Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:ADMA-eNOS-детерминированные пути фармакологической коррекции гестоза

На правах рукописи /

00505113°

Гуреев Владимир Владимирович /

АВМА-е1Ч08-детерминированные пути фармакологической коррекции гестоза

14.03.06 — фармакология, клиническая фармакология

/

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук

2 8 МАР 2013

Курск - 2012

005051135

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович Официальные оппоненты:

Тюренков Иван Николаевич, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей

Серпов Лев Николаевич, заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор, ООО «Фармконсалтинг», генеральный директор

Резников Константин Михайлович, заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Воронежская государственная медицинская академия имени H.H. Бурденко» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой фармакологии

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится« // » O-lif/JUstd 2013 г. в ш на заседании диссертационного сов</га Д 208.039.03 государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (305044, г. Курск, ул. К. Маркса, д. 3.)

С диссертацией можно ознакомиться в ГБОУ ВПО КГМУ Росздрава России

Автореферат разослан « D-f » iQ-fU 2013 г.

Ученый секретарь У/

диссертационного совета /¿г/ Пашни Евгений Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность научного исследования

Несмотря на значительные достижения в диагностике и лечении, гестоз по-прежнему остается грозным заболеванием второй половины беременности. По данным различных авторов, частота встречаемости гестоза колеблется от б до 25% (Сидорова U.C., 2009; Крукиер И.И., 2009). В структуре материнской смертности гестоз занимает 2-3 место. На его долю приходится до 25% случаев. У детей, родившихся у матерей, перенесших гестоз, перинатальная заболеваемость достигает 78%, а смертность в 3-4 раза превышает популяционную (Айламазян Э.К., 2008). Кроме этого, страдает умственное и физическое развитие ребенка, а у женщин повышается вероятность развития хронической патологии почек и артериальной гипертензин (Логутова JI.C., 2008; Радзинский В.Е., 2009; Иванова О.Ю., 2011).

Многочисленные факты свидетельствуют о том, что клинические проявления гестоза обусловлены развитием патологических изменений в эндотелии кровеносных сосудов, которые связаны с нарушением регуляции их тонуса и реологических свойств крови (Böger R.H., 2009). В последние годы обнаружено, что пусковым моментом развития данной патологии может являться повышение концентрации в материнской плазме метилированных аналогов L-аргинина асимметричного диметиларгинина (ADMA) и монометиларгинина (L-NMMA) (Perticone F., 2009; Pope A.J., 2009), являющихся эндогенными ингибиторами эндотелиальной NO-синтазы (eNOS).

При морфологическом исследовании плаценты многие авторы описывают специфическую гистологическую картину, заключающуюся в диспропорциях развития ее пограничного участка между материнской и плодными частями, что приводит к ишемическим явлениям в плаценте (Jeffrey S. Gilbert., 2008).

В ответ на плацентарную ишемию происходит выделение большого количества гуморальных факторов, оказывающих большое влияние на сосудистый тонус. Некоторые из них способствуют развитию системной эндотелиальной дисфункции: свободные радикалы, аутоантитела рецептора ангиотензина II (тип 1) (АТ1-АА), провоспалительные цитокины (фактор некроза опухоли) (TNF-a), рецептор-1 растворимого фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (sFlt-1). Следствием этого являются усиление образования таких факторов, как эндотелии, тромбоксан, 20-гидроксиэйкозатетраеновая кислота (20-НЕТЕ) и повышенная чувствительность к ангиотензину II. Кроме этого, проявлениями системной эндотелиальной дисфункции при гестозе является угнетение синтеза сосудорасширяющих факторов: оксида азота (NO) и простациклина. Финалом сложных патофизиологических изменений, приводящих к нарушению синтеза гуморальных факторов и регуляции сосудистого тонуса, является дисфункция внутренних органов. Наиболее ярко эти закономерности прослеживаются у женщин с ранними проявлениями гестоза.

Принципы современной фармакологической терапии гестоза направлены на восстановление функции жизненно важных органов, снижение артериального давления, нормализацию водно-солевого обмена, реологических и коагуляционных свойств крови (Савельева Г.М., 2010). В свете современных представлений о патогенезе гестоза, ее существенным недостатком является отсутствие целенаправленного использования препаратов для коррекции ЫО-продуцирующей функции эндотелия.

В более ранних исследованиях, проведенных в нашей лаборатории, было показано, что препараты, повышающие содержание субстрата для синтеза N0 - Ь-аргинина, увеличивают активность ИО-синтазы, усиливают образование N0 и предотвращают развитие эндотелиальной дисфункции у крыс-самцов при АБМА-подобном Ь-МАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота. Кроме этого, эффективными на данной модели оказались активатор еЫОЭ - резвератрол, антиоксиданты, эритропоэтин и др. Определенное развитие получили исследования эндотелиопротективной активности на других «еЫОЗ-ассоциированных» экспериментальных моделях: гипоэстроген-индуцированной, гомоцистеин-индуцированной, метаболического X синдрома, при реактивном поствакцинальном васкулите и сепсис-индуцированной эндотелиальной дисфункции (Покровский М.В. и соавт., 2005-2013).

Еще одним перспективным направлением лечения и профилактики гестоза может явиться использование фармакологических препаратов, в основе механизма действия которых лежит активация защитных процессов, наблюдаемых при ишемическом прекондиционировании. Дистантное ишемическое прекондиционирование и, как его вариант, фармакологическое прекондиционирование оказывает положительное влияние на различные звенья патогенеза гестоза, реализуя свое действие через триггеры «1-го окна» (К+АТФазный механизм) и «2-го окна» (МО-опосредованный механизм) защиты (Галлямов Н.В., 2009.; Маслов Л.Н., 2009).

Таким образом, в настоящее время накопилось достаточно большое количество сведений о влиянии различных факторов на течение гестоза и их роли в развитии эндотелиальной дисфункции как основного патогенетического звена этого грозного заболевания и возможности коррекции эндотелиальной дисфункции фармакологическими агентами различных групп. Однако в доступной литературе не обнаружено сведений об изучении эндотелиопротективного действия в условиях АОМА-подобного гестоза Ь-аргинина, Ь-норвалина, тадалафила, а также их комбинаций с препаратами, входящими в стандартную антигипертензивную терапию гестоза, витамином В6 и фолиевой кислотой, поливитаминно-минеральными комплексами, эритромицином, азитромицином, рекомбинантным эритро-поэтином, а также эффективности направления, в основе которого лежит дистантное ишемическое прекондиционирование.

Работа выполнена по инициативному плану, включена в программу «Разработка и совершенствование методов ранней диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний с целью улучшения каче-

ства и увеличения продолжительности жизни больных» на 2007-2012 гг., номер госрегистрации 0120.0710379. Номер государственной регистрации темы диссертационного исследования 01201058348.

Цель исследования: провести оценку коррекции экспериментального гестоза с помощью фармакологических подходов, направленных на АБМА-еЫОЗ-детерминированные пути, и методами, в основе реализации которых лежат биологические процессы, протекающие при дистантном ишемическом прекондиционировании.

Основные задачи исследования

1. Разработать АОМА-подобную модель патологии у беременных животных и провести оценку комплекса качественных и количественных нарушений с использованием результатов функциональных проб, данных ЛДФ-метрии плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и морфологического исследования плаценты и почек.

2. Провести исследование эффективности коррекции экспериментального гестоза препаратами стандартной фармакологической терапии артериальной гипертензии (метилдопа и амлодипин) с использованием выбранных критериев: результатов функциональных проб и данных биохимического и морфологического исследований.

3. Оценить степень коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с экспериментальным гестозом фармакологическими агентами с доказанной ранее эндотелиопротективной активностью донатора N0 - Ь-аргинина и ингибитора аргиназы - Ь-норвалина, а также их комбинаций с метилдопой и амлодипином на основании предложенной методологии.

4. Изучить эффективность коротких эпизодов ишемии-реперфузии при коррекции экспериментального гестоза. Оценить роль АТФ-зависимых К+ каналов и ¡ЫОБ в реализации эндотелиопротекгивного эффекта дистантного ишемического прекондиционирования.

5. Исследовать эффективность фармакологического прекондиционирования рекомбинантным эритропоэтином при коррекции экспериментального гестоза.

6. Изучить эффективность применения ингибитора ФДЭ5 — тадала-фила, обладающего прекондиционирующим эффектом, при коррекции экспериментального гестоза.

7. Оценить степень коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с АОМА-подобной моделью патологии антибактериальными препаратами из группы макролидов, обладающими актиокси-дантной и противовоспалительной активностью.

8. Провести исследование эффективности коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с АЁМА-подобной моделью патологии препаратами из группы витаминно-минеральных комплексов для беременных и витаминами В6 и фолиевой кислотой, обладающими различными механизмами действия.

Научная новизна исследования

В работе впервые предложен способ моделирования АОМА-подобной патологии у беременных животных. Продемонстрировано, что экспериментальная АБМА-подобная патология у животных в период гес-тации характеризуется морфофункционапьными нарушениями, характерными для клинической картины гестоза.

Препараты, входящие в стандартную антигипертензивную терапию гестоза (амлодипин и метилдопа), уменьшают морфофункциональные нарушения при коррекции АОМА-подобной модели патологии у беременных животных, однако выраженность данного эффекта не достегает целевого уровня.

Получены данные, свидетельствующие о том, что Ь-аргинин и Ь-норвалин оказывают выраженное протективное действие при коррекции АОМА-подобной модели патологии у беременных животных.

Комбинация фармакологических агентов с доказанной ранее эндоте-лиопротективной активностью, увеличивающих количество субстрата для синтеза N0: Ь-аргинина и Ь-норвалина, с препаратами, входящими в стандартную антигипертензивную терапию при коррекции морфофункцио-нальных нарушений у беременных животных с АОМА-подобной патологией, оказывает наиболее выраженный эффект за счет воздействия на различные звенья патогенеза.

Использование 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии задних конечностей оказывает выраженное протективное действие при коррекции морфофункциональных изменений при моделировании АОМА-подобной патологии. Значительную роль в реализации положительных эффектов дистантного ишемического прекондиционирования при коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с АОМА-подобной моделью гестоза играют АТФ-зависимые К+ каналы и ¡N08.

Введение рекомбинантного эритропоэтина при АОМА-подобной патологии у животных приводит к коррекции морфофункциональных нарушений. Однако по силе своего эффекта рекомбинантный эритропоэтин уступает Ь-аргинину.

В настоящей работе выявлена эффективность использования для коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с АОМА-подобной моделью патологии фармакологического препарата «Та-дапафила», относящегося к группе ингибиторов фермента фосфодиэстера-зы5.

Проведенное исследование показало уменьшение морфофункциональных нарушений у беременных животных с АОМА-подобной моделью патологии при использовании антибактериальных препаратов из группы макролидов: азитромицина и эритромицина, обладающих актиоксидантной и противовоспалительной активностью.

Впервые показана эффективность использования фолиевой кислоты, комбинации фолиевой кислоты и витамина Вб, препаратов «Компливит триместрум 2 триместр» и «Компливит триместрум 3 триместр» для кор-

рекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с ADMA-подобной моделью патологии.

Научно-практическая значимость В работе обоснована эффективность применения фармакологических агентов для коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с ADMA-подобной моделью патологии, точками приложения в механизмах действия которых являются различные eNOS-обусловленные патогенетические звенья. Показано, что использование различных препаратов, улучшающих NO-продуцирующую функцию, позволяет нормализовать плацентарную микроциркуляцию, артериальное давление, предотвратить альбуминурию, а также изменение соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация), предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO), добиться положительной динамики морфологических показателей в плацентарной и почечной ткани.

