Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных рододендрона золотистого

ДИССЕРТАЦИЯ
Фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных рододендрона золотистого - диссертация, тема по фармакологии
АВТОРЕФЕРАТ
Фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных рододендрона золотистого - тема автореферата по фармакологии
Потрясай, Ксения Алексеевна Москва 2009 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных рододендрона золотистого

На правах рукописи

003484000

Потрясай Ксения Алексеевна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ РОДОДЕНДРОНА ЗОЛОТИСТОГО

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени 9 [т О Я

кандидата фармацевтических наук

Москва-2009 г.

003484008

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова Росздрава

Научный руководитель:

Доктор фармацевтических наук Маркарян Артем Александрович

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук,

профессор, академик РАЕН Патудин Александр Васильевич

Кандидат фармацевтических

наук Шемерянкина Татьяна Борисовна

Ведущая организация:

Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ (ВНЦ БАВ)

Защита состоится « 21 » 009 г. в 14 часов на

заседании диссертационного согета Д 00бУ070.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН (117216, г. Москва, ул. Грина, д. 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, д. 7

Автореферат разослан « » /Сс&лЗ/иР 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.070.01,

доктор фармацевтических наук

А. И. Громакова

Актуальность темы. Снижение уровня жизни в сочетании с ухудшающейся экологической обстановкой и неблагоприятными социальными факторами отрицательно сказываются на здоровье людей. В этих условиях внедрение лекарственных средств, обладающих мягким щадящим действием и одновременно оказывающих лечебный эффект в малых дозах является актуальной задачей современной фармацевтической науки. Особое значение в решение данной проблемы приобретают гомеопатические лекарственные средства.

Возросший во всем мире интерес к традиционным методам лечения, к которым в России относят и гомеопатию, привел к значительному увеличению доли гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС) на фармацевтическом рынке.

В Российской Федерации отсутствует отечественная гомеопатическая фармакопея, наличие которой унифицировало бы требования к качеству ГомЛС, способствовало бы производству безопасных и действенных лекарственных препаратов.

Исходными субстанциями для изготовления ГомЛС являются настойки гомеопатические матричные (НГМ). Количество зарегистрированных ГомЛС в Российской Федерации насчитывает более 600 наименований комплексных и более 1200 однокомпонентных ГомЛС, при этом зарегистрировано всего около 30 наименований НГМ, что, безусловно, не удовлетворяет существующим потребностям производства.

Для организации выпуска качественных и безопасных ГомЛС своевременным является углубленное изучение исходного лекарственного растительного сырья (ЛРС). В последние годы большое внимание уделяется фитохимическим и фармакологическим исследованиям тех лекарственных растений, которые применяются как в официнальной, так и в народной медицине.

В связи с этим является актуальным фитохимическое изучение лекарственных растений с целью разработки нормативной документации на них (НД) и создание отечественной Гомеопатической фармакопеи.

На данный момент в России зарегистрировано 5 гомеопатических лекарственных средств на основе рододендрона золотистого (Rhododendron aureum Georgi), семейства Вересковые — Ericaceae. Из них 3 монокомпонентных препарата гранулы гомеопатические, капли гомеопатические монокомпонентные, а также гомеопатический многокомпонентный препарат «Метео-плюс» в виде гранул. Помимо выше перечисленного, зарегистрирован также препарат для ветеринарии «Хондратон», выпускаемый в виде таблеток, геля и инъекций. Основными симптомами для принятия гомеопатических препаратов рододендрона золотистого являются:

• Ревматические боли с типичным ухудшением в дождливую погоду и перед изменение погоды.

• Усиление симптомов ночью и в состоянии покоя, улучшение от движения. Боли локализуются глубоко в надкостнице.

• Особые показания: первично-хронический полиартрит мелких суставов (пальцы рук).

• Пузырьковые высыпания.

• Поражения яичек. Эпвдидимит. Невралгия семенных канатиков. Последствия гонореи и сифилиса (нервные поражения).

• Сердечные жалобы. Иногда это связано с ощущением страха и ухудшением при перемене погоды.

• Лицевые невралгии, зубные боли с улучшением после еды и от тепла

В связи с этим считаем целесообразным и своевременным разработку из сухого и свежего сырья рододендрона золотистого настойки матричной гомеопатической и соответствующей нормативной документации.

Кроме того, химический состав побегов рододендрона как лекарственного растительного сырья изучен недостаточно, методики стандартизации отсутствуют. Поэтому, актуальным является фитохимическое изучение рододендрона с использованием современных физико-химических методов, разработка методик стандартизации, создание нормативной документации.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований является сравнительное изучение высушенных и свежих побегов рододендрона золотистого и настоек гомеопатических матричных и разработка методик их стандартизации.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить фитохимический состав свежесобранного и высушенного сырья рододендрона золотистого с использованием физико-химических методов.

2. Изучить морфологические признаки сырья.

3. Разработать методики качественного и количественного анализа биологически активных веществ в рододендроне золотистом.

4. Получить настойку гомеопатическую матричную из высушенного и свежего сырья рододендрона золотистого и провести исследование химического состава полученных настоек. Разработать методики контроля качества настоек гомеопатических матричных.

5. Провести сравнительное фитохимическое исследование рододендрона золотистого и рододендрона Адамса.

6. Разработать и оформить проекты Фармакопейных статей на «Рододендрон золотистый побеги свежие», «Рододендрон золотистый побеги» и настойку гомеопатическую матричную «Rhododendron aureum Dl», «Rhododendron aureum (Rhododendron)».

Научная новизна. Анализ уровня стандартизации сырья и настоек гомеопатических матричных позволил сформулировать необходимость исследования и разработки лекарственного растительного сырья, использования его в гомеопатии и разработку на его основе HTM.

На основании микроскопического анализа побегов рододендрона, установлены диагностически значимые признаки, характерные для сырья.

Установлены качественные характеристики высушенного и свежего сырья рододендрона золотистого.

Разработаны методики количественной оценки в сырье и HTM рододендрона золотистого фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту, тритерпеновых сапонинов в пересчете на урсоловую кислоту методом, моносахаридов в пересчете на глюкозу методом спектрофотометрии (СФМ); качественное и количественное определение арбутина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ); а также качественное определение органических кислот в НГМ рододендрона методом ВЭЖХ.

Установлены закономерности различия содержания БАВ в зависимости от физического состояния растения.

Разработаны унифицированные методики качественного и количественного анализа сырья и НГМ рододендрона золотистого на основе чего предложены критерии подлинности и нормы содержания действующих веществ.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны:

• Проект ФС «Рододендрон золотистый свежие побеги»;

• Проект ФС «Рододендрон золотистый побеги высушенные»;

• Проект ФС «Рододендрона золотистого D1 настойку гомеопатическую

матричную»;

• Проект ФС «Рододендрона золотистого настойку гомеопатическую

матричную».

Основные положения, выносимые на защиту:

• Результаты сравнительного изучения химического состава свежесобранного и высушенного сырья и настоек гомеопатических матричных ан его основе;

• Результаты разработки методик качественного и количественного анализа действующих веществ в ЛРС и НГМ с использованием современных методов физико-химического анализа рододендрона золотистого;

» Разработка проектов фармакопейных статей на J1PC и НГМ в соответствии с учетом современных требований качества на лекарственные средства.

Связь задач и исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований». Per. Номер 01.2.006 06 352.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 184 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), четырех глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 170

источников, в том числе 56 иностранных, 6 приложений. Работа содержит 45 рисунков и 80 таблиц.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, представлена научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании обзора данных литературы представлено ботаническое описание, данные по химическому составу, распространению, применению в народной и научной медицине препаратов рододендрона золотистого. Приведены описания стандартизации и контроля качества гомеопатических лекарственных препаратов, описана ситуация на современном рынке гомеопатической продукции. В разделе «Объекты и методы исследования» приведены сведения об объектах изучения, о методах и приборах, используемых в экспериментах.

Вторая глава посвящена фармакогностическому исследованию побегов рододендрона золотистого, установлению показателей, позволяющих идентифицировать данное сырье и контролировать его качество.

В третьей главе представлены данные анализа состава биологически активных веществ свежих и высушенных побегов рододендрона золотистого с использованием современных физико-химических методов.

В четвертой главе изложены результаты исследований настоек гомеопатических матричных из свежего и высушенного сырья рододендрона золотистого (методы получения, стандартизации и контроля качества).

Пятая глава содержит результаты разработки показателей качества сырья и настоек гомеопатических матричных рододендрона золотистого, а также методика анализа гомеопатических разведений НГМ Rhododendron aureum.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили образцы опытных партий свежих и высушенных побегов рододендрона золотистого и рододендрона Адамса, заготовленные в фазу цветения (июль-август) собранные в Бурятии (Тункинский район) в 2007-2009 году.

Отбор проб и анализ лекарственного растительного сырья (ЛРС) проводили по методикам ГФ XI и ОФС 42-0011-03 «Правила приемки и отбора проб».

Исследование морфологических признаков сырья и приготовление микропрепаратов осуществляли в соответствии с требованиями статьи «Побеги» (ГФ XI, вып. 1, с. 282).

Изучение анатомических признаков цельного сырья проводили в соответствии с указаниями статьи «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» (ГФ XI, вып. 1, с. 277).

Приготовление реактивов, используемых в экспериментальной части работы осуществляли согласно ГФ XII, часть 1, С. 220; для экстракции БАВ и приготовления хроматографических систем использовали растворители марки «ч» и «х.ч».

Объектами изучения являлись: лекарственное растительное сырье (побеги свежие и высушенные), настойки гомеопатические матричные из свежего и высушенного сырья рододендрона золотистого.

