивотным на 30 суток кальцификация биоткани была незначительной, а 1ри длительной имплантации препарат оказался малоэффективным. 1о-видимому, ингибирующее действие фосфоновых соединений на процес-:ы кальцификации биоткани ксенопротезов зависит от длины углеводо-юдной цепочки комплексонатов.

Анализ индивидуальных показателей степени кальцификации био-■кани с фиксированными формами АПДФ и ИТФ представлены в табл.29, ак, частота 5 и 10% кальциноза ( весовых соотношений ГА и сухой иоткани) при использовании тетрафосфоната•для обработки биоткани ыла значительно ниже, чем с АПДФ.

Для изучения влияния фосфоновых соединений на протеолитиче-кую устойчивость биоткани ксенопротезов были проведены исследова-ия действия высокой активности коллагеназы на нативный перикард елёнка, обработанного комплексонатами АПДФ и ИТФ (табл.30), езультаты опытов показали, что фосфоновые соединения, фиксирование на биоткани обладают протекторным действием на протеолиз кол-агена. Однако данный эффект выражен неравномерно. Так, выявлено, то АПДФ снижает накопление оксипролина в реакционной среде в 3.1 аза, тогда как ИТФ - в 8.8 раза, т.е. последний почти в 3 раза казался эффективнее, чем дифосфонат. Антипротеолитический эффект, о-видимому, связан с наличием в молекуле ИТФ дополнительной фос-эновой группы. Полученные данные побуждают к поиску- фосфоновых эединений, которые обладали бы более выраженным сочетанкым про-экторнкм действием на кальциноз и протеолиз биоматериала ксено-ротезов.

Таким образом, проведенные исследования влияния фосфоновых эединений на биологические свойства ксенопротезов выявили их высоте антикальцифицирующее действие и относительный антипротеолитиче-<ий эффект. Использованное в экспериментах тетрафосфоновое соеди-зние обладает более выраженными протекторными свойствами по срав-гнию с дифосфонатом АПДФ. Усиление защитного эффекта следует ожиг 1ть с увеличением концентрации ИТФ на биоткани ксенопротезов, что эжно достигнуть путём предварительной протеазной обработки ксено-1териала (Барбараш Л.С., 1986) или увеличения количества доступ-jx аминогрупп при фиксации ингибитора с помощью алифатических ди-<инов (Ni.mnl M.Е. et al.. 1987).

Влияние комплексонов на биологические свойства ксенопротезов.

Комплексоны -это хелаторы, ионсвязывающие вещества. Важнейшим »едставителем данной группы является ЭДТА. Последняя используется медицине как лекарственное средство для связывания и удаления ;быточного количества Са из организма. На основании закономерно-

стей взаимодействия переходных металлов с белками (ряда Ирвинга Уильямса), последние образуют с ионами цинка и меди наиболее проч ные, комплексные соединения, константы устойчивости которых, как правило, выше, чем у остальных переходных элементов (Sigel Н. 1983). На основании этого наибольшим защитным антикальцифицирующим и противоферментным действием должны обладать комплексы цинка эти лендиаминтетраацетатоцинката и меди этилендиаминтетраацетатокуприа та за счёт образования высокопрочных смешанолигандных соединений с ЭДТА и белком, в которых свободная координационная ёмкость внешне сферических ионов цинка и меди замыкается в виде прочных хелатных циклов.

Механизм ингибирующего действия цинката и куприата ЭДТА на минерализацию, по нашему мнению, реализуется двумя путями. Как пс казано ранее, ионы 2-х и 3-х валентных металлов тормозят минерали зацию биоткани. Данным ингибиторным свойством обладают алюминий и железо (Webb C.L. et al., 1988, Levy R.J. et al., 1990), олово и кобальт (Boskey A.L. et al., 1982). Как указывалось выше, цинк и медь имеют наибольшую прочность связи с белками, поэтому предпола гается более выраженная эффективность- антикальцифицирующего дейст вия. Кроме того, показано, что соединения ЭДТА с цинком и медьк в буферном растворе лиганда (NH<0 образуют химически действующие компоненты гпгШН^ЭДТАи СигСЫН^ЭДТА. При инкубации биоматери ала, обработанного цинкатом и куприатом ЭДТА,в кальциевой среде ис ны NH4 данных соединений замещаются ионами Са. Таким образом, бис ткань, обработанная данными веществами, в биологических жидкостях преобретает "защитный кальциевый слой". Блокируются процессы акти вированной кальцификации и следует ожидать значительного пролонги рования процессов пассивной минерализации.

Эффективность ингибирования кальциноза ксенопротезов зависит от количества инибитора, фиксированного на биоткани, и длительнс сти его сохранения на створках биоклапана в системе кровообращения Нами проведены исследования по фиксации цинката ЭДТА на ксеноперр карде телёнка в зависимости от рН раствора препарата, времени инку бации и концентрации комплексона. Показано, что в растворах препг рата при рН от-6.8 до 7.3 происходит выпадение кристаллов цинкатг ЭДТА, а наибольшая фиксация цинката ЭДТА на биоткани происходи! при рН 7.4-7.6. При изучении времени инкубации биоткани показанс что оптимальная фиксация препарата составляет 1 сутки. Иучение фиь сации препарата на биоткани в зависимости от его концентрации покг зало, что, начиная с 10% и выше, накопление цинката ЭДТА выходит на плато.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить or тимальные условия биотехнологии обработки ксенопротезов: сформирс ванный биопротез обрабатывается 10% цинкатом ЭДТА с рН растворг препарата 7.4-7.6 при комнатной температуре в течение 1 суток. Не фиксированный препарат удаляется 1М NH4CI. Раствор цинката и Kynpt ата ЭДТА, а также отмывающий раствор выдерживают условия стерилизг ции без потери своих биологических свойств. Учитывая тот факт, чтс

обработка в течение 15 минут приводит к фиксации препарата на 76% от максимального накопления, а экспозиция в течение 1 часа -на 81%, можно считать данный метод обработки ксенопротеэов приемлемым перед имплантацией во время операции. Ни один из существующих методов такой возможностью не обладает. Аналогичные характеристики присущи и куприату ЭДТА.

Исследования инкубации образцов биоткани, обработанных цинка-том и куприатом ЭДТА по вышеописанному методу, в кальцифицирующей среде в течение 4 суток показали резкое снижение накопления Ca на ксеноматериале, по сравнению с контролем. Соответствующие результаты составили 4.6±0.4, 3.4±0.2 и 20.5±1.2 мкг/мг веса сухой биоткани, Р<0.001. Коэффициент Са/Р оказался равным, соответственно 1.2± 0.06 и 1.0±0.1.

Таким образом, использование препаратов цинката и куприата ЭДТА для обработки биоткани ксенопротеэов приводит к значительному ингибированию кальцификации в опытах In vitro, соответственно в 4.5 и 6 раз. Причём, полученные коэффициенты Са/Р могут указывать на образование фосфорно-кальциевого соединения - брушита, который,, по мнению Cheung Р.Т. (1985), не относится к предшественникам ГА.

Исследования эффективности ингибирования кальцификации биоткани, обработанной растворами препаратов цинката и куприата ЭДТА, проводили на экспериментальных животных методом подкожной имплантации образцов. Согласно данной модели степень кальцификации после 3-х месячной имплантации (200 мкг Ca на мг ткани) эквивалентна /ровню, наблюдаемому при-дисфункции клапана в клинике (Levy R.J.et з1., 1986). Полученные результаты представлены в табл.31 и свидетельствуют о выраженной эффективности ингибирования процессов каль-дификации комплексными соединениями переходных металлов с ЭДТА, 1ричём, применение цинката ЭДТА снижало накопление Ca в образцах го сравнению с контролем в 6 раз, а куприата - в 11 раз.

Эффективность и жизнеспособность биопротезов клапанов сердца, зависит' от длительности присутствия на биоткани фиксированных ин-'ибиторов кальцификации в системе кровообращения. Для изучения это-'о вопроса были проведены исследования по десорбции цинката с био-'кани ксенопротеэов. Кусочки перикарда телёнка, фиксированные глга-'аровым альдегидом, обрабатывали цинкатом ЭДТА по вышеописанной тех-юлогии и помещали в сосуд с забуференным 0.15.М NaCl, pH 7.4 при юмнатной температуре. С помощью магнитной мешалки и магнитного яко->я создавали эффективный ламинарный поток жидкости. Исследования [роводили в течение 3 месяцев с еженедельной заменой отмывающей :идкости. Содержание препарата на ксеноперикарде в процессе экспери-[ента контролировали по определению цинка в биоткани (рис.17). Проеденные исследования го!асали прочную фиксации препарата на био-кани, что свидетельствует о длительном действие цинката ЭДТА на нгибирование процессов кальцификации ксенопротеэов. Учитывая, то связь меди с белками по ряду Ирвинга-Уильямса более прочная, ем у цинка, фиксация куприата ЭДТА должна быть более эффективной.

Работоспособность функционирующего ксенопротеза зависит также

от прочностных свойств используемых биоматериалов, структура кото рых может подвергаться ферментной деградации с последующим истон чением и разрывом биоткани. Перфорация и изъязвление створок био клапанов сердца, как правило, сочетается с кальцификацией коллаге новых волокон (Schoen F.J. et al., 1985), но может протекать без обызвествления биоткани. Несмотря на значительную прочность ксено материала после обработки глютаровым альдегидом, коллагеновые во локна всё же подвержены ферментному лизису, и поэтому необходима их защита от протеолитического действия лиэосомальных ферментов.