Полученные данные позволяют обосновать новое перспективное направление для поиска и создания эффективных лекарственных препаратов для лечения гестоза и преэклампсии, в основе реализации механизма действия которых будет лежать патогенетическое воздействие на различные ADMA-eNOS-детерминированные механизмы развития этой патологии.

На основании результатов проведенной исследовательской работы разработаны теоретические положения, совокупность которых можно квалифицировать как крупное научное достижение в развитии перспективных направлений в фармакологии, клинической фармакологии, состоящее в экспериментальном обосновании новых патогенетических подходов к лечению гестоза.

Внедрение результатов научных исследований На основании данных диссертационного исследования запланировано проведение целенаправленных клинических исследований L-норвалина, L-аргинина, тадалафила, коротких эпизодов ишемии-реперфузии, а также их комбинаций с препаратами, входящими в стандартную фармакологическую терапию эндотелий-ассоциированной патологии.

Материалы диссертационного исследования, касающиеся эндоте-лиопротективной активности препаратов «Компливит триместрум 2 триместр» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» (РУ № J1CP-008560/10) и «Компливит триместрум 3 триместр» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» (РУ № ЛСР-008555/10), включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ.

Полученные результаты используются в учебных программах кафедр фармакологии, клинической фармакологии КГМУ, кафедры фармакологии Орловского государственного университета и кафедры фармхимии и фармакогнозии, фармакологии и фармацевтических дисциплин, биохцмии и фармакологии Белгородского государственного университета, кафедры фармакологии Воронежской медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. АОМА-подобная Ь-КАМЕ-индуцированная патологии у беременных животных характеризуется морфофункциональными нарушениями, характерными для клинических проявлений гестоза.

2. Введение препаратов, входящих в стандартную терапию гестоза, и фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин - N0, оказывает протективное действие при коррекции морфофункциональных нарушений при АОМА-подобной модели патологии у беременных животных, причем наибольшей эффект наблюдается при их комбинированном использовании.

3. Использование коротких эпизодов ишемии-реперфузии, рекомби-нантного эритропоэтина и тадалафила как препаратов, обладающих пре-кондиционирующими свойствами, оказывает выраженное протективное действие на коррекцию морфофункциональных изменений при моделировании АОМА-подобной патологии. Важную роль в реализации протектив-ных эффектов коротких эпизодов ишемии-реперфузии играют АТФ-зависимые К+ каналы и ¡N08.

4. Введение антибактериальных препаратов из группы макролидов азитромицина и эритромицина оказывает выраженный положительный эффект при коррекции морфофункциональных нарушений у беременных животных с АОМА-подобной моделью патологии.

5. Применение витаминных препаратов для коррекции морфофункциональных нарушений, возникающих у беременных животных при АОМА-подобной модели патологии, оказывает выраженный положительный эффект.

Апробация диссертации

Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и конференциях молодых ученых ГОУ ВПО КГМУ в 2009,2010, 2011 и 2012 гг., V и XIV национальных конгрессах «Человек и лекарство», V конгрессе «Рациональная фармакотерапия и клиническая фармакология» (Санкт-Петербург, 2010), III Всероссийском научно-практическом семинаре «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии» (Волгоград, 2011), X итоговой научно-практической конференции клинических ординаторов, интернов, молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» НИУ БелГУ, конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине», Франция (Париж, 2012), конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине», Россия (Сочи, 2012).

Апробация диссертации проведена 25 мая 2012 г. на совместном заседании кафедр фармакологии, клинической фармакологии, патофизиологии, гистологии, внутренних болезней № 2, акушерства и гинекологии, акушерства и гинекологии ФПО, НИИ экологической медицины КГМУ и на кафедре фармацевтических дисциплин Белгородского государственного национального исследовательского университета.

Личный вклад автора

Автору принадлежит основная роль при определении направления исследования, постановке цели и поиске путей ей достижения. Лично автором проведен анализ отечественных и зарубежных источников по теме выполняемой диссертации. На основании анализа литературных данных выдвинуты рабочие гипотезы о возможных путях фармакологической коррекции экспериментального гестоза с помощью подходов, направленных на ADMA-eNOS-детерминированные механизмы, и методами, в основе реализации которых лежат процессы, протекающие при дистантном ишемическом прекондиционировании. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования.

В опубликованных работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведена разработка дизайна и протокола исследования, определены ключевые критерии оценки морфофункциональных нарушений при моделировании исследуемой патологии и оценки эффективности вводимых тестируемых препаратов. При непосредственном участии автора осуществлялось выведение животных из эксперимента с регистрацией физиологических показателей и проведением функциональных проб on-line с помощью программного комплекса Asqknowledge 3.8.1, забор тканей и органов для биохимического и морфологического исследований, биохимические и морфологические исследования, статистическая обработка полученных данных, научное обоснование, обобщение и представление полученных результатов.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 36 печатных работ, из них 20 в российских рецензируемых научных журналах, включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК для публикаций результатов диссертаций, отражающих полностью содержание работы. Получено 12 патентов РФ на изобретения и 1 патент РФ на полезную модель.

Структура и объём работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы, включающего 441 источник, из них 81 отечественных и 360 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 281 странице машинописного текста, содержит 35 таблиц, 97 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Моделирование АОМА-подобного гестоза

Эксперимент выполнен на 970 белых крысах-самках линии \Vistar массой 250-300 г. Для формирования групп беременных животных с заданными сроками, находящихся на раздельном содержании, к самкам (3 животных) подсаживали самцов (2 животных) на 24 часа. Затем животных рассаживали и через 10 суток в условии эфирного сна пальпаторно определяли наличие беременности. В наших экспериментах беременность наступала в 30-40%. АОМА-подобный агент - неселективный блокатор N0-сиитазы ¡Ч-нитро-Ь-аргинин-метиловый эфир (Ь-ЫАМЕ) вводили внутри-брюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение семи дней (14-20 сутки беременности). По данным литературы, такой умеренно пролонгированный сред-недозовый режим введения Ь-ЫАМЕ приводит к блокаде ЫО-синтазы в эндотелии плацентарных сосудов, что, в свою очередь, приводит к деструктивным изменениям в тканях плаценты, артериальной гипертензии и протеинурии.

Оценка степени развития эндотелиальиой дисфункции при моделировании патологии

Степень эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных оценивали по расчетному коэффициенту эндотелиальной дисфункции (КЭД), предложенному в лаборатории кардиофармакологии НИИ экологической медицины коллективом авторов под руководством профессора М.В. Покровского.

При оценке результатов функциональной пробы на ЭЗВД использовалась площадь прямоугольного треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг. При этом за меньший из катетов данного треугольника принималась разность между исходным значением АД (перед проведением пробы) и минимальным значением АД после окончания кардиального компонента.

При оценке результатов ЭНВД с введением нитропруссида в дозе 30 мкг/кг также использовалась площадь прямоугольного треугольника над кривой восстановления АД, точками меньшего катета которого являлись: исходное значение АД (перед проведением пробы) и точка максимального падения АД при сосудистой реакции.

Большими катетами в обоих треугольниках являлись показатели времени восстановления АД в ответ на внутривенное введение ацетилхолина и нитропруссида соответственно, выражаемое в секундах. Площадь исчисляемых треугольников выражалась в условных единицах (усл. ед.).

Предложенный коэффициент эндотелиальной дисфункции является отношением площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение НП (внл) к площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение АХ (вдх):

¡>АХ

Определение биохимических маркеров эндотелиальной дисфункции

Уровень метаболитов N0 (то есть суммарную концентрацию нитратов и нитритов, ЫОх) определяли колориметрическим методом по развитию окраски в реакции диазотирования нитритом сульфаниламида, входящим в состав реактива Грисса.

Уровень экспрессии эндотелиальной синтазы оксида азота (еТЧОв) определяли в клеточном лизате по методу Хендриксона (Метель-ская В .А., Туманова Н.Г., 2002). Детекцию полосы е>108 проводили методом усиленной хемолюминесценции (ЕСЬ).

Оценка плацентарной микроциркуляции

Для получения данных о состоянии микроциркуляции в плаценте на 21 сутки беременности под наркозом в 4 точках измеряли уровень микроциркуляции на расстоянии 1 мм от края плацентарного диска. Для получения данных о состоянии микроциркуляции в плаценте использовали оборудование производства компании Вюрасзуз1етз: полиграф МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) ЫЭРЮОС и инвазив-ным игольчатым датчиком Т80144, который устанавливался непосредственно на проекцию плацентарного диска. Регистрация и обработка результатов ЛДФ производилась с помощью программы АсцК.по'^ес^е версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕд).

Исследование протеинурии

Сбор мочи у интактных и опытных групп крыс проводился с использованием специальных метаболических клеток. Животное помещалось в клетку на 12 часов с обеспечением свободного доступа к воде.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера. Для определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цит-ратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально с помощью тест-полосок или с помощью анализаторов мочи. Тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями.

Морфологические методы оценки изменений в плаценте и почках при моделировании Ь^АМЕ-индуцированной ЭД

Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и в комплексной оценке эффективности препаратов проведено гистологическое исследование (во всех сериях эксперимента), почек и плаценты. Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Срезы почек производили перпендикулярно основной оси органа через лоханку. Гистологические срезы плаценты про-

изводили в строго вертикальном направлении через середину плацентарного диска с захватом всех слоев плаценты и стенки рога матки. Изучение микропрепаратов, фотопротоколирование и морфометрию проводили на микроскопе Leica DM4000B с системой видеорегистрации и обработки изображений. При всех морфологических исследованиях использовали окраску гематоксилином и эозином. Для возможности сравнительной оценки морфологические изменения оценивали в рангах. Иммуногистохимическое исследование экспрессии eNOS и iNOS в плаценте проводили с использованием антител фирмы "Spring Bioscience".

Выбор режимов введения фармакологических агентов и воспроизведения эпизодов ишемии-реперфузии

В рамках данной работы проведено исследование эндотелиопротек-тивной активности ряда фармакологических агентов.

Исследована эндотелиотропная активность L-аргинина ("EUROBIOPHARM", GmgH) в дозе 200 мг/кг/сут внутрь однократно с 14 по 20 сутки беременности.

L-норвалин ("WIRUD", GmgH) вводился в дозе 10 мг/кг/сут внутрь однократно с 14 по 20 сутки беременности.

Исследование активности антагониста кальция дигидропиридиново-го ряда - амлодипина («Амлотоп», ЗАО «Макиз-Фарма») производили в дозе 0,5 мг/кг/сут однократно внутрь с 14 по 20 сутки беременности.

Гипотензивный препарат центрального действия - метилдопа (Допе-гит, «Эгис») вводился в дозе 0,086 (2 х 0,043) г/кг/сут внутрь однократно с 14 по 20 сутки беременности.

В эксперименте с воспроизведением 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии использовались 2 режима их воспроизведения. В первом случае эпизод ишемии-реперфузии воспроизводили на 21 день беременности за 90 минут до начала проведения функциональных проб. Второй режим заключался в ежедневном с 10 по 20 сутки беременности однократном воспроизведении эпизода ишемии-реперфузии задней конечности.

Рекомбинантный эритропоэтин (Эпокрин, ФГУП ГосНИИ ОЧБ) вводили подкожно в дозе 50 МЕ/кг однократно в сутки на 7, 10, 13, 16, 19 сутки беременности.