Для хроматографии в тонком слое сорбента использовали пластинки Kieselgel 40 F254; E.Merck, Darmstadt, Германия, размером 15х 15 см; Сорбфил, РФ. Хроматографирование выполняли при температуре 19-23°С в герметически закрытых вертикальных стеклянных камерах. Нанесение исследуемых растворов на хроматографические пластинки осуществляли при помощи шприца Hamilton (10 мкл).

Для тонкослойной хроматографии использовали следующие системы растворителей: муравьиная кислота-вода-этилацетат (6:6:88); этилацетат-хлороформ-кислота уксусная ледяная (15:83:2); толуол-этилацетат (93:2); вода-метанол-уксусная кислота конц.-хлористый этилен (10:15:25:50); хлороформ-метанол-вода (63:23:3).

Спектры поглощения снимали на спектрофотометре «Gelios» (США) в кювете с толщиной поглощающего слоя жидкости 10 мм.

ВЭЖХ-анализ БАВ проводили на хроматографе «GILSTON» (Франция) с металлической колонкой размером 4,6x250 мм Kromasil С 18, размер частиц 5 микрон, а также с металлической колонкой ALTECH ОА-ЮОО Organic Acids размером 6.5x300 мм, с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром для Windows».

Для качественного определения БАВ методом ТСХ были использованы достоверные образцы и стандартные образцы: арбутина (Fluka, каталожный №10960, СО ВИЛАР ТУ 9363-133-048668-44-01), рутина (ГСО ФС 42-2508-87), галловой кислоты (Fluka, каталожный №3378), гиперозида (ГСО ФС 42-010603).

Фармакологические и токсикологические исследования (острая токсичность) сухого экстракта и настоек рододендрона золотистого проводили в отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ).

Исследования анатомического строения сырья рододендрона золотистого методом микроскопии проведено совместно с кафедрой фармакогнозии Иркутского государственного медицинского университета (ИГМУ).

1. Фармакогностическое изучение сырья рододендрона золотистого и разработка методов контроля его качества Товароведческая характеристика сырья Проведена товароведческая оценка свежего и высушенного сырья рододендрона золотистого. Установлены следующие характеристики: внешние признаки свежего сырья - олиственные побеги длиной 1.5-2 см. Стебли 2 - 3 мм толщиной, с гладкой, темно-коричневой корой. Листья 2-9 см длинной, 0,5-3,5 см шириной, на толстых, коротких, до 1 см длинной, черешках; жесткие, цельнокрайние, с завернутыми вниз краями, со слегка заостренной верхушкой и клиновидным основанием. Цветки по 3-5 собраны на верхушке побегов в зонтиковидное соцветие. С верхней стороны листья темно-зеленые, блестящие; с нижней - матовые, буровато-зеленые с перистым мелкоячеистым

жилкованием. Запах цветков сильный, стеблей - слабый, специфический. Вкус водного извлечения вяжущий, горький.

Высушенное цельное сырье. Смесь олиственных побегов, листьев, цвеггков. Листья очередные на толстых черешках длиной до 1 см, кожистые продолговато-овальные 2-9 см длиной и 0,5-3,5 см шириной, цельнокрайные с завёрнутыми вниз краями. Сверху тёмно-зелёные, блестящие, снизу буровато-зелёные, матовые. Побеги одревесневшие, зелёного цвета. Запах слабый специфичный. Вкус вяжущий, горький.

Высушенное измельченное сырье. Кусочки листьев, стеблей, цветков, проходящие сквозь сито с отверстиями 7 мм. Цвет стеблей светло-зеленый, цвет фрагментов цветков коричневатый и светло-желтый. Запах слабый специфичный. Вкус вяжущий, горький.

В ходе исследования определяли диагностические признаки ЛРС, а также нормативы таких числовых показателей, как влажность, измельченность, содержание минеральной и органической примеси, золы общей, золы, не растворимой в 10 % хлористоводородной кислоте.

Исследование микроскопических признаков сырья

Для определения подлинности сырья были установлены его микродиагностические признаки. Для микроскопического анализа готовят препараты с поверхности листьев, стеблей, почечных чешуек рододендрона золотистого (ГФ XI изд.).

Верхний эпидермис листа двухслойный, наружный ряд клеток более мелкий, покрыт толстым слоем кутикулы. Клетки нижнего эпидермиса однослойные, покрыты более тонким слоем кутикулы. К верхнему эпидермису примыкает палисадная ткань, состоящая из 4-5 рядов клеток. Губчатая паренхима с крупными межклеточными полостями, где видны остатки тонких клеточных оболочек.

В клетках палисадной, губчатой ткани, в межклеточных полостях встречаются друзы и одиночные призматические кристаллы оксалата кальция. Проводящий пучок центральной жилки в нижней части окружен волокнами склеренхимы, губчатая паренхима с воздухоносными полостями, с нижней стороны жилки над эпидермой лежат два слоя уголковой колленхимы. В поверхностных препаратах клетки верхнего эпидермиса многоугольные с почти прямыми стенками; клетки нижней эпидермы имеют несколько извилистые контуры. Вдоль жилки на верхней и нижней стороне имеются простые одноклеточные волоски, характерные для вересковых. Кроме того, на верхнем эпидермисе встречаются группы клеток с пигментным содержимым, вокруг которых эпидерма образует розетку, которые представляют собой остатки кустистых волосков, покрывающих рыжеватым опушением молодые листья. На нижнем эпидермисе имеются железистые образования из 3-7 клеток с секретом. Черешок листа. На поперечном срезе черешок листа овальный с ушками. Под эпидермисом располагается уголковая 2-3 рядная колленхима. В центре пучка ближе к верхней стороне расположен крупный подковообразный проводящий пучок, состоящий из механической обкладки, флоэмы и ксилемы. В ушках пучка наблюдается по два некрупных проводящих пучка без механической

обкладки. В основной паренхиме встречаются многочисленные воздухоносные полости и редкие каменистые клетки.

Стебель. В течение первых двух лет стебель остается зеленым и только на третьем году эпидерма заменяется пробковой тканью. Эпидермис стебля покрыт толстой волнистой кутикулой, на эпидермисе имеются простые одноклеточные волоски. Под эпидермисом лежит трехслойная уголковая колленхима. Клетки коровой паренхимы изодиаметричные и вытянутые, расположены в цепочки и образуют крупные межклеточные полости. За паренхимой расположен прерывистый склеренхимный пояс, состоящий из 2-3 рядов лубяных волокон. Камбий хорошо заметен. Ксилема представлена сосудами и трахеидами, сердцевинные лучи 1-2-х рядные. Сердцевина стебля широкая, рыхлая с межклеточными полостями. Клеточные стенки одревесневшие, пористые. В межклеточных полостях встречаются друзы. Почечная чешуйка. На поперечном срезе кроющей чешуи цветочной почки под эпидермисом располагается колленхима, ассимиляционная ткань имеет воздухоносные полости, в паренхиме разбросано много каменистых клеток разветвленной формы с одревесневшими стенками.

Эпидермис наружной стороны чешуи усажен крупными грушевидными железками со смолистым содержимым. Многоклеточная головка железки сидит на короткой многоклеточной ножке. Здесь также встречаются простые одноклеточные волоски. По краям чешуи располагаются редкие кустиковые волоски и волоски с многоклеточной ножкой, от которой отходят узкие, длинные клетки с темно-бурым пигментом.

Рис. 1. - Верхний эпидермис листа рододендрона

Рис.2. - Нижний эпидермис листа рододендрона

Рис. 3. - Стебель первого года

Рис. 4. -Препарат с поверхности кроющ чешуи цветочной почки

2.Фитохимическое изучение сырья рододендрона золотистого

Установление подлинности и разработка методики количественного определения фенольных соединений в сырье

Сырье рододендрона золотистого (Rhododendron aureum Georgi) находит разнообразное применение в медицинской практике. Биологическая активность растения зависит от действия комплекса органических и неорганических соединений, содержащихся в них. В этом комплексе наиболее важная роль принадлежит фенольным соединениям (флавоноиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты), тритерпеновым сапонинам, полисахаридами, и др.

Для установления подлинности побегов рододендрона золотистого, кроме макроскопического и микроскопического методов, нами предложено использовать тесты, основанные на качественных реакциях и методике ТСХ.

На основании данных химического изучения состава БАВ рододендрона золотистого, в разделе «Качественные реакции» проекта НД предусмотрено проведение общеизвестных качественных реакций на наличие: танинов (темно-зелёное окрашивание при добавлении 5% раствора железа окисного хлорида), арбутина (реакция с натрия карбонатом и дихлорхинонахлоримидом в спирте этиловом - синее окрашивание), флавоноидов (красное окрашивание при реакции с 95%спиртом этиловым, порошком магния и концентрированной хлористоводородной кислотой), свободных Сахаров с реактивом Фелинга j (должно наблюдаться появление осадка кирпично-красного цвета) и методики ТСХ для определения наличия фенольных соединений, в том числе арбутина и , рододендрина.

Согласно данным литературы и проведенному фитохимическому исследованию преобладающей группой БАВ сырья рододендрона золотистого являются фенольные соединения. Качественный анализ фенольных соединений

проводили методом ВЭЖХ. В результате было идентифицировано 11 соединений (арбутин, галловая кислота, феруловая кислота, катехин, эпикатехин, рутин, гиперозид, лютеолин, кверцетин, кемпферол, апигенин). Количественное определение суммы фенольных соединений основано на спектрофотометрировании водно-спиртового извлечения из сырья рододендрона золотистого. Для разработки методики количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту подобраны условия анализа (кратность экстракции, выбор экстрагента, температура, степень измельченности). Полученные данные свидетельствуют о том, что максимальный уровень суммы фенольных соединений в извлечении наблюдается при экстрагировании сухого сырья, предварительно измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито с размером 2мм, 70% спиртом этиловым, или грубоизмельченного свежего сырья 90% спиртом этиловым на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч при соотношении сырья и экстрагента 1:10.

