Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Исследования по стандартизации и созданию лекарственных средств на основе плодов и семян лимонника китайского [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.].

На правах рукописи

Сатдарова Фарида Шамильсвна

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И СОЗДАНИЮ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ПЛОДОВ И СЕМЯН ЛИМОННИКА КИТАЙСКОГО \SCHIZANDRA СНШЕЫЗК (TUR.CZ.) ВАШ..]

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск - 2009

003474846

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социального развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Куркин Владимир Александрович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Челомбитько Вячеслав Александрович доктор фармацевтических наук, профессор Кудашкина Наталья Владимировна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социального развитию»

Защита состоится « 7^» 2009 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 208.039.ОЗ'при ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социального развитию» (305041, г. Курск, ул. К.Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

Автореферат разослан « ¿.¿Л&гА^ 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

Актуальность темы. В настоящее время социально и экономически важным направлением в современной фармации является расширение ассортимента безопасных и эффективных лекарственных средств (JIC), обладающих тонизирующим и общеукрепляющим действием. В этом отношении особую ценность представляют препараты на основе лекарственных растений (ЛР), проявляющих адаптогенную активность. Подобное фармакологическое действие в наибольшей степени среди адаптогенных растений имеет лимонник китайский [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.]. Данный эффект растения обеспечивает группа фенилпропаноидов - лигнаны, обусловливающие также гепатопротекторные свойства его препаратов (Liu G., 1985; Ко К.М. etc., 1995).

Несмотря на многолетний опыт изучения лимонника китайского, в нашей стране не разработан государственный стандартный образец (ГСО) схизандрина, что таким образом оставляет открытым вопрос стандартизации сырья и лекарственных препаратов (ЛП) данного растения. Так, на сегодняшний день в нормативной документации (НД) на лекарственное рас тительное сырье (ЛРС) - «Лимонника плоды» (ГФ СССР X изд., ФС 294) и «Лимонника семена» (ГФ СССР XI изд. ФС 80) отсутствуют разделы «Подлинность» и «Количественное определение», а анализ лекарственного препарата «Лимонника семян настойки» (ФС 42-1822-90) проводят по содержанию эфирного масла, сумме жирного и эфирного масел, лимонной кислоте, не являющихся ведущей группой биологически активных соединений (БАС) этого растения с точки зрения трактовки тонизирующего эффекта.

При решении этой проблемы необходимо учитывать и то обстоятельство, что методики качественного и количественного анализа должны со-

ответствовать принципу унификации в ряду: сырье - субстанция - лекарственная форма (Арзамасцев А.П. и др., 2000, Самылина И.А. и др., 1994).

Решение вопроса стандартизации новых ЛС заключается в разработке объективных и унифицированных методов анализа ЛРС и ЛП по ведущей группе БАС (Куркин В.А., 2002; 2007).

Таким образом, представляется актуальным дальнейшее фотохимическое исследование плодов и семян лимонника китайского в рамках разработки отечественного стандартного образца и современных подходов к химическому анализу ЛРС и ЛП на его основе, а также создание новых эффективных тонизирующих средств.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое исследование плодов и семян лимонника китайского и разработка объективных методов стандартизации сырья и лекарственных препаратов растения.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследование анатомо-морфологических признаков плодов и семян лимонника китайского.

2. Сравнительное изучение химического состава сырья, субстанций и ЛП лимонника китайского.

3. Разработка новых подходов к стандартизации сырья и ЛП лимонника китайского с учетом принципа унификации методик в ряду ЛРС - субстанция - лекарственная форма.

4. Разработка методик качественного анализа плодов и семян лимонника с использованием стандартного образца у-схизандрина.

5. Разработка методик количественного анализа сырья лимонника китайского с использованием стандартного образца у-схизандрина.

6. Разработка методик качественного и количественного анализа ЛП «Лимонника семян настойка», «Лимонника плодов настойка», «Лимонника сироп» с использованием стандартного образца у-схизандрина.

7. Оптимизация состава и технологии получения ЛП: «Лимонника семян настойка» и «Лимонника сироп».

8. Изучение в процессе хранения числовых показателей ЛП «Лимонника семян настойка» и «Лимонника сироп».

9. Разработка проектов НД на плоды и семена лимонника, ГСО у-схизандрин и ЛП «Лимонника плодов настойка», «Лимонника семян настойка», «Лимонника сироп».

Научная новизна. Впервые в Российской Федерации в результате изучения химического состава субстанции «С02-зкстракт плодов лимонника китайского (ООО «Роджер-Медика», г. Новосибирск, ООО «Экспро», г. Железногорск) выделены и идентифицированы 2 индивидуальных соединения - у-схизандрин и схизандрин, которые охарактеризованы как доминирующие лигнаны в этом растении. Установление структуры и изучение физико-химических свойств выделенных веществ проводилось с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии в сочетании с традиционными методами химического анализа. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов лимонника китайского по ведущей группе БАС - лигнанам, и в частности, по содержанию у-схизандрина.

Обоснована необходимость использования ГСО у-схизандрина в методиках качественного и количественного анализа плодов и семян лимонника китайского и препаратах на его основе.

Разработаны методические и методологические подходы к стандартизации сырья и препаратов лимонника китайского, заключающиеся в оценке суммы лигнанов и суммы двух доминирующих лигнанов - у-схизандрина и схизандрина с использованием ТСХ, спектроскопии и ВЭЖХ.

