Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка и стандартизация растительной композиции "ЭКЗОФИТ" и масляного экстракта на ее основе

од

1 5 мдй 1395

На правах рукописи

ПУШКИНА КИРА АЛЕКСАНДРОВНА

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ РАШГЕЛЬНОЙ КОМПОЗИЦИИ "ЗКЗОФШ-" И МАСЛЯНОГО ЭКСТРАКТА НА ЕЕ ОСНОВЕ

15.00,02-фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

УФА - 1995

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском институте

Научный руководитель: - кандидат фармацевтических наук

доцент Т.И.Никитина

Официальные оппоненты: - доктор фармацевтических наук,

профессор Дмитрук С.Е. доктор фармацевтических наук, профессор Сичко О.И.

Ведущая организация - Пермский фармацевтический инстит]

Защита диссертации состоится " 8 " ишня 1995

в _ часов на заседали диссертационного coi

К 084.35.02 при Башкирском государственном медицин« институте (4500и0, г. Зфа, ул. Ленина, 3),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирско! государственного медицинского института

Автореферат разослан "_"-1995г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

профессор Э.Г.Давлетов

- 3 -

ОБЩ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Одной из основных задач развития здраво-анения является всестороннее и полное удовлетворение потреб-тей населения в лекарственных средствах. Она включает в себя бходимость расширения исследований по изыскании новых источ-ов для получения препаратов растительного происхождения,в том ле с ранозаживляющим, противовоспалительным действием, облада х минимальной токсичностью, отсутствием побочных эффектов, ши-ое применение в медицинской практике находят масляные каротин-ержащие препараты растительного происхождения с указанной ак-ностьш. Однако число таких препаратов весьма ограниченно - это ло шиповника, масло облепихи, аекол, каротолин и потребность в удовлетворяется на 10—15%.Недостаточная сырьевая база требует ска альтернативных источников аналогичных растительных препа-ов,которые были бы доступны и в достаточном количестве. Важное чение имеет также возможность получения масляных экстрактов в ечных условиях из местного растительного сырья, что позволило обеспечивать население недорогими лекарственными средствами.

Лекарственная флора Башкортостана богата растениями, обладаем , по данным народной и научной медицины,ранозаживляющим дей-ием; здесь также успешно выращивается календула лекарственная, побудило нас произвести поиск растений,которые могли бы быть пчены в сбор с противовоспалительным и ранозаживляющим дейст-й,используемый для наружного применения и для получения масля-э экстракта в аптечных условиях.как заменителя дефицитных пре-зтов из облепихи и шиповника. Применение масляного экстракта изготовления мазей по аптечной технологии расширяет возмож-гь обеспечения населения ранозаживлящими препаратами.

Таким образом, создание многокомпонентного сбора, его фито-лческое изучение, разработка нормативно-технической документа-,создание рациональной лекарственной формы на основе масляного тракта из сбора является актуальной задачей.

р/1Ь И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью наших исследований явилась заботка прописи сбора из официнальных лекарственных растений с гаточной сырьевой базой, произрастающих или культивируемых на штории Республики Башкортостан, получение из него масляного тракта и мази по аптечной технологии с ранозаживляющей актив-гью. Для этого предстояло решить следующие задачи:

- обосновать состав сбора;

- провести товароведческий и фотохимический анализ сбора;

- разработать метод стандартизации и нормативно-техническу кументацию на него;

- разработать технологии приготовления масляного экстрак сбора для использования в аптечных условиях и метод кон его качества;

- предложить рациональную лекарственную форму на основе мае го экстракта для приготовления в условиях аптеки и разраб метод контроля качества лекарственной формы;

- изучить фармакологические свойства сбора и масляного зке та на его основе.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Разработан сбор экзофит из че видов лекарственного растительного сырья, разрешенного для п нения в медицинской практике. Изучены макро- и микроскопич диагностические признаки; определены товароведческие показа установлен качественный и количественный состав различных биологически активных веществ сбора и его липофильной фра предложен метод стандартизации в зависимости от целей исполь ния сбора; для применения в форме водных вытяжек - по содер дубильных веществ и суммы фдавоноидов,для получения масляног стракта - по содержании эфирных масел и каротиноидов. Предо оптимальная технология получения масляного экстракта из сб мази на его основе для приготовления в аптечных условиях.Нет лена ранозаживляющая, противовоспалительная активность сбор зофита,масляного экстракта и мази. Доказана нетоксичность м ного экстракта и отсутствие раздражающего, аллергезирущего ствия

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Подготовлен проект Врем фармакопейной статьи "Сбор экзофит". Информационные письма " готовление масляного экстракта из сбора экзофита в условиях ки", "Приготовление 25% эмульсионной мази в условиях аптеки" рены в аптечную сеть Республики Башкортостан. Разработан тех гический регламент на изготовление масляного экстракта из экзофита на норковом жире, на основании которого осуществлен мышленный выпуск косметических кремов"Альбина" и "Сударыня", чен патент N 1752395 от 6 мая 1993 г. на "Способ получения м ного экстракта, обладающего ранозаживляющей активностью".Маз основе масляного экстракта внедрена в работу детской республ

1Й клинической больницы для послеоперационного лечения геманги-и лимфангиом. Эффективной оказалась 25% эмульсионная мазь при [ении ожогов в Республиканском ожоговом центре и нейродермитов 'еспубликанском кожно-венерологическом диспансере,Материалы ис-¡дований внедрены в учебный процесс кафедр фармакогнозии и тех-югии лекщзственных форм БГМИ.