\Vavelenflth (пт)

Рис. 5 - Спектры фенольных соединений: 1 - извлечение из свежего сырья;

2 - кислоты галловой СО; 3 - плацебо

Максимум поглощения исследуемого раствора из сухого и свежего сырья рододендрона золотистого находится в УФ-области спектра при длине волны 271± 5 нм , 286± 5 нм, свежего сырья при длине волны 272±5 нм ,285±5 нм. Эти данные позволяют использовать в качестве аналитической длину волны 280 нм.

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту должно быть не менее 5,0%.

Wavelength (nm)

Рис. 6. - Спектры фенольных соединений: 1 - извлечение из высушенного сырья; 2 - кислоты галловой СО; 3 — плацебо

Воспроизводимость методики количественного определения суммы фенольных соединений установлена на примере анализа одного образца сырья в 5 независимых повторностях.

Таблица 1

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенольных соединений в свежем сырье рододендрона золотистого

п f хср S2 sx Р,% t(P,f) ДХср вер, %

5 4 5,564 0,06203 0,1114 95 2,78 0,3096 ±5,56

Метрологические характеристики методики (табл. 1 и 2) свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения с 95 % вероятностью составляет ±5,16% для сухого и +5,56% для свежего сырья.

Таблица 2

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенольных соединений в высушенном сырье рододендрона

золотистого

п f Хер S" sx Р,% t(P,f) ДХеР Sep, %

5 4 5,548 0,05252 0,1025 95 2,78 0,2849 ±5,16

Отсутствие систематической ошибки методики подтверждено в опытах с добавками галловой кислоты непосредственно к навеске сырья перед экстракцией (табл. 3).

Таблица 3

Результаты опытов с добавками кислоты галловой к навеске свежего сырья

рододенд юна золотистого

Взято в Добавлено Должно Найдено Ошибка

сырье, г к-ты галл- быть (г) (г) Абсолютная Относительная

ловой (г) (г) (%)

0,05616 0,01404 0,07020 0,07029 + 0,00009 + 1,280

0,05616 0,02808 0,08424 0,08418 - 0,00006 -0,710

0,05616 0,04212 0,09828 0,09840 + 0,00012 + 1,22

0,05616 0,05616 0,11232 0,11225 -0,00007 - 0,622

Методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту в свежих и высушенных побегах рододендрона золотистого включена в разработанный проект ФС на сырье. Отчет по валидации представлен.

Таблица 4

Результаты опытов с добавками кислоты галловой к навеске высушенного __сырья рододендрона золотистого_

Взято в Добавлено Должно Найдено Ошибка

сырье, г к-ты галл- быть (г) (г) Абсолютная Относительная

ловой (г) (г) (%)

0,0564 0,0141 0,0705 0,0712 + 0,0007 + 0,993

0,0564 0,0282 0,0846 0,0841 - 0,0005 -0,591

0,0564 0,0423 0,0987 0,0996 + 0,0009 + 0,911

0,0564 0,0564 0,1128 0,1124 - 0,0004 -0,655

Определение арбутина в сырье рододендрона золотистого

Для обнаружения и количественного определения арбутина в сухом и свежем сырье рододендрона золотистого нами был использован метод ВЭЖХ.

Для разработки методики количественного определения арбутина в сырье были подобраны оптимальные условия пробоподготовки.

Полученные данные свидетельствуют о том, что максимальный уровень арбутина в извлечении наблюдается при экстрагировании сырья рододендрона золотистого 70% спиртом этиловым на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч при соотношении сырья и экстрагента 1:10.

Содержание арбутина в свежем и высушенном сырье рододендрона золотистого должно быть не менее 1,0 %.

Относительная ошибка методики определения содержания арбутина с 95% вероятностью составляет ±6,39% для свежего сырья и ±5,88% для высушенного сырья.

mV

О 1,25 2,5 3,75 5,0 6,25 7,5 8,75 10 min

Рис. 7 Хроматограмма спиртового извлечения из высушенного сырья

рододендрона методом ВЭЖХ: арбутина РСО-1, кислоты галловой РСО-2.

2

LL

—I—I—I—I—I—I—I—I— О 1,25 2,5 3,75 5,0 6 ^5 7,5 8,75 1 0 min

Рис, 8 Хроматограмма спиртового извлечения из свежего сырья рододендрона методом ВЭЖХ: арбутина РСО-1, кислоты галловой РСО-2.

Определение тритерпеновых сапонинов в сырье рододендрона золотистого Наряду с фенольными соединениями фармакологическое действие рододендрона золотистого обуславливает наличие соединений тритерпенового ряда. В связи с этим была разработана методика количественного определения суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту методом спектрофотометрии. Методика основана на взаимодействии урсоловой кислоты с серной кислотой концентрированной и получении окрашенного комплекса. Время устойчивости комплекса и время гидролиза 60 минут, при однократной экстракции, длина волны 311 нм.

Содержание суммы тритерпеновых сапонинов в пересчете на урсоловую кислоту составило 1,25 % для свежего сырья и 0,8 % для высушенного сырья рододендрона золотистого.

Таблица 5

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту в

сухом сырье рододендрона золотистого

п f Хер Sx Р,% t(P,f) ДХср £ср, %

5 4 1,24 0,00210 0,00205 95 2,78 0,0570 ±4,59

Относительная ошибка методики количественного определения суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту с 95% вероятностью составляет ±4,59% для сухого сырья и +5,74% для свежего сырья.

Таблица 6

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту в свежем сырье рододендрона золотистого

п Хср Б2 Р,% ДХср гср, %

5 4 0,804 0,00138 0,0166 95 2,78 0,0462 ±5,74

Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были проведены эксперименты с добавками урсоловой кислоты к навеске сырья рододендрона золотистого (Табл.7).

Таблица 7

Результаты опытов с добавками урсоловой кислоты к сырью рододендрона

золотистого

Взято в Добавлено Должно Найдено Ошибка

сырье, Урсоловой быть (г) (Г) Абсолютная Относительная

(г) кислоты, (г) (г) (%)

0,0124 0,0031 0,0155 0,0152 - 0,0003 -1,50

0,0124 0,0062 0,0186 0,0182 - 0,0004 - 1,86

0,0124 0,0093 0,0217 0,0220 + 0,0003 + 1,28

0,0124 0,0124 0,0248 0,0240 + 0,0008 + 1,18

Определение Сахаров в сырье рододендрона золотистого Предлагаемый нами для количественной оценки Сахаров в сырье рододендрона метод спектрофотометрии предусматривает экстракцию полисахаридного комплекса из сырья водой, его осаждение спиртом этиловым, гидролиз, образование окрашенного комплекса продуктов гидролиза (моносахаридов) с пикриновой кислотой в щелочной среде, последующее измерение оптической плотности. Полученный окрашенный комплекс имеет максимум поглощения при длине волны 466+2 нм, как и комплекс глюкозы с пикриновой кислотой (рис. 9 и 10).

а

Рис. 9- Спектры поглощения комплекса моносахаридов из высушенного сырья рододендрона золотистого с пикриновой кислотой (1) и комплекса глюкозы СО (2) с пикриновой кислотой в щелочной среде

Предложено использовать в качестве аналитической длину волны 466 нм и проводить определение суммы моносахаридов после гидролиза полисахаридов в пересчете на глюкозу.

В ходе разработки методики были подобраны следующие параметры: измельченность сырья, время экстракции, время гидролиза, время образования и устойчивости комплекса. В результате было установлено, что оптимальным является использование сырья, измельченного до размера частиц проходящих сквозь сито диаметром отверстий 2 мм (для высушенного сырья)или грубоизмельченного (для свежего сырья), при однократной экстаркции в течение 60 минут при соотношении сырья/экстрагента 1:100; время гидролиза и время устойчивости комплекса 60 минут.

А

Рис. 10- Спектры поглощения комплекса моносахаридов из свежего сырья рододендрона золотистого с пикриновой кислотой (1) и комплекса глюкозы СО (2) с пикриновой кислотой в щелочной среде

Согласно полученным данным продукт взаимодействия извлечения из сырья рододендрона с пикриновой кислотой имеет спектральную кривую идентичную спектральной кривой комплекса глюкозы с пикриновой кислотой.

Содержание моносахаридов в сырье рододендрона должно составлять не менее 2,8% для свежего сырья и не менее 2,3% - для высушенного сырья.

Относительная ошибка методики количественного определения суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу с 95% вероятностью составляет ±3,81% для свежего сырья и +3,86% для сухого сырья..

Таблица 8

Результаты опытов с добавками глюкозы к сырью рододендрона золотистого

Взято в сырье, г Добавлено глюкозы, г Должно быть (г) Найдено (г) Ошибка

Абсолютная (г) Относительная (%)

0,02368 0,005920 0,02960 0,02971 + 0,00011 + 0,372

0,02368 0,01184 0,03552 0,03558 + 0,00006 + 0,169

0,02368 0,01776 0,04144 0,04132 -0,00012 -0,290

0,02368 0,02368 0,04736 0,04728 - 0,00008 -0,169

Изучение содержания БАВ в высушенном и свежем сырье рододендрона

Адамса

С помощью разработанных методик нами проведено сравнительное фитохимическое изучение высушенных и свежих побегов рододендрона Адамса. Оценено содержание фенольных соединений, тритерпеновых сапонинов и моносахаридов.