Научно обоснована целесообразность оптимизации состава и технологии получения ЛС - «Лимонника семян настойки», обладающей более высокой тонизирующей активностью, чем промышленный образец, и «Лимонника сироп».

Впервые в Российской Федераций обнаружена антиоксидантная активность для у-схизандрина, в сравнительном плане - для субстанции «СОг-экстракт лимонника» и настойки лимонника.

Практическая значимость. Выделены и охарактеризованы доминирующие лигнаны плодов и семян лимонника китайского: схизандрин и у-схизандрин (приоритетная справка № 2009103383 от 2.02.2009 г. на изобретение «Способ получения у-схизандрина»). Разработаны методики качественного и количественного анализа плодов и семян и ЛП лимонника китайского. Их подлинность основывается на определении у-схизандрина методами тонкослойной хроматографии (ТСХ), спектрофотометр™ и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методики количественного анализа ЛРС и ЛП лимонника базируются на определении содержания суммы лигнанов методом спектрофотометрии и суммы двух доминирующих лигнанов - схизандрина и у-схизандрина методом ВЭЖХ в пересчете на у-схизандрин. Унифицированы методики качественного и количественного анализа сырья и ЛС лимонника с использованием ТСХ-анализа, спектрофотометрии и ВЭЖХ. Разработаны показатели качества ЛП «Лимонника семян настойка», «Лимонника сироп», в том числе «Со-

держание суммы лигнанов», «Содержание суммы схизандрина и 7-схизандрина», «Сухой остаток», «Концентрация спирта», также установлены сроки их годности. Оформлены проекты фармакопейных статей (ФС) «Лимонника плоды», «Лимонника семена», «у-схизандрин - стандартный образец», фармакопейной статьи предприятия (ФСП) ЛП «Лимонника семян настойка» (на его способ получения получено положительное решение от 7.04.2009 г.), «Лимонника сироп» для представления на экспертизу в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития Министерства здравоохранения и социального развития РФ. Результаты исследований используются в научных исследованиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии и кафедре химии фармацевтического факультета СамГМУ (акты внедрения от 25.12.2008 г.). Результаты микроскопических исследований включены в электронное учебно-методическое пособие «Атлас по ботанике», разработанное на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ.

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты исследований по разработке подходов к стандартизации ЛРС и ЛП лимонника китайского.

2. Методики качественного и количественного анализа ЛРС «Лимонника плоды», «Лимонника семена» и ЛП «Лимонника семян настойка» и «Лимонника сироп» с использованием ГСО у-схизандрина, ТСХ, спекгро-фотометрии и ВЭЖХ.

3. Результаты исследований по обоснованию показателей качества плодов и семян лимонника китайского, а также лекарственных средств «Лимонника настойка», «Лимонника сироп».

4. Способ получения у-схизандрина из субстанции «С02-экстракт лимонника».

5. Способ получения лекарственного средства «Лимонника настойка» (положительное решение на изобретение от 7.04.2009 г.).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме: «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277) и «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» (Томск, 2006 г.); на X, XI и XII Всероссийских конгрессах "Экология и здоровье человека" (Самара, 2005-2007 гг.); на 62-й Межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2007 г.); на XII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007 г.); на III Всероссийской конференции

«Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.).

Основное содержание диссертации опубликовано в 24 научных работах, из них 7 статей в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 176 страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы, 49 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 126 источников, из которых 53 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Глава 1 содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по современному состоянию исследований лимонника китайского, в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растения, фармакологической активности, применению в медицинской практике.

В главе 2 представлена характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики анатомо-морфологического, химического и физико-химического изучения лекарственного сырья, индивидуальных веществ и препаратов.

В главах 3-6 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава плодов и семян лимонника китайского, совершенствованию методик стандартизации дан-

ного сырья и ЛП на его основе, разработке новых препаратов, оценке их качества и обоснованию целесообразности внедрения в медицинскую практику в качестве тонизирующих ЛС.

В Приложениях включены: материалы по разработке НД, акты внедрения.

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах, в формулах, на рисунках, которые приведены в тексте диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Морфолого-анатомическое исследование плодов и семян лимонника китайского

Исследования срезов плодов и семян данного растения и его порошка осуществляли с помощью микроскопов «Мойс ОМ-111» (Корея), «МоНс 0М-39С-№00-А» (Корея), и «МБИ-15У42» (Россия) с увеличениями х 8, х 16, х 40, х 100, х 400, х Ю00. Микроскопический анализ плодов лимонника китайского показал, что диагностическое значение для данного вида сырья имеют: прямостенные клетки эпидермиса, покрытые складчатой кутикулой; часто встречающиеся среди них одиночные округлые секреторные клетки с эфирным маслом (рис. 1); изредка встречающиеся устьица тетрацитного типа; клетки мякоти с простыми крахмальными зернами овальной формы (рис. 2). Диагностическими же признаками семян данного растения являются четырех- и пятиугольные клетки эпидермиса с сильно утолщенными, одревесневшими буровато-желтыми стенками; расположенные ниже 2-3 ряда сильно одревесневших каменистых клеток, под которыми находится слой тонкостенных клеток с каплями лимонно-желтого цвета, ограниченный с двух сторон слоями спавшихся клеток. Многоугольные

клетки эндосперма содержат капли жирного масла с мелкими алейроновыми зернами (рис. 3, 4). Результаты проведенного исследования подтверждаются соответствующими микрофотографиями.

