Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Гормональная функция стероидпродуцирующих желез приматов в постнатальном онтогенезе

О « "

1 о А995

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

На правах рукописи

БУТНЕВ Владимир Юрьевич

ГОРМОНАЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ СТЕРОИДПРОДУЦИРУЮЩИХ ЖЕЛЕЗ ПРИМАТОВ В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

14.00.17— нормальная физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург — 1995

Работа выполнена в Сухумском приматологическом исследовательском Центре экспериментальной медицины (директор— Р. И. Карчаа).

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Н. П. Гончаров

Официальные оппоненты: член-корреспондент РАМН, профессор Н. Н. Василевский доктор медицинских наук, профессор А. М. Зайчик доктор биологических наук, профессор О. Н. Савченко

Ведущая организация: Московский областной научно-исследовательский клинический институт, г. Москва

Защита состоится « » акр-е^л 1995 Г-

в час. на заседании Спецсовета Д001.23.01 НИИЭМ РАМН по адресу: г. Санкт-Петербург, 197022, ул. Академика Павлова, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИЭМ РАМН по адресу: г. Санкт-Петербург, 197022, ул. Академика Павлова, 12.

Автореферат разослан < > / 1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

Л. В. Пучкова

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Одним из актуальных направлений исследований современной биологии и медицины является эндокринология развития.

Это обусловлено как важной роль» эндокринной системы в регуляции и координации различных процессов жизнедеятельности организма, так и постоянным увеличением числа патологий, ассоциированных с нарушением нормального процесса формирования эндокринных функций на ранних стадиях постнатального онтогенеза ( Jay N. et al., 1992, Dichek H.L. et al.,1994, Fraser H.M. et al.,1994)

Как известно, процесс становления эндокринных функций в онтогенезе человека и животных носит сложный комплексный характер. На ранних этапах онтогенеза эндокринная функция периферических желез осуществляется автономно, и лишь на более поздних этапах развития происходит включение регуля-торных механизмов гипоталамо-гипофизарного комплекса. (Мицкевич М.С.,1978).

Параллельно с этим возникают взаимосвязи между различными периферическими звеньями внутренней секреции.

С этой точки зрения особый интерес представляет динамика развития взаимосвязи между стероидсекретирующими железами - надпочечниками и гонадами.

Многочисленные клинические и экспериментальные данные, накопленные к настоящему времени, свидетельствуют об антагонистических взаимоотношениях между системами гипоталамус-гипофиз-гонады и гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников у взрослых особей.

Так, например, в условиях стрессорного воздействия повышение кортизола в крови сопровождалось выраженным подавлением синтеза тестостерона в половых железах приматов (Goncharov N.P. et al.,1979).

Эндогенное введение глюкокортикоидов аналогичным образом приводило к резкому снижению уровня тестостерона в крови (Bambino Т.Н..Hsueh A.J.W.,1981, Welsh Т.Н. et al.,1982), причем ингибирующий эффект глюкокортикоидов осуществлялся как непосредственно на уровне семенников, так и опосредованно через секрецию гонадотропинов передней долей гипофиза (Baldwin D.V.,1979).

Значительное количество работ по изучению функции сте-

роидпродуцирующих желез в постн^тальном онтогенезе приматов можно условно разделить на две большие группы.

Первая группа охватывает неонатальный период, который характеризуется резкими изменениями гормонального баланса, обусловленными адаптацией новорожденного организма к изменившимся условиям окружающей среды после его появления на свет (Бутнев В.Ю. и др.,1935, Loganath F.,1992 и др.).

Вторая и более многочисленная группа работ посвящена перестройке эндокринной системы в период пубертации, которая сопровождается выраженной активацией системы гипоталамус-гипофиз-гонады (Copeland К.С.,1982, Silman В.,1991 и Др. )

Между двумя указанными периодами выделяют так называемую "ювенильную паузу", которая продолжается у человека около 10 лет и характеризуется низким содержанием гонадот-ропинов и половых стероидных гормонов в крови (Gorski R.А.,1990, Grumbach М.М., Kaplan S.L.,1990).

И именно этот период до настоящего времени остается наименее изученным.

Имеющиеся работы сводятся к констатации постоянно низкой функциональной активности системы гипофиз-гонады и наличию так называемого "адренархе" - раннему повышению секреции надпочечниковых андрогенов, которому,по мнению ряда авторов, принадлежит роль пускового механизма в активации функции системы гипоталамус-гипофиз-гонады в период пубертации (Forest M.G. et al.,1975, Leo P.A.,Migeon C.J., 1975, Ducharme J.R. et al.,1976).

Вместе с тем, нашими исследованиями, выполненными на павианах гамадрилах, были обнаружены значительные изменения уровня кортикостероидов на протяжении ювенильной паузы.

Так, в возрасте одного года в крови обезьян обнаружено высокое содержание кортизола, 11-дезоксикортизола и 17-ок-сипрогестерона, которое затем снижается в последующем развитии животных, достигая к трехлетнему возрасту уровня, характерного для взрослых особей, после чего начинается период пубертации с характерным увеличением содержания половых стероидных гормонов и гонадотропинов (Бутнев В.Ю..Гончаров Н.П.,1986).

Возникает вопрос - могут ли эти изменения кортикостеро-

идного баланса иметь отношение к последующему процессу пу-бертацин?

Выяснение этого вопроса требует прежде всего использование адекватной экспериментальной модели.

Оптимальной моделью для изучения вопросов гормональных взаимосвязей в процессе онтогенеза несомненно являются человекообразные обезьяны. Однако, в связи с исключительно высокой стоимостью этих животных и больпими сложностями проведения на них экспериментов, большинство работ по при-патам в этой области выполнено на низших обезьянах, чаще всего - макаках резусах.

Однако, следует учесть, что для этого вида обезьян характерна выраженная сезонность размножения (Азапоу Я.Б.,1971), сопровождающаяся значительными колебаниями уровня половых гормонов на протяжении года (Тавадян Д.С.»Гончаров К.П.,1981).

В связи с этим, при проведении длительных экспериментов на обезьянах этого вида возникают сложности при дифференцировании гормональных сдвигов, вызванных экспериментальным воздействием и обусловленных сезонными изменениями уровня гормонов.

Рядом наших предыдущих исследований,а также данными мировой литературы было показано, что из всех низших обезьян оптимальной моделью для изучения эндокринной системы в процессе онтогенеза являются павианы гамадрилы (Гончаров Н.П. и др.,1977, Соре1апсЗ К.С. et а1.,1981, КаЪ-зиуик1 НогЧе, 1983, Рг1с1тап Е.Р.,РороУа V.N.,1988 и др.)

Таким образом, выаеизложенноа дает нам основание говорить, что проблема адрено-гонадальных взаимодействий в онтогенезе приматов является актуальной и малоизученной.

Детальное изучение этой проблемы на адекватной экспериментальной модели позволит не только дополнить существующие представления об общих закономерностях взаимосвязи отдельных звеньев эндокринной системы, но и получить конкретные данные о характере и направленности нарушений гормонального гомеостаза при различных отклонениях адрено-гонадального равновесия в онтогенезе приматов.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ - изучение в эксперимента на модели приматов (санцы павианов'гамадрилов) механизме:: нейрогормональ-

■ной регуляции надпочечных и половых желез и характера их взаимодействий в постнатальном онтогенезе как в базальных условиях, так и при функциональных нагрузках с использованием АКТГ, кортизола, лгалиберина, чХГ и острого стрессорно-го воздействия.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

- провести сравнительную характеристику эндокринной функции надпочечных и половых желез самцов павианов гамадрилов в различные возрастные периоды раннего постнатального онтогенеза,

- выявить возрастные различия характера взаимосвязи гормональной реакции надпочечников и гонад неполовозрелых самцов павианов гамадрилов различного возраста на острое стрессорное воздействие,

изучить эндокринную функцию стероидпродуцирующих желез неполовозрелых обезьян различного возраста в условиях введения адренокортякотропного гормона,

выявить возрастные различия гормональной реакции половых и надпочечных желез обезьян на введение хорионическо-го гонадотропина,

- исследоьать действие экзогенного гонадотропин-рили-зинг-гормона на функцию адсногипофиза у неполовозрелых животных и возможность влияния на функциональную активность коры надпочечников,

провести параллельное изучение эндокринной функции половых и надпочечных желез самцов павианов гамадрилов в процессе полового созревания,

- исследовать функциональную активность системы гипота-ламус-гипофиэ-гонады у неполовозрелых обезьян в условиях хронического введения глюкокортикоидов,

выяснить влияние длительного введения дегидроэпианд-ростерона неполовозрелым самцам павианов гамадрилов на функцию систем гипофиз-гонады, гипофиз-кора надпочечников и последующий процесс полового созревания.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Научная новизна работы заключается в том, что она является первым фундаментальным исследованием, выполненным с применением адекватной экспериментальной модели, по изучению функциональной взаимосвязи надпочечных и половых желез

в онтогенезе приматов.

Впервые у самцов обезьян выявлены четкие разнонаправленные изменения уровня половых стероидных гормонов и глю-кокортикоидов в период пубертации, сопровождающееся резким снижением кортиэола, что,вероятно,является одним из основных факторов, определяющих изменение адаптационных возможностей организма в данный период разлития.

Впервые получены данные по характеру гормональной реакции неполовозрелых приматов на острое стрессорное воздействие в зависимости от исходного функционального состояния системы гипофиз-кора надпочечников. Показано, что при высокой базальной концентрации кортизола, характерной для обезьян первого года жизни, наблюдалась наиболее выраженная гормональная реакция на стресс в сравнении с другими группами неполовозрелых животных. В то же время пик содержания кортиэола в условиях стресса у годовалых животных наблюдался значительно раньше, чем в последующем возрасте.

Возрастная динамика содержания тестостерона в крови в условиях жесткой иммобилизации претерпевала отчетливые изменения - от выраженного повышения его концентрации у обезьян первого года жизни до достоверного снижения в пре-пубертатном периоде.

Впервые показано, что хроническое введение глюкокорти-коидов неполовозрелым приматам приводит к достоверному повышению уровня андрогенов в крови, что указывает на модулирующую роль глюкокортикоидов в поддержании андрогенного баланса организма.

Выявлены высокие функциональные резервы аденогипофиза и семенников неполовозрелых самцов павианов гамадрилов. Установленный факт позволил сделать вывод, что ни аденогипофиз, ни семенники не могут являться лимитирующими звеньями в инициации процесса полового созревания приматов.

Установлено развитие феномена десонситизации гипофиза неполовозрелых приматов в условиях длительного введения лю-либорина. Обнаруженный феномен может являться причиной отсутствия эффекта при применении данного препарата и его производных для лечения задержки полового созревания.

Впервые получены принципиально новые данные о длительном влиянии экзогенного дегидроэпиандсстерона на эндокрин-

ную систему неполовозрелых обезьян, которое подразделяется на непосредственное и отсроченное действие. Непосредственное влияние дегидроэпиандростерона проявляется в ингибиро-ванин продукции тестостерона в период введения препарата. Отсроченное действие реализуется через 1-2 года после окончания введения дегидроэпиандростерона и проявляется в значительно более выраженной активации синтеза тестостерона в период пубертации.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ Результаты работы вносят существенный теоретический вклад в изучение природы адреногонадальных взаимодействий в онтогенезе приматов. Вместе с тем, экспериментальные данные позволяют с минимальной коррекцией экстраполировать их на организм человека, поскольку получены на одном из биологически ближайших к человеку видов животных.