Можно предположить, что возможно при дальнейшем углубленном изучении рододендрона Адамса, он может служить перспективным источником для создания ГомЛС

Таблица 9

Количественное определение БАВ в побегах высушенных и свежих _ рододендрона Адамса__

Количественное определение Свежее сырье рододендрона Адамса Высушенное сырье рододендрона Адамса

Суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту 2,47% 2,17%

Суммы тритерпеновых сапонинов в пересчете на урсоловую кислоту 1,40% 1,15%

Суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу 3,60% 3,53%

Исследование динамики накопления БАВ в зависимости от стадии вегетации

Поскольку накопление БАВ значительно варьирует в процессе онтогенеза растений, нами изучено содержание суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую, суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту и суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу в сырье в зависимости от фазы вегетации рододендрона золотистого (табл. 10)

Таблица 10

Результаты количественного определения БАВ в побегах рододендрона

золотистого в зависимости от фазы вегетации растения_

№ Фаза вегетации Содержание БАВ

п/п Сумма фенольных соединений, % Сумма тритерпеновых соединений, % Сумма моносахаридов, %

1 Появление побега 4,86 0,75 2Д

2 Начало бутонизации 5,00 0,8 2,3

3 Цветение 5,56 1,2 2,8

4 Конец цветения 5,38 0,75 2,4

5 Плодоношение 5,29 0,70 2,3

Полученные результаты свидетельствуют о том, что наибольшее количество БАВ накапливается в фазу цветения, в связи, с чем заготовку побегов рододендрона целесообразно вести в конце июля - начале августа.

Изучение стабильности в процессе хранения Изучение стабильности рододендрона золотистого при хранении в рекомендуемой упаковке позволяет установить срок годности этого сырья 2 года. По истечении указанного срока годности по всем показателям качества лекарственное растительное сырье отвечало требованиям проекта НД. Свежесобранное сырье подлежит переработке не позднее чем в течение 48 ч с момента заготовки. В случае необходимости хранения сырья в течение нескольких часов (но не более 48), оно должно быть помещено в защищенное от света месте при температуре от 5 до 10 °С.

Разработка нормативной документации на сырье На основании проведенных исследований разработаны и оформлены фармакопейные статьи (ФС) на новый вид лекарственного сырья «Рододендрона золотистого побеги свежие» и «Рододендрона золотистого побеги». Согласно ФС контроль качества ЛРС осуществляется по следующим показателям: внешние признаки, подлинность (микроскопия, качественные реакции), числовые показатели (содержание фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую; влажность; зола общая; зола, нерастворимая в 10 % растворе кислоты хлористоводородной; другие части растения, в т.ч. отделенные при анализе; частицы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 0,18 мм и 5 мм; органическая и минеральная примеси, побуревших и почерневших частей растения), микробиологическая чистота, радиологическая чистота, упаковка, маркировка.

3. Фитохимическое исследование НГМ Rhododendron Изучение качественного состава БАВ НГМ Нами проведен качественный анализ БАВ в НГМ из свежего и высушенного сырья в соответствии с методиками, используемыми при анализе сырья.

В НГМ обнаружены фенольные соединения, тритерпеновые сапонины, полисахариды по методикам реакций, аналогичным таковым на сырье. Химическое изучение НГМ показало, что состав БАВ настоек близок таковому в нативном сырье.

Установление показателей подлинности и разработка методики количественного определения БАВ в НГМ Для установления подлинности НГМ предусмотрено проведение качественных реакций аналогичных реакциям на БАВ в сырье, а также ТСХ-анализ со стандартными образцами. В ходе исследований подобранны условия анализа фенольных соединений и разработана методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчёте на галловую кислоту методом спектрофотометрии.

Таблица 11

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фснольных соединений в HTM из свежего сырья рододендрона

золотистого

п f Xq, S2 Sx P,% t(P,f) дх^ Ecp, %

5 4 1,114 0,00239 0,0,216 95 2,78 0,0060 ±1,90

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую должно быть не менее 1,0% для НГМ из свежего сырья и не менее 0,80% для НГМ из высушенного сырья.

Таблица 12

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенольных соединений в НГМ из высушенного сырья рододендрона золотистого

n f Xcp SJ Sx P,% t(P,f) ДХср вер, %

5 4 0,859 0,0000417 0,00285 95 2,78 0,00793 ±2,17

Относительная ошибка методики не превышает ±2,17 % для НГМ из высушенного сырья и +1,90%цля НГМ из свежего сырья (табл. 11-12).

Таблица 13

Результаты опытов с добавками кислоты галловой к НГМ из свежего сырья

Взято в НГМ, г Добавлено к-ты галл-ловой (г) Должно быть (г) Найдено (г) Ошибка

Абсолютная (г) Относительная (%)

0,01114 0,002785 0,01393 0,01398 + 0,00005 + 0,359

0,01114 0,00557 0,01671 0,01663 -0,00008 -0,479

0,01114 0,008355 0,01950 0,01955 + 0,00005 + 0,256

0,01114 0,01114 0,02228 0,02220 -0,00008 -0,359

Количественное определение арбутина, суммы тритерепновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту, суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу проводили по методикам аналогичным таковым на сырье.

Норма содержания арбутина установлена не менее 0,25 %. Относительная ошибка определения не превышает +2,32% для НГМ из сухого сырья и +1,90% для НГМ из свежего сырья.

Установлены нормы суммы тритерпеновых соединений не менее 1,05%для НГМ из свежего сырья и 0,65% для НГМ из высушенного сырья. Относительные ошибки определения не превышают +2,18% НГМ из сухого сырья и +2,11 % для НГМ из свежего сырья.

Содержание суммы полисахаридов должно быть не менее 2,0% для НГМ из высушенного и свежего сырья. Относительные ошибки определения не превышают +1,42% НГМ из сухого сырья и +2,78% для НГМ из свежего сырья.

Дана качественная характеристика органических кислот с использованием метода ВЭЖХ. Идентифицировано 7 кислот: янтарная, щавелевая, гидроксилимонная, лимоновая, винная, маликовая и фумаровая.

Установлен срок годности НГМ - 2 года.

На основании полученных данных разработан и оформлен проект фармакопейной статьи (ФС) «Rhododendron aureum (Rhododendron)» и «Rhododendron aureum (Rhododendron) Dl», который включает следующие разделы: описание, подлинность, сухой остаток, спирт, тяжелые металлы, микробиологическая чистота, количественное определение суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту, упаковка, маркировка, хранение, срок годности.

Разработана методика анализа гомеопатических разведений. Результаты анализа гомеопатических настоек рододендрона свидетельствуют о том, что метод ТСХ позволяет объективно оценивать наличие биологически активных веществ до D2 разведения включительно.

Фармакологические исследования сухого и жидкого экстракта рододендрона золотистого, проведенные в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН, показали его выраженную антимикробное и противовоспалительную активность. По данным токсикологического исследования (острая токсичность) жидкий и сухой экстракт согласно действующей классификации отнесены к малотоксичным веществам.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведен товароведческий анализ JIPC рододендрона, установлены диагностически значимые микроскопические признаки сырья «Побеги рододендрона высушенные» и «Побеги рододендрона», определены числовые показатели для JIPC рододендрона.

2. С помощью физико-химических методов изучен в сравнительном аспекте фенольный, полисахаридный, тритерпеновый состав JIPC видов рододендрона, как свежего, так и высушенного сырья, и НГМ, изготовленных из него.

3. Проведено исследование качественного состава фенольных соединений НГМ и сырья рододендрона золотистого с помощью метода ВЭЖХ. Проведен ТСХ анализ. Количественное определение проводили методом спектрофотометрии, в пересчете на кислоту галловую. Разработаны хроматографические условия и условия пробоподготовки.

4. Разработаны методики количественного определения суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту и моносахаридов в пересчете на глюкозу в НГМ рододендрона методом спектрофотометрии.

5. Проведено исследование состава органических кислот в НГМ рододендрона.

6. Показано, что сырье рододендрона золотистого и рододендрона Адамса кодно по составу БАВ, следовательно, оно также может быть использовано ля изготовления НГМ и других официнальных лекарственных форм.

7. В доклиническом изучении наработанных нами опытных партий сухой кстракт и жидкий экстракт рододендрона показали антимикробную и ротивовоспалительную активность; по данным токсикологического сследования отнесен к малотоксичным веществам согласно действующей лассификации.

8. Установлен срок годности ЛРС рододендрона - 2 года, НГМ - 2 года, [о результатам исследования подготовлены проекты ФС на сырье -Рододендрон золотистый побеги» и «Рододендрон золотистый побеги свежие»

настойки гомеопатические матричные «Rhododendron aureum-» и Rhododendron aureum Dh>.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Потрясай К.А., Маркарян А.А, Даргаева Т.Д., Сокольская Т.А. Рододендрон олотистый - перспективный источник создания лекарственных средств // ¡опросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - М., 2009. -f2 6.-C.7-ll.

. Потрясай К.А., Маркарян А.А., Даргаева Т.Д. Идентификация аминокислот в бразцах настойки матричной гомеопатической рододендрон // Научные труды [еждународного форума «Интегративная медицина-2009».-М., 2009.- С.226-27.

. Потрясай К.А., Копнии А.А. Определение фенольных соединений методом 1ЭЖХ в сырье рододендрона золотистого (Rhododendron aureum G.) И Тезисы ;окладов VII Международного Симпозиума по фенольным соединениям. - М., .009

. Потрясай К.А., Копнин АЛ., Даргаева Т.Д., Маркарян А.А. Определение >енольных соединений методом ВЭЖХ в настойке гомеопатической матричной рододендрона золотистого (Rhododendron aureum G.) II Тезисы [окладов VII Международного Симпозиума по фенольным соединениям. - М., 009

'. Потрясай К.А., Копнин А.А., Даргаева Т.Д, Маркарян А.А., Сокольская Т.А.. Соличественное определение арбутина в сырье рододендрона золотистого Rhododendron aureum Georgi) методом ВЭЖХ // Сибирский медицинский курнал.- И., 2009.- С.25-28.