В табл. 32 приведены данные исследований воздействия коллаге назы, специфического фермента для коллагена, на ксеноперикард те лёнка, обработанного цинкатом и куприатом ЭДТА. Показано, что не тивный перикард в данных условиях подвергается значительному разру шению. Уже через 3-4 часа инкубации кусочки нативного перикарде полностью лизируются в гомогенную массу. Перикард телёнка, фиксирс ванный 0.625% глютаральдегидом в течение 14 суток, оказался знач1 тельно более устойчивым к протеолизу, хотя и в нём, по данным опре деления оксипролина, выявляется деструкция коллагена. Обработка биоткани комплексонами переходных металлов с ЭДТА, как и ДДС, npai тически полностью предотвращает ферментную деградацию ксеноматери; ла. Однако, учитывая более прочное по сравнению с ДДС связывание препаратов цинката и куприата ЭДТА с биотканью, использование ко! плексонов для обработки ксенопротеэов, устойчивых к ферментному л: зису ксеноматериала, более перспективно. Убедительным доказател ством протекторного действия комплексонов переходных металлов ЭДТА на ферментное разрушение биоткани явились опыты инкубации н тивного перикарда, обработанного цинкатом и куприатом ЭДТА, с ко лагеназой в течение 1 месяца при температуре 37°С. Показано, чт данные соединения не только предотвращают лизис перикарда, но и э фективно защищают от разрушения коллагеновые структуры. Выявлении свойства антикальцифицирующего и противоферментного действия кс плексонов переходных металлов с ЭДТА на биоткань могут быть с yen хом использованы для обработки биопротезов из нативного ксеномат риала.

Таким образом, проведенные исследования химической стабили; ции биоткани препаратами цинката и куприата ЭДТА показали зна^ тельное улучшение биологических свойств ксенопротеэов. Выявле} высокая степень эффективности ингибирования этих препаратов диет] фического кальциноза, а также протеолиза коллагеновых структур 6i ткани ксенопротеэов. Особенностью разработанных методов являет! простота технологии обработки биопротезов и, что весьма актуалы возможность её внутриоперационного использования, как фиксиров, ных глютаральдегидом ксенопротеэов, так и сформированных из нат: ного ксеноматериала.

Влияние полимерных покрытий биоткани на процессы дистрофи ского кальциноза ксенопротеэов. Перспективным направлением ме дов защиты биопротезов от дистрофического кальциноза и разрушен

является полимерное покрытие ксеноматериала створок, т.е. создание 5иокомпозитных материалов с помощью полимеризации мономерных молекул в межволоконном пространстве биоткани. Показано, что формирована на поверхности биоткани слоя полиакриламидного геля с концентрациями от 0.5 до 6X2 эффективно предотвращает процесс кальцифика-щи (Сагреп^ег А. е1 а1., 1984). Однако компоненты данного полиме-эа токсичны и потенциально канцерогенны, а его использование в кли-1ической практике проблематично.

Нашим опытом в разработке данного направления явилось созда-ше и апробация защитного покрытия биоткани ксенопротезов на осно-¡е полисахаридного полимера, разработанного в ИНЭОС им. А.Н.Несме-[нова РАН. Использование в качестве исходного материала кровезаме-(ителя-раствора "Полиглюкина" не противоречило клиническому применимо данного способа. Образцы ксеноперикарда телёнка, фиксирован-¡ые глютаровым альдегидом, обрабатывались раствором активированно-о эпихлоргидрином декстрана "Полиглюкина" с мол. массой 60 ООО альтон до завершения процесса гелеобразования. После удаления с иоткани избытка гидрогеля, образцы хранились в глютаральдегиде.

В исследованиях, проведенных на модели подкожной имплантации . ивотным, выявлено значительное торможение кальцификации биоткани сенопротезов в случае покрытия её полимером; антикальцифицирующий ффект при длительной имплантации превосходил способ обработки био-ротезов 17. ДЦС (рис.18).

Механизм ингибирования [кальцификации с помощью данного поли-ерного покрытия связан с особенностью строения полимерной решёт-л, которая исключает контакт ферментов и клеточных элементов со груктурами коллагена. В данном случае происходит механическая за-лта биоткани от.разрушающего действия ферментов крови, фагоцитов бактерий.

Выявлено также улучшение гемосовместимых свойств ксеноматери-1а, обработанного полимером декстрана (табл.26).

Другим аспектом данного направления явилось создание метода химерного покрытия биоткани ксенопротезов диальдегвд декстраном. >следний готовили из "Полиглюкина" методом периодатного окисления. ;спериментальные исследования с длительной подкожной имплантацией ( выявили существенного антикальцифицирующего эффекта данного ме->да обработки биопротезов клапанов сердца (табл.33). Однако^ основой особенностью данного полимера является наличие в его структуре нкционально активных альдегидных групп, способных реагировать с зличными аминосодержащими соединениями. Эта особенность 'делает можной ковалентную фиксацию на полимере антибиотиков, антйкоагу-нтов, протекторов кальциноза, ингибиторов коллагеназы.'Связанный биотканью гидрогель имеет очень значительную ёмкость фиксации, казано, что ксеноперикард, содер<т^щий 152 диальдегип лекс?пана. валентно связывает не менее 2.2% мае.доли аминосодержацих анти-отиков (Дятлов В.А. и соавт., 1987).

Как видно из приведенных данных (табл.33), сульфатные формы иногликозидов (амикацин и гентамицин), фиксированные на биоткани

посредством альдегидных групп полимера, обладают более выраженные антикальцифицирующим эффектом, механизм которого описан выше.

Полученные биокомпозитные материалы практически не разрушаю! ся в организме, посколько в крови отсутствует фермент декстраназг Наличие данного фермента у многих патогенных бактерий позволило предложить метод защиты от бактериальной инфекции, основанной нг создании условий "самоуничтожения" микроорганизмов при их попадг нии на поверхности биоткани с фиксированными антибиотиками. Обрабс танный биокомпозитный материал с иммобилизированным амикацином не ввделял антибиотик, будучи помещенный под кожу кролика на 12 суто! что эквивалентно 1-2 годам в кровотоке человека. Однако при контш те извлечённого из-под кожи кролика биоматериала с газоном стафилг кокка на кровяном агаре через сутки наблюдалась обширная зона инп бирования роста бактерий, характерная для действия свободного ант> биотика.

Разработанные методы химической защиты дистрофической кальц] фикации не ограничиваются применением их только для ксенопротезга клапанов сердца, а приемлемы так же для любого биоматериала. Та1 одной из актуальных проблем сердечно-сосудистой хирургии является оперативное лечение поражённых сосудов малого и среднего диаметр; (артерии и вены конечностей, коронарные артерии) с использование! биопротезов сосудов алло- и ксеногенного происхождения. Для изуч! ния кальцификации биопротезов сосудов в экспериментах с подкожно! имплантацией крысам были использованы артерии голени и верхних к нечностей от трупов лиц молодого возраста (аплографты) и сонны артерий телят (ксенографты), фиксированные 0.625% глютаральдегидо: в .течение 14 суток. Для химической стабилизации биоткани использ ван полимерный способ обработки в сочетании с цинкатом и купр атом ЭДТА (табл.34). Исследования с длительным сроком имплантаци показали выраженную резистентность к кальцификации биопротезов с судов вышеописанными методами обработки ксеноматериала.

В настоящее время в лаборатории биопротезирования ИСС им.А.Н.Бакулева РАМН с учётом разработанных способов биотехнологи обработки ксеноматериала создаётся новый тип биопротезов клапано сердца поколения серии" "БИОНИКС".

ВЫВОДЫ

1. Дистрофический кальциноз клапанов сердца развивается у больных на фоне нормокальциемии и некоторой гиперфосфатемии, дисбаланса гормональной регуляции фосфорно-кальциевого обмена. Содержание в крови больных кальцитонина и альдостерона положительно коррелирует со степенью выраженности кальциноза клапанов оердца. Снижение базального уровня паратгормона выявлено при ППС только у пациентов с III степенью эктопической кальцификации.

2. Гиперпродукция 25-оксихолекальциферола при ППС прямо коррелирует со, степенью минерализации клапанов сердца. Назальная концентрации 25-оксихолекальциферола не достигает токсического уровня.

3. На развитие дистрофического кальциноза клапанов сердца оказывает влияние функциональный статус печени и состояние межуточного обмена в ней:

- функциональное состояние эндоплазматического ретикулума ге-патоцитов взаимосвязано с выраженностью кальцификации клапанов сердца. Развитие кальциноза клапанов сердца, активация эндоплазматического ретикулума гепатоцитов и- гиперпродукция 25-оксихолекаль-циферола происходят параллельно;

- по мере увеличения активности щелочной фосфатазы сыворотки крови возрастает степень кальциноза клапанов сердца. Высокая активность щелочной фосфатазы в крови у детей позитивно коррелирует с интенсивностью кальцификации биопротезов;

- состояние межуточного обмена в печени'у больных ППС с дистрофическим кальцинозом клапанов существенно отличается от такового у больных ППС без проявлений патологической минерализации;

- процесс дистрофической кальцификации клапанов сердца зависит от активнЬсти внутриклеточной регенерации гепатоцитов, которая в свою очередь связана с эффективностью внутрипечёночной гемодинамики. С ухудшением функционального состояния печени процессы дистрофической кальцификации замедляются, а в условиях восстановления или активации внутриклеточной регенерации гепатоцитов риск кальциноза клапанов сердца возрастает.

4. У больных ППС дистрофический кальциноз клапанов сердца развивается на фоне активации окислительного метаболизма стимулированных фагоцитов крови. Прямое воздействие фагоцитирующих, клеток на биоткань ксенопротезов усиливает и ускоряет процесс кальцификации.

5. В условиях подкожной имплантации животным ксеноматерйала в диффузионных камерах субтоксические дозы холекальциферола активизируют кальцификацию биоткани ксенопротезов. Гормонально активные метаболиты холекальциферола провоцируют дестабилизацию условий образования неорганической основы кальциноза - гидроксиапатита:

- снижение концентрации кальция и значительное увеличение содержания фосфора в межтканевой жидкости;

- защелачивание межтканевой среды.

6. Избыточное введение экспериментальным животным кальция при-

водит к медленно развивающемуся кальцинозу биоткани ксенопротезов без изменений количественного и качественного состава межтканевой жидкости.

7. Ввделены два типа развития дистрофической кальцификации клапанов сердца: активированный и пассивный. Интенсивность формирования кальциноза биопротезов зависит от суммы факторов, определяющих скорость минералиации.

8. Установлена возможность медикаментозной профилактики кальцификации биоткани ксенопротезов. Наиболее эффективным является ди-фосфонат - ксидифон.

9. Химическая обработка биопротезов додецилсульфатом натрия пролонгирует процесс кальцификации биоматериала, увеличивает механическую прочность и гемосовместимость биоткани. Улучшение биологических свойств ксеноматериала под влиянием додецилсульфата натрия положено в основу метода обработки биопротезов нового типа - "БИОНИКС". В клинике зарегистрировано удовлетворительное функционирование почти 10ОХ из них без проявлений кальциноза с 1985 года.