ПОЛОЖЕНИЯ.ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТИ. На защиту выносятся: результаты разработки сбора экзофита с противовоспалительным и ранозаживлящим действием, используемый для наружного применения и для получения масляного экстракта в аптечных условиях; результата макро- и микродиагностического цитохимического изучения сбора;

результаты исследований по разработке технологии приготовления масляного экстракта и мази в аптечных условиях; стандартизация сбора и масляного экстракта; результаты фармакологических исследований сбора, масляного экстракта и мази.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕС-НАНК. Диссертационная работа выполнена по плану НИР Башкирс-

0 государственного медицинского института, соответствует пробе N 1006, АМН РФ "Фармация", секции "Фармацевтическая химия и макогнозия". Номер госрегистрации

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Основные положения диссерта-доложены:

на Всесоюзной научно-практической конференции "Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР",г,Вла димир (1991г.);

на научных конференциях Башкирского государственного медицинского института (1990-1994 гг.);

на 6-ом межрегиональном научно-производственном семинаре "Кормовые, в том числе нетрадиционные (альтернативные) лекарственные растительные ресурсы - фактор стабилизации регионального производства кормов, пищевых и лекарственных продуктов" (Москва, 1993 г.).

3 том числе, представлены :

за третьей Украинской конференции по медицинской ботанике : 1992г.);

и 1-м международном научном конгрессе "Традиционная медицина

1 питаниетеоретические и практические аспекты" (1994 г.).

По теме диссертации опубликовано 13 работ (6 в централь печати),в которых отражены основные результаты исследования.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.Диссертационная работа излс на на МЯ страницах машинописного текста (включая 12 рисур 40 таблиц, 2 схемы) и состоит из введения, обзора литературы, зультатов собственных исследований, выводов, указателя литера! и приложений.Указатель литературы включает £21источников оте^ твенных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы представляет собой систематизированные р ные по изученности лекарственных растительных средств, примем мых при лечении ран и различных поражений кожи, принципов cocí ления и стандартизации растительных сборов, особенностей аналк стандартизации и применения масляных экстрактов из лекарствен^ растительного сырья, использования масляных экстрактов для при товления мазей.

Изучение литературных источников показало, что в научнс народной медицине издавна и довольно успешно лечили раны, ране инфекции,различные поражения кожи с использованием продуктов г родного,в том числе, растительного происхождения. Доказана эф<1 тивность и безвредность растительных средств,возможность длите ного применения без вреда для больного. Причем,чем сложнее coji жащийся в них комплекс биологически активных и сопутствующих ществдем богаче информационное содержание многокомпонентного тительного средства и шире возможности использования его в кач тве многомерного сигнала управления системой гомеостатов. Нара с отдельными видами лекарственных растений и сборов широкое г менение находят препараты на их основе в форме настоев,экстра» медицинских масел и растительных порошков, обладающих противов палительной и ранозаживляищей активностью. Это подтверждает г вильность нашего подхода к выбору объектов для растительной и позиции и разработке на ее основе лекарственных форм для наруя го применения, что стало предметом наших исследований.

1. Разработка растительной композиции "экзофит".

На основе анализа информации О химическом составе лекарст

с растений, их фармакологической активности, применения в науч* и народной медицине составлена растительная композиция(сбор), шанная нами "экзофит", в которую вошли четыре вида лекарствен-'о растительного сырья,разрешенного к применении в медицинской шике. Подбор компонентов сбора осуществляли учитывая, что для :тного лечения ран и различных поражений кожи комплексный препа г должен обладать противовоспалительным, антисептическим, анти-гтериальным действием,способствовать уменьшению боли, отека,поить защитные свойства и оказывать стимулирующее влияние на реферативные процессы поврежденных тканей. Наличие дублирующих шонентов, позволило достичь,за счет усложнения природного комикса действующих и сопутствующих веществ,суммации,потенциирова I, поливалентность лечебного действия. Предлагаемые для сбора :тения содержат биологически активные вещества искомой активное ; флавоноиды, дубильные вещества, эфирные масла, каротиноиды, гостерины и др.,совокупность которых адекватна сложному лечению I.

При составлении сбора также учитывалась возможность исполь-?ания лекарственного растительного сырья, недорогого и с доста-шой сырьевой базой. Получение на его основе масляного экстрак-и мазей делает эти препараты более доступными в отличие от ма-I шиповника и облепихи, запасы сырья которых не удовлетворяют гребности промышленности, а культура сворачивается из-за сложен ухода при возделывании и экономической нерентабельности.По-эму была проведена выборка сведений о распространении лекарст-здых растений, входящих в состав предлагаемого сбора экзофита, территории Башкортостана, а также использованы данные ресурсо-^ческих исследований, проведенных сотрудниками кафедры фармако-узт БГМИ, в том числе автором,во время экспедиций 1988-92 г.г. шые исследований показали, что все виды лекарственного расти-1ьн0г0 сырья, входящего в состав предлагаемого сбора, можно за-гавливать или выращивать на территории республики Башкортостан достаточном количестве, и аптечные учреждения в нем недостатка испытывают.

2. Стандартизация растительной композиции "экзофит".

Для получения разрешения Фармакологического комитета УЗ и МП на клиническую апробацию сбора необходимо разработать проект

Временной фармакопейной статьи. Согласно требованиям, предъяв. мым к проекту ВФС,проведено морфолого-анатомическое изучение ! ра с целью определения его подлинности;разработаны числовые га затели, определяющие качество сбора: влажность не более [2"/.; : оощей не более 12%; золы нерастворимой в 10% хлористоводоро' кислоте не более 1,5%¡содержание органической примеси не боле« содержание минеральной примеси не более 1%; содержание частиц проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 5,и мм не более частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,18 мм более 1,5%,

Содержание экстрактивных веществ определяли с использовш различных экстрагентов:40-96%-ный этанол и вода дистиллирован! 11аибольший выход экстрактивных веществ наблюдался при использс нии в качестве экстрагента 70% этилового спирта (23,05% - 34Л Но в связи с тем,что сбор экзофит может использоваться для нар ного применения в виде настоя, целесообразно в качестве критег оценивающего доброкачественность сбора, определять содержание страктивных веществ,извлекаемых водой, которое должно быть не нее 20 %.