Во взаимодействии гормоноь коры надпочечников и половых желез процесс пубертации является критическим периодом, на протяжении которого характер взаимосвязи глюкокортикоидов и половых стероидных гормонов изменяется от однонаправленных сдвигов у неполовозрелых обезьян до разнонаправленных, или реципрохких, у взрослых.

у неполовозрелых сакцов обезьян в связи с низкой концентрацией тестостерона, анаболический эффект реализуется за счет высокого содержания дегидроэпиандростерона в сочетании с повышением уровня тестостерона при стимуляции функции коры надпочечников. На протяжении периода пубертации, наряду со снижением концентрации дегидроэпиандростерона, нарастает уровень секреции тестостерона в семенниках, который с этого времени выполняет основное анаболическое действие в организме животных.

Выяснение зависимости гормональной реакции неполовозрелых приматов на стрессорное воздействие от исходного функционального состояния системы гипофиз-кора надпочечников открывает возможность прогнозирования развития адаптивных процессов и разработки эффективных методов направленной коррекции эндокринных нарушений.

Изучение функции системы гипофиз-гонады неполовозрелых обезьян различного возраста в условиях специфической функциональной нагрузки и введении различных стероидных соеди-

нений закладывает основу для выбора средств и методов лечения различных форм нарушений процесса полового созревания человека.

Характеристика эндокринной системы неполовозрелых павианов гамадрилов на протяжении постнатального развития и в условиях функциональных нагрузок позволила обосновать тезис об использовании данного вида обезьян для изучения в эксперименте различных вопросов гормональных взаимодействий эндокринной системы в онтогенетическом развитии человека.

В процессе выполнения исследований разработаны радиоиммунологические наборы для определения пяти основных стероидных соединений: тестостерона, прогестерона, эстрадиола, 11-дезоксикортиэола и кортикостерона. На наборы была оформлена и утверждена в установленном порядке нормативно-техническая документация.

По своему качеству компоненты наборов не уступают лучшим зарубежным образцам, а по отдельным параметрам превосходят их.

Создание указанных наборов позволило отказаться от закупки аналогичной продукции за рубежом, что обеспечило значительную экономию валютных средств.

В ходе выполнения исследований в практику работы лаборатории был внедрен метод хроматографической очистки меченных тритием стероидных соединений на колонках с сефадексом ЬН-20.

Это позволило устранить влияние продуктов радиолиэа меченых стероидных соединений и повысить точность и воспроизводимость используемых радионимунологических методов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Во взаимодействии гормонов коры надпочечников.и половых желез процесс пубертации является критическим периодом, на протяжении которого характер взаимосвязи глюкокортикоидов и половых стероидных гормонов изменяется от однонаправленных сдвигов у неполовозрелых обезьян до разнонаправленных, или реципрокных, у взрослых.

1. Становление функции стероидсекретирующих желез в процессе постнатального развития помимо резких изменений в содержании тестостерона в период пубертации характеризуется выраженными возрастными различиями в секреции кадпочечнико-

- в -

вых гормонов - глгакокортикоидов , Л 5-андрогенов и их предшественников с максимальным содержанием дегидроэпиандросте-рона у полугодовалых и кортизола у годовалые самцов павианов .

2. На ранних этапах постнаталыюго онтогенеза выраженность и длительность активации секреции глюкокортикоидов в ответ на действие стресс-факторов вариирует в зависимости от возраста экспериментальных животных с ускоренной максимальной реакцией у годовалых самцов.

Секреторная реакция тестостерона также характеризуется возрастной динамикой, но при этом наряду с интенсивностью реакции изменяется ее направленность - от повышения уровня тестостерона у годовалых животных до его ингибирования у трехлетних самцов.

3. На протяжении препубертатного развития наблюдается выраженная динамика в характере реакции адреналовых желез на стимуляцию АКТГ,- от остротекущей у годовалых до максимальной у трехлетних самцов.

4. В процессе пубертацш: наблюдаются сопряженные изменения функциональной активности стероидсекретпрующих желез

надпочечников и гонад. Периоды максимального нарастания уровня андрогенов сопровождаются выраженным обратимым снижением уровня кортизола и его предшественников в крови.

5. Длительное введение кортизола в физиологических дозах неполовозрелым животным может являться положительным стимулом в секреции надпочечниковых андрогенов, но только в период введения препарата, то есть без отсроченного эффекта на последующий процесс активации функции половых желез в период пубертации.

6. Влияние экзогенного дегидроэпиандростерона в физиологической дозе на эндокринную систему неполовозрелых обезьян разделяется на непосредственное и отсроченное действие. Непосредственное влияние проявляется в ингибировайии продукции тестостерона в период введения препарата. Отсроченное действие реализуется через 1-2 года после окончания введения дегидроэпиандростерона и проявляется в более выраженной активации синтеза тестостерона в семенниках в период пубертации.

7. Отсутствие стимулирующего действия экзогенного гона-

дотропина на секрецию дегидроэпиандростерона у животных всех исследованных возрастных групп свидетельствует о том, что лютеиннзнруюций гормон не играет существенной роли в активации секреции надпочечниковых андрогенов как у взрослых, так и неполовозрелых животных.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертации докладывались на Всесоюзной научной конференции "Проблемы обеспечения обезьянами медико-биологических исследований и принципы использования обезьян в эксперименте" (Сухуми, 1983), Всесоюзной конференции "Вопросы медицинской приматологии. Наиболее перспективное использование обезьян в медицине и биологии" (Сухуми, 1987), Всесоюзной конференции по нейроэндокрннологии, (Харьков, 1988), Всесоюзном съезде эндокринологов, (Ташкент, 1989), Международном симпозиуме "Физиология гипофизарно-адре-но-кортикальной системы", (Ленинград, 1990), Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды", (Ленинград, 1991), Международный конгресс по стероидным гормонам (Даллас, 1994. США). По материалам диссертации опубликовано 26 работ.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена на 203 страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 9 разделов собственных исследований, общего заключения и списка использованной литературы ( 31 источник на русском языке и 241 на иностранных языках. Работа иллюстририрована 21 таблицами и 26 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Описание экспериментов Исследования проводились на клинически здоровых неполовозрелых и взрослых самцах павианов гамадрилов в возрасте от 0,5 до 12 лет, родившихся в Сухумском приматологическом центре.

Использованы следующие возрастные группы экспериментальных животных: 0,5+0,1 года, 1,0+0,1 года, 2,0+0,1 года, 3,0 + 0,1 года,4,0 + 0,1 года,а также группа взрослых самцов в возрасте 8-12 лет.

- 10 -

В общей сложности в экспериментах использовано 89 животных .

Во Еремп проведения экспериментов животные содержались в индивидуальных метаболических клетках, специально приспособленных для быстрой фиксации животных и взятия крови из локтевой вены.

Перед началом экспериментов в течение трех недель животные были адаптированы к условиям индивидуального содержания в клетках п процедуре взятия крови.

Кровь от экспериментальных жнвотных для определения ба-зального содержания гормонов брали в утренние часы (10-12 часов), используя гепарин в качестве антикоагулянта.

В каждую контрольную группу жнвотных входило от 15 до 20 обезьян.

Во всех случаях плазму отделяли центрифугированием, а затеи хранили при -20°С до проведения гормонального анализа .

В эксперименте по изучению функциональной взаимосвязи половых и надпочечных желез самцов павианов гамадрилов различного возраста в условиях острого стрессорного воздействия использовали три возрастные группы неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте 1, 2 и 3 Лет, а также группу взрослых животных 8-12 лет. В каждую возрастную группу входило 5 животных.

После предварительной адаптации к условиям содержания ь индивидуальных клетках животные были подвергнуты острому стрессорному воздействию, которое достигалось жесткой Двухчасовой иммобилизацией на специальных щитах в положении на спине.

Кровь для определения гормонов и их предйеетвенникой брали из локтевой вены до начала иммобилизации, а затем Через 1., 3, 6, 24, 48 и 72 часа с момента фиксации животных.

Эксперименты с вбеденнем горМоНоб.

Для изучения функции стероидпродуцирующих ЖеЛёэ обеЗЬЯН различного возраста В условиях вбедейия адреЯокортИКотроП-ного гормона использовали три возрастные группы самцов павианов гамадрилов в йозрасте 1 года, 3 лет и 8-12 лет.

Адренокортикотропный гормон (АКТГ 1-24, Синактен,С1ВА)

- 11 -

вводили по 1 ед/кг веса тела.

Кровь для определения гормонов брали до введения препарата, а затем через 1, 3, 6, 24, 48 и 72 часа с момента введения.

При изучении возрастных различий гормональной реакции стероидпродуцирующих желез на введение лютеинизируюцего гормона обезьянам различного возраста (1, 2, 3 и 8-12 лет) внутримышечно вводили по 500 ед. человеческого хорионичес-кого гонадотропина (чХГ, Гонадекс, Швеция).

Взятия крови: до введения препарата, а затем через 1, 3, 6, 24, 48 и 72 часа.

Действие экзогенного гонадотропин-рилизинг гормона (ЛГР$) на функцию аденогипофиза у неполовозрелых и взрослых ¡кивотных изучали на четырех возрастных группах самцов павианов гамадрилов (1,0 , 2,0 , 3,0 года и 8-12 лет).

Люлиберин вводили внутривенно, однократно по 30 мкг/жи-вотное. Взятия крови - до введения, а затем через 0,5 , 1, 3, 6 и 24 часа после введения.

Повторные введения ЛГР$ проводили на этих же животных через месяц после окончания эксперимента с однократным введением препарата. Люлиберин вводили внутримышечно в дозе 30 мкг/животное/введение, через день, на протяжении двух недель. Взятия крови - перед каждым введением препарата и через 1 час после него.

Для исследования функциональной активности системы ги-поталамус-гипофиэ-гонады у неполовозрелых обезьян в условиях хронического введения глюкокортикоидов использовали б неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте одного года, содержащихся в индивидуальных клетках.

Раствор кортизола в персиковом масле вводили внутримышечно на протяжении двух недель по 2,5 мг/животное три раза в неделю, а затем на протяжении месяца.по 10 мг/животное два раза в неделю. Кровь из локтевой вены брали перед каждым введением препарата.

Через 2 недели после окончания введения кортизола животным был проведен тест с АКТГ для оценки функциональных резервов коры надпочечников. Адренокортикотропный гормон (АКТГ 1-24, Синактон, CIBA) вводили внутривенно, однократно, в дозе 1 ед/кг веса тела. Кровь бралк до введения АКТГ,

- 12 -

а затем через 30 и 60 мин после введения.

Для изучения влияния длительного введения дегидроэгшан-дростерона неполовозрелом самцам павианов гамадрилов на функцию систем гипофиз-гонады, гипофиз-кора надпочечников и последующий процесс полового созревания, использовали 5 неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте от 2 до 3 лет. Растворенный б персиковом масле дегидроэпиандросте-рон в течение первого месяца вводили внутримышечно в дозе 1 мг/животное/введение каждый второй день, а затем на протяжении второго месяца - по 3 мг/животное/введение с той же частотой.

Через 1 и 2 года после окончания введения дегидроэпиан-дростерона у экспериментальных обезьян была взята кровь для сравнения содержания половых стероидных гормонов с контрольными животными аналогичных возрастных групп.

