Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакокоррекция стресс-индуцированной тревожной депрессии у животных новыми агентами на основе терпеновых соединений

АВТОРЕФЕРАТ
Фармакокоррекция стресс-индуцированной тревожной депрессии у животных новыми агентами на основе терпеновых соединений - тема автореферата по медицине
Маренина, Мария Константиновна Томск 2015 г.
Ученая степень
кандидата биологических наук
ВАК РФ
14.03.06
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакокоррекция стресс-индуцированной тревожной депрессии у животных новыми агентами на основе терпеновых соединений

На правах рукописи

МАРЕНИНА МАРИЯ КОНСТАНТИНОВНА

ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ СТРЕСС-ИНДУЦИРОВАННОЙ ТРЕВОЖНОЙ ДЕПРЕССИИ У ЖИВОТНЫХ НОВЫМИ АГЕНТАМИ НА ОСНОВЕ ТЕРПЕНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

8 АПР 2015

005567066

Томск-2015

005567066

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Новосибирский институт органической химии им. H.H. Ворожцова» Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Толстикова Татьяна Генриховна

Научный консультант:

доктор биологических наук

Августиновнч Дамира Фуатовна

Официальные оппоненты:

Новожеева Татьяна Петровна, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт психического здоровья», лаборатория клинической психонейроиммунологии и нейробиологии, старший научный сотрудник

Данилец Марина Григорьевна, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга», отдел экспериментальных биологических моделей, заведующая отделом

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «£2.» _ О/зЗ 2015 г. в_часов на заседании диссертационного совета

Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» (634028, Томск, пр. Ленина, 3; адрес сайта: http://www.pharmso.ru)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

Автореферат разослан « 30 »___2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В современном мире депрессия и тревожные расстройства являются самыми распространенными нарушениями психического здоровья людей (Kessler et al., 2009). Депрессия - это хроническое, рецидивирующее и потенциально опасное для жизни расстройство, от которого страдает 20% населения по всему миру (Berton, Nestler, 2006). По прогнозам Всемирной Организации Здравоохранения, в 2020 году депрессия займет второе место в списке причин нетрудоспособности населения (WHO, 2001). Тревожные расстройства также широко распространены - только за 2010 год они были выявлены у 14% населения развитых стран (Griebel, Holmes, 2013). Важно отметить, что эти две психопатологии имеют перекрывающиеся симптомы и часто сочетаются, поэтому в клинической практике нередко говорят о смешанном тревожно-депрессивном расстройстве у людей (Незнанов, Борцов, 2005; Kaufman, Charney, 2000). Это наиболее тяжелые случаи, поскольку они обостряют течение болезни и труднее других поддаются лечению (Den Boer et al., 2000). Несмотря на наличие широкого ассортимента анксиолитиков и антидепрессантов, фармакотерапия тревожных и депрессивных расстройств все еще недостаточно эффективна, и требует особого подхода в связи с высокой продолжительностью лечения. Поэтому важное место в современной психофармакологии занимает разработка малотоксичных и высокоэффективных лекарственных средств, в том числе на основе растительного сырья. Известно, что терпеновые соединения, выделенные из растений, обладают широким спектром биологического действия (Galeotti et al., 2002; Grodnitzky, Coats, 2002; Han, 2005), что делает их перспективными при создании новых психотропных препаратов. Одним из таких соединений является ламбертиановая кислота (ЛК) - дитерпеноид, получаемый из живицы сибирского кедра. Предварительные исследования показали, что производные JIK проявляют нейротропное действие, а исходное соединение обладает хорошим потенциалом в качестве платформы для синтетических преобразований (Толстиков и др., 2011). На основе этих данных было решено исследовать возможные анксиолитические и антидепрессивные свойства JIK и ее новых производных. Другое соединение - глицирризиновая кислота (ГК) относится к классу тритерпеноидов и содержится в корне солодки различных видов. Важной особенностью ГК является способность образовывать комплексы с лекарственными средствами (Толстикова и др., 2010; Tolstikova et al., 2012). Такой подход позволяет получить комплексы со сниженной дозой исходного препарата, то есть более безопасные новые соединения при сохранении фармакологической активности. Это особенно важно, поскольку терапия психических расстройств обычно проводится длительно. Основой для нового комплекса с ГК, исследованного в данной работе, был выбран широко применяемый в практике анксиолитик буспирон. Новый агент получил название буспиглизин.

Степень разработанности. Современный метод лечения тревожных и депрессивных расстройств состоит в фармакотерапии, характерной чертой которой является длительность. Такая особенность предъявляет ряд требований к анксиолитикам и антидепрессантам - в первую очередь они должны быть низкотоксичными. При этом существующие препараты не обеспечивают достаточной эффективности, поскольку их применение ограничено из-за неблагоприятных эффектов. В то же время создание агентов на основе растительных веществ является одним из перспективных способов разработки малотоксичных высокоэффективных лекарственных препаратов.

Цель исследования. Изучить новые агенты терпенового ряда в качестве возможных фармакокорректоров при экспериментальной тревожной депрессии, вызванной социальным стрессом.

Задачи исследования.

1. Исследовать влияние ламбертиановой кислоты и ее производных на поведение мышей разного генотипа (беспородные животные и мыши инбредной линии С57ВЬ/6Г) и выбрать наиболее активные соединения для дальнейшего углубленного скрининга.

2. Изучить влияние выбранных производных ламбертиановой кислоты (метилового эфира и незамещенного амида) на поведение, биохимические показатели крови, уровень эстрадиола и развитие гипертрофии надпочечников у самок мышей линии С57ВЬ/61 в модели тревожной депрессии.

3. Исследовать влияние незамещенного амида ламбертиановой кислоты на уровень гормонов гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (ГГНС), для установления его механизма действия.

4. Изучить влияние буспиглизина на поведение и биохимические показатели крови мышей в модели тревожной депрессии при превентивном и лечебном способах введения.

Научная новизна. В настоящей работе впервые исследованы производные ламбертиановой кислоты (замещенный и незамещенный амиды) и показано их различное влияние на поведение животных в зависимости от генотипа: стимулирующий эффект на двигательную и исследовательскую активность у беспородных мышей и анксиолитический эффект с седативным действием у мышей инбредной линии С57В1761. Для незамещенного амида ламбертиановой кислоты установлен стресс-протекторный эффект при развитии экспериментальной тревожной депрессии, и показан широкий спектр влияния на уровни гормонов ГГНС.

Впервые показано, что превентивное введение буспиглизина препятствует развитию тревожно-депрессивного состояния у животных. Лечебное введение буспиглизина активирует антиоксидантную систему организма, что положительно влияет на состояние организма в условиях оксидативного стресса, развивающегося при тревожной депрессии.

Теоретическая и практическая значимость. Исследовано действие новых агентов терпенового ряда на состояние экспериментальной тревожной депрессии у мышей линии С57В1У61. Полученные данные позволяют лучше понять эндокринные и нейрохимические механизмы развития тревожно-депрессивного состояния, а также могут быть использованы при разработке новых схем лечения психических расстройств.

Незамещенный амид ламбертиановой кислоты рекомендован для расширенного доклинического скрининга в качестве профилактического средства при развитии стресс-индудированной тревожной депрессии. Данный агент положительно влияет на поведение животных в условиях социального стресса, повышает активность антиоксидантной системы организма, а также на уровне тенденции препятствует развитию гипертрофии надпочечников.

Показано, что буспиглизин - комплекс буспирона с ГК, является перспективным низкодозным аналогом буспирона для терапии тревожно-депрессивных расстройств.

Работа выполнена при поддержке интеграционной программы Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине» № 39 и программы ФНИ РАН - У.48.1.5. Развитие современных подходов к фармакологическим исследованиям перспективных для медицины агентов, полученных на основе целенаправленного органического синтеза.

Методология и методы исследования. В соответствии с поставленными задачами были использованы современные высокоинформативные методы исследования. Объектом

исследования были выбраны беспородные мыши и мыши линии С57ВЬ/6.1. Для исследования различных видов активности производных ЛК, а также буспирона и буспиглизина воспроизводили модель сенсорного контакта у самцов мышей и модель социального дискомфорта у самок.

Основные методы исследования: поведенческие (тесты: «перегородка», «открытое поле» в двух модификациях, «темная и светлая камера», «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), тест Порсолта), биохимические (определяли содержание глюкозы, общего белка, холестерина и триглицеридов в плазме крови, а также активность каталазы и концентрацию малонового диальдегида (МДА)), метод иммуноферментного анализа (определяли концентрацию гормонов: эстрадиола, кортикостерона, адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортикотропин-рилизинг-фактора (КРФ)); кроме того определяли массу надпочечников животных.

Положения, выносимые на защиту.

1. Амиды ламбертиановой кислоты при однократном введении по-разному влияют на поведение животных, в зависимости от генотипа мышей, проявляя стимулирующий эффект у беспородных мышей и анксиолитический эффект с седативным действием у мышей линии С57ВЬ/6.1.

2. Незамещенный амид ламбертиановой кислоты проявляет стресс-протекторное действие при развитии тревожной депрессии у мышей, способствуя нормализации поведения и биохимических показателей крови животных. При превентивном введении амида установлена тенденция к снижению гипертрофии надпочечников.

3. Превентивное введение незамещенного амида ламбертиановой кислоты приводит к снижению уровней адренокортикотропного гормона и кортикотропин-рилизинг-фактора у животных, что может являться ключевым фактором в механизме стресс-протекторного действия агента, опосредованном через гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему.

4. Буспиглизин обладает протекторным действием при развитии экспериментальной тревожной депрессии у животных, препятствуя развитию тревожности и сохраняя коммуникативность мышей.

5. При лечебном введении буспиглизин активирует антиоксидантную систему организма, и проявляет меньшее седативное действие на поведение тревожно-депрессивных животных, чем буспирон.