Проведен качественный и количественный химический анал сбора экзофита.Предварительными качественными реакциями устано лено присутствие в сборе дубильных веществ, среди которых прео ладают соединения конденсированной природы; флавоноидов (свобо ных агликонов и гликозидов),производных флавона, флавонола.в т числе со свободной гидроксильной группой у С-3 и С-7 атомов, оксифлавонов, 5-оксифлавонолов, катехинов, халконов,лейкоантоц адов; кумаринов; азуленов: аскорбиновой кислоты. Методами хром тографического анализа (БХДСХ) по окраске и флюоресценции пят в видимом, НФ-свете, до и после обработки хромогенными реактив ми, по значениям НГ и сравнении их со значениями КГ аутентичн образцов,установлено наличие в спиртовом растворе,очищенной су мы фенольных соединений, 18 веществ флавоноловой природы,относ щихся к группам флавонов, флавонолов и их гликозидов, катехино халконов; о веществ, относящихся к фенолкарбоновым кислотам,да из которых были идентифицированы как хлорогеновая и кофейная к слоты,В спиртовом растворе суммы флавоноидов после гидролиза у тановлено присутствие агликонов флавоноидов: кемпферола, кверц тина, апигенина, мирицетина. Для разделения флавоноидов и выд ления фенолкарбоновых кислот использовали адсорбционную колоно

Таблица i.

Флавоноиды, выделенные из сбора экзофита.

Шифр Элемент . Темп.пл. -град ЗФ-спектры АХ Агликон Идентифицированное

вещества состав вещества д* полоса Яшах нм вещество

поглощ. нм ALCL

В-2 347-349 нет I 336 45 апигенин

желт.крист. СА°5 (этанол) II 268 10 (5,7,4*-триоксифлавон)

В-3 271-274 нет I 367 52 кемпферол

бледно-желт. We (метанол) II 260 2 (3,5,7,4'-тетра-окси-

игольч.крис. 314-316 флавонол)

В-4 нет I 370 60 кверцетин

ярко-желт. ОДА. (метанол) II 256 14 (3,5,7,3 *,4'-пентаокси

игольч.крис. 232-235 362 43 флавонол)

B-ii нет I идентифи- гиперозид

зол.-желт. (этанол) II 259 13 цирован- (5,7,3',4'-тетраокси-

крист. 189-192 365 50 кверцетин -З-в-Д-галактопиранозид)

В-13 нет I идентифи- ритин

бледно-желт. (этанол) II 258 2 цирован- (5,7,3',4'-тетраокси-

крист. 355-357 378 кверцетин -3-рутинозид)

В—14 нет I 22 мирицетин

WPITT ипигт * ^«twitw 4 ф Ws (этанол) 256 15 ГЗ R 7 4* R'-ГРКГЯ-

окси-флавонол

Примечание: Д*- проба смежения с аутентичным образцом флавоноида; изменение темп плавления

нув хроматографию на полиамидном сорбенте.Выделены и идентифт рованы следущие соединения: апигенин, кемпферол, кверцетин, ь ркцетин, гиперозид, рутин, кофейная и хяорогеновая кислоты(та£ i,рис Л),Идентификацию флавоноидов и фенолкарбоновых кислот пр водили сравнительной хроматографией со свидетелями,определение температуры плавления (в том числе пробы смешения), элементный анализом, изучением ЯФ-спектров, батохромных сдвигов,сравните/ ной ^^-спектроскопией с аутентичными образцами,изучением проду тов кислотного гидролиза гликозидов.

Хроматографический анализ кумаринов позволил предполош присутствие в сборе экзофите скополетина,умбеллиферона, кумарш эснулетина, эскулина.

Разделение пигментов сбора экзофита проводили методом адс( бционной колоночной хроматографии на окиси алюминия после пред! рительной их экстракции. Выявили три зоны, которые по окраш максимумам поглощения,определенным спектрофотометрически в инте вале длин волн 350-500 нм и 4?0-?00 нм, были идентифицированы \ хлорофиллы а и б, каротины а и б (рис.2).

юглощение

Рис.2. Спектры поглощения, выделенных хроматографическим

путем а-С1) и в-каротинаС2),хлорофилла а (3) и б (4).

Количественно определены основные группы биологически актив-( веществ, ответственные за фармакологический эффект сбора: содержание дубильных веществ (ГФ-Х1) сбора экзофита составило 10,35% до 15,80%;

содержание суммы флавоноидов определяли спектрофотометричес-й методом (по образованию комплекса с алюминия хлоридом и пря-\ спектрофотометрии),которые позволяют определять сумму флаво-едов в пересчете на один из компонентов суммы. В связи с тем, э в составе флавоноидной фракции идентифицированы кверцетин и ] гликозиды рутин, гиперозид,возможен пересчет суммы флавонои-? на один из них. Нами выбран рутин, так как он содержится во зх компонентах сбора зкзофита и является гликозидом с более вышиной растворимостью. Сравнительное изучение двух методов попало, что наиболее точным и наименее трудоемким является зксп-:с-метод прямой спектрофотометрии и содержание суммы флавонои-5 (в пересчете на рутин) по этому методу составило от 2,55% до 10%;

- определение содержания эфирного масла в сборе проводили пс вестной методике (ГФ-Х1,метод 1), Были изучены различные уы перегонки эфирного масла,влияшщие на его выход:степень измель ности сырья, время перегонки и величина навески сбора. Исслер ния показали, что оптимальным режимом для количественного опр ления эфирного масла сбора экзофита является: навеска 10,0 г; мельченность сырья - 1,0 мм;время перегонки - 2 часа.При этой держание эфирного масла в сборе составило от 1,18% до 1,72%. ме того,определено содержание азуленов в сборе, которое соста от 120,имг% до 135,4мг%;

- содержание каротиноидовСв пересчете на в-каротин)в сборе э фите определялось колориметрически (Плешков Б.П.,1978) и сост ло от 5,36 мг% до 9,05 мг%;

- содержание аскорбиновой кислоты СГФ-Х1) составило от 12,25 до 14,20 мг%;

- содержание полисахаридов определялось гравиметрическим мет (Горин Я.Г.,1975) и составило от 0,82% до 1,18%,

В связи с тем, что сбор экзофит предлагается также испол вать для получения масляного экстракта, представляло интерес чение липофильных веществ сбора, которые играют определенную в обеспечении ранозаживлящего эффекта масляного экстракта.