Рисунок 3 - Поперечный срез семени лимонника (х 100)

1 - эпидермис; 2 - каменистые клетки . 3 - тонкостенные клетки; 4 - клетки эндосперма с жирным маслом и алейроновыми зернами; 5 - капли жирного масла

Рисунок 4 - Фрагмент поперечного среза семени лимонника (х 400)

1 - слой тонкостенных клеток

2 - слой спавшихся клеток 3 - капли эфирного масла.

Рисунок 1 - Фрагмент эпидермиса плода лимонника китайского с поверхности (х 400)

1 - секреторные клетки

2 - капля

Рисунок 2 - Фрагмент мякоти плодов лимонника (х 400)

1 - крахмальные зерна

2 - клетки паренхимы масла

2. Фнтохимическое исследование лекарственного растительного сырья и субстанций лимонника китайского

В результате изучения химического состава субстанции «С02-экстракт плодов лимонника» (ООО «Роджер-Медика», г. Новосибирск; ООО «Экс-про», г. Железногорск) выделены 2 индивидуальных соединения, являющиеся доминирующими лигнанами лимонника китайского (табл. 1). Разделение веществ осуществляли с помощью метода колоночной хроматографии. Для элюирования использовали растворители, такие как гексан, хлороформ. В качестве сорбента применяли алюминия оксид (II нейтральный по Брокману). Для контроля отсутствия примесей в получаемых соединениях использовали метод ТСХ в различных системах.

Таблица 1 - Физико-химические константы соединений, выделенных из субстанции «С02-экстракт плодов лимонника»

Название / Структурная формула Физико-химические константы

1. Гамма-схизандрин Ол /-\ ,сн3 HjCO-'^Y I HjCO^Jv yL [ \_/ СНз OCHj СгзНгвОб Т.пл. 117-122 °С (вода) ^пах(ЕЮН), нм 220, 254 пл., 280

2. Схизандрин OCH, "!СОч/1 Д \_сн, HjCO-~^=Y Ч-н i'»'»CH3 AJ 0H HjCO l— OCH, С24Н32О7 аморфное вещество ^(ЕЮН), нм 220, 254 пл., 280

Для установления структуры выделенных веществ использованы данные УФ-, 'Н-ЯМР и масс-спектров. Фрагменты структурных исследований выделенных соединений представлены на рисунках 5 и 6.

'Н-ЯМР-спектр (Сетпиш-200) у-схизандрина ((8 Я, 8'8)-3,3\4,5-тетраметокси-4',5'-метилендиокси-2,2'-циклолигнан) в СБСЬ (200 МГц, м.д.): 8: 6,56 (Н-4), 6,49 (Н-11), 5,93 (0СН20), 3,90 (х 2, ОСН3), 3,83 (ОСН3), 3,55 (ОСНз), 2,1 (2Н, Н-6), 2,55 (2Н, Н-9), 1,85 (2Н, Н-7, Н-8), 0,97 (СН3-7), 0,73 (СНз-8).

П

I *

/

к-

_л

■ц........а.....".т.

Г........Г"".....i......

--

......Г'"

У"!

М4 «I

в.* 1 * п.;

Рисунок 5 -ЯМР-спектр у-схизандрина в СБСЬ

Т

? £

к

I

"У. '"Т.

Рисунок 6 - 'Н-ЯМР-спектр схизандрина в СЭСЬ

'Н-ЯМР-спектр (Gemmini-200) схизандрина [(8S, 8'S)-3,3\4,4',5,5'-гексаметокси-8-гидрокси-2,2'-циклолигнан] в CDCI3 (200 МГц, м.д.): 5: 6,60 (Н-4, Н-11), 3,92 (х 2, ОСНз), 3,9 (х 2, ОСН3), 3,59 (х 2, ОСН3), 2,7 (Н-6а), 2,32 (д, Н-бр), 2,33 (дд, Н-9й), 2,68 (дд, Н-9р), 0,82 и 1,8 (д, м, СН3-С-Н), 1,25 и 1,86 (СНз-С-ОН).

Впервые схизандрин и у-схизандрин выделены из субстанции «СО2-экстракт плодов лимонника», при этом у-схизандрин выделен со степенью чистоты 99,5%, в связи с чем предлагается применять его как стандартный образец. Данный способ получения у-схизандрина имеет ряд преимуществ по сравнению с ранее известными способами (Кочетков Н.К., 1961, Ikeya Y., Taguchi Н. etc., 1979, 1982): использование в качестве элюента гексана позволяет в 7 и 30 раз увеличить выход у-схизандрина из сырья лимонника китайского, а также исключить дорогостоящие и особо токсические растворители (хлороформ, бензол, метанол). По заявляемому способу получения у-схизандрина получена приоритетная справка на изобретение № 2008104442 от 5.02.2008.

3. Совершенствование методов стандартизации плодов и семян лимонника китайского

Согласно вышедшему ОСТу 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств», в проекты ФС «Лимонника плоды» и «Лимонника семена» внесены: раздел «Спецификация лекарственного растительного сырья», иллюстрации в разделе «Микроскопия» фотографий микропрепаратов поперечного среза мякоти плодов и семян, в разделе «Подлинность» и «Количественное определение» введены новые методики качественного и количественного анализа сырья.