Антибиотики из группы макролидов: эритромицин (ОАО «Биосинтез») и азитромицин (Сумамед, Плива Хрватска д.о.о. ) вводились внутри-брюшинно однократно в сутки в дозе 30 мг/кг с 14 по 20 сутки беременности.

Фолиевую кислоту (ОАО «Валента Фармацевтика») вводили внут-рижелудочно в дозе 0,2 мг/кг/сут однократно с 14 по 20 сутки беременности. Витамин В6 (ОАО «Верофарм») вводили внуТрибрюшинно в дозе 2 мг/кг/сут однократно с 14 по 20 сутки беременности.

Препараты «Компливит триместрум 2 триместр» и «Компливит три-меструм 3 триместр» (ООО «Фармстандарт-УфаВИТА») вводили в дозе 0,084 таб/кг/сут однократно внутрь с 14 по 20 сутки беременности.

Ингибитор фосфодиэстеразы 5 - тадалафил (Сиалис, ELI LILLY & Company Limited) вводили в дозе 0,9 мг/кг 1 раз в сутки внутрь с 14 по 20 сутки беременности.

Блокатор АТФ-зависимых К+ каналов - глибенкламид (Манинил, Берлин-Хеми АГ) вводили внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг с 14 по 20 сутки беременности.

Селективный ингибитор iNOS - аминогуанидин (Aminoguanidine hemisulfate sate, Sigma-aldrich chemine GmbH) вводили внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг.

При комбинированном применении препаратов использовались те же дозы, пути введения и та же продолжительность применения.

Дизайн эксперимента состоит из следующих блоков:

1. Контрольная группа (животные с пероральным введением NaCl в эквивалентных дозах с 14 по 20 сутки беременности).

2. Моделирование ADMA-подобного гестоза (животные с внутри-брюшинным введением L-NAME в дозе 25 мг/кг однократно в сутки с 14 по 20 сутки беременности) (рис. 1).

3. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений препаратами, входящими в стандартную терапию лечения гестоза: метилдопой 0,086 (2 х 0,043) г/кг/сут и амлодипином 0,5 мг/кг при моделировании ADMA-подобного гестоза.

4. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием фармакологических агентов с доказанной эндоте-лиопротективной активностью, реализующих свое действие за счет увеличения количества субстрата для синтеза NO - L-аргинина: L-аргинина 200 мг/кг и L-норвалина 10 мг/кг при моделировании ADMA-подобного гестоза.

5. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием фармакологических агентов с доказанной эндоте-лиопротективной активностью, реализующих свое действие за счет увеличения количества субстрата для синтеза NO - L-аргинина: L-аргинина 200 мг/кг и L-норвалина 10 мг/кг в комбинации с препаратами, входящими в стандартную терапию лечения гестоза: метилдопой 0,086 г/кг/сут и амлодипином 0,5 мг/кг при моделировании ADMA-подобного гестоза.

6. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием кратковременных эпизодов ишемии-реперфузии при моделировании ADMA-подобного гестоза.

7. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием кратковременных эпизодов ишемии-реперфузии на фоне введения аминогуанидина при моделировании ADMA-подобного гестоза.

8. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием кратковременных эпизодов ишемии-реперфузии на фоне введения глибенкламида при моделировании ADMA-подобного гестоза.

9. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием рекомбинантного эритропоэтина 50 Ме/кг при моделировании АОМА-подобного гестоза.

10. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием ингибитора ФДЭ5 - тадалафила 0,9 мг/кг при моделировании АОМА-подобного гестоза.

11. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием эритромицина 30 мг/кг и азитромицина 30 мг/кг при моделировании АОМА-подобного гестоза.

12. Оценка эффективности коррекции морфофункциональных нарушений с использованием фолиевой кислоты 0,2 мг/кг, витамина В6 2 мг/кг, препаратов «Компливит триместрум 2 триместр» 0,084 таб/кг и «Компли-вит триместрум 3 триместр» 0,084 таб/кг/ при моделировании АОМА-подобного гестоза.

сутки

1 2 10 14 20

Рис. 1. Дизайн моделирования ADMA-подобного гестоза.

Примечания:

== - Спаривание животных

- Пальпаторное определение факта беременности ътмтттт, - ВввДвНИС L-NAME

- Проведение функциональных проб, забор материала для биохимического и морфологического исследований

Статистическая обработка результатов исследования

Цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики: вариационные ряды проверяли на нормальность распределения, при его соблюдении количественные величины характеризовали средней арифметической (М) и ошибкой средней арифметической (±т), статистическую значимость количественных величин оценивали по критерию Стьюдента (t); статистическую значимость различий между морфологическими изменениями после их ранжирования оценивали с помощью метода анализа непараметрических данных Манна-Уитни. Все расчеты выполнены с помощью пакета статистических программ Microsoft Excel 7.0.

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ У БЕРЕМЕННЫХ КРЫС ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ АОМА-ПОДОБНОГО ГЕСТОЗА

Введение АРМА-подобного агента - Ь-ЫАМЕ небеременным самкам не приводило к статистически значимым изменениям. При введении Ь-ИАМЕ беременным самкам мы наблюдали развитие патологии, по своим проявлениям соответствующей критериям клинических проявлений гесто-за. Происходило статистически значимое (р<0,05) повышение систолического и диастолического АД с 125,0±6,3 мм рт. ст. и 82,0±5,8 мм рт. ст. до 183,1±9,4 мм рт. ст. и 136,7±7,4 мм рт. ст. соответственно (рис. 2). Дефицит N0 приводил к увеличению КЭД до 3,06±0,32 (р<0,05). Обращает на себя внимание, что значения КЭД, полученные у беременных самок, отличаются от полученных в нашей лаборатории результатов у самцов, что отражает, вероятно, специфичность, связанную с половыми различиями. Однако само различие в значениях КЭД у интактных беременных и с моделированием гестоза в 2,5-3 раза указывает на адекватность модели (рис. 2).

Среднее значение уровня микроциркуляции в наружной поверхности рога матки в группе интактных беременных крыс составляет 425,9± 39,6 ПЕд (перфузионных единиц). Результаты изучения уровня микроциркуляции, проведенного на 21 сутки беременности при моделировании гестоза, обнаружили ее существенное снижение до 210,0±21,1 ПЕд.

У интактных беременных крыс 12-часовой диурез составил 5,6± 1,2 мл, что соответствовало нормальным показателям у животных массой 250-300 г при протеинурии, значения которой соответствовали 0,90±0,10 г/л, т.е. до 1,0 г/л.

Моделирование Ь^АМЕ-индуцированного гестоза не оказывало существенного влияния на 12-часовой диурез. Визуально также не наблюдались отеки на конечностях. При анализе мочи обнаружено умеренно выраженное увеличение протеинурии со значениями 1,88±0,19 (р<0,05) (рис. 2). Однако нужно отметить, что при измерении микроциркуляции в почечной ткани статистически достоверной разницы между группой интактных беременных животных и животных с моделируемым АБМА-подобным гестозом не наблюдалось.

ЫО-продуцирующая функция эндотелия исследована на основании данных увеличения экспрессии еКЮБ (в процентах от контроля) и содержания нитрит-ионов ЫОх в сыворотке крови. Обнаружено, что моделирование Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 приводило к резкому снижению экспрессии еМОБ и содержания нитрит-ионов (ЫОх) соответственно в 1,9 и 1,8 раза (рис. 3).

моделировании АРМА-подобного гестоза.

Примечания: *- при р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; у- при р<0,05 в сравнении с беременными крысами с Ь-ЫАМЕ; Л - данные получены совместно с аспирантом А.А. Барсук.

Рис. 3. Концентрация ЫОх в сыворотке крови и экспрессия еЫОЗ при моделировании АОМА-подобного гестоза.

Примечания: *- при р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; Л - данные получены совместно с аспирантом А.А. Барсук.

Гистологическая картина почек у интактных беременных крыс (21 сутки беременности) была следующей: клубочки умеренно полнокровны, базальная мембрана не утолщена, воспалительные изменения в интер-стиции клубочков и пирамид отсутствуют; спастические и гипертрофические изменения мелких артерий и артериол не обнаружены (рис. 4).

Рис. 4. Почка беременной крысы в норме.

Примечания: а, б - мелкая артерия в корковом веществе без признаков гипертрофии стенок, её эндотелий не поврежден; в - базальная мембрана капилляров клубочка не утолщена, клеточная воспалительная реакция отсутствует. Окраска гематоксилином и эозином. Микрофото. X 280.

Плацента крыс на 21 сутки беременности без признаков повреждения (рис. 5).

У крыс с экспериментальным гестозом в клубочках почек выявлены признаки ишемического повреждения в виде их малокровия, а также дистрофические изменения базальной мембраны капилляров клубочков с её утолщением в виде проволочных петель (рис. 6 (в, г)). Заметной реакции мезангия не отмечено: среднее количество клеток на клубочек составило 39,9+3,02 (в норме 38,5+3,29). Описанные изменения гломерулярного аппарата могут объяснять имеющуюся у крыс данной группы гиперфильтрацию с выраженной протеинурией. Юкстагломерулярный аппарат многих клубочков был гипертрофирован (рис. 6 (в)). В мелких артериях и арте-риолах отмечались спазм и выраженная гипертрофия стенок (рис. 6 (а, б)). В канальцах обнаруживались цилиндры (рис. 6 (д)).

Морфологическая картина плаценты при Е-МАМЕ-индуцированном гестозе проявлялась в виде ишемии ворсин и интервиллезных пространств и слушиванием эндотелия в сосудах плаценты (рис. 7). В отдельных случаях это приводило к появлению очагов некроза децидуальных клеток в ткани плаценты. На внешней поверхности плаценты наблюдали массивные отложения фибрина.

Интегральная характеристика балльной оценки изменения морфологических показателей при моделировании АЭМА-подобного гестоза представлена в табл.1.

Результаты количественного анализа данных, полученных при им-муногистохимическом исследовании экспрессии еЫОБ в плаценте интакт-ных беременных животных, показали, что удельная площадь иммунореак-тивного вещества составила 5,4±0,21%. В группе животных с экспериментальным гестозом экспрессия еМОБ в эндотелии капилляров практически не выявлялась.

Таблица 1

Комплексная оценка патоморфологических изменений в сосудах почек и плаценты при моделировании Ь^АМЕ-индуцированного _гестоза (іі=10)__

Серия экспериментов Комплексная оценка в баллах Экспрессия eNOS в плаценте, %

Интактные беременные самки 0-1 5,4±0,21

Беременные самки + L-NAME 5-6*л 0,04±0,01*

Примечания: * - р<0,05 в сравнении с интактными беременными самками; А - данные получены совместно с аспирантом A.A. Барсук.

ИЙ^Шр

ШшРш

У «У * «Г£ЯИГ<а|м|

- -

шшшшшш*:

Рис. 6. Почка беременной крысы с гесто-зом (21 сутки беременности). Примечания: а, б - спазм артериолы; в -гиперплазия темного пятна; г - клубочки малокровны, базальные мембраны капилляров резко утолщены и имеют вид проволочных петель (мембранозная гломеру-лопатия); д - цилиндры в канальцах. Окр. гематоксилином и эозином. Микрофото. X 280.