Изучен качественный и количественный состав липофиль фракции, Установлено присутствие в ней азуленов,токоферолов, тостеринов.В неомыляемой фракции после хроматографического ра ления (ТСХ), идентифицированы препаративно выделенные с хром, грамм каротиноиды: а- и в- каротин, ликопин (табл.2).

Таблиц

Хроматографическая характеристика и идентификация каротиноидов в липофильной фракции.

Значе- Окрашива-

NN ние РЛ* ние зоны

1, 0,16 желтое

2, 0,25 яр./розов.

0,61 желтое

4 * ♦ 0,82 оранжевое

Л мах каротиноидов нм эксперим-но литератур,данные

416, 440 473, 504

421.446.474

423.450.475

474,506 420,445,475 425,450,477

Идентифи! ция веще!

неиденти! ликопи в-карот] а-карот)

Определено количественное содержание азуленов от 278,0мг;

,Омг% и каротиноидов (в пересчете на в-каротин) от 9,98 мг% до 20 мг% в липофильной фракции.

Полученные данные позволили предложить проведение стандартами сбора экзофита в зависимости от целей его использования:для менения в форме водных вытяжек-по содержанию дубильных веществ е менее 10% и суммы флавоноидов(в пересчете на рутин) - не ме-2,5%; для получения масляного экстракта - по содержанию эфир-масел - не менее 1,10% и каротиноидов - не менее 5,3мг%.

3. Разработка и стандартизация масляного экстракта из сбора экзофита.

Использование лекарственных растений в виде оптимальных ком-иций - сборов Сводные вытяжки) и масляных экстрактов является спективным для лечения различных раневых процессов. Масляный тракт получали метопом мацерации (настаивания) сырья на расти-ьном масле, как наиболее приемлемого для приготовления в усло-х аптек. Кроме того, представляло интерес получение масляного тракта, который может быть использован в качестве биологически ивных добавок в косметических средствах. Зкстрагентами служили тительные масла - подсолнечное,оливковое,отвечающие требовани-ГФ-1Х,Х, и жир норковый дезодорированный,отвечающий требовани-ГОСТ 8285-74, Для получения масляного экстракта были изучены личные условия экстракции растительного сбора экзофита:влияние мени экстракции,соотношение экстрагента и растительного сырья, троль вели по содержанию каротиноидов,Установлено, оптимальное мя экстракции - 6 часов (рис.3)* оптимальное соотношение рас-ельного сырья и экстрагента - 1:6 (табл.3).

Таблица 3.

Выход каротиноидов и конечного продукта в зависимости от соотношения растительного сырья и экстрагента.

отношение растит, [рья и экстрагента Содержание каротиноидов, в мг % Выход конечного продукта, в %

1 : 2 1 : 4 1 • R 1 : 8 2,46 ± 0,027 2,21 ±0,071 2 14 + п пзп U ^ A W ¿ W f WU W 1,36 ± 0,015 17.2 ±0,02 44,6 ± 0,01 69.3 ± 0,03 71,1 ± 0,11

г\

Рис.3. ^Грайк згЬисиьЬсти^выхода каротиноидов от времен экстракции.

Проведено также сравнительное определение содержания кар ноидов в экстрагентах и масляных экстрактах,полученных на пор нечном, оливковом маслах и норковом жире (табл.4).

Таблиц

Содержание каротиноидов в экстрактах и экстрагентах.

Используемый Содержание каротиноидов , в мг X Эффективн

экстрагент в экстрагенте в масл.экстракте экстрам

Подсолнечное 0,336 ± 0,016 2,198 ¿0,014 1,857

масло

Оливковое 0,158 ± 0,0028 1,330 ±0,003 1,172

масло

Мир норковый 0,225 ± 0,010 1,920 ± 0,020 1,695

дезодор. •

Установлено, что для приготовления масляного экстракта в течных условиях лучше использовать подсолнечное масло,которое иболее полно извлекает действушщие вещества, является продук более доступным и дешевым,чем оливковое масло. Для приготовл! косметических средств - жир норковый,который также достаточно

Таблица £

Определение числовых показателей экстрагентов и экстрактов.

Объекты исследования

Показатели, обязательные для проверки качестве

цвет

запах, вкус

НА ПОЯС

удельн вес

показ, прелом

ЛНЕЧНОМ НАС]

Е

кислот число

не более 2,25

2,2

2,162,19

число омыл.

Зкстрагент, по ГФ-1Х

экспериментально !асляный экстракт. сер.01-10

прозрач., масл.ж-сть,желт. цвета

н I» «I

проз.масл. ж-сть,зе ленов,-жел.цв.

запах

слабый,

своеобр,

вкус

прият.

1* и II

запах своеобр. вкус ГОЕЬК.

0,9200,930

0,921

0,9230,929

1,4701,474

1,472

1,4711,474

185198

193,1

190,4198,0

НА

0]

ШВК0В0М МАСЛЕ

)^гтпягрнт

поТф-1Х '

экспериментально асляный4 экстракт, сер.01—10

прозр.

желтов.ж-

сть

II II и

проз.масл ж-сть,жел. цв.

запах

слабый

своеобр.

вкус

прият,

п н п

запах

своеобр

вк.гор.