10. Дистрофический кальциноз оиопротёвов эффективно блокируют фиксированные формы соединений, активно и прочно связывающие ионы двухвалентных металлов с формированием на коллагене и в межуточном пространстве биоткани защитного кальциевого слоя:

- обработка ' биоткани цинкатом и куприатом зтилендиаминтетра-уксусной кислоты значительно ингибирует процессы кальциноза и про-теолиза ксеноматериала (даже в условиях простой и кратковременной обработки биопротезов). Это позволяет использовать метод внутриопе-рационно, как для фиксированных глютаровым альдегидом ксенопротезов, так и для сформированных из нативного ксеноматериала;

- обработка фосфоновыми соединениями улучшает биологические свойства ксеноматериала; эти соединения обладают эффективным анти-кальцифицирующим и относительным антипротеолитическим эффектом Тетрафосфоновые соединения обладают более выраженными по сравнению с дифосфонатами протекторными свойствами. Антикальцифицирующее влияние комплексонатов зависит от длины углеводородной цепи и коли чества функциональных фосфоновых групп на биоткани;

- покрытие биоткани ксенопротезов диальдегид декстраном позво ляет проводить ковалентную фиксацию на полимере протекторов каль циноза, ингибиторов коллагеназы, антибиотиков, антикоагулянтов и других соединений. Связанный с биотканью гидрогель обладает значи тельной емкостью фиксации и улучшает биологические свойства био ткани ксенопротезов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

- Использование биопротеза для хирургической коррекции пороков сердца следует дифференцировать в зависимости от состояния фосфорно-кальциевого обмена больных (фосфатемии, секреции парат-гормона, кальцитонина и 25-оксихолекальциферола), уровня ферменте-мии щелочной фосфатазы, активности внутриклеточных регенерационных процессов в гепатоцитах.

- Пациентам с имплантированными ксенопротезами клапанов сердца, а также с минерализацией створок без существенных гемодинами-ческих расстройств, с целью профилактики развития дистрофического кальциноза биоткани рекомендуется применять лекарственный препарат ксидифон.

- Для экспериментального изучения патогенеза развития патологической минерализации ксеноматериала в зависимости от вида нагрузки и факторов воздействия можно использовать модель подкожной имплантации диффузионных камер молодым растущим животным.

- Использование кальцифицирующей среды рН 7.0 и времени инкубации в течение 4 суток при 37°С позволяет применять как скрининг -тест предварительной оценки протекторной эффективности кальциноза биоткани.

- Эффективными ингибиторами дистрофического кальциноза биоткани ксенопротезов являются химические соединения, фиксирующиеся на ксеноматериале и обладающие хелаторным связыванием ионов кальция с образованием "защитного кальциевого слоя".

- Для защиты коллагена биоткани ксенопротезов от протеолиза рекомендуется использовать комплексоны переходных металлов с ЭДТА.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТСИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Оценка функционального состояния печени. Гвмосорбция и гемодиализ как метод лечения остро* печёночно-почечной недостаточности. Материалы 3-й кон}, анестезиологов и реаниматологов Литовской ССР, г.Вильнюс,-1880.-с.132-134 (Сови. с Т.Н.Дорофеевой).

2. Ивучеиие активности гамма-глвтамилтраисфвравы сыворотки крови у кардиохирургическик вольных. Материалы 2-й конф."Кровообращение, метаболивм и функция органов при реконструктивных операциях". Ереван.- 1981.-с.35-30 (Совм. с Т.А.Корякиной).

3. К методике определения жидкостных объёмов человека. Депо-нир. ВИНИТИ, реферат "Лабораторное дело" . - 1982.-N9.-с.57В. (Совм.

с Б.М.Аауровым и А.В.Мопкиным).

4. Состояние водного обмена во время и после искусственного кровообращения у больных аортальными пороками сердца. "Анестезиология и реаниматология.- 1984N1с. 16-19. (Совм. с А.Л.Дивониным, Н. Д. Нисневич) .

5. Способ определения фагоцитарной активности. Авторское свидетельство N 1090130.-1984. (Совм. с D.Е.ВеЛьТищевым и В.А.Комаровым).

S. »изиология и патология хемотаксиса фагоцитов. Вопросы охраны материнства и детства.- 1985.-N8.- с.31-35. (Совм. с В.А.Комаро вым) .

7. Новый способ оценки фагоцитоза. В сб.ДСП-00152 "Доклады о наиболее важных достижениях в области медицинской науки, техники и з-дротго хранен юг в f98* г; * М. - 1985. - с. 17В. (Совм. с В. С. Вельтищеввм и В.А.Комаровым).

8. Динамика водного обмена у больных приобретенными пороками сердца, оперированных в условиях искусственного кровообращения. Материалы III Всесоовного съезда врачей-лаборантов. М.- 1985.-с.48-49. (Совм. с А.Л.Дивониным и И.Л.Михайловой).

9. Показатели микросомального окисления печени больных приобретенными пороками сердца. Материалы III Всесоюзного съезда врачей-лаборантов. М. - 1985.-с. 109-111 (Совм. с В.М.Хадовской).

10. Состояние микросомального окисления печени и водного обмена у больных приобретенными пороками сердца, оперированных в условиях искусственного кровообращения. В сб."Актуальные вопросы медицинского обеспечения войск". МО СССР.- 1985.- с. 137-140 (Совм. с А. Л. Дивониным и В.Д.Поповым).

11. Способ определения общей жидкости в организме. Авторское свидетельство N 218677.-1985. с грифом "секретно". (Совм. с С.В.Харченко, В.В.Помазановым, В.Г.Чвмисовым и Н.П.Харченко).

12. Способ определения антипирина в биологических жидкостях. Авторское свидетельство N 2166 78.-1985, с грифом "секретно".(Совм. с С. В. Харченко, В.В.Помазановым, В. Г. Чемисовым и Н. П. Харченко) .

13. Состояние системы цитохрома Р-450 у больных с хроническим» диффузными заболеваниями печени. Материалы пленума правления Всесоюзного научного общества гастроэнтерологов. Рига.- 1986.- с. 375377. (Совм. с С.С.Катаевым и Г.В.Цодиковым).

14. Состояние монооксигеназ печени у больных с приобретенным! пороками сердца. Материалы Всесоюзного симпозиума по медицинской вцэимологии. Махачкала.-1986.-29-30. (Совм. с В.М.Хадовской i Н.Н.Самсоновой).

15. Иммуко-биохимический метод определения фагоцитарной активности в цельной крови. В сб. ДСП центрального госпиталя ракетны] войск. Одинцово. - 1987 .-с. 87-89 . (Совм. с С. Е . Ве льтищев ым и B.A.Ki маровым).

16. »ункциональное состояние системы цитохрома Р-450 у больны: приобретенными пороками сердца. Материалы III Всесоюзной конференции "Цитохром Р-450 и охрана окружающей среды". Новосибирск.-1987 -с. 117-118 (Совм. с В. М. Хадовскоой.

17. 10-ундецеленил-0,0-диэтилфосфаты, являющиеся ингибиторами минерализации биологических протезов в сердечно-сосудистой хирур гии. Авторское свидетельство N 1381939, ДСП.-1987. (Совм.

D. Г. Гололововым, В.А.Дятловым, 5. А. Фурсовым, В. В. Зайцевым и Л.В.Зайцевым) .

18. Определение содержания цитохрома Р-450 в ткани печени и антипириновая проба у больных гепатитом и циррозом. Материалы XIX Всесоюзного съезда терапевтов. Ташкент.- 1987.-с. 376-377 ( Совм. с С.С.Катаевым и Г.В.Цодиковым).

19. Способ получения сшитого полисахаридного полимера. Авторское свидетельство N 1545558, ДСП.-1909 (Совм. с В.Г.Гололововым, 5. А. Фурсовым, В.В.Зайцевым, В.А.Дятловым и Л. В. Зайцевым) .

20. Клинико-экспериментальные исследования процессов минерализации биопротеэов сердца. "Сабчота медицина". Iбилиси.- 1988.-N2.-с. 18. (Совм. с Б.А.Фурсовым, D.Н.Ярошинским, А.I.Совичевым и др.).

21. Исследование ингибиторного действия бисфосфоновых кислот в троцессе кальцификации биоткани. В кн."Химические реактивы и особо ¿истые вещества: научные труды". М. ИРБА.- 1938.-выпуск 50.-е. 33- 68. (Совм. с Т. А. Катков ской, В.В.Зайцевым и др.).

22. Значение антипириновой пробы в. оценке детоксикационной функции печени у больным хроническим гепатитом и циррозом печени. S сб."Функциональная диагностика и эффективность лечения заболвва-!ий". Ви льнюс. - 1 988. - с . 357-350. (Совм. с С.С.Катаевым и О.В.Голова-ювоЛ) .

23. Эффективность ингибирования кальциноза ксенопротеэов пикированными дифосфонатами. Материалы III Всесоюзного совещания по :имии и применение комплексонов и комплексонатов металлов. Челя-1инск. - 1 988. - с. 264. (Совм. с Б.А.Фурсовым, В.В.Зайцевым, И. С. Алфе-ггвтга тг згр. ) .

24. Профилактика кальцификации биопротеэов клапанов сердца с омощьп дифосфонатов "Амок" и "Ксидифон". Материалы III Всесоюэно-о совещания по химии и применение комплексонов и комплексонатов еталлов. Чв л ябинск. - 1 988. - с. 205. (Совм. с Б.А.Фурсовым, В.В.Эвйце-ым, Т.А.Матковской и др.).

25. Перспективы дальнейшего развития проблемы биопротезирова-ия клапанов сердца. "Вестник АМН СССР".- 1988. -N2.-с.56-60. (Совм.

Г. И. Цукерманом, Б.А.Фурсовым, В.А.Быковой и др.).

26. Способ подготовки сосудистых ксенопротеэов к транспланта-ии. Патент СССР N 182Э177. (Совм. с Б.А.Фурсовым, Н. В.Михалиным, .В.Зайцевым и др.).

27. Способ подготовки сосудистых ксенопротеэов к транспланта-ии. Патент СССР N 1823179. ( Совм. с Б.А.Фурсовым, В.А.Дятловым, .В. Зайцевым и др.).