¡. Потрясай К.А., Маркарян А.А., Даргаева Т.Д. Идентификация аминокислот в сухом сырье рододендрона золотистого // Тезисы докладов Международной студенческой научной конференции «Клинические и теоретические аспекты современной медицины». - М., 2009. - С.114.

7. Копнин А.А., Потрясай К.А., Даргаева Т.Д., Сокольская Т.А. Исследования по химическому составу и стандартизации сырья и настоек гомеопатических матричных Рододендрона золотистого. Тезисы докладов X Международный конгресс «Здоровье и образование в XXI веке. Инновационные технологии в биологии и медицине»,1-5 декабря 2009 г., спецвыпуск «Вестника РУДН»

8. Потрясай К.А., Копнин А.А. Исследования по стандартизации свежего и высушенного сырья рододендрона золотистого методом ВЭЖХ. Тезисы докладов I Всероссийской конференции «Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции», МГУ, 1-4 декабря 2009 г.

Подписано в печать:

02.11.2009

Заказ № 2885 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

 
 

Оглавление диссертации Потрясай, Ксения Алексеевна :: 2009 :: Москва

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СВЕДЕНИЯ О РАСТЕНИЯХ РОДА РОДОДЕНДРОН (БОТАНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ, ПРИМЕНЕНИЕ, СТАНДАРТИЗАЦИЯ)

1.1 Ботаническая характеристика рододендрона золотистого

1.2 Химический состав различных видов рододендронов

1.3 Применение рододендрона золотистого в медицине

1.4 Стандартизация и контроль качества сырья и препаратов 21 рододендрона золотистого

1.5 Стандартизация и контроль качества гомеопатических лекарственных 29 средств

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. ПОЯСНЕНИЕ К ЭКСПЕРИМЕНТУ

ГЛАВА II. ТОВАРОВЕДЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННОГО 45 РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ РОДОДЕНДРОНА

2.1 Исследование морфологических признаков сырья

2.2 Исследование микроскопических признаков сырья

2.3 Установление номенклатуры и норм числовых показателей

2.3.1 Определение влажности сырья

2.3.2 Определение содержания золы общей и золы, нерастворимой в 53 растворе 10 % хлористоводородной кислоты

2.3.3 Определение содержания допустимых примесей

2.3.4 Определение измельченности сырья

2.3.5 Изучение радиологической и микробиологической чистоты сырья 57 2.4. Изучение стабильности сырья в процессе хранения 60 2.5 Разработка нормативной документации на сырье 63 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ II

ГЛАВА III. ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛРС РОДОДЕНДРОНА 65 3.1 Разработка критериев подлинности ЛРС рододендрона

3.2 Разработка методик качественного и количественного определения 70 БАВ

3.2.1 Методики качественного и количественного определения 71 фенольных соединений в сырье рододендрона

3.2.1.1 Качественное определение фенольных соединений в побегах 71 рододендрона

3.2.1.2 Разработка методики количественного определения суммы 74 фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту

3.2.1.3 Изучение содержания фенольных соединений в рододендроне 86 Адамса

3.2.2 Качественный и количественный анализ арбутина в сырье 87 рододендрона золотистого

3.2.3 Исследование тритерпеновых соединений

3.2.3.1 Качественный и количественный анализ тритерпеновых 98 соединений сырья рододендрона золотистого

3.2.3.2 Изучение содержания тритерпеновых соединений рододендрона 105 Адамса

3.2.4 Исследование полисахаридов в JIPC рододендрона

3.2.4.1 Качественный и количественный анализ полисахаридов сырья 106 рододендрона золотистого

3.2.4.2 Исследование содержания полисахаридов в рододендроне Адамса 114 3.3 Исследование динамики накопления веществ фенольной природы в 115 ЛРС рододендрона золотистого в зависимости от стадии вегетации

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ III

ГЛАВА IV. ФОТОХИМИЧЕСКОЕ' ИССЛЕДОВАНИЕ НАСТОЕК 118 ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ РОДОДЕНДРОНА

4.1 Технология настоек гомеопатических матричных Rhododendron

4.2 Разработка методик качественного и количественного определения 119 фенольных соединений в НГМ рододендрона

4.3 Количественное определение арбутина в НГМ рододендрона 130 золотистого

4.4 Разработка методик количественного определения тритерпеновых 134 соединений в НГМ рододендрона

4.5 Разработка методик количественного определения полисахаридов в 137 НГМ рододендрона

4.6 Исследование качественного состава органических кислот в НГМ 141 рододендрона золотистого

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV

ГЛАВА V. РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА И 146 УСТАНОВЛЕНИЕ СРОКА ГОДНОСТИ ЛРС, НГМ RHODODENDRON AUREUM, АНАЛИЗ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ РАЗВЕДЕНИЙ

5.1 Разработка показателей качества побегов рододендрона. 146 Установление срока годности сырья

5.2 Разработка показателей качества и установление срока годности НГМ 154 рододендрона

5.3 Методика анализа гомеопатических разведений НГМ Rhododendron аигеит

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V

 
 

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Потрясай, Ксения Алексеевна, автореферат

Актуальность темы. Снижение уровня жизни в сочетании с ухудшающейся экологической обстановкой и неблагоприятными социальными факторами отрицательно сказываются на здоровье людей. В этих условиях внедрение лекарственных средств, обладающих мягким щадящим действием и одновременно оказывающих лечебный эффект в малых дозах является актуальной задачей современной фармацевтической науки. Особое значение в решение данной проблемы приобретают гомеопатические лекарственные средства.

Возросший во всем мире интерес к традиционным методам лечения, к которым в России относят и гомеопатию, привел к значительному увеличению доли гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС) на фармацевтическом рынке.

В Российской Федерации отсутствует отечественная гомеопатическая фармакопея, наличие которой унифицировало бы требования к качеству ГомЛС, способствовало бы производству безопасных и действенных лекарственных препаратов.

Исходными субстанциями для изготовления ГомЛС являются настойки гомеопатические матричные (НГМ). Количество зарегистрированных ГомЛС в Российской Федерации насчитывает более 600 наименований комплексных и более 1200 однокомпонентных ГомЛС, при этом зарегистрировано всего около 30 наименований НГМ, что, безусловно, не удовлетворяет существующим потребностям производства.

Для организации выпуска качественных и безопасных ГомЛС своевременным является углубленное изучение исходного лекарственного растительного сырья (ЛРС). В последние годы большое внимание уделяется фитохимическим и фармакологическим исследованиям тех лекарственных растений, которые применяются как в официнальной, так и в народной медицине.

В связи с этим является актуальным фитохимическое изучение лекарственных растений с целью разработки нормативной документации (НД) на них и создание отечественной Гомеопатической фармакопеи.

На данный момент в России зарегистрировано 5 гомеопатических лекарственных средств на основе рододендрона золотистого (Rhododendron aureurn Georgi), семейства Вересковые — Ericaceae. Из них 3 монокомпонентных препарата: гранулы гомеопатические, капли гомеопатические монокомпонентные, а также гомеопатический многокомпонентный препарат «Метео-плюс» в виде гранул. Помимо выше перечисленного, зарегистрирован также препарат для ветеринарии «Хондратон», выпускаемый в виде таблеток, геля и инъекций. Основными симптомами для принятия гомеопатических препаратов рододендрона золотистого являются:

Ревматические боли с типичным ухудшением в дождливую погоду и перед изменение погоды.

Усиление симптомов ночью и в состоянии покоя, улучшение от движения. Боли локализуются глубоко в надкостнице.

Особые показания: первично-хронический полиартрит мелких суставов (пальцы рук).

Пузырьковые высыпания.

Поражения яичек. Эпидидимит. Невралгия семенных канатиков. Последствия гонореи и сифилиса (нервные поражения).

Сердечные жалобы. Иногда это связано с ощущением страха и ухудшением при перемене погоды.

Лицевые невралгии, зубные боли с улучшением после еды и от тепла В связи с этим считаем целесообразным и своевременным разработку из сухого и свежего сырья рододендрона золотистого настойки матричной гомеопатической и соответствующей нормативной документации.

Кроме того, химический состав побегов рододендрона как лекарственного растительного сырья изучен недостаточно, методики стандартизации отсутствуют. Поэтому, актуальным является фитохимическое изучение рододендрона с использованием современных физико-химических методов, разработка методик стандартизации, создание нормативной документации.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований является сравнительное изучение высушенных и свежих побегов рододендрона золотистого и настоек гомеопатических матричных и разработка методик их стандартизации.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить фотохимический состав свежесобранного и высушенного сырья рододендрона золотистого с использованием физико-химических методов.

2. Изучить морфологические признаки сырья.

3. Разработать методики качественного и количественного анализа биологически активных веществ в сырье рододендрона золотистого.

4. Получить настойку гомеопатическую матричную из высушенного и свежего сырья рододендрона золотистого и провести исследование химического состава полученных настоек. Разработать методики контроля качества настоек гомеопатических матричных.

5. Провести сравнительное фитохимическое исследование рододендрона золотистого и рододендрона Адамса.

6. Разработать и оформить проекты Фармакопейных статей (ФС) на «Рододендрон золотистый побеги свежие», «Рододендрон золотистый побеги» и настойку гомеопатическую матричную «Rhododendron aureum Dl», «Rhododendron aureum (Rhododendron)». Научная новизна. Анализ уровня стандартизации сырья и настоек гомеопатических матричных позволил сформулировать необходимость исследования и разработки лекарственного растительного сырья, использования его в гомеопатии и разработку на его основе НГМ. На основании микроскопического анализа побегов рододендрона, установлены диагностически значимые признаки, характерные для сырья.