Исследование эндокринной функции половых и надпочечных желез самцов павианов гамадрилов в процессе полового созревания проводили на 6 неполовозрелых животных в возрасте 3-4 лет, которые содержались в одной большой клетке на протяжении одного года. Взятия крови осуществляли 1 раз в две педели в течение 12 месяцев. (Период полового созревания у самцов данного гида обезьян начинается на четвертом году жизни).

Методы определения гормонов

Содержание стероидных гормонов и их предшественников в крови экспериментальных животных определяли радиоиммунологическим методом.

Уровень кортизола определяли методом конкурентного связывания с белком (Nugent С.A. et all.,1966).

Прегненолон, прогестерон, 17-оксипрегненолон, 17-оксип-рогестерон, дегидроэпиандростерон, андростендион и 5<*--ди-гидротестостерон перед радиоиммуноанализом подвергали хро-матографическому выделению на колонках с целитом (Н.П.Гончаров Н.П. и др.,1979) .

Концентрацию кортикостерона, 11-дезоксикортизола и аль-достерона определяли радиоиммунологическкм методом без предварительного хроматографического выделения.

Определение широкого спектра стероидных гормонов и их предшественников в крови экспериментальных животных обеспе-

чило системный подход в изучении стероидогенеэа приматов и позволило оценить хаи направленность биосинтеза ос ювных половых гормонов и кортикостероидов, так и особенности метаболизма стероидов у обезьян разного возраста в условиях различных функциональных нагрузок.

Антисыворотки для радиоиммуноанализа вышеуказанных стероидных гормонов были получены в лаборатории экспериментальной эндокринологии Института экспериментальной патологии и терапии.

Полученные антисыворотки были охарактеризованы по следующим параметрам:

а) Сродство антисывороток к соответствующим соединениям. Оценивалось по константе ассоциации (Касс), которую расчитывали по методу Скетчарда, то есть графику зависимости отношения связанного и свободного лиганда от концентрации связанного лиганда.

б) Рабочие разведения антисывороток. Оценивались титрами антисывороток, которые обеспечивали на заключительном этапе радиоиммуноанализа связывание лиганда в интервале от 25 до 50 %

в) Специфичность антисывороток, которая оценивалась в тесте перекрестных реакций с 30 родственными по структуре стероидными соединениями. Низкие значения перекрестных реакций позволили разработать для ряда соединений прямые ра-дноиммунологические методы без предварительного выделения стероидов в чистом виде.

Для оценки воспроизводимости результатов радиоиммуноанализа (контроль качества) был изготовлен пул плазмы крови обезьян, для того чтобы в каждом эксперименте, наряду с исследованием очередного биологического материала, в пуле плазмы проводилось определение содержания соответствующего стероида и сравнивалось с таковым, полученным ранее. Коэффициент вариации значений концентрации стероидов в пуле плазмы между различными сериями определений не превышал 15%, а в пределах одного эксперимента в параллельных пробах пула плазмы был нижа 10% .

Содержание лютеинизирующего гормона' в плазме крови экспериментальных животных определяли биорадиоиммунологи-ческим методом in vitro (VanDamme М.-Р. st al.,1974), мо-

дифицированным и адаптированным для плазмы обезьян СИ1.с-кз.пд Е.Л. et а1.,1979., вопсЬагоу И.Р. ег а1.,1979).

Метод основан на изменении секреции тестостерона интер-стициалышми клетками семенников мышей в зависимости от содержания лютеинизирующего гормона в плазме. На заключитель-^ ном этапе концентрация тестостерона измеряется радиоиммунологическим методом.

Для определения биологически активного фолликулостиму-лирующего гормона был использован биорадиоиммунологическиЙ метод с использованием гранулезных клеток яичников неполовозрелых крыс.

Гранулезные клетки обладают способностью секретировать эстрадиол из андростендиона (в качестве субстрата) под действием фолликулостимулирующего гормона. Образующийся эстрадиол определяют радиоиммунологическим методом (.На Х.С. ей а1.,1986, Лакко1а Т. е1 а1.,1990).

- 15 -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭНДОКРИННОЙ ФУНКЦИИ НАДПОЧЕЧНЫХ И ПОЛОВЫХ ЖЕЛЕЗ САМЦОВ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ В РАЗЛИЧНЫЕ ВОЗРАСТНЫЕ ПЕРИОДЫ РАННЕГО ОНТОГЕНЕЗА.

Для оценки базального уровня функциональной активности надпочечных и половых желез самцов павианов гамадрилов были проведены исследования широкого спектра стероидных гормонов в крови обезьян различных возрастных групп. Животные содержались в общих вольерах вместе со взрослыми самцами и самками .

Показано, что основным глюкокортикоидннм гормоном у павианов гамадрилов является кортизол, уровень которого в крови полугодовалых обезьян был близок к значениям, наблюдаемым у взрослых животных.

Однако, в возрасте одного года уровень кортизола и его предшественников (11-дезоксикортизола и 17-оксипрегненолона) повышался примерно в 2 - 2,5 раза, а в последующем развитии животных их содержание снижалось. Значения концентраций этих стероидов, характерные для взрослых обезьян.устанавливались в 3-4 года.

Концентрация тестостерона - основного гормона андроген-ной фракции - в крови неполовозрелых обезьян различного возраста находилась на низком уровне, составляя около 1 нмоль/л. У взрослых самцов уровень тестостерона примерно в 20 раз выие, чем у неполовозрелых, причем увеличение содержания тестостерона у самцов павианов . гамадрилов происходит на 4 году жизни (период пубертации).

Концентрация дигидротестостерона - биологически активного метаболита тестостерона - не изменялась в исследуемом возрастном интервале у неполовозрелых животных, но превышала уровень тестостерона примерно в 1,5 раза.

После достижения уровня андрогенов, характерного для взрослых животных, содержание дигидротестостерона примерно в 3-4 раза ниже, чем тестостерона.

Изменение соотношения концентрации дигидротестостерона и тестостерона в сторону преобладания последнего у взрослых животных свидетельствует об относительном снижении уровня 5^ - редуктазной активности в процессе пубертации у самцов па-

вианов гамадрилов.

Концентрация андростендиона - непосредственного предшественника тестостерона- колебалась от 5,5 до 7,0 нколь/л в крови обезьян всех возрастных групп, включая взрослых животных. Заслуживает внимание то обстоятельство, что уровень тестостерона у взрослых самцов возрастает, как уже указывалось, в 20 раз, тогда как содержание его предшественника -андростендиона, существенно не изменяется.

Из андрогенной фракции стероидных гормонов в крови неполовозрелых самцов павианов гамадрилов значительные изменения претерпевает концентрация дегидроэпиандростерона - важного промежуточного соединения в системе синтеза половых гормонов. У полугодовалых обезьян его уровень в 5 раз выше, чем у взрослых животных и составляет в среднем 104 нмоль/л. В процессе развития животных его уровень постепенно снижался, однако, даже в 2 года он достоверно выше, чем у взрослых животных .

При проведении различных экспериментов, наряду с необходимостью установления исходных нормативов по содержанию исследуемых соединений в крови животных, необходимо также знание циркадных ритмов, которые являются основой для проведения дальнейших исследований на выбранном биологическом объекте.

Известно, что установление суточных ритмов кортикосте-роидов и половых гормонов, характерных для взрослых животных, свидетельствует об определенной степени зрелости сте-роидпродуцирующих желез и регулирующих их деятельность образований. В настоящем исследовании необходимость изучения суточных ритмов обусловлена тем, что при последующем проведении экспериментов, сопряженных со взятиями крови в различное время суток, нам необходим был исходный фон содержания стероидных соединений в крови.

В нашу задачу входило изучение изменений содержания глюкокортикоидов, андрогенов, гестагенов и их предшественников в крови неполовозрелых самцов павианов гамадрилов на протяжении суток.

Достоверные изменения содержания стероидов были установлены только для прогестерона, концентрация которого в 17 часов достоверно превышала значения, регистрируемые в 23

- 17 -

часа (Р<0,05). Для осех остальных соединений достоверные изменения отсутствовали.

Подводя итог первой главе диссертационного исследования следует отметить, что на протяжении постнатального развитии самцов павианов гамадрилов наряду с резким изменением концентрации тестостерона в период пубертацин наблюдаются внрл-тсенние возрастные различия в концентрации глюкокортикоидов, которая находится на максимальном уровне в крови годопазтнх обезьян. Кроме того, на протяжении развития обнаружено неуклонное снижение концентрации надпочечникового андрогена -дегидроэпиандростероиа, которая достигает минимальных значений в крови взрослых животных.

Для большинства стероидных соединений установлено отсутствие достоверных изменений их содержания в крови неполовозрелых обезьян на протяжении суток.

50РМИР0ВАНИЕ ГОРМОНАЛЬНОЙ РЕАКЦИИ НА СТРЕСС В ОНТОГЕНЕЗЕ САМЦОВ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ.

Гормональная реакция на стресс является классической моделью разнонаправленных изменений функциональной активности надпочечных и половых желез у половозрелых животных.

Однако, у неполовозрелых животных, в отличие от взрослых, характер данных взаимоотношений коренным образом отличается, прежде всего в связи с низкой активность» системы гипофиз-гонады.

Учитывая данное обстоятельство, а также наличие выраженных изменений функциональной активности коры надпочечников павианов гамадрилов в различные периоды постнатального развития нами были поставлены следующие задачи.

а) Изучение особенностей реакции системы . гипофиз-кора надпочечников в условиях физиологически низкой функциональной активности половых желез.

б) Выявление различий в секреторной реакции надпочечных желез на стресс в зависимости от возрастной динамики содержания кортикостерондов в крови на ранних этапах постнатального онтогенеза.

Полученные результаты показали следующие изменения функциональной активности надпочечных и половых желез з условиях стресса.

Исходное содержание кортизола в крови неполовозрелых животных было достоверно выше, чем у взрослых обезьян к составляло около 1200 мкмоль/л и 800 мкиоль/л соответственно (Р<0,05 ).

В условиях иммобилизационного стресса уровень кортизола в крови годовалых животных увеличился на 80% (Р<0,001), тогда как у двух- и трехлетних животных только на 45 и 50 % соответственно (Р<0,01). Статистическая обработка полученных результатов продемонстрировала достоверные различия в степени увеличения уровня кортизола у годовалых животных с одной стороны и 2-3-летних - с другой (Р<0,05).

У взрослых самцов павианов гамадрилов в условиях аналогичной двухчасовой иммобилизации содержание кортизола в крови увеличивалось на 55% (Р<0,05), то есть примерно в той же степени, что у 2-3-летних животных.

Однако, динамика нарастания и последующего снижения уровня кортизола в крови неполовозрелых павианов существенно отличалась от таковой у взрослых животных.

Так, у годовалых обезьян максимальное содержание кортизола регистрировалось уже через 1 час от начала иммобилизации, тогда как у последующих возрастных групп отмечалось все более выражение« запаздывание реакции. Максимальный уровень кортизола у взрослых животных отмечался через 4 часа от начала иммобилизации.

Возрастные различия в гормональной реакции на стресс проявляются в динамике других стероидных соединений. Так, у животных в возрасте 1 и 2 лет уровень прегненолона, одного из ранних предшественников стероидных гормонов, практически не изменялся, однако, у трехлетних животных содержание прегненолона в условиях иммобилизации увеличивалось в три раза. Еще более выраженная степень увеличения содержания прегненолона регистрировалась у взрослых животных.