Ш

не более 2,5

0,25

0,751.43

НОРКОВОЙ ЖЖ

187196

188,3

190,3195.7

8088

кстрагент, по ГОСТ В285-74

зкеперим. зеляный гстракт, :ер.01-10

кремоват. оттен.ма-зеоб.мас.

н м II

желт.мазе

пй млггл

запах

слабый,

специф,

п н н

запах

тот гит

» V» « |

1,4631,469

1,465 1

не более 1,0 0,98

п qti-

11,467 ! 0,99

рошо извлекает действующие вещества из сбора и широко применяв! в косметической промышленности.

Анализ на содержание биологически активных соединений пор зал наличие в масляных экстрактах каротиноидов (а- и в-каротинь азуленов, фитостеринов, токоферолов.Определены числовые показат лм, характеризующие качество экстрагентов и масляных экстрактов удельный вес, показатель преломления,кислотное число, йодное чи ло, число омыления (табл.5); и количественное содержание шрот ноидов от 2,ОмгХ до 2,25мг%, азуленов от 47,22мг£ до 72,13мг2.

На основании проведенных исследований нами разработаны: 1) способ получения масляного экстракта из сбора экзофита подсолнечном масле для приготовления в аптечных условиж (пате N 1752395 от 6 мая 1993г) - схема 1;

Схема 1

ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ МАСЛЯНОГО ЭКСТРАКТА ИЗ СБОРА ЭКЗОША.

ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТИТЕЛЬНОЕ СЫРЬЕ

1.Измельчение

2.Просеивание

3.Взвешивание

4.Смешивание

СБОР "ЭКЗОФИГ"

1.Соотношение (1:6)

2.Время 6 часов

3.Температура 50 град

¿.Ир. З.Те]

ЭКСТРАКЦИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СБОРА

ПОДГОТОВКА _ЭКСТРАГЕНТОМ

ЭКСТРАГЕНТА 1.Взвеши

1.50-60 град 2.0,9 кгс/см1 ФАСОВКА

МАСЛЯНЫЙ ЭКСТРАКТ

!) способ получения масляного экстракта из сбора экзофита на нор ;овом жире, который используется для приготовления косметически) ;ремов "нлъбина" и "Сударыня" ("Технологический регламент на вы [уск комплексного экстракта растений масляного").

Изучено влияние условий и сроков хранения, полученных масля их экстрактов,нл показатели их качества,В процессе хранения пре. гарат через каждые 6 месяцев, а по истечении 1 года через три ме ;яца, исследовался по следующим показателям: плотность,показател феломления, кислотное число,количественное содержание каротинои дев (в пересчете на в-каротин). Анализ данных показал, что препа зат оставался стабильным в течении 1 года шести месяцев. По исте ¡ении этого срока некоторые показатели качества изменялись,поэте !у рекомендуемый срок хранения масляного экстракта из сбора зкзо рита 1,5 года.

Полученные данные позволили предложить проведение стандарта зации масляного экстракта из сбора экзофита по содержании карота юидов - не менее 2,0 мг%; кислотному числу не более 2,2; числ змыления 190-198; йодному числу 125-139,

4. Технологические исследования по разработке мази, содержащей масляный экстракт из сбора экзофита.

Наиболее рациональной лекарственной формой для масляног экстракта из растительного сбора является мазь, которая проявляе шеокую терапевтическую активность и может широко использоватьс з хирургической и дерматологической практике. При выборе мазевь эснов учитывали, что повышенной резорбцией лекарственных вещестн отличаются мази на эмульсионных основах,которые при нанесении н? хожу хорошо ее очищают,увлажняют, смягчают,а в некоторых случая? гавыиают эластичность.

При разработке оптимальной концентрации и технологии мази ь основе масляного экстракта, экспериментально на животных устаноЕ лено, что наибольшей ранозаживляющей активностью обладает мазы 2Ш. содержанием масляного экстракта. Изучено влияние последовав льности введения составляющих компонентов мази,а именно:масляног экстракта,воды очищенной и эмульгатора в мазевую основу. Усташь пено,что стабильные эмульсионные системы образуются в результат смешивания сплава масляного экстракта с эмульгатором и добавлен? эм водной фазы,с последующим эмульгированием. Оценку стабильно^

мазевых композиций проводили путем центрифугирования при 300 6000 об/мин после приготовления и после хранения образцов м 24ч при комштной температуре,или +5 С в условиях холодильной меры. Выбор оптимального количества вспомогательных веществ,о зушщих эмульсионную систему,проводили путем переменного измен содержания компонентов в количественном отношении.В качестве ; могательных веществ нами были использованы: эмульгаторы Т-2, 1 пентол, моноглицерид дистиллированный (МГД), эмульсионный воа пластификаторы:пчелиный воск,низкомолекулярный полиэтилен (НМ! Мази исследовались на однородность,намазываемость,цвет,консис цию и стабильность при хранении. В результате изучения маз( композиций,установлено,что хорошими технологическими и консис-тными свойствами обладают мази следующих составов:

N1: вазелин 35,0 N2: вазелин 35,0

эмульгатор Т-2 10,0 эмульгатор N1 10,0

вода очищенная 30,0 вода очищенная 30,0

масляный экстр, 25,0 масляный экстр, 25,0

N3: вазелин 20,0 N4: МГД 10,0

эмульсион.воск 10,0 НМПЭ 20,0

пчелиный воск 4,0 вазелин,масло 15,0

вода очищенная 41,0 вода очищенная 30,0

масляный экстр. 25,0 масляный экстр, 25,0

В разработанных составах мазей определяли количественное держание каротиноидов, рН водных извлечений. Установлено,что м с масляным экстрактом из сбора обладают нейтральной реакцией, отвечает требованию нейтральности мазей и сохранению первонача ного рН кожи.Проведены биофармацевтические исследования по оце способности эмульсионных мазей,содержащих 25% масляного экстра к высвобождению каротиноидов в сравнении с 25% мазью на вазели ланолиновой основе (6:4) методом диффузии при прямом контакте зи со средой. Установлено, что биодоступность масляного экстра зсшисит от состава мазевой основы. Мази составов N1, N2, N3 им приблизительно одинаковые показатели высвобождаемости каротин дов. Однако, необходимо отметить ступенчатый характер высвобож, ния каротиноидов из мази N3 за счет ячеистой структуры,образов, ной пчелиным воском. Эмульсионная основа мази N4 значительно п] вышает по степени высвобождения каротиноидов другие основы,