3.1. Качественный анализ сырья лимонника китайского

Оценка подлинности сырья проводится с использованием у-схизандрина, рекомендованного в качестве стандартного образца (проект ФС «Гамма-схизандрин - стандартный образец»). При этом идентифицировать у-схизандрин в сырье наряду с ТСХ-анализом (рис. 7) предлагается по характеру УФ-спектра водно-спиртового извлечения, который имеет 3 максимума поглощения при 220, 254 (пл.) и 280 нм, что сопоставимо с таковым спиртового раствора PCO у-схизандрина.

В результате проведенных опытов с различными хроматографически-ми системами предпочтение было отдано системе растворителей хлороформ-этиловый спирт (9:1), позволяющей эффективно разделить и однозначно идентифицировать основные компоненты плодов и семян лимонника, в частности, один из доминирующих лигнанов - у-схизандрин. При облучении УФ-светом (254 нм) данное соединение на хроматограмме обнаруживается в виде доминирующего пятна фиолетового цвета с величиной Rf около 0,7 (рис. 7), не проявляющееся раствором диазобензолсульфокис-лоты. Обнаруживаемое при этом пятно схизандрина имеет величину Rs около 0,75 относительно у-схизандрина.

Кроме того, для ВЭЖХ хроматограммы водно-спиртовых извлечений сырья лимонника китайского (рис. 8) при длине 254 нм характерны 2 доминирующих пика, один из которых соответствует схизандрину (tR = 3' 30"), другой пик - у-схизандрину (tR ~ 9').

0 о о о о

о о о

гл о

Г \ 1 _» о

1 2 3 4 5

Рисунок 7 - ТСХ сырья и препаратов лимонника китайского при просмотре в УФ-свете (254 нм)

1 - извлечение из плодов (70% этиловый спирт); 2 - извлечение из семян (70% этиловый спирт); 3 - лимонника настойка; 4 - лимонника сироп; 5 - спиртовой раствор PCO у-схизандрина

Э 4.ООО «.ООО 8.ООО 10.ООО 12.000 13.833

Рисунок 8 - ВЭЖХ водно-спиртового извлечения плодов лимонника 3.2. Количественный анализ сырья лимонника китайского В основу методики количественного анализа БАС в плодах и семенах лимонника китайского положены прямое спектрофотометрическое определение суммы лигнанов в пересчете на у-схизандрин и ВЭЖХ-анализ определения суммы двух доминирующих лигнанов в пересчете на у-схизандрин.

3.2.1. УФ-спектроскопия (метод 1)

С целью разработки методики количественного определения суммы лигнанов определены оптимальные условия экстракции сырья лимонника: размер частиц не более 3 мм (для плодов) и не более 2 мм (для семян); экс-трагент - 70% этанол; соотношение сырье-экстрагент - 1:30; время экстракции - извлечение на водяной бане при температуре 65-70 °С в течение 60 мин.

Водно-спиртовые извлечения из сырья имеют максимумы поглощения при 220, 254 (пл.) и 280 нм, причем характер УФ-спектра («Specord 40», Analytik Jena) практически совпадает с таковым раствора PCO у-схизандрина (рис. 4). В качестве аналитической выбрана длина волны 280 нм, ввиду того, что при 220 нм имеет место вклад в оптическую плотность других сопутствующих веществ, а длина волны 254 нм - «плечо» кривой. При этом в данной области спектра растворы у-схизандрина имеют прямо-пропорциональную зависимость оптической плотности от концентрации вещества. Анализ серии образцов сырья, проведенных с использованием спектофотометрической методики подтверждает, что нижний предел содержания суммы лигнанов в доброкачественном ЛРС равен 2% (для плодов) и 4% (для семян).

Метрологические характеристики спектрофотометрической методики количественного определения суммы лигнанов в пересчете на у-схизандрин в ЛРС представлены в табл. 2.

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ±3,49% и ±4,86%. Опыты с добавками PCO у-

схизандрина в извлечение из сырья лимонника свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки.

Таблица 2 - Метрологические характеристики методики количественного определения суммы лигнанов в пересчете у-схизандрин в сырье лимонника китайского методом УФ-спектроскопии (Р=95, 1т,вл=2,23, п=11)

Вид сырья X S1 S АХ е

Плоды 3,75 0,0566 0,2379 0,16 ±4,27

Семена 6,40 0,0885 0,2975 0,20 ±3,13

3.2.2. ВЭЖХ-анализ (метод 2)

В ходе разработки методики ВЭЖХ-анализа варьировали условия разделения основных компонентов сырья: тип сорбента, состав элюента, скорость элюирования и длину волны детектирования. Для адаптации метода к условиям заводской лаборатории, оборудованной жидкостными хроматографами отечественного производства, были проведены эксперименты на хроматографе «Милихром-5 (НПО «Научприбор»). При этом были найдены оптимальные условия хроматографирования: колонка - обращено-фазовая КАХ (2 х 80 мм, сталь) с модифицированным октадециленовыми группами силикагелем ("Диасорб С 16", d= 5 мкм); подвижная фаза (элюент) - аце-тонитрил - вода (75:25).

Количественное определение содержания суммы схизандрина и у-схизандрина в экстракте проводили методом абсолютной градуировки (внешнего стандарта - спиртового раствора PCO у-схизандрина), что обеспечило стабильность работы системы пробоотбора и всей хроматографиче-ской ситемы в целом. Содержание суммы схизандрина и у-схизандрина оп-

ределяли по высоте пиков, соответствующих по времени удерживания и спектральному отношению пикам PCO схизандрина и PCO у-схизандрина.

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ±3,73% и ±2,14%.

