Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Эффективность противоопухолевого препарата эстразин при спонтанных опухолях собак

На правах рукописи

БОРИСОВА Лариса Михайловна

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА ЭСТРАЗИН ПРИ СПОНТАННЫХ ОПУХОЛЯХ СОБАК

14.00.14 - онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Государственном учреждении

Российском онкологическом научном центре им. H.H. Блохина РАМН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук

З.С. Смирнова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук

доктор биологических наук

Т.П. Рябых JI.A. Островская

Ведущее учреждение: Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена МЗ РФ

Защита диссертации состоится 2004г. в /f ^часов на

заседании диссертационного совета (К.00К17.01) ГУ Российского онкологического научного центра им. H.H. Блохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе, 24)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН

Автореферат разослан «13ъ (M&iJL. 2004г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к. м. н.

Ю.А. Барсуков

WM

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Одной из актуальных проблем современной онкологии и урологии является лечение рака предстательной железы (РПЖ). Во всех странах мира наблюдается тенденция роста заболеваемости этой патологией. РПЖ выявляется чаще у мужчин пожилого и старческого возраста, средний возраст которых составляет 65-75 лет [Заридзе Д.Г., 1997; Степанов В.Н., Гориловский JI.M., 1999; Трапезников H.H., Аксель Е.М., 1999]. В связи с особенностями клинического течения и несовершенством ранней диагностики, 60-80% больных РПЖ при первичном обращении имеют распространенный процесс с метастазами в лимфоузлы, кости и отдаленные органы - D стадия [Матвеев Б.П. и др., 1999]. Основным методом лечения РПЖ в D стадии является паллиативная гормональная терапия.

За последние годы разработаны новые гормональные препараты, среди которых широкое применение в клинике находят антиандрогены и агонисты рилизинг гормон-лютеинизирующего гормона (ЛГРГ), а также их комбинация, получившая название «максимальная андрогенная блокада» (МАБ). МАБ рекомендуется в качестве первой линии гормонального лечения РПЖ в D стадии [Матвеев Б.П. и др., 1999; Denis L., 1995; Larsen J.F., Walter S., Krarup Т., 1990]. Относительная безопасность такого вида лечения привела к ограничению эстрогенотерапии, из-за наличия первичной и вторичной гормонорезистентности РПЖ к известным эстрогенам и выраженных осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, свертывающей системы крови и др. [Гершанович М.Л. 19S2; Пытель Ю.А., Золотарев И.И., Цомык В.Г.,1974].

Однако в последнее время вновь возрос интерес к эстрогенотерапии РПЖ в связи с выявлением осложнений при лечении антиандрогенами и аналогами ЛГРГ. Кроме того, отсутствуют убедительные клинические и

рос, национальная

«ШбЛИОТЕКА

экспериментальные данные о преимуществе противоопухолевого действия других видов гормонотерапии перед эстрогенами, вероятно, из-за прямого цитотоксического действия последних на опухоль [Сох R.L., Grawford E.D. 1995; Johansson J-E, Anderson S-O, Holmberg L., Bergstom R., 1991]. Как показано в исследованиях последних лет, при эстрогенотерапии частота сердечно-сосудистых осложнений носит дозозависимый характер [Портной

A.C., Бегунов А.Б., 1992].

Целесообразность создания нового эстрогенного препарата, обладающего противоопухолевым действием, диктовалась следующими факторами: первичной нечувствительностью ряда больных РПЖ к известным эстрогенным препаратам; различиями в степени проявления побочных эффектов у разных эстрогенов; возникновением лекарственной устойчивости при длительном применении одного и того же эстрогенного препарата; отсутствием среди известных эстрогенов - препаратов пролонгированного действия [Гершанович М.Л., 1982; Гончар М.А., Попов А.И. 1985; Дунаевский Л.И., 1962; Лейзеруков Е.М., 1976; Пытель Ю.А., Золотарев И.И., Цомык В.Г., 1974]. Кроме того, с экономической точки зрения лечение РПЖ эстрогенами гораздо дешевле, чем применение агонистов ЛГРГ и антиандрогенов.

В Уральском Государственном техническом университете (г. Екатеринбург) совместно с институтом проблем эндокринной патологии им.

B.Я. Данилевского АМН Украины (г. Харьков) и ГУ Российским онкологическим научным центром им. Н. Н. Блохина РАМН (г. Москва) разработан препарат Эстразин (3-окси-экстра-1,3,5-триен-17-гидразон). Основанием для синтеза эстразина послужило предположение, что простейшие гидразоны стероидных кетонов в организме способны подвергаться окислению с образованием реакционно-способных диазостероидов, более прочно связывающихся с рецепторами соответствующих гормонов и тем самым оказывающих пролонгированное гормональное и противоопухолевое действие.

По структуре входящего гормона (эстрон) и модифицирующего фрагмента

(гидразоновая группировка) эстразин не имеет аналогов среди применяющихся для лечения РПЖ отечественных и зарубежных эстрогенов, а также отличается от эстрогеноцитостатика - эстрацита [Михайлова Л.М., Пильщиков С.Н., Ермакова Н.П., Сыркин А.Б., 1996; Смирнова З.С., Лагова Н.Д., Киселев В.И. и соавт., 1996]. Эстразин имеет отличную от других эстрогенов лекарственную форму - свечи на водорастворимой полиэтиленоксидной основе для ректального введения, с содержанием препарата 100 мг, 200 мг и 300 мг. Ректальный способ введения эстрогенного препарата имеет ряд преимуществ. Во-первых, лекарственное вещество попадает в ток кровообращения, минуя печень, где происходит метаболизм эстрогенов и, во-вторых, часть препарата через систему коллатералей непосредственно поступает в предстательную железу.

Данные о высокой противоопухолевой активности на перевиваемых и индуцированных опухолях мышей и крыс, а также низкой токсичности эстразина, полученные при доклиническом изучении препарата [Михайлова Л.М., Пильщиков С.Н., Ермакова Н.П., Сыркин А.Б., 1996; Смирнова З.С., Лагова Н.Д., Киселев В.И. и соавт., 1996], послужили основанием оценить его эффективность на спонтанных опухолях собак.

Цель исследования

Доклиническое изучение препарата эстразин на спонтанных опухолях собак для рекомендации его на клинические испытания.

Задачи исследования

1. Провести дифференциальную диагностику опухолей перианальных желез собак.

2. Изучить противоопухолевую активность препарата эстразин на спонтанных аденомах перианальных желез у собак в сравнении с синэстролом.

3. Определить наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов в аденомах перианальных желез собак. Оценить эффект

лечения эстразином аденом перианальных желез в зависимости от наличия и уровня содержания цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов.

4. Изучить патоморфоз аденом перианальных желез у собак после лечения эстразином.

5. Изучить терапевтическую эффективность эстразина при аденоматозной гиперплазии предстательной железы и опухолях яичка у собак.

Научная новизна

Спонтанные опухоли собак позволяют исследователям оценивать различные методы лечения при этих новообразованиях.

Выявлено, что андроген-зависимая аденома перианальных желез собак по гормональной чувствительности к орхиэктомии, эстрогенотерапии и наличию цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствует характеристикам гормоночувствительности раку предстательной железы человека. На основании этих данных спонтанная аденома перианальных желез собак использована для доклинического изучения нового противоопухолевого препарата эстразин, отработки его режима применения с целью передачи препарата на клинические испытания.

Впервые было показано, что препарат эстразин обладает высоким противоопухолевым действием в отношении андроген-зависимой спонтанной аденомы перианальных желез собак. Показана возможность объективной морфологической и клинической оценки эффективности препарата на гиперпластические процессы в перианальных железах собак.

Сравнительное изучение противоопухолевой активности эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез собак выявило его преимущества перед синэстролом, который применяется в ветеринарной практике при лечении этой патологии.

Установлено пролонгированное действие эстразина по сравнению с синэстролом по срокам и частоте возникновения рецидивов аденом

перианальных желез после лечения.

Выявлен выраженный патоморфоз аденом перианальных желез под действием эстразина вплоть до их полной регрессии.

Выявлен положительный объективный эффект эстразина у 5 собак с гиперплазией предстательной железы.

Научно-практическая значимость

Показана высокая и равная эффективность эстразина при двух режимах введения, которые рекомендуются для клинических испытаний при РПЖ человека: введение препарата в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней или в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней.

Препарат эстразин можно рекомендовать для лечения спонтанных аденом перианальных желез и гиперплазии предстательной железы собак в ветеринарной клинике.

Апробация работы

Материалы представлены на 6 International Congress on Anti-Cancer Treatment, Paris, 1996; Международной конференции по проблеме ветеринарной медицины мелких домашних животных, Москва, 1998; Научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 2003 и 2004 гг.