гирт пйрпрниа и рр гпгтяп МГЛ п^ргприирляттргп гтайилкипгть гшп

» и и и^и« 4-а М V V/ ич/ш 4 * >1/ «М* у %* М %/ V * мм« С^м* * « » •

фобной фазы,и,в качестве пластификатора,НМПЭ,имеющего разветвл!

- -л «-»

р структуру и до 40-45% кристаллизационной фазы. Мазь на вазе ян-ланолиновой основе отличается низкой высвобождаемостьнз. Дл ::ех мазей характерен пик концентрации каротиноидов на интерва ремени между 45 и 90 минутами с момента постановки опыта 1п э. На основе определения биодоступности каротиноидов, определе птимальный состав и технология мазей с масляным экстрактом ь иульсионных основах.

На основании проведенных исследований структурно-механически войств мазей и соответствуищих основ, установлено,что все иссле ованные мази являются структурированными дисперсными системам* бладающими упруго-вязко-пластичными и тиксотропными свойствам* ля которых характерны коагуляционные связи. Кроме, того,на стру? урно-механические свойства мазей и основ значительное влияю называет введение вспомогательных веществ:эмульгаторов N1, Т-2 ГД, эмульсионного воска; пластификаторов пчелиного воска, НМЛ; также масляного экстракта,Варьированием композиций вcпoмoгaтe^ ых веществ, пластификаторов можно регулировать технологические труктурно-механические свойства мазей.

С целью определения устойчивости мазей и вида упаковки, на* роведены исследования по определению потери влаги при храненю становлено,что разработанные составы мазей с масляным экстракте 1,Н2,Ю рекомендуется хранить в аптечных условиях в стекляннс аре темного стекла с винтовыми, пластмассовыми крышками, а. маг остава N4,имеющую значительный процент потери влаги при хранен* использованием алюминиевых тубов с лаковым покрытием.

Проведенные технологические исследования позволили разрабс ать состав, технологию получения и методы стандартизации мазей асляным экстрактом из растительного сбора экзофита для наружног рименения.При этом хорошими технологическими, агрегативными,бис армацевтическими и структурно-механическими свойствами облада1 мульсионные мази составов N1, N2, N3 и N4. Учитывая особенное! птечного производства, для дальнейшего применения можно рекомеь овать мази на основе масляного экстракта составов N1.N2.N3.

5. Изучение фармакологических свойств сбора экзофита и масляного экстракта на его основе.

Изучение острой токсичности масляного экстракта из сбора эр офита показало, что на основании ГОСТ 12.1.007-76 масляный экст

ракт относится к 4-му классу малоопасных веществ,ЛД50для мае го экстракта при однократном введении в желудок составляе (5,0 - 8,45) г/кг. Кроме того, для масляного экстракта изуча местное кожно-раздражающее и аллергизируицее действие и уст лено,что он не обладает раздражающим и аллергизирущим дейст Для обнаружения способности настоя и масляного экстрак сбора экзофита влиять на острый воспалительный процесс и ори ровочной оценки выраженности этого эффекта использовали моде трого агарового отека. Асептическое воспаление у мышей выз субплантарным введением 1%-ного раствора агара ЧИГсо" в честве 0,05 мл (табл.6).

Табли

Влияние настоя и масляного экстракта на острое агаровое воспаление у мышей.

N Группа Количество Процент увеличения массы

п/п животных пораженной конечности

I. Контроль 6 100,0 ± 9,30

2. Контроль« 7 98,2 ± 8,02

3. Настой 6 71,4 ± 6,80* Р <

4. Масляный

экстракт 6 67,2 ± 5,02* Р <

Установлено,что настой и масляный экстракт из сбора экзофита являют выраженную противовоспалительную активность.

Изучение ранозаживлящей активности проводилось в опыта: 144 белых половозрелых крысах без учета пола: 1) на модели плоскостных кожных ран изучалось ранозаживл; действие настоя,масляных экстрактов из сбора,его отдельных р< тельных компонентов. При этом анализ изменений в ране у жив« исследованных групп позволил отметить, что во всех случаях з< ление дефекта кожи происходило прсредством вторичного натяже! образованием рубца.Установлено,что по отношению к препарату ( нения - каротолину, масляный экстракт и настой из сбора экз си; обладали более выраженной ранозаживлящей активностью, так к животных этой группы заживление наблюдалось в более ранние с| (табл.7).

На этой же модели изучалось раноза*ивлящее действие ш

Тяппмид 7

Изучение ранозаживлящей активности масляных экстрактов (м.э.) из растений,входящих в состав сбора экзофита,м.э.из сбора,настоя из сбора.

NN ГРУППА п 1-е с.

1. Подсолне*ь 100

ное масло Ь

2. М.э.хмеля 5 100

3. М.э.полыни

4. горькой 5 100

Н.э.зверо-

5. боя 5 100

М,э,кален-

дулы 6 100

6. М.э,из сбо-

7. ра экзофита 5 100

Настой из

сбора(внутрь)6 100

8. Каротолин 6 100

9. Контроль 5 100

Площади ран в % на

3-е сут. ! 7-е сут.! 10-е сут. ! 14-е сут,! 21-е сут.