28. 0-этил-0,0-ди-(и-оксодецил) фосфат в качестве ингибитора инерализации биологических протезов для сердечно-сосудистой хи-ургии и 0-этил-0,0-ди-(и-ундециленил) фосфат в качестве промежу-очного продукта для его получения. Авторское свидетельство

1510314, ДСП.- 1989. (Совм. с D. Г. Гололововым, В. А. Дятловым, Г. Н. лонимским и др.).

29. Влияние способов химической обработки на кальцификацию, эмосовместимые и иммуногенные свойства ксеноперикардиальных био-ротезов клапанов сердца. Доклады АН УССР.-1989.-серия Б.-с.56-58. :овм. с В. Г. Гололововым, Б.А.Фурсовым, В.В.Зайцевым и др.).

30. Экспериментальное обоснование метода определения общего зчвночного кровотока. В сб."Экспериментальная сердечнко-сосудис-зя хирургия". М.- 1989.-с. 7 1-74. (Совм. с Л.И.Логиновой и А.И.Манным) .

31. Изучение патогенеза кальциноза биопротеэов клапанов сердца

условиях эксперимента на животных. В сб. "Экспериментальная серено- сосудистая хирургия". М.- 1989.-с. 77- 79. (Совм. с Б.А.Фурсо-<м, В.В.Зайцевым, Л. В. Зайцевым) .

32. Изучений кальцификации биоткани ксенопротеэов клапанов >рдца в эксперименте. В сб."Экспериментальная сердечно-сосудистая фургия". М. - 1989 .-с. 80-83. (Совм. с Б. А. Фурсовым, В.В.Зайцевым,

В.Зайцевым и др.).

33. Биохимическая оценка ферментативного разрушения и защиты юткани ксенопротеэов клапанов сердца. В св. "Экспериментальная

сердечно-сосудистая хирургия".-1989.-с.83-85.

34. Перспективы использования биологических тканей в сердечно-сосудистой хирургии. Грудная хирургия. - 1989 .-N. 6. - с. 80-81 . (Совм. с Б.А.Фурсовым, В.А.Дятловый, В.А.Быковой и др.).

35. Новый подход к решению проблемы кальцификации и инфицирования биологических протезов. Материалы 14 съезда ВХО им. Менделеева по обцей и прикладной химии. М. "Наука".- 1989.-т. 1.-с.423. (Совм. с С.Г.ГолоЛобовым, Б.А.Фурсовым, В.А.Дятловым и др.).

36. Экспериментальная апробация биопротезов сосудов на основе артерий алло- и ксекогенного происхождения. В сб."Экспериментальная сердечно-сосудистая хирургия". M.- 1989.-с. 74- 77. (Совм. с Б.А.Фурсовым, И.И.Скопиным, В.В.Зайцевым и др.).

37. Экспериментальное изучение эффективности медикаментозной профилактики кальциноэа биопротезов клапанов сердца дифосфоновыми соединениями АМОК и КСИДИФОН. В'кн."Новый хелатируюций агент- Кси-дифон в фармакологии, токсикологии и терапии". M. - 1990.-с. 45-50. (Совм. с Б.А!Фурсовым, В.В.Зайцевым, Т.А.Матковской и др.).

38. Способ химической стабилизации протезов клапанов сердца серии "Бионике". Медицинская техника.- 1990.-с.30-33. (Совм. с Б.А. Фурсовым, В.В.Зайцевым, Л.В.Зайцевым и др.).

39. Биопротезирование клапанов- сердца (отдалённые результаты и перспективы). Материалы I Всесоюзного съезда сердечно-сосудистых хирургов. М. - 1990. - т. 2. с. 400-408. (совм. с Б.А.Фурсовым, В.В.Зайцевым, В.А.Быковой и др.).

40. Факторы развития кальциноза биопротезов клапанов сердца. Материалы I Вс-еоо»эного еггзда сердечно—сосудистых хирургов. М. 1990.-с.413-415. (Совм. с Б.А.Фурсовым, В.В.Зайцевым).

41. Способ определения печёночного кровотока у кардиохирурги-ческих больных. Авторское свидетельство N 1692552.-1991. (Совм. с

A.Л.Дивониным, Л.И.Логиновой, А. И. Мариным) .

42. The effect of colla ln blonaterial calcification: Expérimenta with m vivo diffusion chambers.' J. of biomédical Materials Research, v.25. 2,p.277-280. (Совм. с И.Б.Рязановой, В.В.Зайцевым, С.Д.Васиным и др.).

43. Способ обработки биопротезов. Авторское свидетельство N 1660148.-1991. (Совм. с Б.А.Фурсовым, D.Г.Гололобовым, С.М.Чайковской и др. ) .

44. Биопротезы клапанов сердца серии "БИ0НИКС". 6-летний опыт замещения митрального клапана. Грудная сердечно-сосудистая хирургия. -1991.-N 10.-е. 11-16. (Совм. с Б.А.Фурсовым, В.В.Зайцевым,

B.А.Быковой и др.).

45. Способ определения печёночного кровотока у кардиохирурги-ческик вольных. Бюллетень Госкомитета по делам изобретений и открытий. - 199 1 .- N 43.-с.35. (Совм. с А.Л.Дивониным, Л.И.Логиновой,

A. И.Мариным).

46. Способ обработки биопротезов клапанов сердца. Авторское свидетельство N 1651890.-1991. (Совм. с Б. А. Фурсовым, В.И.Севастьяновым, Е. Г. Гололобовым и др.).

47. Способ обработки биопротезов. Бюллетень Госкомитета по делам изобретений и открытий.-1991.-N 20.-е.16. (Совм. с Б.А.Фурсовым, 0.Г.Гололобовым, С.М.Чайковской и др.).

48. Способ обработки биопротезов клапанов сердца. Бюллетень Госкомитета по делам изобретений и открытий.-1991N 20.-е. 16. (Совм. с Б.А.Фурсовым, В.И.Севастьяновым, D. Г. Гололобовым и др.).

49. Horaonal résiliation of Са/Р ne tabol lsrn ln patients with dlstrophlc calclnosls. IX International Congress of Endocr 1 no 1 osry. Abstract P.06.01.058. Nice 1992, p.£37. (Совм. с Б.А.Фурсовым,

B.В.Зайцевым, И. И. Дедовым) .

Приложение 1 СПИСОК ДОПУЩЕННЫХ СОКРАЩЕНИЙ И РАЗМЕРНОСТЕЙ

ААПП . - Аланинаминопептидаза (Е/Л)

АЛТ - Аланиновая аминотрансфераза (Е/Л)

АМОК - 3-метил-1-гидроксипропилиденбис-

фосфоновая кислота

АПДФ - 3-амино-1-гидроксипропан-1,1-

дифосфоновая кислота

АСА - Арилсульфатаза А (Е/Л)

ГА - Гидроксиапатит

0-Гл - 0-Глюкуронидаза (Е/Л)

т-гт - Г-Глютамилтрансфераза (Е/Л)

ддс - Додецилсульфат натрия

ИДФ - Иминометилдифоефонввая -кислота

ИТФ - Иминобис-2-этилиден-1,1-ди-

фосфоновая кислота

ИК - Искусственное кровообращение

КТ - Кальцитонин (пг/мл)

ЛАА - Лейцилариламидаза (Е/Л)

НК - Недостаточность кровообращения

25-ОНДз - 25-оксихолекальциферол (нг/мл)

1.25-(ОН)гДз - 1.25-диоксихолекальциферол

24.25-(ОН)гДз - 24.25-диоксихолекальциферол

ПГ - Паратгормон (нг/мл)

ппс - Приобретенные пороки сердца

Р - Неорганический фосфор (мМ/л)

са - Общий кальций (мМ/л)

Са++ - Ионизированный кальций (мМ/л)

СИ - Сердечный индекс (л/мин/м2)

Т1/2 - Период полувыведения

Ф.кл. - Функциональный класс заболевания

хэ - Холинэстераза (Е/Л)

ЩФ - Щелочная фосфатаза (Е/Л)

ЭДТА - Этилендиаминтетрауксусная кислота

ЭР - Эндоплазматический ретикулум

* - Изобретения с грифом "ДСП" или "секретно"

Таблица 1

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ ППС ПО КЛИНИЧЕСКИМ ПРИЗНАКАМ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИССЛЕДУЕМЫХ ПАРАМЕТРОВ.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ И

Са

Са++

ПГ

КТ

АЛЬДО-СТЕРОН

КОРТИ- 25-ОНДз Т 1/2 АЛЬБУ-ЗОЛ АНТИПИРИНА МИН

КАЛЬЦИНОЗ КЛАПАНОВ СЕРДЦА

КЛИНИЧЕСКИЕ -ГРУППЫ - + - + - + - + - + - + - + - + - + - +

ВИД ПОТОКА

Аи'КГАЛЬНЫь 10 10 В в У 10 10 К) Н п 10 ю 10 10 10 10 12 14 19 17

МИТРАЛЬНЫЕ 34 20 1Ь 13 32 22 34 16 32 20 ■м 20 34 20 34 20 27 22 34 36

МИТРАЛЪНО- Н Н 3 4 7 В 8 В В 6 В В В В В В 12 1У 1Ь 1В

ТРИКУОШДАЛЬНЫЕ

СТАДИЯ НК

0-1 Н 4 4 4 V Ь Н 4 Н 2 н 4 Н 4 Н 4 И 6 4 7

ПА Ж 32 19 16 зь 32 зн 2Н :ч4 2Н зн 32 ЗН 32 38 32 28 29 43 Я8

11Б-111 6 2 1 3 ь 2 н 2 6 2 н 2 Н 2 6 2 21 21 22 26

ФУНКЦИОНАЛЬНЫМ Ю1АС1;

ш ■ 24 16 в 7 18 24 16 22 15 24 16 24 16 24 16 14 11 25 24

1У 28 22 1Ь 2Ь •¿ь 22 28 1« 26 17 2Ь 22 28 22 28 22 37 44 44 47

сл со

ХЭ ПРЕАЛЬ- ГАЛАК- Д-ГЛЮКА- ЖЕЛЧНЫЕ ЩФ БУМИН ТОЗНАЯ РОВАЯ К-ТЫ ПРОБА К-ТА

Г-ГТ

НАГ ФАГОЦИТОЗ

ВИД ПОРОКА

АОИГАЛЬНЫЕ 24 25 4 3 6 4 5 5 6 4 39 25 24 31 10 9 6 9

МИТРАЛЬНЫЕ ЬО 52 18 12 23 13 22 15 21 18 65 62 67 53 .16 20 12 14

МИТРАЛЬНО- 24 26 4 3 10 7 10 10 11 10 29 63 24 28 10 12 5 4

ТРИКУСГОДАЛЬНЫЕ

СТАДИЯ НК

0-1 10 12 4 3 4 1 1 3 6 3 13 14 10 2 4 5 4 3

ПА 59 60 16 10 22 12 19 12 17 И 70 83 71 72 22 23 16 19

ПБ-1П .29 31 6 5 13 11 17 15 15 18 33 43 34 38 10 13 3 5

ФУНКЦИОНАЛЬНЫМ КЛАСС

"ТГГ 30 32 5 4 13 8 9 10 13 11 40 34 39 33 5 11 9 11

IV 68 71 21 14 26 16 28 20 25 21 76 106 77 79 31 30 14 16

СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ И ФОСФОРА СЫВОРОТКИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±Бх).