I

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы - материалы и методы, 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 37 отечественных и 111 иностранных источников. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 17 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа была выполнена в клинике экспериментальной терапии животных ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. В исследование включено 74 животных (самцов) со спонтанными опухолями перианальных желез (ПЖ). При морфологическом изучении опухолей ПЖ у 5 собак диагностировали гиперплазию, у 62 собак - аденому и у 7 собак - рак ПЖ. Возраст собак с доброкачественными опухолями составил от 6 до 15 лет (средний 10,1±1,8), а возраст собак со злокачественными опухолями - от 10 до 15 лет (средний 12,5± 2,5). Местом локализаций опухолевых узлов являлись перианальные железы, расположенные в коже окружающей анальное отверстие.

Препарат эстразин вводили 33 животным ректально в суппозиториях ежедневно 1-2 раза в день (в зависимости от массы тела собаки) 5-ти и 10-ти дневными курсами Из них: 11 собак получали эстразин в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней (суммарная доза 100 мг/кг), 16 собак - в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней (суммарная доза 100 мг/кг) и 6 собак - в дозе 30 мг/кг в течение 5 дней (суммарная доза 150 мг/кг).

В качестве препарата сравнения использовали синэстрол, который применяется в ветеринарной практике при лечении аденом ПЖ собак. Синэстрол получали 29 животных в таблетках внутрь в дозах 0,2 мг/кг, 0,5 мг/кг и 0,8 мг/кг массы тела (в суммарных дозах 12 мг/кг, 15 мг/кг и 24 мг/кг, соответственно) ежедневно в течение 1-2-х месяцев. Во всех случаях после лечения синэстролом делали орхиэктомию.

Эффективность гормонотерапии опухолей оценивали по следующим критериям: полная ремиссия (ПР) - полная регрессия опухоли, частичная ремиссия (4P) - регрессия опухоли более чем на 50%, стабилизация опухолевого роста (Ст.ОР) - регрессия опухоли менее чем на 50% или рост опухоли не более чем на 25% и прогрессирование роста опухоли (ПРО).

Терапевтический эффект гормонотерапии оценивали как сумму положительных эффектов - ПР+ЧР+Ст.ОР.

У всех животных в процессе лечения измеряли объем опухоли в 1-й день и на 7, 14, 21, 28 сутки от начала лечения, брали кровь для клинического анализа и исследования биохимических показателей сыворотки крови.1

У 16 собак после лечения эстразином были изучены морфологические изменения в ткани аденомы на 7, 14, 21, 30, 50 и 60 сутки от начала лечения. При этом у животных для гистологического исследования брали инцизионно-биопсийный материал - кусочки опухоли, а также операционный материал, полученный при хирургическом удалении остатков опухолевых узлов (у 5 собак).

По окончании лечения животные наблюдались в клинике амбулаторно в течение 1 года.

Эстразин получали также 5 собак с аденоматозной гиперплазией предстательной железы (ГПЖ) в дозе 10 мг/кг (2 животных) и 20 мг/кг (2 животных) в течение 10 дней и в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней (1 животное) в суммарных дозах 100 мг/кг и 200 мг/кг. Диагноз ГПЖ устанавливали с помощью ректального пальцевого исследования, а также на основании косвенных клинических признаков (затруднения при актах дефекации и мочеиспускании, развитие промежностной грыжи вследствие длительных потуг). Все животные с ГПЖ были усыплены по просьбе владельцев в сроки от 1 до 10 месяцев от начала лечения и подвергнуты патологоанатомическому исследованию.

В исследование были включены 6 собак с опухолями яичка. Эстразин вводили 3 собакам в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней и 3 собакам в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней в суммарной дозе 100 мг/кг. Диагностику опухолей яичка осуществляли на основании клинического осмотра животного, а также на основании цитологического исследования материала, полученного при пункционной биопсии опухоли. Собаки с опухолями яичка наблюдались в

течение 24 -30 дней от начала лечения, а затем им проводилась орхиэктомия.

С целью изучения местного действия эстразина было проведено морфологическое исследование изменений прямой кишки. Аутопсийный материал для этого исследования был получен при патологоанатомическом вскрытии усыпленных по просьбе владельцев или павших от разных причин в различные сроки от начала лечения (от 2 недель до 3 месяцев) 7 животных с аденомой ПЖ и ГПЖ.

Операционный и аутопсийный материал фиксировали в 10-12%-ном растворе нейтрального формалина или жидкости Карнуа, кусочки заливали в парафин, полученные срезы окрашивали гематоксилин-эозином по стандартной методике.

Морфологические исследования проводили с помощью световой микроскопии. При морфологической верификации опухолей ПЖ, яичка и ГПЖ руководствовались Международной гистологической классификацией опухолей домашних животных ВОЗ (1974 г.).

У 19 собак из группы, получавшей эстразин, в аденомах ПЖ были изучены содержание и уровень экспрессии цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов (РА и РЭ), используя метод конкуренции с меченым гормоном и осаждения стероида углем, покрытым декстраном [Бассалык Л.С., 1987].2 Рецептороположительными считали опухоли, в цитозолях которых содержалось не менее 10 фмолей рецептора на 1 мг белка.

Значимость различий при статистической обработке материалов исследования оценивали по критерию Стьюдента-Фишера. Разницу считали достоверной при р < 0,05.

1,2 - Исследование биохимических показателей сыворотки крови и исследование цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов проводилось в лаборатории клинической биохимии ГУ РОНЦ им.Н.Н. Блохина.

и

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛЕЙ ПЕРИАНАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ У СОБАК

Местом локализации опухолевых узлов являлись перианальные железы, расположенные в коже, окружающей анальное отверстие.

При клиническом осмотре у животных обнаруживались один, редко два округлых, ярко-розового цвета, подвижных, упругой консистенции опухолевых узла. Опухоли больших объемов (более 30 см3) имели изъязвления и свищевые ходы с гнойным отделяемым и примесью крови.

У собак с диагнозом рак ПЖ кроме уже перечисленных признаков наблюдались частые запоры, тенезмы при дефекации, общее угнетенное состояние. Эти животные погибали вследствие прогрессирования заболевания или были усыплены по просьбе владельцев. При патологоанатомическом вскрытии этих животных обнаруживались метастазы в лимфоузлах (паховых, внутренних поясничных и подвздошных) и внутренних органах (легких, сердце, печени, почках).

Проведена морфологическая верификация опухолей ПЖ. При гиперплазии ПЖ в дерме определялись множественные правильно сформированные дольки из зрелых крупных секреторных клеток с широкой слабо гранулированной эозинофильной цитоплазмой. По периферии долек и в строме находились в несколько большем количестве, по сравнению с нормальной железой, мелкие резервные (переходные) клетки с гиперхромными ядрами и узкой цитоплазмой. Между дольками располагалась рыхлая, малоклеточная строма в виде узких прослоек, содержащая сосуды.

В аденомах ПЖ секреторные и резервные (переходные) клетки формировали обширные пласты и тяжи с небольшими участками стромы из рыхлой соединительной ткани. Обнаружены два подтипа аденом: с переходно-клеточными формами (23 случая) и со вторичной васкуляризацией (39 случаев).

Степень пролиферации резервных клеток в аденомах ПЖ каждого подтипа значительно варьировала. Наблюдались аденомы со слабой, умеренной и резко выраженной пролиферацией переходных клеточных элементов. Подтип аденомы ПЖ со вторичной васкуляризацией характеризовался преобладанием сосудистого компонента. Узкие железистые зоны перемежались с многочисленными участками стромальной соединительной ткани, содержащими просветы расширенных кровеносных сосудов. В этом подтипе чаще встречались аденомы с умеренной пролиферацией резервных клеток.

Рак ПЖ характеризовался интенсивной пролиферацией опухолевых клеток и появлением атипичных клеток с крупным ядром и большими вакуолями, так называемых клеток типа „птичий глаз". Наблюдались выраженные признаки клеточного и ядерного полиморфизма, грубый рисунок хроматина, различное количество ядрышек в ядре, частые митозы. Отмечался инвазивный рост опухоли в окружающие ткани.

Изучение морфологического строения аденом ПЖ собак при верификации диагноза позволило в дальнейшем изучить патоморфоз опухолей после лечебного воздействия эстразина (см. глава 4).

2. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ЭСТРАЗИНА ПРИ СПОНТАННЫХ АДЕНОМАХ ПЕРИАНАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ СОБАК В СРАВНЕНИИ

С СИНЭСТРОЛОМ

Эффективность эстразина при лечении спонтанной аденомы ПЖ собак в зависимости от дозы и режима введения препарата представлена в таблице 1. Через 4-7 недель после начала лечения из 11 животных, получавших эстразин в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней, полная регрессия опухоли была достигнута у 5 собак (45,5 %), частичная регрессия - также у 5 собак (45,5%) и у 1-го животного (9 %) отмечалась стабилизация опухолевого процесса.

В группе из 16 животных, которым вводили эстразин в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней, ПР заболевания наблюдалась у 9-ти собак (56,2 %) и ЧР - у 5

собак (31,2 %) также через 4-7 недель от начала лечения. Ст.ОР была выявлена у 1 собаки (6,3 %) и у 1 собаки (6,3 %) наблюдалось прогрессирование роста опухоли.