75,75+3,72145,75+1,94 82,06+4,8 149,83+1,95

78,70+9,17133,35+4,13

80,82+9,87139,66+3,69 ■

74,84+3,65130,20+1,63

77,05+10,2141,83+7,25

74,89+5,48I38,78+3,45 72,75+13,4130,28+1,87 82,56+11,1156,75+5,95

32,04+4,70 27,33+2,25 _

18,28+4,32*1

22,05+2,02 !

19,52+2,17*!

15,44+2,71*1

16,04+4,18*1 20,56+2,58 1 30,77+8,90 1

110,50+3,8 14,32+0,45 18,25+0,37 13,38+1,26*

I ■

"б,43+3,55*12,22+0,45* 4,25+0,37*1 0

6,04+3,06*11,65+0,34* ■

0 1 о

3,50+2,56*'! 0 7,05+5.39*13,59+1,25* 17,8+16,1 19,53+2,56

День полного заживл.

25-е сут. 23-е сут.

23-е сут.

17-е сут.

21-е сут.

14-е сут.

16-е сут. 25-е сут. 28-е сут.

Примечание: * - различие статистически значимо отличается от контрольной группы (Р<0,05); п - количество животных.

с различным содержанием масляного экстракта (52-502),Выявле что по отношении к препарату сравнения каротолину наибольшей нозаживляющей активностью обладает 25Х мазь, которая стала 061 том технологических исследований.

2) на модели термических ожогов изучалось ранозаживлящее дей вие масляного экстракта из сбора экзофита и 25% мази,При этом тановлено, что ожоговые раны до 14 дня имели тенденции к увели ниш,в последующем.воспалительная реакция утихла, уменьшились н ротические явления,язвы покрылись коркой, под которой шла реге рация. Таким образом, более эффективно, чем каротолин, ускор заживление ожоговых ран у крыс масляный экстракт из сбора экзо та и 25X мазь на его основе (табл.8),

3) ранозаживлящее действие масляного экстракта из сбора и мази изучалось также при криодеструкциях.Как показали наблщден до 5-х суток воспалительная реакция в области криотравмы умень; лась незначительно, а затем поверхность раны покрывалась корко; под которой шел процесс регенерации. Установлена,что наиболее « тивным криопротекторным действием обладал масляный экстрак мазь на его основе (табл.9).

Оценку влияния масляного экстракта из сбора экз офита и 25У. зи на течение контактного аллергического дерматита проводили 24 морских свинках (весом 300-350 г).Было установлено,что нане( ние масляного экстракта и мази морским свинкам после разреше! аллергической реакции приводило к более быстрому заживлению по! хностных некрозов по сравнению с контрольной группой живота воспалительный процесс вокруг некроза был выражен слабо уже 3-й день и практически отсутствовал на 7-е сутки. Ранее было I тановлено, что масляный экстракт, проявивший в данном эксперим* те наибольшую активность, обладает также выраженным противовес! лительным действием. По-видимому, способность масляного экстра! из сбора экзофита и мази на его основе ускорять заживление кош тного аллергического дерматита, в определенной степени, связанг их противовоспалительными и регенерирующими свойствами.

Таблицы 8 и 9.

Влияние масляного экстракта из сбора и 25% мази на заживление ожоговых ран.

NN

17 2,

3,

4,

Площадь ран в % на

п;

¡1-е ! 3-е сут. ! 7-е сут.! 14-е сут.! 22-е сут,! 29-е сут,! 39-е сут.

Масл,экст. 25% мазь с экстр, Карото-лин

Контроль

6!100 159,20+7,58|70,62+9,47174,05+10,3139,40+7,07125,67+5,6916,60+1,66* 61100 ¡60,64+6,42174,11+6,35176,81+8,16142,62+5,39127^5,14110,11+5,5*

День

полног;

заживл

45-е су на 50-е заж.ц ' на 50н

61100 165,02+6,45158,05+6,56157,92+8,56135,80ч4,34122,21+4,48114,92+6,5 ¡язв.сох] 61100 175,25+6,34184,21+5,34180,05+16,4148,00+3,61134,63+5,41117,25+2,0

Влияние масляного экстракта из сбора и 25% мази на заживление криодеструкций.

1 Ни! ГРУППА ■ ■ ■ ■ 1 Площадь ран в % на п! День полного заживл.

11-е с. ■ > 3-е сут, 1 7-е сут, 1 10-е сут,! 14-е сут. ■ ■ 1 21-е сут.

1,1Масл,экст, 2.1 25% мазь 1 с экстр, 3.110%синт.эм. 4,1 Контроль 61 100 ■ б! юо 61 100 61 100 64,20+3,22130,05+3,76115,25+2,8612,40+0,56* ■ 1 ■ 65,82+9,12142,45+5,60118,62+1,7419,02+1,48* 74,23+8,10161,03+13,4131,20+12,2113,2+3,16 82,60+8,18167,82+9,56138,03+5,05116,80+3,2 0 зажило у 4 из 6 2,10+1,11* 8,20+2,62 16-е сут. 23-е сут. 25-е сут. 28-е сут.

Примечание: * - различие статистически значимо отличается от контрольной группы (Р<0,05); п - количество дивотннх

-24-

выводы:

1. Разработана пропись сбора экзофита, включающего 4 в лекарственного мстительного сырья, разрешенного к применени медицинской практике, для наружного использования и изготовле масляного экстракта с противовоспалительной и ранозаживлящей тивностью,

2,Определены макро- , микродиагностические признаки сбо позволяющие идентифицировать все его составные части, и числов товароведческие показатели.

3. Проведен фотохимический анализ сбора.В полифенольном к плексе идентифицированы флавоноиды рутин, кверцетин, апигенин, перозид, кемпферол, мирицетин,кофейная и хлорогеновая кислоты, тановлено количественное содержание фяавоноидов, эфирных масел азуленов, дубильных веществ,аскорбиновой кислоты, полисахарида каротиноидов.