ОБСЛЕДОВАННЫЕ КАЛЬЦИЙ (мМ/л) ФОСФОР

NN ГРУППЫ ----------------------------------------------(мМ/Л)

ОБЩИЙ ИОНИЗИРОВАННЫЙ

1 БОЛЬНЫЕ ППС

(В ЦЕЛОМ ПО ГРУППЕ) 2.54±0.01 1.22Ю.01 1.20Ю.02

П=90 71=47 п=88

2 БОЛЬНЫЕ ППС

С КАЛЬЦИНОЗОМ 2.52Ю.02 1.21Ю.01 1.22±0.04

КЛАПАНОВ П=38^ П=23 П=40

3 БОЛЬНЫЕ ППС

БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 2.57±0.03 1.23±0.02 1.19±0.03

КЛАПАНОВ П=52 П=24 п=48

4 ЗДОРОВЫЕ 2.54±0.04 1.22±0.02 1.00±0.04

П=26 п=2б п=30

КРИТЕРИЙ ДОСТОВЕРНОСТИ

Р1-4<0.001 Р2-4<0.001 Рз-4<0.'001

таолица 3

СОДЕРЖАНИЕ ГОРМОНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±3х)

ГОРМОНЫ ЧИСЛО пг кт

NN ■ НАБЛЮДЕ-

ГР1ТШЫ НИИ (нг/мл) (пг/мл)

А|1ЬДОСТЕРОН КОРТИЗОЛ 25-ОНДз (пг/мл) (нмоль/л) (нг/мл)

1 ЗДОРОВЫЕ 20 1.22+0.1 55.0+5.0 153.3±11.0 280.1+13.0 30.5+3.2

2 БОЛЬНЫЕ ППС 90 1.26+0.03 72.9±4.6 238.8+15.3 292.7+6.8 50.3+2.3 СТЕПЕНЬ КАЛЬЦИНОЗА

3 0 52 1.32+0.04 66.9±4.6 201.8+18.7 282.4+7.9 45.6±2.8

4 I 12 1.19+0.07 49.0±8.4 £53.0*45.7 310.0±15.6 51.9±6.6

5 II 14 1.24±0.03 90.4+13.1 221.1+18.5 294.1±18.1 57.8±5.6

6 III 12 1.06±0.06 110.7±20.4 Л06.2+42.5 317.0±27.0 65.3±7.4

7 КАЛЬЦИНОЗ ПО ГРУШЕ 38 1.17±0.03 87.2±9.6 ¿89.5±23.5 306.2±11.5 56.8±3.7

сл Ol

ИСТЕРИЙ ДОСТОВЕРНОСТИ

Рз-б<0.001

р3-7<0.01

Р5-б<0.05

Pl_2<0.001

Р}_5<0.02

Pi-6<0.001

Pi-7<0.01

Рз-6<0.05

Pl-2<0.001

Pl-3<0.05

Pi-5<0.001

Pl-6<0.001

Pl-7<0.001

p3-6<0.001

Pl-2<0.001

Pl-3<0.001

P}-4<0.001

Pl-5<0.001

Pl-6<0.001

Pl-7<0.001

P3-6<0.02

Рз-7<0.02

ПОКАЗАТЕЛИ ГОРМОНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА ОДНОРОДНЫХ ГРУШ ПО НК ПА.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ (Х±Бх)

ИССЛЕДУЕМЫЕ --------------------------------------------------------------КРИТЕРИЙ

NN СОСТОЯНИЕ КЛАПАНОВ СЕРДЦА ДОСТОВЕР-

ПОКАЗАТЕЛИ --------------------------------------------------------------НОСТИ

КАЛЬЦИНОЗ БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА ( Р )

1 ПАРАТГОРМОН 1,20±0,04 1.30Ю04

нг/мл п=28 п=38

2 КАЛЬЦИТОНИН 89.70±10.6 67.00+5.67

пг/мл П=28 п=34

3 АЛЬДОСТЕРОН . 310.00±25.9 208.70±20.1 <0.001

пг/мл П=32 п=38

4 К0РТИ30Л . 309.50±13.6 298.30+8.85 ' нМ/л п=34 П=38

5 25-ОНДз . 62.71±3.95 46.97±3.52 <0.001

нг/мл п=32 п=34

Таблица 5

ПОКАЗАТЕЛИ КОРРЕЛЯЦИОННОГО АНАЛИЗА СОДЕРЖАНИЯ ФОСФОРА И ГОРМОНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА.

ИССЛЕДУЕШЕ-Р 25-ОНДз ПГ "КГ АЙЬДО- КОРТИЗОЛ

ПОКАЗАТЕЛИ СТЕРОН

Р г=-0.466 п=44 Г=-0.300 П=48

р<0.002 р<0.05 1

25-ОНДз г=+0.537 Г=+0.521 ]

- - П=46 П=44 :

р<0.001 р<0.001

ПГ г=+0.570 п=32 р<0.01 - -

КТ г=-0.401 г=-0.554 г=+0.611

п=30 п=30 П=46

р<0.05 р<0.002 р<0.001 '

АЛЬДО- Г=+0.377

СТЕРОН - - - п=48

р<0.01

КОРТИ- г=+0.443

ЗОЛ • п=30 р<0.05

КАЛЬЦИНОЗ

ПОКАЗАТЕЛЬ БИОТРАНОЮРМАЦИИ АНТИПИРИНА У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА. ВИДА ПОРОКА, НК И ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ (Х±Бх).

NN ОБСЛЕДОВАННЫЕ ЧИСЛО Т1/2 АНТИПИРИНА КРИТЕРИЙ ГРУППЫ НАБЛЮДЕНИЙ (час.) ДОСТОВЕРНОСТИ

ЗДОРОВЫЕ БОЛЬНЫЕ ППС

49 106

9.9Ю.32 17. НО. 8

Pl-2<0.001

СТЕПЕНЬ КАЛЬЦИНОЗА

3 0 51 19.3И.09 Pl-3 <0.001

4 I 11 1б.6±2.08 Pl-4 <0.001

5 II 13 14.9И.88 Pl_5 <0.01

б III 31 13.5Ю.63 Pl-6 <0.001

7 КАЛЬЦИНОЗ В ЦЕЛОМ Pl-7 <0.001

ПО ГРУППЕ 55 15.211.05 P3-5 <0.05

ВИД ПОРОКА Рз-6 <0.01

i3.5H.13 Рз-7 <0.01

8 АОРТАЛЬНЫЕ 26

9 МИТРАЛЬНЫЕ 49 16.5Ю.84 P8-9 <0.05

Ю МИТРАЛЬНО- Рэ-Ю<0.001

ТРИКУСПИДАЛЬНЫЕ 31 20.0И.61

СТАДИЯ НК

.1 0-1 8 11.011.37 Рц-12<0.01

.2 ПА 56 15.710.72 Рц-13<0.001

.3 11Б-111 42 19.611.28 Pi2-13<0.02

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ

КЛАСС

4 III 25 16.0И.18

5 IY 81 17.012.3

ПОКАЗАТЕЛЬ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СТАТУСА ЭНДОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО РЕТИ-КУЛУМА ГЕПАТОЦИТОВ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ КАЛЫЩФИКАЦИИ КЛАПАНОВ СЕРДЦА ПРИ НОЗОЛОГИЧЕСКИХ ФОРМАХ ПОРОКОВ, СТАДИЙ НК И ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ (Х±Бх).

КЛИНИЧЕСКИЕ ■ ГРУППЫ Т1/2 АНТИПИРИНА (час) КРИТЕРИЙ ДОСТОВЕР НОСТИ ( Р )

NN СОСТОЯНИЕ КЛАПАНОВ СЕРДЦА

КАЛЬЦИНОЗ БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА

1 ВИД ПОРОКА

АОРТАЛЬНЫЕ МИТРАЛЬНЫЕ МИТРАЛЬНО-ТРИКУСГВДАЛЬНЫЕ 11.65±0.95 п=14 14.85±1.18 П=22 16.74±1.37 П=19 17.87±2.3 П=6 17.42±1.11 П=27 23.48±3.15 П=12 < 0.05 < 0.05

2 СТАДИЯ НК

3 ПА 11Б-111 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ КЛАСС 13.7±0.81 п=28 17.07±1.34 П=21 17.5±1.12 п=27 22.1±2.06 п=21 < 0.01 < 0.05

III IY 13.38Ü.1 п=12 15.04±0.84 п=44 17.87±1.81 п=13 19.88±1.35 п=37 < 0.05 < 0.00

Показатель Т1/2 антипирина у здоровых и больных ППС в зависимости от степени кальциноза клапанов сердца (Х±8х).