6. Исследованные агенты терпенового ряда - незамещенный амид ламбертиановой кислоты и буспиглизин являются перспективными соединениями для расширенного доклинического скрининга в качестве фармакокорректоров при развитии тревожной депрессии.

Степень достоверности и апробация результатов. Применение современных подходов и методов исследования, адекватная статистическая обработка данных и достаточный объем экспериментального материала для решения поставленных задач обуславливают высокую степень достоверности полученных результатов исследования. В работе были использованы профессиональные программно-аппаратные комплексы и современное программное обеспечение. Для интерпретации и подтверждения результатов работы был проведен обширный анализ литературных данных.

Основные результаты диссертационной работы представлены на IV съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012), на VII Сибирском съезде физиологов «Физиология - медицине» (Красноярск, 2012), на международной научно-практической конференции «Свободные радикалы и антиоксиданты в химии, биологии и

медицине» (Новосибирск, 2013), на IX международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Украина, Крым, Судак, 2013).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них 4 - в журналах, рекомендованных перечнем ВАК, и получен 1 патент на изобретение № 2534987.

Структура и объем работы. Диссертация включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований и обсуждение, заключение, выводы и список цитируемой литературы, включающий 145 источников, из них 20 отечественных и 125 зарубежных. Работа изложена на 105 страницах, содержит 11 рисунков и 14 таблиц.

Работа выполнена в лаборатории фармакологических исследований Отдела медицинской химии ФГБУН Новосибирского института органической химии им H.H. Ворожцова СО РАН (зав. лаб. д.б.н., проф. Т.Г. Толстикова).

Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертации. Диссертант принимал непосредственное участие в исследовании на всех его этапах, включая постановку цели и задач, поиск и анализ литературных данных, планирование и проведение экспериментов, статистическую обработку данных, анализ и интерпретацию полученных результатов исследования. Соискателем также подготовлены к публикации статьи по теме диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первой главе представлен обзор научной литературы по теме исследования. Рассмотрены распространенность и классификация тревожных и депрессивных расстройств и их этиология. Подробно проанализированы основные теории патогенеза данных расстройств - моноаминовая теория, изменения в гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системе, а также теория оксидативного стресса. Далее представлены данные о фармакологическом подходе к лечению депрессии и тревожных расстройств, определены и описаны основные классы антидепрессантов и анксиолитиков. В последнем разделе освещены перспективные подходы к разработке новых психотропных препаратов на основе растительных метаболитов терпенового ряда. Рассмотрены два различных направления в этой области и приведены сведения об используемых в работе соединениях. Первое - это химическая модификация ЛК. Для данного соединения и его производных представлены результаты предварительного исследования психотропной активности. Другое направление представлено образованием комплексов известных лекарственных препаратов с ГК, что позволяет получить агенты со сниженной дозой исходного вещества, то есть более безопасные новые соединения при сохранении фармакологической активности. Для комплексообразования с ГК в работе выбран анксиолитик буспирон.

Вторая глава диссертации посвящена материалам и методам исследования. Эксперименты проводили на половозрелых самцах и самках мышей инбредной линии C57BL/6J массой тела 20-30г, самцах мышей линии ICR массой тела 25-30г и белых беспородных мышах весом 2025г. Животные были получены из вивария Института цитологии и генетики СО РАН и, во время эксперимента, содержались в стандартных условиях при неограниченном доступе к воде и гранулированному корму. Работы с животными проводили в строгом соответствии с законодательством Российской Федерации, положениями «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986).

В работе исследованы следующие соединения: ламбертиановая кислота, метиловый эфир Ж (МеЛК), незамещенный амид ЛК (АЛК) и N-метилпиперазинамид ЛК (замещенный амид, или

3AJIK). Данные вещества были получены в Лаборатории медицинской химии (зав. лаб. - д.х.н., проф. Шульц Э.Э.) Новосибирского института органической химии СО РАН. Также в работе проведены исследования нового комплекса буспирона с глицирризиновой кислотой в массовом соотношении 1:10 - буспиглизина, который был получен механохимическим методом в Институте химии твердого тела и механохимии, группой механохимии органических соединений (зав. лаб. - д.х.н. Душкин A.B.). Все исследуемые вещества растворяли в дистиллированной воде с добавлением Твина-80.

Определение острой токсичности для амидов ЛК проводили на беспородных мышах, с помощью однократного внутрижелудочного введения. Значение среднесмертельной дозы (LD50) рассчитывали по методу Кербера (Беленький, 1963).

Первичный скрининг ЛК и ее производных. Эффекты однократного введения ЛК и ее производных на поведение животных исследовали в автоматизированной фотосенсорной установке TruScan (Coulbourn, США). Использовали две методики: «открытое поле» и «темная и светлая камера». «Открытое поле» - широко используемый тест для оценки двигательной и исследовательской активности животных (Choleris et al., 2001; Prut, Beizung, 2003). В данном тесте регистрировали следующие показатели: время движения (с); дистанция (см), пройденная животным; число и время (с) вертикальных стоек; число и время (с) заглядываний в норки. В методике «темная и светлая камера», которая позволяет оценить уровень тревожности животных (Costall et al., 1989), половина арены была закрыта темным боксом (темная камера) с входным отверстием размерами 4x4см. Мышь помещали в светлую камеру, и регистрировали показатели, описанные для теста «открытое поле», а также время нахождения в светлой камере (с) и число переходов из одной камеры в другую. Исследуемые соединения вводили животным перорально, за один час до тестирования в дозах 2,5, 5 и 10 мг/кг. На первом этапе работы оценивали влияние ЛК, МеЛК, а также амидов - АЛК и ЗАЛК на поведение беспородных мышей. На основании результатов были выбраны наиболее активные соединения - амиды ЛК, для которых были выполнены аналогичные исследования на мышах линии C57BL/6J. Дальнейшее изучение выбранных производных ЛК, а также исследование буспиглизина, проводили на модели тревожной депрессии у мышей линии C57BL/6J (Августинович, Коваленко, 2004; Kudryavtseva et al., 1991).

Для моделирования тревожно-депрессивного состояния, мышей линии C57BL/6J содержали в условиях длительного социального стресса. При этом использовали модель сенсорного контакта для самцов мышей (Kudryavtseva et al., 1991), и модель социального дискомфорта -для самок (Августинович, Коваленко, 2004).

В модели сенсорного контакта самцов мышей содержали попарно в клетках, разделенных на два равных отсека прозрачной перфорированной перегородкой, которая позволяла мышам видеть, слышать и обонять друг друга, но препятствовала их физическому контакту. Ежедневно на 10 мин перегородку вынимали из клетки, что приводило к межсамцовым конфронтациям, в которых формировалось два типа поведения в каждой паре животных: один самец мыши проявлял агрессию (агрессор), подчиняя другого, который приобретал опыт социальных поражений (жертва). Приобретенный опыт закрепляли, для чего особей, потерпевших поражение, после конфронтации пересаживали за перегородку к незнакомому агрессору. Таким образом, для самцов мышей социальный стресс был обусловлен: ежедневными поражениями в 10-минутных межсамцовых конфронтациях, постоянным проживанием в сенсорном контакте с агрессором, и постоянной сменой территории и партнера за перегородкой.

В модели социального дискомфорта самок мышей содержали в клетках с перегородкой, описанных выше. За перегородку помещали агрессивного самца мыши, полученного в модели

сенсорного контакта, к которому ежедневно на 10 мин подсаживали жертву, что приводило к межсамцовым конфронтациям. После конфронтации агрессоров пересаживали так, чтобы у каждой экспериментальной самки оказался новый (незнакомый) партнер. Таким образом, социальный стресс для самок включал в себя: длительное проживание в сенсорном контакте с агрессором, постоянную смену партнера за перегородкой и присутствие при ежедневных межсамцовых конфронтациях.

Влияние превентивного введения MeJIK и АЛК на поведение животных в тесте «перегородка», биохимические показатели крови, уровень эстрадиола и массу надпочечников (по отношению к массе тела, мг/г) оценивали в модели социального дискомфорта у самок мышей. Для исследования влияния АЛК на ГГНС определяли уровни кортикостерона, АКТТ и КРФ, а также массу надпочечников у самцов мышей в модифицированной модели сенсорного контакта, где в качестве агрессоров были использованы мыши линии ICR. В обоих экспериментах мышей содержали в условиях социального стресса в течение 30 дней, и с 10 по 30 день ежедневно перорально вводили либо одно из исследуемых веществ в дозе 5мг/кг (опытные группы СТР_АЛК и СТР_МеЛК), либо растворитель (группа СТР_р). Некоторые показатели определяли также у животных, содержавшихся в условиях социального стресса в течение 30 дней, но без введения веществ (группа СТР_б/в) и интактных животных (группа ИНТ), не подвергавшихся никаким воздействиям.

Эффекты буспиглизина и буспирона на поведение животных и биохимические показатели крови оценивали в модели сенсорного контакта у самцов мышей, содержавшихся в условиях социального стресса 20 дней. Превентивное введение проводили ежедневно с 5 по 20 день, лечебное - с 20 дня в течение 14 дней. Вещества вводили внутрибрюшинно, в дозе 1 мг/кг, для сравнения использовали контрольную группу с введением растворителя. Поведение мышей оценивали в тестах: «перегородка», «ПКЛ», «открытое поле», и тест Порсолта.