Для сырья предложены следующие числовые показатели: суммы лиг-нанов в плодах не менее 2%, в семенах - 4%; суммы схизандрина и у-схизандрина в плодах не менее 0,5%, в семенах - 1%.

4. Стандартизация новых препаратов и обоснование целесообразности их использования в медицинской практике

На основании результатов изучения химического состава JIPC, физико-химических свойств выделенных соединений и предложенных подходов к стандартизации сырья лимонника китайского разработаны технологические способы получения новых тонизирующих препаратов, представляющих собой настойку и сироп.

В ходе проведенных исследований были приготовлены образцы настойки семян лимонника различными методами. Использовали методы мацерации, перколяции и модифицированной мацерации. Полученные образцы настоек были проанализированы по разработанной методике УФ-спектроскопии.

Все образцы настоек соответствовали по разработанному числовому показателю качества «содержание суммы лигнанов в пересчете на у-схизандрин». Наибольший выход действующих веществ (2,12 ± 0,06%) наблюдался при использовании метода модифицированной мацерации.

Для лекарственных препаратов предложен числовой показатель суммы лигнанов в настойке лимонника не менее 0,5%, в сиропе - 0,02%.

При разработке подходов к решению проблем стандартизации препаратов «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп» мы придерживались принципа унификации методик анализа в ряду лекарственное растительное сырье-субстанция-лекарственная форма (И.А. Самылина, 1994; 1995). Разработаны методики качественного анализа препаратов «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп», также основанные на определении у-схизандрина методами ТСХ (рис. 7), УФ-спектроскопии и ВЭЖХ. Анализ серии образцов препаратов «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп», проведенных с использованием данной методики, показал, что в качестве нижних пределов содержания суммы лигнанов в настойке плодов и семян (1:5) и сиропе могут быть рекомендованы не менее 0,5%; 0,3% и 0,02% соответственно; содержания схизандрина и у-схизандрина в настойке плодов и настойке семян - не менее 0,2% и 0,3%.

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,44% для настойки плодов, ±3,49% для настойки семян и ±4,86% для сиропа (УФ-спектроскопия); ±4,55% для настойки плодов и ±4,35% для настойки семян (ВЭЖХ). Опыты с добавками PCO у-схизандрина в извлечение из сырья лимонника свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки.

В ходе проведенных фармакологических исследований выявлено, что разработанные PCO у-схизандрин и настойка лимонника обладают нейро-тропной активностью, при этом последняя превосходит промышленный образец данного препарата. Также установлена выраженная антиоксидант-ная активность (модель токсического гепатита - четыреххлористый угле-

род) для разработанной настойки и концентрированного сока лимонника на

основе его плодов, включенного в состав сиропа лимонника.

ВЫВОДЫ

1. В ходе анатомо-морфологических исследований уточнены диагностические признаки плодов и семян лимонника китайского, которые нашли отражение в спецификации на данное лекарственное растительное сырье.

2. Впервые в Российской Федерации в результате изучения химического состава субстанции «С02-экстракт плодов лимонника китайского» [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.] выделены и идентифицированы с помощью УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спеюрометрии лигнаны у-схизандрин и схизандрин.

3. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья, субстанции и препаратов лимонника китайского по у-схизандрину как представителю доминирующей группы БАС - лигнанов.

4. Разработаны методики качественного анализа плодов и семян лимонника китайского, основанные на обнаружении с использованием ТСХ одного из доминирующих веществ растения - у-схизандрина; использовании УФ-спектра и выявлении двух доминирующих пиков, соответствующих схизандрину и у-схизандрину методом ВЭЖХ.

5. Разработаны методики количественного определения суммы лигнанов в плодах и семенах лимонника китайского методом прямой спектрофото-метрии и суммы двух доминирующих лигнанов - схизандрина и у-схизандрина методом ВЭЖХ с использованием PCO у-схизандрина.

6. Определены оптимальные условия выделения у-схизандрина из субстанции «С02-экстракт плодов лимонника китайского»: предложенный

способ позволяет получать данное вещество со степенью частоты 99,5% и дает увеличение выхода целевого продукта в 7 и 30 раз по сравнению с существующими способами.

7. В качестве нижнего предела содержания суммы лигнанов в плодах и семенах лимонника китайского предложен показатель «не менее 2%» и «не менее 4%» соответственно.

8. В качестве нижнего предела содержания суммы двух доминирующих лигнанов в плодах и семенах лимонника китайского предложен показатель «не менее 0,5%» и «не менее 1%» соответственно.

9. В проекты ФСП «Лимонника плоды», «Лимонника семена», «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп» в разделы «Подлинность» и «Количественное определение» введены методики качественного и количественного анализа, в которых предложено использовать PCO у-схизандрин.

10. На основе результатов химических, аналитических, технологических и фармакологических исследований обоснована целесообразность использования в медицинской практике новых тонизирующих лекарственных средств «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп».

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Сатдарова, Ф.Ш. Сравнительное хроматографическое исследование препаратов на основе сырья лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова // Материалы XXIX Самарской обл. студ. науч. конф.: тез. докл. - Самара, 2003. - С. 102.

2. Сатдарова, Ф.Ш. Фитохимическое и фармакологическое исследование препаратов на основе сырья лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова // Материалы 72-й итог. конф. СНО: тез. докл. - Самара; 2004. - С. 180-181.

3. Сатдарова, Ф.Ш. Исследование препаратов на основе сырья лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдаторова / Материалы XXX Самарской обл. студ. науч. конф.: тез. докл. - Самара, 2004. - С. 118-119.