Установлены качественные характеристики сырья рододендрона золотистого.

Разработаны методики количественной оценки в сырье и НГМ рододендрона золотистого фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту, тритерпеновых сапонинов в пересчете на урсоловую кислоту, моносахаридов в пересчете на глюкозу методом спектрофотометрии (СФМ); качественное и количественное определение арбутина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ); а также качественное определение органических кислот в НГМ рододендрона методом ВЭЖХ.

Установлены закономерности различия содержания биологически активных веществ (БАВ) в зависимости от физического состояния растения.

Разработаны унифицированные методики качественного и количественного анализа сырья и НГМ рододендрона золотистого на основе чего предложены критерии подлинности и нормы содержания действующих веществ.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны:

• Проект ФС «Рододендрон золотистый свежие побеги»;

• Проект ФС «Рододендрон золотистый побеги высушенные»;

• Проект ФС «Рододендрона золотистого D1 настойку гомеопатическую матричную»;

• Проект ФС «Рододендрона золотистого настойку гомеопатическую матричную».

Связь задач и исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (per. № 01.2.006 06 352).

Основные положения, выносимые на защиту:

• Результаты сравнительного изучения химического состава свежесобранного и высушенного сырья и настоек гомеопатических матричных ан его основе;

• Результаты разработки методик качественного и количественного анализа действующих веществ в J1PC и НГМ с использованием современных методов физико-химического анализа рододендрона золотистого;

• Разработка проектов фармакопейных статей на J1PC и НГМ в соответствии с учетом современных требований качества на лекарственные средства.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных рододендрона золотистого"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведен товароведческий анализ ЛРС рододендрона, установлены диагностически значимые микроскопические признаки сырья «Побеги рододендрона высушенные» и «Побеги рододендрона», определены числовые показатели для ЛРС рододендрона.

2. С помощью физико-химических методов изучен в сравнительном аспекте фенольный, полисахаридный, тритерпеновый состав ЛРС видов рододендрона, как свежего, так и высушенного сырья, и НГМ, изготовленных из него.

3. Проведено исследование качественного состава фенольных соединений НГМ и сырья рододендрона золотистого с помощью метода ВЭЖХ. Проведен ТСХ анализ. Количественное определение проводили методом спектрофотометрии, в пересчете на кислоту галловую. Разработаны хроматографические условия и условия пробоподготовки.

4. Разработаны методики количественного определения суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту и моносахаридов в пересчете на глюкозу в НГМ рододендрона методом спектрофотометрии.

5. Проведено исследование состава органических кислот в НГМ рододендрона.

6. Показано, что сырье рододендрона золотистого и рододендрона Адамса сходно по составу БАВ, следовательно, оно также может быть использовано для изготовления НГМ и других официнальных лекарственных форм.

7. В доклиническом изучении наработанных нами опытных партий сухой экстракт и жидкий экстракт рододендрона показали антимикробную и противовоспалительную активность; по данным токсикологического исследования отнесен к малотоксичным веществам согласно действующей классификации.

8. Установлен срок годности ЛРС рододендрона - 2 года, НГМ - 2 года. По результатам исследования подготовлены проекты ФС на сырье — «Рододендрон золотистый побеги» и «Рододендрон золотистый побеги свежие» и настойки гомеопатические матричные «Rhododendron аигеит» и «Rhododendron аигеит D1».

 
 

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Потрясай, Ксения Алексеевна

1. Аксельруд Г.А., Лысянский Г.М. Экстрагирование. Система твердое тело-жидкость.- Л.: Химия, 1974.- С.254.

2. Александрова М.А. Рододендрона природной флоры СССР.-М.: наука, 1975.

3. Александрова М.А. Рододендроны.- М.: ЗАО «Фитон+»,

4. Александрова М.С. Рододендроны природной флоры СССР.- М.: Наука, 1975.

5. Алюшин М. Т., Костенникова 3. П. Проблемы развития гомеопатической медицины // Фармация. 1993. - № 5. — С. 43-45;

6. Архангельский К. рододендрин и андромедотоксин // патология и фармакология.- 1901.- №46.- С.313.

7. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР / Главный редактор Чиков П. С. М.: ГУГК, 1980. - С.247.

8. Атлас лекарственных растений СССР / сотр. ВИЛР. М.: Госуд. изд. мед. литературы, 1962. — С. 254-255.

9. Атлас лекарственных растений СССР.- М., 1962.- С. 478-479.

10. Атлас лекарственных растений СССР.-М., 1962.-С.478-479.

11. Бабич С.В., Медведева Р.Г. Факторы, влияющие на процесс извлечения дубильных веществ из растительного сырья // Фармация.-1946.-№4.- С. 26-29.

12. Багирова В.Л., Сокольская Т.А., Лякина М.Н., Даргаева Т.Д., Копытько Я.Ф. Номенклатура гомеопатических лекарственных средств на фармацевтическом рынке России и проблемы их стандартизации. Новая аптека, 2002. № 6. - С.65-70.

13. Баньковский А.И., Зарубина М.П., Сергеева А.Л. Исследование растений, применяемых в народной медицине, на содержание алколоидов // Тр. ВНИИ лекарственных и ароматических растений.- М., 1947.-Вып.1Х.- С. 119-179.

14. Баньковский И. А., Запесочная М.Ф. Исследование флавоноидов в листьях рододендрона золотистого // химия природных соединений 1968.- 34.- С.48-50.

15. Баньковский И.А., Запесочная М.Ф. Исследования флавоноидов в листьях рододендрона золотистого//Химия природных соединений.-1968.-34.-С.48-50.

16. Белова Н.В. Андромедотоксин и получение его из Rhododendron L. //Растительныересурсы-1971.- Вып. IV.- С.574-576.

17. Белова Н.В. К химическому исследованию растений рода Rhododendron Ь.//Растительные ресурсы.- 1968.-Bbin.IV.- С.258-272.

18. Белова Н.В. Эфирные масла рододендронов // Межд. Конгр. По эфирным маслам (4;1968;Тбилиси): Тез. Докл. . Тбилиси, 1968.- Т.1.-С.31-33.

19. Белова Н.В., Фокина Г.А. Тритерпеноиды некоторых видов Rhododendron. II Химия природных соединений.-1970.-№1.-С.574-576.

20. Белоусов М.В., Левашова И.Г., Комисаренко Н.Ф., Старченко В.М. Содержание арбутина в сибирско-дальневосточных видах семейства Ericaceae // Растительные ресурсы.-1992.-Т.28, Вып. IV.-C.53-54.

21. Берике В. Materia medica гомеопатических препаратов. Москва. Гомеопатическая медицина.- 1998.- с 639-640.

22. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения.- М.: мир, 1977.- С.238.

23. Ботанический словарь / под ред. Анненкова Н. СПб.; 1878.646с.

24. Вавилова Н. М. Гомеопатическая фармакодинамика. М.: Эверест, 1994. - ч.2. - С. 165-167.

25. Васильченко Е.А., Васильева Л.Н., Комисаренко Н.Ф., Левашова И.Г., Батюк B.C. Анальгизирующее действие флавоноидов Rhododendron luteum S., Hypericum perforatoum L. // Растит. Ресурсы.-1986.-T.22, вып. 1-C. 12-22

26. Верещагин В.И., Соболевская К.А., Якубова А.И. полезные растения западной Сибири. -М.; Д., 1959.-348 с.

27. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / под ред. Е.Е. Сироткиной.- Томск, 1987.-С.138-161.

28. Галютева Г.И. Диуретические свойства арбутин содержащих растений // Регуляция функции почек и водно-солевого обмена. Барнаул, 1987,- С.52-56.

29. Гаммерман А.Ф., Семичев Б.В. Словарь тибетско-латино-русских названий лекарственного растительного сырья, применяемого в тибетской медицине.- улан-Удэ: Бурят, кн. изд-во , 1963.- 180 с.

30. Гомеопатическая Фармакопея Германии 1978 (НАВ-1978).

31. Гомеопатический метод лечения и практического здравоохранение // Сборник нормативных документов и информационных материалов. — 1-е издание. М., 1996.- 327 с.

32. Горшков А.Г., Мурашкина И.А. и др. Количественное определение методом ВЭЖХ биологически активных компонентов растения Rhododendron aureum Georgi. // Химико-фармацевтический журнал.-Т.34.-№12.-С.30-34.

33. ГОСТ 24027.0 80 Сырье лекарственное растительное. Правила приемки и методы отбора проб. — М.: Издательство стандартов, 1980.

34. ГОСТ 24027.2 80. Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла. - М.: Издательство стандартов, 1980.

35. Государственная фармакопея СССР XI изд. М.: Медицина, 1987. - Вып.1. - 338 е.; Вып.2. - 400 с.

36. Государственная фармакопея РФ XII изд, том 1, М.: Медицина, 2008.-336 с.

37. Государственный реестр лекарственных средств. — М.: МЗ РФ,2000.

38. Гранникова Т. А. Краткий курс по гомеопатии. Ленинград: Медицина, 1991.-70 с.

39. Губанов И.А., Крылова И.Л., Тихонова В.Л. Дикорастущие полезные растения СССР.- М., 1976. 360 с.

40. Дюкова В.В., Белова О.И. К вопросу об экстракции растительного сырья подогревом // Сб. науч. Трудов ВНИИФ.- М., 1979.-Т.17.- С.163.

41. Ефремова Н.А. Лекарственные растения Камчатки. П. Камчатский, 1963. -75 с.

42. Завражнов В.И., Китаева Р. И., Хмелев К.Ф. Лекарственные растения. Лечебное и профилактическое использование. Издательство Воронежского университета, 1994.- С. 421-422.