Таким образом, вышеизложенное свидетельствует о том, что длительное, в течение 7 суток, внутрибрюшинное введение Ь-ЫАМЕ в дозе 25 мг/кг вызывает у беременных самок крыс комплекс функциональных, биохимических и морфологических изменений, связанных с развитием дефицита N0 вследствие блокады МО-синтетазы. В частности, на 8 сутки развивалась выраженная гипертензия и эндотелиальная дисфункция, резко уменьшался уровень нитрит-ионов. При лазердопплерфлоуметрическом исследовании обнаружены нарушения плацентарной микроциркуляции, сопровождавшиеся протеинурией. Гистологически обнаруживались признаки ишемических повреждений почек и плаценты. Описанный симпто-мокомплекс соответствует патофизиологическим нарушениям, возникающим при развитии гестоза у беременных женщин.

Рис. 7. Патологические изменения в плаценте при моделировании экспериментального гестоза.

Примечания: А - неравномерное кровенаполнение спонгиозного слоя; Б - вакуольная дистрофия гигантоклеточного трофобласта; В - очаги некроза на границе гигантоклеточного трофобласта и децидуапьной ткани; Г - дистрофические изменения, малокровие децидуального слоя. Окр. гематоксилином и эозином. Микрофото. X 200.

С учетом проведенного анализа литературных данных о патогенезе гестоза и того факта, что выраженные морфофункциональные изменения в организме экспериментального животного при введении АОМА-подобного агента - Ь-ИАМЕ возникают только в условии беременности, и с точки зрения протекания патофизиологических событий можно говорить об адекватности выбранной модели.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ, ВХОДЯЩИХ В СТАНДАРТНУЮ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНУЮ ТЕРАПИЮ ГЕСТОЗА, ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ПУТЬ Ь-АРГИНИН -1ЧО, И ИХ СОЧЕТАННОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Исследование эффективности препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза: метилдопы и амлодипина, фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин - N0: Ь-аргинина и Ь-норвалина, и их сочетанного использования при коррекции АБМА-подобного гестоза выявило статистически значимое снижение артериального давления под влиянием метилдопы и Ь-аргинина (табл. 2).

Таблица 2

Влияние препаратов, входящих в стандартную антигипертеншвную терапию гестоза, и фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин - N0, на артериальное давление, КЭД и микроциркуляцию в плаценте при моделировании АБМА-подобного гестоза у крыс

(М±ш; п=10)

^Показатель Группа ~~—---- САД мм рт.ст. ДАД мм рт.ст. КЭД усл. ед. Микроциркуляция ПЕд

Интактные 125±6,3У 82,0±5,8У 1,28±0,23у 425,9±39,6У

L-NAME 183,1±9,4" 136,7±7,4" 3,06±0,32* 210,0±21,1"

L-NAME + метилдопа (0,086 г/кг/сут) 135,4±2,8У 101,4±3,8У 2,8±0,01' 242,6±10,9У

L-NAME + амлодипин (0,5мг/кг/сут)л 165,7±6,8" 123,5±6,3" 1,48±0,21у 202,8±18,5У

L-NAME + L-аргинин (200 мг/кг/сут)л 151,2±5,3У 112,8±6,8У 1,50±0,25у 342,5±29,3У

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) 194,5±8,3' 146,4±8,2' 1,51±0,15у 455,7±41,5У

L-NAME + L-аргинин (200 мг/кг/сут) + амлодипин (0,5мг/кг/сут)л 145,5±5,7У 109,6±7,1у 1,39±0,16у 434,8±50,8У

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) + метилдопа (0,086 г/кг/сут) 120,1±2,9У 92,4±3,3У 1,50±0,25у 394,2±25,8У

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) + амлодипин (0,5мг/кг/сут) 156,3±2,0У 108,9±4,6У 1,69±0,07у 398,6±18,4У

Примечания: *- р<0,05 - в сравнении с интактными; у - р<0,05 - в сравнении с L-NAME;Л - данные получены совместно с аспирантом A.A. Барсук.

Обращает на себя внимание тот факт, что, не обладая собственным выраженным гипотензивным эффектом при данной моделируемой патологии, амлодипин и Ь-норвалин в комбинации проявляют его, что свидетельствует о положительном фармакологическом взаимодействии. Все используемые препараты и их сочетания, кроме метилдопы в монотерапии, снижали коэффициент эндотелиальной дисфункции.

При исследовании микроциркуляции в плаценте было выявлено ее улучшение под влиянием фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин - N0, и их сочетанного использования с препаратами, входящими в стандартную антигипертензивную терапию гестоза. Метилдопа и амлодипин в монотерапии влияния на нее не оказывали (табл. 2).

Все используемые препараты и фармакологические агенты, влияющие на путь Ь-аргинин - N0, а также их сочетания уменьшали протеину-рию (табл. 3).

При исследовании влияния препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза, фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин - N0, и их сочетанного использования на N0-

синтезирующую функцию при коррекции АОМА-подобного гестоза было выявлено ее улучшение под влиянием фармакологических агентов, повышающих количество субстрата для синтеза N0 и их комбинаций с препаратами, входящими в стандартную антигипертензивную терапию гестоза (р<0,05) (рис. 8). Это касается как содержания конечных метаболитов N0, так и уровня экспрессии еЫ08.

Таблица 3

Влияние препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза, фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин — N0, на значения показателей 12-часового диуреза и протеинурии при моделировании Ь^АМЕ-индуцированного

--——_^______Показатель Группа " Интактные беременные Кол-во 12-часовой мочи (мл) 5,52±0,43 Протеинурия (г/л) 0,90±0,10у

L-NAME 5,22±0,35 1,88±0,19*

L-NAME + L-аргинин (200 мг/кг/сут)л 5,62±0,27 0,98±0,11у

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) 5,32±0,32 0,90±0,06у

L-NAME + метилдопа (0,086г/кг/сут) 5,59±0,24 0,96±0,06у

L-NAME + амлодипин (0,5 мг/кг/сут)Л 5,6±0,33 0,79±0,11у

L-NAME + L-аргинин (200 мг/кг/сут) + амлодипин (0,5 мг/кг/сут)Л 5,29±0,31 0,83±0,08у

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) + метилдопа (0,086 г/кг/сут) 5,64±0,38 1,04±0,04у

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) + амлодипин (0,5 мг/кг/сут) 5,99±0,38 0,98±0,11у

Примечания: * - р<0,05 - в сравнении с интактными беременными животными; - р<0,05 - в сравнении с беременными самками, получавшими L-NAME; ' - данные получены совместно с аспирантом A.A. Барсук.

Рис. 8. Влияние на концентрацию NOx в плазме крови и экспрессию eNOS препаратов, входящих в стандартную интигипертензивную терапию гестоза, фармакологических агентов, влияющих на путь L-аргинин - NO и их сочетанного использования при коррекции ADMA-подобного гестоза.

Примечания: I - интактные беременные; II - L-NAME; III - метилдопа; IV -амлодипинл; V - Ь-аргининА; VI - L-норвалин; VII - амлодипин + Ь-аргининл; VIII -метилдопа + L-норвалин; IX - амлодипин + L-норвалин; *- при р<0,05 по сравнению с интактными беременными крысами; Y- р<0,05 в сравнении с группой беременных животных, получавших L-NAME; Л - данные получены совместно с аспирантом А.А. Барсук.

Морфологическое и иммуногистохимическое исследования выявили в почках и плаценте протективный эффект при применении препаратов, влияющих на метаболический путь Ь-аргинин - N0, и препаратов, входящих в стандартную схему лечения гестоза для коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза, что выразилось в приближении интегральной оценки к группе интактных беременных животных. Наибольший эффект наблюдался при сочетанном применении препаратов, влияющих на метаболический путь Ь-аргинин - N0, и препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза (табл. 4).

Таблица 4

Влияние препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза, фармакологических агентов, влияющих на путь Ь-аргинин - N0, на интегральную оценку комплекса патоморфологических изменений в почках и плаценте и экспрессию

eNOS при коррекции L-NAME-индуцированного гестоза (п=10)

Серия экспериментов Комплексная оценка в баллах Экспрессия eNOS в плаценте, %

Интактные беременные самки 0-1 5,4±0,21

L-NAME 5-6* 0,04±0,01*

L-NAME + L-аргинин (200 мг/кг/сут) 2-3*А 5,12±0,26

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) 2-3* 4,85±0,28

L-NAME + метилдопа (0,086г/кг/суг) 3* 2,39±0Д6*

L-NAME + амлодипин (0,5 мг/кг/сут) 3_4*л 2,63±0,13*

L-NAME + L-аргинин (200 мг/кг/сут) + амлодипин (0,5 мг/кг/сут) 1-2*л 4,84±0,23

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) + метилдопа (0,086 г/кг/сут) 2* 5,1±0,23

L-NAME + L-норвалин (10 мг/кг/сут) + амлодипин (0,5 мг/кг/сут) 1-2* 5,11±0,13

Примечания: * - р<0,05 в сравнении с интактными беременными самками; л - данные получены совместно с аспирантом A.A. Барсук.

Микроскопическое исследование почек у животных получавших комбинированное лечение, выявило однотипную картину, которая резко отличалась от контрольной группы беременных крыс. Мелкие артерии коркового вещества почки без признаков гипертрофии мышечного слоя. Капилляры почечных клубочков полнокровны, базальные мембраны не утолщены, симптом «проволочных петель» отсутствует. Заметной реакции мезангия не отмечено. Так, среднее количество клеток на клубочек в группе с использованием метилдопы в комбинации с Ь-норвалином составило 35,5+3,31 (в норме 38,5+3,29).

Морфологическая картина плаценты при Ь-ИАМЕ-индуцированном гестозе, леченном комбинацией препаратов, влияющих на метаболический путь Ь-аргинин - N0, и препаратов, входящих в стандартную схему лечения гестоза, приближалась к группе интактных животных. Отмечались мо-номорфная структура слоев плаценты без очаговых изменений, умеренное кровенаполнение спонгиозного слоя. На внешней поверхности плаценты наблюдались следы отложения фибрина (рис. 9).

■щт. т.зщ.

Рис. 9. Морфологическая картина плаценты при лечении экспериментального гестоза метилдопой в сочетании с Ь-норвалином.

Примечания: А - общий вид слоев плаценты, имеющих мономорфную структуру без очаговых изменений; Б - спонгиозный слой с умеренным кровенаполнением, В - граница спонгиозного слоя и слоя гигантского трофобласта, Г - структура слоя гигантского трофобласта без дистрофических изменений; Окр. гематоксилином и эзином. Микрофото. X 50 (А), X 200 (б, в, г).

Таким образом, сочетанное использование фармакологических агентов, увеличивающих количество субстрата для синтеза N0 - Ь-аргинин, и препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза, оказывало наиболее выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза, что выражалось в потенцировании гипотензивного эффекта, снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции КЭД до уровня интактных животных, а также в полном пре-

дотвращении снижения содержания нитрит-ионов ЫОх и экспрессии еЫОЗ. Одновременно результаты исследований микроциркуляции плаценты выявили предотвращение снижения показателей перфузии на фоне полного предотвращения протеинурии. Морфологические исследования почек и плаценты в этих группах выявили максимальное приближение гистологической картины к группе интактных беременных животных. Данный эффект можно объяснить различными патогенетически обоснованными воздействиями и рекомендовать к широкому клиническому изучению.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ 10-МИНУТНЫХ ЭПИЗОДОВ ИШЕМИИ-РЕПЕРФУЗИИ, РЕКОМБИНАНТНОГО ЭРИТРОПОЭТИНА И ТАДАЛАФИЛА ПРИ Ь-КАМЕ-

ИНДУЦИРОВАННОМ ГЕСТОЗЕ И РОЛИ ¡N08 И АТФ—ЗАВИСИМЫХ К+ КАНАЛОВ В РЕАЛИЗАЦИИ ИХ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ ЭФФЕКТОВ Исследование эффективности 10-минутных эпизодов ишемик-реперфузии, рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила для коррекции морфофункциональных нарушений при АБМА-подобном гестозе Воспроизведение однократного ишемического эпизода за 90 минут до снятия проб не приводило к какому-либо значимому изменению артериального давления. 10-кратное воспроизведение ишемического эпизода и введение рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила приводило к статистически значимому снижению артериального давления: систолического до 141,6±5,5, 143,5±4,3 и 149,7±2,2 мм рт.ст., диастолического до 104,2±5,7, 98,1±5,9 и 97,6±3,2 мм рт.ст. (р<0,05) соответственно (табл. 5).