4. Сатдарова, Ф.Ш. Фитохимическое исследование препаратов на основе сырья лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова // Материалы 78-й Всерос. студ. науч. конф.: тез. докл. - Казань, 2004. -Т.2. - С. 59-60.

5. Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источники им-муномодулирующих средств / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, A.B. Жесткое и др. // Экология и здоровье человека: тр. X конгр., Самара, 11-13 окт. 2005 г. - Самара, 2005.-С. 155-158.

6. Сатдарова, Ф.Ш. Исследование препаратов лимонника китайского как природных стимуляторов центральной нервной системы / Ф.Ш. Сатдарова // Материалы XXXI Самарской обл. студ. науч. конф.: тез. докл. - Самара, 2005. - С. 128.

7. Сатдарова, Ф.Ш. Разработка методики определения подлинности сырья лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова // Материалы 73-й итог. конф. СНО: тез. докл. - Самара, 2005. - С. 236.

8. Сатдарова, Ф.Ш. Стандартизация препаратов лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова // Материалы 53-й итог. студ. науч. конф.: тез. докл. - М., 2005. - С. 154-155.

9. Актуальные аспекты создания и стандартизации адаптогенных лекарственных средств на основе сырья лимонника китайского (статья) / Ф.Ш. Сатдарова, В.А. Куркин, Е.В. Авдеева и др. // Экология и здоровье человека: тр. XI Всерос. конгр., Самара, 5-7 дек. 2006 г. - Самара, 2006. - С. 238-240.

10. Сатдарова, Ф.Ш. Стандартизация препаратов лимонника китайского: настоящее и будущее (статья) / Ф.Ш. Сатдарова // Аспирантские чтения: тр. межвуз. конф. молодых ученых. - Самара, 2006. - С. 272-275.

И. Сатдарова, Ф.Ш. Фармакогностическое исследование плодов и семян лимонника китайского с целью создания новых лекарственных препаратов /Ф.Ш. Сатдарова, В.А. Куркин, Е.В. Авдеева // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения: тр. Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию со дня рождения Л.Н. Березнеговской, Томск, 11-12 сент. 2006 г. - Томск, 2006. - С. 294-296.

12. Антиоксидантная активность некоторых фитопрепаратов, содержащих флаво-ноиды и фенилпропаноиды / О.Л. Кулагин, В.А. Куркин, Н.С. Додонов и др. // Фармация. - 2007. - Т. 55, № 2. - С. 30-32.

13. Куркин, В.А. Перспективы использования схизандрина в фармакопейном анализе в качестве государственного стандартного образца / В.А. Куркин, Ф.Ш. Сатдарова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. E.H. Вергейчика, H.H. Кареевой. - Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 357 - 359.

14. Ноотропная активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов / В.А. Куркин, A.B. Дубищев, В.Н. Ежков и др. // Растительные ресурсы. - 2007. - Т. 43, вып. 2. - С. 76-88.

15. Сатдарова, Ф.Ш. Выделение схизандрина как новая веха в стандартизации плодов и семян лимонника китайского и препаратов на их основе / Ф.Ш. Сатдарова // Молодые ученые в медицине: тез. докл. XII Всерос. науч.-практ. конф., Казань, 25-26 апр. 2007. - Казань, 2007. - С. 265.

16. Сатдарова, Ф.Ш. Разработка государственного стандартного образца у-схизандрина из семян лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова, В.А. Куркин //

Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: тез. докл. III Всерос. конф., Барнаул, 23-27 апр. 2007 г. - Барнаул, 2007. - С. 278-281.

17. Сатдарова, Ф.Ш. Современные подходы к стандартизации сырья и разработке новых препаратов лимонника китайского с изучением влияния на вирулентную активность бактерий / Ф.Ш. Сатдарова, П.Н. Золотарев, Н.Р. Шагалиева // Экология и здоровье человека: тр. XII Всерос. конгр., Самара, 13-15 нояб. 2007 г. -Самара, 2007. - Т. 2. - С. 198-203.

18. Сатдарова, Ф.Ш. Фармакогностическое исследование по созданию инновационных препаратов лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова // Аспирантские чтения: тр. межвуз. конф. молодых ученых. - Самара, 2007. - С. 252-259.

19. Антиоксидантная активность некоторых тонизирующих и гепатопротекгорных фитопрепаратов, содержащих флавоноиды и фенилпропаноиды / В.А. Куркин, O.JI. Кулагин, Н.С. Додонов и др. // Растительные ресурсы. - 2008. - Т. 44, вып. 1.-С. 122-129.

20. Куркин, В.А. Современный качественный анализ плодов и семян лимонника китайского, субстанции и препаратов на их основе / В.А. Куркин, Ф.Ш. Сатдарова, Е,В. Авдеева // Фармация из века в век: тр. науч.-практ. конф., Санкт-Петербург, 2008 г. - СПб., 2008. - С. 72-76.

21. Куркин, В.А. Стандартизация плодов и семян лимонника китайского / В.А. Куркин, Ф.Ш. Сатдарова // Фармация. - 2008. - Т. 56, № 6. - С. 11-14.

22. Подходы к стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего флавоноиды и фенилпропаноиды / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браслав-ский и др. // Человек и лекарство: материалы XV рос. нац. конгр.: тез. докл. -М., 2008. - С. 545-546.