Поведенческие тесты. Тест «перегородка» позволяет оценить уровень коммуникативности у животных по реакции на партнера (сначала знакомого, потом незнакомого) за перегородкой (Kudryavtseva, 1994). Регистрировали время (с), проведенное особью возле перегородки; число подходов к ней; среднее время за один подход к перегородке (с); число и время (с) ворошения подстилки в клетке; число и время (с) грумингов. Тест «ПКЛ» является одним из общепринятых для оценки тревожного состояния у грызунов (Lister, 1987; Pellow, File, 1986). Лабиринт состоит из двух открытых и двух закрытых рукавов и приподнят над полом. Регистрировали время нахождения животного в открытых рукавах, центре и закрытых рукавах лабиринта (с); число выходов в открытые рукава, центр и закрытые рукава; общее число входов/выходов в рукава и центр; число переходов из одного закрытого рукава в другой; число выглядываний из закрытых рукавов, и число заглядываний под лабиринт. Тест «Открытое поле» для модельных экспериментов проводили на арене, размерами 80x80x25см, с разметкой на квадраты 10x10 см. Фиксировали латентное время (с) первой побежки из центра; число пересеченных мышью квадратов; число и время (с) вертикальных стоек; число и время (с) грумингов. Тест Порсолта используется для оценки состояния депрессивности у животных (Borsini, Meli, 1988; Porsolt et al., 1977). Мышь помещали в цилиндр с водой (Т=25±1°С) и оценивали число и время (с) актов пассивного плавания, а также латентное время (с) до первой иммобильное™ животного.

Методы биохимического исследования. Для определения биохимических показателей крови животных выводили из эксперимента методом декапитации. Кровь забирали в пробирки с гепарином, затем центрифугировали и отделяли плазму. В плазме крови с помощью стандартных наборов реактивов (Biocon) определяли содержание глюкозы, общего белка,

холестерина, триглицеридов. Активность каталазы определяли в реакции с молибдатом аммония (Королюк, Иванова, 1988), концентрацию малонового диальдегида (МДА) - в реакции с тиобарбитуровой кислотой (Камышников, 2000). Измерения выполняли на автоматическом фотометре - 5010 «Boehringer Mannheim» (Германия).

Метод иммуноферментного анализа. Определение уровня эстрадиола в крови проводили с помощью набора «Эстрадиол-ИФА» (ООО «ХЕМА»). Концентрацию гормонов, относящихся к ГГНС, определяли с помощью наборов «Mouse Corticosterone (CORT)», «Mouse adrenocorticotropic hormone (ACTH)», «Mouse Corticotropin-releasing Factor (CRF)» (Cusabio Biotech Co.). Считывание результатов выполняли на фотометре вертикального сканирования («Thermo Scientific Multiskan Ascent», Finland).

Статистическая обработка результатов проведена с использованием программы Statistica 6.0. Данные представлены в виде средних величин и стандартных ошибок среднего. Сравнения проводили при помощи непараметрического U-критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U Test). Данные поведенческого теста «перегородка» (для АЛК и МеЛК) оценивали двухфакторным дисперсионным анализом, с последующим сравнением по критерию Фишера (Fisher LSD). За достоверный уровень значимости принимали р<0,05. Различия на уровне тенденции рассматривали при значениях 0,05<р<0,1.

Третья глава посвящена описанию полученных результатов исследования и их обсуждению с привлечением данных литературы.

Исследование фармакологических свойств ламбертиаиовой кислоты и ее производных.

Определение острой токсичности.

Для амидов ЛК была определена LDso при однократном внутрижелудочном введении мышам: 1500 мг/кг для АЛК и 750 мг/кг для ЗАЛК. Значения LD50 для ЛК - 920 мг/кг и МеЛК -1500 мг/кг были рассчитаны ранее (Толстиков и др., 2011). Полученные данные позволяют отнести все исследуемые агенты к 3-му классу умеренно токсических веществ (согласно ГОСТу, LD50 150-5000 мг/кг). Для широко применяемых анксиолитиков буспирона и диазепама LDso составляет 571-594 мг/кг и 615 мг/кг соответственно (Колла, Шеленкова, 2006; Kadota et al., 1990). Таким образом, исследуемые агенты, а особенно АЛК, обладают низкой токсичностью даже по сравнению с используемыми в клинике препаратами.

Изучение влияния однократного введения ламбертиаиовой кислоты и ее производных на поведение белых беспородных мышей.

Для первичного скрининга ЛК и ее производных была выбрана доза 5 мг/кг, исходя из данных, полученных в лаборатории ранее (Толстиков и др., 2011). Действие соединений было изучено в тесте «открытое поле». Результаты эксперимента показали, что однократное введение исходного соединения - ЛК и ее метилового эфира в указанной дозе не оказывает влияния на поведение животных в данном тесте, все исследуемые параметры оставались на уровне контрольной группы. Однако ее амидные производные АЛК и ЗАЛК оказывали значительное влияние на поведение животных, увеличивая пройденную мышами дистанцию в данном тесте (Таблица 1). Кроме того, у группы с введением ЗАЛК также было повышено число и время вертикальных стоек. Такие изменения свидетельствуют о повышении двигательной и исследовательской активности мышей, то есть данные соединения обладают стимулирующим эффектом в дозе 5 мг/кг.

Таблица 1. Влияние амидов ЛК на поведение беспородных мышей в тесте «открытое поле».

Параметры: Контроль АЛК, 5 мг/кг ЗАЛК, 5 мг/кг

Время движения, с 99,8 ± 2,94 103,5 ±0,91 100,8 ±2,40

Дистанция, см 268,0 ± 18,43 328,3 ±21,63 * 338,7 ± 16,97 *

Число вертикальных стоек 7,0 ± 1,89 12,0 ±2,06 13,9 ± 1,68 *

Время вертикальных стоек, с 10,1 ± 3,02 18,5 ±3,11 22,0 ± 2,73 *

Число заглядываний в норки 4,1 ± 1,09 6,0 ± 0,98 3,6 ± 0,96

Время заглядываний в норки, с 5,5 ± 1,63 7,4 ± 1,31 4,9 ± 1,27

* р<0,05 - по сравнению с контрольной группой;

Далее было исследовано влияние всех изучаемых агентов в дозе 10 мг/кг на поведение животных в тесте «открытое поле». Было установлено, что ЛК и МеЛК в дозе 10 мг/кг, также как и в дозе 5 мг/кг, не оказывают эффектов на поведение животных в данном тесте -увеличение дозы не привело к проявлению их активности. Кроме того, соединение ЗАЛК в дозе 10 мг/кг оказало более слабое влияние на поведение животных по сравнению с дозой 5 мг/кг (Таблица 2). Некоторый стимулирующий эффект данного вещества на двигательную активность мышей был выявлен только по увеличению показателя «время движения». При этом было показано, что АЛК в дозе 10 мг/кг, также как и в дозе 5 мг/кг, обладает стимулирующим эффектом на поведение мышей в тесте «открытое поле». Введение агента увеличивало пройденную животными дистанцию, аналогично дозе 5 мг/кг, а также повышало число и время вертикальных стоек. Таким образом, установлено, что с повышением дозы у агента АЛК проявляется эффект на исследовательскую активность мышей. Поскольку амиды ЛК оказали влияние на поведение мышей в тесте «открытое поле» в дозах 5 и 10 мг/кг, было дополнительно изучено их действие в более низкой дозе - 2,5 мг/кг. Результаты показали, что в данной дозе исследуемые соединения не оказывают влияния на поведение животных, что характеризует эту дозу как неэффективную.

Таблица 2. Влияние амидов ЛК на поведение беспородных мышей в тесте «открытое поле».

Параметры: Контроль АЛК, 10 мг/кг ЗАЛК, 10 мг/кг

Время движения, с 102,0 ±2,9 106,5 ± 1,5 108,9 ±1,7 *

Дистанция, см 291,1 ±27,4 379,3 ±23,1* 358,3 ± 15,1

Число вертикальных стоек 8,4 ± 1,7 14,3 ± 1,7 * 11,4 ± 1,5

Время вертикальных стоек, с 11,8 ±2,6 21,1 ±2,8* 17,1 ±2,8

Число заглядываний в норки 3,6 ± 0,8 3,1 ±0,4 3,1 ±0,7

Время заглядываний в норки, с 4,3± 0,9 3,8 ± 0,6 3,5 ± 0,9

* р<0,05 - по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, в тесте «открытое поле» было выявлено устойчивое стимулирующее действие агентов: АЖ в дозах 5 и 10 мг/кг; ЗАЛК в дозе 5 мг/кг, на основании чего они были выбраны для дальнейшего изучения. При этом исходное соединение - ЛК и МеЛК не оказывали влияние на поведение животных. Все дальнейшие исследования в рамках первичного скрининга были выполнены для амидов ЛК. На следующем этапе скрининга было исследовано действие соединений в дозе 5 мг/кг на поведение мышей в тесте «темная и светлая камера» (Таблица 3). Тест позволяет кроме двигательной и исследовательской активности оценить также уровень тревожности у животных, и соответственно выявить возможный анксиолитический эффект соединений.

Таблица 3. Влияние амидов ЛК на поведение беспородных мышей в тесте «темная и светлая камера».

Параметры: Контроль АЛК, 5 мг/кг ЗАЛК, 5 мг/кг

Время в светлой камере, с 114,4 ± 15,65 85,5 ± 7,35 90,5 ± 4,09

Число переходов 5,1 ± 1,27 8,1 ±0,81 (*) 8,1 ±0,67 (*)

Дистанция, см 372,5 ± 23,70 462,2 ± 36,94 (*) 438,5 ± 17,38*

Число вертикальных стоек 13,1 ±2,04 15,9 ±2,54 16,9 ± 1,78

Время вертикальных стоек, с 19,4 ±2,73 22,1 ±4,06 23,6 ±3,18

Число заглядываний в норки 7,8 ± 0,86 5,3 ± 1,08 4,5 ± 0,86 *

Время заглядываний в норки, с 9,1 ± 1,28 6,1 ± 1,09 (*) 5,3 ± 1,09 *

* р<0,05; (*) 0,05<р<0,1 (тенденция) - по сравнению с контрольной группой.

Результаты показали, что однократное введение АЛК и ЗАЛК не изменяет один из основных параметров, определяюших тревожность мышей в данном тесте - время нахождения в светлой камере, однако влияет на пройденную животными дистанцию, число переходов из одной камеры в другую и заглядывания в норки. Действие ЗАЛК было более выраженным, о чем свидетельствуют достоверные изменения по дистанции и по параметрам исследовательской активности. При этом агент повышал двигательную активность, но снижал исследовательскую. Введение АЛК вызывало аналогичные эффекты, однако, только на уровне тенденции.