Таблица 1

Терапевтическая эффективность эстразина при спонтанных аденомах

перианальных желез собак в сравнении с синэстролом.

Препарат Доза (мг/кг) Кол- Количество собак / % случаев

разовая суммарная во собак ПР ЧР Ст.ОР ПРО

10 100 11 5/ 45,5 5/ 45,5 1/9 0

Эстразин 20 100 16 9/ 56,2 5/31,2 1/6,3 1/6,3

30 150 6 2/ 33,3 2/ 33,3 0 2/ 33,3

33 16/ 48,5* 12/36,5* 2/6 3/9

Синэстрол 0,20,8 12-24 29 9/31* 7/ 24,2* 9/31 4/13,8

Примечание: *- р<0,05 по сравнению с синэстролом.

Из 6-ти животных, получавших эстразин в дозе 30 мг/кг в течение 5 дней, у 2-х собак (33,3 %) была выявлена ПР заболевания через 4-6 недель от начала лечения. В эти же сроки наблюдения у 2-х собак (33,3 %) наблюдалась ЧР и у 2 собак (33,3 %) - прогрессирование роста опухоли.

При лечении аденом ПЖ собак синэстролом в суммарных дозах 12-24 мг/кг ПР заболевания была достигнута у 9 животных (31 %), ЧР - у 7 животных (24,2%), Ст.ОР - у 9 животных (31 %) и прогрессирование роста опухоли - у 4 животных (13,8 %) через 8-13 недель от начала лечения (табл.1).

При оценке эффективности лечения аденом ПЖ эстразином в зависимости от объема опухоли было выявлено, что высокий терапевтический эффект был достигнут у животных с объемом опухоли не более ЗОсм3 (табл.2).

Таблица 2

Терапевтическая эффективность эстразина при спонтанных аденомах ПЖ собак

в зависимости от размера опухоли и в сравнении с синэстролом.

Объем Кол-во Количество собак / % случаев

Препарат опухоли (см3) собак ПР ЧР Ст.ОР ПРО

<10 12 10/83* 2/17 0 0

Эстразин 10-30 12 5/42 6/50* 0 1/8

>30 9 1/11 4/45 2/ 22 2/ 22

< 10 6 4/ 66,7* 1/ 16,7 1/ 16,7 0

Синэстрол 10-30 5 3/ 60 1/20* 1/20 0

>30 9 0 3/33,3 3/ 33,3 3/33,3

Примечание: *- р<0,05 по сравнению с синэстролом.

Так у собак с объемом опухолевого узла до 10 см3 ПР заболевания достигалась в 83 % случаев, с объемом 10-30 см3 - в 42 % случаев, а с объемом опухоли более 30 см3 только - в 11 % случаев. ЧР заболевания наблюдалась у животных с объемом опухолевого узла до 10 см3 в 17 % случаев, с объемом 1030 см3 - в 50% случаев. У животных с объемом опухоли более 30 см3 был выявлен невысокий терапевтический эффект: ЧР в 45 % случаев, Ст.ОР в 22 % случаев и в 22 % прогрессирование роста опухоли.

При лечении собак со спонтанной аденомой ПЖ синэстролом было выявлено, что высокий терапевтический эффект наблюдался у животных с объемом опухоли до 10 см3 и 10-30 см3, у которых ПР заболевания была

достигнута у 4 собак (66,7 %) и у 3-х собак (60 %), соответственно (табл.2). Более слабый терапевтический эффект отмечался у собак с объемом опухоли больше 30 см3, у которых не выявлено полной регрессии аденом ПЖ ни в одном случае, а ЧР заболевания была достигнута только у 3-х собак (33,3%).

Животным с достигнутой ранее частичной регрессией аденомы ПЖ (8 собак) и лечившихся эстразином без эффекта (2 собаки) через 4-6 недель после проведенного курса лечения была проведена орхиэктомия (табл.3). В результате орхиэктомии у 6 собак (60 %) наблюдалась ПР заболевания, у 2 собак (20 %)-ЧР и у 2 собак (20 %) - Ст.ОР.

Таблица 3

Изучение терапевтической эффективности орхиэктомии при спонтанной аденоме ПЖ собак.

Терапевтический эффект после лечения эстразином -количество собак Терапевтический эффект Количество животных

абс. %

Частичная ремиссия - 8 Полная ремиссия 6 60

Частичная ремиссия 2 20

Стабилизация опухолевого роста - 2 Стабилизация опухолевого роста 2 20

При наблюдении в течение 1 года за собаками со спонтанной аденомой ПЖ после проведенного лечения эстразином у 13 из 33 и синэстролом у 18 из 29 животных в различные сроки выявляли развитие рецидивов (табл.4). После лечения эстразином с достигнутой ранее ПР заболевания возобновление роста опухоли наблюдалось через 1-4 месяца только у 2 животных (15,4 %), через 5-8 месяцев - у 5 животных (38,5 %) и через 9-12 месяцев - у 6 животных (46,1 %). Тогда как у животных, лечившихся синэстролом, рецидивы спонтанных аденом ПЖ возникли у 14 собак (77,8 %) уже через 1- 4 месяца после окончания

лечения и у 4 собак (22,2 %) - в более отдаленные сроки, через 5-8 месяцев после окончания лечения.

Таблица 4

Сравнение частоты и сроков возникновения рецидивов спонтанных аденом ПЖ собак после лечения эстразином и синэстролом.

Препарат Доза (мг/кг) Кол-во собак Частота возникновения рецидивов: кол-во собак / % случаев

разовая суммарная 1-4 мес. 5-8 мес. 9-12 мес.

Эстразин 10-30 100-150 13 2 /15,4* 5/ 38,5 6/46,1

Синэстрол 0,2-0,8 12-24 18 14/77,8* 4/ 22,2 0

Примечание: *- р<0,05 по сравнению с синэстролом.

13 собакам после возникновения рецидива спонтанной аденомы ПЖ был проведен повторный курс лечения эстразином в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней.

I□ Полная ремиссия I

15.3%- ; [

■ Частичная ремиссия, 46 2% у

.□Стабилизация роста ¡I

' Я Прогрессирование I 1 роста |

I

Рис.1. Терапевтическая эффективность эстразина после возникновения рецидива спонтанной аденомы ПЖ.

В результате лечения полная регрессия опухоли наблюдалась у 6-ти собак (46,2%), частичная регрессия - у 4-х собак (30,8 %), Ст.ОР выявлена у одной собаки (7,7 %) и прогрессировать роста опухоли - у 2-х собак (15,3%) (рис 1).

Клинический эффект при применении эстразина наблюдался через 3 недели после начала лечения: размягчение консистенции опухоли, закрытие свищевых ходов и эпителизация язвенных дефектов. Также установлено, что эстразин не вызывал осложнений и побочных эффектов, кроме местно-раздражающего действия, которое было выражено умеренно и носило обратимый характер. В то же время в процессе лечения синэстролом у 15 (51,7%) из 29 собак наблюдались побочные явления: анорексия, рвота и вялость.

Гематологические показатели периферической крови у всех животных в процессе лечения как эстразином так и синэстролом существенно не изменялись.

Биохимические показатели сыворотки крови собак, которые отражают функциональное состояние почек и печени представлены в таблице 5.

Таблица 5

Биохимические показатели сыворотки крови собак с аденомой перианальных желез

Биохимические показатели Норма Эстразин Синэстрол

До лечения После лечения До лечения После лечения

Мочевина (ммоль/л) 1,7-3,7 5,4±0,62 4,9±0,36 4,5 ± 0,38 6,2 ± 0,44

Креатинин (мкмоль/л) 30-114 80,6±8,6 80,0±8,4 101 ±6,0 68 ± 7,3

АЛТ (Е/л) 5-25 55,4±4,2 19,Ш,2 213 ±9,2 143 ±5,3

ACT (Е/л) 5-80 65,4±5,0 58,1±4,5 49 ± 3,6 24 ±6,7

Следует отметить, что собаки, поступившие в клинику животных для лечения эстразином, были уже с патологией почек, о чем свидетельствует повышенный уровень мочевины, и некоторые - с патологией печени (повышенный уровень АЛТ). После лечения собак эстразином уровень мочевины практически не изменялся, оставаясь таким же высоким, как и до лечения: - 5,4 и 4,9 мкмоль/л, соответственно. В то же время содержание в сыворотке крови АЛТ увеличился с 55,4 Е/л до лечения до 79,8 Е/л после лечения, что указывает на гепатотоксичность эстразина. Однако клиническое состояние этих животных после лечения препаратом не ухудшалось.

При сравнении биохимических показателей сыворотки крови собак до и после лечения синэстролом отмечалось повышение уровня мочевины с 4,5 до 6,2 ммоль/л, соответственно, что указывало на нарушение функции почек (табл.

5).