Таким образом, повыаение концентрации прегненолона в плазме периферической крови обезьян в возрасте трех лет и старше является более адекватным показателен стрессорной реакции по сравнению с изменением уровня кортизола.

Примечательно, что обнаруженная закономерность относительно степени увеличения обнаружена и для альдостерона.

С каждой последующей возрастной группой наблюдается бо-

лее выраженная реакция альдостерона на острое стрессорное воздействие. Данная закономерность, очевидно, свидетельствует об повышении роли адренокортикотропного гормона в регуляции секреции альдостерона.

Содержание 17-оксипрегненолона также заметно повышалось в крови обезьян всех возрастных групп, однако, у более взрослых животных повышение выражено в большей степени - от 63% у годовалых обезьян, до двухкратного повышения у взрослых.

Через 6 часов с момента иммобилизации в крови двух- и трехлетних обезьян регистрировалось резкое (в 3-5 раз) снижение содержание 17-оксипрегненолона (Р<0,01), которое отсутствовало у павианов в возрасте одного года. Такое значительное снижение уровня 17-оксипрегненолона, по-видимому,не может быть обусловлено суточными колебаниями этого соединения, так как изучение суточных ритмов содержания 17-оксипрегненолона в крови неполовозрелых самцов павианов гамадрилов не выявило достоверных изменений на протяжении суток.

Наряду с изменением уровня глюкокортикоидов и альдостерона, иммобилиэационный стресс вызывал изменения надпочечных андрогенов, в частности, дегидроэпиандростерона.

В условиях иммобилизации у годовалых самцов уровень дегидроэпиандростерона возрастал в 2 раза , однако, это повышение, регистрируемое у всех исследуемых обезьян данной группы, было статистически недостоверным вследствие значительных индивидуальных колебаний концентрации стероида. У животных других возрастных групп оно было выражено в меньшей степени или отсутствовало.

Через 6 часов после фиксации животных в крови двух- и трехлетних павианов регистрировалось 5-б-кратное снижение уровня дегидроэпиандростерона (Р<0,05), которое отсутствовало у годовалых павианов.

У взрослых самцов павианов гамадрилов в условиях аналогичного стрессорного воздействия однонаправленные изменения содержания дегидроэпиандростерона отсутствовали.

Как указывалось выше, содержание тестостерона в крови неполовозрелых обезьян всех возрастных групп было примрр-но в 20 раз ниже, чем у взрослых самнов и составляло около

1 нмоль/л.

В условиях стресса уровень тестостерона достоверно увеличивался только у годовалых животных (с 0,9 до 1,9 нмоль/л, Р<0,05), в то время как у двухлетних существенно не изменялся, а у обезьян в возрасте трех лет обнаруживалось достоверное двухкратное снижение уровня тестостерона {Р<0,01) через б часов от начала эксперимента.

У взрослых самцов павианов гамадрилов иммобилизация вызывала 3-5-кратное снижение уровня тестостерона, которое сохранялось на протяжении двух суток после прекращения стрессориого воздействия.

Как известно, у неполовозрелых животных значительная часть тестостерона секретируется в надпочечных железах. Для оценки возможных изменений вклада надпочечных и половых желез в продукцию тестостерона, был рассчитан коэффициент корреляции между содержанием кортизола и тестостерона в крови обезьян каждой возрастной группы на протяжении первых шести часов стрессорной реакции. При этом были получены следующие значения: годовалые животные - г=0,96 (Р<0,01); двухлетние - г=0,87 (Р<0,5); трехлетние - г=0,63 (Р<0,1> и взрослые -г=-0,97 (Р<0,01).

Таким образок, у неполовозрелых животных с каадой последующий возрастной группой отмечавгсп снижение корреляционной связи между содержанием кортизола и тестостерона в крови обезьян в условиях стрессорной реакции.

У взрослых кивотных существует резко выраженная отрицательная корреляция в динамике кортизола и тестостерона.

Подводя итог результатам данного фрагмента исследования можно сделать следующие выводы:

1. Характер гормональной реакции надпочечников и гонад на стресс подвергается выраженной трансформации на протяжении периода неполовозрелости. ,

2. В условиях иммобилизационного стресса для павианов гамадрилов в возрасте одного года характерно более значительное повышение концентрации кортикостероидов по сравнению с животным» других возрастных групп.

3. У годовалых животных максимальный подъем уровня кортизола регистрируется значительно раньше, с выраженным запаздыванием гормональной реакции на стресс у павианов более зрелого возраста.

- 21 -

4. Характер взаимосвязи содержания кортиэола и тестостерона в условиях стресса в онтогенезе менялся от однонаправленных изменений у животных раннего возраста до разнонаправленных у взрослых.

ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ГОРМОНАЛЬНОЙ РЕАКЦИИ НАДПОЧЕЧНЫХ И ПОЛОВЫХ ЖЕЛЕЗ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ НА ВВЕДЕНИЕ АДРЕНОКОР-ТИКОТРОПНОГО ГОРМОНА.

Как известно, важным звеном в реализации гормональной реакции на стресс у человека и животных является влияние адренокортикотропного гормона на.кору надпочечников и половые железы, причем чувствительность тканей-мишеней может претерпевать выраженные изменения к АКТГ в различные периоды развития.

Так, например, при введении специфического ингибитора 11-бета-гидроксилазы - метопирона обезьянам разного возраста было показано, что в ответ на повышенный выброс эндогенного АКТГ степень повышения уровня предшественников стероидных гормонов - прегненолона, 17-оксипрегненолона и 17-ок-сипрогестерона у неполовозрелых животных была значительно выше, чем у взрослых (Гончаров Н.П. и др.,1984).

В условиях стрессорного воздействия, как описано выше, максимальная реакция кортикостероидов у неполовозрелых животных регистрировалась раньше, чем у взрослых павианов, а прирост концентрации кортизола был ярче выражен у животных наиболее раннего возраста.

Однако, оба использованные воздействия (введение метопирона. и жесткая иммобилизация), кроме повышения секреции эндогенного АКТГ, сопровождались существенным гуморальным дисбалансом, который мог влиять на стероидогенез в надпочечниках.

В связи с этим, в плане изучения изолированного влияния экзогенного АКТГ на стероидогенез приматов были поставлены следующие задачи:

1. Изучение изменений чувствительности коры надпочечников к АКТГ в зависимости от возраста.

2. Изучение влияния АКТГ на секрецию половых стероидных гормонов у обезьян разного возраста.

Результаты исследования показали, что поело введения АКТГ у годовалых обезьян концентрация кортизола увеличива-

лась только на 15% (различие недостоверно), тогда как у трехлетних и взрослых обезьян - почти в 2 раза (Р<0,01).

Через б часов после введения АКТГ концентрация кортизо-ла в крови обезьян всех возрастных групп была ниже исходных значений. Однако, у неполовозрелых животных это снижение было выражено значительно ярче (Р<0,05), чем у взрослых обезьян (Р>0 , 05 ) .

Снижение уровня кортизола у неполовозрелых павианов гамадрилов, вероятно, не может быть обусловлено суточными ритмами содержания кортикостероидов, так как изучение суточных ритмов уровня кортизола не выявило достоверных его изменений на протяжении суток.

Исходная концентрация стероидного предшественника -17-оксипрогестерона в крови годовалых животных значительно превышала его содержание у обезьян последующего возраста.

После введения АКТГ уровень 17-оксипрогестерона повышался примерно в равной степени во всех группах экспериментальных животных (в 3-3,5 раза), однако, статистически достоверное повышение наблюдалось только у трехлетних обезьян (Р<0,05).

Исходное содержание более раннего предшественника стероидных гормонов - 17-оксипрвгненолона практически одинаково у обезьян разного возраста.

После введения АКТГ его содержание повышалось примерно в равной степени в крови животных всех возрастных групп (в 1,6 - 1,9 раза), хотя достоверные изменения регистрировались только у взрослых павианов (Р<0,05).

Через 3-6 часов после введения препарата у неполовозрелых животных наблюдалось достоверное снижение уровня 17-ок-сипрегненолона (Р<0,05).

Динамика содержания прегненолона обнаруживала лишь тенденцию к повышению у трехлетних и взрослых животных /• тогда как у годовалых павианов его уровень заметно снижался (Р<0,05).

Как показано выше, исходное содержание тестостерона в крови взрослых самцов павианов гамадрилов - значительно выше, чем у неполовозрелых особей. В условиях стимуляции АКТГ у животных всех возрастных групп наблюдалась сходная динамика - после кратковременного увеличения содержания тестос-

терона регистрировалось заметное его понижение, которое, однако, вследствие выраженных индивидуальных колебаний,было достоверным только у обезьян в возрасте одного года (Р<0,01). В то же время следует отметить, что в процентном содержании наиболее выраженное снижение уровня тестостерона наблюдалось у взрослых животных: 7 5% - у последних, 32% - у годовалых и 46% - у трехлетних.

Первоначальный подъем содержания тестостерона в первый час после введения АКТГ также был наиболее ярко выражен у взрослых животных, однако, статистически достоверное повышение регистрировалось только у трехлетних обезьян.

Исходный уровень надпочечникового андрогена - дегидроэ-пиандростерона- в крови годовалых обезьян значительно выше, чем у животных других возрастных групп. В условиях стимуляции АКТГ изменения содержания дегидроэпиандростерона носят недостоверный характер.

Аналогично отсутствуют статистически достоверные изменения концентрации альдостерона.

Таким образом, результаты изучения возрастных особенностей реакции стероидпродуцирующих желез на введение ад-ренокортикотропного гормона позволили сделать следующие выводы:

1. Реакция коры надпочечников павианов гамадрилов на введение АКТГ претерпевает выраженные изменения в различные возрастные периоды, причем минимальный гормональный ответ регистрируется у животных в возраста одного года.

2. У обезьян всех возрастных групп п условиях стимуляции АКТГ динамика тестостерона претерпевает двухфазные изменения - первоначальное повышение с последующим снижением его содержания.

ВЗАИМОСВЯЗЬ 5УНКЦИ0НАЛЫЮЙ АКТИВНОСТИ НАДПОЧЕЧНИКОВ И ГОНАД ОВЕЗЬЯН В ПЕРИОД ПУБЕРТАЦИИ

В предыдущих разделах рассмотрен характер гормональной активности стероидпродуцирующих желез обезьян различного возраста в условиях функциональных нагрузок, обусловленных воздействием либо эндогенного (стрессорное воздействие), либо экзогенного адренокортикотропного гормона.

Однако, необходимо учесть, что могут существовать зна-

чительные различия в характере взаимосвязи надпочечников и гонад в условиях направленного специфического Еоздействия с одной стороны, и без воздействия извне, в условиях физиологического функционирования,- с другой.

В этом плане природой создана такая уникальная модель, как период пубертации, на протяжении которого значительно изменяется уровень функциональной активности системы гипофиз-гонады, что предоставляет возможность анализировать характер сопряженных изменений в системе гипофиз-кора надпочечников .

В связи с вышеизложенным, задачей настоящего фрагмента исследования явилось параллельное изучение гормональной функции половых и надпочечных желез самцов павианов гамадрилов на протяжении пубертатного периода с использованием продольной выборки (longitudinal study).

Для решения поставленной 'задачи была использована группа из 6 самцов павианов гамадрилов в возрасте около 3 лет (препубергатный возраст), содержащихся в одной клетке.