Изучение влияния однократного введения ламбертиановой кислоты и ее производных на поведение мышей линии С57ВЬ/6Х

В результате первичного скрининга, проведенного на беспородных мышах, амиды ЛК - АЛК и ЗАЛК были выбраны для проведения второй серии экспериментов - на мышах линии С57В1761, для которых показано развитие тревожной депрессии в модели сенсорного контакта у самцов (К^гуа^эеуа е1 а1., 1991) и социального дискомфорта у самок (Августинович, Коваленко, 2004). Для оценки влияния соединений на поведение животных были также использованы тесты «открытое поле» и «темная и светлая камера». Поскольку влияние соединений на поведение беспородных мышей в тесте «открытое поле» была выявлена в дозах 5 и 10 мг/кг для АЛК и 5 мг/кг для ЗАЛК, именно их исследовали у мышей линии С57ВЬ/6.1. Полученные данные показывают, что введение АЛК в дозах 5 и 10 мг/кг вызывает значительные изменения в поведении мышей линии С57В1ЖГ в данном тесте (Таблица 4).

Таблица 4. Влияние амидов ЛК на поведение мышей линии С57ВЬ/61 в тесте «открытое поле».

Параметры: Контроль АЛК, 5 мг/кг АЛК, 10 мг/кг ЗАЛК, 5 мг/кг

Время движения, с 131,6± 1,6 119,6 ±3,98 ** 127,6 ± 1,42 (*) 120,6 ±3,36**

Дистанция, см 573,0 ± 30,64 461,5 ±34,74 * 481,1 ± 16,86 ** 451,4 ± 16,21 **

Число вертикальных стоек 26,6 ± 1,96 18,9 ±2,51 * 18,2 ±2,33 * 13,1 ± 1,61 ***

Время вертикальных стоек, с 39,8 ± 3,00 33,4 ±4,37 25,4 ±4,30* 16,9 ±2,84***

Число заглядываний в норки 7,3 ± 1,13 7,2 ± 0,76 6,6 ± 0,48 7,2 ± 1,06

Время заглядываний в норки, с 4,5 ± 0,56 5,1 ±0,69 4,4 ± 0,22 10,2 ±4,17

* р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001; (*) 0,05<р<0,1 (тенденция) - по сравнению с контрольной группой.

При этом агент в обеих исследуемых дозах снижает двигательную активность мышей, сокращая время движения (для 10 мг/кг на уровне тенденции) и пройденную дистанцию, а также уменьшает число вертикальных стоек (и время для 10 мг/кг). Введение соединения ЗАЛК аналогично влияет на поведение мышей в данном тесте, снижая 4 перечисленных параметра. Сравнительный анализ данных по поведению беспородных животных и мышей линии С57ВЬ/6.Г в проведенном тесте показывает разнонаправленность действия исследуемых соединений. Это согласуется с широко известным фактом влияния генотипа животных на их поведение и эффекты различных препаратов. Так, установлено, что мыши различных линий ведут себя по-разному в тесте «открытое поле», при этом для линии С57В1У6 характерна высокая двигательная активность (СгаЬЬе, 1986). Мыши данной линии демонстрируют активный тип эмоционально-стрессорной реакции, а однократное введение различных анксиолитических препаратов чаще всего приводит к седативному эффекту (Середенин, и др. 1998, 8егес1етп е1 а1., 2013). Например, при исследовании эффектов феназепама было установлено, что он дозозависимо снижает двигательную активность у мышей С57В1У6 (8егес1ешп с1 а1., 1990). Аналогичный эффект у животных в тесте «открытое поле» показан после однократного введения известного анксиолитика буспирона и других агонистов 5-НТ1Д рецепторов (Тэир е1 а1., 2000). Суммируя результаты по эффектам амидов ЛК на поведение мышей в тесте «открытое поле», можно заключить, что в дозе 5 и 10 мг/кг для АЛК и 5 мг/кг для ЗАЛК агенты в зависимости от генотипа животных стимулируют либо угнетают их двигательную и исследовательскую активность. Влияние АЛК и ЗАЛК в дозе 5 мг/кг было изучено у мышей линии С57ВЬ/6Д в тесте «темная и светлая камера». Введение АЛК приводило к снижению двигательной активности животных, установленному по уменьшению времени движения, снижению числа переходов и сокращению пройденной дистанции (Таблица 5). При этом время нахождения мышей в светлой камере было повышено, что, как известно (СоэСаП (Л а!., 1989), отражает низкую тревожность животных в данном тесте и определяет анксиолитические свойства вещества. Таким образом, несмотря на некоторое седативное действие, агент АЛК проявлял противотревожный эффект в тесте «темная и светлая камера» у мышей линии С57ВЬ/6.Г.

Таблица 5. Влияние АЛК на поведение мышей линии С57В176.Г в тесте «темная и светлая камера».

Параметры: Контроль АЛК, 5 мг/кг

Время в светлой камере, с 127,4 ± 15,60 174,4 ±3,13 **

Число переходов 3,5 ± 1,05 0,8 ±0,51 *

Время движения, с 129,8 ±4,68 104,9 ±7,67 *

Дистанция, см 409,5 ±35,13 273,0 ± 30,95 *

Число вертикальных стоек 7,8 ± 1,76 5,0 ± 1,261

Время вертикальных стоек, с 7,3 ± 1,56 7,0 ± 1,85

Число заглядываний в норки 6,4 ± 0,82 5,8 ± 0,90

Время заглядываний в норки, с 4,5 ± 0,53 4,6 ± 0,86

* р<0,05; ** р<0,01 - по сравнению с контрольной группой.

В то же время введение ЗАЛК не повлияло на поведение животных в данном тесте - все исследуемые параметры оставались на уровне контрольных значений. Это говорит о том, что введение заместителя в структуру амида ЛК снижает его биологическую активность. Такое

предположение согласуется и с установленным отсутствием эффекта ЗАЛК в дозе 10 мг/кг в тесте «открытое поле» у беспородных мышей.

Сравнение эффектов АЛК в тесте «темная и светлая камера» у беспородных мышей и мышей линии С57ВЬ/61 также указывает на зависимые от генотипа различия в поведении животных. В то время, как введение АЛК беспородным мышам вызывает стимулирующий эффект без влияния на тревожность, у мышей линии С57ВЬ/61 наблюдается анксиолитический эффект с угнетающим влиянием на двигательную активность. Такие результаты согласуются с установленным ранее фактом о том, что поведение в тесте «темная и светлая камера» опосредуется генотипом тестируемых животных (Августинович е! а1., 1998; О'Ьеагу е! а!., 2014).

Несмотря на разнонаправленность эффектов амидов ЛК на поведение животных различного генотипа, только для АЛК было выявлено влияние в двух используемых тестах, как на беспородных, так и на линейных мышах, поэтому он был выбран для дальнейшего изучения. Также исследовали МеЛК, поскольку для него ранее был установлен антидепрессивный эффект (Толстиков и др., 2011), и он является перспективной платформой для синтеза различных производных ЛК.

Исследование метилового эфира и незамещенного амида ламбертиановой кислоты в качестве фармакокорректоров экспериментальной тревожной депрессии.

Комплексное исследование эффектов АЛК и МеЛК в дозе 5 мг/кг на формирование тревожно-депрессивного состояния проводили в модели социального дискомфорта у самок мышей (Августинович, Коваленко, 2004). Эффекты превентивного введения АЛК и МеЛК на фоне социального стресса (группы СТРАЛК и СТР_МеЛК) на поведение самок мышей оценивали в тесте «перегородка» (Таблица 6). Результаты, полученные в данном тесте, обрабатывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа («агент х партнер»). Было установлено достоверное влияние фактора «агент» на следующие параметры поведения: ворошение (число и время) самкой мыши подстилки в клетке и время эпизодов груминга, то есть показатели, связанные, прежде всего, со стрессорной реакцией самок мышей. Также было выявлено влияние фактора «агент» на параметры коммуникативного поведения (общее и среднее время возле перегородки) на уровне тенденции. В то же время показатели коммуникативности в значительной степени определялись партнером за перегородкой (фактор «партнер»), причем во всех исследуемых группах животных. Общее и среднее время возле перегородки увеличивалось при замене партнера. При этом, на подсадку незнакомого партнера - то есть новый социальный стимул, самки мышей с введением АЛК отреагировали более выражено, чем мыши с введением МеЛК. Среднее время возле перегородки у животных данных групп изначально не отличалось, но после замены партнера у группы СТР АЛК стало выше, чем у группы СТР_МеЛК. Таким образом, можно говорить о некотором стимулирующем действии АЛК на коммуникативную мотивацию самок мышей. Установлено, что при знакомом партнере, самки СТР_АЛК чаще и дольше ворошили подстилку, чем животные групп СТР_р и СТР_МеЛК. Поскольку это наблюдалось в ситуации со знакомым самцом за перегородкой, и не обусловлено привнесением каких-либо новых стимулов, можно считать, что наблюдаемое повышение ворошения опилок отражает повышение общей двигательной активности в клетке у самок под действием АЛК. Следует отметить, что у мышей СТР МеЛК повысилась стресс обусловленная смещенная активность в реакции на незнакомого партнера, оцениваемая по длительности грумингов. В целом, можно заключить, что длительное введение АЛК, в отличие от МеЛК, самкам мышей на фоне продолжающегося социального дискомфорта снижает их стрессированность, повышая коммуникативную и двигательную активность.

Таблица 6. Влияние превентивного введения АЛК и МеЛК на поведение самок мышей в тесте «перегородка».