З.ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРОВ АНДРОГЕНОВ И ЭСТРОГЕНОВ В АДЕНОМАХ ПЕРИАНАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ СОБАК

Исследование цитоплазматических РА и РЭ в аденомах ПЖ показало, что опухоли содержат оба вида рецепторов стероидных гормонов (РСГ) (табл.6). Однако частота встречаемости и уровень цитоплазматических РСГ колебались в зависимости от объема опухолей. Такие колебания обусловлены, вероятно, гетерогенностью клеточной популяции опухоли, при которой опухолевые клетки содержат разные количества цитоплазматических РА и РЭ.

В аденомах ПЖ, объем которых составлял менее 10 см3 чаще встречались РЭ, а в аденомах, объем которых составил 10-30 см3 - РА. В то же время в этих группах животных значительных различий в уровнях содержания РСГ в аденомах ПЖ не выявлено. В опухолях объемом более 30 см3 цитоплазматические РА и РЭ встречались редко (табл.6).

Изучение содержания цитоплазматических РСГ в аденомах ПЖ собак в зависимости от возраста показало, что РЭ у собак в возрасте 8-9 лет и 13-15 лет определялись чаще, чем РА в этих же возрастных группах (табл.7).

Таблица 6

Содержание цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов в

аденомах ПЖ в зависимости от объема опухоли

Объем опухоли (см3) Число собак РА+ РЭ+

п/п* (%) Содержание (фмоль/мг белка) п/п* (%) Содержание (фмоль/мг белка)

< 10 7 2/7 28,6** 17,4 ± 1,7 6/7 85,7** 26,75 ±16,35

10-30 7 5/7 71,4** 29,5 ± 14,7 4/7 57,1** 59,1 ± 14,9

>30 5 1/5 20 89,5 2/5 40 25,1 ± 10,5

Примечание: * - п/п - число опухолей содержащих РСГ/общее число изученных опухолей; **- р<0,05 разница по частоте встречаемости РА и РЭ в группах достоверна.

Таблица 7

Содержание цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов в

аденомах ПЖ в зависимости от возраста.

Возраст собак Число РА+ РЭ+

собак п/п* (%) Содержание (фмоль/мг белка) п/п* (%) Содержание (фмоль/мг белка)

8-9 лет 7 3/7 42,9 30,1 ± 10,9 5/7 71,4 59,65 ±47,35

10-12 лет 5 2/5 40 52,6 ± 26,9 2/5 40 22,8 ± 11,6

13-15 лет 7 3/7 42,9 24,6 ±3,5 5/7 71,4 25,7 ± 15,3

Примечание: * - п/п - число опухолей содержащих РСГ/общее число изученных опухолей.

Средние уровни содержания цитоплазматических РА и РЭ во всех группах примерно одинаковые с резким колебанием в опухолях одной возрастной

группы. В то же время в аденомах ПЖ прослеживается тенденция к снижению уровня содержания цитоплазматических РА и РЭ по мере увеличения возраста животного.

При оценке эффективности лечения эстразином аденом ПЖ в зависимости от наличия и уровня содержания цитоплазматических РА и РЭ в опухолях (табл.8) было установлено, что ПР и ЧР были достигнуты у собак, в опухолях которых выявлялись РСГ и их уровень был достаточно высок. Животные, у которых отсутствовали цитоплазматические РА, а уровень РЭ был недостаточно высоким (12,5 ± 2,1 фмоль/мг белка), наблюдалась стабилизация роста опухоли, или терапевтический эффект отсутствовал.

Таблица 8

Зависимость терапевтического эффекта эстразина от наличия РА и

РЭ в аденомах ПЖ собак.

Терапевтический эффект Число собак РА+ РЭ+

n/n* (%) Содержание (фмоль/мг белка) n/n* (%) Содержание (фмоль/мг белка)

Полная ремиссия 9 5/9 55,6 53,75 ±35,75 5/9 55,6 26,7 ± 14,4

Частичная ремиссия 7 3/7 42,9 28,35 ± 12,65 5/7 71,4 59,1 ± 14,9

Стабилизация роста опухоли и без эффекта 3 0/3 - 2/3 66,7 12,5 ±2,1

Примечание: * - n/n - число опухолей содержащих РСГ/общее число изученных опухолей.

4. ИЗУЧЕНИЕ ПАТОМОРФОЗА АДЕНОМЫ ПЕРИАНАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ У СОБАК ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ ЭСТРАЗИНОМ

Морфологическое изучение аденом ПЖ собак в процессе применения эстразина показало, что первые признаки повреждения опухолевых клеток начинали появляться у всех животных на 14-й день после начала лечения. При

этом в ткани опухолей отмечались пикноз ядер и мелкоочаговая вакуольная дистрофия цитоплазмы, и у части клеток наблюдался лизис ядер.

На 21-й день дистрофические процессы нарастали, в опухолевой ткани преобладали поврежденные клетки с пикнозом и лизисом ядер, наблюдалась гибель отдельных клеток.

* К 30-му дню большинство опухолевых клеток выглядели дистрофически

измененными, в них выявлялись резкий пикноз и лизис ядер, вакуолизация цитоплазмы, и начали появляться мелкие очаги некроза. У собак с последующей ПР заболевания отмечали тотально выраженную вакуольную дистрофию опухолевых клеток, появление гигантских многоядерных клеток и образование небольших участков некроза.

К 50-му дню у всех животных с полной и частичной ремиссией заболевания, некротические изменения в опухоли усиливались, и преобладали очаги некроза. У собак с полной ремиссией заболевания на месте погибших опухолевых клеток появлялись лимфоидные и плазматические клетки, происходило разрастание соединительной ткани.

К 50-му дню у 48,5% животных выявлялась полная регрессия опухоли.

Собакам с ЧР в эти же сроки было проведено оперативное удаление опухолевого узла. При морфологическом исследовании полученного биопсийного материала в тканях опухоли наблюдались признаки лекарственного патоморфоза.

. 5. ИЗУЧЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭСТРАЗИНА ПРИ

АДЕНОМАТОЗНОЙ ГИПЕРПЛАЗИИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ОПУХОЛЯХ

ЯИЧКА У СОБАК

"" При морфологическом изучении предстательной железы у 3 собак была

обнаружена интраацинарная папиллярная гиперплазия и у 2 собак -внутриацинарная криброзная гиперплазия.

Результаты лечения собак с аденоматозной гиперплазией предстательной

железы представлены в таблице 9. В результате лечения у всех животных был выявлен положительный объективный терапевтический эффект, который выражался в уменьшении объема предстательной железы и восстановлении актов дефекации и мочеиспускания. Наибольший терапевтический эффект (уменьшение объема предстательной железы более 50 %) был достигнут у 2-х собак, получавших эстразин в дозе 20 мг/кг в течение 10 дней в суммарной дозе 200 мг/кг. У этих животных при морфологическом исследовании в ткани железы отмечались признаки плоскоклеточной метаплазии, атрофии эпителия ацинусов и разрастание соединительной ткани.

Таблица 9

Изучение противоопухолевой активности препарата эстразин при

аденоматозной гиперплазии предстательной железы собак.

№ собаки Доза (мг/кг) Срок наблюдения (месяцы) Уменьшение объема предстательной железы, %

разовая суммарная

1 10 100 1 = 25%

2 10 100 10 =25%

3 20 100 1 <50%

4 20 200 3 >50%

5 20 200 2 >50%

Результаты лечения эстразином собак со спонтанными опухолями яичка представлены в таблице 10. Из данных таблицы видно, что противоопухолевый эффект наблюдался у 4 собак. Из них у одной собаки с опухолью из клеток •> Лейдига выявлена частичная ремиссия заболевания, у 2-х собак со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и одной собаки с семиномой -стабилизация опухолевого роста. У 2-х собак опухоли, имеющие строение

сертолиомы и семиномы, не проявили чувствительности к эстразину.

Таблица 10

Изучение терапевтической эффективности эстразина

при спонтанных опухолях яичка у собак.

Диагноз Кол-во собак Доза, мг/кг Терапевтический эффект

разовая суммарная

Злокачественная опухоль из клеток Сертоли 2 10 100 Стабилизация роста опухоли

Доброкачественная опухоль из клеток Лейдига 1 10 100 Частичная ремиссия

Семинома 1 20 100 Стабилизация роста опухоли

Злокачественная опухоль из клеток Сертоли 1 20 100 Рост опухоли

Смешанная опухоль (участки семиномы и сертолиомы) 1 20 100 Рост опухоли

При морфологическом исследовании лейдигомы после лечения эстразином в ткани опухоли наблюдались выраженные пикноз и лизис ядер, некроз клеток, а также наблюдались участки разрастания соединительной ткани.

ВЫВОДЫ

1. Новый противоопухолевый препарат эстразин из группы гидразонов стероидных кетонов вызывает терапевтический эффект у 94 — 100% собак со спонтанными аденомами перианальных желез. Терапевтический эффект выражается в полных и частичных регрессиях аденом, возникающий через 4-7 недель после начала лечения.