23. Поиск путей комплексной переработки сырья лимонника китайского / В.А. Куркин, O.JI. Кулагин, Н.С. Додонов и др. // Процессы, технологии, оборудование и опыт переработки отходов и вторичного сырья: тр. III Всерос. науч.-практ. конф., Самара, 13-15 нояб. 2008 г. - Самара, 2008. - С. 159-163.

24. Сатдарова, Ф.Ш. Лигнаны СОг-экстракта плодов лимонника китайского / Ф.Ш. Сатдарова, В.А. Куркин // Химия растительного сырья. -2008. - №3. - С. 59-63.

Подписано в печать 13.07.2009. Формат 60x84/16. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Бумага офсетная. Печать оперативная. Заказ 378.

Отпечатано в типографии ООО «Офорт». 443070, Самара, ул. Революционная, д. 70, литера П. Тел. 372-06-56, 372-06-57.

Актуальность темы. В настоящее время социально и экономически важным направлением в современной фармации является расширение ассортимента безопасных и эффективных лекарственных средств (ЛС), обладающих тонизирующим и общеукрепляющим действием. В этом отношении особую ценность представляют препараты на основе лекарственных растений (JIP), проявляющих адаптогенную активность. Подобное фармакологическое действие в наибольшей степени среди адаптогенных растений имеет лимонник китайский [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.]. Данный эффект растения обеспечивает группа фенилпропаноидов - лигнаны, обусловливающие также гепатопротекторные свойства его препаратов (Liu G., 1985; Ко K.M. etc., 1995).

Несмотря на многолетний опыт изучения лимонника китайского, в нашей стране не разработан государственный стандартный образец (ГСО) схизандрина, что таким образом оставляет открытым вопрос стандартизации сырья и лекарственных препаратов (ЛП) данного растения. Так, на сегодняшний день в нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье (JIPC) - «Лимонника плоды» (ГФ СССР X изд., ФС 294) и «Лимонника семена» (ГФ СССР XI изд. ФС 80) отсутствуют разделы «Подлинность» и «Количественное определение», а анализ лекарственного препарата «Лимонника семян настойки» (ФС 42-1822-90) проводят по содержанию эфирного масла, сумме жирного и эфирного масел, лимонной кислоте, не являющихся ведущей группой биологически активных соединений (БАС) этого растения с точки зрения трактовки тонизирующего эффекта.

При решении этой проблемы необходимо учитывать и то обстоятельство, что методики качественного и количественного анализа должны соответствовать принципу унификации в ряду: сырье - субстанция -лекарственная форма (Арзамасцев А.П. и др., 2000, Самылина И.А. и др., 1994).

Решение вопроса стандартизации новых ЛС заключается в разработке объективных и унифицированных методов анализа ЛРС и ЛП по ведущей группе БАС (Куркин В.А., 2002; 2007).

Таким образом, представляется актуальным дальнейшее фитохимическое исследование плодов и семян лимонника китайского в рамках разработки отечественного стандартного образца и современных подходов к химическому анализу ЛРС и ЛП на его основе, а также создание новых эффективных тонизирующих средств.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое исследование плодов и семян лимонника китайского и разработка объективных методов стандартизации сырья и лекарственных препаратов растения.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследование анатомо-морфологических признаков плодов и семян лимонника китайского.

2. Сравнительное изучение химического состава сырья, субстанций и ЛП лимонника китайского.

3. Разработка новых подходов к стандартизации сырья и ЛП лимонника китайского с учетом принципа унификации методик в ряду ЛРС -субстанция - лекарственная форма.

4. Разработка методик качественного анализа плодов и семян лимонника с использованием стандартного образца у-схизандрина.

5. Разработка методик количественного анализа сырья лимонника китайского с использованием стандартного образца у-схизандрина.

6. Разработка методик качественного и количественного анализа ЛП «Лимонника семян настойка», «Лимонника плодов настойка», «Лимонника сироп» с использованием стандартного образца у-схизандрина.

7. Оптимизация состава и технологии получения ЛП: «Лимонника семян настойка» и «Лимонника сироп».

8. Изучение в процессе хранения числовых показателей ЛП «Лимонника семян настойка» и «Лимонника сироп».

9. Разработка проектов НД на плоды и семена лимонника, ГСО у-схизандрин и ЛП «Лимонника плодов настойка», «Лимонника семян настойка», «Лимонника сироп».

Научная новизна. Впервые в Российской Федерации в результате изучения химического состава субстанции «ССЬ-экстракт плодов лимонника китайского (ООО «Роджер-Медика», г. Новосибирск, ООО «Экспро», г. Железногорск) выделены и идентифицированы 2 индивидуальных соединения - у-схизандрин и схизандрин, которые охарактеризованы как доминирующие лигнаны в этом растении. Установление структуры и изучение физико-химических свойств выделенных веществ проводилось с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии в сочетании с традиционными методами химического анализа. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов лимонника китайского по ведущей группе БАС — лигнанам, и в частности, по содержанию у-схизандрина.

Обоснована необходимость использования ГСО у-схизандрина в методиках качественного и количественного анализа плодов и семян лимонника китайского и препаратах на его основе.

Разработаны методические и методологические подходы к стандартизации сырья и препаратов лимонника китайского, заключающиеся в оценке суммы лигнанов и суммы двух доминирующих лигнанов - у-схизандрина и схизандрина с использованием ТСХ, спектроскопии и ВЭЖХ.