Параметры: СТР_р СТР_МеЛК СТРАЛК

В реакции на знакомого партнера за перегородкой

Число подходов 12,7 ± 1,35 12,5 ±0,59 12,5 ±0,93

Время у перегородки, с 80,9 ± 9,79 64,9 ±5,13 61,3 ±6,93

Среднее время, с 6,7 ± 0,67 5,3 ± 0,46 4,9 ± 0,46

Число ворошениий 3,9 ± 1,08 1,9 ±0,80 6,6 ± 1,49 (#) $$

Время ворошения, с 10,3 ±3,89 6,4 ± 2,40 27,8 ± 7,69 ## $$

Число грумингов 6,4 ± 1,06 8,2 ± 1,09 9,4 ± 2,38

Время грумингов, с 26,5 ± 5,80 41,1 ±7,76 24,8 ± 7,55

В реакции на незнакомого партнера за перегородкой

Число подходов 14,6 ±0,99 14,4 ± 1,66 13,2 ±0,73

Время у перегородки, с 154,8 ± 11,36 *** 126,9 ± 11,90 *** 142,2 ±7,81 ***

Среднее время, с 11,0 ±0,99 *** 9,1 ±0,48 *** 11,2 ±0,86 *** $

Число ворошениий 2,8 ±0,71 1,9 ±0,65 3,8 ± 0,72 *

Время ворошения, с 6,6 ± 1,86 4,6 ± 1,71 9,3 ± 1,67 ***

Число грумингов 6,6 ± 1,27 9,1 ± 1,07 8,3 ± 1,58

Время грумингов, с 13,6 ±2,85 37,6 ± 7,39 # 21,1 ±2,82

* р<0,05; *** р<0,001 - по сравнению с аналогичным параметром в реакции на знакомого партнера (для каждой группы); # р<0,05; ## р<0,01; (#) 0,05<р<0,1 (тенденция) - по сравнению с группой СТР_р; $ р<0,05; $$ р<0,01 - по сравнению с группой СТР МеЛК.

Результаты поведенческого тестирования согласуются с результатами анализа показателей массы надпочечников (Рис. 1), которая рассматривается как объективный критерий состояния организма при стрессе.

0,4 0,3 0,2 0,1 0

Мг/г

Масса надпочечников

______________________________#__________________________##

ИНТ

$(л)

—•£-

СТР_б/в СТР_р СТР МеЛК СТР_АЛК

Рис. 1. Влияние превентивного введения АЛК и МеЛК на массу надпочечников самок мышей. ИНТ - интактные животные, СТР_б/в - стрессированные мыши без введения агентов, СТР_р -стрессированные мыши с введением растворителя (воды), СТР_МеЛК и СТР_АЛК -стрессированные мыши с введением соответствующего агента.

** р<0,01; *** р<0,001 - по сравнению с группой ИНТ; # р<0,05; ## р<0,01 - по сравнению с группой СТР_б/в; $ р<0,05 - по сравнению с группой СТР_МеЛК; (л) р<0,1 (тенденция) - по сравнению группой СТР_р.

В условиях длительного социального дискомфорта без введения каких-либо веществ у самок группы СТР_б/в развивается выраженная гипертрофия надпочечников, которая еще более усиливается на фоне хронического введения растворителя (группа СТР_р). Введение МеЛК на фоне стресса (группа СТР_МеЛК) не предотвращает это увеличение. У мышей СТРАЛК, напротив, наблюдается статистически значимое снижение массы надпочечников относительно группы СТРМеЛК, и на уровне тенденции - относительно группы СТР_р. Однако значение остается достоверно большим, чем у интактных самок мышей. Таким образом, несмотря на то, что новый агент АЛК не снимает полностью негативного влияния условий социального дискомфорта, он существенно ослабляет это стрессорное воздействие на самок мышей, особенно по сравнению с МеЛК.

При исследовании биохимических показателей крови было установлено повышение активности каталазы в плазме крови самок СТР_АЛК (Таблица 7). Это является еще одним доказательством стресс-протекторного эффекта незамещенного амида ламбертиановой кислоты. Введение МеЛК не оказывало аналогичного эффекта. Известно, что одним из патогенных механизмов стресса является неспецифическое повышение уровня перекисного окисления, прежде всего липидных мембран (Зенков и др., 2001). На этом фоне повышение активности ферментов (каталаза, пероксидаза, супероксиддисмутаза) эндогенной антиоксидантной системы рассматривается как защитная реакция организма, направленная на повышение общей резистентности в ответ на патогенные стимулы.

Таблица 7. Влияние превентивного введения АЛК и МеЛК на биохимические показатели крови самок мышей.

Показатели: СТР_р СТРМеЛК СТРАЛК

Глюкоза, моль/л 7,96 ±0,18 7,68 ±0,39 7,37 ± 0,36

Общий белок, г/л 58,99 ±0,89 61,02 ± 1,71 60,01 ± 1,78

Триглицериды, мкмоль/л 1,81 ±0,07 1,72 ±0,08 1,64 ±0,07 (*)

Холестерин, ммоль/л 2,17 ±0,13 2,24 ±0,13 2,37 ± 0,07 (*)

Каталаза, ед/л 28,62 ± 1,02 33,64 ± 3,05 36,49 ± 1,41 ***

*** р<0,001; (*) 0,05<р<0,1 (тенденция) - по сравнению с группой СТР_р.

Уровень эстрадиола был выбран для исследования исходя из литературных данных о том, что он может вносить свой вклад в стресс-индуцированное развитие тревожности и депрессии, как у людей, так и у животных (Brummelte, Galea, 2010; Waif, Frye, 2005). Результаты показали, что содержание самок в условиях социального дискомфорта (группа СТР_б/в) не вызывает значимого изменения уровня эстрадиола по сравнению с интактными особями. Введение растворителя и МеЛК (группы СТР_р и СТР_МеЛК) также не оказывало достоверного влияния на уровень гормона в крови. Однако у самок СТР_АЛК наблюдалось снижение уровня эстрадиола относительно интактных животных, при отсутствии различий с остальными группами, что позволяет предположить специфическое влияние этого агента на уровни половых гормонов самок мышей. В связи с этим обращает на себя внимание тенденция к повышению свободного холестерина в плазме крови самок СТР АЛК (Таблица 7). Возможно, АЛК вызывает некоторое снижение интенсивности стероидогенеза вследствие нарушения захвата свободного холестерина стероид-продуцирующими клетками, что приводит к повышению его концентрации в циркулирующей крови. Стоит отметить, что агент АЛК на уровне тенденции снижал уровень триглицеридов в крови. Учитывая тревожно-депрессивный статус самок, обнаруженный эффект можно расценивать как положительный, поскольку показано повышение

уровня триглицеридов в крови пациентов, страдающих аффективными расстройствами (Липей е! а1., 2014). При этом длительное введение обоих производных ЛК не приводит к значимым сдвигам основных метаболических показателей (уровень глюкозы и общего белка).

Таким образом, новый агент АЛК, в отличие от МеЛК, оказывал положительное влияние на состояние самок мышей на фоне сохраняющегося стрессорного воздействия. На основе выявленного стресс-протекторного эффекта АЛК целью дальнейшего исследования стало углубленное изучение его влияния на ГГНС в модели тревожной депрессии.

Изучение влияния незамещенного амида ламбертиановой кислоты на гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему мышей в модели тревожной депрессии.

Эффекты превентивного введения АЛК изучали у самцов мышей в модели сенсорного контакта. Было установлено, что формирование тревожно-депрессивного состояния у самцов мышей в модели сенсорного контакта (группа СТР_б/в), также как и у самок, сопровождалось гипертрофией надпочечников (Рис. 2). Дополнительное воздействие, состоящее в ежедневном введении растворителя животным группы СТР_р не отразилось на данном показателе, в отличие от самок мышей. Введение АЛК не оказывало эффекта на изменение массы надпочечников у самцов мышей.

, , Масса надпочечников

Мг/г

** т *** ......:т:::г -

-5-

ИНТ СТР_б/в СТР^> СТР_АЛК

Рис. 2. Влияние превентивного введения АЛК на массу надпочечников самцов мышей. ИНТ - интактные животные, СТР_б/в - стрессированные мыши без введения агентов, СТР_р -стрессированные мыши с введением растворителя (воды), СТР АЛК - стрессированные мыши с введением АЛК.

** р<0,01; *** р<0,001 - по сравнению с самцами мышей группы ИНТ.

Анализ результатов двух экспериментов (для самцов и для самок мышей) показывает, что 30-дневный социальный стресс (СТР_б/в), используемый в обеих моделях, приводит к достоверному повышению массы надпочечников у животных, выраженному, однако, в разной степени. Так, по сравнению с интактными животными, у самок мышей социальный дискомфорт приводит к увеличению данного показателя на 24%, а сенсорный контакт у самцов - на 51%. При этом в группах СТР_р изменения сходные - 50% у самок и 55% у самцов. Таким образом, выбранные условия социального стресса у самцов мышей приводят к более выраженной гипертрофии надпочечников, чем условия стресса в модели у самок. Это, вероятно, объясняет отсутствие увеличения массы надпочечников у самцов группы СТР_р по сравнению с группой СТР_б/в, несмотря на дополнительное стрессорное воздействие. Более того, возможно, именно такие сильные изменения обусловливают неэффективность АЛК в предотвращении гипертрофии надпочечников у самцов мышей в модели сенсорного контакта. Вероятно, для

стресс-протекторного эффекта АЛК у самцов мышей требуется более высокая доза, или более длительное введение.

Изучение действия АЛК на ГГНС проводили при помощи определения уровня трех основных гормонов данной системы: кортикостерона, АКТГ и КРФ. Результаты показали, что длительный социальный стресс не вызывает изменения базового уровня гормонов ГГНС у самцов мышей в используемой модели (Рис. 3). Однако, дополнительное стрессирование группы СТР_р, в виде ежедневного введения растворителя, вызывало снижение АКТГ на уровне тенденции по сравнению с интактными животными. Еще большие изменения по этому параметру наблюдались у группы СТР_АЛК, для которой было показано достоверное понижение уровня АКТГ относительно интактных самцов мышей. Кроме того, длительное введение данного агента приводило к достоверному снижению уровня КРФ, как относительно интактных животных, так и по сравнению с группой СТР_р. Также введение АЛК вызывало заметное повышение уровня кортикостерона у животных, однако, статистически недостоверное (Рис. 3).