2. Равная эффективность препарата выявлена при двух режимах введения: в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней и в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней. При этом полная регрессия опухолей наблюдается у 45 - 56 % животных, частичная ремиссия - у 45 -31 %.

3. Выявлены преимущества терапевтической эффективности эстразина по сравнению с синэстролом:

• по числу полных и частичных ремиссий: синэстрол в суммарной дозе 12-24 мг/кг вызывает терапевтический эффект у 86 % собак, из них полную ремиссию - у 31 % и частичную ремиссию у 24 % животных;

• по длительности курса лечения: продолжительность лечения собак эстразином составляет 5-10 дней, а синэстролом - 30-60 дней;

• по срокам и частоте возникновения рецидивов: после лечения эстразином рецидивы опухоли возникают у 13 из 33 собак, из них у 15 % через 1-4 месяца, у 38 % через 5-8 месяцев и у 46 % собак через 9-12 месяцев. При лечении синэстролом рецидивы опухоли возникают у 18 из 29 животных, причем у 78 % собак через 1-4 месяца и у остальных 22 % собак через 5-8 месяцев.

4. Эффективность препарата подтверждена морфологическими исследованиями. Выраженные дистрофические изменения в опухолевой ткани выявляются с 21-30-го дня от начала лечения. К 30-50-му дню возникают некротические изменения, появляются инфильтраты из

лимфоидных и плазматических клеток, разрастание соединительной ткани.

5. Эстразин высоко эффективен при лечении рецидивов аденомы перианальных желез. Терапевтический эффект наблюдается у 85 % животных.

6. Лечение эстразином хорошо переносится животными, не вызывая осложнений и побочных эффектов, а синэстрол вызывает анорексию, рвоту и вялость у 15 из 29 собак (в 52 % случаев)

7. Выявлена корреляция величины терапевтического эффекта эстразина с уровнем экспрессии рецепторов андрогенов и эстрогенов в ткани аденомы перианальных желез.

8. Выявлен положительный объективный терапевтический эффект эстразина у собак с гиперплазией предстательной железы: уменьшение объема предстательной железы, восстановление актов дефекации и мочеиспускания. У части животных (у 2-х из 5-ти) обнаружено уменьшение объема предстательной железы более чем на 50 %.

9. Выявленная гормональная чувствительность аденомы перианальных желез собак к орхиэктомии, эстрогенотерапии и наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствуют характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека. Это дает основание рекомендовать эстразин для лечения рака предстательной железы.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. З.С. Смирнова, Н.Д. Лагова, В.И. Киселев, Л.М. Борисова, В.И. Нифонтов, Е.А. Штокарева, Л.Н. Воловельский // Эстразин - новый противоопухолевый препарат адресованного действия. - Вестник ОНЦ АМН России. - 1996 г.- № 3.- с. 24-28.

2. Борисова Л.М. // Лечение аденом перианальных желез у собак.-Тезисы 6-ой Международной конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. - Москва. -1998 г.- с. 76.

3. Борисова Л.М. // Изучение влияния эстразина на спонтанные аденомы перианальных желез и аденоматозную гиперплазию простаты собак. -Российский биотерапевтический журнал. - Материалы Всероссийской научно-практической конференции „Отечественные противоопухолевые препараты". - Москва. - 2003 г. - № 1.-е. 15-16.

4. Борисова Л.М., Кузьмина З.В., Герштейн Е.С., Смирнова З.С.// Зависимость противоопухолевого действия эстразина от экспрессии рецепторов анрогенов (РА) и эстрогенов (РЭ) в клетках спонтанных аденом перианальных желез собак - Российский биотерапевтический журнал. Материалы Всероссийской научно-практической конференции „Отечественные противоопухолевые препараты". -Москва. - 2004 г. - № 2. - с. 15.

5. Борисова Л.М., [Пономарьков В. И.|, Смирнова З.С.// Предклиническое изучение эффективности препарата эстразин на спонтанных аденомах перианальных желез собак. - Российский биотерапевтический журнал. - Москва. - 2004 г. - № 3. - с. 56-60.

6. Borisova L., Golubeva V., Ponomarkov V. // Preclinical study of a new anticancer drug estrasin on spontaneous tumours in dog. - 6-th International Congress on Anti-Cancer Treatment. - Paris. - 1996. - № 614.

Служба множительной техники ГУ ГОНЦ им. H.H. Блохина РАМН Подписано в печать 27.05.04 Заказ № 17 3 Тираж 100 эга

РНБ Русский фонд

2007-4 4404

(

Актуальность темы

Одной из актуальных проблем современной онкологии и урологии является лечение рака предстательной железы (РПЖ). Во всех странах мира наблюдается устойчивая тенденция роста заболеваемости этой патологией. В Европе РПЖ в структуре онкологической заболеваемости занимает второе место (82 на 100 ООО мужчин), в России - 4 место (13,3 на 100 ООО мужчин). РПЖ обнаруживается в основном у мужчин пожилого и старческого возраста. Средний возраст больных определяется в интервале 65-75 лет [13,29,33]. В связи с особенностями клинического течения и несовершенством ранней диагностики, 60-80 % больных РПЖ при первичном обращении имеют распространенный процесс с метастазами в лимфоузлы, кости и отдаленные органы - D стадия [22,23]. Основным методом лечения РПЖ в D стадии является паллиативная гормональная терапия.

За последние годы разработаны новые гормональные препараты, среди которых широкое применение в клинике находят антиандрогены и агонисты рилизинг гормон-лютеинизирующего гормона (ЛГРГ), а также их комбинация, получившая название «максимальная андрогенная блокада» (МАБ) и рекомендуемая в качестве первой линии гормонального лечения [16,60,88,89]. Относительная безопасность такого вида лечения привела к ограничению эстрогенотерапии из-за наличия первичной и вторичной гормонорезистентности РПЖ к известным эстрогенам и выраженных осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, свертывающей системы крови и др. [7,24].

В последнее время вновь возрос интерес к эстрогенотерапии РПЖ в связи с наличием осложнений и недостатков при терапии антиандрогенами и аналогами ЛГРГ, а также отсутствием убедительных клинических и экспериментальных данных о преимуществе противоопухолевого действия других видов гормонотерапии перед эстрогенами, вероятно, из-за прямого цитотоксического действия последних на опухоль [59,80]. В текущих исследованиях показано, что частота сердечно-сосудистых осложнений при эстрогенотерапии носит дозозависимый характер. Так при суточной дозе диэтилстильбэстрола 1 мг частота венозных и артериальных тромбозов составили 14,2 %, а при 2-3 мг - 30 %, при более 5 мг - 35 %. Кроме того рядом авторов показана высокая противоопухолевая активность эстрогенов при низких побочных эффектах со стороны сердечно-сосудистой системы при комбинации их с препаратами, обладающими дезагрегатными и антикоагулянтными свойствами [23].

Выраженные побочные эффекты большинства эстрогенов и низкая стоимость лечения этими препаратами поставили вопрос о целесообразности синтеза новых производных эстрогенов, которые обладали бы выраженным пролонгированным противоопухолевым действием и низкой токсичностью [131].

В Уральском государственном техническом университете (г. Екатеринбург) совместно с институтом проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского АМН Украины (г. Харьков) и ГУ Российским онкологическим научным центром им. Н. Н. Блохина РАМН (г. Москва) разработан препарат Эстразин (3-окси-экстра-1,3,5-триен-17-гидразон). Основанием для синтеза эстразина послужило предположение, что простейшие гидразоны стероидных кетонов в организме способны подвергаться окислению с образованием реакционно-способных диазостероидов, более прочно связывающихся с рецепторами соответствующих гормонов и тем самым оказывающих более длительное гормональное и противоопухолевое действие.

По структуре входящего гормона (эстрон) и модифицирующего фрагмента (гидразоновая группировка) эстразин не имеет аналогов среди применяющихся для лечения рака предстательной железы отечественных и зарубежных эстрогенов, а также отличается от эстрогеноцитостатика — эстрацита [18,27]. Лекарственная форма Эстразина - свечи на водорастворимой полиэтиленоксидной основе для ректального введения. Ректальный способ введения эстрогенного препарата имеет ряд преимуществ. Во-первых, лекарственное вещество попадает в ток кровообращения, минуя печень, где происходит метаболизм эстрогенов и, во-вторых, часть препарата через систему коллатералей непосредственно поступает в предстательную железу.

Данные о высокой противоопухолевой активности на перевиваемых и индуцированных опухолях мышей и крыс, а также низкой токсичности эстразина, полученные при доклиническом изучении препарата, послужили основанием оценить его эффективность при спонтанных гормонозависимых опухолях собак.

Цель исследования

Целью настоящего исследования явилось доклиническое изучение препарата эстразин на спонтанных опухолях собак для рекомендации его на клинические испытания.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Провести дифференциальную диагностику опухолей перианальных желез собак.

2. Изучить противоопухолевую активность препарата эстразин на спонтанных аденомах перианальных желез у собак в сравнении с синэстролом.