час

п-51 п-11

п-13 п-31 П"49

Рис. 1

ИНДИВИДУАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ Т1/2 АНТИПИРИНА БОЛЬНЫХ П П С В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТАДИИ НК

Час. 50 Ч

40

30 -

20 -

10 -

О С КАЛЬЦИНОЗОМ КЛАПАНА • БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНА

оо о

оо

о

л °

о

••••

с§о

ТЛо

о©

. и

88°

• о°о

о°о

ООО

° Граню норм

о" о

0-1

ПА

ПБ-Ш

Рис.2

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЯ Т1/2 АНТИПИРИНА У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ

Кол-во лиц 12

Рис.3

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЯ Т1/2 АНТИПИРИНА У БОЛЬНЫХ

ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАРУШЕНИЯ КРОВООБРАЩЕНИЯ .ол-во лиц 12

СТАДИЯ НК

2А 2Б-3

I I I I ( I I I I I 1 г-б в 10 12 И 18 1В 20 22 24 2в 28 30 40 цас

Рис.4

ПОКАЗАТЕЛИ БЕЛКОВО-СИНТЕТИЧЕСКОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЫШНОЗА КЛАПАНОВ (Х±3х)

NN ОБСЛЕДОВАННЫЕ ГРУППЫ ПРЕАЛЬБУШН (МГХ) АЛЬБУМИН (Г/Л) ХЭ (Е/Л)

1 ЗДОРОВЫЕ 36.27Ю.89 46.9+0.9 4348.0±143.

п=45 п=43 П=46

БОЛЬНЫЕ ППС:

2 КАЛЬЦИНОЗ КЛАПАНОВ 38.68И.99 44.5±0.9 3975.6±143.

п=18 П=71 П=103

3 БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА

КЛАПАНОВ 26.9±1.53 41.7±0.7 3431.9193.5

П=26 п=69 П=98

КРИТЕРИЙ ДОСТОВЕРНОСТИ Р1-3<0.001 Р2-3<0.001 Р1_3<0.05 Р2-3<0.01 Р1-з<о.оо: Рг-з<о.оо:

, Таблица 9

ПОКАЗАТЕЛИ БЕЛКОВО-СИНТЕТИЧЕСКОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ БОЛЬНЫХ ПИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЬЦИФИКАЦИИ КЛАПАНОВ СЕРДЦА ПРИ ОДНОРОДМ ГРУППАХ НЕДОСТАТОЧНОСТИ КРОВООБРАЩЕНИЯ (Х±Бх).

NN

ИССЛЕДУ-МЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ

СТАДИЯ НК

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ СОСТОЯНИЕ КЛАПАНОВ СЕРДЦА

КРИТЕР ДОСТОВ

--------------------------- ноет

КАЛЬЦИНОЗ БЕЗ КАЛЫШНОЗА (Р)

1 ХЭ (Е/Л) ПА 4067.01178.1 п=60 , 3597.9±132.3 п=59 < 0.0

11Б-111 3818.41234.3 п=31 3106.7И53.6 п=29 < 0.0

2 . АЛЬБУМИН ПА 44.2±1.1 41.2Ю.8 < 0.0

(г/л) п=38 П=43

11Б-111 43.7+1.7 п=26 40,2±1.5 п=22

Таблица 10

ПОКАЗАТЕЛИ ГАЛАКТ03Н0Й ПРОБЫ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±&.

N (ШОТВАННЫЕ ЧИСЛО СУТОЧНАЯ ЙКСКРШЯ КРИТЕРИЙ

ГРУППЫ НАБЛЮДЕНИЙ ГАЛАКТОЗЫ (г/сутки) ДОСТОВЕРНО

1 ЗДОРОВЫЕ 19 0.25+0.07

БОЛЬНЫЕ ППС:

2 КАЛЬЦИНОЗ КЛА- 24 0. ЗЗЮ.06 Р1-3<0.С

ПАНОВ СЕРДЦА

3 БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 39 0.78Ю. 20 Р2-3<0.С

КЛАПАНОВ СЕРДЦА

СУТОЧНАЯ ЭКСКРЕЦИЯ ГЛЮКАРОВОЙ КИСЛОТЫ У ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±Бх).

МП КЛИНИЧЕСКИЕ ЧИСЛО ГЛЮКАРОБАЯ КИСЛОТА КРИТЕРИЙ

ГРУППЫ НАБЛЮДЕНИЙ (мкмоль/сутки) ДОСТОВЕРНОСТИ

1 ЗДОРОВЫЕ 22 31.9± 3.8 Р1-3<0.05

БОЛЬНЫЕ ППС:

2 КАЛЬЦИНОЗ КЛА- 30 25.0± 5.6 Р2-3<0.01

ПАНОВ СЕРДЦА

3 БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 37 60.4±12.0

КЛАПАНОВ СЕРДЦА

Таблица 12

БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИНДУКТИВНОЙ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ППС С ГИЛЕРБИЛИРУБИНЕМИЕЙ НЕПРЯМОГО ТИПА (п=5, Х±5х).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ КРИТЕРИЙ

N БИОХИМИЧЕСКИЕ ------------------------------------------------ДОСТОВЕРНОСТИ -

ПАРАМЕТРЫ В ' ПОСЛЕ МЕТОДОМ ПАРНЫХ

ИСХОДЕ ТЕРАПИИ СРАВНЕНИЙ

БИЛИРУБИН СЫВОРОТКИ

КРОВИ:ОБЩИЙ (мкМ/л) 48, .0±6.8 16.8±1.3 Р<0.001

ПРЯМОЙ 10, .2±1.1 5.1+1.4 Р<0.01

НЕПРЯМОЙ 37, .8+6.2 11.7+1.4 Р<0.001

Т1/2 АНТИПИРИНА

(час) 24. .2+2.1 11.9+1.6 Р<0.001

ГЛЮКАРОВАЯ КИСЛОТА

(мкмоль/сутки) 32. ,0+21.8 117.2±34.4 Р<0.001

Т-ГТ СЫВ-КИ КРОВИ

(Е/Л) 42. 3+15.0 116.8±34.3 Р<0.001

Таблица 13.

СОДЕРЖАНИЕ ОБЩИХ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ И ЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±3х).

ОБСЛЕДОВАННЫЕ ЧИСЛО ИССЛЕДУЕМЫЙ КРИТЕРИЙ

ГРУППЫ НАБЛЮДЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЬ (мкМ/л) ДОСТОВЕРНОСТИ

ЗДОРОВЫЕ 58 2.7+0.2 Ра-2<0.001 БОЛЬНЫЕ ППС: -с

КАЛЬЦИНОЗ КЛА- 32 12.0±0.9 Р1-3<0.001 ПАНОВ СЕРДЦА

БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 38 8.7±0.7 Р2-з<0.001 кяапд.нпй прртшд —

АКТИВНОСТЬ ЩЕЛОЧНОЙ 40СФАТАЗЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЬЦИФИКАЦИИ КЛАПАНОВ СЕРДЦА ПРИ ОДНОТИПНЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ (Х+Бх).

ОБСЛЕДОВАННЫЕ NN ГРУППЫ

ИССЛЕДУЕМЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ (Е/Л) КРИТЕРИЙ СОСТОЯНИЕ КЛАПАНОВ СЕРДЦА ^ДОСТОВЕРНОСТИ КАЛЬЦИНОЗ БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА ( Р)

ВИД ПОРОКА

1 АОРТАЛЬНЫЕ

2 МИТРАЛЬНЫЕ .

3 МИТРАЛЬНО-ТРИКУСПИДАЛЬНЫЕ

СТАДИЯ НК

4 II-A

5 П-Б-Ш

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ КЛАСС

6 III

7 IY

167.2±7.9

П=39 168.6±9.5 п=65 184.5*14.1 п=36

178.5±6.4 п=83 199.7±11.1 п=43

171.8±14.3

п=34 190.0±6.2 П=106

140.2±9.5

П=25 169.3±9.4

П=62 175.8±14.0 11=29

130.3±6.2 п=70 156.6±11.1 п=33

126.5±6.0 п=40 145.1±7.6 Г) =76

< 0.05

< 0.001 < 0.01

<.0.01 < 0.001

ПОКАЗАТЕЛИ КОРРЕЛЯЦИОННОГО АНАЛИЗА АКТИВНОСТИ МЕМБРАННЫХ ФЕРМЕНТОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ПРЕД И ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЙ ДИНАМИКЕ.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ФЕРМЕНТЫ г

ГТ

ЩФ

ААПП

ЛАА

г - ГТ

ЩФ

ААПП

ЛАА

г=+0.721 п=813 р<0.001

г=+0.714 П=235 р<0.001

Г=+0.582 г=+0.760

П=229 П=210,

р<0.001 р<0.001

Г=+0.835 г=+0.689

П=44 п=44

р<0.001 р<0.001

Г=+0.802 Г=+0.696 г=+0.944

11=44 п=44 П=44

р<0.001 р<0.001 р<0.001

В И С ХОД

г=+0.742 П=209 р<0.001

г-+0.756

п=198

р<0.001

г=+0.876

П=203

р<0.001

Д И Н А

И К Е

Таблица 16

АКТИВНОСТЬ МЕМБРАННЫХ ФЕРМЕНТОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х+Бх).

ИССЛЕДУЕМЫЕ ФЕРМЕНТЫ . ПОКАЗАТЕЛИ АКТИВНОСТИ (Е/Л) КРИТЕРИЙ

1 СОСТОЯНИЕ КЛАПАНОВ СЕРДЦА ДОСТОВЕРНОСТИ

КАЛЬЦИНОЗ БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА (Р)

г-гт 58.0±6.5 38.0+2.8 <0.001

п=11б п=115

ААПП 84.0±5.1 69.2±3.8 <0.02

и=ои л

ЛАА 41.5±3.2 30.б±2.0 <0.002

п=30 П=14

АКТИВНОСТЬ Г-ГТ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ВЫРАЖЕННОСТИ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА, ВИДА ПОРОКА, СТАДИИ НК И Ф.КЛ.ЗАБОЛЕВАНИЯ (Х±Бх).