43. Запесочная Г.Г., Баньковский А.И. О флавоноидах некоторых лекарственных растений // науч. Труды ВНИИ лекарственных растений.-1969.-Т.15.-С.629-639.

44. Запесочная Г.Г., Баньковский А.И. Полифенолы растений: изучение химического сотава листьев Rhododendron аигеит Georgi II Химия природных соединений.-1965.-№4.- С.289-292.

45. Землинский С.Е. Лекарственные растения СССР.- М., 1958.609 с.

46. Йорданов Д., Николов П., Бойчинов А. Фитотерапия. София, Медицина и физкультура.- 1972.- с.281-282

47. Каргинова В.Т. Влияние рододендрона золотистого на физичекую работоспособность: Автореф. . дисс. Мед. Наук.- Краснодар, 1974.- 17 с.

48. Кейн. С. Гомеопатическая фармация. Введение и руководство. М.: Гомеопатическая медицина, 2002. — 256 с.

49. Келлер Г. Гомеопатия / Пер. с нем. Ю. И. Коршиковой, М.: Медицина, 1989.- 592 с.

50. Кент Д. Реперториум гомеопатических лекарств. Под. Ред. Канд.мед.наук Е.Ю. Филина.- 1997.,

51. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. Т.1. — М.: Мир, 1981. С. 258-265, 398-399, 480-483, 550-555.

52. Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений.- Алма-Ата, 1978.- С.97.

53. Ковалева Н.Г. Лечение растениями. Очерки по фитотерапии. Москва, Медицина.- 1971.- с. 140.

54. Колесников Б.П. Дубильные растения Юга Дальнего Востока // Тр. Дальневост. Филиал / АН СССР. Сер. Ботан.- М., Л., 1956. Т.3.(5).-С.80-92.

55. Комиссаренко А. А., Салычева А. В. К вопросу о гомеопатических разведениях // Гомеопатия и фитотерапия. — 2000. № 1.;

56. Костенникова З.П. Стандартизация и контроль качества гомеопатических лекарственных средств. // Медико-фармацевтический журнал.-1995.-№ 8.

57. Куршакова Г.В. и др. Рододендрон золотистый, или кашкара, и возможности его использования в качестве дубильного растения // Растительное сырье.- 1961.- Вып.1Х.- С.291-302.

58. Лекарственные растения СССР. Культивируемые и дикорастущие растения. М., Планета.- 1987.- с. 108-109

59. Луферов А. Н. Ботаническая номенклатура. — М.: ММА, 199540 с.

60. Лякина М.Н. Субстанции растительного происхождения в гомеопатической фармации: методология построения стандарта качества. Химико-фармацевтический журнал, 2004, Т. 38, № 1, С. 28-30.

61. Макаров А.А. Растительные лечебные средства якутской народной медицины.- Якутск, 1974.- 64 с.

62. Мартынюк Д.Ф. Ядовитые растения Дальнего Востока.-Благовещенск, 1956.-С.196.

63. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. Саратов: Приволжское книжное издательство, 1993 г. С. 190.

64. Медведева Р.Г. Сибирское лекарственное растение — рододендрон золотистый (кашкара) // Аптечное дело.- Иркутск, 1952.-№3.-С.29-32.

65. ОСТ 42-2-72 «Лекарственные средства. Порядок установления сроков годности».

66. ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».

67. ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные».

68. ОФС 42-0011-03 «Правила приемки и отбора проб».

69. ОФС 42-0011-03 «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье».

70. Палов М. Энциклопедия лекарственных растений. М., Мир, 1998.- с.158-159

71. Патудин А.В. Современный рынок гомеопатических лекарственных средств в Российской федерации. Гомеопатический ежегодник.- Москва. 2005.- С.125-130

72. Петряев Е.Д. Лекарственные растения Забайкалья.- Чита, 1952.-С.110-112.

73. Петухова И.П. Рододендроны на юге приморья.- Владивосток: РАН Дальневост. отд. Бот. Сад-институт, 2006.- 131 с.

74. Полная энциклопедия народной медицины / Главный редактор Г. А. Непокойчицкий. — М.: Олма-пресс, 1996. т. 1. - 751 е., т.2. - 800 с.

75. Почему растения лечат / М. Я. Ловкова, А. М. Рабинович, С. М. Пономарева, Г. Н. Бузук и др. М.: Наука, 1989. - С.126-127.

76. Раздорский В. Ф. Анатомия растений. — М.: Советская наука, 1949.-С.185.

77. Растительные ресурсы России и сопредельных государств. Вып. 8-9. Спб.: Наука. 1994 - 1996.

78. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Вып. 1-7. Л., Спб.: Наука. — 1985 -1993.

79. Рекевег Г. Г. Гомеопатическая антигомотоксикология. Систематизиро-ванное практическое лекарствоведение. Москва. Гомеопатическая медицина.- 2000.- с.561.

80. Рекевег Г.Г. Гомеопатическая антигомотоксикология. Систематизиро-ванное практическое лекарствоведение. — Смоленск: Гомеопатическая медицина. 1997. -591 с.

81. Руководство по стандартизации лекарственных средств / под ред. Р.У. Хабриева, B.JI. Багировой, В.Б. Герасимова. Москва, 2006 г.-С. 219-286.

82. Сборник фармакопейных статей по гомеопатии /под ред. Р.У. Хабриева. Москва, 2005 г.- 80 с.

83. Семенов С.Р., Телятьев В.В. Лекарственные растения Восточной Сибири.-Иркутск, 1966.- С.214.

84. Смирнов Н.Н. Лекарственные и технические растения Сибири.-Омск, 1959.-236 с.

85. Сокольская Т.А. Расширение номенклатуры лекарственных средств за счет гомеопатических препаратов //Российские аптеки, 2004, № 6, с.44-47.

86. Справочник провизора безрецептурного отпуска (провизора-консультанта) / Е. А. Федина, В. К. Таточенко, Н. Н. Сапронова, В. В. Вандышев. М: МЦФЭР, 2003. - С.321-322.

87. Тайсс Петер Человек. Природа. Здоровье (Советы домашнего фитотерапевта). М.: Институт современной политики, 2002. — 168 с.

88. Тахтаджанян А. Л. Анатомия семенных растений. Москва: Мир, 1980.-502 с.

89. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири.-Иркутск, 1976.- С.-193-195.

90. Травоцелительство эпохи Водолея / А. Ю. Нестеровская, Т. Д. Рендюк, Л. Я. Спешилов, Н. Я. Спешилов и др. М.: Крон-пресс, 2000. — Т.1.-439 е., Т.2.-340 с.

91. Универсальная энциклопедия лекарственных растений / сост. И. Путырский, В. Прохоров. М.: Махаон, 2000. - С. 162-164, 319.

92. Фарингтон Э. Гомеопатическая клиническая фармакология. Киев: «Колос», «ИТЭМ», 1992

93. Флора Сибири / Под ред. Л.И. Малышевой.- Новосибирск, 1997.- Т.П.- С.16

94. Флора Средней Сибири / Под ред. М.Г. Попова.- Москва-Ленинград, 1959.- Т.2.- С. 565-567.

95. Флора СССР / Под ред. В.Л. Комарова.- М., 1952.- Т.18. С.38.

96. Флора СССР. М., Л.: Издат. академии наук СССР, 1955. -XXII т.-С. 122-169.

97. Флора Центральной Сибири / Под ред. Л.И Малышевой и Г.А. Пешковой.- Новосибирск, 1979.- Т.2.- С.696.

98. Фокина Г.А Тритерпеновые кислоты растений Rhododendron флоры СССР // Химия прир. Соедин. -1979.- №4.- С.734-735.

99. Фруентов Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока. Изд. 2-е.- Хабаровск, 1974.- 398 с.

100. Хефтман Э., Кастер Т. и др. Хроматография. Практическое приложение метода. В 2 частях, пер. с английского. / Под ред. Э. Хефтмана. -М.: Мир, 1986. -ч.1: 336 е., ч.2: 422 с.

101. Химический анализ лекарственных растений / Е. Я. Ладыгина Л. Н. Сафронич, В. Э. Отряшенкова, И. А. Баландина. — М.: Высшая школа, 1983.-С. 7-8, 47, 170-174.

102. Червяков Д.К. Фармакология рододендрона золотистого//Тр. Бурятмонгольского ин-та.- Улан-Удэ, 1951.-Вып. VII.-C. 117-135.

103. Черепанов С. К. Сосудистые растения СССР. Ленинград: Наука, - 1981.-510 с.

104. Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. М.: Мир, 1980. — т. 1,2. - 621 с.

105. Швабе В. Руководство по изготовлению гомеопатических лекарств. -М.: Медицина, 1967. С. 14-19, 465.

106. Ш.Шнякина Г.П., Седельникова В.А., Цыганкова Н.Б. О содержании арбутина в листьях некоторых растений советского Дальнего Востока // Растит. Ресурсы.- 1981.- Т.17.- Вып. IV.- С.568-571.

107. Шретер А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока.- М.: Медицина, 1975.- С.216-217.

108. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения / под ред. Г. П. Яковлева, К. Ф. Блиновой. СПб.: Спец. лит, 1999. - 407 с.

109. Antiviral screening of British Columbian medicinal plants / A. Cutcheon, T. Roberts, E. Gibbons, S. Ellis, L. Babiuk, R. Hancock, G. Towers //Journal Ethnopharmacology Vancouver., 1995. - V.49. - № 2. - P. 101-110.

110. Bait Katrin Old man's flannel. // Journal Garden West. — Royal Botanical Society. 1991.-V.5. - № 5.-P. 16-17.

111. Beal. F.S. Herbals and homeopathic remedies as formulary items. // Am. J. Health-Syst. Pharm. 1998. - V.55 - p. 1266-1267 (Jun 15).