440

%

Уровни гормонов ГГНС

100 • 80 60 40 20 0

# **

СТР б/в

СТР_р

СТР АЛК

Рис. 3. Влияние превентивного введения АЛК на уровни гормонов ГГНС в крови самцов мышей.

Белые столбики - кортикостерон, серые - АКТГ, черные - КРФ. За 100% принят уровень гормона у интактных животных (черная линия). Пунктиром обозначен разрыв оси. Ошибка среднего для значения кортикостерона у группы СТР_АЛК составляет 184,75% (не приведена на графике). СТР_б/в - стрессированные мыши без введения агентов, СТР_р - стрессированные мыши с введением растворителя (воды), СТР_АЛК - стрессированные мыши с введением АЛК. ** р<0,01; (*) р<0,1 (тенденция) - по сравнению с интактными самцами мышей. # р<0,05 - по сравнению с СТР_р.

Данные, полученные для группы СТР_б/в, показали, что в используемой модели, после 30 дней социального стресса, у животных не наблюдается значимых изменений в базовых уровнях гормонов ГГНС. При этом, гиперактивация ГГНС, вероятно все таки происходит, на что указывает найденная значительная гипертрофия надпочечников. Поскольку в клинике повышение базового уровня кортизола происходит только у части депрессивных больных (Steckler et al., 1999), а более часто наблюдается нарушение обратной связи в данной системе (van Praag, 2005), можно предположить похожий процесс в используемой модели. Согласно этой гипотезе, у мышей происходят динамические изменения в ГГНС, которые на стадии

сформированного тревожно-депрессивного состояния приводят уже к более глубоким последствиям, не затрагивающим базовые уровни гормонов. Наиболее вероятные из них - это изменения в рецепторном звене, и нарушение обратной связи. Однако, у депрессивных больных часто наблюдается повышение секреции КРФ (Owens, Nemeroff, 1993), которое рассматривают как один из основных факторов патогенеза тревожных и депрессивных расстройств. Исходя из этого снижение уровня КРФ в группе СТР_АЛК, возможно, является ключевым моментом в стресс-протекторном влиянии незамещенного амида ламбертиановой кислоты, найденном у самок мышей. В любом случае, AJIK, несомненно, обладает широким спектром действия на ГГНС, что требует дальнейшего более детального изучения.

Исследование буспиглизина в качестве корректора тревожно-депрессивного состояния

мышей

Эффекты комплекса буспирона с ГК - буспиглизина оценивали у самцов мышей в модели тревожной депрессии как после превентивного, так и после лечебного введения.

Влияние буспиглизина на поведение мышей в модели тревожной депрессии.

Превентивное введение. В тесте «перегородка» при превентивном введении (Рис. 4) был выявлен достоверный положительный эффект буспиглизина на параметры коммуникативного поведения животных. В реакции на знакомого партнера мыши чаще подходили к перегородке, по сравнению с контрольной группой, а также проводили больше времени у перегородки, по сравнению с мышами с введением буспирона. В отличие от буспиглизина, буспирон не оказывал значимого действия на поведение животных при данном режиме введения. При этом оба вещества не оказывали влияния на поведение самцов мышей в реакции на незнакомого партнера (Рис. 4).

Число подходов к перегородке

20------А..*.....

15 10 5 0

i I

Знакомый партнер Незнакомый партнер

Время у перегородки

200 150 100 50 0

Знакомый партнер Незнакомый партнер

Рис. 4. Влияние превентивного введения буспиглизина и буспирона на поведение мышей в тесте «перегородка».

** р<0,01 — по сравнению с контрольными животными; # р<0,05 — по сравнению с буспироном. Белые столбцы - контрольная группа, серые - буспирон, черные - буспиглизин.

В тесте «ПКЛ» было установлено, что превентивное введение буспирона не повлияло на поведение мышей (Таблица 8). При этом буспиглизин оказывал воздействие на уровне тенденции на большинство фиксируемых параметров. Мыши чаще выходили в центр лабиринта и больше времени проводили там по сравнению с контрольной группой. При этом животные меньше времени находились в закрытых рукавах. Также увеличивалось общее количество входов/выходов в рукава и центр лабиринта, и количество заглядываний под лабиринт.

Таблица 8. Влияние превентивного введения буспиглизина и буспирона на поведение мышей в тесте «ПКЛ».

Параметры поведения Контроль Буспирон Буспиглизин

Тест «ПКЛ»

Число выходов в центр 6,9 ± 1,25 8,1 ± 1,38 12,0 ± 2,23 (*)

Число заходов в закрытые рукава 6,3 ± 1,06 6,7 ± 1,17 9,6 ± 1,63

Число выходов в открытые рукава 0,6 ± 0,26 1,1 ±0,34 2,4 ± 0,94

Время в центре, с 33,8 ± 7,49 59,1 ± 14,82 54,9 ± 9,83 (*)

Время в закрытых рукавах, с 263,1 ± 8,46 234,7 ± 16,08 231,3 ± 14,54 (*)

Время в открытых рукавах, с 3,0 ± 1,48 6,1 ±2,20 13,8 ±5,94

Общее число входов/выходов 13,8 ±2,48 15,9 ±2,77 24,0 ± 4,46 (*)

Число выглядываний 4,6 ± 0,75 4,8 ± 0,78 4,3 ± 0,95

Число заглядываний под лабиринт 2,3 ± 0,94 3,1 ±0,53 5,3 ± 1,61(*)

Число переходов 3,9 ± 1,06 3,8 ± 1,04 6,2 ± 1,40

(*) 0,05<р<0,1 (тенденция) -по сравнению с контрольными животными

В тесте «открытое поле» превентивное введение, как буспиглизина, так и буспирона не повлияло на оцениваемые параметры поведения животных. В тесте Порсолта не установлено влияния превентивного введения обоих веществ на поведение животных.

Полученные результаты показали, что анксиолитик буспирон при превентивном введении не оказывал влияния на поведение животных во всех исследуемых тестах. Таким образом, введение препарата на фоне формирования тревожно-депрессивного состояния у животных было неэффективным. Возможно, это связано с сохранением продолжающегося социального стресса, поскольку известно, что социальные факторы могут влиять на анксиолитическую активность буспирона как при тестировании животных, так и при лечении пациентов с генерализованным тревожным расстройством (Majercsik et al., 2003). В отличие от буспирона, буспиглизин проявляет заметное положительное действие на поведение животных в двух тестах - «перегородка» и «ПКЛ». В тесте «перегородка» буспиглизин оказывал положительное влияние на коммуникативность животных, при этом результаты теста «открытое поле» показывают, что такой ответ не обусловлен действием на их двигательную активность. Таким образом, образование комплекса буспирона с ГК способствует сохранению коммуникативности мышей даже в условиях продолжающего социального стресса. В тесте «ПКЛ», оценивающем поведение мышей в незнакомой для них ситуации, изменения были на уровне тенденции, но они затрагивали основные параметры, определяющие тревожность грызунов (Pellow, File, 1986). Превентивное введение буспиглизина оказывало анксиолитический эффект, оцениваемый по предпочтению животными открытой территории. Кроме того, буспиглизин повышал число заглядываний под лабиринт и общее число входов/выходов в рукава и центр, что свидетельствует о его стимулирующем влиянии на исследовательскую активности животных. Поведение мышей в «открытом поле» и тесте Порсолта после введения буспиглизина не изменялось, вероятно, из-за их большей аверсивности, то есть эффекты буспиглизина проявляются только в мягких условиях тестирования животных.

Предположительный механизм действия буспиглизина может быть связан с повышением биодоступности входящего в его состав буспирона за счет клатрирования, то есть образования супрамолекулярных структур. Такие структуры состоят из двух или более молекул ГК и молекулы буспирона, стабилизированных межмолекулярными водородными и ионными

связями. Известно, что значительная часть буспирона метаболизируется в печени, и только 4% от введенной дозы остается в крови в неизменном виде (Loane, Politis, 2012). Вероятно, клатрат буспирона с ГК - буспиглизин внутри организма препятствует метаболизму буспирона, что способствует пролонгированному действию анксиолитика на рецепторы. На этом фоне может происходить ускоренная десенситизация 5-HTja ауторецепторов, что, как считают исследователи (Blier, Ward, 2003), обуславливает анксиолитический эффект буспирона. Кроме того, ГК обладает самостоятельными эффектами, такими как противовоспалительный, анальгезирующий, жаропонижающий, гепатопротекторный и другие (Толстикова et al., 2010). Это может положительно влиять на общее состояние организма, нормализуя соматические нарушения, часто сопровождающие тревожные расстройства и депрессии (Simon et al., 1999).

Лечебное введение. В тесте «перегородка» при лечебном введении было установлено, что животные с введением буспирона проводили больше времени у перегородки в реакции на знакомого партнера. При этом оба вещества не оказывали влияния на поведение самцов мышей в реакции на незнакомого партнера (Рис. 5).

Число подходов к перегодке

20

15 10

0

Знакомый партнер Незнакомый партнер

Время у перегородки

200

Знакомый партнер Незнакомый партнер

Рис. 5. Влияние лечебного введения буспиглизина и буспирона на поведение мышей в тесте «перегородка».

* р<0,05 - по сравнению с контрольными животными; Белые столбцы - контрольная группа, серые - буспирон, черные - буспиглизин.