NN ОБСЛЕДОВАННЫЕ ЧИСЛО ИССЛЕДУЕМЫЙ КРИТЕРИЙ

ГРУППЫ НАБЛЮДЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЬ (Е/Л) ДОСТОВЕРНОСТ

1 ЗДОРОВЫЕ 66

2 БОЛЬНЫЕ ППС 227

20.3+1.1 48.4±3.4

Р1-2<0.001

СТЕПЕНЬ КАЛЬЦИНОЗА

3

4

5

6

О Г

II

III

115 24 36 52

38.0±2.8 47.0Ю.5-50.6±7.0 63.1+11.5

Р1-3<0.001 Р1-4<0.001 Р1-5<0.001 Р1-6<0.001

7 КАЛЬЦИНОЗ В ЦЕЛОМ ПО ГРУППЕ

112

58.0±6.5

Р1-7<0.001 Рз-6<0.05

ВИД ПОРОКА

Рз-7<0.01

8 АОРТАЛЬНЫЕ 55 28.9±2.5 Р8-э<0.001

9 МИТРАЛЬНЫЕ 120 44.2±3.6 Р8-ю<0.00 10 МИТРАЛЬНО- 52 66.4+6.8 Рд-ю<0.01

ТРИКУСПИДАЛЬНЫЕ

СТАДИЯ НК

11 12 13

0-1 ПА ПБ-Ш

12 143 72

19.6±3.5 41.6±3.0 89.9122.2

Рц-12<0.0 Рц-13<0.0

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ КЛАСС

14 III 70

15 1У 157

36.1±4.0 54.214,4

Р12-13<0.С Р14-15<0.С

Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови больных ППС в зависимости от кальциноза клапанов (Х+Бх)

Здоровые

п-55 п-116

1 2

Степень

п-28 п-41

Рис.5.

ПОКАЗАТЕЛИ КОРРЕЛЯЦИОННОГО АНАЛИЗА АКТИВНОСТИ МЕМБРАННЫХ ФЕРМЕНТОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА.

ЯЙ5ЛЕОТЕЕ : !

ФЕРМЕНТЫ Г-ГТ ЩФ ААПП ЛАА

. г-ГТ г=+0.395

П=113 - - Б

р<0.001 Е

3

ЩФ Г=+0.608

П=116 - - К

р<0.001 А

Л

ААПП Г=+0.877 г=+0.763 г=+0.873 Ь

П=44 п=14 п=44 Ц

р<0.001 р<0.001 р<0.001 И

ЛАА г=+0.828 г=+0.749 г=+0.922 О

_П=44____п=44 _ _п=44 3

р<0.001 р<0.001" ' р< 0.001 А

КАЛЬЦИНОЗ

Таблица 19

ПОКАЗАТЕЛИ ОБЩЕГО ПЕЧЕНОЧНОГО КРОВОТОКА ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ П В ИСХОДЕ И ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ НА "ОТКРЫТОМ СЕРДЦЕ" В УСЛОВИЯХ И В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НК (Х±Бх).

NN КЛИНИЧЕСКИЕ ЧИСЛО ПЕЧЕНОЧНЫЙ % СНИЖЕНИЯ КРОВОТОКА ГРУППЫ НАБЛЮДЕНИЙ КРОВОТОК ПО СРАВНЕНИЮ

(мл/мин.кг) к норме до операции

1 ЗДОРОВЫЕ 17 33.50±0.86

2 БОЛЬНЫЕ ППС

ДО ОПЕРАЦИИ 28 2б.09±0.99 22

3 —НК IIA 22 27.47±1.08 18

4 —НК IIB 6 20.97±0.94 37

5 БОЛЬНЫЕ ППС

ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ 28 12.66tl.02 51

6 —НК IIA 22 13.93±0.99 49

7 —НК ПБ 6 6.83±1.92 67

КРИТЕРИЙ ДОСТОВЕРНОСТИ

Pl-2<0.001 Pl-3<0.001 Pl-4<0.001

Р2-5<0.001

p3-6<o.ooi p4_7<0.001

Е/Л 100 ■

УРОВЕНЬ АКТИВНОСТИ ЛГ-ГТ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА ПРИ ОДНОТИПНЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ

80 -

во -

40

20

ВИД ПОРОКА

-58.0-

32.5 51

^ГАЛЬЕ^ГЕ МИ^АЛЬ^Е

¡—1 - без кальциноэа щ

МИТРА^^О-Т^КУСП. - кальциноэ

п=71 2-Ап=72 п=36

кальциноэа дв - кальциноэ * - ДОСТОВЕРНЫЕ РАЗЛИЧИЯ Рис.6.

П/О ДИНАМИКА МЕМБРАННЫХ ФЕРМЕНТОВ В % К ИСХОДУ И БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ППС

% 250

200

150

100

— . -ГГ

-+- • [Дф

. ААПП

-е- ЛАА

2

Недели

Рис.7а

П/0 ДИНАМИКА у-гт СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ппс в

ЗАВИСИМОСТИ ОТ КЛИНИУЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ЗАБОЛЕВАНИЯ ( в/о к исходу )

Ркс.ва

%

Рис.86

%

ПОКАЗАТЕЛИ Т1/2 АНТИПИРИНА БОЛЬНЫХ ППС В ИСХОДЕ И В П/О ДИНАМИКЕ (Х±вх)

$ п-81 п-36 п-11 п-38 п-12

Рис.9

СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ В ОБРАЗЦАХ КСЕНОПЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА, ИМПЛАНТИРОВАННЫХ КРОЛИКАМ ПОДКОЖНО И В ДИФФУЗИОННЫХ КАМЕРАХ (Х±Бх).

Ш УСЛОВИЯ ИМПЛАНТАЦИИ И

ИССЛЕДУЕМЫЕ ГРУППЫ

-ПЕРИОД ИМПЯАНТАЦИИ_(В НЕДЕЛЯХ)

2 4 8

СОДЕРЖАНИЕ Са (мкг/мг веса сухой ткани)

1 (КОНТРОЛЬ)

В КАМЕРЕ 5.1±0.9 16.5±4,4 45.7121.2

П=12 П=4 П=8

ВНЕ КАМЕРЫ ■ 6.2±1.2 28.2±2.3 72.6+44.2

П=12 п=4 П=8

(СаС12) 36.8+16.С

В КАМЕРЕ 7.5И.9 13.0±4.0

П=12 П=4 п=8

ВНЕ КАМЕРЫ 20.3+4.4 41.9±24.4 176.8174.:

П=12 П=6 П=6

(ВИТАМИН Д)

В КАМЕРЕ 15.814.9 46.715.5 116.0±69.С

п=12 П=6 П=6

ВНЕ КАМЕРЫ 33.8И5.3 77.1±25.1 437.4162."/

п=12 п=6 П=6

Таблица 21

АКТИВНОСТЬ ЛИЗОСОМАЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ В БИОЖИДКОСТИ ДИ4ФУЗИ0НН! КАМЕР В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ДЛИТЕЛЬНОСТИ ИМПЛАНТАЦИИ (Е/Л, Х±бх

ИССЛЕДУЕМЫЕ ЛИЗОСОМАЛЬНЫЕ ПЕРИОД ИМПЛАНТАЦИИ (В НЕДЕЛ NN ГРУППЫ ФЕРМЕНТЫ ------------------------------

П 2 п 4-8

1 КОНТРОЛЬ 3-ГЛ 12 17.2±1.6 11 45.И6

АСА 12 11.011.8 10 60.8И

НАГ 12 4.2Ю.4 10 13.2 ±3

2 СаС1г 0-ГЛ 10 19.311.6 16 48.513

АСА 10 10.113.0 16 72.819

НАГ 10 3.9Ю.2 15 10.411

3 ВИТАМИН Д О-ГЛ 12 20.812.4 15 39.51Е

АСА 12 6.610.9* 12 37.411

НАГ 12 9.211.1* ** 14 21.1+2

* - ДОСТОВЕРНЫЕ ОТЛИЧИЯ ОТ КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЫ

** - ДОСТОВЕРНЫЕ ОТЛЖМЯ ОТ ГРУППЫ С СаС12

УДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ И ФОСФОРА В БИОЖИДКОСТИ ИМПЛАНТИРОВАННЫХ КАПСУЛ СРОКОМ 2-8 НЕДЕЛЬ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА НАГРУЗКИ

m I контр оль п=22

п=27

Г~] з виташш Д п=27

те.10

ЗАВИСИМОСТЬ КАЛЬЦИФИКАЦИИ БИОТКАНИ ОТ ВИДА ДИФОСФО-

АСТВОРА г; /кг per os.

НАТА И СОСТАВА БУФЕРНОГО РАСТВОРА ГЛЮТАРАЛЬДЕГИДА (кролики, 50 иг/кг per os,

50

30 -

ю -

о -

'а ккг/иг сухой ткани

КСЕНЬАОРТАЛ^ный ^^'Н ' ' КСЕНОЛЕРИКАР!

Фосф.буфер Нерез буфер Фосф.буфер Нерез I

фер

[—^ j Контроль

Ксидифон р—-) 3 Амок

ic.И.

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ ДЕЛЬНОЙ КРОВИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±Эх).

NN ОБСЛЕДОВАННЫЕ ГРУППЫ ЧИСЛО НАБЛЮДЕНИЙ ИССЛЕДУЕМЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ (цмоль 02/120 мин.0.1 мл) КРИТЕРЙ ДОСТОВЕРНОС!

1 ЗДОРОВЫЕ 26 130.1±4.6

БОЛЬНЫЕ ППС: -

2 КАЛЬЦИНОЗ 27 153.3±8.3 Р1-2<0.(

3 БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 23 131.2±7.5 Р2-3<0.<

Б-НЫЕ ППС НК НА:

4 КАЛЬЦИНОЗ 19 164.5±9.4

5 БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 16 127.1+8.5 Р4-5<0.1

Таблица 23

АКТИВНОСТЬ И-АЦЕТИЛ-0-Д-ГЛЮКОЗАМИНИДАЗЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ППС В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ КАЛЬЦИНОЗА КЛАПАНОВ СЕРДЦА (Х±Бх).

КРИТЕРИЙ ДОСТОВЕРНОС

NN

ОБСЛЕДОВАННЫЕ ГРУППЫ

ЧИСЛО НАБЛЮДЕНИЙ

ИССЛВДУЕМЬМ ПОКАЗАТЕЛЬ (Е/Л)

1 ЗДОРОВЫЕ 23 БОЛЬНЫЕ ППС:

2 КАЛЬЦИНОЗ КЛА- 41 ПАНОВ СЕРДЦА

3 БЕЗ КАЛЬЦИНОЗА 36 КЛАПАНОВ СЕРДЦА

2.70±0.20

3.60±0.17 3.04±0.14

Р1-2<0.00 Р2-э<0.02

КАЛЬЦИФИКАЦИЯ КСЕНОПЕРИКАРДА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ДОЗЫ ДИФОСФОНАТОВ (крошпси,п=15).