На протяжении одного года, то есть в процессе периода пубертации, у исследуемых обезьян брали кровь 1 раз в две ньдсли из локтевой вены для определения половых гормонов и кортикостероидов.

Исходное содержание андрогенов (тестостерона + дигидро-тестостерона) в крови исследуемых обезьян в возрасте трех лет составляло около 2 нмоль/л и но обнаруживало вырасенных индивидуальных колебаний. На протяжении 4-го года жизни концентрация андрогенов увеличивалась примерно в 5 раз, достигая уровня 10 нмоль/л. В возрасте от 3,5 до 4 лет обращают на себя внимание выраженные индивидуальные различия уровня андрогенов в крови экспериментальных животных.

Из шести использованных в работе самцов к концу четвертого года жизни уровень андрогенов, характерный для .взрослых животных, был достигнут только у одного (Ко.16418), возрастая при этом с 2-х нмоль/л до 20 нмоль/л. Параллельно отмечалось возрастание уровня лютеинизируоцего гормона - с 2,7 до- 12,4 ME/JI, проявляя выраженную положительную корреляцию с динамикой андрогенов (г=0,82 Р<0,001).

Минимальный прирост андрогенов наблюдался у самца Но.17252 - с 3 нмоль/л до 6 нмоль/л.

Между концентрациями тестостерона и дигидротестостерона в крови обезьян на протяжении 4-го года жизни обнаруживалась выраженная положительная корреляция (г=0,82 Р<0,001).

Изучение динамики содержания кортизола в крови исследуемых обезьян на протяжении 4-го года жизни выявило выраженное достоверное снижение его уровня (Р<0,001) с минимальными значениями в возрасте 3,5 лет и последующим увеличением к четырехлетнему возрасту.

Аналогично динамике андрогенов, наблюдались выраженные индивидуальные колебания концентрации кортизола к концу 4-го года жизни.

При анализе индивидуальной динамики содержания корти-костероидов в крови обезьян на протяжении периода пуберта-ции обнаружена четкая закономерность - более выраженное снижение концентрации кортизола, а также стероидных пред-пественников - прогестерона и 17-оксипрогестерона регистрировалось у животных с более высоким приростом уровня тестостерона .

Как указывалось выше, концентрация андрогенов в крови экспериментальных животных к концу 4-го года жизни составляла в среднем около 10 нмоль/л.

В то же время ранее проведенными исследованиями было показано, что у четырехлетних самцов , содержащихся в общих вольерах (вместе со взрослыми животныни) содержание андрогенов в крови практически не отличалось от значений, наблюдаемых у взрослых самцов (25,7+3,7 и 30,7+1,4 нмоль/л соответственно ).

Таким образон, концентрация андрогенов в крови 4-летних санцов павианов гамадрилов, изолированных на протяжении года от взрослых яивотных, была значительно ниже, чей у павианов того же возраста, но содержащихся в общих вольерах.

Вероятно, причиной обнаруженных.различий является выраженное влияние условий содержания .тивотных на процесс полового созревания.

В то же время, при сравнительном исследовании концентрации андрогенов в крови взрослых самцов павианов гамадрилов (8-12 лет), выросших в изоляции от самок, и самцов того же возраста из общих вольер, не было обнаружено достоверных различий в уровне андрогонов (31,9+2,1 и 36,0+2,5 нмол^/л

соответственно).

Результаты данного фрагмента исследования позволили сделать следующие выводы:

. 1. На протяжении 4-го года жизни в крови самцов павианов гамадрилов наблюдалось выраженное повышение уровня анд-рогенов с достижением средней концентрации в 10 нмоль/л в возрасте 4 лет.

2. Параллельно с нарастанием уровня андрогенов в крови животных отмечалось достоверное снижение концентрации кор-тизола и предшественников стероидных гормонов.

3. Наиболее выраженное снижение концентрации кортикос-тероидов регистрировалось у животных с наибольшим увеличением уровня андрогенов на протяжении 4-го года жизни.

4. Степень повышения уровня андрогенов в крови самцов павианов гамадрилов на протяжении четвертого года жизни в значительной степени зависело от условий содержания животных.

ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ГОРМОНАЛЬНОЙ РЕАКЦИИ ПОЛОВЫХ И НАДПОЧЕЧНЫХ ЖЕЛЕЗ САМЦОВ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ НА ВВЕДЕНИЕ ХОРИОНИЧЕСКОГО ГОНАДОТРОПИНА

Как известно, одним из основных гормональных проявлений процесса пубертации является усиление или синхронизация секреции люлиберина и соответствующая активизация выработки гонадотропинов.

В предыдущем разделе были представлены данные, свидетельствующие о выраженном снижении содержания кортизола в крови обезьян на фоне повышения функциональной активности системы гипоталамус-гипофиз-гонады в период пубертации.

Однако, данный феномен может быть связан как с повышением уровня андрогенов, так и гонадотропинов или гонадотро-пин-рилизинг-гормона. В связи с этим, возникает вопрос -следствием чего является снижение уровня кортизола в период полового созревания?

Для ответа на этот вопрос необходимы исследования с раздельным введением указанных гормонов неполовозрелым животным .

В данном разделе приведены результаты исследований по изучению влияния хорионического гонадотропина (действие которого аналогично действию лютеинизирующего гормона) на

функциональную активность стероидпродуцирующих желез самцов павианов гамадрилов различного возраста.

После введения чХГ у животных более раннего возраста (1 и 2 лет) наиболее резкое повышение уровня тестостерона наблюдалось на 2-3 сутки после введения чХГ, тогда как у взрослых животных максимум тестостерона регистрировался уже через 6 часов от начала эксперимента, после чего наблюдалось отчетливое снижение его концентрации.

У животных 3-4-летнего возраста резкое повышение уровня тестостерона отмечалось уже через 1 час после введения чХГ, однако, концентрация тестостерона продолжала повышаться до третьего дня эксперимента.

Таким образом, по характеру динамики тестостерона 3-4-летние животные занимали промежуточное положение между взрослыми павианами с одной стороны и 1-2-летними - с другой.

Обнаружена четкая закономерность интенсивности ответа тестостерона на введение чХГ в зависимости от возраста животных. Степень увеличения уровня тестостерона при введении хорионического гонадотропина была максимальной у животных в возрасте одного года, а затем четко снижалась с каждой последующей возрастной группой.

В отличие от тестостерона, степень повышения концентрации дигидротестостерона в крови обезьян была • значительно ниже. Так, если содержание тестостерона в крови 2-летних животных после введения чХГ увеличилось в 14,6 раза, то дигидротестостерона - только в 2,7 раза.

Изучение динамики содержания кортикостероидов в крови обезьян различных возрастных групп при введении хорионического гонадотропина выявило статистичесхи достоверное снижение уровня коргизола в крови обезьян в возрасте 1,2 и 3-4 лет через 6 часов после введения чХГ.

Как указывалось ранее, концентрация кортизола не претерпевала достоверных изменений в крови интактных неполовозрелых обезьян на протяжении суток (циркадные колебания).

В связи с этим, можно говорить об ингибирующем влиянии хорионического гонадотропина на уровень кортизола по крайней мере в первые часы после введения чХГ.

В то же время следует отметить, что на фоне продолмгг-

цегося увеличения содержания тестостерона у неполовозрелых животных (через 1-4 суток после введения чХГ) уровень кор-тизола нормализуется и практически не отличается от исходных значений.

Это дает основание полагать, что снижение концентрации кортизола в крови неполовозрелых обезьян скорее обусловлено действием хорионического гонадотропина, а не тестостерона, уровень которого существенно повышается после введения чХГ.

У взрослых самцов павианов гамадрилов характер динамики кортизола при введении чХГ существенно отличается от такового у неполовозрелых обезьян. Уже через 3 часа после введения гонадотропина наблюдалось достоверное повышение уровня кортизола.

Однако, как показали эксперименты на взрослых обезьянах с введением физиологического раствора, однократная инъекция последнего приводила к аналогичному повышению концентрации кортизола, указывая на неспецифический характер обнаруженных изменений со стороны гипофизарно-адренокортикальной системы (Кация Г.В.,1991).

Анализ динамики содержания других стероидных соединений, синтезируемых в коре надпочечников, продемонстрировал наличие достоверных изменений после введения чХГ, только в крови 3-4-летних животных.

В различные периоды после введения препарата у них отмечалось достоверное снижение уровня кортикостерона, аль-достерона и дегидроэпиандростерона.

В крови животных 1 и 2 лет обнаруживалась лишь тенденции к снижению содержания указанных стероидов, наиболее заметная через 6 часов после введения гонадотропина.

Результаты данного фрагмента работы позволили сформулировать следующие выводы.

1. Функциональные резервы половых желез неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте 1,2 и 3-4 лет не ниже, чем у взрослых животных.

2. Для неполовозрелых обезьян, в отличие от взрослых, характерна растянутая во времени (до 3-4 дней) реакция семенников на однократное введение хорионического гонадотропина.

3. В условиях введения хорионического гонадотропина для

неполовозрелых животных в возрасте 1,2 и 3-4 лет характерно снижение уровня кортизола.

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ СИСТЕМ ГИПОФИЗ-ГОНАДЫ, ГИПОФИЗ-КОРА НАДПОЧЕЧНИКОВ У НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ САМЦОВ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ ПРИ ОДНОКРАТНОМ ВВЕДЕНИИ ГОНАДОТРОПИН-РИЛИ-ЗИНГ-ГОРМОНА

В исследовании по изучению влияния ЛГР5 на функциональ- ' ную активность систем гипофиз-гонады, гипофиз-кора надпочечников било использовано внутрнвенное однократное введение препарата люлиберина - Lutrelef (FERRING ARZHEIMITTEL GMBH, ФРГ).

Для отработки дозы обезьянам в возрасте двух лет было введено по 30, 50 и 100 мкг препарата с последующей оценкой реакции указанных систем.

Величина прироста концентрации ЛГ, 5СГ и тестостерона не зависела от вводимой дозы люлиберина.

Многократное повышение уровня как лютеинизирующего, так и фолликулостимулирующего гормонов после введения люлибери-иа свидетельствует о существовании единого нейрогормона, ответственного за регуляцию секреции обоих гонадотропинов, к чему склоняются большинство исследователей.

В связи с вышеизложенным, для неполовозрелых самцов павианов гамадрилов была выбрана доза ЛГРФ в 30 мхг/животное.

Базальная концентрация лютеинизирующего гормона в крови неполовозрелых обезьян была в 5-6 раз выше, чем у взрослых.

Уже через 30 мин после введения люлиберина уровень ЛГ в крови обезьян всех возрастных групп возрастал-в несколько раз, достигая концентрации в 60-80 МЕ/Л. Через 3 часа после введения препарата содержание ЛГ снижалось , однако, если у I-2-лэтних животных возвращались исходные уровни, .то у 3-4-летних и взрослых обезьян концентрация лютеинизирующего горкона в этот период превышала!.базальные величины.

У неполовозрелых животных всех возрастных групп (1, 2 и-3-4 лет) регистрировалось приблизительно 20-кратное (20005) повышение уровня ЛГ, тогда как у взрослых обезьягг аонцент-рация лютеинизирующего- гормона увеличивалась только в 3,7 раза.

Повьгяение содержания ЛГ в крови обезьян приводило к за-

кономерному увеличению концентрации тестостерона, динамика которой существенно изменялась в зависимости от возраста животных.