Полученные результаты показали, что при лечебном введении буспирона тревожно-депрессивным мышам повышалась их коммуникативность в тесте «перегородка». Введение буспиглизина, в котором содержание буспирона снижено в 11 раз, не оказывало влияния на поведение мышей в данном тесте. Следовательно, когда у животных сформировано выраженное тревожно-депрессивное состояние, положительное действие буспирона проявляется в зависимости от его дозы. В тесте «открытое поле» буспиглизин не оказывал влияния на поведение животных — все показатели оставались на уровне контрольной группы (Рис. 6). Буспирон при лечебном введении повышал латентное время побежки с центрального квадрата и снижал количество пересеченных квадратов, как в центре, так и на периферии. При этом было замечено, что 67% мышей (8 из 12 особей), которым вводили буспирон, при посадке на тестовую арену вообще не проявляли двигательной активности до окончания теста, оставаясь на одном месте. По остальным поведенческим паттернам (груминг и стойки) не обнаружено значимых различий между группами.

Латентное время первой

побежки

*.....

Число пересеченных квадратов

50 40 30 20 10 0

Центр

Периферия

Рис. 6. Влияние лечебного введения буспиглизина и буспирона на поведение мышей в тесте «открытое поле».

* р<0,05 - по сравнению с контрольными животными; # р<0,05 - по сравнению с буспироном; Белые столбцы — контрольная группа, серые — буспирон, черные — буспиглизин.

В тесте «ПКЛ» лечебное введение буспиглизина повышало время, проведенное в закрытых рукавах лабиринта, и снижало время, проведенное в центре (Таблица 9). Кроме того, у мышей с введением буспиглизина было снижено общее число входов/выходов в рукава и центр лабиринта и число переходов (на уровне тенденции), а также повышено число выглядываний из закрытых рукавов. Буспирон при лечебном введении так же, как и буспиглизин, вызывал снижение общего числа входов/выходов в рукава и центр лабиринта, а также снижение количества переходов между закрытыми рукавами (на уровне тенденции) (Таблица 9). В тесте Порсолта не установлено влияния обоих веществ на поведение животных при лечебном введении.

Таблица 9. Влияние лечебного введения буспиглизина и буспирона на поведение мышей в тесте «ПКЛ».

Параметры поведения: Контроль Буспирон Буспиглизин

Тест «ПКЛ»

Число выходов в центр 8,4 ± 1,11 3,9 ±0,71 ** 4,7 ± 0,73 *

Число заходов в закрытые рукава 7,1 ± 1,02 3,0 ± 0,77 ** 3,8 ± 0,66 *

Число выходов в открытые рукава 1,3 ±0,43 0,6 ± 0,22 0,8 ± 0,25

Время в центре, с 86,8 ± 15,31 134,7 ±39,20 37,7 ± 7,04 * #

Время в закрытых рукавах, с 205,2 ± 15,73 160,8 ±39,46 259,2 ±7,12 *#

Время в открытых рукавах, с 7,8 ±2,97 4,6 ± 2,03 3,2 ± 1,06

Общее число входов/выходов 16,8 ±2,21 7,5 ± 1,51 ** 9,3 ±1,47**

Число выглядываний 3,6 ± 0,62 2,8 ±0,76 5,1 ±0,56 (*)#

Число заглядываний под лабиринт 3,6 ± 0,69 2,1 ±0,59 2,5 ±0,71

Число переходов 3,7 ± 0,92 1,5 ±0,65 (*) 1,8 ±0,63 (*)

* р<0,05; ** р<0,01; (*) 0,05<р<0,1 (тенденция) - по сравнению с контрольными животными; # р<0,05 - по сравнению с буспироном.

Лечебное введение буспирона негативно влияло на двигательную активность мышей в тесте «ПКЛ». Замечено, что часть особей (4 из 12) при посадке в центр лабиринта не покидали его и оставались на одном месте в течение всего времени тестирования. Другие животные (6 из 12) сразу уходили в закрытый рукав, и оставались там неподвижными. Сходный с буспироном

эффект был у буепиглизина при лечебном введении — он вызывал снижение двигательной активности животных. При этом большая часть мышей после посадки в центр лабиринта переходили в закрытый рукав, и длительное время находились там. Однако, у мышей после введения буепиглизина, в отличие от буспирона, было повышено число выглядываний из закрытых рукавов, что может свидетельствовать о некотором снижении тревожности у животных, которое проявляется в увеличении исследовательской активности (Griebel, Holmes, 2013). Результаты, полученные в тесте «открытое поле» также как и данные, полученные в тесте «ПКЛ», свидетельствуют о значительном седативном действии буспирона. В то же время буспиглизин не оказывал седативного влияния на животных в тесте «открытое поле».

Эффекты буспирона при лечебном введении, возможно, объясняются разным участием пре-и постсинаптических 5-HTia рецепторов мозга. Известно, что плотность и/или чувствительности 5-HTiA рецепторов у людей снижается в разных отделах мозга при тревожных расстройствах (Lanzenberger et al., 2007; Neumeister et al., 2004) и депрессии (Drevets et al., 2007; Sargent et al., 2000). Аналогичное было показано для животных. Мыши нокаутные по гену серотонинового транспортера, проявляющие поведенческие признаки депрессии (Holmes et al., 2003), имеют сниженную плотность 5-НТ]д рецепторов (Li et al., 2004). Мыши нокаутной линии по 5-HTia рецепторам проявляют тревожное поведение в тестах «открытое поле», «ПКЛ» и «темная и светлая камера» (Heisler et al., 1998). Ранее на модели тревожной депрессии были получены данные, которые также свидетельствуют о снижении чувствительности 5-HTia рецепторов мозга у мышей (Августинович и др., 2004; Августинович, Фомина, 2012). Следовательно, лечебное введение буспирона и буепиглизина происходит на фоне сформированной десенситизации. По данным, представленным в литературе, в таких условиях происходит конкуренция между эндогенным серотонином и вводимым буспироном за связывание 5-HTia рецепторов (Blier, Ward, 2003). При этом буспирон, связанный с 5-HTja рецепторами проявляет «частичный агонизм», то есть не вызывает равный по силе серотонину ответ, и таким образом снижает трансмиссию в системе эндогенного серотонина. Возможно, этим объясняется отсутствие выраженного анксиолитического эффекта буепиглизина, а также седативный эффект обоих веществ. Не исключено также, что выраженный анксиолитический эффект буспирона и буепиглизина был бы обнаружен при более длительном введении, поскольку известно, что в клинике анксиолитическое действие буспирона проявляется только через 4 недели (Goa, Ward, 1986). Во всяком случае, результаты теста «перегородка», обнаруживающие положительный эффект буспирона на коммуникативность мышей даже после небольшого срока введения (2 недели) свидетельствуют в пользу данного предположения.

В целом можно заключить, что буспирон и буспиглизин оказывают различное действие на поведение животных в зависимости от стадии развития тревожно-депрессивного состояния. На фоне действующего социального стресса буспиглизин оказывает протекторное влияние (в отличие от буспирона), в значительной степени препятствуя развитию тревожности у животных и способствуя сохранению коммуникативности у мышей. Лечебное введение буспирона и буепиглизина приводит к снижению двигательной активности у тревожно-депрессивных животных, при этом у буепиглизина оно менее выражено. Предполагается, что действие буспирона определяется разной чувствительностью 5-HTia серотониновых рецепторов мозга, меняющейся на фоне действия социального стресса при формировании тревожно-депрессивного статуса у мышей. При этом комплексообразование буспирона с ГК вносит свои положительные коррективы на поведение животных при обоих способах введения -превентивном и лечебном.

Влияния буспиглизина на биохимические показатели крови у мышей в модели тревожной депрессии

Результаты исследования показали, что при обоих типах введения ни буспирон, ни буспиглизин не влияли на уровень глюкозы и содержание белка в крови, то есть показатели энергетических и структурных ресурсов организма. Не обнаружено влияния исследуемых веществ и на содержание холестерина и триглицеридов в крови тревожно-депрессивных мышей. Следовательно, как превентивное, так и лечебное введение буспирона и буспиглизина не влияет на показатели липидного обмена в организме. Таким образом, в нашей работе было показано отсутствие влияния исследуемых веществ на основные биохимические показатели крови у животных. В то же время эффекты буспиглизина и буспирона были найдены при оценке показателей оксидативного стресса. Одним из неспецифических факторов, определяющим функциональные изменения на фоне социального стресса, является усиление перекисного окисления липидов (ПОЛ), и как следствие повышение уровня МДА. На этом фоне происходит ответная активация антиоксидантной системы организма, важнейшим компонентом которой является фермент каталаза. Однако длительное воздействие социального стресса в используемой модели приводит к истощению антиоксидантной системы и снижению активности каталазы у тревожно-депрессивных мышей, как было показано ранее (Августинович и др., 2003). В результате проведенных экспериментов было установлено, что превентивное введение буспиглизина не оказывало эффекта на активность каталазы, а также уровень МДА (Рис. 7). В то же время превентивное введение буспирона приводило к повышению активности каталазы.

Мкмоль/л

МДА

60 40 20 0

50 40 30 20 10

Активность каталазы

Ед/л ^

#

1

Рис. 7. Влияние превентивного введения буспиглизина и буспирона на уровень МДА и активность каталазы.

Белые столбцы - контрольная группа, серые - буспирон, черные - буспиглизин; * р<0,05 - по сравнению с контрольными животными; # р<0,05 - по сравнению с буспироном.

Лечебное введение буспирона оказывало более выраженный эффект, изменяя оба показателя: повышая активность каталазы, и снижая содержание МДА в крови животных (Рис. 8). Буспиглизин также повышал активность каталазы, причем данный эффект по силе не уступал буспирону.

Активность каталазы

Ед/л

Рис. 8. Влияние лечебного введения буспиглизина и буспирона на уровень МДА и активность каталазы.