Ca мкг/мг сухой ткани 200

150 -

100 -

50 А

контроль

Ксидифон

Аиок

Q .

контроль

Е-Э -5 иг/кг в/и хх-гибель животных

в 2 иг/кг в/и-СЗ Ю иг/кг в/и

рис. 12

СТЕПЕНЬ КАЛЬЦИФИКАЦИИ КСЕНОПЕРИКАРДА ПРИ В/М

ВВЕДЕНИИ КСИДИФ0НА ИЛИ ЭТИДРОНА (в% к контролю,крысы, 30 суток).

100

80 -

60 -

40

20 -

. п=18 ге=20 1 иг/кг веса

§мг/кг

»16, п-24 веса

ГП КСИДИФОН

.ЭТИДР0Н

Рк"

КОНЦЕНТРАЦИЯ КАЛЬЦИЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ СОБАК ПОСЛЕ ОДНОКРАТНОГО ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ КСЗДИФОНА В ДОЗЕ 5 мг/кг МАССЫ ТЕЛА В ДИНАМИКЕ (Х±Бх).

ИССЛЕДУЕМЫЙ ЧИСЛО ВРЕМЯ ИЗМЕРЕНИЯ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ (мин)

ПОКАЗАТЕЛЬ НАБЛКЬ -----------------------------------------

ДЕНИЙ ИСХОД 3 10 30 60 120 180

КАЛЬЦИЙ (мМ/л) 10 2.35± 2.35± 2.29+ 2.404 2.35+ 2.324 2.43

0.09 0.09 0.1 0.1 0.11 0.12 0.05

Таблица 25

ПОКАЗАТЕЛИ МЕХАНИЧЕСКОЙ ПРОЧНОСТИ КСЕНОПЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ (Х±Бх).

МЕТОД ЧИСЛО СРЕДНЯЯ ТОЛ- РАЗРЫВНОЕ УДЛИНЕНИЕ

ОБРАБОТКИ НАБЛЮДЕ- №НА ОБРАЗЦОВ НАТЯЖЕНИЕ ДО НАЧАЛА НИЙ (см) 5 мах(кгс/см2) РАЗРЫВА

ГЛЮТАРОВЫЙ АЛЬДЕГИД

20 20 20

0.030 0.040 0.051

194+14 180±17 169 ±9

4444 50±3 62±3

ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТ НАТРИЯ

20

0.047

250±9

51+3

ТОСФОСОДЕРЖА-ЩИЙ АЛЬДЕГИД Ai

20

ФОСФОСОДЕРЖА-ЩИЙ АЛЬДЕГИД Аг 20

0.034

0.040

114417

215424

53±3

47+3

РЕКАЛЬЦИФИКАЦИЯ БИОТКАНИ ПОД ВЛИЯНИЕМ ДИФОСФОНАТОВ (в % к исходному содержанию Са. кролики, п=б)

Г~1.1 иг/кг в/и И 5 иг/кг в/и

Рис. 14.

КАЛЬЦИФИКАЦИЯ КСЕНОПЕРИКАРДА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА

ОБРАБОТКИ И СРОКА ИМПЛАНТАЦИИ (крысы, п-10) Са ыкг/мг сухой ткани

лут ар^^це гид —+—гдутар альдегид

сутки

рис.15

ГЕМОСОВМЕСТИМЫЕ СВОЙСТВА ОБРАЗЦОВ КСЕНОПЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ (X±Sx).

NN

ПАРАМЕТРЫ ГЕМОСОВМЕСТИМОСТИ

СПОСОБ ОБРАБОТКИ

ОТНОСИТЕЛЬНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ КОНСТАНТА ИНДУЦИРОВАННС АДГЕЗИИ ТРОМБОЦИТОВ* АКТИВАЦИИ КОМПЛЕМЕНТА»

1 ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД 1.0±0.1 1.0±0.05

2 ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД+ДДС 0.67±0.1 0.65+0.02

3 ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД - 0.48±0.1 +ПОЛИМЕР ДЕКСТРАН

* - Сг-ТРОМБОЦИТЫ КРОЛИКА,СТАТИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ БЕЗ КОНТАКТА С 0; а* - СЫВОРОТКА ЧЕЛОВЕКА,ГЕМОЛИТИЧЕСКИЙ МЕТОД БЕЗ КОНТАКТА С ВОЗДУХОМ, Б-10 см2, ВРЕМЯ ИНКУБАЦИИ 15 мин.

Таблица 27

ПОКАЗАТЕЛИ КАЛЬЦИФИКАЦИИ КСЕНОПЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА В РЕЗУЛЬТАТ ОБРАБОТКИ ФОСФОСОДЕРЖАЩИМИ АЛЬДЕГИДАМИ (КРОЛИКИ, 30 СУТОК ИМПЛАНТАЦИИ)

NN СПОСОБ ЧИСЛО СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ КРИТЕРИЙ

ОБРАБОТКИ НАБЛЮДЕНИЙ мкг/мг ВЕСА СУХОЙ ДОСТОВЕРНС

ТКАНИ (X±Sx)

1 ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД

2 ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД+АI

3 ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД+А2

7 12 12

124.0±3.2 13.05±1.84 11.41±0.64

Pl-2<0.0( Pl-3<0.0

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЛИЯНИЯ ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТА НАТРИЯ НА СТЕПЕНЬ КАЛЬЦИФИКАЦИИ БИОТКАНИ ДО И ПОСЛЕ ОТМЫВКИ В

[—I ДЦС Отиывка в течение 4 суток

Рис. 16.

СОДЕРЖАНИЕ КОМПЛЕКСОНАТА ЦИНКА НА БИОТКАНИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВРЕМЕНИ ОТМЫВКИ В ПОТОКЕ ЖИДКОСТИ (ФВ 0.1М,рН 7.4,п=10)

25

20

кг сухого веса биот кани

Л 11]

£——Ь—к_i |

' 1 у

Рис.17.

МЕСЯЦЫ

ПОКАЗАТЕЛИ КАЛЬЦИФИКАЦИИ КСЕНОПЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОЮ ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ И ДЛИТЕЛЬНОСТИ ИМПЛАНТАЦИИ (Х±Бх).

СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ (МКГ/МГ ВЕСА СУХОЙ БИОТКАШ ■ ДЛИТЕЛЬНОСТЬ ИМПЛАНТАЦИИ п 30 суток п 90 суток

NN

СПОСОБ ОБРАБОТКИ

1 КОНТРОЛЬ

2 ИДФ

3 АЦЦФ

4 ИТФ

34 17 10

119.4±4.7 12.5±1.5 3.8±0.6

28 16 14 11

227.7±15.1 85.2±19.! 30.0±4.3 20.3±7.6

КРИТЕРИЙ ДОСТОВЕРНОСТИ

Р1-2<0.001 Р1-3<0.001 Р2-3<0.001

Р1-2<0.0 Р1-3<0.0 Р1-4<0.0 Р2-3<0.0 Р2-4<0.0

Таблица 29

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВЫРАЖЕННОСТИ КАЛЬЦИНОЗА КСЕНОПЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА ИНГИБИТОРА.

СПОСОБ ОБРАБОТКИ

АЦЦФ ИТФ

ЧИСЛО НАБЛЮДЕНИЙ И 7. РАСПРЕДЕЛЕНИЯ 5 X КАЛЬЦИНОЗ 10 % КАЛЬЦИНОЙ

п 7. п 5

43 9

Таблица 30

ПОКАЗАТЕЛИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ КОЛЛАГЕНАЗЫ НА НАТИВН1 КСЕНОПЕРИКАРД ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ.

Ш СПОСОБ ЧЙСЖ5 НАКОПЛЕНИЕ ОКЙПРоША КРИТЕР

ОБРАБОТКИ НАБЛЮДЕНИЙ (мг/л.час) ДОСТОВЕРН

1 НАТИВНЫЙ ПЕРИКАРД 5 1.15±0.15 Р1-2<0

2 НАТИВНЫЙ ПЕРИКАРД

+АПДФ 6 0.37±0.06 Р1-з<0

3 НАТИВНЫЙ ПЕРИКАРД

+ИТФ 11 0.13±0.02 Р2-3<С

ПОКАЗАТЕЛИ КАЛЬЦИФИКАЦИИ КСЕНОПЕРИКАРДА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ (ДЛИТЕЛЬНОСТЬ ИМПЛАНТАЦИИ 90 СУТОК).

4 СПОСОБ ЧИСЛО СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ КРИТЕРИЙ

ОБРАБОТКИ НАБЛЮДЕНИЙ (МКГ/МГ СУХОЙ ТКАНИ) ДОСТОВЕРНОСТИ

Р1_2<0.001

Р1-3<0.001

Таблица 32

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЯ КОЛЛАГЕНАЗЫ НА КСЕНОПЕРИКАРД ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ (Х±Бх).

СПОСОБ ЧИСЛО НАКОПЛЕНИЕ ОКИПРОЛИНА КРИТЕРИЙ

ОБРАБОТКИ НАБЛЮДЕНИЙ (мг/л.час) ДОСТОВЕРНОСТИ

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД 28 227.7±15.8

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД

+ ЦИНКАТ ЭДТА 17 37.б±Ц.б

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД

+ КУПРИАТ ЭДТА 17 21.2±4.5

НАТИВНЫЙ ПЕРИКАРД

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД + ДДС

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД . + ЦИНКАТ ЭДТА

ГЛЮТАРАЛЬДЕГИД + КУПРИАТ ЭДТА

6 12

1.28±0.07 0.32±0.01

0.0б±0.001

0.05±0.001

и.05*0.001

Ра-2<0.001 Р1-3<0.001

Р1-4<0.001

Ра-Б^.СШ/ Р2-3<0.001

Р2-4<0.001

б

6

б

КАЛЬЦИФИКАЦИЯ КСЕНОНЕРИКАРДА ТЕЛЕНКА В ЗАВИСИМОСТИ

ОТ ВИДА ОБРАБОТКИ ( КРОЛИКИ. 80 СУТОК ИМПЛАНТАЦИИ)

Са цкг/цг сухой ткани.

200

150

100

ГЛЮТАР АЛЬДЕГИД п=3в

ПОЛИМЕР-ДЕКСТРАН п=12

Рир.1В