Воспроизведение как однократного ишемического эпизода за 90 минут до снятия проб, так и 10-кратного эпизода ишемии-реперфузии с 10 по 20 день беременности, а также введение рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила приводило к нормализации взаимоотношения вазодилатирую-щих и вазоконстрикторных реакций при АБМА-подобном гестозе, о чем свидетельствует снижение КЭД до 1,52±0,09, 1,56±0,13, 1,67±0,15 и 1,85±0,08 соответственно (табл. 5).

Обращает на себя внимание, что однократное воспроизведение эпизода ишемии-реперфузии снижало КЭД на фоне Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологии, не влияя на артериальное давление. Это свидетельствует об отличительных особенностях механизмов действия однократного и многократного воспроизведения эпизодов ишемии-реперфузии и их различном влиянии на вовлеченные в патогенетический процесс элементы гуморального и нейрогенного контуров регуляции системы кровообращения.

Воспроизведение однократного, 10-кратного эпизода ишемии-реперфузии и введение рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила вызывало существенное улучшение микроциркуляции до 327,3±17,2, 339,6±20,4, 301,1±19,4 и 398,7±24,84 ПЕд соответственно, что было достоверно выше, чем у беременных самок с гестозом

(р<0,05), но значений микроциркуляции интактных беременных крыс достигало только в группе с тадалафилом.

Таблица 5

Влияние 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии, рекомбинантного эритропоэтнна и тадалафила на артериальное давление, микроцикуляцию в плаценте и КЭД при коррекции

Ь^АМЕ-индуцированного гестоза (М±ш; п=10)

—_^Локазатель Группа САД, мм рт.сг. ДАД, мм рт.ст. КЭД, усл. ед. Микроциркуляция, ПЕд

Иптактные 125,0±6,3У 82,0±5,8У 1,28±0,23у 425,9±39,6У

Ь-ЫАМЕ 183,1±9,4" 136,7±7,4" 3,06±0,32" 210,0±21,Г

Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия (1) 177,1±9,8* 124,9±8,4* 1,52±0,09у 327,3±17,2У

Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия (10) 141,6±5,5У 104,2±5,7У 1,56±0,13у 339,6±20,4У

Ь-ЫАМЕ + рекомбинантный эритропоэтин (50 МЕ/кг) 143,5±4,3У 98,1±5,9У 1,67±0,15у 301,1±19,4У

Ь-ЫАМЕ + тадалафил (0,9 мг/кг/сут) 149,7±2,2У 97,6±3,2У 1,85±0,08у 398,7±24,84у

Примечания: САД, ДАД - систолическое и диастолическое артериальное давление; КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; микроциркуляция в плаценте; ПЕд - перфузионные единицы; - р<0,05 - в сравнении с группой беременных интактных животных; у- р<0,05 - в сравнении с группой беременных крыс, получавших ЫМАМЕ.

Воспроизведение 10-кратных эпизодов ишемии-реперфузии с 10 по 20 сутки и введение рекомбинантного эритропоэтнна и тадалафила у беременных животных с моделированием Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза нормализовало показатели белка в моче, значения которых не выходили за пределы нормы и составили 1,02±0,04, 1,01±0,06 и 1,01±0,06 г/л соответственно, что статистически различимо (р<0,05) по сравнению с группой нелеченых беременных животных (табл. 6).

Влияние 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии, рекомбинантного эритропоэтнна и тадалафила на ИО-продуцирующую функцию эндотелия исследовано на основании данных увеличения экспрессии еЫОБ и содержания нитрит-ионов ЫОх (рис. 10). Обнаружено, что при однократном воспроизведении эпизода ишемии-реперфузии и введении тадалафила не происходило увеличения ни экспрессии е!Ч08, ни уровня нитрит-ионов в плазме крови. Увеличение показателей экспрессии еЫОЗ происходило как под влиянием рекомбинантного эритропоэтина, так и при воспроизведении 10-кратного эпизода ишемии-реперфузии. Увеличение содержание конечных метаболитов N0 в плазме крови происходило только при 10-кратном воспроизведении эпизодов ишемии-реперфузии.

Таблица 6

Влияние 10 минутных эпизодов ишемии-реперфузии, рекомбинантного

эритропоэтина и тадалафила на значения показателей 12-часового диуреза и протеинурии при моделировании Ь^АМЕ-индуцированного

" Показатель Группа Интактные Кол-во мочи, мл 5,52±0,43 Протеинурия, г/л 0,90±0,10у

Ь-ЫАМЕ 5,22±0,35 1,88±0,19*

Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия (10) 5,51±0,29 1,02±0,04у

Ь-ЫАМЕ + рекомбинантный эритропоэтин (50 МЕ/кг) 5,32±0,23 1,01±0,06у

Ь-ЫАМЕ + тадалафил (0,9 мг/кг/сут) 5,72±0,33 1,01±0,06у

Примечания: * - р<0,05 - в сравнении с интактными беременными животными; у- р<0,05 - в сравнении с беременными самками, получавшими Ь-ЫАМЕ.

/

ш ' 1

7, ^ 1

т.рфц.чц

Рис. 10. Влияние 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии, рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила на концентрацию ЫОх в плазме крови и экспрессию е!Ч05 при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза.

Примечания: *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; р<0,05 в сравнении с группой беременных крыс, получавших Ь-ЫАМЕ.

При морфологическом исследовании почек и плаценты также обнаружен протективный эффект 10-кратного воспроизведения эпизодов ише-мии-реперфузии и введения рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила.

При морфологическом исследовании сосудов почек у животных с 10-кратным воспроизведением 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии картина резко отличалась от контрольной группы беременных крыс. Мелкие артерии коркового вещества почки со слабовыраженными признаками гипертрофии и спазма мышечного слоя. Капилляры почечных клубочков полнокровны, базальные мембраны не утолщены, симптом «проволочных петель» отсутствует. Заметной реакции мезангия не отмечено: среднее количество клеток на клубочек составило 36,8+3,16 (в норме 38,5+3,29).

Морфологическое исследование плаценты при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза 10-кратным воспроизведением эпизода ишемии-реперфузии выявило устранение ишемических повреждений в плацентарной ткани (рис. 11). Наблюдалось относительно равномерное кровенаполнение спонгиозного слоя, отсутствие повреждения слоя гигантоклеточного

трофобласта и децидуальной оболочки. На внешней поверхности плаценты наблюдались слабые отложения фибрина.

'Г1:' ^ • / •>;"' С,4 '**.

' • * г

^ - -г "-.I-

йрз

'Лк,/ . £ щр Э"

т"' ^ * ТР*:* — ■■ ^ ■

з * а

V >

■ ! Шя I , У

"Ш р 1 «.

. шШ.

.......л;

дрг

А-,'

I

■ л ■ в ;

' 1

ш

Рис. 11. Плацента у животных с 10-кратным воспроизведением кратковременных ишемических эпизодов на фоне АОМА-подобного гестоза.

Примечания: А - децидуальный слой: мономорфная структура, отсутствие дистрофических изменений; Б - равномерное кровенаполнение спонгиозного слоя; В - отсутствие дистрофических изменений трофобласта; Окр. гематоксилином и эозином. Микрофото. X 200.

Интегральная характеристика балльной оценки морфологических показателей и результаты иммуногистохимического исследования представлены в табл. 7, из которой следует, что 10-кратное воспроизведение кратковременного эпизода ишемии-реперфузии и введение рекомбинант-ного эритропоэтина и тадалафила достоверно снижали интегральную оценку в баллах и восстанавливали экспрессию еК08 в плаценте по сравнению с Ь-ИАМЕ-индуцированным гестозом (табл. 7).

Таблица 7

Влияние 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии на комплекс патоморфологических изменений и экспрессию е>Ю8

№ п/п Серия экспериментов Комплексная оценка в баллах Экспрессия е1М05 в плаценте, %

1 Интактные беременные самки 0-1 5,4±0,21

2 Ь-ЫАМЕ-индуцированный гестоз 5-6* 0,04±0,01*

3 Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия(Ю) 2-3* 5,18+0,31

4 Ь-ЫАМЕ + рекомбинантный эри-тропоэтин (50 МЕ/кг) 3* 5,18+0,27

5 Ь-ЫАМЕ + тадалафил (0,9 мг/кг/сут) 3* 5,04+0,26

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с интактными беременными самками.

Исследование роли iNOS и АТФ-зависимых К+ каналов в реализации положительных эффектов 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии при коррекции L-NAME-индуцированного гестоза

Введение аминогуанидина, являющегося селективным ингибитором iNOS, или глибенкламида, являющегося блокатором АТФ-зависимых К+ каналов, здоровым беременным животным не приводило к статистически значимому изменению артериального давления, КЭД, микроциркуляции в плаценте и протеинурии.

Введение аминогуанидина или глибенкламида беременным животным с экспериментальным гестозом, леченным 10-минутными эпизодами ишемии-реперфузии, приводило к полному устранению их гипотензивного эффекта, ухудшало микроциркуляцию в плаценте (рис. 12) и повышало протеинурию до уровня нелеченых животных. Только КЭД, несмотря на статистически достоверное свое повышение, оставался ниже группы нелеченых животных (р<0,05).

Рис. 12. Влияние аминогуанидина (300 мг/кг) и глибенкламида (50 мг/кг) на АД, КЭД, микроциркуляцию в плаценте и протеинурию при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза 10-минутными эпизодами ишемии-реперфузии.

Примечания: *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; ¥- р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

При введении аминогуанидина или глибенкламида беременным животным принципиально значимого снижения уровня нитрит-ионов в плазме крови и активности еКЮ8 не происходило. При введении их животным с АОМА-подобным гестозом, леченным 10-минутными эпизодами ише-

мии-реперфузии, увеличение уровня нитрит-ионов в плазме крови конечных метаболитов N0 и экспрессии еТчЮБ под влиянием последних не происходило.

Обращает на себя внимание то, что отрицательное влияние амино-гуанидина и глибенкламида на функциональные показатели проявляется только при попытке коррекции моделируемой патологии, что указывает на важную роль ¡N08 и АТФ-зависимых К+ каналов в реализации эндотелио-протективного эффекта короткими эпизодами ишемии-реперфузии.

При морфологическом исследовании почек и плаценты животных, которым вводился аминогуанидин или глибенкламид, обнаружено отсутствие какого-либо их влияния на микроскопическую картину в органах, которая соответствовала группе интактных беременных животных (0-1 в баллах).

2,50-

2.00-

в" 'Л""

г

0.500,00-

Рис. 13. Влияние аминогуанидина (300 мг/кг) и глибенкламида (50 мг/кг) на концентрацию ЫОх в плазме крови и экспрессию еЫОЭ при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза 10-минутными эпизодами ишемии-реперфузии.