4. Исследован качественный и количественный состав липофи ной фракции сбора. Установлено присутствие в ней азуленов,токо ролов, фитостеринов;идентифицированы а- и в- каротин, ликопин; ределено количественное содержание азуленов и каротиноидов.

5. Предложена стандартизация сбора в зависимости от це, его использования: для применения в форме водных вытяжек - по I держанию дубильных веществ - не менее ш. и суммы флавоноидрв I пересчете на рутин) - не менее 2,52;для получения масляного эк ранта - по содержанию эфирных масел - не менее 1,1ОИ и кароти идов - не менее 5,3 мг£,

6. На основании товароведческого и фитохимического анализ; разработан проект ВФС на сбор экзофит,

7. Проведены технологические исследования по разработке м< ляного экстракта и рациональной лекарственной формы - 2Ъ/. эму. сионной мази для изготовления в аптечных условиях, Разрабо-"Технологический регламент на выпуск комплексного экстракта р< тений масляного" для косметической промышленности.

8. Проведен фитохимический анализ масляного экстракта из : зофита и предложены нормативы качества масляного экстракта -числовым показателям и содержанию каротиноидов.

9. Изучены фармакологические свойства сбора, масляного эш ракта и мази.Выявлена противовоспалительная и репаративная акт! ность сбора и масляного экстракта; репаративная - мази; против о< лергическая - экстракта и мази. Масляный экстракт отнесен к ч(

ертому классу малоопасных веществ,не обладает раздражающим и а. ергезирующим действием.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: .Мухаметшина В,С,,Хайретдинов С,С.,Бонвеч(Пупыкина)К,А, 0 раци! альном использовании лекарственных растений БАССР//Возрастн роблемы патологии:в сб,молодых ученых БГМИ.-Уфа,1988.-С.2В. .Бонвеч( Пушкина Ж .А., Плеханова Т.И..Мухаметшина B.C. и др. Ох] рироды как фактор охраны здоровья//Социально-философские пробл ы современной медицины и здравоохранения:Тез,докл.внутривуз,н. ч. -практ. кон®.-Уфа, 1988.-С. 49-50.

.Пупыкина К.Н.,Никитина Т,И,,Насыров Х.М.,Кудашкина Н,В, К во осу разработки многокомпонентных сборов с противовоспалительн ранозаживляющим действием//Резервы совершенствования лек.обес ения населения РСФСР:Тез.докл.науч.-практ.конф.-Владимир,1991. ,24-25.

.Пупыкина К,А..Никитина Т,И.,Насыров Х.М. и др. Изыскание сти яторов регенерации среди природных и синтетических соединений/ !ечение внутри- и околосуставных повреждений:Труды 4-ой респ.н

и -пплит KnwiTi Мрпшошл кг»тягтпрф -ЧгТи 1ЧЧ1 -Г Т/у-134

I 1 ^ « 4 • ^ А 1U * ttj/ ^ Ш W f "в - 1 L ал. tU* à дС* t WA W t W^j/ ^ w^n^à p л. L/\J A f W ^ A W ш-л A W i f

¡.Пупыкина К.A.,Никитина Т.И. Растительное средство"Экзофит" д ¡ечения криодеструкций и ожогов//Поиск биологически активных в [еств и проблема лек.обеспечения.-Уфа,1991.-С.104-1Об. i,Пупыкина К.А.,Никитина Т.И.,Насыров Х.М. Разработка растител юй композиции с ранозаживлящим действием/Лретья Урк.конф. teд.ботанике:Тез.докл,Киев,1992,-Ч,1,-С.111, ' RnHPPuf Пчпыкина Ï К А Нитгитинл T M Нягнпрп Y M и un fnnrnfi

f wwiuv w it ml u«i«U * li 4 ti ( ^ »uuui « * u <u « Ф m a 4 p л tuuw^uw «»f шел + л л f-*if-/ ♦ witwwww

[учения масляного экстракта, обладающего ранозаживляющей активн ЪЕ//Патент N 1752395 от б мая 1993г.

I,Пупыкина К.А.»Никитина Т.И. Изучение масляного экстракта,пол шнного из сбора "Экзофита"//Решение актуальных задач фармации :овремен.этапе:Тез.докл.конф.-М,,1994,-С,253-254. ).Пупыкина К.А,,Никитина Т.И,,Ардашова С,Н, Фармакогностическс оучение сбора "Зкзофит",обладающего ранозаживляющей и против воспалительной активность&//Матер.59-й науч,-практ.конф,молоп г tri м rnm hTUM'Tp-5 пгжп -Ч 1 -Чтя 1444 -Г R3-R4

• О * ♦ w * Ort ♦ "» » WW + /^utitrt t л t t wtjAi p i WW A ♦ О « WW w ♦

О,Пупыкина К,А.,Никитина Т.И,,Хисамова Л.Ф, Изучение и станда ■изация масляного экстракта,полученного из сбора"Зкзофит"//Мате ¡9-й науч. -прбнт. конф. молод, цч. и студ, БГМИ : Тез, докл. -Ч. 1. -С, 84-

11,Пушкина К.А. »Никитина Т.И. Разработка масляного растителы зкстракта//1-й Неждунар,науч.конгресс'Трад,мед. и питание:! рет.и практ. аспекты".-Й.,1994.-С,189-190.

12,Пушкина К.А. »Никитина Т.И, ,Ардашова С.Н, Стандартизация ( лодий хмеля обыкновенного//Современ.аспекты изуч.лек,растений; уч.труды.т.ХХХШ.-М.ЛЭЗЗСв печати),

13,Пушкина К,А,,Никитина Т.И.,Лиходед В.А.и др. Разработка рг ональной лекарственной формы для наружного применения на ось масляного экстракта из сбора экзофита//Современ.аспекты изуч^ растений:Науч,труды,т,ХХХ1и,-Н,,1995(в печати).