Научно обоснована целесообразность оптимизации состава и технологии получения ЛС — «Лимонника семян настойки», обладающей более высокой тонизирующей активностью, чем промышленный образец, и «Лимонника сироп».

Впервые в Российской Федерации обнаружена антиоксидантная активность для у-схизандрина, в сравнительном плане — для субстанции «СОг-экстракт лимонника» и настойки лимонника.

Практическая значимость. Выделены и охарактеризованы доминирующие лигнаны плодов и семян лимонника китайского: схизандрин и у-схизандрин (приоритетная справка № 2009103383 от 2.02.2009 г. на изобретение «Способ получения у-схизандрина»). Разработаны методики качественного и количественного анализа плодов и семян и ЛП лимонника китайского. Их подлинность основывается на определении у-схизандрина методами тонкослойной хроматографии (ТСХ), спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методики количественного анализа ЛРС и ЛП лимонника базируются на определении содержания суммы лигнанов методом спектрофотометрии и суммы двух доминирующих лигнанов - схизандрина и у-схизандрина методом ВЭЖХ в пересчете на у-схизандрин. Унифицированы методики качественного и количественного анализа сырья и ЛС лимонника с использованием ТСХ-анализа, спектрофотометрии и ВЭЖХ. Разработаны показатели качества ЛП «Лимонника семян настойка», «Лимонника сироп», в том числе «Содержание суммы лигнанов», «Содержание суммы схизандрина и у-схизандрина», «Сухой остаток», «Концентрация спирта», также установлены сроки их годности. Оформлены проекты фармакопейных статей (ФС) «Лимонника плоды», «Лимонника семена», «у-схизандрин — стандартный образец», фармакопейной статьи предприятия (ФСП) ЛП «Лимонника семян настойка» (на его способ получения получено положительное решение от 7.04.2009 г.), «Лимонника сироп» для представления на экспертизу в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития Министерства здравоохранения и социального развития РФ. Результаты исследований используются в научных исследованиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии и кафедре химии фармацевтического факультета СамГМУ (акты внедрения от 25.12.2008 г.). Результаты микроскопических исследований включены в электронное учебно-методическое пособие «Атлас по ботанике», разработанное на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ.

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты исследований по разработке подходов к стандартизации ЛРС и ЛП лимонника китайского.

2. Методики качественного и количественного анализа ЛРС «Лимонника плоды», «Лимонника семена» и ЛП «Лимонника семян настойка» и «Лимонника сироп» с использованием ГСО у-схизандрина, ТСХ, спектрофотометрии и ВЭЖХ.

3. Результаты исследований по обоснованию показателей качества плодов и семян лимонника китайского, а также лекарственных средств «Лимонника настойка», «Лимонника сироп».

4. Способ получения у-схизандрина из субстанции «СОг-экстракт лимонника».

5. Способ получения лекарственного средства «Лимонника настойка» (положительное решение на изобретение от 7.04.2009 г.).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ:

1. «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме: «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

2. «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» (Томск, 2006 г.); на X, XI и XII Всероссийских конгрессах "Экология и здоровье человека" (Самара, 2005-2007 гг.); на 62-й Межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2007 г.); на XII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007 г.); на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.).

Основное содержание диссертации опубликовано в 24 научных работах, из них 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 176 страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы, 49 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 126 источников, из которых 53 - на иностранных языках.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1.В ходе анатомо-морфологических исследований уточнены диагностические признаки плодов и семян лимонника китайского, которые нашли отражение в спецификации на данное лекарственное растительное сырье.

2. Впервые в Российской Федерации в результате изучения химического состава субстанции «С02-экстракт плодов лимонника китайского» [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.] выделены и идентифицированы с помощью УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии лигнаны у-схизандрин и схизандрин.

3. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья, субстанции и препаратов лимонника китайского по у-схизандрину как представителю доминирующей группы БАС - лигнанов.

4. Разработаны методики качественного анализа плодов и семян лимонника китайского, основанные на обнаружении с использованием ТСХ одного из доминирующих веществ растения - у-схизандрина; использовании УФ-спектра и выявлении двух доминирующих пиков, соответствующих схизандрину и у-схизандрину методом ВЭЖХ.

5. Разработаны методики количественного определения суммы лигнанов в плодах и семенах лимонника китайского методом прямой спектрофотометрии и суммы двух доминирующих лигнанов — схизандрина и у-схизандрина методом ВЭЖХ с использованием PCO у-схизандрина.

6. Определены оптимальные условия выделения у-схизандрина из субстанции «СО?-экстракт плодов лимонника китайского»: предложенный способ позволяет получать данное вещество со степенью частоты 99,5% и дает увеличение выхода целевого продукта в 7 и 30 раз по сравнению с существующими способами.

7. В качестве нижнего предела содержания суммы лигнанов в плодах и семенах лимонника китайского предложен показатель «не менее 2%» и «не менее 4%» соответственно.

8. В качестве нижнего предела содержания суммы двух доминирующих лигнанов в плодах и семенах лимонника китайского предложен показатель «не менее 0,5%» и «не менее 1%» соответственно.

9. В проекты ФСП «Лимонника плоды», «Лимонника семена», «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп» в разделы «Подлинность» и «Количественное определение» введены методики качественного и количественного анализа, в которых предложено использовать PCO у-схизандрин.

10. На основе результатов химических, аналитических, технологических и фармакологических исследований обоснована целесообразность использования в медицинской практике новых тонизирующих лекарственных средств «Лимонника настойка» и «Лимонника сироп».