Примечания: *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

При введении аминогуанидина или глибенкламида животным с экспериментальным гестозом, леченным короткими эпизодами ишемии-реперфузии, наблюдалось практически полное устранение положительного влияния последних как в плацентарной ткани, так и в почках. В почках наблюдались спазм и гипертрофия мышечного слоя мелких артерий. Эпителий канальцев уплощен, на значительных участках десквамирован. Заметной реакции мезангия не отмечено.

Морфологическая картина плаценты проявлялась ишемией ворсин и интервиллезных пространств и слущиванием эндотелия в сосудах плаценты. Отмечаются очаги некроза децидуальных клеток в ткани плаценты. На внешней поверхности плаценты наблюдали массивные отложения фибрина.

Интегральная характеристика балльной оценки морфологических показателей и результаты иммуногистохимического исследования представлены в табл. 8, из которой следует, что 10-кратное воспроизведение кратковременных эпизодов ишемии-реперфузии на фоне введения амино-

гуанидина или глибенкламида положительного эффекта на морфофунк-циональные нарушения при АБМА-подобном гестозе не оказывало.

Таблица 8

Влияние аминогуанидина и глибенкламина на комплекс патоморфологических изменений и экспрессию е1Ч08 при коррекции короткими эпизодами ишемии-реперфузин ЫЧАМЕ-индуцированного

№ п/п Серия экспериментов Комплексная оценка в баллах Экспрессия еМОЭ в плаценте, %

1 Интактные беременные самки 0-1 5,4±0,21

? Ь-ИЛМЕ-индуцированный гестоз 5-6* 0,04±0,01*

Ч Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия (10) 2-3* 5,18±0,31

4 Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия (10) + аминогуанидин (300 мг/кг) 5-6* 0,03±0,01*

5 Ь-ЫАМЕ + Ишемия-реперфузия (10) + глибенкламид (50 мг/кг) 5-6* 0,04±0,01*

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с интактными беременными самками.

Таким образом, однократное и 10-кратное воспроизведение 10-минутных ишемических эпизодов и введение рекомбинантного эритропо-этина и тадалафила проявило выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза, что выражалось в усилении эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции КЭД до уровня интактных животных, а также в уменьшении нарушений микроциркуляции в плаценте. Кроме этого, 10-кратное воспроизведение 10-минутных ишемических эпизодов и введение рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила приводило к снижению артериального давления, нормализации протеинурии. Восстановление функции >Ю-продуцирук>щей системы наблюдалось только при воспроизведение 10-минутных ишемических эпизодов и введение рекомбинантного эритропоэтина. Морфологическое исследование выявило предотвращение деструктивных явлений ишемического генеза, вызванных введением Ь-ЫАМЕ, при воспроизведении 10-кратных ишемических эпизодов и введении рекомбинантного эритропоэтина и тадалафила. Однако полной нормализации морфологической картины в почках и плаценте не наступало.

Следует отметить, что эффекты однократного воспроизведения и 10-кратного воспроизведения ишемических эпизодов на ИО-синтезирующую функцию разнонаправленные. Данный факт говорит о различных механизмах реализации их эндотелиопротективного действия.

В представленных экспериментах показано, что введение аминогуанидина, относящегося к селективным ингибиторам ¡N08, или глибенкламида, являющегося блокатором АТФ-зависимых К+ каналов, животным с экспериментальным АОМА-подобным гестозом, леченным воспроизведением эпизодов ишемии-реперфузии, практически полностью снимает положительный эффект последних. Это проявляется в устранении их гипо-

тензивного эффекта, снижении выраженности положительного влияния на функцию эндотелия, снижении микроциркуляции в плацентарной ткани и показателей NO-продуцирующей функции эндотелия до уровня нелеченых животных, а также в восстановлении деструктивных повреждений в плацентарной ткани и почках ишемического генеза. Это говорит о важной роли ¡NOS и АТФ-зависимых К+ каналов в реализации протективных эффектов эпизодов ишемии-реперфузии при коррекции ADMA-подобного гесто-за в эксперименте.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭРИТРОМИЦИНА И АЗИТРОМИЦИНА ПРИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ГЕСТОЗЕ

Введение азитромицина (30 мг/кг) приводило к статистически значимому снижению как систолического, так и диастолического давления у животных с экспериментальным ADMA-подобным гестозом (рис. 14). Введение эритромицина (30 мг/кг) не оказывало сколь-нибудь существенного влияния на данные показатели. Оба препарата примерно в равной степени статистически значимо снижали КЭД до 1,88±0,16 и 1,82±0,09 соответственно (р<0,05), тогда как в группе нелеченых беременных самок, получавших L-NAME, он составлял 3,06±0,32. Однако целевого уровня снижение КЭД не достигало.

Курсовое введение эритромицина и азитромицина вызывало существенное улучшение микроциркуляции до 381,9±16,6 и 362,1±1б,7 перфузионных единиц соответственно, что было достоверно выше, чем у беременных самок с гестозом (р<0,05), и статистически не отличалось от значений микроциркуляции у интактных беременных крыс. Кроме этого, происходило снижение белка в моче до уровня интактных животных (рис. 14).

Введение эритромицина и азитромицина вызывало улучшение N0-синтезирующей функции эндотелия, что выразилось в увеличении уровня нитрит-ионов в плазме крови под действием эритромицина и в статистически достоверном увеличении экспрессии eNOS под действием обоих препаратов (рис. 15).

При морфологическом исследовании почек и плаценты также обнаружен протективный эффект эритромицина и азитромицина. В сосудах почек у животных, получавших L-NAME на фоне лечения эритромицином и азитромицином, картина отличалась от контрольной группы беременных крыс. Наиболее выраженный положительный эффект от проводимой терапии наблюдался в группе животных с использованием азитромицина. Мелкие артерии коркового вещества почки с умеренными признаками гипертрофии мышечного слоя. Капилляры почечных клубочков полнокровны, базальные мембраны незначительно утолщены, симптом «проволочных петель» отсутствует. Заметной реакции мезангия не отмечено: среднее количество клеток на клубочек составило 39,4+2,74 и 39,3+2,55 соответственно (в норме 38,5+3,29).

Интактныв ЬМАМЕ Эритромицин Азитромицин

|_-МАМЕ Эритромицин Азитромицин

Рис. 14. Влияние эритромицина (30 мг/кг) и азитромицина (30 мг/кг) на значения АД, КЭД, микроциркуляцию в плаценте и протеинурию при коррекции Ь-ЫАМЕ-

индуцированного гестоза.

Примечания: *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; р<0,05 по сравнению с группой беременных животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

Рис. 15. Влияние эритромицина (30 мг/кг) и азитромицина (30 мг/кг) на концентрацию ЫОх в плазме крови и экспрессию еШБ при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза. у

Примечания: *- р<0,05 в сравнении с интактными крысами; - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

Морфологическое исследование плаценты при коррекции эритромицином и азитромицином Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза выявило однотипность гистологической картины в обеих группах, но более положительные явления выявлены у животных группы, получавшей азитромицин. Плацента без патологических изменений, ворсины и интервиллезные про-

Эритромицин Азитромицин

Интактныв ЫМИЕ Эритромицин Азитромицин

странства полнокровны. Имеются признаки ишемии плаценты функционального характера. На внешней поверхности плаценты наблюдались отложения фибрина.

Интегральная характеристика балльной оценки морфологических показателей и результаты иммуногистохимического исследования представлены в табл. 9, из которой следует, что эритромицином и азитромици-ном достоверно снижали интегральную оценку в баллах (3-4) по сравнению с Ь-ЫАМЕ-индуцированным гестозом и повышали экспрессию еЫОБ в эндотелии сосудов плаценты.

Таблица 9

Влияние эритромицина и азитромицина на комплекс патоморфологических изменений и экспрессию еІЧОБ при моделировании Ь^АМЕ-индуцированного гестоза (п=10)

№ п/п Серия экспериментов Комплексная оценка в баллах Экспрессия еКОЭ в плаценте, %

1 Интактные беременные самки 0-1 5,4±0,21

2 Ь-ЫАМЕ-индуцированный гестоз 5-6* 0,04±0,01*

3 Ь-ЫАМЕ + эритромицин (30 мг/кг) 3-4* 3,77±0,12*

4 ЫЧАМЕ + азитромицин (30 мг/кг) 3* 4,28±0,21*

Примечание. * - р<0,05 в сравнении с интактными беременными самками.

Таким образом, эритромицин и азитромицин в дозе 30 мг/кг проявляли отчетливое эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза, что выражалось в снижении коэффициента эн-дотелиальной дисфункции до уровня интактных животных, улучшении микроциркуляции в плаценте, а также в уменьшении снижения экспрессии еЫОЗ на фоне полного предотвращения протеинурии. Кроме этого, азитромицин проявлял умеренное гипотензивное действие, эритромицин уменьшал падение стабильных метаболитов ЫОх в плазме крови. Морфологические исследования обнаружили уменьшение под влиянием эритромицина и азитромицина в указанных дозах развития нарушений в почках и ишемических изменений в плаценте, не достигающих повреждения структур.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВИТАМИНА В9, СОЧЕТАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ВИТАМИНОВ В9 И В6, ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЫ1ЫХ КОМПЛЕКСОВ «КОМПЛИВИТ® ТРИМЕСТРУМ 2 ТРИМЕСТР» И «КОМПЛИВИТ® ТРИМЕСТРУМ 3 ТРИМЕСТР» ПРИ Ь^АМЕ-ИНДУЦИРОВАННОМ ГЕСТОЗЕ Введение исследуемых препаратов: фолиевой кислоты, сочетания фолиевой кислоты и витамина В6, поливитаминно-минеральных комплексов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр» не оказывало сколь-нибудь значимого влияния на артериальное давление на фоне моделируемого экспериментального АОМА-подобного гестоза (рис. 16).

Рис. 16. Влияние витамина В9 (0,2мг/кг), сочетанного применения витаминов В9 (0,2 мг/кг) и В6 (2 мг/кг), препаратов «Компливит® триместрум 2 триместр» (0,084 таб/кг) и «Компливит® триместрум 3 триместр» (0,084 таб/кг) на АД, КЭД, микроциркуляцию в плаценте и протеинурию при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза.

Примечание. Здесь и далее - КТр2Тр - «Компливит триместрум 2 триместр»; КТрЗТр - «Компливит® триместрум 3 триместр»; *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; у- р<0,05 в сравнении с группой беременных животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

Интактные Ы4АМЕ ВЭ В6+В9 КТр2Тр КТрЗТр

Введение фолиевой кислоты в монотерапии не приводило к коррекции КЭД. Введение фолиевой кислоты в сочетании с витамином В6, а также обоих поливитаминно-минеральных комплексов приводило к улучшению функции эндотелия, что выразилось в статистически значимом снижении КЭД. Улучшение микроциркуляции в плаценте происходило во всех исследуемых группах (рис. 16).

Использование витаминно-минеральных комплексов «Компливит триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр» у беременных животных с моделированием Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза статистически достоверно уменьшало количество белка в моче, доводя его значение в последней группе животных до значения ин-тактных животных. Использование фолиевой кислоты и сочетания фолиевой кислоты и витамина В6 не приводило к статистически зна-

чимому снижению протеинурии на данной модели патологии (рис. 16).