3. Определить наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов в аденомах перианальных желез собак. Оценить эффект лечения эстразином аденом перианальных желез в зависимости от наличия и уровня содержания цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов.

4. Изучить патоморфоз аденомы перианальных желез у собак после лечения препаратом эстразин.

5. Изучить терапевтическую эффективность препарата эстразин при аденоматозной гиперплазии предстательной железы и опухолях яичка у собак.

Научная новизна

Спонтанные опухоли собак позволяют исследователям оценивать различные методы лечения при этих новообразованиях.

Выявлено, что андроген-зависимая аденома перианальных желез собак по гормональной чувствительности к орхиэктомии, эстрогенотерапии и наличию цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствует характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека. На основании этих данных спонтанная аденома перианальных желез собак использована для доклинического'изучения нового противоопухолевого препарата эстразин, отработки его режима применения с целью передачи препарата на клинические испытания.

Впервые было показано, что препарат эстразин обладает высоким противоопухолевым действием в отношении андроген-зависимой спонтанной аденомы перианальных желез собак. Показана возможность объективной морфологической и клинической оценки эффективности препарата при гиперпластических процессах в перианальных железах собак.

Сравнительное изучение противоопухолевой активности эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез собак выявило его преимущества перед синэстролом, который применяется в ветеринарной практике при лечении этой патологии.

Установлено пролонгированное действие эстразина по сравнению с синэстролом по срокам и частоте возникновения рецидивов после лечения.

Выявлен выраженный патоморфоз под действием эстразина вплоть до полной регрессии аденом перианальных желез.

Выявлен положительный объективный эффект у 5 собак с гиперплазией предстательной железы при лечении эстразином.

Научно-практическая значимость.

Показана высокая и равная эффективность эстразина при двух режимах введения, которые рекомендуются для клинических испытаний при РПЖ человека: введение препарата в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней или в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней.

Препарат эстразин можно рекомендовать для лечения спонтанных аденом перианальных желез и гиперплазии предстательной железы собак в ветеринарной клинике.

Апробация диссертации. Материалы представлены на 6 International Congress on Anti-Cancer Treatment, Paris, 1996; Международной конференции по проблеме ветеринарной медицины мелких домашних животных, Москва, 1998; Научно-практической конференции с международным участием л

Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 2003 и 2004 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы - материалы и методы, 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка цитируемой литературы. Список литературы включает 148 источников, среди которых 37 работ отечественных и 111 работ иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 17 таблицами.

выводы

1. Новый противоопухолевый препарат эстразин из группы гидразонов стероидных кетонов вызывает терапевтический эффект у 94 - 100% собак со спонтанными аденомами перианальных желез. Терапевтический эффект выражается в полных и частичных регрессиях аденом, возникающий через 4-7 недель после начала лечения.

2. Равная эффективность препарата выявлена при двух режимах введения: в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней и в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней. При этом полная регрессия опухолей наблюдается у 45 — 56 % животных, частичная ремиссия - у 45 -31 %.

3. Выявлены преимущества терапевтической эффективности эстразина по сравнению с синэстролом:

• по числу полных и частичных ремиссий: синэстрол в суммарной дозе 12-24 мг/кг вызывает терапевтический эффект у 86 % собак, из них полную ремиссию - у 31 % и частичную ремиссию у 24% животных;

• по длительности курса лечения: продолжительность лечения собак эстразином составляет 5-10 дней, а синэстролом - 30-60 дней;

• по срокам и частоте возникновения рецидивов: после лечения эстразином рецидивы опухоли возникают у 13 из 33 собак, из них у 15 % через 1-4 месяца, у 38 % через 5-8 месяцев и у 46 % собак через 9-12 месяцев. При лечении синэстролом рецидивы опухоли возникают у 18 из 29 животных, причем у 78 % собак через 1-4 месяца и у остальных 22 % собак через 5-8 месяцев.

4. Эффективность препарата подтверждена морфологическими исследованиями. Выраженные дистрофические изменения в опухолевой ткани выявляются с 21-30-го дня от начала лечения. К 3050-му дню возникают некротические изменения, появляются инфильтраты из лимфоидных и плазматических клеток, разрастание соединительной ткани.

5. Эстразин высоко эффективен при лечении рецидивов аденомы перианальных желез. Терапевтический эффект наблюдается у 85 % животных.

6. Лечение эстразином хорошо переносится животными, не вызывая осложнений и побочных эффектов, а синэстрол вызывает анорексию, рвоту и вялость у 15 из 29 собак (в 52 % случаев)

7. Выявлена корреляция величины терапевтического эффекта эстразина с уровнем экспрессии рецепторов андрогенов и эстрогенов в ткани аденомы перианальных желез.

8. Выявлен положительный объективный терапевтический эффект эстразина у собак с гиперплазией предстательной железы: уменьшение объема предстательной железы, восстановление актов дефекации и мочеиспускания. У части животных (у 2-х из 5-ти) обнаружено уменьшение объема предстательной железы более чем на 50 %.

9. Выявленная гормональная чувствительность аденомы перианальных желез к орхиэктомии, эстрогенотерапии и наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствуют характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека. Это дает основание рекомендовать эстразин для лечения рака предстательной железы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенного исследования показали, что препарат эстразин обладает противоопухолевым действием при аденоматозной гиперплазии предстательной железы. У всех собак с аденоматозной гиперплазией простаты наблюдалось восстановление актов дефекации и мочеиспускания, а объем предстательной железы уменьшился более чем на 25 %. У двух собак, получавших препарат эстразин в дозе 20 мг/кг в течение 10 дней, объем предстательной железы уменьшился более чем на 50 %.

После проведенного лечения у 2 животных, получивших суммарную дозу эстразина 200 мг/кг, при морфологическом исследовании была выявлена картина выраженной атрофии предстательной железы с признаками плоскоклеточной метаплазии, атрофии эпителия ацинусов и разрастанием соединительной ткани.

При лечении собак с опухолями яичек противоопухолевый эффект наблюдался у 4 собак. Из них у одной собаки с опухолью из клеток Лейдига выявлена частичная ремиссия заболевания, у 2-х собак со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и одной собаки с семиномой - стабилизация опухолевого роста.

При морфологическом исследовании после лечения эстразином выявлен патоморфоз опухоли из клеток Лейдига. В ткани опухоли выявлены выраженные пикноз и лизис ядер, некроз клеток, а также участки разрастания соединительной ткани.

ЧАСТЬ IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Рак предстательной железы относится к наиболее тяжелым онкологическим заболеваниям и занимает 3-5 место среди всех злокачественных новообразований у мужчин среднего и старшего возраста. Как причина смертности у мужчин в России это опухолевое заболевание занимает 10 место, составляя в 1999 году 8 человек на 100 ООО населения [1,15,29,33].

При развитии РПЖ большое значение придается тестикулярной функции и повышенным концентрациям тестостерона в крови. Основной мужской половой гормон тестостерон в крови связан с плазменными белками - гормоносвязывающим глобулином и альбумином. Лишь 2 % тестостерона находится в свободном состоянии. Именно это количество диффундирует внутрь эпителиальных клеток простаты, где превращается в дигидротестостерон (ДГТ) под действием фермента 5а-редуктазы. Далее ДГТ соединяется с андрогенными рецепторами, находящимися в ядрах клеток.

Андрогенная регуляция характеризуется тремя видами эффекта на эпителиальные клетки предстательной железы [6]. Недифференцированные или инволютивные клетки простаты начинают синтез ДНК и пролиферацию благодаря транскрипционному влиянию позитивных генов, заведенных андрогенами.

Когда простата приобретает нормальный размер, в присутствии высоких цифр андрогенов, вступает в процесс транскрипция тормозных генов, приводящая к сохранению определенного лимита клеток и синтеза ДНК. Этот вид регуляции называется негативным.

Когда секреция андрогенов прекращается или уменьшается, начинают функционировать так называемые андроген-репрессорные гены, вследствие чего наблюдается физиологическая гибель клеток - апоптоз. Погибают до 80% эпителиальных клеток и клинически это проявляется атрофией ткани простаты.

Опухолевая трансформация эпителиальных клеток простаты связана с нарушением гормонального контроля со стороны позитивных, негативных и андроген-репрессорных генов. Когда отмечается делеция негативного типа генной регуляции (нет механизма ограничения числа клеток), опухоли остаются андроген-зависимыми. При нарушении негативной регуляции и делеции андроген-репрессорных типов генов (нет механизма ограничения числа клеток и их физиологической смерти) в опухоли есть клоны клеток андроген-чувствительные и андроген-независимые.

При дальнейшем прогрессировании отмечается поломка генов позитивной регуляции (инициации клеточного деления), в этой ситуации опухоль становится андроген-независимой и ее рост автономным.

Удаление андрогенов ведет к замедлению инициации синтеза и индукции апоптической смерти клеток [52].