Наиболее выраженное повышение уровня тестостерона наблюдалось у животных в возрасте двух и 3-4 лет (около 1100%), тогда как у годовалых обезьян увеличение составило 280% , а у взрослых - только 180%

Изучение динамики содержания кортизола ^ крови неполовозрелых павианов разного возраста после введения ЛГРФ выявило достоверное снижение его концентрации у 2- и 3-4- летних обезьян через 6 часов после введения люлиберина. У годовалых жиеотных это снижение отсутствует, хотя, как указывалось выше, у обезьян всех возрастных групп отмечался резкий подъем уровня ЛГ после инъекции ЛГРФ.

Таким образом, снижение уровня кортизола наблюдалось у обезьян £ максимальным повышением концентрации тестостерона в крови.'

Указанный феномен иллюстрируется также динамикой содержания других стероидных соединений, продуцируемых у неполовозрелых животных корой надпочечников.

Так, в крови годовалых животных достоверные изменения концентрации адреналовых стероидов после введения ЛГРФ отсутствовали, тогда как у двухлетних животных регистрирова- ' лось достоверное снижение концентрации андростендиона, а у 3-4-летних обезьян снижалось содержание кортикостерона (с 72,1+6,9 до 34,6+5,2 нмоль/л, Р<0,01) через 6 часов после введения ЛГРФ.

Полученные данные по однократному введению люлиберина павианам гамадрилам разного возраста позволили сформулировать следующие выводы.

1. Степень повышения концентрации лютеинизирующего гормона при однократном введении ЛГРФ у неполовозрелых животных значительно выше, чем у взрослых.

2. Соответствующее увеличение содержания тестостерона выражено в большей степени у животных в возрасте 2 и 3-4 лет.

3. Статистически достоверное снижение уровня кортизола,. кортикостерона и андростендиона после введения ЛГРФ регистрировалось у 2- и 3-4- летних животных.

ГОРМОНАЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ СИСТЕМ ГИПОФИЗ-ГОНАДЫ, ГИПОФИЗ-КОРА НАДПОЧЕЧНИКОВ В УСЛОВИЯХ МНОГОКРАТНОГО ВВЕДЕНИЯ ГОНАДО-ТРОШШ-РИЛИЗИНГ-ГОРМОНА.

В предыдущем разделе были представлены результаты изучения влияния однократного введения гонадотропин-рили-зинг-гормона на функциональную активность систем гипофиз-гонады, гипофиз-кора надпочечников у неполовозрелых животных .

Однако, следует иметь в виду, что на протяжении периода пубертации наблюдается длительное повышение секреции люли-берина, что может оказывать определенное воздействие на функциональную активность коры адреналовых желез.

В связи с этим, нами была поставлена задача - изучить характер функционирования систем гипофиз-гонады, гипофиз-кора надпочечников в условиях многократного введения гонадотропин-рилизинг-гормона неполовозрелым самцам павианов гамадрилов различного возраста.

Данный эксперимент, с одной стороны, позволил исследовать характер взаимодействия указанных систем у неполовозрелых животных, с другой стороны,- оценить эффективность стимуляции повторными инъекциями ЛГРФ функции системы гипофиз-гонады у обезьян разного возраста, что имеет значение в связи с использованием синтетических аналогов гонадотро-пин-рилизинг-гормона в эндокринологической клинике для лечения некоторых форм задержки полового созревания.

Для выполнения данной работы нами был использован пре-препарата люлиберина - Lutrelef (FERRING ARZNEIMITTEL GMBH, ФРГ), который вводили внутримышечно, через день, по 30 мкг/животное/введение, на протяжении 12 дней.

При равных базальных уровнях лютеинизируюцего гормона в крови неполовозрелых обезьян всех возрастных групп, максимальное повышение концентрации ЛГ регистрировалось у животных в возрасте 3-4 лет, минимальное - у годовалых обезьян. Обращает на себя внимание снижение стимулирующего влияния-ЛГР5 на лютеиниэирующий гормон с каждой последующей инъекцией у животных в возрасте одного года. Если после первого введения ЛГР§ уровень ЛГ увеличился в 6,9 раза, то после четвертой стимуляции - только в 3,2 раза.

У 3-4-летних животных концентрация ЛГ после третьей и

шчстой стимуляции была достоверно ниже (Р<0,05 в обоих случаях), чем после первой инъекции.

У животных в возрасте двух лет четкого снижения стимулирующего влияния ЛГРФ на уровень ЛГ не прослеживалось. У животных данной группы было определено содержание биологически активного фолликулостимулирующего гормона после первой и шестой инъекций ЛГРФ. Если в результате первой инъекции уровень 5СГ вырос с 1,3+0,2 до 9,2+2,8 МЕ/Л, то после шестого введения ЛГР5 - с 1,4+0,3 до 21,0+2,5 МЕ/Л, то есть стимулирующее влияние гонадотропин-рилизинг-гормона было ярче выражено после шестого введения.

В отличие от динамики лютеинизирующего гормона, уровень тестостерона не обнаруживал тенденцию к снижению стимулирующего влияния ЛГРФ с последующими введениями препарата

Минимальные значения концентрации тестостерона после стимуляции гонадотропин-рилизинг-гормоном наблюдались у годовалых животных, а максимальные - у обезьян в возрасте 3-4 лот.

Параллельно с исследованием функции системы гипофиз-гонады была проведена оценка функциональной активности коры надпочечников.

В крови годовалых обезьян после третьего и четвертого введения ЛГР$ отмечалось достоверное повышение уровня кортизола (Р<0,05) в сравнении с исходным уровнем до первого введения люлиберина. Данные изменения не могут являться следствием стрессорного влияния процедуры введения препарата, сопряженной с краткосрочной иммобилизацией животного, так как отсутствуют достоверные изменения содержания корти-зрла до и после каждого введения ЛГРФ. Обнаруженное повышение наблюдается лишь относительно исходного уровня до первого введения ЛГРФ.

У этой же группы животных зарегистрированы четкие изменения содержания кортикостерона, уровень которого достоверно снижался после первого и второго введения ЛГРФ (Р<0,05).

Также следует отметить снижение концентрации дигидро-тестостерона (Р<0,05) через 1 час после второго введения ЛГР».

У животных в возрасте двух лет наблюдался несколько иной характер изменения уровня кортикостероидов.

- 33 -

Достоверные изменения содержания кйртнзола в крови животных данной возрастной группы в условиях повторного введения ЛГРФ отсутствовали.

Однако, наблюдалось чёткое снижение концентрации хорти-костерона (Р<0,05) во время второго, пятого и шестого введения люлиберина, которое прослеживалось и через двое суток после шестого введения препарата.

Кроме того, регистрировалось выраженное снижение содер- -жание 11-дезоксикортизола, начиная с третьего введения ЛГРФ (Р<0,001) и наблюдаемое до второго, дня после шестого введения препарата (Рч0,05).

Таким рбразом, для неполовозрелых животных в условиях повторного введения гонадотропин-рилизинг-гормона характерно снижение содержания 11-дезоксикортизола и хортикостеро-на, тогда как уровень основного глюкокортикоидного гормона - кортизола- не изменялся или несколько увеличивался.

Выполнение данного фрагмента'работы позволила сделать следующие выводы:

1. Повторные (через день) инъекции гонадотропин-рилизинг-гормона приводят к снижению стимулирующего влияния препарата на уровень лютеинизирующего гормона у самцов павианов гамадрилов в возрасте одного года.

2. Сопутствующее повышение уровня тестостерона не обнаруживает тенденцию к снижению с последовательными инъекциями ЛГРФ у обезьян всех возрастных групп.

3. Повторное введение ЛГРФ не изменяет содержание кортизола в крови годовалых животных, но приводит к повышению уровня последнего у павианов в возрасте двух лет.

4. В крови неполовозрелых обезьян повторное введение гонадотропин-рилизинг-гормона приводило к достоверному снижению содержания кортикостерона и 11-дезоксикортизола.

ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ КОРТИЗОЛА!НА УРОВЕНЬ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СИСТЕМ ГИПОФИЗ-ГОНАДЫ, ГИПОФИЗ-КОРА-НАДПОЧЕЧНИКОВ У НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ САМЦОВ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ

Общеизвестно, что в условиях острого стрессорного воздействия в крови человека и животных"происходит одновременное повышение содержания кортизола, '■а'дренокортикотропного гормона и кортикотропин-рилизинг-горм-она. Как показано вы-

ше, этот феномен сопровождался снижением концентрации тестостерона у взрослых самцов павианов гамадрилов и достоверным повышением его содержания у годовалых (неполовозрелых) х;иботных .

Для ответа на вопрос об изолированном введении кортизола на уровень андрогенов у неполовозрелых животных был проведен эксперимент с длительным введением этого стероида годовалым самцам павианов гамадрилов. Такой эксперимент обеспечил создание высокого уровня кортизола в крови годовалых животных при пониженном или нормальном содержании АКТГ и кортикотропин-рилиэинг гормона.

Кроме того, интерес к данному эксперименту обусловлен еще одним обстоятельством. Как указывалось ранее, в крови ннтактных неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте одного года отмечалось повышенное содержание кортизола, которое затем снижалось в последующем развитии животных. К трехлетнему возрасту уровень кортизола приближался к значениям, характерным для взрослых обезьян, и с этого времени начинало обнаруживаться повышение концентрации тестостерона, являющееся проявлением процесса пубертации.

Эксперимент с длительным введением кортизола позволил ответить на еопрос о возможности наличия взаимосвязи между содержанием кортизола и тестостерона в крови неполовозрелых животных'.

И наконец, данный эксперимент представляет интерес в плане изучения влияния длительного введения глюкокортикои-дов на процесс последующего полового созревания, в частности - на нарастание уровня тестостерона в крови обезьян в период пубертации.

Для выполнения данного фрагмента работы использовали группу из шести неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте одного года.

Полученные результаты содержания гормонов - в крови обезьян обработаны следующим образом:

а) рассчитаны средние арифметические величины содержания гормонов на протяжении контрольного периода для всех обезьян,

б) определено среднее содержание гормонов за период введения по 2,5 мг кортизола.

в) аналогично рассчитано содержание гормонов за период введения по 10 мг кортизола,

г) рассчитано среднее содержание гормонов в крови обезьян через 1 неделю после окончания введения кортизола (первая неделя восстановительного периода),

д) определено содержание гормонов через две недели после окончания введения препарата (вторая неделя восстановительного периода).

Через 2,5 недели после окончания введения кортизола на экспериментальных животных был проведен тест с введением адренокортикотропного гормона для оценки функциональных резервов коры надпочечников.

Результаты исследования показали, что концентрация кортизола увеличивалась более, чем в 2 раза уже в период введения по 2,5 мг препарата и оставалась повышенной через 1 неделю после окончания введения. Через 2 недели уровень кортизола статистически не отличался от контрольных значений .

Анализ динамики тестостерона показал четкое увеличение его содержания, которое в период введения кортизола в дозе 10 мг и через неделю после окончания введения статистически достоверно превышало контрольные значения (р<0,05).

Аналогичные изменения обнаружены в динамике 5<£.-дигидро-тестостерона, уровень которого достоверно (р<0,05) повышался в период введения кортизола в дозе 10 мг.

Наиболее выраженные изменения претерпевало содержание андростендиона, концентрация которого возросла в 3,5 раза (р<0,001) в период введения 10 мг кортизола. В конце первой недели восстановительного периода уровень андростендиона так::<е достоверно превышал исходные значения (р<0,05).