Исследование влияния витамина В9, сочетанного применения витаминов В9 и В6, препаратов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Ком-пливит® триместрум 3 триместр» на N0-0интезирующую функцию эндотелия при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного гестоза показало, что использование поливитаминно-минеральных препаратов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр» статистически значимо повышало концентрацию нитрит-ионов (рис. 17). Введение фолиевой кислоты и сочетания ее с витамином В6 не приводило к статистически значимому повышению концентрации нитрит-ионов в плазме крови у животных с АБМА-подобным гестозом.

Рис. 17. Влияние витамина В9(0,2 мг/кг), сочетанного применения витаминов Вд (0,2 мг/кг) и В6 (2 мг/кг), препаратов «Компливит® триместрум 2 триместр» (0,084 таб/кг) и «Компливит® триместрум 3 триместр» (0,084 таб/кг) на концентрацию МОх в плазме крови и экспрессию еКЮ5 при коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированного

гестоза.

Примечание. Здесь и далее - КТр2Тр - «Компливит® триместрум 2 триместр»; КТрЗТр - «Компливит® триместрум 3 триместр»; *- р<0,05 в сравнении с интактными беременными крысами; - р<0,05 в сравнении с группой беременных животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

Динамика показателей экспрессии еМОБ при применении описываемых в этой главе препаратов носила тот же характер, что и концентрация стабильных метаболитов N0 (рис. 17). Отмечалось статистически значимое увеличение показателей экспрессии е>Ю8 только в группах животных, получавших поливитаминно-минеральные препараты «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр».

При морфологическом исследовании почек и плаценты было выявлено, что введение фолиевой кислоты и ее комбинации с витамином В6 не приводило у улучшению гистологической картины в почках и плаценте. При введении витаминно-минеральных комплексов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр» отмечалась умеренно выраженная положительная динамика как в почках, так и в пла-

центе (табл. 10). Кроме этого, происходило повышение экспрессии еЫОЭ в эндотелии сосудов плаценты.

Таблица 10

Влияние витамина В9, сочетанного применения витаминов В9 и В«, препаратов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит триместрум 3 триместр» на комплекс патоморфологических изменений и экспрессию е1Ч08 при коррекции

№ п/п Серия экспериментов Комплексная оценка в баллах Экспрессия еКОБ в плаценте, %

1 Интактные беременные самки 0-1 5,4±0,21

2 Ь-Ь'АМЕ 5-6* 0,04±0,01*

3 Ы^ГАМЕ + В9 (0,2 мг/кг) 5-6* 0,04±0,01*

4 Ь-Ь'АМЕ + В9 (0,2 мг/кг)+ Вб (2 мг/кг) 5-6* 0,03±0,01*

5 Ь-ИАМЕ +КТр2Тр (0,084 таб/кг) 4* 2,02±0Д2*

6 Ь-ИАМЕ +КТрЗТр (0,084 таб/кг) 4* 1,83,±0,21*

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с интактными беременными самками.

Таким образом, приведенные данные исследования указывают на то, что минимальные протективные свойства были выявлены при использовании фолиевой кислоты в монотерапии и при сочетанном ее применении с витамином В6. Выраженность положительных эффектов от применения поливитаминно-минеральных препаратов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр» носила значимый характер и проявилась в улучшении функции эндотелия, увеличении показателей микроциркуляции в плаценте и повышении ЫО-синтезирующей функции эндотелия, снижении протеинурии и положительной динамике морфологической картины в почках и плаценте.

В заключение нужно отметить, что результаты проведенной работы дают экспериментальное обоснование новых подходов к профилактике и лечению гестоза фармакологическими средствами, направленными на преодоление и компенсацию АОМА-обусловленного ингибирования КО-синтезирующей функции эндотелия, а также активацию биологических процессов, лежащих в основе механизма положительных эффектов ишемического прекондиционирования.

выводы

1. Разработанная модель ADMA-подобного гестоза (ежедневное внутрибрюшинное введение ADMA-подобного агента - N-нитро-Ь-аргинин-метиловый эфир крысам-самкам с 14 по 20 день беременности) вызывала развитие выраженной гипертензии, протеинурии, нарушение взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой сосудистых реакций, снижение показателей микроциркуляции в плаценте и NO-синтезирующей функции эндотелия почти в 2 раза. При морфологическом исследовании плаценты и почек выявлены деструктивные изменения.

2. Использование для коррекции ADMA-подобного гестоза в эксперименте препаратов, входящих в стандартную антигипертензивную терапию гестоза, метилдопа (0,086 г/кг/сут) и амлодипин (0,5 мг/кг/сут), с 14 по 20 сутки беременности вызывало уменьшение протеинурии и структурных нарушений в плацентарной ткани и почках, снижение артериального давления при введении метиддопы и коррекции взаимоотношения эндотелий-зависимых и эндотелийнезависимых механизмов вазодилатации при введении амлодипина.

3. Введение животным фармакологических агентов, увеличивающих субстрат для синтеза NO - L-аргинина: аминокислоты L-аргинина (200 мг/кг/сут) и ингибитора аргиназы L-норвалина (10 мг/кг/сут), а также их комбинации с препаратами, входящими в стандартную антигипертензивную терапию гестоза с 14 по 20 день беременности, приводило к выраженной коррекции патологических изменений при экспериментальном ADMA-подобном гестозе. Наблюдалось восстановление взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазорелаксации, улучшение микроциркуляции в плаценте, восстановление NO-синтезирующей функции эндотелия, уменьшении протеинурии, снижение артериального давления, кроме группы с монотерапией L-норвалином. При морфологическом исследовании гистологическая картина в почках и плацентарной ткани приближалась к таковой в группе интактных животных. Наибольшая выраженность протективных эффектов наблюдалась при сочетанном использовании.

4. Воспроизведение однократного 10-минутного эпизода ишемии-реперфузии на 21 сутки беременности за 90 минут до проведения функциональных проб приводило к статистически значимому улучшению взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакций и повышению микроциркуляции в плаценте. Воспроизведение 10-минутных эпизодов ишемии-реперфузии с 10 по 20 сутки беременности приводило к умеренному гипотензивному эффекту, статистически значимому улучшению взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакций, повышению микроциркуляции в плаценте, снижению протеинурии, повышению NO-синтезирующей функции эндотелия, улучшению гистологической картины в почках и плацентарной ткани. Ингибирование ¡NOS или блокада АТФ-зависимых К+ каналов снимали эффект прекондициони-рования.

5. Фармакологическое прекондиционирование рекомбинантным эри-тропоэтином в дозе 50 МЕ/кг однократно на 7, 10, 13, 16, 19 сутки беременности на фоне моделирования АИМА-подобного гестоза вызывало умеренный, статистически достоверный гипотензивный эффект, улучшение взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакций, повышение микроциркуляции в плаценте, повышение активности еЫОЗ, снижение протеинурии, улучшение гистологической картины в почках и плацентарной ткани, которая приближалась к группе интактных беременных животных.

6. Введение тадалафила (0,9 мг/кг/сут) приводило к статистически достоверному гипотензивному эффекту, достоверному улучшению взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакций, повышению микроциркуляции в плаценте, снижению протеинурии, устранению выраженных деструктивных явлений ишемического генеза и уменьшало нарушения функционального характера в плацентарной ткани и почках.

7. Введение эритромицина (30 мг/кг/сут) и азитромицина (30 мг/кг/сут) с 14 по 20 сутки беременности приводило к статистически достоверному улучшению взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакций, повышению микроциркуляции в плаценте, снижению протеинурии, статистически достоверному повышению экспрессии еЫОБ, устранению выраженных деструктивных явлений ишемического генеза и некоторому уменьшению нарушений функционального характера. Под влиянием эритромицина происходило увеличение концентрации конечных метаболитов в плазме, под влиянием азитромицина наблюдался умеренный гипотензивный эффект.

8. При использовании фолиевой кислоты (0,2 мг/кг/сут), сочетания фолиевой кислоты (0,2 мг/кг/сут) и витамина В6 (2 мг/кг/сут), поливита-минно-минеральных комплексов «Компливит® триместрум 2 триместр» (0,084 таб/кг/сут) и «Компливит® триместрум 3 триместр» (0,084 таб/кг/сут) в большей степени коррекция морфофункциональных нарушений в условии АОМА-подобного гестоза происходит при использовании поливита-минно-минеральных комплексов «Компливит® триместрум 2 триместр» и «Компливит® триместрум 3 триместр». Их введение приводило к улучшению взаимоотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакций, повышению микроциркуляции в плаценте, снижению протеинурии, статистически достоверному увеличению показателей МО-синтезирующей функции эндотелия, уменьшению выраженности деструктивных явлений ишемического генеза в почках и плаценте.

Список статей, опубликованных по теме диссертации

1. Экспериментальное изучение кардиопротекторного и эндоте-лиопротекторного действия макролидов и азалидов / Е.С. Черноморцева, М.В. Покровский, В.В. Гуреев [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. —2009. - Т. 72, № 2. - С. 29-31.

2. Исследование дозозависимых кардиопротективных эффектов макролидов / Е.С. Черноморцева, Т.Г. Покровская, Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, В.В. Гуреев, Ю.В. Легкова // Российский медико-биологический вестник имени академика И. П. Павлова.-2009.-№ 1. -С. 63-67.

3. Гуреев, В.В. Коррекция резвератролом ADMA-подобноГо гес-тоза в эксперименте / В.В. Гуреев, В.И. Кочкаров, Е.В. Проскурякова И Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. - 2010. - № 22 (93), вып. 12. - С. 53-57.

4. Реалии и перспективы фармакологической коррекции ADMA-eNOS-ассоциированных путей при преэклампсии / М.В. Покровский, Н.Г. Филиппенко, В.В. Гуреев [и др.] // Рациональная фармакотерапия в кардиологии.-2010.-№6(6).-С. 882-887.

5. Фармакологическая коррекция L-аргинином ADMA-eNOS-ассоциированных мишеней при экспериментальной преэклампсии / М.В. Покровский, Т. Г. Покровская, В. В. Гуреев [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. - 2010. - № 1. — С. 85-92.

6. Комплексная оценка эндотелиопротекторной и кардиопротек-торной активности макролидных антибиотиков при моделировании дефицита окиси азота / Е.С. Черноморцева, М.В. Покровский, В.В. Гуреев [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2010. — Т. 73, № 9. - С. 20-23.

7. Влияние L-аргинина, витамина Вб и фолиевой кислоты на показатели эндотелиальной дисфункции и микроциркуляции в плаценте при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота / М.В. Покровский, О.О. Новиков, В.В. Гуреев [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2011. - Т. 152, № 7. - С. 77-80.

8. Фармакологическая коррекция ADMA-eNOS-ассоциированных мишеней при преэклампсии / М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, В.В. Гуреев [и др.] // Акушерство и гинекология. - 2011. - № 2. — С. 16-20.

9. Пути коррекции NO-дефицитного состояния при патологии беременных в эксперименте / В.В. Гуреев, М.В. Покровский, О.С. Полянская [и др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. — 2011. - № 4 (99), вып. 13/2. — С. 40-43.

10. Гуреев, В.В. Эндотелиальная дисфункция — центральное звено в патогенезе гестоза / В.В. Гуреев // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. — 2012. — № 4 (123), вып. 17/1. - С. 5-12.

11. Arginase Inhibitor in the Pharmacological Correction of Endothelial Dysfunction / M.V. Pokrovskiy, M.V. Korokin, V.V. Gureev [et al.] // International Journal of Hypertension. - 2011. - Vol. 2011. - Article ID 515047, doi: 10.4061/2011/515047.