Ответственность за рост и прогрессию РПЖ возлагается также на пептидные факторы роста - трансформирующий (3 и эпидермальный, которые обладают способностью подавлять рост опухоли и одновременно снижать продукцию трансформирующего а и инсулиноподобного, стимулирующих этот рост.

Выбор метода лечения рака предстательной железы зависит от стадии заболевания, уровня дифференцировки опухоли и возраста больного. У достаточно молодых больных со стадией А и В, особенно при низкодифференцированном раке применяется радикальный метод лечения — простатэктомия. В стадии С методом выбора является лучевая терапия.

Основным методом лечения РПЖ в D стадии является паллиативная гормональная терапия и в качестве первой линии гормонального лечения «максимальная андрогенная блокада» (МАБ) [5,16,60,88,89]. 80 % больных в этой стадии отвечают субъективным эффектом. Среднее время до прогрессирования после начала гормональной терапии — 12 месяцев, а средняя выживаемость после ее начала — 30 месяцев.

При гормононезависимой форме РПЖ показана химиотерапия. Химиотерапия при лечении РПЖ вызывает регрессию опухоли только у 3040 % больных.

Целесообразность использования нового эстрогенного препарата, обладающего противоопухолевым действием, диктовалась следующими факторами: первичной нечувствительностью ряда больных РПЖ к известным эстрогенным препаратам; различиями в степени проявления побочных эффектов у разных эстрогенов; возникновением лекарственной устойчивости при длительном применении одного и того же эстрогенного препарата; отсутствием среди известных эстрогенов препаратов пролонгированного действия [10,12,14,24]. Кроме того, с экономической точки зрения лечение РПЖ эстрогенами гораздо дешевле, чем применение агонистов ЛГРГ и антиандрогенов. Так, затраты на 28-дневное лечение диэтилстильбэстролом в дозе 1 мг в сочетании с аспирином в 48 раз дешевле чем лечение золодексом в комбинации с флутамидом [131]. А

Эстразин обладает высокой степенью сродства (I 5о — 1 х 10 ~вМ) и необратимо связывается с РЭ матки крыс in vitro. Препарат проявляет выраженное и длительное антиандрогенное действие: уменьшает массу вентральной доли простаты, семенников и семенных пузырьков; вызывает химическую кастрацию мышей-самцов; снимает гиперплазию предстательной железы, вызванную тестостероном [25,26].

Высокое противоопухолевое и пролонгированное действие эстразина показано в отношении перевиваемых опухолей молочной железы (РМК-1, F-24), индуцированных по методике Бискиндов опухолей яичников (ЧР у 72 % и стабилизацию опухолевого процесса у 14 % животных) и гормонозависимой аденокарциномы предстательной железы R3327-H (тормозит рост на 82 %) [27].

Острая и хроническая токсичность препарата была изучена на мышах, крысах и собаках. Эстразин в летальной, высокой и низкой токсической дозах оказывает влияние на функциональное состояние сердца, вызывая преходящую умеренную гипоксию сердечной мышцы [18].

Лимитирующим видом токсичности является гепатотоксичность. Токсическое действие эстразина на печень связано с нарушением ее углеводной и белоксинтезирующей функций. Функциональная обратимость гепатотоксического действия - 120-150 суток после применения эстразина. Препарат в низких токсических дозах не оказывает токсического действия на печень. Токсическое действие на печень имеет дозозависимый характер, учитывая это, препарат можно классифицировать как умеренно опасный (ГОСТ 12.1.007-76) [18].

Данные о дозозависимом уровне токсического действия эстразина, а также высоком и пролонгированном противоопухолевом действии на грызунах, у которых отсутствует анальный сфинктер, послужили основанием оценить его эффективность на спонтанных гормоночувствительных опухолях собак.

Собака является, по-видимому, единственным из домашних животных, которое на протяжении всей своей жизни живет около человека, разделяя с ним среду обитания и испытывая на себе влияние тех же или весьма близких факторов внешней среды. В отличие от многих других домашних животных собаки, как правило, доживают до своей естественной смерти и, возможно, именно поэтому у них так широк и разнообразен спектр опухолевых заболеваний, которые, как известно, возникают чаще всего у старых животных.

Для изучения противоопухолевого действия препарата эстразин была предложена спонтанная аденома перианальных желез собак. Аденома перианальных желез собак является гормонозависимой доброкачественной опухолью и возникает у старых самцов в условиях повышенного уровня андрогенов в организме. Как и в РПЖ человека [3], в аденоме перианальных желез нами обнаружены рецепторы андрогенов и эстрогенов, что согласуется с данными литературы об их наличии в этих опухолях [55,65,68]. Эффективными методами лечения аденомы перианальных желез, по мнению большинства исследователей, являются эстрогенотерапия и орхиэктомия, применяемые как в отдельности, так и в сочетании. За рубежом для лечения аденомы ПЖ применяют: эстрадиола циклопропионат, эстрадиола ципионат, диэтилстильбэстрол. Продолжительность ремиссии в результате применения этих препаратов составляет 6 месяцев, после чего возможно развитие рецидивов [55,67,111,117,139]. Таким образом, по гормональной чувствительности аденома ПЖ соответствует характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека, и она может быть использована для доклинического испытания новых гормональных препаратов.

Кроме того, прижизненная диагностика спонтанных опухолей ПЖ собак не вызывает особых трудностей. Аденома ПЖ доступна визуально, что позволяет проводить осмотр животного и оценивать результаты лечения по клиническим признакам, путем измерения объема аденомы и по патоморфозу опухоли.

И, наконец, спонтанная аденома ПЖ является достаточно распространенной и плохо поддающейся лечению опухолью собак. Поэтому ее лечение остается актуальной проблемой в ветеринарной практике и сегодня.

При изучении противоопухолевой активности эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез выявлены явные преимущества препарата по сравнению с синэстролом, применяемым при лечении этих опухолей. Эстразин в дозе 10 мг/кг при введении в его течение 10 дней вызывает терапевтический эффект у 100 % животных (ПР в 45,5 % случаев, ЧР также в 45,5% случаев и стабилизации опухолевого процесса в 9 % случаев) через 4-7 недель после начала лечения. В те же сроки наблюдения эстразин в дозе 20 мг/кг при применении его в течение 5 дней вызывает ПР в 56,2 % случаев, ЧР в 31,2 % случаев и стабилизацию опухолевого процесса в 6,3 % случаев.

На лечение аденом ПЖ синэстролом требуется больше времени — прием таблеток внутрь в течение 1-2 месяцев в дозах 12 — 24 мг/кг, а терапевтический эффект развивается только через 8-13 недель после начала лечения. При этом ПР наблюдаются в 31 % случаев, ЧР в 24,5 % случаев и стабилизация опухолевого процесса в 31 % случаев (терапевтический эффект у 86,2 % собак).

Наибольшее преимущество в лечении аденом - ПР двумя препаратами выявлено при небольшом объеме опухоли — 0,5 — 10 см3. После введения эстразина высокий терапевтический эффект наблюдается у 100 % собак (ПР в 83 % случаев и ЧР в 17 % случаев). После приема синэстрола внутрь терапевтический эффект проявляется у 83,4 % собак, при этом ПР наблюдаются в 66,7 % и ЧР в 16,7 % случаев.

Выявлена также разная частота и сроки возникновения рецидивов после лечения эстразином и синэстролом. Из 13 собак после проведенного лечения эстразином, с достигнутой ранее ПР, через 1-4 месяца только у 2 животных (15,4 %) наблюдали возобновление роста опухоли, через 5-8 месяцев - у 5 животных (38,5 %) и через 9-12 месяцев у 6 животных (46,1 %). Тогда как из 18 собак, леченных синэстролом, уже через 1—4 месяца у 14 животных (77,8 %) возникли рецидивы аденомы ПЖ, а еще через 4 месяца и у остальных 4 собак (22,2 %).

Морфологическое изучение аденом перианальных желез собак в процессе применения препарата эстразин выявило, что в опухолях появляются выраженные дистрофические изменения с 21-30 дня от начала лечения. К 30-50-му дню от начала лечения в опухолях возникают некротические изменения, появляются инфильтраты из лимфоидных и плазматических клеток, а также разрастание соединительной ткани.

К 50-60-му дню от начала лечения у 48,5 % животных выявляется полная регрессия опухоли. Собаки с ЧР в эти же сроки подвергались хирургическому лечению. При морфологическом исследовании полученного от них биопсийного материала в тканях опухоли наблюдались признаки лекарственного патоморфоза.

На основании клинических данных во время лечения эстразином собак со спонтанной аденомой перианальных желез установлено, что препарат не вызывает осложнений и побочных эффектов. В то же время в процессе лечения синэстролом у 15 (51,7 %) из 29 собак наблюдались побочные явления в виде анорексии, рвоты и вялости.

Изучение эстразина проводили также на спонтанной аденоматозной гиперплазии предстательной железы, которая также является гормоно-зависимой у собак.