Содержание альдостерона, кортикостерона, 11-дезоксикор-тизола, дегидроэпиандростерона и лютеинизирующего гормона в '.:рови экспериментальных животных не подвергалось достоверным изменениям в различные периоды после введения кортизо-• л а.

Через 2,5 недели после окончания введения кортизола на используемых животных был проведен тест с введением адренокортикотропного гормона, который выявил отсутствие нарушений функциональных резервов коры надпочечников.

- 36 -

Спустя 2 года после введения кортизола, когда экспериментальные животные ' находились на четвертом году жизни (т.е. в периоде пубертации), у них в крови определяли содержание тестостерона и сравнивали с результатами в контрольной группе животных, подобранных по возрасту, но без предварительного введения кортизола.

У экспериментальных животных концентрация тестостерона составила 2,9+1,5 нмоль/л, у контрольных обезьян - 2,1+0,2 нмоль/л. Различия между полученными значениями были статистически недостоверны.

Выполнение данного фрагмента работы с хроническим введением кортизола неполовозрелым самцам обезьян позволило сделать следующие выводы:

1. Длительное введение кортизола неполовозрелым самцам павианов гамадрилов в возрасте одного года вызывает достоверное повышение уровня тестостерона, 5^-дигидротестостеро-на и андростендиона, которое нормализуется через 2 недели после окончания введения препарата.

2. Тест с введением адренокортикотропного гормона, проведенный через 2,5 недели после окончания введения кортизола , свидетельствует о нормальных функциональных резервах коры надпочечников экспериментальных животных в этот период.

3. Полуторамесячное введение кортизола годовалым самцам павианов гамадрилов не влияет на процесс активации функции половых желез в последующий период пубертации.

ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ ДЕГИДРОЭПНАНДРОСТЕРОНА НА ПР(?ЦЕСС СТАНОВЛЕНИЯ ЭНДОКРИННОЙ ФУНКЦИИ ПОЛОВЫХ ЖЕЛЕЗ В ОНТОГЕНЕЗЕ ПАВИАНОВ ГАМАДРИЛОВ

В последние годы во всем мире значительный интерес исследователей вызывает выяснение биологических эффектов над-почечниковых андрогенов, в частности, дегидроэпиандростеро-на (БНА), роль которого в процессах жизнедеятельности остается в значительной степени неизученной.

По мнению ряда исследователей, это соединение играет роль пускового фактора в инициации процесса активации системы гипофиз-гонады в период полового созревания человека, однако, эта гипотеза не получила экспериментального подтверждения.

Кроме того, было показано, что дегидроэпиандростерон оказывал положительное влияние при лечении некоторых форм злокачественных образований, в частности, рака молочной железы, что обусловило возрастание внимание исследователей к этому соединению.

При изучении динамики этого стероида в крови самцов павианов гамадрилов были обнаружены значительные !<ол«б.пшя в различные возрастные периоды. Так, максимальные концентрации дегидроэпиандростерона были обнаружены в крови обезьян в возрасте 0,5 года, а затем его концентрация неуклонно снижалась, достигая к трехлетнему возрасту значений, характерных для взрослых животных . Именно с этого возраста в крови самцов павианов гамадрилов наблюдалось повышение уровня тестостерона, что является одним из основных гормональных проявлений процесса пубертации.

В связи с этим, возникает вопрос о возможном влиянии дегидроэпиандростерона на процесс полового созревания у данного вида обезьян.

Теоретически это может быть•обусловлено тем, что это соединенно обладает некоторой андрогенной активностью, то есть оно может ингибировать по принципу обратной связи секрецию тестостерона у павианов гамадрилов более раннего возраста.

К трехлетнему возрасту концентрация дегидроэпиандростерона снижается, вследствие чего растормаживается секреция тестостерона в половых железах.

Для проверки данного предположения был проведен эксперимент с длительным введением дегидроэпиандростерона неполовозрелым самцам павианов гамадрилов.

В качестве модели использована группа неполовозрелых самцов павианов гамадрилов в возрасте трех лет, у которых содержание дегидроэпиандростерона уже находилось на низком уровне, характерном для взрослых животных.

Таким образом, введение дегидроэпиандростерона модели--рсвало более высокий уровень этого соединения, наблюдаемый у обезьян более раннего возраста.

После предварительной адаптации животных к содержанию в индивидуальных клетках им подкожно вводили раствор дегидроэпиандростерона в персиковом масле на протяжении двух меся-

Ц6Б .

Полученные результаты определения стероидных соединений и лютеинизирующего гормона представлены следующим образом:

1. Рассчитаны средние арифметическое значения содержания гормонов на протяжении контрольного периода для всех пяти обезьян,

2. Определено среднее содержание гормонов в крови животных за период введения по 1 мг.

3. Аналогично рассчитано содержание гормонов за период введения по 3 нг дегидроэпиандростерона.

4. Рассчитана средняя концентрация гормонов в крови обезьян через 1 неделю после окончания введения препарата (первая неделя восстановительного периода).

5. Определено содержание гормонов через 2 недели после окончания введения препарата (вторая неделя восстановительного периода).

6. Рассчнтаны средние значения содержания андрогенов в крови обезьян через 1 год после окончания введения препарата.

7. Аналогично рассчитано среднее содержание андрогенов через 2 года после введения дегидроэпиандростерона.

Результаты исследования показали, что уже через 48 часов после введения дегидроэпиандростерона концентрация этого соединения в крови экспериментальных животных не отличалась от исходных значений, что, вероятно, указывает на быструю его утилизацию после введения в организм.

Определение концентрации суммарных андрогенов (тестостерона и 5 Л, -дигидротестостерона) выявило достоверное их снижение в период введения по 3 нг дегидроэпиандростерона (р<0,01) и в первую неделю восстановительного периода (р<0,05), что свидетельствует о возможном ингибировании синтеза андрогенов при введении БНА по принципу обратной связи.

Как указывалось выше, основное количество тестостерона у неполовозрелых животных синтезируется в надпочечных железах, и введение дегидроэпиандростерона,вероятно, ингибирует образование адреналового тестостерона. Подтверждением этого предположения является тот факт, что концентрация лютеинизируюцего гормона не подвергалась достоверным изменениях на

фоне введения ОНА.

Наряду с этим отсутствовали достоверные изменения содержания других основных стероидных соединений коры надпочечников - кортизола, кортикостерона и 11-деэоксикортизола.

Через 2 недели после окончания введения БНА уровень всех исследуемых гормонов но отличался от исходных значений.

Через 1 год после введения БНА, когда экспериментальные животные находились в периоде пубертации (возраст - 4 го- ' да), была проведена оценка содержания андрогенов в крови и прироста веса тела обезьян в сравнении с животными контрольной группы аналогичного возраста, но не получавших де-гидроэпиандростерон.

Установлено, что содержание андрогенов (тестостерона и 5<,-дигидротестостерона) в крови пубертатных животных, которым предварительно вводили ОНА, было на 45% выше, чем в контрольной группе животных того же возраста.

Статистически достоверные различия, однако, отсутствовали в связи с выраженными индивидуальными колебаниями в концентрации андрогенов.

Масса тела животных, получавших препарат>была достоверно выше, чем контрольных, и превышала последнюю на 37% (Р<0,05 ) .

Сравнение содержания андрогенов в крови экспериментальных и контрольных животных было проведено Повторно, через 2 года после окончания введения ОНА. Концентрация суммарного содержания тестостерона и 5э1-ДигИдротестостерона в крови животных, которым ранее вводили дегидроэпиандростерон, в этот период пубертации была в 4,7 раза выше, чем у контрольных животных аналогичного возраста (31,4+3,1 и 6,6+1,4 нмоль/л соответственно, р<0,001).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что длительной введение ЬНА обезьянам препубертатного возраста ускоряло процесс активации функции ноловых желез в период пубертации и способствовало более быстрому нарастанию Массы тела в этот период развития.

Влияние дегидроэпнандростерона на инициацию процесса пубертации, вероятно, следует рассматривать в плане концепции о "нейростероидах" [42], к которым, в частности, относится дегидроэпиандростерон.

- 40 -

Имеющиеся данные о возможности синтеза и секреции этого стероида в отделах головного мозга, вовлеченных в процесс' полового созревания, в частности, в гипоталамусе, позволяют думать о непосредственном влиянии ДНА на созревание нейро-эндокринных механизмов, ответственных за процесс пубертации.

Выполнение данного фрагмента диссертационного исследования позволило сделать следующие выводы:

1. Длительное введение дегидроэпиандростерона неполовозрелым самцам павианов гамадрилов в возрасте 3 лет инги-бирует продукцию тестостерона у неполовозрелых животных.

2. Через 2 года после окончания введения дегидроэпиандростерона уровень андрогенов (тестостерона и 5(^-дигидротес-тостерона) у экспериментальных самцов павианов гамадрилов значительно превышает его содержание у контрольных животных того же возраста.

ВЫВОДЫ

1. Во взаимодействии гормонов коры надпочечников и половых желез процесс пубертации является критическим периодом, на протяжении которого характер взаимосвязи глюкокор-тикоидов и половых стероидных гормонов изменяется от однонаправленных сдвигов у неполовозрелых обезьян до разнонаправленных, или реципрокных, у взрослых.

2. На протяжении первых трех лет жизни у самцов павианов гамадрилов на фоне стабильно низких значений тестостерона наблюдается выраженная возрастная динамика кортикосте-роидов с максимальным уровнем дегидроэпиандростерона и глю-кокортикоидов в возрасте 0,5-1 года и постепенным снижением к 3-4 годам до значений, наблюдаемых у взрослых особей.

3. Интенсивность гормональной реакции коры адреналовых желез на острое стрессорное воздействие претерпевает выраженные изменения на протяжении раннего периода онтогенетического развития. Максимальная реакция коры надпочечников наблюдается у животных в возрасте одного года, для которых характерно наиболее высокое базальное содержание кортизола.

4. Для неполовозрелых самцов павианов гамадрилов характерна ускоренная реакция глюкокортикоидов на двухчасовую

иммобилизацию. У годовалых животных пик реакции регистрируется на протяжении первого часа иммобилизации, а у взрослых - через 4-6 часов от начала фиксации. Животные двух- н трехлетнего возраста занимают промежуточное положение.

5. Динамика содержания тестостерона в крови в условиях жесткой иммобилизации характеризуется выраженными возрастными особенностями - от четкого повышения его концентрации у обезьян первого года жизни до достоверного снижения а препубертатном возраста.

6. Реакция коры надпочечников неполовозрелых самцов павианов гамадрилов различного возраста на введение адре-нокортикотропного гормона находится в достоверной отрицательной корреляционной зависимости от базального уровня кортизола в крови. Максимальная реакция регистрируется в трехлетнем возрасте, а минимальная реакция кортизола наблюдается у животных в возрасте одного года с максимальным ба-зальным его содержанием.

7. В начальном периоде пубертации нарастание уровня андрогенов (тестостерона и дигидротестостерона) в крови самцов обезьян сопровождается снижением содержания корти-хосгероидов , которое наиболее резко проявляется у животных с максимальным нарастанием концентрации андрогенов.

8. У неполовозрелых самцов павианов гамадрилов введение хорионического гонадотропина приводит к выраженному повышению содержания тестостерона, но реакция носит отсроченный характер по сравнению со взрослыми самцами.В крови животных всех исследованных возрастных групп регистрируется снижение концентрации кортизола через 6 часов после введения хорионического гонадотропина.