12. Гуреев, B.B. Роль витаминов в коррекции эндотелиальной дисфункции при экспериментальном гестозе / В.В. Гуреев // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация.-2012.-№4(123), вып. 17/1.-С. 120-123.

13. Коррекция экспериментального гестоза препаратами из группы макролидов / В.В. Гуреев, М.В. Покровский, А.А. Должиков [и др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация.-2012.-№4(123), вып. 17/1.-С. 124-127.

14. Коррекция дистантным ишемическим прекондиционированием эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобном экспериментальном гестозе / В.В. Гуреев, М.В. Покровский, А.А. Должиков [и др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. - 2012. -№ 4 (123), вып. 17/1. - С. 128-134.

15. Коррекция ADMA-подобного гестоза в эксперименте /

B.В. Гуреев, С.А. Алехин, А.А. Должиков, А.С. Мостовой // Курский научно-практический вестник «Человек н его здоровье». - 2012. — № 1. -

C. 14-19.

16. Использование L-аргинина в коррекции эндотелиальной дисфункции при экспериментальной преэклампсии / М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, В.В. Гуреев [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2012. - Т. 75, № 2. - С. 14-16.

17. Гуреев, В.В. Коррекция ADMA-подобного гестоза в эксперименте с помощью ингибитора аргиназы L-норвалина и препаратов, входящих в стандартную схему лечения / В.В. Гуреев, О.С. Полянская, А.А. Должиков // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2012. - № 2. - С. 14-20.

18. Гуреев, В.В. Роль iNOS в коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобном гестозе короткими эпизодами ишемии-реперфузии в эксперименте / В.В. Гуреев // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 8, ч. 2. - С. 298-301.

19. Гуреев, В.В. Роль АТФ-зависимых К+ каналов в коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобном гестозе короткими эпизодами ишемии-реперфузии в эксперименте / В.В. Гуреев [Электронный ресурс] // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 5, http:/Avww.scierice-educatiori.ru/105-7053.

20. Гуреев, В.В. Исследование роли дистантного ишемического прекондиционирования в коррекции морфофункциональных нарушений короткими эпизодами ишемии-реперфузии в условии ADMA-подобного гестоза / В.В. Гуреев // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». — 2012. — № 3. — С. 5-9.

21. Моделирование L-NAME-индуцированного гестоза у крыс /

A.A. Барсук, В.В. Гуреев, М.В. Покровский [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации : сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск : Изд-во КГМУ, 2009. -С. 104-105.

22. Использование L-аргинина в профилактике развития L-NAME-индуцированного гестоза в эксперименте / В.В. Гуреев, A.A. Барсук, Е.В. Проскурякова [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации : сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск : Изд-во КГМУ, 2009. - С. 165.

23. Комбинированное использование L-аргинина и амлодипина в коррекции L-NAME-индуцированного гестоза у крыс / М.В. Покровский, Г.А. Лазарева, A.A. Барсук, В.В. Гуреев [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации : сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск : Изд-во КГМУ, 2009. -С. 289-290.

24. Использование амлодипина в коррекции L-NAME-индуцированного гестоза крыс / Е.В. Проскурякова, A.A. Барсук, В.В. Гуреев [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации : сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск : Изд-во КГМУ, 2009. - С. 304-305.

25. Изучение эндотелиопротективных эффектов азитромицина у крыс с хроническим грамположительным сепсисом / Е.С. Черноморцева,

B.В. Гуреев, A.C. Белоус [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации : сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск : Изд-во КГМУ, 2009. - С. 357-358.

26. L-NAME-индуцированный гестоз у крыс / A.A. Барсук, В.В. Гуреев, М.В. Покровский [и др.] // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16 апр. 2010 г.). -М„ 2010.-С. 575-576.

27. L-аргинин в профилактике развития L-NAME-индуцированного гестоза у крыс / В.В. Гуреев, A.A. Барсук, Е.В. Проскурякова [и др.] // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16 апр. 2010 г.). - М., 2010. - С. 601-602.

28. Сочетанное использование L-аргинина и амлодипина в коррекции L-NAME-ндуцированного гестоза в эксперименте / М.В. Покровский, Г.А. Лазарева, A.A. Барсук, Е.В. Проскурякова, В.В. Гуреев [и др.] // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16 апр. 2010 г.). - М„ 2010. - С. 704.

29. Амлодипин в коррекции L-NAME-индуцированного гестоза крыс / Е.В. Проскурякова, A.A. Барсук, В.В. Гуреев [и др.] // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (Москва, 12-16 апр. 2010 г.). - М„ 2010. - С. 707.

30. Коррекция резверотролом ADMA-подобного гестоза у крыс / О.С. Полянская, В.В. Гуреев, A.A. Барсук [и др.] // Биотехнология и био-

медицинская инженерия : материалы III Всерос. науч.-практ. конф. с меж-дунар. участием, посвящ. 75-летию Курск, гос. мед. ун-та. - Курск : Изд-во КГМУ, 2010. - С. 219-220.

31. Коррекция L-NAME-индуцированного гестоза в эксперименте с помощью L-норвалина / О.С. Полянская, В.В. Гуреев, И.В. Медведев [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.). - Курск : Изд-во КГМУ, 2011. - С. 291-292.

32. Коррекция микроциркуляции в плаценте с помощью дистантного прекондиционирования при ADMA-подобной модели гестоза / О.С. Полянская, В.В. Гуреев, И.В. Медведев [и др.] // Молодежная наука и современность : материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием (Курск, 19-20 апр. 2011 г.). - Курск: Изд-во КГМУ, 2011.-С. 292-293.

33. Полянская, О.С. Перспективы использования дистантного прекондиционирования в коррекции развития ADMA-подобного гестоза у крыс / О.С. Полянская, Т.В. Корогодина, В.В. Гуреев // Молодая фармация - потенциал будущего : материалы II Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов (Санкт-Петербург, 18-19 апр. 2012 г.). - СПб., 2012. - С. 6-7.

34. Полянская, О.С. Коррекция экспериментального гестоза с помощью ингибитора аргиназ L-норвалина и ингибитора фосфодиэстеразы 5 тадалафила / О.С. Полянская, В.В. Гуреев, О.Ю. Иванова // Успехи современного естествознания. - 2012. — № 10. — С. 90-91.

35. Полянская, О.С. Исследование влияния коротких эпизодов ишемии-реперфузии на течение ADMA-подобного гестоза / О.С. Полянская, В.В. Гуреев, О.Ю. Иванова// Успехи современного естествознания.-2012,- № 10,- С. 94.

36. Гуреев, В.В. Новые подходы к фармакологической коррекции гестоза : метод, рекомендации / В.В. Гуреев, О.С. Полянская. - Курск : Изд-во КГМУ, 2012. - 96 е.; ил.

Патенты РФ на изобретения

1. Пат. 2449381 Российская Федерация. Способ коррекции эндо-телиальной дисфункции L-норвалином при ADMA-подобной модели гестоза / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, Т.Г. Покровская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». -№ 2010144195/14; опубл. 27.04.2012, Бюл. № 12. - 4 с.

2. Пат. 2453000 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте при ADMA-подобной модели гестоза / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, Т.Г. Покровская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».-№2010144193/14; опубл. 10.06.2012, Бюл. № 16. - 4 с.

3. ■ Пат. 2432618 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, A.A. Барсук [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». — № 2010121673/14; опубл. 27.10.2011, Бюл. № 30. -4 с,

4. Пат. 2400826 Российская Федерация. Способ коррекции эндо-телиапьной дисфункции азитромицином при моделировании хронического Неположительного сепсиса / Е.С. Черноморцева, М.В. Покровский, Т.П Покровская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». - № 2009140129/14; опубл 27.09.2010, Бюл. №27. - 4 с.

5. Пат. 2457548 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте поливитаминно-минеральным комплексом при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». -№ 2011122318/14; опубл. 27.07.2012, Бюл. № 21. - 4 с.

6. Пат. 2460149 Российская Федерация. Способ коррекции эндо-телиальной дисфункции поливитаминно-минеральным комплексом при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская [и др.] ; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». -№ 2011122328/14; опубл. 27.08.2012, Бюл. № 24. 4-е.

7. Пат. 2449783 Российская Федерация. Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота L-норвалином в эксперименте / М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, С.А. Цепелева [и др.]; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». -№ 2010132488/15; опубл. 10.05.2012, Бюл. № 13. -4 с.

8. Пат. 2460148 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте / М.В.. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская [и др.]; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». - № 2011116372/14; опубл. 27.08.2012, Бюл. № 24. - 4 с.

9. Пат. 2462766 Российская Федерация. Способ коррекции эндо-телиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином при ADMA-подобной модели гестоза / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская

[и др.]; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». - № 2011116378/14; опубл. 27.09.2012, Бюл. № 27. - 4 с.

10. Пат. 2462253 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте азитромицином при АИМА-подобной модели гестоза в эксперименте / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская [и др.]; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». — № 2011116308/15; опубл. 27.09.2012, Бюл. № 27. -4 с.

11. Пат. 2462765 Российская Федерация. Способ коррекции эндо-телиальной дисфункции дистантным прекондиционированием при АОМА-подобной модели гестоза / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская [и др.]; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». — № 2011116380/14; опубл. 27.09.2012, Бюл. № 27. - 4 с.

12. Пат. 2466462 Российская Федерация. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте рекомбинантным эритропоэтином при АОМА-подобной модели гестоза / М.В. Покровский, В.В. Гуреев, О.С. Полянская [и др.]; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации». — № 2011116371/14; опубл. 10.11.2012, Бюл. № 31. - 4 с.

Патенты РФ на полезную модель.

1. Пат. 97615 Российская Федерация. Устройство для дистантного прекондиционирования / О.О. Новиков, М.В. Покровский, В.И. Кочкаров [и др.] ; заявитель и патенообладатель ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет». - № 2010110708/22; опубл. 20.09.2010, Бюл. № 27. -4 с.

Список сокращений

AT — ангиотензин

АД - артериальное давление

АГ- артериальная гипертензия

АХ - ацетилхолин

ГМК — гладкомышечная клетка

ДАД — диастолическое артериальное давление

ИЛ-1 р — интерлейкин 1 р

ИЛ-6 — интерлейкин 6

ИЛ-12 - интерлейкин 12

ИЛ-10 - интерлейкин 10

ИПФР — инсулиноподобный фактор роста

КЭД- коэффициент эндотелиальной дисфункции

САД - систолическое артериальное давление

СЭФР — сосудисто-эндотелиальный фактор роста

СЭФР-R - рецепторы СЭФР

ТФР-а — трансформирующий фактор роста а

ТФР-Р - трансформирующий фактор роста а

ЧСС — частота сердечных сокращений

цГМФ — циклический гуанозин - монофосфат

ЭТ-1 -эндотелии-1

ЭД - эндотелиальная дисфункция

ЭЗВД - эндотелийзависимая вазодилатация

ЭНВД — эндотелийнезависимая вазодилатация

ЭК - эндотелиальная клетка

ЭрД — эректильная дисфункция

ЭФР-R — рецепторы эпидермального фактора роста

ADMA - асимметричный диметиларгинин

eNOS - эндотелиальная синтаза оксида азота

iNOS - индуцибельная синтаза оксида азота

L-NAME - NG-HHTpo-L-aprHHHii метиловый эфир

L-NMMA — монометиларгинин

NO - оксид азота

NOS -NO-синтаза

PGI2 - простациклин

TNF-a — фактор некроза опухоли

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 21.12.2012 г. Подписано в печать 24.12.2012 г. Формат 30x42 78. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ № 223"А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.