Гиперплазия простаты встречается у 60-87 % собак старше 5-7-летнего возраста [84,85,126]. Гиперплазия простаты возникает на фоне длительных гормональных нарушений в организме. С возрастом у животных может уменьшаться секреция эстрогенов клетками Сертоли и андрогенов -интерстициальными клетками Лейдига яичка, что может привести к нарушению количественного соотношения этих гормонов и их предшественников. Избыточная длительная стимуляция андрогенными гормонами становится одной из причин возникновения и развития изменений в предстательной железе [44,126,119,132]. Кастрация вызывает инволюцию как нормальной, так и гиперплазированной железы. Противоположный эффект достигается при введении тестостерона, в результате чего развивается гиперплазия простаты, и восстанавливается секретирование атрофированной железы [106].

При лечении гиперплазии предстательной железы собак чаще проводится орхиэктомия. Кроме того, при гиперплазии предстательной железы проводится эстрогенотерапия, которая может применяться в течение многих лет. Из эстрогенных препаратов за рубежом в основном применяется диэтилстильбэстрол и эстрадиола ципионат [54,62]. В последнее время стали применяться прогестины - мегестрола ацетат, обладающий антиандрогенным действием [55] и антиандрогены — хлормадинон ацетат [85], озатерон ацетат [140].

В случаях, когда гиперплазия простаты не отвечает на кастрацию или эстрогенотерапию, прибегают к хирургическим способам лечения: капсулотомия, частичная или полная простатэктомия. Капсулотомия и частичная простатэктомия вызывают временную ремиссию [45,67,70].

Развитие доброкачественнной гиперплазии предстательной железы (Д111Ж) человека связано не столько с уровнем циркулирующих гормонов, сколько с процессами, происходящими в самой железе, хотя последние и зависят от гормонального гомеостаза [2].

Важными факторами в патогенезе ДГПЖ являются:

• Повышенная активность ядерной 5-а-редуктазы, которая приводит к высокой концентрации ДГТ в гиперплазированной простате человека (в 5 - 8 раз превышает нормальные уровни) [137]. При этом концентрация тестостерона в нормальной и гиперплазированной предстательной железе практически не различается.

• Эстрогены в низких дозах не влияют или незначительно стимулируют превращение тестостерона в ДГТ при участии 5-а-редуктазы. В то же время, учитывая возможность влияния эстрогенов на накопление андрогенов в простате, а также вмешательство в метаболические процессы, связанные с образованием ДГТ, трудно принять жесткую альтернативу в отношении эстрогенной или андрогенной теории патогенеза ДГПЖ. По-видимому, определящим фактором является дисбаланс в системе обоих гормонов и их взаимодействия [2]. • Дискутабельным остается вопрос о роли пролактина в патогенезе ДГПЖ. Предстательная железа содержит рецепторы к пролактину. « Прямое влияние пролактина на простату было установлено в опытах как in vitro, так in vivo. Пролактин стимулирует пролиферацию эпителиальных клеток в монослойной культуре простаты. Кроме того, пролактин повышает чувствительность простаты к тестостерону, а потому, если и не непосредственно, то через механизм потенцирования влияния андрогенов может способствовать гиперплазии простаты [2].

При консервативном лечении ДГПЖ патогенетически обснованными для лечения ДГПЖ являются:

1. Блокаторы 5-а-редуктазы (финастерид и др.).

2. Агонисты J11РГ (нафарелин ацетат, бусерелин, золадекс)

3. Прогестины (депостат, мегестрол ацетат, гидроксипрогестерона 4 ацетат, медрогестрона ацетат).

4. Антиандрогены (флутамид, андрокур, ципротерон ацетат).

5. Кетоконазол, ингибирующий синтез стероидов.

6. Ингибиторы секреции пролактина (бромкриптин и др.). Основным все-таки методом лечения ДГПЖ является хирургический простатэктомия.

Препарат эстразин применяли для лечения гиперплазии предстательной железы у 5 собак. В результате лечения у всех животных р отмечался положительный объективный эффект, который выражался в „ уменьшении объема предстательной железы и восстановлении актов дефекации и мочеиспускания. Уменьшение объема предстательной железы более чем на 50 % наблюдали у 2-х животных при использовании эстразина в дозе 20 мг/кг и введении в течение 5 дней. Все животные были подвергнуты патологоанатомическому исследованию. При морфологическом изучении у 2-х собак была выявлена картина выраженной атрофии предстательной железы с признаками плоскоклеточной метаплазии и атрофии эпителия ацинусов.

Данные о наличие у эстразина прямого цитотоксического действия и влияния его на массу яичек крыс [25,26] позволили предположить возможность его эффективности при опухолях яичка собак.

У собак наиболее часто встречаются три типа опухолей яичка: семиномы, Сертоли-клеточные опухоли и опухоли из клеток Лейдига.

Спонтанные опухоли яичка у собак возникают относительно редко, и на их долю приходится по данным различных авторов от 5 % до 10 % всех злокачественных опухолей собак, но по отношению к опухолям самцов частота опухолей яичка может составлять 17 % [21,97,111,128]. Опухоли яичка обнаруживаются чаще у старых животных в возрасте 7-9 лет, однако, этот возраст может колебаться от 4 до 16 лет, а средний возраст находится в пределах от 8 до 11,5 лет [55,92,111,114,128].

Некоторые клинические признаки определяются гормональной активностью той или иной опухоли яичка. Сертоли-клеточные опухоли секретируют эстрогенные стероиды, и в соответствии с изменяющимся гормональным статусом у собак-самцов развивается характерный комплекс симптомов феминизации: увеличение молочных желез и сосков, билатеральная симметричная алопеция, гиперпигментация, особенно в перианальной и генитальной областях, угасание либидо, тяготение к другим самцам, атония крайней плоти, атрофия эпидермального слоя и метаплазия клеток плоского эпителия предстательной железы. Волосы становятся сухими и ломкими, кожа утолщается, развивается отечность, особенно вокруг мошонки. Происходит характерное отложение жира в подкожной клетчатке грудной клетки, бедер, поясничной области. Нередко развивается атрофия непораженного яичка [19,95,111,119,120,134].

Семиномы - опухоли, возникающие из герминогенного эпителия. Симптомы связаны с проявлением андрогенной активности опухоли. К ним можно отнести возникновение аденомы перианальных желез одновременно с семиномой, что обнаруживается в 8-10 % случаев [110,111,114,119,129]. В некоторых случаях одновременно с семиномой яичка может развиваться гиперплазия предстательной железы, а иногда — и рак предстательной железы [114].

Интерстициально-ютеточные опухоли, или опухоли из клеток Лейдига, возникают чаще у более старых животных. Их часто обнаруживают случайно при вскрытии старых собак, погибших от других заболеваний [114]. Эти опухоли продуцируют андрогены, поэтому при их развитии у собак могут возникать аденомы перианальных желез и гиперплазия простаты [55,114].

Злокачественные опухоли яичка у собак метастазируют редко. Метастазы возникают у 10 % собак с Сертоли-клеточными опухолями и семиномами, тогда как интерстициально-клеточные опухоли метастазируют еще реже. Метастазирование происходит по лимфатическим сосудам в глубокие паховые, внутренние подвздошные и сублюмбальные лимфоузлы [95].

В целом злокачественные опухоли яичка у собак менее часты, чем у человека (особенно редки тератомы и эмбриональный рак) [72,95].

Эстразин вводили 6 животным с опухолями яичка в дозах: 10 мг/кг в течение 10 дней (3 животных) и 20 мг/кг в течение 5 дней (3 животных) в суммарной дозе 100 мг/кг. Из 6 у двух собак со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и у одной с семиномой наблюдалась стабилизация роста опухоли. У собаки с доброкачественной опухолью из клеток Лейдига выявлена частичная ремиссия. У одной собаки со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и у одной собаки со смешанной опухолью участки семиномы и сертолиомы) выявлен рост опухолей.

Животные с опухолями яичка наблюдались в течение 24-30 суток от начала лечения, после чего им была проведена орхиэктомия. У собаки с частичной регрессией доброкачественной опухоли из клеток Лейдига при морфологическом исследовании после лечения эстразином выявлены признаки патоморфоза опухоли. В ткани опухоли наблюдались выраженные пикноз и лизис ядер, некроз клеток, а также участки фиброзного разрастания соединительной ткани.

Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат эстразин обладает выраженным противоопухолевым действием на гормоно-зависимые опухоли собак - спонтанную аденому перианальных желез и аденоматозную гиперплазию предстательной железы. По сравнению с синэстролом противоопухолевое действие эстразина реализуется раньше и имеет пролонгированный характер. Кроме того, эстразин обладает меньшими побочными эффектами. Препарат эстразин рекомендуется для клинических испытаний при раке предстательной железы человека и для лечения аденомы перианальных желез собак.

В заключение хотелось бы выразить глубокую благодарность моему первому руководителю диссертации [В.И. Пономарькову] , а также всем тем, кто помогал в выполнении представленной работы: сотрудникам лаборатории сравнительной онкологии, сотрудникам лаборатории клинической биохимии, сотрудникам отдела экспериментальной химиотерапии.