9. Однократное введение люлиберина неполовозрелым самцам павианов гамадрилов различного возраста вызывает снижение содержания кортикостероидов в крови тех животных, для которых характерно более выраженное люлиберин-индуцирован-ное повышение уровня тестостерона.

10. Многократное введение кортизола годовалым самцам павианов гамадрилов вызывает достоверное повышение в крови уровня надпочечниковых андрогенов - тестостерона, дигидротестостерона и дегидроэпиандростерона, который нормалирует-ся после прекращения введения препарата, и не влияет на

последующий процесс активации функции половых желез в период пубертации.

11. Влияние экзогенного дегидроэпиандростерона на эндокринную систему неполовозрелых обезьян разделяется на непосредственное и отсроченное действие. Непосредственное влияние проявляется в ингибировании продукции тестостерона в период введения препарата. Отсроченное действие реализуется через 1-2 года после окончания введения дегидроэпиандростерона и проявляется в более выраженной активации синтеза тестостерона в семенниках в период пубертации..

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Учитывая значительное сходство в характере секреторной активности и механизмах эндокринной регуляции стероид-секретирующих желез в онтогенезе человека и самцов павианов гамадрилов рекомендуется использовать последних в качестве адекватной экспериментальной модели для решения различных вопросов гормональных взаимодействий эндокринной системы в процессе онтогенеза.

2. При проведении эндокринологических исследований на модели неполовозрелых приматов рекомендуется использовать установленные показатели гормональной активности надпочечных и половых желез как в базальных условиях, так и при проведении функциональных тестов с АКТГ, чХГ и ЛГРФ.

3. Учитывая выраженное актививующее влияние экзогенного дегидроэпиандростерона на функциональную активность половых желез в период пубертации, представляется целесообразным тертнрование этого соединения в эндокринологической клинике для коррекции различных форм задержки полового созревания.

4. Метод хроматографической. очистки меченных тритием стероидных соединений на колонках с сефадексом 1.Н-20 рекомендуется использовать в рутинной практике радиоиммуноана-лиза для устранения продуктов радиолиза и повышения точности и воспроизводимости радиоиммунологических методов.

Список работ.опубликованных по теме диссертации

1. Изучение гормональной функции надпочечных и половых желез в опытах на обезьянах./Н.П.Гончаров, Г.В.Кация,

A.B.Антоничев, В.Ю.Бутнев.//Вестник АМН СССР.-1977,- Но.8.-С.13-20.

2. Эндокринная функция надпочечников и половых желез у приматов./Н.П.Гончаров, В.Н.Воронцов, Г.В.Кация, A.B. Антоничев, В.Ю.Бутнев.// В сб. "Моделирование на обезьянах важ-нейоих заболеваний человека".- Всесоюзн. конф. Сухуми.-1977,- С.21-23.

3. Использование радиоиммунологического метода определения стероидов с применением ЭВМ для изучения гормональной функции надпочечников и гонад у приматов./Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, А.В.Антоничев, В.Ю.Бутнев.// В сб."Моделирование на обезьянах патологических состояний человека".-1977.-Т.2.- С.58-68.

4. Характер изменения уровня стероидных гормонов и их предшественников в периферической крови павианов гамадрилов в условиях стресса./Н.П.Гончаров, А.В.Антоничев, Г.В.Кация,

B.Ю.Бутнев, А.Г.Таранов, Б.А.Лапин.//Боллютень экспериментальной биологии и медицины.- 1978.- Но.З.- С.270-274.

5. Уровень андрогенов в плазме крови павианов гамадрилов в различные периоды постнатального развития./В.Ю.Бутнев, Н.П.Гончаров.//Журнал.эволюционной.биохимии и физиологии.- 1979.- Ко.4.- С.425-429.

6. Радиоиммунологический метод определения 11 стероидов в малом объеме плазмы обезьян./Н.П.Гончаров, А.В.Антоничев, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Е.Дисфалузи.//Вопросы медицинской.химии. - 1979.- N0.1.- С.92-97.

7. Возрастные различия гормональной реакции надпочечников и семенников на стрессорное воздействие у обезьян. /З.Ю. Бутнев, Л.П.Ломая, А.Г.Таранов, Н.П.Гончаров.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1980.- N.2.—

C.157-160.

8. Биологические ритмы гормональной функции надпочечников и половых желез у павианов гамадрилов. / Н.П.Гончаров, В.П.Бутнев // Тезисы докладов 11 Всесоюзного съезда эндокринологов.- 1980.- С.375-376.

9. Эндокринная функция надпочечникових и половых желез у павианов гамадрилов в онтогенезе./В.Ю.Бутнев.//Сборник работ молодых ученых и специалистов Абхазии.- 1980,- Сухуми,- С. 143-146.

10. Эндокринная функция надпочечников и гонад павианов гамадрилов в постнатальном периоде развития./В.Ю.Бутнев, Н.П.Гончаров.//Материалы конференции "Биологическая характеристика лабораторных животных и экстраполяция на человека экспериментальных данных".-1980.- Москва.- С.135-137.

11. Эндокринная функция стероидпродуцирующих желез низших приматов в постнатальном развитии. / В.Ю.Бутнев, Н.П.Гончаров.//Материалы Всесоюзной конференции "Проблемы обеспечения обезьянами медико-биологических исследований и принципы использования обезьян в эксперименте".- 1983.-С.61. .

12. Нейроэндокринные механизмы эмоционального стресса у Неполовозрелых обезьян./М.Г.Цулая, С.К.Чиркова, В.Г.Старцев, В.Ю.Бутнев.//Сообщения Академии Наук Грузинской ССР.-1984.- Т.116, No.3.- С.637-640.

13. Становление эндокринной функции надпочечных и половых желез павианов гамадрилов в постнатальном онтогенезе. / В.Ю. Бутнев, Н.П.Гончаров // Онтогенез.- 1986.- N.3.- С.309-313.

14. Становление Гормональной реакции на стресс в онтогенезе павианов гамадрилов./ В.Ю.Бутнев, Н.П.Гончаров.// Онтогенез.- 1987.- N.3.- С. 316-319.

15. Эндокринная функция стероидпродуцирующих желез павианов гамадрилов в периоде пубертации./ В.Ю.Бутнев, Н.П.Гончаров.,// Материалы Всесоюзной конференции "Вопросы медицинской приматологии. Наиболее перспективное использование обезьян в медицине и биологии".- 1987.- С.8.

16. Характеристика возрастных и половых особенностей стероидогенеза обезьян в условиях различных стрессорных Воздействий./ Н.П.Гончаров, Г.В.Нация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, В.М.Горлушкин, А.Н.Шехова, Т.Н.Тодуа.// Вестник АМН СССР.- 1987.- No.10.- С. 88-94.

17. Неврогенная артериальная гипертония у обезьян: ней-рогорнональные механизмы, профилактика, лечение./В.Г.Старцев, С.К.Чиркова, А.М.Чирков, С.В.Старцев, В.Ю.Бутнев.// Вестник АМН СССР.- 1987.- Но.10.- С.83-88.

18. Изучение гормональных механизмов полового созревания в опытах на обезьянах./ В.Ю.Вутнев, Н.П.Гончаров.// Тезисы докладов III Всесоюзной конференции по нейроэндокрино-логии,- 1988,- С. 49.

19. Применение радиоиммунного метода определений 11-до- -зоксикортизола для оценки функции системы гипофиз-кора надпочечников в условиях метопиронового теста./И.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Вутнев, В.И.Воронцов, Л.Б.Хагундокова, P.Be- ' земан.//Вопросы медицинской химии.- 1988,- No.l.- С.130-133.

20. Особенности гормональной функции системы гипофиз-семенники у приматов в различные периоды постнатального развития / В.Ю.Вутнев. // Тезисы докладов III Всесоюзного съезда эндокринологов.- 1989.- С. 28.

21. Стимулирующее действие глюкокортикоидов на биосинтез адреналовых андрогенов у неполовозрелых .обезьян./ В.Ю.Вутнев, Н.П.Гончаров.// Материалы международного симпозиума "Физиология гипофизарно-адрено-кортикальной системы".- 1990,- С. 48-49.

22. Взаимодействие систем гипофиз-гонады, гипофиз-кора надпочечников у неполовозрелых обезьян./ В.Ю.Вутнев, И.О. Дэидзигури.// Тезисы докладов IV Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды".- 1991.- С. 44.

23. Особенности гормональной реакции стероидпродуцирую-щих желез обезьян на введение адренокортикотропного гормона в различные периоды постнатального онтогенеза./ Н.П.Гончаров, В.Ю.Бутнев.//Проблемы эндокринологии. Деп. в ВИНИТИ 21.05.91.- Hp.2070-В91.

24. Разработка и применение радиоиммунного метода определения эстрадиола и прогестерона для оценки менструального цикла приматов./Н.П.Гончаров,Г.В.Кация,В.Ю.Бутнев,Л.В.Хагундокова. //Проблемы эндокринологии. Деп.в ВИНИТИ 21.05.91,-Но.2069-В91.

25. Взаимосвязь функциональной активности надпочечников-и гонад обезьян в период пубертации./В.Ю.Бутнев, Н.П.Гончаров.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1992.- N.11.- С. 455-457.

26. Effect of Small Doses of Dehydroepiandrosterone Durina Propubertstiûiidl Period on Testis Endocrine Function

(Papio hamadryas)./N.P.Goncharov, V.Yu.Butnev.// IX International Congress on Hormonal Steroids.- 24th-29th September 1994.-P.127.- C146.- Dallas.- Texas.- U.S.A.

ПЕРЕЧЕНЬ ТЕХНИЧЕСКОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ НА АНТИСЫВОРОТКИ И РАДИ0ИММУН0Л0П1ЧЕСКПЕ НАБОРЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ, РАЗРАБОТАННЫЕ В ПРОЦЕССЕ ВЫПОЛНЕНИЯ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Сыворотка диагностическая против прогестерона для радиоиммунологического определения./ Б.А.Лапин, Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова. // Технические условия. ТУ 42.14-332-82. С.23.

2. Сыворотка диагностическая против кортикостерона для радиоиммунологического определения./ Б.А.Лапин, Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова. // Технические условия. ТУ 42.14-33 3-82. С.23.

3. Сыворотка диагностическая против 11-деэоксикортизола для радиоиммунологического определения./ Б.А.Лапин, Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова. // Технические условия. ТУ 42.14-334-82. С.24.

4. Сыворотка диагностическая против эстрадиола для радиоиммунологического определения./ Б.А.Лапин, Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова. // Технические условия. ТУ 42.14-335-82. С.22.

5. Сыворотка диагностическая против тестостерона для радиоиммунологического определения./ Б.А.Лапин, Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова. // Технические условия. ТУ 42.14-336-82. С.22.

, 6. Регламент производства на сыворотки диагностические против стероидных гормонов для радиоиммунологичоского определения./ Б.А.Лапин, Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова, В.И.Воронцов.// Регламент производства No.288-82. С.69.

7. Набор реактивов для радиоиммунологического определения эстрадиола в плазме крови./ Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова.// Технические условия. ТУ 42.15-86. С.20.

8. Набор реактивов для радиоиммунологического определения тестостерона в плазме крови./ Н.П.Гончаров, Г.В.Кация, В.Ю.Бутнев, Н.Д.Гончарова, Л.Б.Хагундокова.// Технические