Белые столбцы - контрольная группа, серые - буспирон, черные - буспиглизин; * р<0,05 - по сравнению с контрольными животными;

Поскольку развитие оксидативного стресса характерно для депрессии и тревожных расстройств, одним из положительных эффектов терапии можно считать нормализацию процессов ПОЛ (Кго1оуу й а1., 2014; ЬоргеБЙ е1 а1., 2014). Результаты экспериментов показали, что буспирон обладает такой активностью при превентивном и лечебном введении в используемой модели, причем эффект лечебного введения более выражен, поскольку нормализует оба исследуемых параметра. Буспиглизин также способен активировать антиоксидантную систему организма при лечебном введении, несмотря на сниженную в нем дозу буспирона в 11 раз. Также стоит отметить, что эффект буспиглизина заметен уже через 2 недели, хотя при терапии антидепрессантами даже 6 недель приема не нормализуют показатели оксидативного стресса, а значительные изменения заметны только через 3 месяца лечения (Ьоргевй е1 а1., 2014; 5агапёо1 е! а1., 2007). Таким образом, более длительное введение буспиглизина, возможно, позволит достигнуть эффекта и на уровень МДА, поскольку активация антиоксидантной системы происходит уже на небольших сроках введения. Это говорит о перспективности использования буспиглизина, вместо буспирона при длительном лечении, и является одним из возможных способов снижения дозы анксиолитика, и соответственно, его побочных эффектов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе исследованы агенты, полученные с использованием двух подходов к разработке лекарственных средств на основе растительных соединений: химическая модификация природного дитерпеноида - ЛК и комплексообразование буспирона с ГК.

Исследование эффектов ЛК и ее производных (МеЛК, АЛК, ЗАЛК) на поведение мышей различных генотипов показало, что только амиды ЛК обладают активностью при однократном введении. Установлено, что данные агенты проявляют зависимые от генотипа мышей свойства: стимулирующий эффект на двигательную и исследовательскую активность у беспородных животных и анксиолитический эффект с седативным влиянием на двигательную активность у мышей линии С57ВЬ/6Д. Показано, что превентивное введение АЛК в модели тревожной депрессии у самок мышей обладает стресс-протекторным влиянием: положительно действует на коммуникативность и двигательную активность животных в условиях социального стресса, повышает активность антиоксидантной системы организма, а также на уровне тенденции препятствует развитию гипертрофии надпочечников. Для изучения возможного механизма стресс-протекторного действия АЛК проведено исследование его влияния на уровни гормонов

24

ГГНС. Выявлены значительные изменения в уровнях АКТГ и КРФ, но неоднозначность полученных данных требует дополнительных более детальных исследований. Таким образом, АЛК является перспективным соединением для применения в качестве протекторного средства на фоне развития стресс-индуцированной тревожной депрессии.

Вторая часть работы посвящена исследованию буспиглизина - нового комплекса буспирона с ГК, в котором доза исходного препарата снижена в 11 раз. Исследование показало, что действие буспирона и буспиглизина на поведение животных зависит от стадии развития тревожно-депрессивного состояния. Установлено, что превентивное введение буспиглизина оказывает протекторное влияние (в отличие от буспирона), в значительной степени препятствуя развитию тревожности у животных и способствуя сохранению их коммуникативности. При лечебном введении буспиглизин активирует антиоксидантную систему организма, и позволяет снизить седативное влияние буспирона на поведение тревожно-депрессивных животных. На основании результатов предложена гипотеза, согласно которой эффективность агентов определяется разной чувствительностью 5-НТ|,\ рецепторов мозга, меняющейся на фоне действия социального стресса. Исходя из вышеизложенных данных, можно заключить, что такой подход, как комплексообразование буспирона с ГК является перспективным для создания низкотоксичного аналога буспирона для профилактики тревожно-депрессивных расстройств.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что амиды (замещенный и незамещенный) ламбертиановой кислоты при однократном введении в дозе 5мг/кг действуют на поведение животных в зависимости от их генотипа, проявляя стимулирующий эффект у беспородных мышей и анксиолитический эффект с седативным действием у мышей линии С57ВЬ/6Д.

2. Установлено, что при развитии тревожной депрессии у самок мышей незамещенный амид ламбертиановой кислоты в дозе 5мг/кг обладает стресс-протекторным действием, способствуя нормализации поведения и биохимических показателей крови животных. При превентивном введении амида также показана тенденция к снижению гипертрофии надпочечников у самок мышей.

3. Превентивное введение незамещенного амида ламбертиановой кислоты приводит к снижению уровней адренокортикотропного гормона и кортикотропин-рилизинг-фактора у животных, что может являться ключевым фактором в механизме стресс-протекторного действия агента, опосредованном через гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему.

4. Установлено, что на фоне социального стресса, превентивное введение буспиглизина в дозе 1мг/кг, в отличие от буспирона в дозе 1мг/кг, препятствует развитию тревожности у животных и способствует сохранению их коммуникативности.

5. При лечебном введении буспиглизин в дозе 1мг/кг активирует антиоксидантную систему организма и проявляет меньшее седативное действие, чем буспирон в дозе 1мг/кг, на фоне экспериментальной тревожной депрессии.

6. Изученные агенты терпенового ряда — незамещенный амид ламбертиановой кислоты и буспиглизин рекомендованы как перспективные соединения для расширенного доклинического исследования в качестве фармакокорректоров при развитии стресс-индуцированной тревожной депрессии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фомина (Маренина) М.К. Антидепрессивный эффект буспирона у мышей, испытавших длительный социальный стресс / М.К. Фомина (Маренина), Д.А. Смагин, Д.Ф. Августинович // Материалы XXI Съезда Физиологического Общества им. И.П. Павлова. -Калуга, 2010. - С. 646-647.

2. Avgustinovich D.F. Depression in females: difficulties in modelling and pharmacological studies / D.F. Avgustinovich, I.L. Kovalenko, G.B. Vishnivetskaya, M.K. Fomina (Marcnina) // Abstract from 11 th ECNP Regional Meeting. - St. Petersburg, 2011. - P. S111 -S112.

3. Фомина (Маренина) M.K. Изменение чувствительности 5-HTia рецепторов у самок мышей в динамике развития тревожно-депрессивного состояния // Материалы XLIX Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс». - Новосибирск, 2011. - С. 45.

4. Августинович Д.Ф. Эффекты хронического введения комплекса буспирона с глицирризиновой кислотой на биохимические показатели крови тревожно-депрессивных мышей / Д.Ф. Августинович, М.К. Фомина (Маренина), И.В. Сорокина, Т.Г. Толстикова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -2011.-№ 1.-С. 2830.

5. Фомина (Маренина) М.К. Эффекты комплекса буспирона с глицирризиновой кислотой на поведение и биохимические показатели крови мышей, испытывающих социальный стресс / М.К. Фомина (Маренина), Д.Ф. Августинович, И.В. Сорокина, Т.Г. Толстикова // Материалы VII Сибирского съезда физиологов с международным участием. - Красноярск, 2012.-С. 559-560.

6. Фомина (Маренина) М.К. Эффекты комплекса буспирона с глицирризиновой кислотой на биохимические показатели крови мышей в условиях социального стресса / М.К. Фомина (Маренина), Д.Ф. Августинович, И.В. Сорокина, Т.Г. Толстикова // Материалы IV Съезда фармакологов России «Инновации в современной фармакологии». - Казань, 2012. - С. 188.

7. Августинович Д.Ф. Эффекты буспирона на поведение самок мышей в модели социального дискомфорта / Д.Ф. Августинович, М.К. Фомина (Маренина) // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. - 2012. - № 6. - С. 693-705.

8. Фомина (Маренина) М.К. Исследование антиоксидантных свойств новых соединений, содержащих природные компоненты, в условиях моделирования тревожно-депрессивного состояния у животных / М.К. Фомина (Маренина), Д.Ф. Августинович, И.В. Сорокина, Т.Г. Толстикова // Материалы Международной научно-практической конференции «Свободные радикалы и антиоксиданты в химии, биологии и медицине». - Новосибирск, 2013. - С. 141142.

9. Фомина (Маренина) М.К. Влияние производных ламбертиановой кислоты на самок мышей в условиях социального дискомфорта / М.К. Фомина (Маренина), Д.Ф. Августинович, И.В. Сорокина, Т.Г. Толстикова // Материалы IX международного междисциплинарного конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». - Судак, 2013. - С. 343-344.

10. Августинович Д.Ф. Комплексное исследование эффектов амида ламбертиановой кислоты у самок мышей, находящихся в условиях социального дискомфорта / Д.Ф. Августинович, М.К. Фомина (Маренина), И.В. Сорокина, Т.Г. Толстикова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2014. - № 5. — С. 599-604.

11. Фомина (Маренина) M.K. Исследование эффектов комплекса буспирона с глицирризиновой кислотой на поведение мышей, находящихся в условиях формирования тревожно-депрессивного состояния / М.К. Фомина (Маренина), Д.Ф. Августинович, Т.Г. Толстикова // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. - 2014. - № 7. - С. 808-820.

Патент на изобретение

Пат. 2534987 Российская Федерация, МПК C07D 405/08, C07D 307/38, А61К 31/341, А61К 31/496, А61Р 29/00. Амиды ламбертиановой кислоты, обладающие анальгетической активностью и стимулирующим действием / Шульц Э.Э., Харитонов Ю.В., Морозова Е.А., Фомина (Маренина) М.К., Толстикова Т.Г.; заявитель и патентообладатель ФГБУН Новосибирский институт органической химии им. H.H. Ворожцова СО РАН - опубл. 10.12.14, Бюл. № 34.-12 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АКТГ - адренокортикотропный гормон

AJIK - незамещенный амид ламбертиановой кислоты

ГГНС - гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система

ГК - глицирризиновая кислота

3AJ1K - замещенный амид ламбертиановой кислоты

КРФ - кортикотропин-рилизинг-фактор

ЛК — ламбертиановая кислота

МДА - малоновый диальдегид

МеЛК - метиловый эфир ламбертиановой кислоты

ПКЛ - приподнятый крестообразный лабиринт

ПОЛ - перекисное окисление липидов

Подписано к печати 20 февраля 2015 г. Тираж 100 экз. Заказ № 1103. Отпечатано в типографии ООО «Параллель» 630090, г. Новосибирск, ул. Институтская, 4/1 Тел.: 8 (383) 330-26-98