112. British Pharmacopea. 2005. -V. 2. - № 1. - P. 1583.

113. Brown Т., Glyde H. Carbonic anhydrase in certain species of plants // Ohio J. Science. 1950. - V.55. - p. 257-262.

114. Chang W., Caruso J. Lower temperature and orthophosphate control of alkaline phosphatase in a cold-requiring plant //Cryobiology. 1983. - V.20. -№3.- P. 380-382

115. Chaptan R.L. Homeopathic remedies. ASHP Annual Meeting. -1997.- V. 54.-p.l-10.

116. Dansyl amino acid enantiomer separation on a teicoplanin chiral stationary phase: effect of eluent pH. / Peyri E., Ravelet C., Nicolle E., Villet A., Grosset C., Ravel A., Alary J. // J. Chromatogr A. 2001.- Vol. 923.- N 1-2.-p.37-43.

117. Dizet P., Courtois J., Wickstrom A. Action of fructosidases on the various galactosidses of sucrose //Bull. Soc. Chim. Biol. 1956. — V.38. p. 851862.

118. Fiamegos Y.C., Stalikas C.D. Gas chromatographic determination of amino acids via one-step phase-transfer catalytic pentafluorobenzylation-preconcentration. // J. Chromatogr A. 2006. - V. 31. - N 1-2., P. 66-72.

119. Filippini G., Cappeletti H., Caniato L. Botanical identification of powdered plant drugs // Int. Crude Drug. Res. UK, USA. - 1990. - V.28. - № 2.-P. 128-133.

120. Geissman T.A. The chemistry of flavonoid compounds. — Pergamon Press. 1962.-666 p.

121. Golovko D.N. Ascertaining the optimum temperature for moisture assays of crude drugs // Farmatsia. 1944. - № 2. - p. 29-32.

122. Gross K., Werner P. Colonizing abilities of "biennial" plant species in relation to ground cover: implication for their distributions in a successional sere // Ecology. 1982. - V.63. - № 4. - P. 921-931.

123. Harborne J.B., Mabry T.J. The Flavonoids: Advances in Research. -London-New York, Chapman and Hall. London. - 1982. - p. 237-240.

124. Harborne J.B., Mabry T.J., Mabry H. The Flavonoids. Chapman and Hall. - London. - 1975. - 1204 pp.

125. Harborne J.B., Williams C.A. Leaf of flavonoids and simple phenols in the genus rhododendron II Phytochem.- 1971.- Vol.10, №11.- P.2727-2744.

126. Hsu C., Yu T. Studies on the chemical constituents of rhododendron dahuricum L. И Hua Hsieh Hsueh Pao/- 1976.- Vol.34, №4/- P.275-281.

127. Homoopathisches Arzneibuch- 1 Ausgabe-1978.-Gesatausgabe.-HAB 1, 1978. 1 Nachtrag 1981; 2 Nachtrag 1983; 3 Nachtrag 1985.- Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart Govi-Verlag GmbH, Frankfurt

128. Homoopathishes Arzneibuch 2005. HAB 2005. Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, Govi-Verlag-Pharmazeutischer Verlag GmbH Eschorn.

129. Hooper S., Chandler R. Herbal remedies of the Maritime (Canada) Indians: phytosterols and triterpenes of 67 plants //J. Ethnopharmacology, Canada. 1984.-V. 10.-№2.-p. 181-194.

130. In vitro anti-hepatoma activity of fifteen natural medicines from Canada / L. Lin, L. Liu, L. Chiang, C. Lin //Phytother. Res. (Canada). 2002. -№16.- P. 440-444.

131. Jin Z., Chen R. Studies on chemical constituents of Rhododendron chrysantum Pallas II Yaoxue Xuebao.- 1981.- Vol.16, №11.- P.869-871; Chem.abstr.-1982.- Vol.96, №31683m.

132. Kim K. Structure of rhododendron // J.Pharm/Soc. Japan.- 1942.-Vol.62; Chem.Abstr.-1951.- Vol.45, №4222.

133. Kim K. Identity of rhododendron and betuloside // J.Pharm/Soc. Japan.- 1943.- Vol.63; Chem.Abstr.-1951.- Vol.45, №4222.

134. Khalig Y. Alternative medicine: what pharmacists need to know. Pharmacy Practice (Canada) 1997. -V.13 - p. 44-50, 83-85 (Mar).

135. Kresanek Jaroslav Atlas liecivych rastein a lesnych plodov. -Bratislava, 1979.-p.l 80-181.

136. Lagoni N.,Gawlik W. Preparation and registration of homeopathic drugs.- Dtsch. Apoth. Ztg. -Bd. 126 1986. - Jan.23. - s.149-152.

137. Li J., Pu H., Jia J., Takeda Т., Ogihara Y. Chimical constituents of the changbai nuipicha {Rhododendron aureum) И Zhongcaoyao.-1988.-Vol. 19 №10.- P.440-442; Chem.Abstr.-1989.-Vol.l 10, №63565.

138. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The systematic identification of flavonoids. Springer-verlag. - Berlin. - 1970. - p. II, ch.: 5c. -354 p.

139. Marotta M., Addoblo I., Kososis S., The quality control and stability testing of homeopathic preparations //Boll. Chim. Farm. 1998. - V. 137. -№10.-P. 439-441.

140. Mueller-Limmroth M., Frochlich H. Mode of action of some phytotherapeutic expectorants on the mucociliar transport //Fortrschr. Med., Germany. 1980. - V.98. - № 3. - p. 95-101.

141. Ordinatio antihomotoxica et material medica. Fachinformation fur Therapeuten und Apotheker. Heel. Herausgegeben von der Wissenschaftlichen Abteilung der Firma Biologische Heilmittel Heel GmbH, Baden-Baden. 1992. -P.539.

142. Ravasz L. The ash contents of the official plants of the Hungarian Pharmacopeia IV //Ber. Ungar. Pharm. Ges., Hungary. 1941. - V. 17. - p. 482-505.

143. Reinholz E. A factor promoting root growth in the diffusate of germinating Digitalis seeds and others species of Scrophulariaceae //Naturwissenschaften., Germany. — 1954. V.41. — p. 233.

144. Runge P. Determination of hemolytic activity //Pharma Acta Helv. -1952.-V.27.-p. 315-333.

145. Sarrel M., Cohen H., Kahan E. Naturopathic treatment for ear pain in children //Pediatrics. 2003. - V.l 11. - № 5. - P. 574-579.

146. Sarrell E.M., Cohen H.A. Naturopathic treatment for ear pain in adults and geriatric patients //Pharmacology. 2003. - V.l52. - № 8. - P. 348351.

147. Search for antiviral activity of certain medicinal plants from Cordoba, Argentina / S. Zanon, F. Ceriatti, M. Rovera, L. Sabini, B. Ramos // Rev. Latinoam. Microbiol. 1999. - V.41. - № 2. - P.59-62.

148. Spoerke D.G. Toxicity of homeopathic products //Vet. Hum. Toxicol. 1989. V.31. - p. 259-260.

149. Tadeg H., Mohammed E., Asres K., Gebre-Mariam T. Antimicrobal activities of some selected tradicional Ethiopian medicinal plants used in the treatment of skin disorders. J. Ethnopharmacology. - 2005. - Vol. 101. - №1-3.-P. 313-318.

150. The substances of plant origin that inhibit protein biosynthesis / W. Galasinski, J. Chlabicz, A. Paszkiewicz-Gadek, C. Marcinkiewicz, A. Gindzienski //Acta Pol.Pharm.-1996. V.53. - № 5. - P. 311-318.

151. Turker A., Camper N. Biological activity of common mullein, a medicinal plant // J. Ethnopharmacol. 2002. - V.82. - № 2-3. - P.l 17-125.

152. Britton G., Haslam E. Phenoic constituens of Arctostaphylos uva-ursi L. // J/ Chem. Soc. C. 1965.- P. 7312-7319.

153. Chang Chao-Lin., Chang Cheng-Chung (China). Study on chemical constituents in Rhododendron agglutinaum II Yao Hsueh Tung Pao.-1981.- vol. 16, №3.- P.53-54; Chem. abstrs.-1981.- Vol.95, №209445.

154. Moran N., Dresel P. The pharmacological action of andromedotoxin from Rh. maximum// J.Pharm. Exptl.Therap. -1954. -Vol.110.

155. Mori Kenji., Qian Zhao Hui. Synthesis rhododendrinae and epirhododendrinae// Bull. Soc. Chim. Fr. -1993. Vol.130, №3. - P.382-387; Chem.Abstrs. - 1994. - Vol.120, №164671s.

156. Nakanura Y., Ohta Т., Hukuti C. The constituens of diuretic drags: The flavanol glucosid of folium uva-ursi and folium vaccinii // J.Pharm. Soc. -Japan, 1935. -Vol.55. -P.800-806.

157. Pan H., Lundgren L.N. Rhododendrol glycosides and phtnyl glucoside esters from inner bark of Betula pubescens// Phytochem. -1994. -Vol.36, №l.-P.79-83.

158. Proliac A. Triterpens Arctostaphylos uva-ursi//Plant.med. et phytother. 1973. - Vol.14, №3. -P.155-158.

159. Sakar M.K., Petereit F., Nahrstedt A. Two phloroglucinol glucosides, flavan callates and flavanol glycosides from Sedum sediforme flowers// Phytochem. 1993. - Vol.33, №1. -P.171-174.

160. Wood H., Stromberg W. Andromedotoxin. A potent hypotensive agent from Rhododendron maximum II J. Am. Chem. Soc.- 1954.- №76.-P.22

161. Wuhan Medical College (Peop.Rep. China) Extraction and isolation of Rhododendrotoxin from Rhododendron molle II Yao Hsueh Tung Pao.-1980.- Vol.15, №10.-P39-40.